MX2012009597A - Tratamiento para transtornos gastrointestinales. - Google Patents

Abstract

La presente invención caracteriza péptidos, composiciones, y métodos relacionados para tratar trastornos y condiciones gastrointestinales, que incluyen pero no se limitan a, síndrome del intestino irritable (lBS), trastornos de movilidad gastrointestinal, trastornos gastrointestinales funcionales, enfermedad de reflujo gastroesofageal (GERD), reflujo duodenogástrico, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, enfermedad inflamatoria del intestino, acidez funcional, dispepsia, dolor visceral, gastropáresis, pseudo-obstrucción intestinal crónica (o pseudo-obstrucción colónica), trastornos y condiciones asociadas con estreñimiento, y otras condiciones o trastornos son descritos en la presente, usando péptidos y otros agentes que activan al receptor de guanilato ciclasa C (GC-C).

Description

TRATAMIENTOS PARA TRASTORNOS GASTROINTESTINALES Campo de la Invención Esta invención se refiere a péptidos, composiciones y métodos para tratar trastornos gastrointestinales.

Antecedentes de la Invención Los trastornos gastrointestinales (por sus siglas en inglés, GI) incluyen síndrome del intestino irritable (por sus siglas en inglés, IBS) el cual es un trastorno crónico común del intestino que afecta 20 a 60 millones de individuos en los Estados Unidos solamente (Lehman Brothers, Global Healthcare- Irritable bo el syndrome industry update, Septiembre 1999) . El IBS es el trastorno más común diagnosticado por gastroenterólogos y considera 12% de visitas a especialistas de cuidado primario (Camilleri 2001, Gastroenterology 120:652-668). En los Estados Unidos, el impacto económico del IBS se estima en $25 billones de dólares anualmente, a través de costos directos de uso al cuidado de la salud y costos indirectos de ausentismo laboral (Talley 1995, Gastroenterology 109:1736-1741). Pacientes con IBS tienen tres veces más ausentismo laboral y reportan una calidad de vida reducida. Existe una necesidad médica enorme no cubierta para pacientes que sufren por IBS, puesto que existen algunas opciones de prescripción para tratar IBS.

Pacientes con IBS sufren de dolor abdominal y un Ref . :234389 patrón intestinal alterado. Tres subgrupos de pacientes con IBS han sido definidos con base en el hábito intestinal predominante: síndrome del intestino irritable de estreñimiento predominante (por sus siglas en inglés, c-IBS) , síndrome del intestino irritable de diarrea predominante (por sus siglas en inglés, d-IBS) o alternación entre los dos síndromes del intestino irritable (por sus siglas en inglés, a-IBS) . Estimaciones de individuos quienes sufren de c-IBS varían de 20-50% de los pacientes con IBS con 30% frecuentemente citados. Contrario a los otros dos subgrupos que tienen una relación de género similar, el c-IBS es más común en mujeres (relación de 3:1) (Talley et al. 1995, Am J Epidemiol 142:76-83).

La definición y criterio de diagnóstico para IBS ha sido formalizada en el "Rome Criteria" (Drossman et al. 1999, Gut 45:Suppl II: 1-81), los cuales son bien aceptados en la práctica clínica. Recientemente, ha habido evidencia incrementada para un papel de inflamación en la etiología del IBS. Reportes indican que subseries de pacientes IBS tienen incrementos pequeños pero significantes en células mástil e inflamatorias colónicas, óxido nítrico (por sus siglas en inglés, NO) y sintasa (por sus siglas en inglés, iNOS) inducible incrementada y expresión alterada de citocinas inflamatorias (revisado por Talley 2000, Medscape Coverage of DDW week) .

Los trastornos gastrointestinales también pueden incluir estreñimiento en donde tantos como 34 millones de Americanos sufren de síntomas asociados con estreñimiento crónico (por sus siglas en inglés, CC) y 8.5 millones de pacientes han buscado tratamiento. Pacientes con CC a menudo experimentan heces duras y con bultos, esfuerzo durante la defecación, una sensación de evacuación incompleta, y menos de tres movimientos intestinales por semana. Esta incomodidad e inflamación de CC afecta significantemente la calidad de vida del paciente deteriorando su capacidad para trabajar y participar en actividades diarias típicas.

La mitad de pacientes con CC no están satisfechos con los tratamientos actualmente disponibles para CC. De este modo, permanece una necesidad de nuevos compuestos y métodos para tratar CC.

Las Patentes Estadounidenses 7,304,036 y 7,371,727 describen péptidos que actúan como agonistas del receptor de guanilato ciclasa C (por sus siglas en inglés, GC-C) para el tratamiento de trastornos gastrointestinales. Un péptido particular descrito es linaclotida, el cual consiste de la siguiente secuencia de aminoácido: Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr. Estas patentes también describen métodos para preparar linaclotida y péptidos relacionados .

La linaclotida tiene la estructura de aminoácido de: La linaclotida es oralmente administrada y actualmente en ensayos clínicos para el tratamiento del síndrome del intestino irritable con estreñimiento (por sus siglas en inglés, IBS-c) y estreñimiento crónico (por sus siglas en inglés, CC) , tiene numerosos efectos en la fisiología del GI que incluye: (1) dolor visceral reducido, (2) inflamación' reducida, y (3) transito del GI incrementado, el cual puede conducir a frecuencia de evacuación incrementada y consistencia de heces mejorada. La linaclotida oralmente administrada actúa localmente activando GC-C en la superficie luminal ; no existen niveles detectables de linaclotida vistos sistemáticamente después de la administración oral a niveles de dosis terapéuticas. De este modo, los resultados de ensayos clínicos de linaclotida, así como también estudios preclínicos que se han hecho con linaclotida y péptidos relacionados, sugieren que agonistas del péptido del GC-C pueden ser usados terapéuticamente.

Los contenidos de las Patentes Estadounidenses 7,304,036 y 7,371,727 están incorporados en la presente por referencia en su totalidad.

La presente invención caracteriza péptidos los cuales pueden ser modificados en sus grupos amina en derivados imidazolidinona y/o modificados en sus grupos carboxilo en éster de alquilos que son capaces de activar y/o unirse a los receptores de guanilato ciclasa-C (por sus siglas en inglés, GC-C) a diferentes afinidades. El GC-C es un regulador clave en mamíferos de la función intestinal, aunque bajos niveles de GC-C han sido detectados en otros tejidos. El GC-C responde a las hormonas endógenas, guanilina y uroguanilina , y a péptidos bacterianos entéricos de la familia de enterotoxina estable al calor (péptido ST) . Cuando los agonistas se unen a GC-C, existe una elevación del segundo mensajero, GMP cíclico (por sus siglas en inglés, c-GMP) , y un incremento en secreción de bicarbonato y cloruro, resultando en un incremento en la secreción de fluido intestinal. En algunos ejemplos de la presente invención, los péptidos descritos aquí pueden producir elevación incrementada de niveles de c-GMP y proporcionar una opción terapéutica para tratar trastornos gastrointestinales.

Breve Descripción de la Invención La presente invención caracteriza péptidos, composiciones, y métodos relacionados para tratar trastornos y condiciones gastrointestinales, que incluyen pero no se limitan a, síndrome del intestino irritable (por sus siglas en inglés, IBS), trastornos de movilidad gastrointestinal, estreñimiento, trastornos gastrointestinales funcionales, enfermedad de reflujo gastroesofageal (por sus siglas en inglés, GERD) , reflujo duodenogástrico, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, enfermedad inflamatoria del intestino, acidez funcional, dispepsia, dolor visceral, gastropáresis, pseudo-obstrucción intestinal crónica (o pseudo-obstrucción colónica) , y otras condiciones y trastornos descritos en la presente usando péptidos y composiciones · que activan el receptor de guanilato ciclasa C (GC-C) .

Un aspecto de la presente invención proporciona un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende la secuencia de aminoácido Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr, en donde al menos un grupo carboxilo del péptido es un éster de alquilo que tiene la fórmula (-COOR) en la cual R es un alquilo Ci-6.

En una modalidád, el péptido comprende la estructura de aminoácido de: o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde R' es H o un alquilo C1-6, y al menos un R' es alquilo Ci-6.

Un segundo aspecto de la presente invención proporciona un péptido que comprende la estructura 'de aminoácido de: o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde R es un alquilo Ci-6; o un péptido que comprende la estructura de aminoácido de: o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde R es alquilo Ci-6.

Un tercer aspecto de la presente invención proporciona un péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende la estructura de aminoácido de: Un cuarto aspecto de la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un péptido de la presente invención.

Un quinto aspecto de la presente invención proporciona un método para tratar un trastorno gastrointestinal, el cual incluye administrar una composición farmacéutica de conformidad con la presente invención.

Los detalles de una o más modalidades de la invención son expuestos en la descripción acompañante.

Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 muestra la respuesta de dosis de péptidos ejemplares de la presente invención en un ensayo de c-GMP de células T84.

La Figura 2 demuestra un ejemplo de un análisis de péptidos ejemplares por RP-HPLC, en donde "Cysi-IMD" se refiere al derivado de linaclotida imidazolidinona modificada en su grupo amina N-terminal.

La Figura 3 muestra enlace específico de linaclotida y Cysx-IMD a receptores GC-C de la superficie celular en células T84 en un ensayo de enlace de radioligando competitivo .

La Figura 4 muestra la respuesta de dosis de péptidos ejemplares de la presente invención en un ensayo de c-GMP de células T84.

Las figuras son proporcionadas por medio del ejemplo y no están propuestas para limitar el alcance de la presente invención.

Descripción Detallada de Invención La Guanilato ciclasa C (GC-C) es un receptor de la transmembrana que está localizado en la superficie apical de células epiteliales en el estómago e intestino. El receptor tiene un dominio de enlace al ligando extracelular, una región de transmembrana única y un dominio guanilil ciclasa C-terminal. Cuando un ligando se une al dominio extracelular de GC-C, el domino catalítico intracelular cataliza la producción de cGMP de GTP. In vivo, este incremento en cGMP intracelular inicia una cascada de eventos que conducen a secreción incrementada de cloruro y bicarbonato en el lumen intestinal, pH luminal incrementado, absorción de sodio luminal reducida, secreción incrementada de fluido, y aceleración del tránsito intestinal. El cGMP es secretado bidireccionalmente del epitelio en la mucosa y lumen. Los péptidos y composiciones de la presente invención se unen al receptor GC-C intestinal el cual es un regulador de fluido y equilibrio electrolítico en el intestino.

En algunas circunstancias, puede ser deseable tratar pacientes con un péptido variante o modificado que se une a y activa los receptores GC-C intestinales, pero es menos activo o más activo que la forma no variante de un péptido. La actividad reducida puede originarse de la afinidad reducida para el receptor o una capacidad reducida para activar al receptor una vez unido o estabilidad reducida del péptido. La actividad incrementada puede originarse de la afinidad incrementada para el receptor o una habilidad incrementada para activar el receptor una . vez unido o estabilidad incrementada del péptido.

Descripción de Péptidos Ejemplares : En varias modalidades, un péptido puede ser modificado en donde al menos un grupo carboxilo del residuo de aminoácido del péptido es modificado a un éster de alquilo. Esta modificación puede ser producida, por ejemplo, tratando un ácido carboxílico con un alcohol en la presencia de un agente deshidratante en donde el agente deshidratante puede incluir pero no se limita a un ácido fuerte tal como ácido sulfúrico. Otros métodos para producir éster de alquilo de grupos carboxilo son fácilmente conocidos en aquellos expertos en las artes y son incorporados en la presente.

Como se usa en la presente, un grupo carboxilo tiene la fórmula: (-COOH) .

Como se usa en la presente, el término "alquilo", se refiere a un radical hidrocarburo monovalente de cadena lineal o ramificada, saturado.

Como se usa en la presente, un grupo es terminal o término cuando el grupo está presente al final de la secuencia de aminoácido.

Como se usa en la presente, un grupo amina en un péptido tiene la fórmula: en donde R es el resto del péptido.

Como se usa en la presente, un grupo imina en un péptido tiene la fórmula: en donde R2 es el resto del péptido.

En algunas modalidades, el ácido carboxílico de la cadena lateral de un aminoácido glutamato en una secuencia peptidica es modificado en un éster de alquilo.

