CN102869669A - 用于药物组合物的含杂环烷基的噻吩并嘧啶化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含噻吩并嘧啶化合物的新的药物组合物。此外，本发明涉及本发明的噻吩并嘧啶化合物在制备用于预防和/或治疗可通过抑制Mnk1和/或Mnk2(Mnk2a或Mnk2b)和/或其变体的激酶活性影响的疾病的药物组合物中的用途。

Description

用于药物组合物的含杂环烷基的噻吩并嘧啶化合物
本发明涉及噻吩并嘧啶化合物及包含噻吩并嘧啶化合物的新的药物组合物。
此外，本发明涉及本发明的噻吩并嘧啶化合物在制备用于预防和/或治疗受抑制Mnk1(Mnk1a或MnK1b)和/或Mnk2(Mnk2a或Mnk2b)或其它变体的激酶活性所影响的疾病的药物组合物中的用途。具体而言，本发明涉及本发明的噻吩并嘧啶化合物在制备用于预防和/或治疗代谢疾病的药物组合物中的用途，所述疾病例如糖尿病、高血脂和肥胖症、造血系统病症、神经变性疾病、肾损伤、炎性病症和癌症，及其后续并发症和与其有关的病症。
代谢疾病为由代谢过程异常而引起的疾病，且可为由于遗传性酶活性异常导致的先天性疾病或由于内分泌器官疾病或具有重要代谢功能的器官(例如肝或胰腺)衰竭而导致的后天性疾病。
更具体而言，本发明涉及治疗和/或预防(尤其)脂质和碳水化合物代谢的代谢疾病，和后续并发症和与其有关的病症。
脂质病症包括引起血脂和脂蛋白的含量和代谢异常的一类病状。因此，高血脂尤其具有临床相关性，因为其为发生动脉粥样硬化和随后血管疾病(例如冠心病)的重要风险因子。
糖尿病定义为与导致器官损伤和代谢过程功能异常有关的慢性高血糖症。根据病因区分为由于绝对(胰岛素分泌缺乏或减少)或相对缺乏胰岛素而引起的数种糖尿病形式。I型糖尿病(IDDM，胰岛素依赖型糖尿病)通常发生于小于20周岁的青少年。认为其由自身免疫引起，导致胰岛炎，结果负责胰岛素合成的胰岛β细胞遭到破坏。另外，在成人潜在性自身免疫糖尿病(LADA；Diabetes Care.8:1460-1467,2001)中，β细胞由于自身免疫攻击而遭到破坏。剩余胰岛细胞产生的胰岛素量太低，导致血糖水平升高(高血糖症)。II型糖尿病通常发生于年长的人。其首先与肝和骨骼肌中的胰岛素抵抗有关，且还与胰岛缺陷有关。高血糖水平(以及高血脂水平)又导致β细胞功能受损和β细胞凋亡增加。
糖尿病为严重致残性疾病，因为当前常见抗糖尿病药不能很好地控制血糖水平，以致无法完全防止高血糖和低血糖水平的发生。超出血糖水平范围会中毒，且造成长期并发症，例如视网膜病变、肾病变、神经病变和外周血管疾病。还有许多例如肥胖症、高血压、心脏病和高血脂等相关病状，为此，患有糖尿病的人相当危险。
肥胖症与例如心血管疾病、高血压、糖尿病、高血脂等后续疾病的风险增加和死亡率增加有关。糖尿病(胰岛素抵抗)和肥胖症为“代谢综合征”的一部分，代谢综合征定义为数种疾病间的各种疾病聚集的病理状态(还称为X综合征、胰岛素抵抗综合征或死亡四重奏(deadly quartet))。这些通常发生在相同患者中，且为发生II型糖尿病和心血管疾病的重要风险因子。已经提出，治疗II型糖尿病、心脏病和代谢综合征的其它事件需要控制脂质水平和葡萄糖水平(参见，例如，Diabetes 48:1836-1841,1999；JAMA 288:2209-2716,2002)。
