CN102869677B - 胃肠病症的治疗 - Google Patents

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Abstract

本发明特征为肽、组合物及使用激活鸟苷酸环化酶C(GC-C)受体的肽和其它药剂用于治疗胃肠病症和病况的相关方法，所述胃肠病症和病况包括但不限于，肠易激综合征(IBS)、胃肠运动障碍、功能性胃肠病症、胃食管返流疾病(GERD)、十二指肠胃返流、克罗恩病、溃疡性结肠炎、炎性肠病、功能性胃灼热、消化不良、内脏痛、胃轻瘫、慢性假性肠梗阻(或假性结肠梗阻)、便秘相关的病症和病况和本文描述的其它病况和病症。

Description

胃肠病症的治疗
发明领域
本发明涉及用于治疗胃肠病症的肽、组合物和方法。
优先权要求
本申请要求于2010年2月17日提交的美国临时申请序号61/305,465的优先权。上述申请的全部内容通过引用结合到本文中。
序列表
本申请通过引用以其整体结合名为“IW087_seq_ST25.txt”(527字节)的序列表，该序列表创建于2011年2约17日，与此一道以电子方式提交。
背景
胃肠病症(GI)包括肠易激综合征(IBS)，肠易激综合征为常见的慢性肠道病症，仅在美国就影响20,000,000至60,000,000人(Lehman Brothers, Global Healthcare-Irritable bowel syndrome industry update, 1999年9月)。IBS是胃肠病学家诊断的最常见的病症，占向初级护理医生就诊的12% (Camilleri 2001, Gastroenterology 120:652-668)。在美国，由于健康护理使用的直接费用和工作缺勤造成的间接费用，据估计IBS的经济影响为每年$250亿(Talley 1995, Gastroenterology 109:1736-1741)。IBS患者具有高出三倍的工作缺勤率，且据报道生活质量下降。对于患有IBS的患者，存在巨大的未满足的医疗需求，这是由于存在用于治疗IBS的处方选择很少。
IBS患者遭受腹痛和扰乱的排便模式。基于主要的排便习惯，已将IBS分为三个亚类：便秘型肠易激综合征(c-IBS)、腹泻型肠易激综合征(d-IBS)或二者交替型肠易激综合征(a-IBS)。患有c-IBS的个体估计为IBS患者的20-50%的范围内，其中经常引用30%。与具有相似的性别比率的其它两个亚类相比，c-IBS在女性中更为常见(比率为3:1) (Talley等. 1995, Am J Epidemiol 142:76-83)。
IBS的定义和诊断标准已在“罗马标准(Rome Criteria)”中确定(Drossman等. 1999, Gut 45:Suppl II: 1-81)，其在临床实践中被广泛接受。近来，已经有越来越多的证据表明炎症在IBS的病因中发挥作用。报告表明IBS患者亚群具有少量但显著增加的结肠炎性和肥大细胞、增加的诱导型一氧化氮(NO)和合酶(iNOS)以及改变的炎性细胞因子表达(Talley 2000, Medscape Coverage of DDW week综述)。
胃肠病症还可包括便秘，其中多达34,000,000的美国人遭受慢性便秘(CC)相关症状，8,500,000患者已经寻求治疗。CC患者常常经历硬的和块状的粪便、排便用力、感觉排泄不完全以及每周少于三次排便。CC的不适和气胀通过损伤其工作和参与典型日常活动的能力而显著影响患者的生活质量。
半数CC患者对目前可用的CC治疗不满意。因此，仍存在对治疗CC的新化合物和方法的需求。
美国专利7,304,036和7,371,727公开了在胃肠病症治疗中用作鸟苷酸环化酶C (GC-C)受体激动剂的肽。公开的一种具体肽为利那洛肽(linaclotide)，其由以下氨基酸序列组成：Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr。这些专利还公开了用于制备利那洛肽和相关肽的方法。
利那洛肽具有氨基酸结构：
。
利那洛肽为口服给药，目前处于治疗具有便秘(IBS-c)和慢性便秘(CC)的肠易激综合征的临床试验中，对GI生理具有多种作用，包括：(1)减轻内脏痛，(2)减轻气胀，和(3)增加GI运输，这可导致排便频率增加和粪便稠度改善。口服给药的利那洛肽通过激活腔表面的GC-C而局部发挥作用；口服给予治疗剂量水平后未观测到全身可检测的利那洛肽水平。因此，利那洛肽的临床试验和使用利那洛肽及相关肽进行临床前研究的结果表明，GC-C肽激动剂可在治疗上使用。
美国专利7,304,036和7,371,727的内容通过引用以其整体结合到本文中。
本发明特征为能够以不同亲和力激活和/或结合鸟苷酸环化酶-C (GC-C)的肽，所述肽可在其胺基处修饰为咪唑啉酮衍生物和/或在其羧基处修饰为烷基酯。在哺乳动物中，GC-C为关键的肠功能调节因子，但已在其它组织中检测到低水平的GC-C。GC-C对内源性激素、鸟苷肽和尿鸟苷肽(uroguanylin)、以及热稳定性肠毒素家族的肠细菌肽(ST肽)响应。当激动剂结合到GC-C时，第二信使环GMP(c-GMP)上升，氯化物和碳酸氢盐的分泌增加，这导致肠液分泌增加。在本发明的一些实例中，本文描述的肽可引起c-GMP水平的升高增加，并提供用于治疗胃肠病症的治疗选择。
概述
本发明特征为肽、组合物及使用激活鸟苷酸环化酶C (GC-C)受体的肽和组合物用于治疗胃肠病症和病况的相关方法，所述胃肠病症和病况包括但不限于，肠易激综合征(IBS)、胃肠运动障碍、便秘、功能性胃肠病症、胃食管返流疾病(GERD)、十二指肠胃返流、克罗恩病、溃疡性结肠炎、炎性肠病、功能性胃灼热(functional heartburn)、消化不良、内脏痛、胃轻瘫、慢性假性肠梗阻(或假性结肠梗阻)和本文描述的其它病况和病症。
本发明的一方面提供肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含氨基酸序列Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr，其中所述肽的至少一个羧基为具有式(-COOR)的烷基酯，其中R为C1-6烷基。
在一个实施方案中，所述肽包含氨基酸结构：
或其药学上可接受的盐，其中R’为H或C1-6烷基，且至少一个R’为C1-6烷基。
本发明的第二方面提供包含以下氨基酸结构的肽：
，
或其药学上可接受的盐，其中R为C1-6烷基；或
包含以下氨基酸结构的肽：
，
或其药学上可接受的盐，其中R为C1-6烷基。
本发明的第三方面提供肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
。
本发明的第四方面提供包含本发明肽的药物组合物。
本发明的第五方面提供用于治疗胃肠病症的方法，所述方法包括给予本发明的药物组合物。
本发明的一个或多个实施方案的细节在所附说明书中阐述。
附图简述
图1显示本发明的示例性肽在T84细胞c-GMP测定中的剂量反应。
图2显示用RP-HPLC对示例性肽进行分析的实例，其中“Cys1-IMD”指对其N-末端胺基进行修饰的利那洛肽咪唑啉酮衍生物。
图3显示在竞争性放射性配体结合测定中利那洛肽和Cys1-IMD与T84细胞中细胞表面GC-C受体的特异性结合。
图4显示本发明示例性肽在T84细胞c-GMP测定中的剂量反应。
附图通过举例的方式提供，并非意欲限制本发明的范围。
详述
鸟苷酸环化酶C (GC-C)为位于胃肠上皮细胞顶端表面上的跨膜受体。该受体具有胞外的配体结合结构域、单个跨膜域和C-末端鸟苷酰环化酶结构域。当配体结合到GC-C的胞外域时，胞内催化结构域催化由GTP产生cGMP。在体内，该胞内cGMP的增加启动级联事件，其导致分泌到肠腔的氯化物和碳酸氢盐增加、腔pH增加、腔钠吸收减少、流体分泌增加和肠运输加快。cGMP由上皮双向分泌进入粘膜和腔。本发明的肽和组合物与肠GC-C受体结合，肠GC-C受体为肠中流体和电解质平衡的调节因子。
在一些情况下，使用结合并激活肠GC-C受体的变体或修饰肽来治疗患者可为合乎需要的，但不如肽的非变体形式有效或比肽的非变体形式更有效。活性降低可由对受体的亲和性降低或一旦结合后激活受体的能力降低或肽的稳定性降低引起。活性增加可由对受体的亲和性增加或一旦结合后激活受体的能力增加或肽的稳定性增加引起。
示例性肽的说明：
在不同的实施方案中，可对肽进行修饰，其中至少将该肽的氨基酸残基的一个羧基修饰为烷基酯。该修饰可例如通过在脱水剂存在时用醇处理羧酸产生，其中脱水剂可包括但不限于强酸例如硫酸。由羧基产生烷基酯的其它方法对于本领域技术人员是容易已知的，并结合到本文中。
如本文所使用的，羧基具有式：(-COOH)。
如本文所使用的，术语“烷基”指饱和的直链或支链一价烃基。
如本文所使用的，当基团存在于氨基酸序列的端点时，该基团为末端的或末端。
如本文所使用的，肽上的胺基具有式：，其中R2为肽的其余部分。
如本文所使用的，肽上的亚胺基具有式：，其中R2为肽的其余部分。
在一些实施方案中，肽序列中的谷氨酸氨基酸的侧链羧酸被修饰为烷基酯。