En modalidades adicionales, el ácido carboxílico en la cadena lateral de un aminoácido glutamato a secuencia peptidica es modificado en un éster etílico.

En otras modalidades, el ácido carboxílico del C-terminal de un aminoácido tirosina en una secuencia peptídica es modificado en un éster de alquilo.

En modalidades adicionales, el ácido carboxílico del C-terminal de un aminoácido tirosina de una secuencia peptídica es modificado en un éster etílico .

En varias modalidades, la' presente invención proporciona un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende la secuencia de aminoácido Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr, en donde al menos un grupo carboxilo del péptido es un éster de alquilo que tiene la fórmula (-COOR) en la cual R es un alquilo Ci-6.

En varias modalidades, el péptido comprende una estructura de aminoácido de: una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, donde R 1 es H o un alquilo Ci_6, y al menos un R' es alquilo Ci- 6 .

En algunas modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende un péptido que tiene una estructura de aminoácido de: en donde R es un alquilo Ci-6 ("Glu3-éster de alquilo" ) .

En otras modalidades, R es un alquilo Ci-4.

En modalidades adicionales, R es metilo, etilo o propilo .

En. algunas modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende una estructura de aminoácido de ("Glu3-éster etílico") : En algunas modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende una estructura de aminoácido de: En algunas modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende una estructura de aminoácido de: En algunas modalidades, la tirosina C-terminal del Glu3-éster de alquilo o sal farmacéuticamente aceptable está ausente .

En algunas modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende una estructura de aminoácido de: en donde R es alquilo Cl-6 En otras modalidades, R es un alquilo Ci-4.

En modalidades adicionales, R es metilo, etilo o propilo .

En algunas modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende una estructura de aminoácido de ( "Tyri4-éster etílico"): En algunas modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende una estructura de aminoácido de: algunas modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende una estructura aminoácido de: Sin desear ser ligado por cualquier teoría, un péptido puede ser modificado en donde al menos un grupo amina del residuo de aminoácidos del péptido es modificado en una imina. Esta modificación puede ser producida, por ejemplo, tratando un grupo amina con un carbonilo, tal como un aldehido o cetona, en la presencia de catalizador de ácido. Otros métodos para producir iminas de grupos amina son fácilmente conocidos por aquellos expertos en las técnicas y son incorporados aquí.

En algunas modalidades, la modificación de imina puede ser producida por una reacción mediada por formaldehído en la presencia de catalizador de ácido.

En modalidades adicionales, el carbono imina puede ser reticulado a otro grupo amina del péptido.

En otras modalidades, un péptido puede ser modificado en una imina en el grupo -amina del aminoácido N-terminal, en donde el carbono imina es reticulado con un grupo amina del segundo residuo de aminoácido del péptido formando un anillo de cinco miembros.

En otras modalidades, un péptido que comprende la secuencia de aminoácido Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr puede ser modificado con la adición de metileno en el grupo a-amina del Cysi N-terminal el cual es reticulado al grupo amina de Cys2 para formar un anillo imidazolidinona de 5 miembros al N-terminal del péptido ("Cysi-IMD") .

En un aspecto, la invención proporciona nuevos agonistas peptídicos de GC-C útiles para el tratamiento de trastornos gastrointestinales.

En varias modalidades, la presente invención proporciona un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende la secuencia de aminoácido Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr, en donde al menos un grupo amina del péptido es una imina que tiene la fórmula en donde R2 es el resto del péptido.

En algunas modalidades, el péptido o una sal farmacéuticamente aceptable comprende un péptido en donde el grupo amina N-terminal del péptido es una imina que tiene la fórmula el resto del péptido.

En modalidades adicionales, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende una estructura de aminoácido de: H2C = Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr S S 1 S S En varias modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende una estructura de aminoácido de: En algunas modalidades, la tirosina C- terminal del péptido Cysx-IMD o sal del mismo farmacéuticamente aceptable está ausente. En algunas modalidades, el péptido Cysx-IMD o sal del mismo farmacéuticamente aceptable además comprende una o más modificaciones peptídicas, en donde al menos un grupo carboxilo del péptido es un éster de alquilo que tiene la fórmula (-COOR) en la cual R es un alquilo Ci-6.

En varias modalidades, la presente invención proporciona un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido consiste de la secuencia de aminoácido Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr, en donde al menos un grupo carboxilo del péptido es un éster de alquilo que tiene la fórmula (-COOR) en la cual R es un alquilo Ci-S.

En varias modalidades, el péptido consiste de una estructura de aminoácido de: o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde R' es H o un alquilo Ci-6, y al menos un R' es alquilo Ci-6.

En algunas modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable consiste de una estructura de aminoácido de: en donde R es un alquilo Ci-6. En modalidades adicionales, la tirosina C-terminal está ausente.

En otras modalidades, R es un alquilo Ci-4.

En modalidades adicionales, R es metilo, etilo o propilo.

En algunas modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable consiste de un péptido que tiene una estructura de aminoácido de: algunas modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable consiste de un péptido que tiene una estructura de aminoácido de: En algunas modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable consiste de un péptido que tiene una estructura de aminoácido de: En algunas modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable consiste de un péptido que tiene una estructura de aminoácido de en donde R es alquilo Ci-6.

En otras modalidades, R es un alquilo Ci-4.

En modalidades adicionales, R es metilo, etilo o propilo.

En algunas modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable consiste de una estructura de aminoácido de: En algunas modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable consiste de una estructura aminoácido de: En algunas modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable consiste de una estructura de aminoácido de: En varias modalidades, la presente invención proporciona un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido consiste de la secuencia de aminoácido Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr, en donde al menos un grupo amina del péptido es una imina que tiene la fórmula en donde R es el resto del péptido.

En algunas modalidades, el péptido o una sal farmacéuticamente aceptable consiste de un péptido en donde el grupo amina N-terminal del péptido es una imina que tiene la fórmula en donde R es el resto del péptido.

En modalidades adicionales, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable consiste de una estructura de aminoácido de: En algunas modalidades, el péptido o sal del mi farmacéuticamente aceptable consiste de una estructura aminoácido de: En algunas modalidades, la tirosina C-terminal del péptido Cysi-IMD o sal del mismo farmacéuticamente aceptable está ausente. En algunas modalidades, el péptido Cysi-IMD o sal del mismo farmacéuticamente aceptable además comprende una o más modificaciones peptídicas, por ejemplo, en donde al menos un grupo carboxilo del péptido es un éster de alquilo que tiene la fórmula (-COOR), en donde R es un alquilo Ci-6.

En algunas modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable activa el receptor guanilato ciclasa C.

En otras modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende 30 o menos aminoácidos.

En modalidades adicionales, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende 20 o menos aminoácidos .

En otras modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende un péptido en donde menos de cinco aminoácidos preceden al primer residuo Cys de la secuencia de aminoácido.

En algunas modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable es aislado.

En otras modalidades, el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable es purificado.

En algunas modalidades, se proporciona una sal del péptido farmacéuticamente aceptable. En algunos casos, la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de cloruro.

Variante o péptidos modificados En varias modalidades, el péptido incluye dos Cys que forman un enlace disulfuro, el péptido incluye cuatro Cys que forman dos enlaces disulfuro, o el péptido incluye seis Cys que forman tres enlaces disulfuro.

En algunos péptidos uno o ambos miembros de uno o ambos pares de residuos Cys los cuales normalmente forman un enlace disulfuro pueden ser reemplazados por homocisteína, penicilamina, 3-mercaptoprolina (Kolodziej et al., 1996 Int J Pept Protein Res 48:274) ; ß , ß-dimetilcisteína (Hunt et al., 1993 Int J Pept Protein Res 42:249) o ácido diaminopropiónico (Smith et al., 1978 J Med Chem 21:117) para formar reticulaciones internas alternativas en las posiciones de los enlaces disulfuro normales. En otras modalidades, los enlaces disulfuro pueden ser reemplazados por reticulaciones de hidrocarburos (Schafmeister et al., 2000 J Am Chem Soc 122:5891, Patgiri et al. 2008 Acc Chem Res 41: 1289, Henchey et al. 2008 Curr Opin Chem Biol 12:692) .

Producción de péptidos En una modalidad, péptidos o péptidos precursores de la invención pueden ser producidos recombinantemente en cualquier sistema de expresión de proteína conocida, que incluyen, sin limitación, bacterias (por ejemplo, E. coli o Bacillus subtilis) , sistemas de células de insecto (por ejemplo, sistemas de células de Drosophila Sf9) , sistemas de células de levadura (por ejemplo, S. cerevisiae, S. saccharomyces) o sistemas de expresión fúngica filamentosa, o sistemas de expresión de células animales (por ejemplo, sistemas de expresión de células de mamífero) . Péptidos o péptidos precursores de la invención también pueden ser químicamente sintetizados.

Si el péptido o péptido variante está siendo producido recombinantemente , por ejemplo, E. coli, la molécula de ácido nucleico que codifica el péptido también puede codificar una secuencia líder que permite la secreción del péptido maduro de la célula. De este modo, la secuencia que codifica el péptido puede incluir la pre-secuencia y la pro-secuencia de, por ejemplo, un péptido ST bacteriano que se origina naturalmente. El péptido maduro, secretado, puede ser purificado del medio de cultivo.

La secuencia que codifica un péptido descrito en la presente puede ser insertada en un vector capaz de suministrar y mantener la molécula de ácido nucleico en una célula bacteriana. La molécula de ADN puede ser insertada en un vector autónomamente replicante (los vectores adecuados incluyen, por ejemplo, pGE 3Z y pcDNA3 , y derivados de los mismos) . El vector de ácido nucleico puede ser un ADN bacteriófago o bacteriano tal como un bacteriófago lambda o M13 y derivados de los mismos. La construcción de un vector que contiene un ácido nucleico descrito en la presente puede ser seguida por transformación de una célula hospedera tal como una bacteria. Hospederos bacterianos adecuados incluyen pero no se limitan a, E. coli, B. subtilis, Pseudomonas y Salmonella. El constructo genético también incluye, además de la molécula de ácido nucleico codificante, elementos que permiten la expresión, tales como un promotor y secuencias reguladoras. Los vectores de expresión pueden contener secuencias de control transcripcional que controlan la iniciación transcripcional, tal como secuencias promotoras, intensificadoras , operadoras y represoras. Una variedad de secuencias de control transcripcional son bien conocidas por aquellos en la técnica. El vector de expresión también puede incluir una secuencia reguladora de la traducción (por ejemplo, una secuencia al 5' no traducida, una secuencia al 3 ' no traducida, o un sitio de entrada de ribosoma interno). El vector puede ser capaz de replicación autónoma o puede integrarse en el ADN hospedero para asegurar la estabilidad durante la producción del péptido.

La secuencia de proteína codificante que incluye un péptido descrito en la presente también puede ser fusionada a un ácido nucleico que codifica una etiqueta de afinidad peptídica, por ejemplo, glutationa S-transferasa (por sus siglas en inglés GST) , proteína de enlace a maltosa E, proteína A, etiqueta FLAG, hexa-histidina , etiqueta myc o etiqueta influenza HA, para facilitar la purificación. La etiqueta de afinidad o fusión reportera une el marco lector del péptido de interés al marco lector del gen que codifica la etiqueta de afinidad de manera que una fusión traduccional se genera. La expresión del gen de fusión resulta en traducción de un péptido único que incluye tanto el péptido de interés como la etiqueta de afinidad. En algunos casos donde las etiquetas de afinidad son utilizadas, la secuencia de ADN que codifica un sitio de reconocimiento de proteasa será fusionada entre los marcos lectores para la etiqueta de afinidad y el péptido de interés.

Los constructos genéricos y métodos adecuados para producción de formas maduras e inmaduras de péptidos y variantes descritas en la presente en sistemas de expresión de proteína distintos de bacterias, y bien conocidos para aquellos expertos en la técnica, pueden ser también usados para producir péptidos en un sistema biológico.

