CN102907328A - 利用微量元素促进甘蔗组培苗生根的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属植物栽培领域,涉及一种利用微量元素促进甘蔗组培苗生根的方法,包括诱导培养过程、分化培养过程、增殖培养过程和生根培养过程,所述生根培养基是以MS培养基为基础培养基,并添加NAA、蔗糖、卡拉胶、微量元素;所述微量元素是指游离状的镧离子、铈离子、硅离子、镨离子、钬离子、铒离子、铥离子、镱离子和镥离子。本发明通过在生根培养基中添加微量元素,解决了组培苗单一植株生根数少、二级根系不发达的问题,有效地提高组培苗的生根数,假植效果好,具有成本低、生根数高、移苗成活率高等特点,实用性强,推广性好。
Description
技术领域
本发明属植物栽培领域,涉及一种甘蔗组培苗生根的方法,具体是一种利用微量元素促进甘蔗组培苗生根的方法。
背景技术
甘蔗(Saccharum officinarum L.)是我国最主要的糖料作物,也是世界主要能源作物,甘蔗糖产量占我国食糖总产量的 90%以上。甘蔗是无性繁殖作物,也是多年宿根栽培作物,多年种植尤其是宿根种植易遭一些病原物的反复侵染和危害。甘蔗的主要病害为花叶病、宿根矮化病等,一般宿根矮化病可使甘蔗减产10~30%,花叶病使甘蔗减产10~40%,干旱地区病害更为严重。早在 20世纪 70年代末,巴西等国就开始对甘蔗健康种苗进行研究,80 年代中期,健康种苗生产已获成功,并在甘蔗生产上推广使用。国内的许莉萍等在90 年代开始通过组织培养和腋芽培养的方法培育甘蔗健康种苗,以去除甘蔗花叶病和宿根矮化病,能够提高甘蔗产量15%以上,蔗糖份含量提高0.5%以上。
目前,甘蔗组培苗生产是利用适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下,通过诱导出愈伤组织、不定芽、不定根等培养步骤,最后形成完整的植株,其幼苗根系吸收能力不强,抗逆性较差,假植成活率只有 70%左右,有时甚至低于 50%,大多都是因为瓶苗单一植株生根数少,二级根系不发达,假植后不能适应外界环境而死亡,虽然假植苗成活率受各种因素影响,但苗的生根质量程度对其至关重要。另外,随着基因工程技术的发展,甘蔗分子育种也是性状改良的重要手段,其培育过程同样涉及甘蔗苗的组培,也存在转基因小苗生根问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用微量元素促进甘蔗组培苗生根的方法,通过在生根培养基中添加微量元素,解决了组培苗单一植株生根数少、二级根系不发达的问题,有效地提高组培苗的生根数,提高假植成活率。
本发明所采用的技术方案:
一种利用微量元素促进甘蔗组培苗生根的方法,包括诱导培养过程、分化培养过程、增殖培养过程和生根培养过程,其具体步骤如下:
1、诱导培养过程
取成熟蔗茎并切成带单芽或双芽的茎段,进行预处理;以甘蔗腋芽为外质体,取1~2mm的茎尖分生组织接种到诱导培养基中进行培养;诱导培养基采用现有常用培养基。
2、分化培养过程
选取健壮腋芽生长点,接种到分化培养基中培养至分化出丛生芽;分化培养基采用现有常用培养基。
3、增殖培养过程
选取丛生芽接种到增殖培养基中进行增殖培养,培养 15 天即可增殖出丛芽;增殖培养采用现有常用培养基。
4、生根培养过程
将经过增殖培养的丛生芽分切成单株,接种到生根培养基中,在培养室温度为 25℃~28℃,光照 12 h,光照强度为1300 lx~1600lx 的条件下培养25~35 天,单株苗即可实现长大成生根苗。所述生根培养基是以MS培养基为基础培养基,并添加1.0~1.5mg/L NAA、15.0~25.0g/L蔗糖、 6.0~10.0g/L 卡拉胶、微量元素;所述微量元素是指游离状的镧离子、铈离子、硅离子、镨离子、钬离子、铒离子、铥离子、镱离子和镥离子,其含量分别为0.5~3.0mmol/L。
