CN102875695A - 一种谷胱甘肽敏感性烷基化壳聚糖及制备与应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种二硫键键合烷基化壳聚糖，利用低分子量壳聚糖，通过二硫键的键合进行烷基化的修饰制备获得。该壳聚糖可在水性介质中通过自聚集形成聚合物胶团，并可被细胞高效摄取；能够作为一种具有优良性能的纳米载体，并利用细胞内高浓度的谷胱甘肽，实现药物的控制释放。利用这种载体，可应用于药物在体内安全转运；探索大分子物质在靶细胞内的控制释放；为开拓药物的靶向控释治疗，提供理论与技术基础。

Description

一种谷胱甘肽敏感性烷基化壳聚糖及制备与应用

技术领域

本发明属化合物的合成方法，涉及二硫键键合烷基化壳聚糖的合成方法，及二硫键键合烷基化壳聚糖在作为药物载体材料中的应用。

背景技术

两亲性聚合物在结构上可以划分出亲水部分和疏水部分，使用两亲性聚合物组成的胶团作为药物载体，在水溶液中能形成具有球形“核-壳”结构的聚合物胶团，这种独特的化学结构有许多优点：如胶团在体内外都能保持稳定，并具有良好的生物相容性，聚合物胶团疏水性的内核可装载难溶性药物，并可作为药物储库，亲水性的外壳可减少胶团与单核吞噬细胞系统间的相互作用，避免被单核吞噬细胞大量摄取，并有利于胶团在水中的分散稳定性。但大多数聚合物胶团普遍存在药物的泄漏情况，因而，人们迫切希望设计出一种能够在体循环中保持相对稳定，在靶部位快速释放药物的新型聚合物胶团。

大多数哺乳动物细胞内都存在高浓度的还原性谷胱甘肽（GSH），它可使二硫键与巯基发生可逆变化。细胞内与细胞外环境间的谷胱甘肽含量相差近千倍，即在细胞内谷胱甘肽约在毫摩尔级，而在细胞外环境的仅为微摩尔级。采用对载体材料进行二硫键修饰的手段，可使载药胶团在细胞外环境中保持稳定，因还原性谷胱甘肽浓度低，二硫键的交联作用可防止药物体液循环分布过程中的渗漏，从而可降低抗肿瘤药物对正常组织的毒副反应；当胶团经高效摄取进入肿瘤细胞后，在细胞内高浓度谷胱甘肽的作用下，二硫键还原成巯基，装载的药物可被大量释放，产生还原响应性，达到控制释放的目的。

壳聚糖是一种具有良好的生物相容性、生物可降解性、低毒性的聚阳离子天然高分子材料，已被广泛应用于药物辅料、止血材料、组织工程支架等。尽管以壳聚糖为基本材料所衍生的众多材料，已被应用于药物载体的研究等方面，但由于壳聚糖本身亲水性结构的限制，现有以壳聚糖为基本组成的载体普遍存在难以被细胞所摄取等问题，以致影响最终疗效。此外，由于壳聚糖本身具有分子量大、粘度高以及在生理pH条件下难溶等缺陷，增加了壳聚糖微粒和纳米粒的制备难度，限制了壳聚糖衍生物的应用。

本发明在我们前期研究工作的基础上，利用壳聚糖的降解产物——低分子量壳聚糖，通过二硫键的键合进行烷基化的修饰，合成了一类具有特殊结构的二硫键键合烷基化壳聚糖。该二硫键键合烷基化壳聚糖可在水性介质中通过自聚集形成聚合物胶团，并可被细胞高效摄取；该聚合物胶团可有效负载阿霉素，实现阿霉素的缓慢释放，其释放特征受GSH的影响，在GSH存在下，药物释放速率明显加快。该GSH敏感的材料可应用于抗肿瘤药物的靶向治疗，在体循环过程中减缓药物的释放，一旦进入靶细胞在GSH的作用下可快速释放出药物，有望实现快速有效治疗。