En otras modalidades, péptidos que contienen aminoácidos no incorporados normalmente por la maquinaria de traducción y descritos anteriormente (por ejemplo, Asp ß-carboxilado, Glu, Asu, Aad y Apm ?-carboxilado) pueden ser recombinantemente producidos por métodos de modificación de ARNt. Los métodos para modificación de ARNt incluyen, pero no se limitan a, modificación del anti-codón, el sitio de unión de aminoácido, y/o el aceptor troncal para permitir la incorporación de aminoácidos no naturales y/o arbitrarios se conocen en la técnica (Biochem. Biophys . Res. Comm. (2008) 372: 480-485; Chem. Biol . (2009) 16:323-36; Nat . Methods (2007) 4:239-44; Nat. Rev. Mol. Cell Biol. (2006) 7:775-82; Methods (2005) 36:227-238; Methods (2005) 36:270-278; Annu. Rev. Biochem. (2004) 73: 147-176; Nuc . Acids Res. (2004) 32:6200-6211; Proc . Nati. Acad. Sci. USA (2003) 100:6353-6357; Royal Soc . Chem. (2004) 33:422-430) .

En algunas modalidades, los péptidos pueden ser químicamente producidos. Los péptidos pueden ser sintetizados por un número de diferentes métodos que incluyen síntesis de fase sólida y solución usando protección BOC o FMOC tradicional. Por ejemplo, el péptido puede ser sintetizado en resina 2 -Clorotritilo o ang usando acoplamientos de aminoácidos consecutivos. Los siguientes grupos protectores pueden ser usados: Fluorenilmetiloxicarbonilo o terc-butiloxicarbonilo (grupos alfa-amino, N-terminal) ; tritilo o tere-butilo (grupos tiol de Cys) ; tere-butilo (?-carboxilo de ácido glutámico y el grupo hidroxilo de treonina, si está presente) ; y tritilo (función ß-amid de la cadena lateral de asparagina y el grupo fenólico de tirosina, si está presente) . El acoplamiento puede ser efectuado con DIC y HOBt en la presencia de una amina terciaria, y el péptido puede ser desprotegido y desdoblado del soporte sólido usando cóctel K (ácido trifluoroacético al 81%, fenol al 5%, tioanisol al 5%, 1 , 2 -etanditiol al 2.5%, agua al 3%, dimetilsulfuro al 2%, yoduro de amonio al 1.5% en p/p) . Después de la remoción de ácido trifluoroacético y otros volátiles el péptido puede ser precipitado usando un solvente orgánico. Los enlaces disulfuro entre residuos Cys pueden ser formados usando dimetilsulfóxido (Tarn et al., (1991) J. Am. Chem. Soc . 113:6657-62) o usando una estrategia de oxidación de aire. El péptido resultante puede ser purificado por cromatografía de fase inversa y liofilizado.

Estos péptidos pueden ser elaborados, aislados o usados ya sea en forma de la base o como sales de los mismos farmacéuticamente aceptables. Ejemplos de sales incluyen, sin limitación, sales de acetato, cloruro, sulfato y fosfato del péptido .

Composiciones de péptidos y agonistas del receptor QC-C En otro aspecto, se proporcionan composiciones farmacéuticas en donde los péptidos, solos o en combinación, pueden ser combinados con cualquier portador o medio farmacéuticamente aceptable.

En varias modalidades, la composición farmacéutica comprende un péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable como se describe en la presente. La composición farmacéutica puede comprender dos o más péptidos o sales de los mismos farmacéuticamente aceptables descritas en la presente .

En algunas modalidades, la composición farmacéutica comprende dos o más péptidos seleccionados de: i. un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende la estructura de aminoácido de : 11. un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende una estructura de aminoácido de: H-Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asp-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr-OH S—S 1 111 un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende la secuencia de aminoácido Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr, en donde al menos un grupo carboxilo del péptido es un éster de alquilo que tiene la fórmula (-C00R) en la cual R es un alquilo Ci-6.

En otras modalidades, la composición farmacéutica comprende linaclotida y un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende una estructura de aminoácido de: y el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende menos de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, o 90% en peso comparado con el peso de linaclotida.

En modalidades adicionales, la composición farmacéutica comprende linaclotida y un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende una estructura de aminoácido de: y el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende menos de 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, ó 1% en peso comparado con el peso de linaclotida.

En algunas modalidades, el derivado imidazolidinona de linaclotida comprende menos de aproximadamente 15% en peso de la composición, menos de aproximadamente 10% en peso de la composición, menos de aproximadamente 7% en peso de la composición o menos de aproximadamente 5% en peso de la composición. En otras modalidades ejemplares, el derivado imidazolidinona de linaclotida comprende desde aproximadamente 0.01% hasta aproximadamente 15% en peso de la composición, aproximadamente 0.05% hasta aproximadamente 10% en peso de la composición, aproximadamente 0.05% hasta aproximadamente 7% en peso de la composición o aproximadamente 0.05% hasta aproximadamente 5% en peso de la composición .

En otras modalidades, la composición farmacéutica comprende linaclotida y un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende una estructura de aminoácido de: y el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende menos de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, o 90% en peso comparado con el peso de linaclotida.

En modalidades adicionales, la composición farmacéutica comprende linaclotida y un péptido o una sal del mismo armacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende una estructura de aminoácido de: y el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende menos de 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, ó 1% en peso comparado con el peso de linaclotida.

En algunas modalidades, el péptido Tyr14-éster etílico comprende menos de aproximadamente 15% en peso de la composición, menos de aproximadamente 10% en peso de la composición, menos de aproximadamente 7% en peso de la composición o menos de aproximadamente 5% en peso de la composición. En otras modalidades ejemplares, el Tyri4-éster etílico comprende desde aproximadamente 0.01% hasta aproximadamente 15% en peso de la composición, aproximadamente 0.05% hasta aproximadamente 10% en peso de la composición, aproximadamente 0.05% hasta aproximadamente 7% en peso de la composición o aproximadamente 0.05% hasta aproximadamente 5% en peso de la composición.

En otras modalidades, la composición farmacéutica comprende linaclotida y un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende una estructura de aminoácido de y el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende menos de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, o 90% en peso comparado con el peso de linaclotida.

En modalidades adicionales, la composición farmacéutica comprende linaclotida y un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende una estructura de aminoácido de : y el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende menos de 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, ó 1% en peso comparado con el peso de linaclotida. algunas modalidades péptido Glu3-éster etílico comprende menos de aproximadamente 15% en peso de la composición, menos de aproximadamente 10% en peso de la composición, menos de aproximadamente 7% en peso de la composición o menos de aproximadamente 5% en peso de la composición. En otras modalidades ejemplares, el Glu3-éster etílico comprende desde aproximadamente 0.01% hasta aproximadamente 15% en peso de la composición, aproximadamente 0.05% hasta aproximadamente 10% en peso de la composición, aproximadamente 0.05% hasta aproximadamente 7% en peso de la composición o aproximadamente 0.05% hasta aproximadamente 5% en peso de la composición.

En algunas modalidades, la composición farmacéutica comprende un péptido o sal farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido consiste de la estructura de aminoácido de: En otras modalidades, la composición farmacéutica consiste esencialmente de un péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende la estructura de aminoácido de El término "consiste esencialmente de" , y variantes del mismo, cuando se usa para referirse a la composición, son usados en la presente para significar que la composición incluye un único péptido activo y otros aditivos, excipientes y/o componentes farmacéuticamente inactivos deseados (por ejemplo, polímeros, aminas primarias estéricamente obstaculizadas, cationes, agentes de relleno, aglutinantes, portadores, excipientes, diluyentes, aditivos desintegradores, lubricantes, solventes, dispersantes, aditivos de recubrimiento, aditivos promotores de la absorción, aditivos de liberación controlada, aditivos anti-apelmazamiento, aditivos antimicrobianos, conservadores, aditivos endulzantes, colorantes, saborizantes , desecantes, plastificadores , tintes, o similares) y no otro(s) ingrediente (s) farmacéutico activo.

Los péptidos descritos en la presente pueden ser combinados con cualquier portador o medio farmacéuticamente tolerable, por ejemplo, solventes, dispersantes, recubrimientos, agentes promotores de la absorción, agentes de liberación controlada, y uno o más excipientes inertes (los cuales incluyen almidones, polioles, agentes de granulación, celulosa microcristalina (por ejemplo, celphere, perillas de Celphere®), diluyentes, lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes, y similares), etc. Si se desea, dosificaciones de tableta de las composiciones descritas pueden ser revestidas por técnicas acuosas o no acuosas estándares.

Ejemplos de excipientes para uso como los portadores farmacéuticamente aceptables y los portadores inertes farmacéuticamente aceptables y los ingredientes adicionales mencionados anteriormente, incluyen, pero no se limitan a aglutinantes, rellenadores , desintegrantes, lubricantes, agentes antimicrobianos, y agentes de recubrimiento.

Como se usa en la presente, el término "aglutinante" se refiere a cualquier aglutinante farmacéuticamente aceptable que puede ser usado en la práctica de la invención. Ejemplos de aglutinantes farmacéuticamente aceptables incluyen, sin limitación, un almidón (por ejemplo, almidón de maíz, almidón de papa y almidón pre-gelatinizado (por ejemplo, STARCH 1500® y STA CH 1500 LM®, vendido por Colorcon, Ltd.) y otros almidones), maltodextriña, gelatina, gomas naturales y sintéticas tales como acacia, tragacanto en polvo, goma guar, celulosa y sus derivados (por ejemplo, metilcelulosa, hidroxietil celulosa, hidroxietil metilcelulosa, hidroxipropil celulosa e hidroxipropil metilcelulosa (hipromelosa) , etil celulosa, acetato de celulosa, carboximetilcelulosa de calcio, carboximetilcelulosa de sodio, carboximetilcelulosa, celulosa microcristalina (por ejemplo, AVICEL™, tal como, AVICEL-PH-101™, -103™ y -105™, vendido por FMC Corporation, Marcus Hook, PA, USA) ) , alcohol polivinílico, polivinilpirrolidona (por ejemplo, polivinil pirrolidona K30) , y mezclas de los mismos .

Como se usa en la presente, el término "rellenador" se refiere a cualquier rellenador farmacéuticamente aceptable que puede ser usado en la práctica de la invención. Ejemplos de los rellenadores farmacéuticamente aceptables incluyen, sin limitación, talco, carbonato de calcio (por ejemplo, gránulos o polvo) , fosfato dicálcico básico, fosfato de calcio tribásico, sulfato de calcio (por ejemplo, gránulos o polvo), celulosa microcristalina (por ejemplo, Avicel PH101 o Celphere CP-305) , celulosa en polvo, dextratos, caolín, manitol, ácido silícico, sorbitol, almidón (por ejemplo, Starch 1500) , almidón pre-gelatinizado, lactosa, glucosa, fructuosa, galactosa, trehalosa, sacarosa, maltosa, isomalta, rafinosa, maltitol, melezitosa, estaquiosa, lactitol, palatinita, xilitol, mioinositol, y mezclas de los mismos.

Ejemplos de rellenadores farmacéuticamente aceptables que pueden ser particularmente usados para recubrir los péptidos incluyen, sin limitación, talco, celulosa microcristalina (por ejemplo, Avicel PH101 o Celphere CP-305) , celulosa en polvo, dextratos, caolín, manitol, ácido silícico, sorbitol, almidón, almidón pre-gelatinizado, lactosa, glucosa, fructuosa, galactosa, trehalosa, sacarosa, maltosa, isomalta, fosfato de calcio dibásico, rafinosa, maltitol, melezitosa, estaquiosa, lactitol, palatinita, xilitol, manitol, mioinositol, y mezclas de los mismos.

Como se usa en la presente, el término "aditivos" se refiere a cualquier aditivo farmacéuticamente aceptable. Aditivos farmacéuticamente aceptables incluyen, sin limitación, desintegrantes, aditivos dispersantes, lubricantes, deslizantes, antioxidantes, aditivos de recubrimiento, diluyentes, tensioactivos , aditivos saborizantes , humectantes, aditivos promotores de la absorción, aditivos de liberación controlada, aditivos antiapelmazamiento, agentes antimicrobianos (por ejemplo, conservadores), colorantes, desecantes, plastificadores y tintes. Como se usa en la presente, un "excipiente" es cualquier aditivo, rellenador, aglutinante o agente farmacéuticamente aceptable.