在本发明一个实施方式中，本发明化合物和组合物可用于治疗和/或预防碳水化合物代谢的代谢疾病及其后续并发症和病症，例如葡萄糖耐量降低、糖尿病(优选为II型糖尿病)、糖尿病并发症，例如糖尿病性坏疽、糖尿病性关节病变、糖尿病性骨质减少、糖尿病性肾小球硬化、糖尿病性肾病变、糖尿病性皮肤病变、糖尿病性神经病变、糖尿病性白内障和糖尿病性视网膜病变、糖尿病性黄斑病变、糖尿病性足综合征、有或无酮症酸中毒的糖尿病性昏迷、糖尿病高渗性昏迷、低血糖昏迷、高血糖昏迷、糖尿病酸中毒、糖尿病酮症酸中毒、毛细血管内肾小球性肾病(intracapillaryglomerulonephrosis)、基-威综合征(Kimmelstiel-Wilson syndrome)、糖尿病性肌萎缩、糖尿病性自律神经病变、糖尿病性单神经病变、糖尿病性多神经病变、糖尿病性血管病、糖尿病性外周血管病、糖尿病性溃疡、糖尿病性关节病变或糖尿病性肥胖症。
在另一实施方式中，本发明化合物和组合物可用于治疗和/或预防脂质代谢的代谢疾病(即脂质病症)，及其后续并发症和病症，例如高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症、佛氏高脂蛋白血症(Fredrickson'shyperlipoproteinemia)、高β脂蛋白血症、高血脂、低密度脂蛋白型[LDL]高脂蛋白血症、纯高甘油酯血症、内源性高甘油酯血症、单纯高胆固醇血症、单纯高甘油三酯血症、心血管疾病，例如高血压、缺血、静脉曲张、视网膜静脉闭塞、动脉粥样硬化、心绞痛、心肌梗塞、狭心症、肺性高血压、充血性心力衰竭、肾小球病、肾小管间质性病症、肾衰竭、血管狭窄或脑血管病症(例如脑卒中)。
在本发明另一实施方式中，本发明化合物和组合物可用于治疗和/或预防造血系统病症及其后续并发症和病症，例如急性髓样白血病(AML)、霍奇金病(Morbus Hodgkin)、非霍奇金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin's lymphoma)；造血系统疾病、急性非淋巴细胞白血病(ANLL)、骨髓组织增殖性疾病、急性早幼粒细胞白血病(APL)、急性粒-单核细胞白血病(AMMoL)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CCL)、维尔姆斯瘤(Wilm's tumor)或尤因肉瘤(Ewing's Sarcoma)。
在本发明另一实施方式中，本发明化合物和组合物可用于治疗和/或预防癌症和后续并发症和病症，例如上胃肠道癌、胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、脑瘤、睾丸癌、喉癌、骨癌、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、肝癌、肺癌、神经母细胞瘤、肾癌、甲状腺癌、食道癌、软组织肉瘤、皮肤癌、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、膀胱癌、转移癌、恶病质或疼痛。
某些抗癌药物(例如顺铂)具有例如肾毒性或耳毒性等严重副作用，此可能限制其剂量。Mnk的激活已将这些副作用联系起来。在本发明另一实施方式中，本发明化合物和组合物可用于治疗和/或预防耳或肾损伤，尤其用于预防或治疗耳和肾药物诱导的损伤。
此外，本发明涉及噻吩并嘧啶化合物在制备用于预防和/或治疗细胞因子相关疾病的药物组合物中的用途。
