CN103424500A - 离子色谱定性检测壳寡糖的方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种离子色谱定性检测壳寡糖的方法及应用。利用高效阴离子交换色谱—积分脉冲安培检测法(HPAEC-IPAD)对多种壳寡糖标准样品进行分离，然后用高效阴离子交换色谱—积分脉冲安培检测法相同条件下分离壳寡糖混合物，根据与标准品保留时间对照推断得出壳寡糖混合物中标准样品的分布各峰，计算标准样品的聚合度与其保留因子值，并建立关联数学方程，然后计算壳寡糖混合物中未知峰保留因子，把未知峰的保留因子值代入上述的关联数学方程计算出壳寡糖的未知峰的聚合度，从而实现对所述壳寡糖混合物的定性检测。本发明只需少数几种标准品即可完成对系列化合物定性，可广泛应用于食品安全、生物医药等产业中壳寡糖产品的聚合度评价成本低，检测方便准确。
Description
技术领域
本发明涉及一种离子色谱定性检测壳寡糖的方法及应用。
背景技术
色谱法最根本的定性指标是组分在色谱柱内的滞留时间即保留时间。保留指数又称柯瓦特指数，它不像保留值那样极大的受实验条件的影响，也不像Vg值要求知道固定液的质量，它还克服了相对保留值定性时只有一个基准物质，在确定保留时间与基准物质的间隔较大的组分时，会产生较大相对误差的问题。目前保留指数通常应用于气相色谱和质谱的辅助定性研究中，至今未见关于将保留值定性方法应用于离子色谱分析物辅助定性方面的文献报道。
对于壳寡糖的定性方法，目前已有薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法等，但这些方法都需要使用标准样品进行验证。而壳寡糖的标准样品不但价格昂贵，且供应商极少因而较难购全。低聚壳寡糖是一类成系列的化合物，实际生产的分析过程中一般也无法购得所有聚合度的壳寡糖标准样品，因而，在实际生产过程中亟待开发一种只需少数几种标准品即可完成对全系列化合物进行定性的方法。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的是提供一种离子色谱定性检测壳寡糖的方法及应用。
一种离子色谱定性检测壳寡糖的方法，利用高效阴离子交换色谱—积分脉冲安培检测法(HPAEC-IPAD)对多种壳寡糖标准样品进行分离，然后用高效阴离子交换色谱—积分脉冲安培检测法相同条件下分离壳寡糖混合物，根据与标准品保留时间对照推断得出壳寡糖混合物中标准样品的分布各峰，计算标准样品的聚合度（DP）与其保留因子（k'）值，并建立关联数学方程，然后计算壳寡糖混合物中未知峰保留因子，把未知峰的保留因子值代入上述的关联数学方程计算出壳寡糖的未知峰的聚合度，从而实现对所述壳寡糖混合物的定性检测。
所述的壳寡糖混合物包括壳寡糖标准样品和未知壳寡糖。
所述的壳寡糖标准样品的聚合度和未知壳寡糖的聚合度不一致。
所述的关联数学方程为线性方程，logk'= alogDP+c, 其中a 为实数参数，c为常数。
色谱条件为85%(V/V)100 mmol/L 氢氧化钠和15%(V/V)水组成的淋洗液进行等度淋洗，流速0.40 mL/min，柱温30℃；检测条件为检测池温度30℃，池内以Au为zz工作电极，Ag-AgCl作参比电极，积分脉冲安培法进行检测。
一种所述的方法，应用于食品安全、生物医药产业中壳寡糖产品的聚合度评价。
一种所述的方法，当其他系列化合物具有壳寡糖的检测特性时，适用于所述的其他系列化合物的定性检测。
本发明的有益效果：本发明只需少数几种标准品即可完成对系列化合物定性，可广泛应用于食品安全、生物医药等产业中壳寡糖产品的聚合度评价，参照该法也可建立其他成系列化合物的辅助定性方法。成本低，检测方便准确。
附图说明
图1为壳六糖、壳五糖、壳四糖、壳三糖、壳二糖标准样品色谱图。其中，1-5号峰依次为壳六糖、壳五糖、壳四糖、壳三糖和壳二糖。
图2为壳寡糖混合物样品分离色谱图。
图3为壳寡糖样品的质谱图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本发明做进一步的说明。
实施例 壳寡糖的色谱分析
具体步骤如下：
1、标准混合液液配制：分别称取壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖、壳六糖的标准物质各10.0000 mg用超纯水分别溶解并于10 mL容量瓶中定容，配成浓度为1.0000 mg/mL的储备液。然后根据样品含量将储备液稀释成标准使用溶液备用。
2、样品前处理：称取混匀的壳寡糖样品2.0g作为试样，用超纯水溶解后定容至20mL，用0.45μm 水性滤膜过滤，滤液备用。
3、色谱条件：
色谱柱系统：DIONEX CarboPac PA10 保护柱 (4.0×50mm) + DIONEX CarboPac PA10 分析柱(4.0×250mm)。
淋洗液：A：100 mmol/L氢氧化钠；B：超纯水；85%A+15%B(V/V) 等度洗脱。
使用以上色谱柱及淋洗液，流速 0.40 mL/min，色谱柱及检测池温度30℃，进样量 25 μL，ED40A电化学检测器配 Au工作电极和Ag-AgCl 参比电极，积分脉冲安培检测。