在进一步的实施方案中，肽序列中的谷氨酸氨基酸的侧链羧酸被修饰为乙酯。
在其它实施方案中，肽序列中的酪氨酸氨基酸的C-末端羧酸被修饰为烷基酯。
在进一步的实施方案中，肽序列中的酪氨酸氨基酸的C-末端羧酸被修饰为乙酯。
在若干实施方案中，本发明提供肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含氨基酸序列Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr，其中所述肽的至少一个羧基为具有式(-COOR)的烷基酯，其中R为C1-6烷基。
在若干实施方案中，所述肽包含氨基酸结构：
，
或其药学上可接受的盐，其中R’为H或C1-6 烷基，且至少一个R’为C1-6烷基。
在一些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐包含具有以下氨基酸结构的肽：
，
其中R为C1-6烷基(“Glu3-烷基酯”)。
在其它实施方案中，R为C1-4烷基。
在进一步的实施方案中，R为甲基、乙基或丙基。
在一些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐包含氨基酸结构(“Glu3-乙酯”)：
。
在一些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐包含氨基酸结构：
。
在一些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐包含氨基酸结构：
。
在一些实施方案中，Glu3-烷基酯或药学上可接受的盐无C-末端的酪氨酸。
在一些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐包含氨基酸结构：
，
其中R为C1-6烷基。
在其它实施方案中，R为C1-4烷基。
在进一步的实施方案中，R为甲基、乙基或丙基。
在一些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐包含氨基酸结构(“Tyr14-乙酯”)：
。
在一些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐包含氨基酸结构：
。
在一些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐包含氨基酸结构：
。
不希望被任何理论束缚，可对肽进行修饰，其中该肽的氨基酸残基的至少一个胺基被修饰为亚胺。该修饰可例如通过在酸催化剂存在时用羰基，例如醛或酮处理胺基产生。由胺基产生亚胺的其它方法对于本领域技术人员是容易已知的，并结合到本文中。
在一些实施方案中，亚胺修饰可通过酸催化剂存在时甲醛介导的反应产生。
在进一步的实施方案中，亚胺碳可交联到肽的其它胺基上。
在其它实施方案中，可在N末端氨基酸的α-胺基处将肽修饰为亚胺，其中亚胺碳与该肽第二个氨基酸残基的胺基交联形成五元环。
在其它实施方案中，可如下对包含氨基酸序列Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr的肽进行修饰：在N-末端Cys1的α-胺基处添加亚甲基，其与Cys2的胺基交联，以在该肽的N-末端形成咪唑啉酮五元环(“Cys1-IMD”)。
在一方面，本发明提供可用于治疗胃肠病症的新型GC-C肽激动剂。
在若干实施方案中，本发明提供肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含氨基酸序列Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr，其中所述肽的至少一个胺基为具有式的亚胺，其中R2为肽的其余部分。
在一些实施方案中，所述肽或药学上可接受的盐包含这样的肽，其中肽的N-末端胺基为具有式的亚胺，其中R2为肽的其余部分。
在进一步的实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐包含氨基酸结构：
。
在若干实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐包含氨基酸结构：
。
在一些实施方案中，Cys1-IMD肽或其药学上可接受的盐无C-末端酪氨酸。在一些实施方案中，Cys1-IMD肽或其药学上可接受的盐进一步包含一个或多个肽修饰，其中该肽的至少一个羧基为具有式(-COOR)的烷基酯，其中R为C1-6烷基。
在若干实施方案中，本发明提供肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽由氨基酸序列Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr组成，其中所述肽的至少一个羧基为具有式(-COOR)的烷基酯，其中R为C1-6烷基。
在若干实施方案中，所述肽由以下氨基酸结构组成：
，
或其药学上可接受的盐，其中R’为H或C1-6烷基，且至少一个R’为C1-6烷基。
在一些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐由氨基酸结构组成：
。
其中R为C1-6烷基。在进一步的实施方案中，C-末端酪氨酸不存在。
在其它实施方案中，R为C1-4烷基。
在进一步的实施方案中，R为甲基、乙基或丙基。
在一些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐由具有以下氨基酸结构的肽组成：
。
在一些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐由具有以下氨基酸结构的肽组成：
。
在一些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐由具有以下氨基酸结构的肽组成：
。
在一些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐由具有以下氨基酸结构的肽组成：
，
其中R为C1-6烷基。
在其它实施方案中，R为C1-4烷基。
在进一步的实施方案中，R为甲基、乙基或丙基。
在一些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐由以下氨基酸结构组成：
。
在一些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐由以下氨基酸结构组成：
。
在一些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐由以下氨基酸结构组成：
。
在若干实施方案中，本发明提供肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽由氨基酸序列Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr组成，其中所述肽的至少一个胺基为具有式的亚胺，其中R2为所述肽的其余部分。
在一些实施方案中，所述肽或药学上可接受的盐由这样的肽组成，其中肽的N-末端胺基为具有式的亚胺，其中R2为肽的其余部分。
在进一步的实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐由以下氨基酸结构组成：
。
在一些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐由以下氨基酸结构组成：
。
在一些实施方案中，Cys1-IMD肽或其药学上可接受的盐无C-末端酪氨酸。在一些实施方案中，Cys1-IMD肽或其药学上可接受的盐进一步包含一个或多个肽修饰，例如，其中该肽的至少一个羧基为具有式(-COOH)的烷基酯，其中R为C1-6 烷基。
在一些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐激活鸟苷酸环化酶C受体。
在其它实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐包含30个或更少的氨基酸。
在进一步的实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐包含20个或更少的氨基酸。
在其它实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐包含这样的肽，其中少于五个氨基酸在氨基酸序列的第一个Cys残基之前。
在一些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐为分离的。
在其它实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐为纯化的。
在一些实施方案中，提供肽的药学上可接受的盐。在一些实例中，药学上可接受的盐为氯化物盐。
变体或修饰的肽