Composiciones de la presente invención también pueden incluir opcionalmente otros ingredientes terapéuticos, agentes anti-apelmazamiento, conservadores, agentes endulzantes, colorantes, saborizantes, desecantes, plastificadores , tintes, deslizantes, antiadherentes , agentes antiestáticos, tensioactivos (agentes endulzantes) , antioxidantes, agentes de recubrimiento de película y similares. Cualquiera de tales ingredientes opcionales debe ser compatible con el compuesto descrito en la presente para asegurar la estabilidad de la formulación. La composición puede contener otros aditivos como sea necesario, incluyendo por ejemplo, lactosa, glucosa, fructuosa, galactosa, trehalosa, sacarosa, maltosa, rafinosa, maltitol, melezitosa, estaquiosa, lactitol, palatinita, almidón, xilitol, manitol, mioinositol, y similares, e hidratos de los mismos, y aminoácidos, por ejemplo alanina, glicina y betaína, y péptidos y proteínas, por ejemplo, albumen.

Las composiciones pueden incluir, por ejemplo, varios solventes adicionales, dispersantes, recubrimientos, aditivos que promueven la absorción, aditivos de liberación controlada, y uno o más aditivos inertes (los cuales incluyen, por ejemplo, almidones, polioles, aditivos de granulación, celulosa microcristalina, diluyentes, lubricantes, aglutinantes, aditivos desintegrantes, y similares), etc. Si se desea, dosificaciones de tableta de las composiciones descritas pueden ser recubiertas por técnicas acuosas o no acuosas estándares. Las composiciones también pueden incluir, por ejemplo, aditivos antiapelmazamiento, conservadores, agentes endulzantes, colorantes, saborizantes , desecantes, plastificadores , tintes, y similares.

Desintegrantes adecuados incluyen, por ejemplo, agar-agar, carbonato de calcio, celulosa microcristalina , croscarmelosa de sodio, crospovidona , povidona, poliacrilina potásica, glicolato almidón de sodio, almidón de papa o tapioca, otros almidones, almidón pre-gelatinizado, arcillas, otras alginas, otras celulosas, gomas, y mezclas de los mismos .

Lubricantes adecuados incluyen, por ejemplo, estearato de calcio, estearato de magnesio, aceite mineral, aceite mineral ligero, glicerina, sorbitol, manitol, polietilenglicol , otros glicoles, ácido esteárico, laurilsulfato de sodio, talco, aceite vegetal hidrogenado (por ejemplo, aceite de maní, aceite de semilla de algodón, aceite de girasol, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja), estearato de zinc, oleato de etilo, laurato de etilo, agar, gel de sílice siloide (AEROSIL 200, W.R. Grace Co . , Baltimore, MD USA), un aerosol coagulado de sílice sintética (Evonik Degussa Co., Piano, TX USA), un dióxido de silicio pirogénico (CAB-O-SIL, Cabot Co . , Boston, MA USA) , y mezclas de los mismos.

Deslizantes adecuados incluyen, por ejemplo, leucina, dióxido de silicio coloidal, trisilicato de magnesio, celulosa en polvo, almidón, talco, y fosfato de calcio tribásico.

Aditivos adecuados anti-apelmazamiento incluyen, por ejemplo, silicato de calcio, silicato de magnesio, dióxido de silicio, dióxido de silicio coloidal, talco, y mezclas de los mismos.

Aditivos antimicrobianos adecuados que pueden ser usados, por ejemplo, como un conservador para las composiciones peptídicas incluyen, por ejemplo, cloruro de benzalconio, cloruro de benzetonio, ácido benzoico, alcohol bencílico, butilparabeno, cloruro de cetilpiridinio, cresol, clorobutanol , ácido deshidroacético, etilparabeno, metilparabeno, fenol, alcohol feniletílico, fenoxietanol , acetato fenilmercúrico, nitrato fenilmercúrico, sorbato de potasio, propilparabeno, benzoato de sodio, deshidroacetato de sodio, propionato de sodio, ácido sórbico, timersol, timo, y mezclas de los mismos.

Antioxidantes adecuados incluyen, por ejemplo, BHA (hidroxianisol butilado) , BHT (hidroxitolueno butilado) , vitamina E, propilgalato, ácido ascórbico y sales o ésteres de los mismos, tocoferol y ésteres del mismo ácido alfa-lipoico y beta-caroteno.

Aditivos de recubrimiento adecuados incluyen, por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, ftalato acetato de celulosa, etilcelulosa , gelatina, esmalte farmacéutico, hidroxipropil celulosa, hidroxipropil metilcelulosa , ftalato de hidroxipropil metil celulosa, metilcelulosa, polietilenglicol , ftalato de acetato de polivinilo, laca, sacarosa, dióxido de titanio, cera de carnauba, cera microcristalina, y mezclas de los mismos. Recubrimientos protectores adecuados incluyen Aquacoat (por ejemplo, Dispersión Acuosa de Etilcelulosa Aquacoat, 15% en p/p, FMC Biopolymer, ECD-30) , Eudragit (por ejemplo, Eudragit E PO PE-EL, Roehm Pharma Polymers) y Opadry (por ejemplo, dispersión Opadry AMB, 20% en p/p, Colorcon) .

En ciertas modalidades, aditivos adecuados para las composiciones peptídicas incluyen uno o más de sacarosa, talco, estearato de magnesio, crospovidona o BHA.

Las composiciones de la presente invención también pueden incluir otros excipientes, agentes, y categorías de los mismos que incluyen pero no se limitan a L-histidina, Pluronic®, Poloxámeros (tales como Lutrol® y Poloxámero 188) , ácido ascórbico, glutationa, intensificadores de la permeabilidad (por ejemplo, lípidos, colato de sodio, acilcarnitina, salicilatos, sales biliares mezcladas, micelas de ácido graso, queladores, ácido graso, tensioactivos , glicéridos de cadena media) , inhibidores de proteasa (por ejemplo, inhibidor de tripsina de soja, ácidos orgánicos), agentes reductores de pH e intensificadores de la absorción efectivos para promover la biodisponibilidad (que incluyen pero no se limitan a aquellos descritos en los documentos US6086918 y US5912014) , materiales para tabletas masticables (como dextrosa, fructuosa, monohidrato de lactosa, lactosa y aspartame, lactosa y celulosa, maltodextrina , maltosa, manitol, celulosa microcristalina y goma guar, sorbitol cristalino) ; parenterales (como manitol y povidona) ; plastificadores (como dibutil sebacato, plastificadores para recubrimientos, ftalato de polivinilacetato); lubricantes en polvo (como gliceril behenato) ; cápsulas de gelatina blanda (como solución especial de sorbitol) ; esferas para recubrimiento (como esferas de azúcar) ; agentes de esferonización (como glicerilbehenato y celulosa microcristalina) ; agentes gelificantes de suspensión (como carragenano, goma de gelano, manitol, celulosa microcristalina, povidona, glicolato almidón de sodio, goma de xantano) ; endulzantes (como aspartame, aspartame y lactosa, dextrosa, fructuosa, miel, maltodextrina, maltosa, manitol, molasas, sorbitol cristalino, solución especial de sorbitol, sacarosa); agentes de granulación en húmedo (como carbonato de calcio, lactosa anhidra, monohidrato de lactosa, maltodextrina, manitol, celulosa microcristalina, povidona, almidón) , caramelo, carboximetilcelulosa de sodio, sabor a crema de cereza y sabor a cereza, ácido cítrico anhidro, ácido cítrico, azúcar de confitería, D&C Rojo No. 33, D&C Amarillo #10 Aluminum Lake, edetato disódico, alcohol etílico al 15%, FD& C Amarillo No. 6 aluminum lake, FD&C Azul #1 Aluminum Lake, FD&C Azul No. 1, FD&C azul no. 2 aluminum lake, FD&C Verde No .3 , FD&C Rojo No. 40, FD&C Amarillo No. 6 Aluminum Lake, FD&C Amarillo No. 6, FD&C Amarillo No.10, palmitoestearato de glicerol, monoestearato de glicerilo, carmina índigo, lecitina, manitol, metil y propil parabenos, glicirrizinato de mono amonio, sabor de naranja natural y artificial, esmalte farmacéutico, polox mero 188, Polidextrosa , polisorbato 20, polisorbato 80, polividona, almidón de maíz pregelatinizado , almidón pregelatinizado, óxido de hierro rojo, sacarina de sodio, carboximetil éter sódico, cloruro de sodio, citrato de sodio, fosfato de sodio, sabor a fresa, óxido de hierro negro sintético, óxido de hierro rojo sintético, dióxido de titanio y cera blanca.

En algunas modalidades, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un péptido descrito en la presente y uno o más agentes seleccionados de Mg2+, Ca2+, Zn2+, Mn2+, K+, Na+ o Al3+, una combinación de los mismos, y/o una amina primaria estéricamente obstaculizada. En modalidades adicionales, el agente es Mg2+, Ca2+ o Zn + o una combinación de los mismos. En algunas modalidades, se proporciona el catión, sin limitación, como acetato de magnesio, cloruro de magnesio, fosfato de magnesio, sulfato de magnesio, acetato de calcio, cloruro de calcio, fosfato de calcio, sulfato de calcio, acetato de zinc, cloruro de zinc, fosfato de zinc,, sulfato de zinc, acetato de manganeso, cloruro de manganeso, fosfato de manganeso, sulfato de manganeso, acetato de potasio, cloruro de potasio, fosfato de potasio, sulfato de potasio, acetato de sodio, cloruro de sodio, fosfato de sodio, sulfato de sodio, acetato de aluminio, cloruro de aluminio, fosfato de aluminio o sulfato de aluminio. En modalidades adicionales, se proporciona el catión como cloruro de magnesio, cloruro de calcio, fosfato de calcio, sulfato de calcio, acetato de zinc, cloruro de manganeso, cloruro de potasio, cloruro de sodio o cloruro de aluminio. En otras modalidades, se proporciona el catión como cloruro de calcio, cloruro de magnesio o acetato de zinc.

En otra modalidad, el agente es una amina primaria estéricamente obstaculizada. En una modalidad adicional, la amina primaria estéricamente obstaculizada es un aminoácido. En una modalidad aún adicional, el aminoácido es un aminoácido que se origina naturalmente. En una modalidad todavía adicional, el aminoácido que se origina naturalmente se selecciona del grupo que consiste de: histidina, fenilalanina , alanina, ácido glutámico, ácido aspártico, glutamina, leucina, metionina, asparagina, tirosina, treonina, isoleucina, triptofano, glicina y valina; aún además, el aminoácido que se origina naturalmente es leucina, isoleucina, alanina o metionina. En una modalidad todavía adicional, el aminoácido que se origina naturalmente es leucina. En otra modalidad, la amina primaria estéricamente obstaculizada es un aminoácido que no se origina naturalmente (por ejemplo, ácido 1-aminociclohexan carboxílico) . En una modalidad adicional, la amina primaria estéricamente obstaculizada es ciclohexilamina, 2 -metilbutilamina o quitosán. En otra modalidad, una o más aminas primarias estéricamente obstaculizadas pueden ser usadas en una composició .

En algunos casos, la amina primaria estéricamente obstaculizada tiene la fórmula en donde R1( R2 y R3 son seleccionados independientemente de: H, C(0)0H, alquilo Ci-C6 alquiléter C!-C6, alquiltioéter C^-C6, ácido alquilcarboxílico Ci-C6, alquilcarboxilamida Ci-C6 y alquilarilo, en donde cualquier grupo puede ser individualmente o de manera múltiple sustituido con: halógeno o amino, y siempre que no más de dos de i, R2 y R3 sean H. En otra modalidad, no más de uno de R1( R2 y R3 es H.

En otras modalidades, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un catión, péptido, portador farmacéuticamente aceptable seleccionado de Mg2+, Ca2+, Zn2+, Mn2+, K+, Na+ o Al3+, o una mezcla de los mismos, y una amina primaria estéricamente obstaculizada. En una modalidad, el catión es Mg2+, Ca2+ o Zn2+ o una mezcla de los mismos. En una modalidad adicional, la composición farmacéutica además comprende un aglutinante farmacéuticamente aceptable y/o un deslizante, lubricante o aditivo farmacéuticamente aceptable que actúa como tanto un deslizante y lubricante y/o un antioxidante. En algunas modalidades, la composición farmacéutica se aplica a un portador. En algunas modalidades, el portador es un rellenador .