4、试验分组及分析：
Ⅰ组——壳寡糖标准品混合液色谱分析，见图1，图中峰1=壳六糖，峰2=壳五糖，峰3=壳四糖，峰2=壳三糖，峰1=壳二糖。
Ⅱ组——壳寡糖混合样品色谱分析，见图2，把色谱峰保留时间与标准品色谱峰保留时间对照，可推出图中峰6=壳六糖，峰7=壳五糖，峰8=壳四糖，峰9=壳三糖，峰10=壳二糖。另外峰1、峰2、峰3、峰4、峰5未知。根据已推断出5个色谱峰（壳二糖～壳六糖）的保留时间计算保留因子与壳寡糖聚合度的关系式（关联数学方程）。根据建立的保留因子与壳寡糖聚合度的关系式推断其余5个未知峰的聚合度，从而推断出样品中另外5种壳寡糖的种类。
Ⅲ组——取壳寡糖样品定容并经前处理后使用液相色谱-质谱联用仪分析，验证推断的壳寡糖样品类型，见图3。
5、保留值计算及定性方法
以图2已知色谱峰（5个）计算表1的各参数，计算壳寡糖聚合度DP与保留因子k'的值，再建立聚合度对数logDP与保留因子对数logk'的相关关系，得出聚合度对数与保留因子对数的线性相关关系。然后根据图2中壳寡糖混合物未知峰保留时间计算出保留因子代入上述建立的聚合度对数与保留因子对数的线性方程，从而计算出未知峰（产物）的聚合度，根据聚合度得出壳寡糖的种类。
表1壳寡糖混合物中壳二糖～壳六糖聚合度DP与保留因子k'相关关系的建立
| 分析物名称 | DP | logDP | tm | tR | t'R | k' | logk' |
| 壳六糖 | 6 | 0.778 | 3.45 | 10.284 | 6.834 | 1.981 | 0.297 |
| 壳五糖 | 5 | 0.699 | 3.45 | 11.300 | 7.850 | 2.275 | 0.357 |
| 壳四糖 | 4 | 0.602 | 3.45 | 12.700 | 9.250 | 2.681 | 0.428 |
| 壳三糖 | 3 | 0.477 | 3.45 | 14.717 | 11.267 | 3.266 | 0.514 |
| 壳二糖 | 2 | 0.301 | 3.45 | 18.484 | 15.034 | 4.358 | 0.639 |
注：表中DP为壳寡糖聚合度，tm为死时间，tR为各壳寡糖的保留时间，t'R为各壳寡糖的 调整保留时间，k'为保留因子，k'=t'R/tm。
考虑到壳寡糖混合物定性公式推导过程相关计算的便捷性，该定性计算过程采用线性方程计算，即由壳寡糖聚合度的对数值logDP与对应壳寡糖的保留因子k'的对数值logk'所建立的相关关系方程进行推导计算。
计算过程如表2，先由表1的数据建立由聚合度为2~6的壳寡糖的logDP与logk'相关关系曲线，再将图1中5号未知峰（经推算极可能为壳七糖）的logk'值数据代入上述曲线方程，计算其“logDP”值，并由此“logDP”值计算其“DP”值，最后将此计算“DP”值与理论DP值计算相对误差，若两者差值小于对应DP值的5%，可认为外推标线得到的壳寡糖聚合度值是可以接受的（本例中即可得图1中5号未知峰为壳七糖）。
表2 定性外推方程的计算
| 峰号 | 分析物名称 | DP | logDP | tm | tR | t’R | k' | logk' |
| 1 | 未知 | 11 | 1.041 | 3.45 | 7.784 | 4.334 | 1.256 | 0.099 |
| 2 | 未知 | 10 | 1.000 | 3.45 | 8.067 | 4.617 | 1.338 | 0.127 |
| 3 | 未知 | 9 | 0.954 | 3.45 | 8.434 | 4.984 | 1.445 | 0.160 |
| 4 | 未知 | 8 | 0.903 | 3.45 | 8.917 | 5.467 | 1.585 | 0.200 |
| 5 | 未知 | 7 | 0.845 | 3.45 | 9.517 | 6.067 | 1.759 | 0.245 |
| 6 | 壳六糖 | 6 | 0.778 | 3.45 | 10.284 | 6.834 | 1.981 | 0.297 |
| 7 | 壳五糖 | 5 | 0.699 | 3.45 | 11.300 | 7.850 | 2.275 | 0.357 |
| 8 | 壳四糖 | 4 | 0.602 | 3.45 | 12.700 | 9.250 | 2.681 | 0.428 |
| 9 | 壳三糖 | 3 | 0.477 | 3.45 | 14.717 | 11.267 | 3.266 | 0.514 |
| 10 | 壳二糖 | 2 | 0.301 | 3.45 | 18.484 | 15.034 | 4.358 | 0.639 |
完成对该未知峰的定性后，再以该峰为最高聚合度，顺序向下再取5个聚合度的壳寡糖数据（本例中DP值为3~7）作为建立新的外推标线方程的壳寡糖的聚合度数据，按以上方法继续对下一个未知峰（本例为图1中4号未知峰）进行定性计算，直至完成所有未知峰定性。计算完成后再对上述样品进行质谱数据的验证，结果见图3。
表3 聚合度确定及其误差计算