在不同的实施方案中，所述肽包含形成一个二硫键的两个Cys，所述肽包含形成两个二硫键的四个Cys，或所述肽包含形成三个二硫键的六个Cys。
在一些肽中，通常形成二硫键的一个或两个Cys残基对的一个或两个成员可用高半胱氨酸、青霉胺、3-巯基脯氨酸(Kolodziej等1996 Int J Pept Protein Res 48:274)、β, β二甲基半胱氨酸(Hunt等1993 Int J Pept Protein Res 42:249)或二氨基丙酸(Smith等1978 J Med Chem 21:117)替换，以在正常的二硫键位置形成替代的内部交联。在其它实施方案中，二硫键可被烃交联替换(Schafmeister等2000 J Am Chem Soc 122:5891, Patgiri等2008 Acc Chem Res 41:1289, Henchey等2008 Curr Opin Chem Biol 12:692)。
肽的生产
在一个实施方案中，本发明肽或前体肽可在任何已知的蛋白表达系统中重组生产，所述蛋白表达系统包括但不限于，细菌(例如，大肠杆菌(E. coli)或枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis))、昆虫细胞系统(例如，果蝇Sf9细胞系统)、酵母细胞系统(例如，酿酒酵母(S. cerevisiae)、S. saccharomyces)或丝状真菌表达系统、或动物细胞表达系统(例如，哺乳动物细胞表达系统)。本发明肽或前体肽也可用化学方法合成。
若重组生产(例如大肠杆菌)肽或变体肽，则编码肽的核酸分子还可编码使成熟肽从细胞分泌的前导肽。因此，编码肽的序列可包含例如天然存在的细菌ST肽的前序列(pre sequence)和原序列(pro sequence)。可从培养基纯化分泌的成熟肽。
可将编码本文所描述肽的序列插入能够在细菌细胞中传递和保持核酸分子的载体中。可将DNA分子插入自主复制载体(合适的载体包括，例如，pGEM3Z、pcDNA3及其衍生物)。载体核酸可为细菌或噬菌体DNA例如噬菌体λ或M13及其衍生物。构建包含本文所描述核酸的载体后，可转化宿主细胞例如细菌。合适的细菌宿主包括但不限于大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、假单胞菌(Pseudomonas)和沙门氏菌(Salmonella)。除编码核酸分子外，基因构建体还包括允许表达的元件，例如启动子和调控序列。表达载体可包含调控转录起始的转录调控序列，例如启动子、增强子、操纵基因和阻遏物序列。多种转录调控序列是本领域人员所熟知的。表达载体还可包含翻译调控序列(例如，不翻译的5'序列、不翻译的3'序列，或内部的核糖体进入位点)。所述载体可具有自主复制能力或可整合到宿主DNA中以保证在肽生产期间的稳定性。
包含本文所描述肽的蛋白编码序列也可与编码肽亲和标签，例如谷胱甘肽S-转移酶(GST)、麦芽糖E结合蛋白、蛋白A、FLAG标签、六-组氨酸、myc标签或流感HA标签的核酸融合，以方便纯化。亲和标签或报告融合物将目的肽的读码框与编码亲和标签的基因的读码框连接使得产生翻译融合物。融合基因的表达导致包含目的肽和亲和标签二者的单个肽的翻译。在一些利用亲和标签的实例中，编码蛋白酶识别位点的DNA序列可在亲和标签和目的肽的读码框之间融合。
适于在除细菌外的蛋白表达系统中生产未成熟或成熟形式的本发明所述肽和变体的基因构建体和方法(是本领域技术人员所熟知的)也可用于在生物系统中生产肽。
在其它实施方案中，可通过tRNA修饰方法重组生产包含非通过翻译装置正常引入的和上文描述的氨基酸(例如β-羧化的Asp、γ-羧化的Glu、Asu、Aad和Apm)的肽。用于修饰tRNA的方法包括，但不限于，修饰反密码子、氨基酸连接位点和/或接受茎(accepter stem)以允许引入本领域已知的非天然和/或任意氨基酸(Biochem. Biophys. Res. Comm. (2008) 372: 480-485; Chem. Biol. (2009) 16:323-36; Nat. Methods (2007) 4:239-44; Nat. Rev. Mol. Cell Biol. (2006) 7:775-82; Methods (2005) 36:227-238; Methods (2005) 36:270-278; Annu. Rev. Biochem. (2004) 73:147-176; Nuc. Acids Res. (2004) 32:6200-6211; Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2003) 100:6353-6357; Royal Soc. Chem. (2004) 33:422-430)。
在一些实施方案中，肽可用化学方法生产。肽可使用多种不同的方法(包括使用传统的BOC或FMOC保护的溶液和固相合成)合成。例如，可使用连续氨基酸偶联在2-氯三苯甲基或Wang树脂上合成所述肽。可使用下列保护基：芴甲氧羰基或叔丁氧羟基(α-氨基，N-末端)、三苯甲基或叔丁基(Cys的硫醇基)、叔丁基(若存在，谷氨酸的γ-羧基和苏氨酸的羟基)和三苯甲基(若存在，天冬酰胺侧链的β-酰胺官能团(function)和酪氨酸的酚基)。偶联可在叔胺存在时使用DIC和HOBt实现，且可使用混合物K (81%三氟乙酸、5%苯酚、5%苯甲硫醚、2.5% 1,2-乙二硫醇、3%水、2%二甲基硫化物、1.5%碘化铵，w/w)对肽进行脱保护和从固体载体切割。去除三氟乙酸和其它挥发物后可使用无机溶剂沉淀肽。Cys残基之间的二硫键可使用二甲基亚砜(Tam等 (1991) J. Am. Chem. Soc. 113:6657-62)或使用空气氧化策略形成。所得肽可通过反相色谱和低压冻干纯化。
这些肽可以以基料(base)形式或作为其药学上可接受的盐制备、分离或使用。盐的实例包括，但不限于，肽的醋酸盐、氯化物、硫酸盐和磷酸盐。
肽和 GC-C 受体激动剂的组合物
在另一方面，提供药物组合物，其中肽，单独或联合的，可与任何药学上可接受的载体或介质混合。
在若干实施方案中，药物组合物包含本文所描述肽或其药学上可接受的盐。药物组合物可包含两种或更多种本文所描述的肽或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，药物组合物包含两种或更多种选自以下的肽：
i. 肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
；
ii. 肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
；和
iii. 肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含氨基酸序列Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr，其中所述肽的至少一个羧基为具有式(-COOH)的烷基酯，其中R为C1-6烷基。
在其它实施方案中，药物组合物包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
；
与利那洛肽的重量相比，所述肽或其药学上可接受的盐构成少于10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的重量。
在进一步的实施方案中，药物组合物包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
；
与利那洛肽的重量相比，所述肽或其药学上可接受的盐构成少于9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%的重量。
在一些实施方案中，利那洛肽的咪唑啉酮衍生物构成少于约15%的组合物重量、少于约10%的组合物重量、少于约7%的组合物重量或少于约5%的组合物重量。在其它示例性实施方案中，利那洛肽的咪唑啉酮衍生物构成约0.01%至约15%的组合物重量、约0.05%至约10%的组合物重量、约0.05%至约7%的组合物重量或约0.05%至约5%的组合物重量。
在其它实施方案中，药物组合物包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
；
与利那洛肽的重量相比，所述肽或其药学上可接受的盐构成少于10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的重量。
在进一步的实施方案中，药物组合物包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
；
与利那洛肽的重量相比，所述肽或其药学上可接受的盐构成少于9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%的重量。