En algunos casos la relación molar de catión ¡amina primaria estéricamente obstaculizada : péptido en la solución acuosa aplicada al portador es 5-100:5-50:1. En algunos casos, la relación molar de catión: amina primaria estéricamente obstaculizada puede ser igual a o mayor de 2:1 (por ejemplo, entre 5:1 y 2:1) . De este modo, en algunos casos la relación molar de catión: amina primaria estéricamente obstaculizada : péptido aplicada al portador es 100:50:1, 100:30:1, 80:40:1, 80:30:1, 80:20:1, 60:30:1, 60:20:1, 50:30:1, 50:20:1, 40:20:1, 20:20:1, 10:10:1, 10:5:1 o 5:10:1. Cuando aglutinante, por ejemplo, metilcelulosa , está presente en la solución de péptido agonista GC-C aplicada al portador puede estar presente a 0.5% - 2.5% en peso (por ejemplo, 0.7%- 1.7% ó 0.7% - 1% ó 1.5% ó 0.7%).

En una modalidad adicional, la composición farmacéutica además comprende un aglutinante o aditivo farmacéuticamente aceptable, y/o un deslizante, lubricante o aditivo farmacéuticamente aceptable que actúa como tanto un deslizante y lubricante y/o un antioxidante.

Composiciones farmacéuticas adecuadas de conformidad con la invención en general incluirán una cantidad del (los) compuesto (s) activos con un diluyente o excipiente farmacéutico adecuado, tal como una solución acuosa estéril, para dar un intervalo de concentraciones finales, dependiendo del uso propuesto. Las técnicas de preparación son en general bien conocidas en la técnica, como se ejemplifica por Remington 1 s Pharmaceutical Sciences (18th Edition, Mack Publishing Company, 1995) .

Las composiciones descritas en la presente pueden ser administradas sistémicamente o localmente, por ejemplo: oralmente (por ejemplo, usando cápsulas, polvos, soluciones, suspensiones, tabletas, tabletas sublinguales y similares) , por inhalación (por ejemplo, con un aerosol, gas, inhalador, nebulizador o similares) , al oído (por ejemplo, usando gotas para el oído), tópicamente (por ejemplo, usando cremas, geles, pomadas, lociones, ungüentos, pastas, parches transdérmicos , etc.), oftálmicamente (por ejemplo, con gotas para los ojos, geles oftálmicos, ungüentos oftálmicos), rectalmente (por ejemplo, usando enemas o supositorios) , nasalmente, bucalmente, vaginalmente (por ejemplo, usando duchas, dispositivos intrauterinos, supositorios vaginales, anillos vaginales . o tabletas, etc.), vía un reservorio implantado o similares, o parenteralmente dependiendo de la severidad y tipo de la enfermedad a ser tratada. El término "parenteral" como se usa en la presente incluye, pero no se limita a, inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular, intra-articular, intra-sinovial , intrasternal , intratecal, intrahepática, intralesional e intracraneal o técnicas de infusión. Preferiblemente, las composiciones son administradas oralmente, intraperitonealmente o intravenosamente .

Para tratamiento de trastornos gastrointestinales, los péptidos descritos en la presente son preferiblemente administrados oralmente, por ejemplo, como una tableta, cápsula, saquillo que contiene una cantidad predeterminada de la pelotilla del ingrediente activo, gel, pasta, jarabe, bolo, electuario, suspensión, polvo, polvo liofilizado, gránulos, como una solución o suspensión en un líquido acuoso o líquido no acuoso; como una emulsión líquida aceite-en-agua o una emulsión líquida agua-en-aceite , vía una formulación liposomal (véase, por ejemplo, documento EP 736299) o en alguna otra forma. Las composiciones administradas oralmente pueden incluir aglutinantes, lubricantes, diluyentes inertes, lubricantes, agentes dispersantes o activos de la superficie, agentes saborizantes y humectantes. Formulaciones oralmente administradas tales como tabletas pueden opcionalmente ser recubiertas o grabadas y pueden ser formuladas para así proporcionar liberación sostenida, retardada o controlada del ingrediente activo en esta.

Los péptidos pueden ser co-administrados con otros agentes usados para tratar trastornos gastrointestinales que incluyen pero no se limitan a los agentes descritos en la presente .

En otro aspecto, composiciones farmacéuticas adecuadas pueden comprender uno o más de otros agentes terapéuticos. Tales agentes terapéuticos incluyen, sin limitación, agentes analgésicos; agentes anti-secretorios , que incluyen inhibidores de bomba de protones, antagonistas de bomba ácida, antagonistas del receptor de H2 , inhibidores de PDE5; antagonistas GABA-B; secuestrantes del ácido biliar; agentes procinéticos y promotilidad; antidepresivos; antibióticos; antieméticos; y agentes protectores de la mucosa .

Métodos de Tratamiento En varias modalidades, los péptidos y composiciones descritas en la presente son útiles para el tratamiento de trastorno gastrointestinal del paciente.

En algunas modalidades, el trastorno gastrointestinal se selecciona del grupo que consiste de síndrome del intestino irritable (por sus siglas en inglés, IBS), estreñimiento, un trastorno gastrointestinal funcional, enfermedad de reflujo gastroesofageal , acidez funcional, dispepsia, dolor visceral, gastropáresis , pseudo-obstrucción intestinal crónica, pseudo-obstrucción colónica, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, y enfermedad inflamatoria del intestino .

En una modalidad adicional, el trastorno gastrointestinal es estreñimiento. El estreñimiento puede ser estreñimiento crónico, estreñimiento idiopático, debido a íleo post-operativo, o causado por uso de opiato. El criterio clínicamente aceptado que define el estreñimiento incluye la frecuencia de movimientos intestinales, la consistencia de las heces y la facilidad del movimiento intestinal. Una definición común de estreñimiento es menos de tres movimientos intestinales por semana. Otras definiciones incluyen evacuaciones o defecación anormalmente duras que requieren excesivo esfuerzo (Schiller 2001, Aliment Pharmacol Ther 15:749-763) . El estreñimiento puede ser idiopático (estreñimiento funcional o estreñimiento de tránsito lento) o secundario a otras causas que incluyen trastornos neurológicos , metabólicos o endocrinos. Estos trastornos incluyen diabetes mellitus, hipotiroidismo, hipertiroidismo, hipocalcemia, Esclerosis Múltiple, enfermedad de Parkinson, lesiones de la médula espinal, Neurofibromatosis , neuropatía autonómica, enfermedad de Chagas, enfermedad de Hirschsprung y fibrosis quística. El estreñimiento también puede ser el resultado de cirugía (íleo postoperativo) o debido al uso de fármacos tales como analgésicos (como opioides) , antihipertensivos , anticonvulsionantes, antidepresivos, antiespasmódicos y antipsicóticos .

En otras modalidades, el trastorno gastrointestinal es síndrome del intestino irritable (por sus siglas en inglés, IBS) . El síndrome del intestino irritable puede ser síndrome del intestino irritable de estreñimiento predominante (c-IBS) , síndrome del intestino irritable de diarrea predominante (d-IBS) o alternante entre los dos síndromes del intestino irritable (a-IBS) .

En otras modalidades, el trastorno gastrointestinal es dispepsia.

En otras modalidades, el trastorno gastrointestinal es gastropáresis . La gastropáresis puede ser seleccionada de gastropáresis idiopática, diabética o post-quirúrgica.

En todavía otras modalidades, el trastorno gastrointestinal es pseudo obstrucción intestinal crónica.

En otras modalidades, el trastorno gastrointestinal es enfermedad de Crohn.

En algunas modalidades, el trastorno gastrointestinal es colitis ulcerativa.

En algunas modalidades, el trastorno gastrointestinal es enfermedad inflamatoria del intestino.

En otra modalidad, el trastorno gastrointestinal es dolor visceral. En una modalidad adicional, la presente invención caracteriza un método para reducir el dolor gastrointestinal o dolor visceral en un paciente, el método comprende, administrar al paciente una composición farmacéutica comprendida del péptido descrito en la presente. Los agonistas peptídicos descritos en la presente pueden ser usados solos o en terapia de combinación para el tratamiento, prevención o reducción del dolos visceral asociado con un trastorno gastrointestinal o dolor asociado con otro trastorno .

En otra modalidad, la invención caracteriza un método para tratar inflamación, que incluye inflamación del tracto gastrointestinal, por ejemplo, inflamación asociada con un trastorno gastrointestinal o infección o algún otro trastorno, el método comprende administrar a un paciente una composición farmacéutica que comprende un péptido purificado descrito en la presente.

En otra modalidad, la invención caracteriza un método para tratar un trastorno gastrointestinal que comprende administrar un agonista del receptor intestinal guanilato ciclasa (GC-C) ya sea oralmente, por supositorio rectal, o parenteralmente .

En todavía otra modalidad, la invención caracteriza un método para tratar un trastorno gastrointestinal que comprende administrar un agonista del receptor intestinal guanilato ciclasa (GC-C) .

En otro aspecto, la invención caracteriza un método para incrementar el nivel de 3 ' -monofosfato de guanocina cíclica (cGMP) en una muestra biológica, tejido (por ejemplo, la mucosa intestinal) , o célula (por ejemplo, una célula que porta el receptor GC-A) , u organismo completo poniendo en contacto la muestra, tejido u organismo a péptidos descritos en la presente.

Los agonistas del receptor peptídico GC-C descritos en la presente pueden ser administrados en combinación con otros agentes. Por ejemplo, los péptidos pueden ser administrados con un compuesto o péptido analgésico. El compuesto o péptido analgésico puede ser covalentemente unido a un péptido descrito en la presente o puede ser un agente separado que es administrado junto con o secuencialmente con un péptido descrito en la presente en una terapia de combinación. Los péptidos descritos en la presente también pueden ser administrados en combinación con otros agentes usados para tratar trastornos del GI que incluyen antidepresivos, agentes promotilidad o procinéticos , antieméticos, antibióticos, inhibidores de bomba de protones, bloqueadores de ácido (por ejemplo, antagonistas del receptor de histamina H2) , antagonistas de bomba de ácido, inhibidores de PDE5, agonistas GABA-B, secuestrantes de ácido biliar, y agentes protectores de la mucosa.

En algunas modalidades, agentes analgésicos útiles que pueden ser usados con los péptidos descritos en la presente incluyen bloqueadores del canal de Ca (por ejemplo, ziconótida) , antagonistas del receptor 5HT (por ejemplo, antagonistas del receptor 5HT3 , 5HT4 y 5HT1) agonistas 5HT4 (por ejemplo, tegaserod [Zelnorm®] , mosaprida, zacoprida, cisaprida, renzaprida, prucaloprida [Resolor®] , derivados de bencimidazolona tales como BIMU1 y BIMU8, y lirexaprida) , agonistas 5HT1 (por ejemplo, sumatriptan y buspirona) , agonistas del receptor opioide (por ejemplo, loperamida, fedotozina, encefalina pentapéptido, morfina, difeniloxilato, fracefamida, trimebutina y fentanil) , agonistas del receptor CCK (por ejemplo, loxiglumida y desxloxiglumida) , antagonistas del receptor NK1 (por ejemplo, aprepitant, vofopitant, ezlopitant, R-673 (Hoffmann-La Roche Ltd) , SR-48968 y SR-14033, (Sanofi Synthelabo) , CP-122,721 (Pfizer, Inc.), GW679769 (Glaxo Smith Kline) y TAK-637 (Takeda/Abbot) ) , antagonistas del receptor NK2 (por ejemplo, nepadutant, saredutant, GW597599 (Glaxo Smith Kline) , SR-144190 (Sanofi -Synthelabo) y UK-290795 (Pfizer Inc) ) , antagonistas del receptor NK3 (por ejemplo, osanetant (SR-142801; Sanofi -Synthelabo) , SR-241586 y talnetant) , inhibidores de la absorción de norepinefrina-serotonina (NSRI) (por ejemplo, milnacipran) , antagonistas del receptor de dopamina mezclados y selectivos (por ejemplo, memetoclopramida , itoprida, domperidona) , vaniloide y antagonistas del receptor canabanoide, sialorfina y péptidos relacionados con sialorfina. Agentes analgésicos en las varias clases son descritos en la literatura.