发明内容

本发明的一个目的是提供二硫键键合烷基化壳聚糖，二硫键键合烷基化壳聚糖可以包含下式（a）所表示的结构单元、下式（b）所表示的结构单元和下式（c）所表示的结构单元聚合物：

其中壳聚糖的分子量为1-100kDa，脱乙酰度为70-100%；壳聚糖链上的部分自由氨基被烷基（R）取代，烷基化比例（壳聚糖上的氨基取代度）为1-50%；烷基链R的碳链数目为12～18。

本发明的第二个目的是提供二硫键键合烷基化壳聚糖的合成方法，通过以下方案实现：

（1）低分子量壳聚糖（壳聚糖）的制备

取市售壳聚糖90g溶解于3000mL 1.25%（v/v）的盐酸水溶液（pH 5.0）中，加热并将温度保持在55~60°C，加入5%wt.纤维素酶将其降解，降解过程中用凝胶透析色谱法测定分子量用以控制反应时间，选取截留量分别为3Kda、5Kda、10Kda、30Kda、50Kda和100Kda的超滤膜进行截留和浓缩，从而得到脱乙酰度为70-100%所需分子量的壳聚糖，冷冻干燥即得；

（2）二硫键键合烷基化壳聚糖制备

精密称定交联剂3,3’-二硫代二丙酸390mg或二硫代二琥珀酰丙酸（DSP）590mg，按交联剂上的羧基与烷基胺上的氨基摩尔比1:1加入烷基胺（十八烷胺、十六烷胺、十二烷胺），至反应完全，终止反应后过滤，加入到50mg/mL的壳聚糖水溶液20-100mL中，反应一定时间后将产物移至透析袋中（MWCO 7Kda）用去离子水透析48-72h，除去水溶性副产物。冷冻干燥，无水乙醇洗涤纯化，得到二硫键键合烷基化壳聚糖。

二硫键键合烷基化壳聚糖的合成路线：

其中n与壳聚糖的分子量及烷基链的取代度有关。

本发明的第三个目的是提供二硫键键合烷基化壳聚糖在作为药物载体材料中的应用。本发明所制备得到的二硫键键合烷基化壳聚糖，具有快速细胞摄取和细胞内谷胱甘肽敏感性，具有能在水性介质中自聚集形成胶团的特性并可有效负载抗肿瘤药物阿霉素。1mg/mL的二硫键键合烷基化壳聚糖水溶液，可形成粒径为200nm左右、zeta电位20mV左右的胶团。二硫键键合烷基化壳聚糖的临界胶团浓度为0.04-0.1mg/mL之间，明显低于一般表面活性剂的临界胶团浓度，当胶团遇到体液被稀释时，可以继续保持胶团的结构，表明二硫键键合烷基化壳聚糖适宜作为药物的载体使用，用于控制释放药物的制备。该二硫键键合烷基化壳聚糖，在亲水段和疏水段之间存在二硫键，该二硫键可在细胞内谷胱甘肽的作用下发生断裂，从而使胶团的结构发生变化，实现药物的快速释放。

本发明的有益之处是：所提供的二硫键键合烷基化壳聚糖能够作为一种具有优良性能的纳米载体，并利用细胞内高浓度的谷胱甘肽，实现药物的控制释放。利用这种载体，可应用于药物在体内安全转运；探索大分子物质在靶细胞内的控制释放；为开拓药物的靶向控释治疗，提供理论与技术基础。

附图说明

图1是载阿霉素二硫键键合十八烷壳聚糖与MCF-7细胞共孵育2小时后的荧光显微镜照片（左图模型游离药物阿霉素的荧光摄取照片，右图载阿霉素二硫键键合十八烷壳聚糖的荧光摄取照片）。