在一些实施方案中，Tyr14-乙酯肽构成少于约15%的组合物重量、少于约10%的组合物重量、少于约7%的组合物重量或少于约5%的组合物重量。在其它示例性实施方案中，Tyr14-乙酯构成约0.01%至约15%的组合物重量、约0.05%至约10%的组合物重量、约0.05%至约7%的组合物重量或约0.05%至约5%的组合物重量。
在其它实施方案中，药物组合物包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
；
与利那洛肽的重量相比，所述肽或其药学上可接受的盐构成少于10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的重量。
在进一步的实施方案中，药物组合物包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
；
与利那洛肽的重量相比，所述肽或其药学上可接受的盐构成少于9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%的重量。
在一些实施方案中，Glu3-乙酯肽构成少于约15%的组合物重量、少于约10%的组合物重量、少于约7%的组合物重量或少于约5%的组合物重量。在其它示例性实施方案中，Glu3-乙酯构成约0.01%至约15%的组合物重量、约0.05%至约10%的组合物重量、约0.05%至约7%的组合物重量或约0.05%至约5%的组合物重量。
在一些实施方案中，药物组合物包含肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
。
在其它实施方案中，药物组合物基本上由肽或其药学上可接受的盐组成，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
。
当用于指组合物时，本文使用的术语“基本上由…组成”及其变体意指该组合物包含唯一的活性肽和其它所需的药学上无活性的添加剂、赋形剂和/或组分(例如，聚合物、位阻的伯胺、阳离子、填充剂、粘合剂、载体、赋形剂、稀释剂、崩解添加剂、润滑剂、溶剂、分散剂、包覆添加剂、促吸收添加剂、控释添加剂、抗结块添加剂、抗微生物添加剂、防腐剂、甜味添加剂、着色剂、风味剂、干燥剂、增塑剂、染料等)，且无其它活性药物成分。
本文所描述肽可与任何药学上容许的载体或介质混合，所述药学上容许的载体或介质例如溶剂、分散剂、包覆剂、促吸收剂、控释剂和一种或多种惰性赋形剂(其包括淀粉、多元醇、成粒剂、微晶纤维素(例如celphere、Celphere beads®)、稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等)。如需要，可使用标准水性或非水性技术包覆片剂剂量的公开组合物。
用作药学上可接受的载体和药学上可接受的惰性载体的赋形剂和前述额外成分的实例包括，但不限于，粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、抗微生物剂和包覆剂。
如本文所使用的，术语“粘合剂”指任何可用于实施本发明的药学上可接受的粘合剂。药学上可接受的粘合剂的实例包括，但不限于，淀粉(例如，玉米淀粉、土豆淀粉和预胶化淀粉(例如，Colorcon, Ltd出售的淀粉1500®和淀粉1500 LM®)和其它淀粉)、麦芽糊精、明胶、天然或合成树胶例如阿拉伯胶、粉状黄芪胶、瓜尔胶、纤维素及其衍生物(例如，甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素(羟丙甲纤维素)、乙基纤维素、乙酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、微晶纤维素(例如FMC Corporation, Marcus Hook, PA, USA出售的AVICEL™，例如AVICEL-PH-101™、-103™和-105™))、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮(例如，聚乙烯吡咯烷酮K30)，及其混合物。
如本文所使用的，术语“填充剂”指任何可用于实施本发明的药学上可接受的填充剂。药学上可接受的填充剂的实例包括，但不限于，滑石、碳酸钙(例如，颗粒或粉末)、磷酸氢钙、磷酸钙、硫酸钙(例如，颗粒或粉末)、微晶纤维素(例如，Avicel PH101或Celphere CP-305)、粉状纤维素、葡萄糖结合剂、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉(例如淀粉1500)、预胶化淀粉、乳糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、海藻糖、蔗糖、麦芽糖、异麦芽糖、棉子糖、麦芽糖醇、松三糖、水苏糖、拉克替醇、palatinite、木糖醇、肌醇，及其混合物。
可特别地用于包覆肽的药学上可接受的填充剂的实例包括，但不限于，滑石、微晶纤维素(例如Avicel PH101或Celphere CP-305)、粉状纤维素、葡萄糖结合剂、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉、预胶化淀粉、乳糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、海藻糖、蔗糖、麦芽糖、异麦芽糖、磷酸氢钙、棉子糖、麦芽糖醇、松三糖、水苏糖、拉克替醇、palatinite、木糖醇、甘露醇、肌醇，及其混合物。
如本文所使用的，术语“添加剂”指任何药学上可接受的添加剂。药学上可接受的添加剂包括但不限于，崩解剂、分散添加剂、润滑剂、助流剂、抗氧化剂、包覆添加剂、稀释剂、表面活性剂、调味添加剂、保湿剂、促吸收添加剂、控释添加剂、抗结块添加剂、抗微生物剂(例如，防腐剂)、着色剂、干燥剂、增塑剂和染料。如本文所使用的，“赋形剂”为任何药学上可接受的添加剂、填充剂、粘合剂或试剂。
本发明组合物还可任选包括其它治疗成分、抗结块剂、防腐剂、增甜剂、着色剂、风味剂、干燥剂、增塑剂、染料、助流剂、抗粘附剂、防静电剂、表面活性剂(润湿剂)、抗氧化剂、薄膜包衣剂等。任何这些任选成分须与本文描述的化合物相容，以确保制剂的稳定性。所述组合物可包含其它需要的添加剂，包括例如乳糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、海藻糖、蔗糖、麦芽糖、棉子糖、麦芽糖醇、松三糖、水苏糖、拉克替醇、palatinite、淀粉、木糖醇、甘露醇、肌醇等及其水合物、氨基酸(例如丙氨酸、甘氨酸)、甜菜碱和肽以及蛋白质(例如白蛋白)。
所述组合物可包含，例如，多种额外溶剂、分散剂、包覆剂、促吸收添加剂、控释添加剂和一种或多种惰性添加剂(其包括，例如，淀粉、多元醇、粒化添加剂、微晶纤维素、稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解添加剂等)等。如需要，可使用标准水性或非水性技术包覆片剂剂型的公开组合物。组合物还可包括，例如，抗结块添加剂、防腐剂、增甜添加剂、着色剂、风味剂、干燥剂、增塑剂、染料等。
合适的崩解剂包括，例如，琼脂、碳酸钙、微晶纤维素、交联羧甲纤维素钠、交联聚维酮、聚维酮、波尔阿克里林钾盐(polacrilin potassium)、淀粉羟乙酸钠、土豆或木薯淀粉、其它淀粉、预胶化淀粉、粘土、其它藻胶、其它纤维素，树胶，及其混合物。
合适的润滑剂包括，例如，硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿物油、轻质矿物油、甘油、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇、其它二醇、硬脂酸、月桂基硫酸钠、滑石、氢化植物油(例如，花生油、棉籽油、向日葵油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油)、硬脂酸锌、油酸乙酯、月桂酸乙酯、琼脂、syloid硅胶(AEROSIL 200, W.R. Grace Co., Baltimore, MD USA)、合成二氧化硅的凝结气溶胶(Evonik Degussa Co., Plano, TX USA)、热解二氧化硅(CAB-O-SIL, Cabot Co., Boston, MA USA)，及其混合物。
合适的助流剂包括，例如，亮氨酸、胶体二氧化硅、三硅酸镁、粉状纤维素、淀粉、滑石和磷酸钙。
合适的抗结块添加剂包括，例如，硅酸钙、硅酸镁、二氧化硅、胶体二氧化硅、滑石、及其混合物。
可用作例如肽组合物的防腐剂的合适抗微生物添加剂包括，例如，苯扎氯铵、苄索氯铵、苯甲酸、苯甲醇、对羟基苯甲酸丁酯、氯化十六烷基吡啶、甲酚、三氯叔丁醇、脱氢乙酸、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸甲酯、苯酚、苯乙醇、苯氧乙醇、醋酸苯汞、硝酸苯汞、山梨酸钾、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠、脱氢乙酸钠、丙酸钠、山梨酸、硫柳汞、百里酚(thymo)，及其混合物。