En algunas modalidades, uno o más de otros agentes terapéuticos pueden ser usados en combinación con los péptidos descritos en la presente. Tales agentes incluyen agentes antidepresivos, promotilidad o procinéticos , antieméticos, antibióticos, inhibidores de la bomba de protones, bloqueadores ácidos (por ejemplo, antagonistas del receptor de histamina H2) , antagonistas de bomba ácida, inhibidores PDE5, agonistas GABA-B, secuestrantes de ácido biliar y agentes protectores de la mucosa.

Ejemplos de antidepresivos incluyen, sin limitación, antidepresivos tricíclicos tales como amitriptilina (Elavil®) , desipramina (Norpramin®) , imipramina (Tofranil®) , amoxapina (Asendin®) , nortriptilina ; los inhibidores de reabsorción de serotonina selectivos (SSRFs) tales como paroxetina (Paxil®) , fluoxetina (Prozac®) , sertralina (Zoloft®) , y citralopram (Celexa®) ; y otros tales como doxepina (Sinequan®) y trazodona (Desyrel®) .

Ejemplos de agentes promotilidad y procinéticos incluyen, sin limitación, itoprida, octreotida, betanecol, metoclopramida (Reglan®) , domperidona (Motilium®) , eritromicina (y derivados de los mismos) y cisaprida (Propulsid®) . Un ejemplo de antieméticos incluye, sin limitación, proclorperazina .

Ejemplos de antibióticos que pueden ser usados incluyen aquellos que pueden ser usados para tratar infecciones por Heliobacter pylori, tales como amoxicilina, tetraciclina, metronidazol , o claritromicina . Otros antibióticos tales como eritromicina y derivados de la misma también pueden ser usados en combinación con los péptidos descritos en la presente.

Ejemplos de inhibidores de bomba de protón incluyen, sin limitación, omeprazol (Prilosec®) , esomeprazol (Nexium®) , lansoprazol (Prevacid®) , pantoprazol (Protonix®) y rabeprazol (Aciphex®) . Ejemplos de bloqueadores del receptor H2 incluyen, sin limitación, incluyendo cimetidina, ranitidina, famotidina y nizatidina. Ejemplos de antagonistas de bomba de ácido incluyen, sin limitación, revaprazan, CS-526 (J. Pharmacol . Exp . Ther. (2007) 323:308-317), PF-03716556 (J. Pharmacol. Exp. Ther. (2009) 328 (2) : 671-9) , y YH1885 (Drug Metab. Dispos. (2001) 29(l) :54-9).

Ejemplos de inhibidores de PDE5 incluyen, sin limitación, avanafil, lodenafil, mirodenafil, sildenafil citrato, tadalafil, vardenafil y udenafil. Agonistas GABA-B incluyen, sin limitación, baclofen y XP19986 (Registro CAS No. 847353-30-4) . Ejemplos de secuestrantes de ácido biliar incluyen, sin limitación, GT102-279, colestiramina , colesevelam, clorhidrato de colesevelam, ácido ursodesoxicólico, colestipol, colestilan, sevelamer, polidialilamina reticulada con epiclorohidrina, derivados de dialquilaminoalquilo de un dextrano reticulado y N-(cicloalquil ) alquilamina . Ejemplos de agentes protectores de la mucosa incluyen, sin limitación, sucralfato (Carafato) , teprenona, polaprezinc, cetraxato y subsalicilato de bismuto.

La terapia de combinación se puede lograr administrando dos o más agentes, por ejemplo, un péptido descrito en la presente y otro péptido o compuesto terapéutico, cada uno de los cuales es formulado y administrado separadamente, o administrando dos o más agentes en una formulación única. Otras combinaciones también están abarcadas por la terapia de combinación. Por ejemplo, dos agentes pueden ser formulados en conjunto y administrados en conjunto con una formulación separada que contiene un tercer agente. Mientras dos o más agentes en la terapia de combinación pueden ser administrados simultáneamente, no necesitan ser. Por ejemplo, la administración de un primer agente (o combinación de agentes) puede preceder la administración de un segundo agente (o combinación de agentes) por minutos, horas, días o semanas. De este modo, los dos o más agentes pueden ser administrados dentro de minutos cada uno del otro o dentro de 1, 2, 3, 6, 9, 12, 15, 18, ó 24 horas de entre sí o dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14 días de entre sí o dentro de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ó 10 semanas de entre sí. En algunos casos intervalos aún más largos son posibles. Mientras en muchos casos es deseable que los dos o más agentes usados en una terapia de combinación estén presentes dentro del cuerpo del paciente al mismo tiempo, esto no necesita ser así.

Dosificación El intervalo de dosificación para adultos humanos puede ser en general de 5 pg hasta 100 mg por día oralmente de los péptidos descritos en la presente. Tabletas, cápsulas, u otras formas de presentación proporcionadas en unidades discretas pueden contener convenientemente una cantidad del compuesto descrito en la presente el cual es efectivo a tal dosificación o como unidades múltiples del mismo, por ejemplo, que contienen 25 µg hasta 2 mg o aproximadamente 100 yg hasta 1 mg. La cantidad precisa del compuesto prescrito a un paciente será la responsabilidad del especialista que atiende. Sin embargo, la dosis empleada dependerá de un número de factores, que incluye la edad y sexo del paciente, el trastorno preciso a ser tratado, y su severidad.

En varias modalidades, la unidad de dosificación es administrada con alimento en cualquier hora del día, sin alimento en cualquier hora del día, con alimento después del ayuno nocturno (por ejemplo, con desayuno) , a la hora de acostarse después de una merienda baja en grasas. En una modalidad particular, la unidad de dosificación es administrada previo a o subsecuente al consumo de alimento (por ejemplo, una comida) . En una modalidad adicional, la unidad de dosificación es administrada aproximadamente 15 minutes hasta 1 hora previo al consumo de alimento. En varias modalidades, la unidad de dosificación es administrada una vez al día, dos veces al día, tres veces al día, cuatro veces al día, cinco veces al día o seis veces al día. En ciertas modalidades la unidad de dosificación y dosis diaria son equivalentes .

La cantidad precisa de cada uno de los dos o más ingredientes activos en una unidad de dosificación dependerá de la dosificación deseada de cada componente. De este modo, puede ser útil crear una unidad de dosificación que, cuando de administre de conformidad con un programa de dosificación particular (por ejemplo, un programa de dosificación que especifica un cierto número de unidades y una sincronización particular para administración) , suministrará la misma dosificación de cada componente como podría ser administrado si el paciente está siendo tratado con solamente un componente único. En otras circunstancias, podría ser deseable crear una unidad de dosificación que suministrará una dosificación de uno o más componentes que son menores de los que podrían ser administrados si el paciente estuviera siendo tratado solamente con un componente único. Finalmente, podría ser deseable crear una unidad de dosificación que suministrará una dosificación de uno o más componentes que son mayores de los que podrían ser administrados si el paciente estuviera siendo tratado solamente con un componente único .

La composición farmacéutica puede incluir ingredientes adicionales que incluyen pero no se limitan a los excipientes descritos en la presente. En ciertas modalidades, uno o más agentes terapéuticos de la unidad de dosificación pueden existir en una formulación de liberación controlada o extendida y los agentes terapéuticos adicionales pueden no existir en la formulación de liberación extendida. Por ejemplo, un péptido o agonista descrito en la presente puede existir en una formulación de liberación controlada o formulación de liberación extendida en la misma unidad de dosificación con otro agente que puede o no puede estar en ya sea una formulación de liberación extendida o liberación controlada. De este modo, en ciertas modalidades, puede ser deseable proporcionar para la liberación inmediata de uno o más de los agentes descritos en la presente, y la liberación controlada de uno o más de otros agentes .

La presente invención ha sido descrita con referencia a ciertas modalidades ejemplares de la misma. Sin embargo, será fácilmente aparente para aquellos expertos en la técnica que es posible incluir la invención en formas específicas distintas de aquellas de las modalidades ejemplares descritas anteriormente. Esto se puede hacer sin apartarse del espíritu de la invención. Las modalidades ejemplares son solamente ilustrativas y no deben ser consideradas restrictivas en cualquier forma. El alcance de la invención es definido por las reivindicaciones adjuntas y sus equivalentes, en lugar que por la descripción precedente.

EJEMPLOS Los péptidos agonistas GC-C o sales de los mismos farmacéuticamente aceptables como se describen en la presente, se prepararon por síntesis química de fase sólida y plegado natural (oxidación al aire) por American Peptide Company (Sunnyvale, CA) . En algunos casos, los péptidos se modificaron después de la síntesis como se describe en la presente .

El péptido Cysi-IMD se sintetizó mezclando 4.6g (3.0 mmol) de linaclotida en 200 mi de EtOH . Se agregó formaldehído al 37% (1.12 ml/5 eq) a esta mezcla. La mezcla de reacción se incubó en baño de agua (45 °C) durante la noche. Al siguiente día el solvente se removió por rota-evaporación. El péptido se purificó adicionalmente a través de cromatografía de fase inversa.

El péptido Glu3-éster etílico se sintetizó en una resina Fmoc-Tyr (tBu) -Wang 20 mmol . Los grupos protectores usados para aminoácidos son: grupo t-Butilo por Tyr y Thr, grupo Trt por Asn y Cys . La cadena peptídica se ensambló en la resina por remoción repetitiva del grupo protector Fmoc y acoplamiento del aminoácido protegido. Se usaron DIC y HOBt como reactivos de acoplamiento y se usó NMM como la base para esta reacción. Se usó piridina al 20% en DMF como el reactivo Fmoc. Después de la remoción del último grupo protector Fmoc, se trato la resina con coctel por 3 horas para desdoblar el péptido de la resina y remoción de los grupos protectores de cadena lateral. El péptido eluido se precipitó en éter frío y se secó. El péptido seco se disolvió en una mezcla de TFA/TIS/agua (95:3:2 v/v) en una relación de 1 a 10 (g/v) . Esta mezcla se agitó a temperatura ambiente por 1 hora. El péptido aislado también se precipitó en éter frío, se recolectó por filtración y se secó bajo alto vacío.

El péptido Tyri4-éster etílico se sintetizó por un método de condensación de fragmento. Fragmento A (Boc-Cys (Trt) -Cys (Trt) -Glu (OtBu) -Tyr (tBu) -Cys (Trt) -Cys (Trt) -Asn(Trt) -Pro-Ala-Cys (Trt) -Thr (tBu) -Gly-OH) se preparó en resina CTC 15 mmol usando química Fmoc. Esta cadena peptídica también se ensambló en la resina por remoción repetitiva del grupo protector Fmoc y acoplamiento del aminoácido protegido. Se usaron DIC y HOBt como reactivos de acoplamiento y se usó NMM como la base. Se usó 20% de piperidina en DMF como el d-Fmoc-reactivo . Después de la remoción del último grupo protector Fmoc, se acopló Boc para proteger el grupo amino N-terminal. La resina peptídica se lavó, secó, y trató con 1% de TFA/DCM para desdoblar el péptido de la resina. Se preparó el Fragmento B (Cys (Trt ) -Tyr-OEt) del acoplamiento de Fmoc-Cys(Trt)-OH y Tyr-OEt. HCl. El grupo Fmoc se removió tratando este di-péptido con 20% de piperidina en DMF.

El péptido Tyri4-éster etílico fue finalmente sintetizado por acoplamiento de los dos fragmentos en DMF. Se usó HBTU/HOBt/NMM como el reactivo de acoplamiento para esta reacción. Los grupos protectores son removidos tratando el péptido con cóctel K por 2 horas. Este péptido fue precipitado en éter frío y secado. El péptido seco se disolvió en una mezcla de TFA/TIS/agua (95:3:2v/v) en una relación de 1 a 10 (g/v) . Esta mezcla se agitó a temperatura ambiente por 1 hora. El péptido aislado se precipitó nuevamente en éter frío, recolectó por filtración y secó bajo alto vacío.

Ejemplo 1 ; acumulación de cGMP en células T84 para análisis de la actividad de GC-C Para el ensayo de cGMP, células 4.5 x 105 células/mL de T84 se hicieron crecer durante la noche en placas de cultivo de 24 cavidades. Al siguiente día, células T84 se lavaron dos veces con 1 mL de DMEM (pH 7) . Después del segundo lavado, las células se incubaron con 450 µ?? de 1 mM de i sobut i lmet i lxant ina (IBMX) en amortiguador a pH 7 por 10 minutos a 37°C para inhibir cualquier actividad de fosfodiesterasa . Los péptidos fueron entonces diluidos en amortiguador DMEM (pH 7) a una concentración 10X. La solución peptídica de 50 µ? se diluyó a un volumen final de 500 µ? , con las células T84, llevando cada concentración de péptido a lx. Los péptidos se probaron por duplicado a 100 n .