| 建立标线的壳寡糖的聚合度范围 | 外推标线方程 | R2 | 未知峰logk'值 | “logDP” | “DP” | DP | Δ(%) |
| 6~10 | logk'= -0.7710 logDP + 0.8966 | 0.9999 | 0.099 | 1.041 | 10.825 | 11 | -1.595 |
| 5~9 | logk'= -0.7730 logDP + 0.8979 | 1.0000 | 0.127 | 1.000 | 9.951 | 10 | -0.488 |
| 4~8 | logk'= -0.7591 logDP + 0.8866 | 0.9999 | 0.160 | 0.954 | 9.068 | 9 | 0.754 |
| 3~7 | logk'= -0.7314 logDP + 0.8658 | 0.9994 | 0.200 | 0.903 | 8.136 | 8 | 1.699 |
| 2~6 | logk'= -0.7142 logDP + 0.8553 | 0.9997 | 0.245 | 0.845 | 7.150 | 7 | 2.143 |
注：Δ=（“DP”- DP）/ DP×100%
4、质谱对照分析
如图3所示，壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖、壳六糖、壳七糖、壳八糖的分子量分别是340，501，662，823，984，1145，1306，1467，其氯离子加合物[M+Cl]-的质量数分别是375，536，697，858，1019，1180，1341，其它以此类推。图中分子量出现大约0.5 Da的偏差可能与三维离子阱质谱有关。
图中459和620的质量数应该是杂质。从质谱可看出样品中存在壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖、壳六糖、壳七糖，从色谱图可明显看存在十种糖，分别是壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖、壳六糖、壳七糖、壳八糖、壳九糖、壳十糖和壳十一糖。聚合度大于8的寡糖含量相对较少。
Claims (7)
1.一种离子色谱定性检测壳寡糖的方法，其特征在于，利用高效阴离子交换色谱—积分脉冲安培检测法(HPAEC-IPAD)对多种壳寡糖标准样品进行分离，然后用高效阴离子交换色谱—积分脉冲安培检测法相同条件下分离壳寡糖混合物，根据与标准品保留时间对照推断得出壳寡糖混合物中标准样品的分布各峰，计算标准样品的聚合度（DP）与其保留因子（k'）值，并建立关联数学方程，然后计算壳寡糖混合物中未知峰保留因子，把未知峰的保留因子值代入上述的关联数学方程计算出壳寡糖的未知峰的聚合度，从而实现对所述壳寡糖混合物的定性检测。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的壳寡糖混合物包括壳寡糖标准样品和未知壳寡糖。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的壳寡糖标准样品的聚合度和未知壳寡糖的聚合度不一致。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的关联数学方程为线性方程，logk'= alogDP+c, 其中a 为实数参数，c为常数。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，色谱条件为85% (V/V)100 mmol/L 氢氧化钠和15%(V/V)水组成的淋洗液进行等度淋洗，流速0.40 mL/min，柱温30℃；检测条件为检测池温度30℃，池内以Au为zz工作电极，Ag-AgCl作参比电极，积分脉冲安培法进行检测。
6.一种根据权利要求1所述的方法，应用于食品安全、生物医药产业中壳寡糖产品的聚合度评价。
7.一种根据权利要求1所述的方法，当其他系列化合物具有壳寡糖的检测特性时，适用于所述的其他系列化合物的定性检测。
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|---|---|
| CN (1) | CN103424500A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104345102A (zh) * | 2014-10-31 | 2015-02-11 | 中国科学院海洋研究所 | 一种测定特定聚合度范围壳寡糖含量的方法 |
| CN108548875A (zh) * | 2018-04-02 | 2018-09-18 | 中国药科大学 | 一种测定壳寡糖中壳二糖、壳三糖含量的方法 |
| CN110514775A (zh) * | 2019-09-02 | 2019-11-29 | 中国林业科学研究院林产化学工业研究所 | 一种单宁酸的高效液相色谱分析方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000060591A (ja) * | 1998-08-26 | 2000-02-29 | Meiji Seika Kaisha Ltd | キトサンオリゴ糖の製造方法 |