合适的抗氧化剂包括，例如，BHA(丁羟基茴香醚)、BHT(丁基羟基甲苯)、维生素E、没食子酸丙酯、抗坏血酸及其盐或酯、生育酚及其酯、α-硫辛酸和β-胡萝卜素。
合适的包覆添加剂包括，例如，羧甲基纤维素钠、邻苯二甲酸乙酸纤维素、乙基纤维素、明胶、药用釉、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、聚乙二醇、邻苯二甲酸聚醋酸乙烯酯、紫胶、蔗糖、二氧化钛、棕榈蜡、微晶蜡，及其混合物。合适的保护性包覆剂包括Aquacoat (例如Aquacoat乙基纤维素水性分散体，15% w/w，FMC生物聚合物，ECD-30)、Eudragit (例如EudragitE PO PE-EL，Roehm Pharma Polymers)和欧巴代(Opadry) (例如欧巴代AMB分散体，20% w/w，Colorcon)。
在某些实施方案中，用于肽组合物的合适添加剂包括蔗糖、滑石、硬脂酸镁、交联聚维酮或BHA中的一种或多种。
本发明组合物还可包括其它赋形剂、试剂及其范畴，包括但不限于L-组氨酸、Pluronic®、泊洛沙姆(例如Lutrol®和泊洛沙姆188)、抗坏血酸、谷胱甘肽、促渗剂(例如脂质、胆酸钠、酰基肉毒碱、水杨酸盐、混合胆汁盐、脂肪酸微粒、螯合剂、脂肪酸、表面活性剂、中链甘油酯)、蛋白酶抑制剂(例如大豆胰蛋白酶抑制剂、有机酸)、pH降低剂和有效提升生物利用度的吸收增强剂(包括但不限于US6086918和US5912014中描述的那些)、咀嚼片剂用材料(如右旋糖、果糖、乳糖一水合物、乳糖和阿司帕坦、乳糖和纤维素、麦芽糊精、麦芽糖、甘露醇、微晶纤维素和瓜尔胶、山梨醇晶体)、parenterals (如甘露醇和聚维酮)、增塑剂(如癸二酸二丁酯、用于包覆的增塑剂、邻苯二甲酸聚醋酸乙烯酯)、粉状润滑剂(如山嵛酸甘油酯)、软明胶胶囊(如山梨醇特殊溶液)、用于包覆的球(如糖球)、滚圆剂(如山嵛酸甘油酯和微晶纤维素)、悬浮/胶化剂(如角叉菜胶、结冷胶、甘露醇、微晶纤维素、聚维酮、羟乙酸淀粉钠、黄原胶)、增甜剂(如阿司帕坦、阿司帕坦和乳糖、右旋糖、果糖、蜂蜜、麦芽糊精、麦芽糖、甘露醇、糖蜜、山梨醇晶体、山梨醇特殊溶液、蔗糖)、湿法制粒剂(如碳酸钙、无水乳糖、乳糖一水合物、麦芽糊精、甘露醇、微晶纤维素、聚维酮、淀粉)、焦糖、羧甲基纤维素钠、樱桃奶油风味剂和樱桃风味剂、无水柠檬酸、柠檬酸、糖果糖(confectioner’s sugar)、D&C红33号、D&C黄#10 铝色淀、乙二胺四乙酸二钠、15%乙醇、FD& C黄6号铝色淀、FD&C蓝#1铝色淀、FD&C蓝1号、FD&C蓝2号铝色淀、FD&C绿3号、FD&C红40号、FD&C黄6号铝色淀、FD&C黄6号、FD&C黄10号、棕榈酰硬脂酸甘油酯、单硬脂酰甘油酯、靛洋红、卵磷脂、甘露醇、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、甘草酸单铵、天然和人工柑橘风味剂、药用釉、泊洛沙姆188、聚右旋糖、聚山梨酯20、聚山梨酯80、聚维酮、预胶化玉米淀粉、预胶化淀粉、红氧化铁、糖精钠、羧甲基钠醚(sodium carboxymethyl ether)、氯化钠、柠檬酸钠、磷酸钠、草莓风味剂、合成黑氧化铁、合成红氧化铁、二氧化钛和白蜡。
在一些实施方案中，提供包含本文所描述肽和选自Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+、K+、Na+或Al3+、其组合和/或位阻型伯胺中的一种或多种试剂的药物组合物。在进一步的实施方案中，所述试剂为Mg2+、Ca2+、Zn2+或其组合。在一些实施方案中，阳离子作为但不限于以下形式提供：醋酸镁、氯化镁、磷酸镁、硫酸镁、醋酸钙、氯化钙、磷酸钙、硫酸钙、醋酸锌、氯化锌、磷酸锌、硫酸锌、醋酸锰、氯化锰、磷酸锰、硫酸锰、醋酸钾、氯化钾、磷酸钾、硫酸钾、醋酸钠、氯化钠、磷酸钠、硫酸钠、醋酸铝、氯化铝、磷酸铝或硫酸铝。在进一步的实施方案中，阳离子作为氯化镁、氯化钙、磷酸钙、硫酸钙、醋酸锌、氯化锰、氯化钾、氯化钠或氯化铝提供。在其它实施方案中，阳离子作为氯化钙、氯化镁或醋酸锌提供。
在其它实施方案中，所述试剂为位阻型伯胺。在进一步的实施方案中，位阻型伯胺为氨基酸。在又进一步的实施方案中，所述氨基酸为天然存在的氨基酸。在又进一步的实施方案中，天然存在的氨基酸选自组氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、酪氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、色氨酸、甘氨酸和缬氨酸。又进一步，天然存在的氨基酸为亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸或甲硫氨酸。在又进一步的实施方案中，天然存在的氨基酸为亮氨酸。在其它实施方案中，位阻型伯胺为非天然存在的氨基酸(例如，1-氨基环己烷羧酸)。在进一步的实施方案中，位阻型伯胺为环己胺、2-甲基丁基胺或壳聚糖。在其它实施方案中，一种或多种位阻型伯胺可用于组合物中。
在一些情况下，位阻型伯胺具有式：，其中R1、R2和R3独立地选自：H、C(O)OH、C1-C6烷基、C1-C6烷基醚、C1-C6烷基硫醚、C1-C6烷基羧酸、C1-C6烷基氨甲酸和烷基芳香基，其中任何基团可被卤素或氨基单取代或多取代，只要R1、R2和R3中的不超过两个为H。在其它实施方案中，R1、R2和R3中的不超过一个为H。
在其它实施方案中，提供药物组合物，其包含药学上可接受的载体、肽、选自Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+、K+、Na+、Al3+或其混合物的阳离子和位阻型伯胺。在一个实施方案中，阳离子为Mg2+、Ca2+、Zn2+或其混合物。在进一步的实施方案中，所述药物组合物进一步包含药学上可接受的粘合剂和/或药学上可接受的助流剂、润滑剂或用作助流剂和润滑剂二者的添加剂和/或抗氧化剂。在一些实施方案中，将药物组合物施用于载体。在一些实施方案中，载体为填充剂。
在一些情况下，施用于载体的水溶液中阳离子:位阻型伯胺:肽的摩尔比为5-100:5-50:1。在一些情况下，阳离子:位阻型伯胺的摩尔比可等于或大于2:1(例如，在5:1到2:1之间)。因此，在一些情况下，施用于载体的阳离子: 位阻型伯胺: 肽的摩尔比为100:50:1、100:30:1、80:40:1、80:30:1、80:20:1、60:30:1、60:20:1、50:30:1、50:20:1、40:20:1、20:20:1、10:10:1、10:5:1或5:10:1。当粘合剂例如甲基纤维素存在于施用于载体的GC-C激动剂肽溶液中时，其可以0.5% - 2.5%重量存在(例如，0.7%-1.7%或0.7% - 1%或1.5%或0.7%)。
在进一步的实施方案中，药物组合物进一步包含药学上可接受的粘合剂或添加剂和/或药学上可接受的助流剂、润滑剂或用作助流剂和润滑剂二者的添加剂和/或抗氧化剂。
依照本发明的合适的药物组合物通常可包含一定量的活性化合物和药学上可接受的稀释剂或赋形剂，例如无菌水溶液，以得到一定范围的终浓度，这依预期用途而定。如Remington's Pharmaceutical Sciences (第18版, Mack Publishing Company, 1995)所例示，制备技术通常在本领域是众所周知的。
本文所描述组合物可根据治疗疾病的严重性和类型全身或局部给药，例如，口服(例如使用胶囊剂、粉剂剂、溶液、悬浮剂、片剂、舌下片剂等)、通过吸入(例如使用气雾剂、气体、吸入器、喷雾器等)、耳朵给药(例如使用滴耳剂)、局部(例如使用霜剂、凝胶剂、搽剂、洗剂、软膏剂、糊剂、透皮贴剂等)、经眼给药(例如使用滴眼剂、眼凝胶剂、眼软膏剂)、经直肠给药(例如使用灌肠剂或栓剂)、经鼻给药、含服给药、阴道给药(例如使用灌洗、子宫内装置、阴道栓剂、阴道环或片剂等)、通过植入的储库(reservoir)给药等或胃肠外给药。如本文所使用的，术语"胃肠外"包括，但不限于，皮下、静脉内、肌肉、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。所述组合物优选口服给药、腹膜内给药或静脉内给药。
对治疗胃肠病症而言，本文所描述肽优选口服给药，例如，作为片剂、胶囊剂、包含预定量的活性成分药丸的囊剂、凝胶剂、糊剂、糖浆剂、大丸剂、药糖剂、膏剂、粉剂、低压冻干粉、粒料、作为溶液或水性液体或非水性液体中的混悬剂、作为水包油液体乳剂或油包水液体乳剂，通过脂质体制剂(见，例如EP 736299)或以一些其它形式。口服给药的组合物可包括粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、润滑剂、表面活性剂或分散剂、调味剂和保湿剂。口服给药的制剂例如片剂可任选包覆或刻痕(scored)且可被配制为提供其中活性成分的持续释放、缓释或控释。
所述肽可与其它用于治疗胃肠病症的试剂包括但不限于本文所描述的试剂一起给药。