图2是载阿霉素二硫键键合十八烷壳聚糖与MCF-7细胞共孵育4小时后的荧光显微镜照片（左图模型游离药物阿霉素的荧光摄取照片，右图载阿霉素二硫键键合十八烷壳聚糖的荧光摄取照片）。

图3是载阿霉素二硫键键合十八烷壳聚糖的体外释放行为。

具体实施方式

本发明结合附图和实施例作进一步的说明。

实施例一

1、低分子量壳聚糖制备

取市售分子量为350kDa的壳聚糖（70%脱乙酰度），在55℃盐酸水溶液下搅拌2小时，使壳聚糖充分溶涨后，加入5%wt.纤维素酶将其降解，以粘度法控制壳聚糖的降解程度。所得壳聚糖的降解液，经过滤除去杂质，使用分子量为50kDa和100kDa的超滤膜进行超滤分级。取分子量介于50kDa和100kDa的超滤液冷冻干燥，得脱乙酰度为90%、分子量75kDa的低分子量壳聚糖。

2、二硫键键合烷基化壳聚糖制备及理化性质测定

精密称取处方量交联剂3,3’-二硫代二丙酸130mg，溶于适量的二甲亚砜中，按摩尔比1:1加入烷基胺（十八伯胺、十六伯胺、十二伯胺），同时加入二环己基碳二亚胺380mg、4-二甲氨基吡啶20mg，N₂保护反应8h，终止反应后过滤，取滤液用碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺活化30分钟，加入50mg/mL壳聚糖水溶液100mL中，60°C水浴反应8h，反应结束后将产物移至透析袋中（MWCO 50Kda）用去离子水透析48h，除去水溶性副产物。冷冻干燥，无水乙醇洗涤纯化，分别得到二硫键键合十八烷壳聚糖、二硫键键合十六烷壳聚糖、二硫键键合十二烷壳聚糖。

二硫键键合烷基化壳聚糖的合成路线，产物为可能的一种结构：

其中n与壳聚糖的分子量及烷基链的取代度有关。

采用三硝基苯磺酸法测定氨基取代度（SD%）。取壳聚糖10mg，置于10mL的容量瓶中，用去离子水定容，即得1.0mg/mL的壳聚糖储备液，分别取0、10、50、100、200、300、400、500μL，用去离子水定容至2mL，加入4%碳酸氢钠2mL和0.1%三硝基苯磺酸2mL，于37℃孵育2h。加入2mol·L^-1盐酸2mL，摇匀，于344nm波长处测定吸光度，制备标准曲线。另取材料10mg，精密称定，置于10mL容量瓶中，去离子水定容。取300μL，同法测定344nm处的吸光度，按标准曲线计算氨基取代度。

采用芘荧光法测定合成所得材料的临界胶团浓度。取芘12mg，精密称定，置100mL量瓶，加丙酮溶解并定容。移取上述芘溶液1.0mL，置100mL容量瓶中稀释并定容。移取稀释后的芘溶液1.0mL分别置10mL玻璃试管中，50℃挥去丙酮。加入不同浓度的聚合物溶液10mL，控制芘终浓度为6.16×10^-7mol·L^-1，室温水浴超声30min（400w，30min）。扫描芘的激发光谱和发射光谱（EX=322nm,EM:I₁=374nm,I₃=384nm,狭缝=10nm,2.5nm），测定荧光强度并计算临界胶团浓度。

精密称定二硫键键合烷基化壳聚糖50mg，，分别加入5mL、50mL去离子水分散，探头超声20次（300w，工作2s停3s），得到10.0mg/mL和1.0mg/mL的聚合物分散液。取上述分散液适量，以Zetasizer 3000HS微粒粒度与表面电位测定仪，分别测定粒径及表面电位。