| WO2001023398A1 (en) * | 1999-09-28 | 2001-04-05 | Carbion Oy | Novel fucosylated oligosaccharides and process for their preparation |
| CN102314559A (zh) * | 2011-10-19 | 2012-01-11 | 天津大学 | 由高分子结晶行为推导保留方程预测气相色谱保留时间方法 |
| CN102875695A (zh) * | 2012-09-07 | 2013-01-16 | 浙江大学 | 一种谷胱甘肽敏感性烷基化壳聚糖及制备与应用 |
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2013
- 2013-08-16 CN CN2013103562970A patent/CN103424500A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000060591A (ja) * | 1998-08-26 | 2000-02-29 | Meiji Seika Kaisha Ltd | キトサンオリゴ糖の製造方法 |
| WO2001023398A1 (en) * | 1999-09-28 | 2001-04-05 | Carbion Oy | Novel fucosylated oligosaccharides and process for their preparation |
| CN102314559A (zh) * | 2011-10-19 | 2012-01-11 | 天津大学 | 由高分子结晶行为推导保留方程预测气相色谱保留时间方法 |
| CN102875695A (zh) * | 2012-09-07 | 2013-01-16 | 浙江大学 | 一种谷胱甘肽敏感性烷基化壳聚糖及制备与应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| KECHENG LI ET AL: "High‐resolution separation of homogeneous chitooligomers series from 2‐mers to 7‐mers by ion‐exchange chromatography", 《JOURNAL OF SEPARATION SCIENCE》, vol. 36, 30 April 2013 (2013-04-30), pages 1275 - 1282 * |
| KYOKO KOIZUMI ET AL: "High-performance anion-exchange chromatography of homogeneous d-gluco-oligosaccharides and-polysaccharides (polymerization degree⩾ 50) with pulsed amperometric detection", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY》, vol. 464, 31 March 1989 (1989-03-31), pages 365 - 373 * |
| TAKEOMI MURATA ET AL: "Purification and characterization of a chitinase from Amycolatopsis orientalis with N-acetyllactosamine-repeating unit releasing activity", 《BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS》, vol. 336, 31 October 2005 (2005-10-31), pages 514 - 520 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104345102A (zh) * | 2014-10-31 | 2015-02-11 | 中国科学院海洋研究所 | 一种测定特定聚合度范围壳寡糖含量的方法 |
| CN108548875A (zh) * | 2018-04-02 | 2018-09-18 | 中国药科大学 | 一种测定壳寡糖中壳二糖、壳三糖含量的方法 |
| CN110514775A (zh) * | 2019-09-02 | 2019-11-29 | 中国林业科学研究院林产化学工业研究所 | 一种单宁酸的高效液相色谱分析方法 |
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