在另一方面，合适的药物组合物可包括一种或多中其它治疗试剂。这些治疗试剂包括，但不限于，止痛剂；、抗分泌剂包括质子泵抑制剂、酸泵拮抗剂、H2受体拮抗剂；PDE5抑制剂；GABA-B拮抗剂；胆汁酸多价螯合剂；促运动和促蠕动剂(prokinetic and promotility agent)；抗抑郁剂、抗生素；止吐剂和粘膜保护剂。
治疗方法
在多个实施方案中，本文所描述肽和组合物可用于治疗胃肠病症患者。
在一些实施方案中，胃肠病症选自肠易激综合征(IBS)、便秘、功能性胃肠病症、胃食管反流病、功能性胃灼热、消化不良、内脏痛、胃轻瘫、慢性假性肠梗阻、假性结肠梗阻、克罗恩病、溃疡性结肠炎和炎性肠病。
在进一步的实施方案中，胃肠病症为便秘。便秘可为慢性便秘、原发性便秘、由于手术后肠梗阻或使用麻醉剂导致。临床上接受的定义便秘的标准包括排便频率、粪便稠度和排便容易度。便秘的一个常见定义为每周排便少于三次。其它定义包括异常硬的粪便或需过度用力的排便(Schiller 2001, Aliment Pharmacol Ther 15:749-763)。便秘可为原发性的(功能性便秘或慢传输性便秘)或继发于其它原因包括神经系统的、代谢的或内分泌病症。这些病症包括糖尿病、甲状腺功能减退、甲状腺功能亢进、低钙血症、多发性硬化、帕金森病、脊髓病变、神经纤维瘤病、自主神经病、恰加斯病(Chagas disease)、先天性巨结肠症(Hirschsprung’s disease)和囊性纤维化。便秘也可由手术(手术后肠梗阻)引起或由于使用药物例如镇痛药(如类罂粟碱)、抗高血压药、抗惊厥药、抗抑郁剂、镇痉剂和抗精神病药。
在其它实施方案中，胃肠病症为肠易激综合征(IBS)。肠易激综合征可为便秘型肠易激综合征(c-IBS)、腹泻型肠易激综合征(d-IBS)或二者交替型肠易激综合征(a-IBS)。
在其它实施方案中，胃肠病症为消化不良。
在其它实施方案中，胃肠病症为胃轻瘫。胃轻瘫可选自原发性、糖尿病型或手术后胃轻瘫。
在又其它实施方案中，胃肠病症为慢性假性肠梗阻。
在其它实施方案中，胃肠病症为克罗恩病。
在一些实施方案中，胃肠病症为溃疡性结肠炎。
在一些实施方案中，胃肠病症为炎性肠病。
在另一个实施方案中，胃肠病症内脏痛。在进一步的实施方案中，本发明以特征为用于减轻患者胃肠痛或内脏痛的方法，所述方法包括给予患者由本文所描述肽组成的药物组合物。本文所描述的肽激动剂可用于治疗、预防或减轻胃肠病症相关的内脏痛或其它病症相关痛的单独或联合疗法。
在另一个实施方案中，本发明特征为用于治疗炎症，包括胃肠道炎症(例如胃肠病症或感染或一些其它病症相关炎症)的方法，所述方法包括给予患者包含本文所述纯化肽的药物组合物。
在另一个实施方案中，本发明特征为用于治疗胃肠病症的方法，所述方法包括口服、经直肠栓剂或胃肠外给予肠鸟苷酸环化酶(GC-C)受体激动剂。
在又另一个实施方案中，本发明特征为用于治疗胃肠病症的方法，所述方法包括给予肠鸟苷酸环化酶 (GC-C)受体激动剂。
在另一方面，本发明特征为通过使样品、组织或生物与本文所描述肽接触，增加生物样品、组织(例如肠粘膜)或细胞(例如，具有GC-A受体的细胞)或完整生物中环鸟苷3’-单磷酸(cGMP)水平的方法。
本文所描述肽GC-C受体激动剂可与其它试剂联合给药。例如，所述肽可与止痛肽或化合物一起给药。在联合疗法中止痛肽或化合物可与本文所描述肽共价连接，或其可作为单独试剂与本文所描述肽一起或序贯给药。本文所描述肽也可与用于治疗GI病症的其它试剂，包括抗抑郁剂、促运动或促蠕动剂、止吐剂、抗生素、质子泵抑制剂、酸阻断剂(例如，组胺H2受体拮抗剂)、酸泵拮抗剂、PDE5 抑制剂、GABA-B激动剂、胆汁酸多价螯合剂和粘膜保护剂联合给药。
在一些实施方案中，可与本文所描述肽一起使用的有用止痛剂包括Ca通道阻断剂(例如，齐考诺肽)、5HT受体拮抗剂(例如，5HT3、5HT4和5HT1受体拮抗剂)、5HT4激动剂(例如，替加色罗[Zelnorm®]、莫沙必利、扎考必利、西沙必利、伦扎必利、普卢卡必利[Resolor®]、苯并咪唑酮衍生物例如BIMU 1和BIMU 8，和利沙必利)、5HT1激动剂(例如，舒马曲坦和丁螺环酮)、阿片样受体激动剂(例如，洛哌丁胺、非多托秦、脑啡肽五肽、吗啡、地芬诺酯(diphenyloxylate)、氟雷法胺、曲美布汀和芬太尼)、CCK受体激动剂(例如，氯谷胺和右氯谷胺)、NK1受体拮抗剂(例如，阿瑞吡坦(aprepitant)、沃氟匹坦、依洛匹坦、R-673 (Hoffmann-La Roche Ltd)、SR-48968和SR-14033 (Sanofi Synthelabo)、CP-122,721 (Pfizer, Inc.)、GW679769 (Glaxo Smith Kline)和TAK-637(Takeda/Abbot))、NK2受体拮抗剂(例如，奈帕坦特、沙瑞度坦、GW597599 (Glaxo Smith Kline)、SR-144190 (Sanofi-Synthelabo)和UK-290795 (Pfizer Inc))、NK3受体拮抗剂(例如奥沙奈坦(SR-142801，Sanofi-Synthelabo)、SR-241586和他奈坦)、去甲肾上腺素-血清素重吸收抑制剂(NSRI) (例如，米那普仑)、混合和选择性多巴胺受体拮抗剂(例如--甲氧氯普胺、伊托必利、多潘立酮)、香草素(vanilloid)和大麻素(cannabanoid)受体激动剂、sialorphin和sialorphin相关肽。文献中描述了不同种类的止痛剂。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗试剂可与本文所描述肽联合使用。这些试剂包括抗抑郁剂、促运动或促蠕动剂、止吐剂、抗生素、质子泵抑制剂、酸阻断剂(例如，组胺H2受体拮抗剂)、酸泵拮抗剂、PDE5抑制剂、GABA-B激动剂、胆汁酸多价螯合剂和粘膜保护剂。
抗抑郁剂的实例包括，但不限于，三环抗抑郁剂例如阿米替林(Elavil®)、地昔帕明(Norpramin®)、米帕明(Tofranil®)、阿莫沙平(Asendin®)、去甲替林；选择性血清素重吸收抑制剂(SSRI’s)例如帕罗西汀(Paxil®)、氟西汀(Prozac®)、舍曲林(Zoloft®)和西酞普兰 (Celexa®)；及其它例如多塞平(Sinequan®)和曲唑酮(Desyrel®)。
促运动和促蠕动剂的实例包括，但不限于，伊托必利、奥曲肽、氨甲酰甲胆碱、甲氧氯普胺(Reglan®)、多潘立酮(Motilium®)、红霉素(及其衍生物)和西沙必利(Propulsid®)。止吐剂的实例包括，但不限于，丙氯拉嗪。
可使用的抗生素的实例包括用于治疗幽门螺旋杆菌(Heliobacter pylori)感染的抗生素，例如阿莫西林、四环素、甲硝唑,或克拉霉素。其它抗生素例如红霉素及其衍生物也可与本文所描述肽联合使用。
质子泵抑制剂的实例包括，但不限于，奥美拉唑 (Prilosec®)、艾美拉唑(Nexium®)、兰索拉唑(Prevacid®)、泮托拉唑(Protonix®)和雷贝拉唑(Aciphex®)。H2受体阻断剂的实例包括，但不限于，西咪替丁、雷尼替丁、法莫替丁和尼扎替丁。酸泵拮抗剂的实例包括，但不限于，瑞伐拉赞(revaprazan)、CS-526 (J. Pharmacol. Exp. Ther. (2007) 323:308-317)、PF-03716556 (J. Pharmacol. Exp. Ther. (2009) 328(2):671-9)和YH1885 (Drug Metab. Dispos. (2001) 29(1):54-9)。
PDE5抑制剂的实例包括，但不限于，阿伐那非(avanafil)、lodenafil、米罗那非(mirodenafil)、柠檬酸西地那非、他达拉非(tadalafiland)、伐地那非(vardenafil)和乌地那非(udenafil)。GABA-B激动剂包括，但不限于，巴氯芬和XP19986 (CAS登记号. 847353-30-4)。胆汁酸多价螯合剂的实例包括，但不限于，GT102-279、消胆胺、考来维仑、考来维仑氢氯化物、熊去氧胆酸、考来替泊、考来替兰、司维拉姆、与环氧氯丙烷交联的聚二苯烯胺、交联葡聚糖的二烷基氨基烷基衍生物和N-(环烷基)烷基胺。粘膜保护剂的实例包括，但不限于，硫糖铝(胃溃宁)、替普瑞酮、聚普瑞锌、西曲酸酯和次水杨酸铋。
联合疗法可通过给予两种或多种试剂，例如本文所描述肽和另一治疗肽或化合物(其分别单独配制和给药)或通过给予在单个制剂中的两种或多种试剂实现。联合疗法还可包括其它组合。例如，两种试剂可一起配制并与包含第三种试剂的单独制剂共同给药。尽管联合疗法中的所述两种或多种试剂可同时给药，但不必同时给药。例如，第一种试剂(或试剂组合)的给药可在第二种试剂(或试剂组合)给药前数分钟、数小时、数天或数周。因此，所述两种或多种试剂彼此可在数分钟内，或彼此可在1、2、3、6、9、12、15、18或24小时内或彼此可在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14天内或彼此可在2、3、4、5、6、7、8、9或10周内给药。在一些情况下更长的间隔是可能的。虽然在许多情况下联合疗法中使用的所述两种或多种试剂同时存在于患者体内是合乎需要的，但其不必如此。