经测定，采用3,3’-二硫代二丙酸交联得到的二硫键键合十八烷壳聚糖、二硫键键合十六烷壳聚糖、二硫键键合十二烷壳聚糖的理化性质见表1。

表1：二硫键键合烷基化壳聚糖（75KDa，10%）的理化性质

实施例二

1、低分子量壳聚糖制备

取市售分子量为350kDa的壳聚糖（90%脱乙酰度），在55℃和pH 5.0条件下搅拌2小时，使壳聚糖充分溶涨后，按纤维素酶与壳聚糖比例0.5:100（w/w）加入纤维素酶，降解壳聚糖。以粘度法控制壳聚糖的降解程度。所得壳聚糖的降解液经过滤除去杂质，使用分子量为1KDa、3KDa的超滤膜进行超滤分级。分级后的超滤液冷冻干燥，得脱乙酰度为95%、分子量为1.2KDa的壳聚糖。

2、二硫键键合烷基化壳聚糖制备及理化性质测定

精密称取处方量交联剂二硫代二琥珀酰丙酸590mg，溶于适量的二甲亚砜中，按摩尔比1:1加入烷基胺（十八伯胺、十六伯胺、十二伯胺），N₂保护反应8h，终止反应后过滤，取滤液用碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺活化30分钟，加入到50mg/mL壳聚糖水溶液中，60°C水浴反应8h，反应结束后将产物移至透析袋中（MWCO 1KDa）用去离子水透析72h，除去水溶性副产物。冷冻干燥，无水乙醇洗涤纯化，得到二硫键键合十八烷壳聚糖、二硫键键合十六烷壳聚糖、二硫键键合十二烷壳聚糖。

采用三硝基苯磺酸法，测定所得二硫键键合烷基化壳聚糖的氨基取代度。取不同量的壳聚糖（0.5~9mg），精密称定，分别溶于2mL的蒸馏水中，加入4％（w/v）的碳酸氢钠溶液2mL和0.1％（w/v）的三硝基苯磺酸2mL，37℃孵育2h。加入2mol/mL盐酸2mL，摇匀，在344nm波长处测定吸收值，制备标准曲线。取上述二硫键键合烷基化壳聚糖4mg溶于2mL去离子水，同法操作，测定344nm波长处的吸收值，按标准曲线计算二硫键键合烷基化壳聚糖的氨基取代度。

采用芘荧光法，测定二硫键键合烷基化壳聚糖临界胶团浓度。取二硫键键合烷基化壳聚糖10mg，精密称定，溶解于蒸馏水，探头超声20次（400w，工作2s停3s），定容至10mL。将1mg/mL的二硫键键合烷基化壳聚糖溶液，稀释成不同浓度的溶液各10mL，分别加入定量的芘（芘的终浓度为6.16×10^-7mol·L^-1），水浴超声（400w，30min）。扫描芘的激发光谱和发射光谱，测定荧光强度，并计算临界胶团浓度。

精密称定二硫键键合烷基化壳聚糖10mg，溶解于蒸馏水，探头超声20次（300w，工作2s停3s），定容至10mL，制备1mg/mL的二硫键键合烷基化壳聚糖胶团溶液。Zetasizer3000HS分析仪，分别测定二硫键键合烷基化壳聚糖胶团的粒径及Zeta电位。

经测定，采用二硫代二琥珀酰丙酸交联得到的二硫键键合烷基化壳聚糖的理化性质见表2。

表2：二硫键键合烷基化壳聚糖（1.2KDa，50%）的理化性质

实施例三

1、低分子量壳聚糖制备

取市售分子量为350kDa的壳聚糖（70%脱乙酰度），在55℃盐酸水pH 5.0溶液下搅拌2小时，使壳聚糖充分溶胀后，加入5%wt.纤维素酶将其降解，以粘度法控制壳聚糖的降解程度。所得壳聚糖的降解液，经过滤除去杂质，使用分子量为3kDa、5kDa、10kDa、30kDa和50kDa的超滤膜进行超滤分级，得脱乙酰度为90%、分子量1.5kDa,7.5kDa,18.0kDa,50.4kda和67.3kDa的低分子量壳聚糖。