上述生根培养基的制备工艺:按配方先称取卡拉胶、蔗糖,煮沸后再加入配方中的其余各种原料,用蒸馏水定容至所要配制的培养基总量后,再用1mol/L 的 NaOH溶液或1mol/L 的 HCl溶液调节 pH 值至5.8;然后,分装到容器中封口;在 1.2 kg/cm2 压力下灭菌20分钟,冷却凝固后即为生根培养基。
在甘蔗的茎尖培养、腋芽繁殖、转基因的愈伤组织分化培养过程中,经常出现芽丛生长旺盛,而转入生根培养的时,苗的生根率不高,成活率低。为了探讨有效增加甘蔗瓶苗生根数量的的方法,发明人将微量元素作为甘蔗组织培养的添加剂,设计了生根培养基,并作了生根培养基中使用上述游离状的微量元素(浓度梯度分别为0~3mmol/L)对甘蔗单株组培苗生根率影响的试验。结果见表1。
表 1 生根培养基中含不同浓度微量元素对组培苗芽生根的影响
注:表 1 采用字母标记方法来表示多重比较结果,按照统计分析平均数多重比较标记字母法规定,用小写拉丁字母 a、b、c、d......表示差异显著水平 α = 0.05,用大写拉丁字母 A、B、C、D...... 表示差异显著水平 α = 0.01。先将各处理平均数由大到小排列,最大平均数后标记 a 或 A,并将该平均数与以下各平均数相比,差异显著的依次标记 b 或 B。依次类推,不显著的标记同一字母。两平均数之间凡有相同字母的即为差异不显著,否则为差异显著。
结果显示,生根培养基中含0.5~-3.0mmol/L微量元素,可以有效提高甘蔗瓶苗的生根数量;其中,以含1.5mmol/L微量元素的生根效果为最好。微量元素加入能够尽量模拟植物的生长环境,刺激植物本身激素的释,促进植物生根。经多次试验和统计分析,表明甘蔗组织培养分化丛芽后,使用含1.5mmol/L微量元素的生根培养基,平均生根数得到11.5条,提高了一倍,效果显著。所述一级根是指从组培苗基本生长的根,根长 >1.5 mm为统计数,二级根指从一级根上长出的侧根,根长 >1.0 mm为统计数。
对比试验:以MS培养基为基础培养基,分别添加NAA、NAA+微量元素进行对比试验,结果见表 2。
表 2生根培养基中使用NAA与微量元素对比试验结果
结果显示,添加微量元素后生根培养基的生根率较高,每株平均一级生根数达11.8根,比单纯添加NAA的生根培养基的一级生根数提高提高28%,二级有效根数提高了31%,呈显著性差异。从苗的长势上看,添加微量元素的培养基培养的甘蔗苗叶片直立,浓绿,茎硬度增强,而只添加NAA的培养基培养的甘蔗苗叶片下垂,淡绿。
本发明通过在生根培养基中添加微量元素,解决了组培苗单一植株生根数少、二级根系不发达的问题,有效地提高组培苗的生根数,假植效果好,具有成本低、生根数高、移苗成活率高等特点,实用性强,推广性好。
具体实施方式
下面结合实施例,对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。
实施例一、
1、材料选择 :采取成熟FR93-345蔗茎并切成带单芽或双芽的茎段;茎段用洗涤剂进行清洗,再用清水冲洗干净;用热水进行热处理30分钟;然后把处理过的蔗茎置于38-40℃的培养箱中进行恒温热处理出苗。
2、诱导培养 :在超净台上,用手术刀取芽基部至顶端15cm处芽基,利用千分之一升汞消毒15分钟 剥去外层叶片,取其1~2mm的芽尖分生组织进行培养,接种到pH为 5.8 的诱导培养基【MS+2 mg/L 2.4-D+30g/L 蔗糖+8g/L 卡拉胶】中;培养室温度为 25℃~28℃,光培养。
3、分化培养 :选取健康芽基本膨大芽顶,接种到pH 值为5.8 的分化培养基【MS+1.0 mg/L BA+0.2 mg/L KT +30g/L 蔗糖+ 8g/L 卡拉胶】中,培养 20天即可分化出丛生芽;培养室温度为 25℃~28℃,光照 10 h,光照强度为1100 lx~1600 lx。
4、增殖培养 :分化培养 20 天,将丛生芽转接到pH 为5.8的增殖培养基【MS+2 mg/L BA+30g/L 蔗糖+8g/L卡拉胶】中,每 20天增殖一次;培养室温度为 25℃~28℃,光培养。