剂量
本文所描述肽针对成人的剂量范围可通常为口服5 μg至100 mg/天。片剂、胶囊剂或以独立单位提供的其它呈现形式可方便地包含一定量的本文所描述化合物，其在该剂量或该剂量倍数时有效，例如，包含25 μg至2 mg或约100 μg至1 mg的单位。给予患者化合物处方的精确量将是护理医师的职责。然而，采用的剂量将依赖于多种因素，包括患者的年龄和性别、所治疗的精确病症及其严重性。
在多个实施方案中，剂量单位在一天的任何时间与食物一起给予、在一天的任何时间无食物给予、通宵禁食后与食物一起给予(例如与早餐一起)、低脂点心后睡前给予。在一个具体实施方案中，剂量单位在进食(例如就餐)前或后给予。在进一步的实施方案中，剂量单位在进食前约15分钟至1小时给予。在多个实施方案中，一天一次、一天两次、一天三次、一天四次、一天五次或一天六次给予剂量单位。在某些实施方案中，剂量单位与每日剂量相当。
剂量单位中的两种或多种活性成分的每一种精确量将依各组分所需剂量而定。因此，建立这样的剂量单位是有用的，当根据具体剂量表(例如，详细说明一定数量的单位和给药具体时间的剂量表)给药时，递送与患者仅用单组分治疗时的给药剂量相同的各组分。在其它情况下，建立这样的剂量单位可为合乎需要，其可递送比患者仅用单组分治疗时的给药剂量少的一种或多种组分。最后，建立这样的剂量单位可为合乎需要的，其可递送比患者仅用单组分治疗时的给药剂量多的一种或多种组分。
药物组合物可包含额外成分，其包括但不限于本文所描述的赋形剂。在某些实施方案中，剂量单位中的一种或多种治疗试剂可存在于延释或控释制剂中，并且额外治疗试剂可不存在于延释制剂中。例如，本文所描述肽或激动剂可以以相同剂量单位与另一试剂存在于控释制剂或延释制剂中，所述另一试剂可在或可不在控释或延释制剂中。因此，在某些实施方案中，立即释放一种或多种本文所描述试剂和受控释放一种或多种其它试剂可为合乎需要的。
已参照本发明某些示例性实施方案描述本发明。然而，本领域技术人员容易清楚明了的是，以除上文所描述示例性实施方案形式之外的具体形式实施本发明是可能的。其可在不背离本发明精神的情况下进行。示例性实施方案仅为说明性的，无论如何不应被认为是限制性的。本发明范围由所附权利要求书及其等价实施方案而非前述说明书限定。
实施例
本文所描述GC-C激动剂肽或其药学上可接受的盐由美国肽公司(Sunnyvale, CA)通过固相化学合成和天然折叠(空气氧化)制备。在一些情况下，如本文所描述，肽在合成后修饰。
Cys1-IMD肽通过将4.6g (3.0mmol)利那洛肽混合在200ml EtOH中合成。将37% (1.12ml/5eq)甲醛加入至混合物中。将该反应混合物水浴(45℃)孵育过夜。第二天通过旋转蒸发除去溶剂。通过反相色谱进一步纯化该肽。
Glu3-乙酯肽在20 mmol Fmoc-Tyr(tBu)-Wang树脂上合成。用于氨基酸的保护基为：针对Tyr和Thr的叔丁基、针对Asn和Cys的Trt基。通过重复去除Fmoc保护基和偶联保护的氨基酸，在树脂上组装该肽链。DIC和HOBt用作该反应的偶联剂，NMM用作反应的基底(base)。20%哌啶/DMF用作去Fmoc剂。去除最后的Fmoc保护基后，用混合物K处理树脂3小时，以将肽从树脂切割下来，并去除侧链保护基。用冷醚沉淀洗脱的肽并干燥。干燥的肽以1至10(g/v)的比率溶解于TFA/TIS/水(95:3:2v/v)混合物中。室温搅拌该混合物1小时。分离的肽也在冷醚中沉淀，过滤收集，高真空干燥。
使用片段缩合方法合成Tyr14-乙酯肽。使用Fmoc化学在15mmol CTC树脂上制备片段A (Boc-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Pro-Ala-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Gly-OH )。该肽链也通过重复去除Fmoc保护基和偶联保护的氨基酸在树脂上组装。DIC和HOBt用作偶联剂，NMM用作基底。20%哌啶/DMF用作去Fmoc试剂。去除最后的Fmoc保护基后，偶联Boc以保护N-末端氨基。将肽树脂洗涤、干燥并用1% TFA/DCM处理以将肽从树脂切割下来。通过偶联Fmoc-Cys(Trt)-OH和Tyr-OEt. HCl制备片段B (Cys(Trt)-Tyr-OEt )。通过用20% 哌啶/DMF处理该二肽去除Fmoc基。
Tyr14-乙酯肽最后通过偶联DMF中的两个片段合成。HBTU/HOBt/NMM用作该反应的偶联剂。通过用混合物K处理该肽2小时去除保护基。在冷醚中沉淀该肽并干燥。干燥的肽以1至10(g/v)的比率溶解于TFA/TIS/水(95:3:2v/v)混合物中。室温搅拌该混合物1小时。分离的肽再次用冷醚沉淀，过滤收集并高真空干燥。
实施例 1 ：用于 GC-C 活性分析的 T84 细胞中 cGMP 的积聚
用于cGMP测定，将4.5×105细胞/mL的T84细胞在24孔组织培养板中生长过夜。第二天，用1 mL的DMEM (pH 7)洗涤T84细胞两次。第二次洗涤后，用450 µL 1 mM异丁基甲基黄嘌呤(IBMX)/pH 7缓冲液37℃孵育细胞10分钟，以抑制任何磷酸二酯酶活性。随后用DMEM缓冲液(pH 7)将该肽稀释到10×浓度。用T84细胞将50 µL肽溶液稀释至500 µL终体积，使各肽浓度至1×。在100 nM测定该肽，重复一次。
没有用于测定内源性cGMP水平的肽对照。37℃孵育肽30分钟。30分钟后，去除上清液，用0.1 M HCl裂解细胞。冰上裂解细胞30分钟。30分钟后，吸出裂解物，置于96孔HPLC板中，10,000×G旋转10分钟以去除任何细胞碎片。将前述旋转所得上清液移出并加入至新的96孔HPLC板中。
使用LC/MS条件(下表1)和计算的标准曲线测定各样品中cGMP浓度。根据GraphPad Prism软件产生的浓度-反应曲线计算EC50值。
表1：LC/MS条件
实施例 2 ：示例性肽与 T84 细胞 GC-C 受体的相对结合亲和性
使用竞争结合测定法测定利那洛肽和Cys1–IMD与鸟苷酸环化酶C受体(GC-C)的相对结合亲和性，其中肽与已知的GC-C激动剂，猪衍生的热稳定肠毒素(pSTa)竞争人结肠上皮(T84)细胞中细胞表面GC-C受体上的结合位点。pSTa用125I放射标记，以使能够测量其受体结合。竞争结合测定法通过加入不同浓度的各肽(0.1至3,000 nM)至0.20mL反应混合物中实施，所述反应混合物包含Dulbecco's改良的Eagle’s培养基(DMEM)、0.5%牛血清白蛋白(BSA)、2.0 x 105 T84细胞和170 pM [125I]-pSTa (200,000 cpm)。使用该数据构建竞争性放射配体结合曲线并测定利那洛肽和Cys1–IMD的相对结合亲和性，如通过其IC50和K i 值测量的。
利那洛肽和Cys1-IMD二者竞争性抑制[125I]-pSTa与T84细胞中细胞表面GC-C受体的特异性结合。其相对结合亲和性，如通过其抑制常数(K i )测量的，如下：利那洛肽 K i = 3.9 ± 1.6 nM，Cys1-IMD K i = 1.4 ± 0.5 nM (图3)。
实施例 3 ：示例性肽诱导的 T84 细胞 cGMP 反应
如下在T84细胞中检测利那洛肽和Cys1-IMD的鸟苷酸环化酶-C (GC-C)激动剂活性。在96孔板的各孔中，约200,000 T84细胞/孔首先用1 mM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)在0.18 mL Dulbecco’s改良的Eagle’s培养基(DMEM)中37℃孵育10分钟。将各肽稀释至终浓度范围为0.1至10,000 nM，将0.02 mL各稀释液加入包含T84细胞的96孔板中，一式两份，至每孔终体积0.20 mL。37℃孵育肽反应物30分钟。孵育后，去除上清液并丢弃，用冷的0.1 M盐酸(HCl)冰上裂解细胞30分钟。通过离心去除细胞碎片，使用液相色谱和串联质谱测定各裂解物中的鸟苷3’,5’-环单磷酸(环GMP)的浓度。该数据用于构建剂量-反应曲线并计算各检测项目的半最大有效浓度值(EC50)。
利那洛肽和Cys1-IMD在T84细胞中显示GC-C激动剂活性，如通过胞内cGMP增加测量的(图4)。利那洛肽和Cys1-IMD的EC50值分别为315 ± 105 nM和172 ± 32 nM。
实施例 4 ：示例性肽的含量和纯度的测量
本发明肽的含量和纯度可使用Agilent Series 1100 LC系统和Chemstation Rev A.09.03软件或等同物通过反相梯度液相色谱测定。使用YMC ProTM C18柱(尺寸：3.0 x 150 mm, 3.5 um, 120 Å; Waters Corp., Milford, MA)或等同物，并维持在40℃。流动相A (MPA)由含有0.1%三氟乙酸的水组成，而流动相B (MPB)由95%乙腈:5%含有0.1%三氟乙酸的水组成。使用28分钟内0%至47%的MPB梯度实施肽的洗脱，随后4分钟内等速上升(ramp)至100% MPB并维持在100% MPB 5分钟以洗涤柱子。柱子的再平衡通过1分钟内返回至0% MPB并随后维持在100% MPA 10分钟实施。流速为0.6 mL/min，在220nm处通过UV实施检测。