2、二硫键键合烷基化壳聚糖制备及理化性质测定

精密称取处方量交联剂3,3’-二硫代二丙酸260mg，溶于适量的二甲亚砜中，按摩尔比1:1加入硬脂胺（十八伯胺），同时加入二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶，N₂保护60°C反应8h，终止反应后过滤，取滤液用碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺活化30min，加入50mg/mL不同分子量壳聚糖的水溶液中，60°C水浴反应8h，反应结束后将产物移至不同分子量截留的透析袋中，去离子水透析48h，除去水溶性副产物。冷冻干燥，无水乙醇洗涤纯化，得到不同分子量二硫键键合十八烷壳聚糖。

采用三硝基苯磺酸法，测定二硫键键合十八烷壳聚糖的氨基取代度。取不同分子量的壳聚糖（0.5-9mg）分别溶于2mL的蒸馏水中，加入4％（w/v）的碳酸氢钠溶液2mL和0.1％（w/v）的三硝基苯磺酸2mL，37℃孵育2h。加入2mol/L盐酸2mL，摇匀，在344nm波长处测定吸收值，制备标准曲线。取上述二硫键键合烷基化壳聚糖4mg溶于2mL去离子水，同法操作，测定344nm波长处的吸收值，按标准曲线计算不同分子量二硫键键合十八烷壳聚糖的氨基取代度。

采用芘荧光法，测定二硫键键合十八烷壳聚糖的临界胶团浓度。分别取上述二硫键键合十八烷壳聚糖10mg，精密称定，溶解于蒸馏水，探头超声20次（300w，工作2s停3s），定容至10mL。将1mg/mL的二硫键键合十八烷壳聚糖溶液稀释成不同浓度的溶液各10mL，分别加入定量的芘（芘的终浓度为6.17×10^-7mol·L^-1），水浴超声（400w，30min）。扫描芘的激发光谱和发射光谱，测定荧光强度，并计算临界胶团浓度。

另取精密称定上述二硫键键合十八烷壳聚糖10mg，溶于蒸馏水，探头超声20次（300w，工作2s停3s），定容至10mL，制备1mg/mL的二硫键键合十八烷壳聚糖溶液。Zetasizer3000HS分析仪，分别测定不同分子量二硫键键合十八烷壳聚糖的粒径及Zeta电位。

经测定，不同壳聚糖分子量的二硫键键合十八烷壳聚糖的理化性质见表3。

表3：不同壳聚糖分子量的二硫键键合烷基化壳聚糖理化性质

实施例四

1、低分子量壳聚糖制备

取市售分子量为350kDa的壳聚糖（70%脱乙酰度），在55℃盐酸水溶液下搅拌2小时，使壳聚糖充分溶涨后，加入5%wt.纤维素酶将其降解，以粘度法控制壳聚糖的降解程度。所得壳聚糖的降解液，经过滤除去杂质，使用分子量为5kDa和10kDa的超滤膜进行超滤分级。取分子量介于10kDa、20kDa的超滤液冷冻干燥，得脱乙酰度为90%、分子量18.5kDa的低分子量壳聚糖。

2、二硫键键合烷基化壳聚糖制备及理化性质测定

精密称取处方量交联剂3,3’-二硫代二丙酸130mg，溶于适量的二甲亚砜中，按摩尔比1:1加入十八伯胺（硬脂胺），同时加入二环己基碳二亚胺380mg、4-二甲氨基吡啶20mg，N₂保护反应8h，终止反应后过滤，取滤液用碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺活化30分钟，加入50mg/mL壳聚糖水溶液中，60°C水浴反应8h，反应结束后将产物移至透析袋中（MWCO 7Kda）用去离子水透析48h，除去水溶性副产物。冷冻干燥，无水乙醇洗涤纯化，分别得到二硫键键合十八烷壳聚糖。