No hubo péptido control usado para determinar los niveles endógenos de cGMP. Los péptidos se incubaron por 30 minutos a 37°C. Después de 30 minutos, los sobrenadantes se removieron y las células se sometieron a lisis con HCl 0.1M. Las células se sometieron a lisis por 30 minutos en hielo. Después de 30 minutos, los lisados de pipetearon y colocaron en una placa de HPLC de 96 cavidades y centrifugaron a 10,000 x G por 10 minutos para remover algunos desechos celulares. Los sobrenadantes de la centrifugación previa se removieron y colocaron en una placa de HPLC de 96 cavidades fresca.

Se determinaron concentraciones de cGMP de cada muestra usando las condiciones de LC/MS (Tabla 1 abajo) y se calculó la curva estándar. Se calcularon valores EC50 de las curvas de respuesta de concentración generadas con Software GraphPad Prism.

Tabla 1: Condiciones de LC/MS Ejemplo 2: Afinidad de enlace relativo de péptidos ejemplares al receptor GC-C de células T84 Las afinidades de enlace relativas de linaclotida y Cysx-I D al receptor guanilato ciclasa-C (GC-C) se determinaron usando un ensayo de enlace competitivo en el cual los péptidos compitieron con un agonista GC-C conocido, enterotoxina estable al calor derivada de porcino (pSTa) , para sitios de enlace en los receptores GC-C de la superficie celular en células epiteliales colónicas humanas (T84) . El pSTA se radioetiquetó con 125I para permitir la medición de su enlace al receptor. El ensayo de enlace competitivo se realizó agregando varias concentraciones de cada péptido (0.1 a 3,000 nM) a 0.20mL de mezclas de reacción que contienen medio Eagle modificado de Dublecco (DMEM) , 0.5% de albúmina de suero bovino (BSA) , 2.0 x 105 células T84 , y 170 pM [125I] -pSTa (200,000 cpm) . Los datos se usaron para construir curvas de enlace de radioligando competitivo y determinar las afinidades de enlace relativo de linaclotida y Cysi-IMD, como se mide por sus valores IC50 y K¿ .

Tanto linaclotida como Cysi-IMD inhiben competitivamente el enlace específico de 125[I]-pSTa a receptores GC-C de la superficie celular en células T84. Sus afinidades de enlace relativo, como se mide por sus constantes de inhibición (K¿) , fueron como sigue: Linaclotida Ki( = 3.9 ± 1.6 nM y CySi-IMD Kif = 1.4 ± 0.5 nM (Figura 3) .

Ejemplo 3: Respuesta cG P en células T84 inducidas por péptidos ejemplares Se probaron linaclotida y Cysi-IMD para actividad agonista de guanilato ciclasa-C (GC-C) en células T84 como sigue. En cada cavidad de una placa de 96 cavidades, aproximadamente 200,000 de células T84/cavidad se incubó primero con 1 mM de 3-isobutil-l-metilxantina (IBMX) en 0.18 mL de medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) por 10 minutos a 37°C. Cada péptido se diluyó a concentraciones finales que varían desde 0.1 hasta 10,000 nM, y 0.02 mL de cada dilución se agregaron por duplicado a una placa de 96 cavidades que contienen las células T84 , para un volumen final de 0.20 mL por cavidad. Las reacciones del péptido se incubaron por 30 min a 37°C. Después de la incubación, los sobrenadantes se removieron y desecharon y las células se sometieron a lisis con ácido clorhídrico 0.1 M frío (HO) por 30 minutos en hielo. Los desechos celulares se removieron por centrifugación y la concentración de monofosfato 3 ',5'-cíclico de guanosina (GMP cíclico) en cada lisado se determinaron usando cromatografía líquida con espectrometría de masa aleatoria. Los datos se usaron para construir curvas de respuesta de dosis y calcular los valores de concentración efectiva máxima media (EC50) para cada artículo de prueba.

Linaclotida y Cyai-IMD mostraron actividad agonista de GC-C en células T84, como se mide por el incremento en cGMP intracelular (Figura 4) . Los valores EC50 para linaclotida y Cysi-IMD se fueron 315 ± 105 nM y 172 ± 32 nM, respectivamente .

Ejemplo 4; Medición de contenido y pureza de péptidos e emplares El contenido y pureza de los péptidos de la presente invención pueden ser determinaos por cromatografía líquida de gradiente de fase inversa usando Sistema LC de Agilent Series 1100 con software Chemstation Rev A.09.03 o equivalente. Una columna YMC Pro™ C18 (dimensiones : 3.0 x 150 mm, 3.5 um, 120 A; Waters Corp., Milford, MA) o equivalente se usa y se mantiene a 40°C. La fase móvil A (MPA) consiste de agua con 0.1% de ácido trifluoroacético mientras la fase móvil B ( PB) consiste de 95% de acetonitrilo : 5% de agua con 0.1% de ácido trifluoroacético. La elución de los péptidos se realiza con un gradiente de 0% hasta 47% de MPB en 28 minutos seguido por una elevación a 100% de MPB en 4 minutos con una retención de 5 minutos a 100% de MPB para lavar la columna. El re-equilibrio de la columna se realiza cambiando a 0% de MBP en 1 minuto seguido por una retención de 10 minutos a 100% MPA. La velocidad de flujo es 0.6 mL/min y la detección se realiza por UV a 220 nm.

Se prepararon muestras para análisis por adición de los contenidos de las cápsulas de péptidos ejemplares a HC1 0.1N para obtener una concentración objetivo de 20 yg de péptido/mL. 100 \i de esta solución se inyectaron sobre la columna .

Péptido Cysl-IMD El péptido Cysx-IMD se purificó usando una columna C18 Waters de 2 pulgadas (5.08 cm) con 0.1% de amortiguador TFA con un gradiente lineal de 15-45% en 60 minutos de amortiguador B a una velocidad de flujo de 100 mL/min. Las fracciones combinadas con pureza de aproximadamente 95% se cargaron sobre la columna C18. Después de equilibrar la columna con amortiguador TEAP y amortiguador AA, el péptido se purificó y eluyó con amortiguador HAC con un gradiente lineal de 15-75% de amortiguador B en 50 minutos. Las fracciones combinadas con péptido purificado fueron liofilizadas a sequedad. Un ejemplo de un análisis de producto de linaclotida y Cysi-IMD por RP-HPLC se muestra en la Figura 2.

Péptido Glii3-éster etílico El péptido Glu3-éster etílico (6.0g) se disolvió en 12 L de 0.05M de bicarbonato de amonio en agua, y el proceso de oxidación se monitoreó por prueba Ellman, MS y HPLC analítico. El proceso de oxidación tomó aproximadamente 48 horas para terminación.

La solución anterior se filtró y cargó en una columna C18 de 2 pulgadas (5.08 cm) , y purificó usando 0.05M de amortiguador de acetato de amonio con un gradiente lineal de 10-40% de amortiguador B en 60 minutos a velocidad de flujo de 100 mL/min.

Las fracciones combinadas con pureza de >95% se liofilizaron a sequedad. Después que los péptidos se secaron, el péptido se redisolvió en acetonitrilo-agua y acidificó a pH a aproximadamente 4-5 por adición de ácido acético y re-liofilizó a sequedad.

Péptido Tyr14-éster etílico El péptido Tyr14-éster etílico se purificó disolviendo 2.5 g del péptido aislado en 5 L de 0.05M de bicarbonato de amonio en agua, y el proceso de oxidación se monitoreó por prueba Ellman, MS y HPLC analítico. Este proceso de oxidación tomó aproximadamente 16 horas para terminación. La solución anterior se filtró y cargó en una columna de Polímero de 2 pulgadas (5.08 cm) , y purificó usando 0.05M de amortiguador de bicarbonato de amonio con un gradiente lineal de 15-45% de amortiguador B en 60 minutos a una velocidad de flujo de 100 mL/min. Las fracciones combinadas con el péptido fueron liofi 1 izadas a sequedad. Después que el péptido se secó, el péptido se re-disolvió en acetonitrilo-agua y acidificó a pH 4-5 por adición de ácido acético y re-liofilizó a sequedad.

Los contenidos de los péptidos purificados fueron medidos determinando la concentración del péptido en la muestra preparada contra un péptido externo preparado de manera similar, estándar.

OTRAS MODALIDADES Todas las publicaciones y patentes referidas en esta descripción están incorporadas en la presente por referencia a la misma extensión como si cada publicación o solicitud de patente individual fueran específicamente e individualmente indicadas para ser incorporadas por referencia. Si el significado de los términos en cualquiera de las patentes o publicaciones incorporadas por referencia entra en conflicto con el significado de los términos usados en esta descripción, los significados de los términos en esta descripción están propuestos para ser controlantes. Además, la discusión anterior especifica y describe solamente modalidades ejemplares de la presente invención. Un experto en la técnica reconocerá fácilmente a partir de tal discusión y de las figuras acompañantes y reivindicaciones, que se pueden hacer varios cambios, modificaciones y variaciones a esta sin apartarse del espíritu y alcance de la invención como se define en las siguientes reivindicaciones.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (100)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, caracterizados porque el péptido comprende la secuencia de aminoácido Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr, en donde al menos un grupo carboxilo del péptido es un éster de alquilo que tiene la fórmula (-C00R) en la cual R es un alquilo Ci-6.

2. Péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con la reivindicación 1, caracterizados porque el péptido comprende la estructura de aminoácido de: , o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde R' es H o un alquilo Ci-6, y al menos un R' es alquilo C1-6.

3. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con la reivindicación caracterizados porque el péptido comprende la estructura aminoácido de: en donde R es un alquilo C1-6.

4. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 3 , caracterizados porque R es un alquilo C1-4.

5. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 3, ó 4, caracterizados porque R es metilo.

6. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 3, ó 4, caracterizados porque R es etilo.

7. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 3, ó 4, caracterizados porque R es propilo.

8. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 3, 4, ó 6, caracterizados porque el péptido comprende la estructura de aminoácido de:

9. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 3, 4, ó 7, caracterizados porque el péptido comprende la estructura de aminoácido de:

10 Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 3, 4, ó 5, caracterizados porque el péptido comprende la estructura de aminoácido de:

11. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con la reivindicación 1, caracterizados porque el péptido comprende la estructura de aminoácido de: en donde R es alquilo Ci-6.

12. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 11, caracterizados porque R es un alquilo C1-4.

13. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 11, ó 12, caracterizados porque R es metilo.

14. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 11, ó 12, caracterizados porque R es etilo.

15. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 11, ó 12, caracterizados porque R es propilo .

16. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 11, 12, ó 14, caracterizados porque el péptido comprende la estructura de aminoácido de:

Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 11, 12, ó 15, caracterizados porque el péptido comprende la estructura de aminoácido de:

18. Péptido o sal del mismo f rmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 11, 12, ó 13, caracterizados porque el péptido comprende la estructura de aminoácido de:

19. Un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, caracterizados porque el péptido comprende la estructura de aminoácido de

20. Un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, caracterizados porque el péptido consiste de la secuencia de aminoácido Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr, en donde al menos un grupo carboxilo del péptido es un éster de alquilo que tiene la fórmula (-COOR) en la cual R es un alquilo Ci-6.

21. Péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con la reivindicación 20, caracterizados porque el péptido consiste de la estructura de aminoácido de: o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde R' es H o un alquilo Ci-6, y al menos un R' es alquilo C1-6.

22. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con la reivindicación 20, caracterizados porque el péptido consiste de la estructura de aminoácido de: en donde R es un alquilo Ci-6.

23. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 o 22, caracterizados porque R es un alquilo Ci-4.

24. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20, 22, ó 23, caracterizados porque R es metilo.

25. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20, 22, ó 23, caracterizados porque R es etilo.

26. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20, 22, ó 23, caracterizados porque R es propilo.

27. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20, 22, 23, o 25, caracterizados porque el péptido consiste de la estructura de aminoácido de:

28. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20, 22, 23, ó 26, caracterizados porque el péptido consiste de la estructura de aminoácido de:

29. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20, 22, 23, ó 24, caracterizados porque el péptido consiste de la estructura de aminoácido de:

30. Un péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con la reivindicación 20, caracterizados porque el péptido consiste de la estructura de aminoácido de : en donde R es alquilo Ci-g.

Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 ó 30, caracterizados porque R es un alquilo Ci-4.

32. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20, 30, ó 31, caracterizados porque R es metilo.

33. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20, 30, ó 31, caracterizados porque R es etilo.

34. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20, 30, ó 31, caracterizados porque R es propilo.

35. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20, 30, 31, o 33, caracterizados porque el péptido consiste de la estructura de aminoácido de:

Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20, 30, 31, ó 34, caracterizados porque el péptido consiste de la estructura de aminoácido de:

37. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20, 30, 31, ó 32, caracterizados porque el péptido consiste de la estructura de aminoácido de:

38. Un péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable, caracterizados porque el péptido consiste de la estructura de aminoácido de:

39. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-38, caracterizados porque el péptido activa el receptor guanilato ciclasa C.

40. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-19 ó 39, caracterizados porque el péptido comprende 30 o menos aminoácidos.

41. Péptido o sal del mismo f rmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-19 ó 39, caracterizados porque el péptido comprende 20 o menos aminoácidos.

42. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-19 ó 39, caracterizados porque menos de cinco aminoácidos preceden al primer residuo Cys de la secuencia de aminoácido.

43. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-42, caracterizados porque el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable es aislado.

44. Péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-43, caracterizados porque el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable es purificado.

45. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-44.

46. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende dos o más péptidos o sales de los mismos farmacéuticamente aceptables de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-44.

47. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende dos o más péptidos seleccionados de: i . un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende la estructura de aminoácido de: ii. un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende una estructura de aminoácido de: iii. un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende la secuencia de aminoácido Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr, en donde al menos un grupo carboxilo del péptido es un éster de alquilo que tiene la fórmula (-COOR) en la cual R es un alquilo Ci-6.

48. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende linaclotida y un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende una estructura de aminoácido de: y el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende menos de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, ó 90% en peso comparado con el peso de linaclotida .

49. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende linaclotida y un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende una estructura de aminoácido de: y el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende menos de 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, ó 1% en peso comparado con el peso de linaclotida.

50. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende linaclotida y un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende una estructura de aminoácido de: y el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende menos de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, ó 90% en peso comparado con el peso de linaclotida.

51. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende linaclotida y un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende una estructura -de aminoácido de y el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende menos de 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, ó 1% en peso comparado con el peso de linaclotida.

52. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende linaclotida y un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende una est^ctura de aminoácido de: y el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende menos de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, ó 90% en peso comparado con el peso de linaclotida.

53. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende linaclotida y un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende una estructura de aminoácido de: y el péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable comprende menos de 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, ó 1% en peso comparado con el peso de linaclotida.

54. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido consiste de la estructura de aminoácido de: y el péptido comprende al menos 90% en peso comparado con el peso de linaclotida u otro agonista de guanilato ciclasa C.

55. Una composición farmacéutica caracterizada porque consiste esencialmente de un péptido o sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde que el péptido comprende la estructura de aminoácido de:

56. Composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 45-55, caracterizada porque además comprende uno o más agentes seleccionados de (i) un catión seleccionado de Mg2+, Ca2+, Zn2+, Mn2+, K+, Na+ o Al3+, o (ii) una amina primaria estéricamente obstaculizada.

57. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un portador farmacéuticamente aceptable, un péptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-44 y uno o más agentes seleccionados de (i) un catión seleccionado de Mg2+, Ca+, Zn2+, Mn2+, K+, Na+ o Al3+, o (ii) una amina primaria estéricamente obstaculizada.

58. Composición farmacéutica de conformidad con las reivindicaciones 56 ó 57, caracterizada porque el agente es Mg2+, Ca2+, Zn2+, Mn2+, K+, Na+ o Al3+ .

59. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 58, caracterizada porque el Mg2+, Ca2+, Zn2+, Mn2+, K+, Na+ o Al3+ se proporciona como acetato de magnesio, cloruro de magnesio, fosfato de magnesio, sulfato de magnesio, acetato de calcio, cloruro de calcio, fosfato de calcio, sulfato de calcio, acetato de zinc, cloruro de zinc, fosfato de zinc,, sulfato de zinc, acetato de manganeso, cloruro de manganeso, fosfato de manganeso, sulfato de manganeso, acetato de potasio, cloruro de potasio, fosfato de potasio, sulfato de potasio, acetato de sodio, cloruro de sodio, fosfato de sodio, sulfato de sodio, acetato de aluminio, cloruro de aluminio, fosfato de aluminio o sulfato de aluminio.

60. Composición farmacéutica de conformidad con las reivindicaciones 56 ó 57, caracterizada porque el agente es una amina primaria esféricamente obstaculizada.

61. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 60, caracterizada porque la amina primaria esféricamente obstaculizada es un aminoácido.

62. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 61, caracterizada porque el aminoácido es un aminoácido que se origina naturalmente, un aminoácido que no se origina naturalmente o un derivado de aminoácido.

63. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 62, caracterizada porque el aminoácido que se origina naturalmente es histidina, fenilalanina, alanina, ácido glutámico, ácido aspártico, glutamina, leucina, metionina, asparagina, tirosina, treonina, isoleucina, triptofano o valina o el aminoácido que no se origina naturalmente es ácido 1-aminociclohexan carboxílico, lantanina o teanina.

64. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 60, caracterizada porque la amina primaria estéricamente obstaculizada tiene la fórmula: en donde Ri, R.2 y R3 son seleccionados independientemente de: H, C(0)0H, alquilo Ci-C6í alquiléter Ci-Cs, alquiltioéter Ci-C6, ácido alquilcarboxílico Cx-Ce, alquilcarboxilamida Ci-C6 y alquilarilo,- en donde cualquier grupo puede ser individualmente o de manera múltiple sustituido con: halógeno o amino, y siempre que no más de un Ri, R2 y R3 es H.

65. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 64, caracterizada porque la amina primaria estéricamente obstaculizada es ciclohexilamina o 2-metilbutilamina .

66. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 60, caracterizada porque la amina primaria estéricamente obstaculizada es una amina polimérica.

67. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 66, caracterizada porque la amina polimérica es quitosán.

68. Composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 60-67, caracterizada porque la composición farmacéutica además comprende Mg2+, Ca2+, Zn2+, Mn2+, K+, Na+ o Al3+.

69. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 68, caracterizada porque el Mg2+, Ca+, Zn2+, Mn+, K+, Na+ o Al3+ se proporciona como acetato de magnesio, cloruro de magnesio, fosfato de magnesio, sulfato de magnesio, acetato de calcio, cloruro de calcio, fosfato de calcio, sulfato de calcio, acetato de zinc, cloruro de zinc, fosfato de zinc, sulfato de zinc, acetato de manganeso, cloruro de manganeso, fosfato de manganeso, sulfato de manganeso, acetato de potasio, cloruro de potasio, fosfato de potasio, sulfato de potasio, acetato de sodio, cloruro de sodio, fosfato de sodio, sulfato de sodio, acetato de aluminio, cloruro de aluminio, fosfato de aluminio o sulfato de aluminio.

70. Composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 45-69, caracterizada porque además comprende un antioxidante.

71. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 70, caracterizada porque el antioxidante es BHA, vitamina E o propil galato.

72. Composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 45-71, caracterizada porque además comprende un aglutinante o aditivo farmacéuticamente aceptable.

73. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 72, caracterizada porque el aglutinante o aditivo farmacéuticamente aceptable es seleccionado de alcohol polivinílico, polivinilpirrolidona (povidona) , un almidón, maltodextrina o un éter de celulosa.

74. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 73, caracterizada porque el aglutinante o aditivo farmacéuticamente aceptable es alcohol polivinílico.

75. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 73, caracterizada porque el aglutinante o aditivo farmacéuticamente aceptable es un éter de celulosa.

76. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 75, caracterizada porque el éter de celulosa es seleccionado de: metilcelulosa, etilcelulosa , carboximetilcelulosa, hidroxietil celulosa, hidroxietil metilcelulosa, hidroxipropil celulosa e hidroxipropil metilcelulosa .

77. Composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 45-76, caracterizada porque además comprende un reíleñador farmacéuticamente aceptable .

78. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 77, caracterizada porque el rellenador farmacéuticamente aceptable es celulosa, isomalta, manitol o fosfato de calcio dibásico.

79. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 78, caracterizada porque la celulosa es seleccionada de celulosa microfina y celulosa microcristalina .

80. Composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 45-79, caracterizada porque además comprende un agente terapéutico adicional.

81. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 80, caracterizada porque el agente terapéutico adicional es seleccionado de uno o más de un agente analgésico, un antidepresivo, un agente promotilidad o procinético, un antiemético, un antibiótico, un inhibidor de bomba de protón, un bloqueador de ácido, un inhibidor de PDE5, un antagonista de bomba de ácido, un agonista GABA-B, un secuestrante de ácido biliar o un agente protector de la mucosa .

82. Una unidad de dosificación caracterizada porque comprende una composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 45-81.

83. Unidad de dosificación de conformidad con la reivindicación 82, caracterizada porque la unidad de dosificación es una cápsula o tableta.

84. Unidad de dosificación de conformidad con la reivindicación 83, caracterizada porque cada una de la unidad de dosificaciones comprende 5 µ9 hasta 1 mg del péptido.

85. Un método para tratar un trastorno gastrointestinal, caracterizado porque comprende administrar composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 45-81.

86. Método de conformidad con la reivindicación 85, caracterizado porque el trastorno gastrointestinal se selecciona del grupo que consiste de: síndrome del intestino irritable (IBS) , estreñimiento, un trastorno gastrointestinal funcional, enfermedad de reflujo gastroesofageal , acidez funcional, dispepsia, dolor visceral, gastropáresis , pseudo-obstrucción intestinal crónica, pseudo-obstrucción colónica, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, y enfermedad inflamatoria del intestino.

87. Método de conformidad con la reivindicación 86, caracterizado porque el trastorno gastrointestinal es estreñimiento .

88. Método de conformidad con la reivindicación 87, caracterizado porque el estreñimiento es estreñimiento crónico, estreñimiento idiopático, debido a íleo post-operativo, o causado por uso de opiato.

89. Método de conformidad con la reivindicación 86, caracterizado porque el trastorno gastrointestinal es síndrome del intestino irritable (IBS).

90. Método de conformidad con la reivindicación 89, caracterizado porque el síndrome del intestino irritable es síndrome del intestino irritable de estreñimiento predominante (c-IBS) , síndrome del intestino irritable de diarrea predominante (d-IBS) o alternancia entre los dos síndromes del intestino irritable (a-IBS) .

91. Método de conformidad con la reivindicación 86, caracterizado porque el trastorno gastrointestinal es dispepsia .

92. Método de conformidad con la reivindicación 86, caracterizado porque el trastorno gastrointestinal es gastropáresis .

93. Método de conformidad con la reivindicación 92, caracterizado porque la gastropáresis es gastropáresis idiopática, diabética o post-quirúrgica .

94. Método de conformidad con la reivindicación 86, caracterizado porque el trastorno gastrointestinal es pseudo obstrucción intestinal crónica.

95. Método de conformidad con la reivindicación 86, caracterizado porque el trastorno gastrointestinal es enfermedad de Crohn.

96. Método de conformidad con la reivindicación 86, caracterizado porque el trastorno gastrointestinal es colitis ulcerativa .

97. Método de conformidad con la reivindicación 86, caracterizado porque el trastorno gastrointestinal es enfermedad inflamatoria del intestino.

98. Método de conformidad con la reivindicación 86, caracterizado porque el trastorno gastrointestinal es dolor visceral .

99. Un método para incrementar la motilidad intestinal en un paciente, caracterizado porque comprende administrar al paciente una cantidad efectiva de la composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 45-81.

100. Un método para incrementar la actividad del receptor de guanilato ciclasa C (GC-C) en una muestra biológica u organismo, caracterizado porque comprende poner en contacto la muestra biológica u organismo con un péptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-44.