5、生根培养 :将经过增殖培养的丛生芽分切成单株苗,接种到生根培养基中【MS+1.5mmol/L 微量元素(游离状的微量元素离子,含量分别为1.5mmol/L)+1.0mg/L NAA+30 g/L蔗糖+8g/L卡拉胶】,pH值为5.8 ;培养 30天后单株苗即可完成生根,培养室温度为 25℃~28℃,光照 12 h,光照强度为1300 lx~1600 lx。
实施例二、
1、材料选择 :参照实施例一的材料选择。
2、诱导培养 :参照实施例一的诱导培养。
3、分化培养 :参照实施例一的分化培养。
4、增殖培养 :参照实施例一的增殖培养。
5、生根培养 :将经过增殖培养的丛生芽分切成单株苗,接种到生根培养基【MS+0.5mmol/L 微量元素(游离状的微量元素离子,含量分别为0.5mmol/L)+1.2mg/L NAA+26 g/L蔗糖+10g/L卡拉胶】中,pH值为5.8;培养 30天后单株苗即可完成生根,培养室温度为 25℃~28℃,光照 12 h,光照强度为 1300 lx~1600 lx。
实施例三、
1、材料选择 :参照实施例一的材料选择。
2、诱导培养 :参照实施例一的诱导培养。
3、分化培养 :参照实施例一的分化培养。
4、增殖培养 :参照实施例一的增殖培养。
5、生根培养 :将经过增殖培养的丛生芽分切成单株苗,接种到生根培养基【MS+3mmol/L 微量元素(游离状的微量元素离子,含量分别为3.0mmol/L)+1.4mg/L NAA+33 g/L蔗糖+6g/L卡拉胶】中,pH值5.8;培养 30天后单株苗即可完成生根,培养室温度为25℃~28℃,光照12 h,光照强度为 1300 lx~1600 lx。
对比试验:
以实施例一、实施例二、实施例三所得生根培养基进行组培苗生根实验。对照为:生根培养基(MS+2.0mg/L NAA)。其他条培养条件相同,结果见表3。
表 3生根培养基中使用NAA与微量元素对比试验结果
有结果可以看出,采用本发明的生根培养基与对照相比,较大幅度地提高组培苗的一级生根数、二级生根数,移苗成活率也较为提高,解决了组培苗生根数少、二级根系不发达的问题,有效地提高组培苗根系吸收能力以及抗逆性,提高成活率。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明技术原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (2)
1.一种利用微量元素促进甘蔗组培苗生根的方法,其特征在于,包括诱导培养过程、分化培养过程、增殖培养过程和生根培养过程,其具体步骤如下:
1)、诱导培养过程
取成熟蔗茎并切成带单芽或双芽的茎段,进行预处理;以甘蔗腋芽为外质体,取1~2mm的茎尖分生组织接种到诱导培养基中进行培养;
2)、分化培养过程
选取健壮腋芽生长点,接种到分化培养基中培养至分化出丛生芽;
3)、增殖培养过程
选取丛生芽接种到增殖培养基中进行增殖培养,培养 15 天即可增殖出丛芽;
4)、生根培养过程
将经过增殖培养的丛生芽分切成单株,接种到生根培养基中,在培养室温度为 25℃~28℃,光照 12 h,光照强度为1300 lx~1600lx 的条件下培养25~35 天,单株苗即可实现长大成生根苗;所述生根培养基是以MS培养基为基础培养基,并添加1.0~1.5mg/L NAA、15.0~25.0g/L蔗糖、 6.0~10.0g/L 卡拉胶、微量元素;所述微量元素是指游离状的镧离子、铈离子、硅离子、镨离子、钬离子、铒离子、铥离子、镱离子和镥离子,其含量分别为0.5~3.0mmol/L。
2.根据权利要求1所述的利用微量元素促进甘蔗组培苗生根的方法,其特征在于:所述生根培养基的制备工艺:按配方先称取卡拉胶、蔗糖,煮沸后再加入配方中的其余各种原料,用蒸馏水定容至所要配制的培养基总量后,再用1mol/L 的 NaOH溶液或1mol/L 的 HCl溶液调节pH 值至5.8,然后分装到容器中封口;在 1.2 kg/cm2 压力下灭菌 20分钟,冷却凝固后即为生根培养基。
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