采用三硝基苯磺酸法测定二硫键键合十八烷壳聚糖的氨基取代度（SD%）。取壳聚糖10mg，置于10mL的容量瓶中，用去离子水定容，即得1.0mg/mL的壳聚糖储备液，分别取0、10、50、100、200、300、400、500μL，用去离子水定容至2mL，加入4%碳酸氢钠2mL和0.1%三硝基苯磺酸2mL，于37℃孵育2h。加入2mol·L^-1盐酸2mL，摇匀，于344nm波长处测定吸光度，制备标准曲线。另取材料10mg，精密称定，置于10mL容量瓶中，去离子水定容。取300μL，同法测定344nm处的吸光度，按标准曲线计算氨基取代度。

采用芘荧光法测定二硫键键合十八烷壳聚糖的临界胶团浓度。取芘12mg，精密称定，置100mL量瓶，加丙酮溶解并定容。移取上述芘溶液1.0mL，置100mL容量瓶中稀释并定容。移取稀释后的芘溶液1.0mL分别置10mL玻璃试管中，50℃挥去丙酮。加入不同浓度的聚合物溶液10mL，控制芘终浓度为6.16×10^-7mol·L^-1，室温水浴超声30min（400w，30min）。扫描芘的激发光谱和发射光谱（EX=322nm,EM:I₁=374nm,I₃=384nm,狭缝=10nm,2.5nm），测定荧光强度并计算临界胶团浓度。

精密称定二硫键键合十八烷壳聚糖10mg，加入10mL去离子水分散，探头超声20次（300w，工作2s停3s），得到1mg/mL分散液，以Zetasizer 3000HS微粒粒度与表面电位测定仪，分别测定粒径及Zeta电位。

结果：测得该二硫键键合十八烷壳聚糖的氨基取代度为5.7%，临界胶团浓度为57.0μg/mL，粒径为220nm，表面电位为23.8mV。

3、载模型药物阿霉素的二硫键键合十八烷壳聚糖制备

精密称定二硫键键合十八烷壳聚糖40mg，用去离子水配成2mg/mL，探头超声20次（300w，工作2s停3s）；取1.0mg/mL的碱基化阿霉素溶液，冰浴磁力搅拌下，逐滴加入到二硫键键合十八烷壳聚糖的水溶液中，使DOX的投药量分别为5%、10%（w/w%），冰浴探头超声30（300w，工作2s停3s），去离子水透析24h，每2h换水一次。取保留液，定容至载体浓度为1.0mg/mL后4℃低速离心（4000rpm，10min），除去尚未增溶的阿霉素固体，上清液即为载阿霉素的二硫键键合十八烷壳聚糖。

4、载阿霉素的二硫键键合十八烷壳聚糖细胞摄取

取0.1g异硫氰基荧光素和0.5g载阿霉素的二硫键键合十八烷壳聚糖，精密称定后分别溶解于60%乙醇溶液中。在冰浴、避光与磁力搅拌（400r·min^-1）条件下，将载阿霉素的二硫键键合十八烷壳聚糖乙醇溶液，滴加到异硫氰基荧光素溶液中，相同条件下继续反应10小时。终反应液置透析袋，去离子水透析24h，除去未反应异硫氰基荧光素。透析液冷冻干燥，得异硫氰基荧光素标记载阿霉素的二硫键键合十八烷壳聚糖。取异硫氰基荧光素标记载阿霉素二硫键键合十八烷壳聚糖10mg，精密称定。加适量去离子水，水浴超声10min分散，得异硫氰基荧光素标记载阿霉素的二硫键键合十八烷壳聚糖溶液。

以人乳腺癌细胞MCF-7细胞为模型细胞，在37℃，5%CO₂条件下培养细胞至呈对数生长期后，离心收集，按每孔3×10⁴个细胞的密度接种24孔培养板，孵箱内预培养24小时。在培养液中加入异硫氰基荧光素标记载阿霉素的二硫键键合十八烷壳聚糖溶液孵育，浓度控制为100μg/mL。培养一定时间后，用荧光倒置显微镜观察，结果参见图1、图2。荧光显微镜观察结果显示，载阿霉素二硫键键合十八烷壳聚糖能快速被细胞所摄取，体现出细胞浆滞留功能，并能在细胞内快速释放出包载的阿霉素。