用于分析的样品如下制备：将示例性肽胶囊剂的内含物加入0.1 N HCl中，以获得20 μg肽/mL的靶浓度。将100 μL该溶液注入柱中。
Cys1-IMD肽
使用2-英寸Waters C18柱与0.1% TFA缓冲液、60分钟内缓冲液B的15-45%线性梯度、流速100 mL/min纯化Cys1-IMD肽。将纯度约95%的合并级分加入C18柱中。用TEAP缓冲液和AA缓冲液平衡柱后，在60分钟内用含有15-75%线性梯度的缓冲液B的HAC缓冲液纯化和洗脱肽。含有纯化肽的合并级分低压冻干至干燥。图2显示用RP-HPLC分析利那洛肽和Cys1-IMD产物的实例。
Glu3-乙酯肽
将Glu3-乙酯肽(6.0g)溶解于12L 0.05M碳酸氢铵/水中，通过Ellman’s检验、MS和分析型HPLC监测氧化过程。氧化过程完成耗费约48小时。
将上述溶液过滤并加入2英寸C18柱中，在60分钟内通过使用含有10-40%线性梯度的缓冲液B的0.05M醋酸铵缓冲液、流速100 mL/min纯化。
将纯度>95%的合并级分低压冻干至干燥。该肽干燥后，用乙腈-水重新溶解肽，并通过加入乙酸酸化至pH约4-5，重新低压冻干至干燥。
Tyr14-乙酯肽
Tyr14-乙酯肽如下纯化：将2.5 g分离的肽溶解于5 L 0.05M碳酸氢铵/水中，通过Ellman’s检验、MS和分析型HPLC监测氧化过程。氧化过程完成耗费约16小时。
将上述溶液过滤并加入2英寸Polymer柱中，在60分钟内通过使用含有15-45%线性梯度的缓冲液B的0.05M碳酸氢铵缓冲液、流速100 mL/min纯化。将含有肽的合并级分低压冻干至干燥。该肽干燥后，用乙腈-水重新溶解肽，并通过加入乙酸酸化至pH 4-5，重新低压冻干至干燥。
通过测定制备样品中肽相对于相似制备的外部肽标准品的浓度测量纯化肽的含量。
其它实施方案
本公开引用的所有出版物和专利均通过引用以结合到本文中，其程度与特别并且逐一指明每一出版物或专利申请以通过引用结合相同。如任何通过引用结合的专利或出版物中术语的含义与本公开使用的术语含义冲突，则意欲以本公开的术语含义为准。此外，前述讨论仅公开和描述本发明的示例性实施方案。根据该讨论及附图和权利要求书，本领域技术人员将容易地认识到，可对其进行各种改变、修饰和变更而不背离以下权利要求书所限定的本发明精神和范围。

Claims (24)

1.一种肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽由以下的氨基酸结构组成：
。
2.一种肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽由以下的氨基酸结构组成：
。
3.肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
。
4.权利要求1-3中任一项的肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽激活鸟苷酸环化酶C受体。
5.权利要求1-3中任一项的肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽或其药学上可接受的盐为分离的或纯化的。
6.药物组合物，所述药物组合物包含至少一种权利要求1-3中任一项的肽或其药学上可接受的盐。
7.药物组合物，所述药物组合物包含两种或多种选自以下的肽：
i. 肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
；
ii. 肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
；和
iii. 肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽由氨基酸序列Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr组成，其中所述肽的至少一个羧基为具有式(-COOCH2CH3)的乙基酯。
8.包含利那洛肽和一种肽或其药学上可接受的盐的药物组合物，其中所述肽由选自以下的氨基酸结构组成：
；
；或
；
且与利那洛肽的重量相比，所述肽或其药学上可接受的盐构成少于1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的重量。
9.包含肽或其药学上可接受的盐的药物组合物，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
，
且与利那洛肽或其它鸟苷酸环化酶C激动剂的重量相比，所述肽构成至少90%的重量。
10.基本上由肽或其药学上可接受的盐组成的药物组合物，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
。
11.权利要求6-10中任一项的药物组合物，进一步包含选自以下的一种或多种试剂：(i) 选自Mg2 +、Ca2 +、Zn2 +、Mn2 +、K+、Na+或Al3 +的阳离子或(ii) 位阻型伯胺。
12.权利要求11的药物组合物，其中所述试剂为Mg2 +、Ca2 +、Zn2 +、Mn2 +、K+、Na+或Al3 +，作为以下提供：醋酸镁、氯化镁、磷酸镁、硫酸镁、醋酸钙、氯化钙、磷酸钙、硫酸钙、醋酸锌、氯化锌、磷酸锌、硫酸锌、醋酸锰、氯化锰、磷酸锰、硫酸锰、醋酸钾、氯化钾、磷酸钾、硫酸钾、醋酸钠、氯化钠、磷酸钠、硫酸钠、醋酸铝、氯化铝、磷酸铝或硫酸铝。
13.权利要求12的药物组合物，其中所述试剂为位阻型伯胺，所述位阻型伯胺为选自天然存在的氨基酸和非天然存在的氨基酸或位阻型伯胺为氨基酸衍生物，并且其中所述天然存在的氨基酸为组氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、酪氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、色氨酸或缬氨酸，或所述非天然存在的氨基酸为1-氨基环己烷羧酸、lanthanine或茶氨酸。
14.权利要求11的药物组合物，其中所述位阻型伯胺具有式：，其中R1、R2和R3独立地选自：H、COOH、C1-C6烷基、C1-C6烷基醚、C1-C6烷基硫醚、C1-C6烷基羧酸、C1-C6烷基氨甲酸和烷基芳基，其中任何基团可被卤素或氨基单取代或多取代，只要R1、R2和R3中的不超过一个为H。
15.权利要求14的药物组合物，其中所述位阻型伯胺为环己胺、2-甲基丁基胺、聚合胺或壳聚糖。
16.权利要求11的药物组合物，其中所述药物组合物包含Mg2 +、Ca2 +、Zn2 +、Mn2 +、K+、Na+或Al3 +。
17.权利要求6的药物组合物，进一步包含抗氧化剂，其中所述抗氧化剂为丁羟基茴香醚、维生素E或没食子酸丙酯。
18.权利要求6的药物组合物，进一步包含药学上可接受的粘合剂或添加剂，其中所述药学上可接受的粘合剂或添加剂选自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉、麦芽糊精或纤维素醚，其中所述纤维素醚选自：甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素。
19.权利要求6的药物组合物，进一步包含药学上可接受的填充剂，其中所述药学上可接受的填充剂为纤维素、超细纤维素、微晶纤维素、异麦芽糖、甘露醇或磷酸氢钙。
20.权利要求6的药物组合物，进一步包含额外的治疗剂，其中所述额外的治疗剂选自以下的一种或多种：止痛剂、抗抑郁剂、促蠕动或促运动剂、止吐剂、抗生素、质子泵抑制剂、酸阻断剂、5型磷酸二酯酶抑制剂、酸泵拮抗剂、γ-氨基丁酸-B激动剂、胆汁酸多价螯合剂或粘膜保护剂。
21.包含权利要求6-10或12-20中任一项的药物组合物的剂型，其中所述剂型为胶囊剂或片剂和所述剂量包含5 µg至1 mg的所述肽。
22.权利要求6-10或12-20中任一项所定义的药物组合物，其用于治疗胃肠病症。
23.权利要求22的药物组合物，其中所述胃肠病症选自：肠易激综合征(IBS)，其中所述肠易激综合征为便秘型肠易激综合征(c-IBS)、腹泻型肠易激综合征 (d-IBS)或二者交替型肠易激综合征(a-IBS)；便秘，其中所述便秘为慢性便秘、原发性便秘、由于手术后肠梗阻或使用麻醉剂导致；功能性胃肠病症；胃食管反流病；功能性胃灼热；消化不良；内脏痛；胃轻瘫，其中所述胃轻瘫为原发性、糖尿病型或手术后胃轻瘫；慢性假性肠梗阻；假性结肠梗阻；克罗恩病；溃疡性结肠炎和炎性肠病。
24.权利要求6-10或12-20中任一项所定义的药物组合物，其用于增强患者的肠运动。
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