5、载阿霉素的二硫键键合十八烷壳聚糖体外氧化还原敏感性研究

在15mL释放介质（磷酸缓冲盐溶液，pH 7.4）中加入1mL的载阿霉素二硫键键合十八烷壳聚糖溶液，放入恒温摇床37℃下进行释放，经时取样，全部替换释放介质，对照组加入具有强还原性的谷胱甘肽至终浓度为10mM，透析袋（MWCO 7Kda）取得的样品用荧光光度法测定阿霉素浓度，得到其累计释放量，同法平行测三组。结果参见图3。

由图3可见，游离药物释放速度最快，在4小时即可达到释放量的100%，二硫键键合十八烷壳聚糖在PBS介质中释放较为缓慢，72小时释放了总载药量的65%，而在加有还原剂谷胱甘肽的释放介质中，释放速率明显加快，尤其是当中2小时之后的部分。聚合物胶团载药胶团的释放可分为三个阶段，第一阶段是吸附在胶团四周、未被紧密包裹的药物的释放，约为1-2小时；第二阶段是胶团内药物从胶团内部逐渐的释放，根据聚合物胶团的结构不同而释放时间、速率有所不同；最后一个是聚合物胶团自身降解致使药物释放的过程。因而我们可以得出，在加入还原剂之后，药物从胶团内部释放的速率加快、载体的降解过程加快，实现了药物在还原剂作用下的加速释放。

Claims (4)

1.一种二硫键键合烷基化壳聚糖，其特征在于，该二硫键键合烷基化壳聚糖由下式（a）所表示的结构单元、下式（b）所表示的结构单元和下式（c）所表示的结构单元聚合物构成：

其中R为烷基，壳聚糖的分子量为1-100kDa，脱乙酰度为70-100%，壳聚糖链上的部分自由氨基被烷基取代，烷基化比例为1-50%；烷基链R的碳链数目为12～18。

2.根据权利要求1所述的一种二硫键键合烷基化壳聚糖的合成方法，其特征在于，通过以下方案实现：

（1）低分子量壳聚糖的制备：

取市售壳聚糖90g溶解于3000mL体积比为1.25%的盐酸水溶液中，pH 5.0，加热并将温度保持在55～60℃，加入5%wt.纤维素酶将其降解，降解过程中用凝胶透析色谱法测定分子量用以控制反应时间，选取截留量分别为3Kda、5Kda、10Kda、30Kda、50Kda和100Kda的超滤膜进行截留和浓缩，从而得到脱乙酰度为70-100%所需分子量的壳聚糖，冷冻干燥即得；

（2）二硫键键合烷基化壳聚糖制备：

将交联剂3,3’-二硫代二丙酸或二硫代二琥珀酰丙酸，按交联剂上的羧基与烷基胺上的氨基摩尔比1:1加入烷基胺，至反应完全，终止反应后过滤，加入到50mg/mL的壳聚糖水溶液20-100mL中反应，再将产物移至MWCO 7Kda的透析袋中，用去离子水透析48-72小时，除去水溶性副产物，冷冻干燥，无水乙醇洗涤纯化，得到二硫键键合烷基化壳聚糖； 

合成路线，产物为一种结构的二硫键键合烷基化壳聚糖：

其中n与壳聚糖的分子量及烷基链的取代度有关。

3.根据权利要求2所述是合成方法，其特征在于，步骤（2）所述的烷基胺选用十八烷胺、十六烷胺或十二烷胺。

4.根据权利要求1所述的二硫键键合烷基化壳聚糖在作为药物载体材料中的应用。 

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