这些疾病尤其为炎性疾病、自身免疫性疾病、破坏性骨病、增殖性疾病、传染病、神经变性疾病、过敏症或与促炎症细胞因子有关的其它病状。
变态性和炎性疾病为例如急性或慢性炎症、慢性炎性关节炎、类风湿性关节炎、牛皮癣、COPD、炎性肠病、哮喘和败血性休克及其后续并发症和与其有关的病症。
1/3的人在其一生中会患例如类风湿性关节炎、炎性肺病(例如COPD)、炎性肠病和牛皮癣等炎性疾病。这些疾病不仅会强加庞大的健康护理费用，而且通常使人残废和衰弱。
尽管炎症为下文这些炎性疾病的一致致病过程，但当前治疗途径甚为复杂且通常针对任一种疾病。现今可用的许多当前疗法仅治疗疾病症状，而不治疗炎症的根本病因。
本发明的组合物可用于治疗和/或预防炎性疾病和后续并发症和病症，例如慢性或急性炎症、关节炎症，例如慢性炎性关节炎、类风湿性关节炎、牛皮癣关节炎、骨关节炎、幼年型类风湿性关节炎、莱特尔综合征(Reiter'ssyndrome)、类风湿性创伤性关节炎、风疹性关节炎、急性滑膜炎和痛风性关节炎；炎性皮肤病，例如晒伤、牛皮癣、红皮性牛皮癣、脓疱性牛皮癣、湿疹、皮炎、急性或慢性移植物形成、异位性皮炎、接触性皮炎、荨麻疹和硬皮病；胃肠道炎症，例如炎性肠病、节段性回肠炎(Crohn`s disease)和相关病状、溃疡性结肠炎、结肠炎和憩室炎；肾炎、尿道炎、输卵管炎、卵巢炎、子宫内膜炎、脊髓炎、系统性红斑狼疮和相关病症、多发性硬化、哮喘、脑膜炎、脊髓炎、脑脊髓炎、脑炎、静脉炎、血栓性静脉炎；呼吸道疾病，例如哮喘、支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、炎性肺病和成人呼吸窘迫综合征、和过敏性鼻炎；心内膜炎、骨髓炎、风湿热、风湿性心包炎、风湿性心内膜炎、风湿性心肌炎、风湿性二尖瓣病变、风湿性主动脉瓣疾病、前列腺炎、前列腺膀胱炎、脊椎关节病变、强直性脊柱炎、滑膜炎、腱鞘炎、肌炎、咽炎、风湿性多肌痛症、肩部肌腱炎或滑囊炎、痛风、假痛风、血管炎病、甲状腺炎性疾病，选自肉芽肿性甲状腺炎、淋巴细胞性甲状腺炎、侵袭性纤维性甲状腺炎、急性甲状腺炎；桥本甲状腺炎(Hashimoto`s thyroiditis)、川崎病(Kawasaki`s disease)、雷诺现象(Raynaud`s phenomenon)、斯耶格伦综合征(Sjogren`s syndrome)、神经炎症疾病、败血症、结膜炎、角膜炎、虹膜睫状体炎、视神经炎、耳炎、淋巴结炎、鼻咽炎、鼻窦炎、咽炎、扁桃腺炎、喉炎、会厌炎、支气管炎、肺炎、口炎、牙龈炎、食道炎、胃炎、腹膜炎、肝炎、胆结石、胆囊炎、肾小球肾炎、古德帕斯彻病(goodpasture`s disease)、新月体性肾小球肾炎、胰腺炎、子宫内膜炎、子宫肌炎、子宫炎、子宫颈炎、子宫颈内膜炎、外子宫颈炎、子宫旁炎、结核病、阴道炎、外阴炎、硅肺病、结节病、肺尘病、轻瘫、炎性多发性关节病变、干癣性关节病、肠纤维化、支气管扩张症和肠病变性关节病。
而且，还认为细胞因子与以下疾病的发生和发展有关：多种心血管和脑血管病症，例如充血性心脏病、心肌梗塞、形成粥样硬化斑块、高血压、血小板聚集、咽峡炎、中风、阿尔兹海默病(Alzheimer's disease)、再灌注损伤、血管损伤，包括再狭窄和外周血管疾病；和例如多种骨代谢病症，例如骨质疏松症(包括老年性和绝经后骨质疏松症)、佩吉特病(Paget's disease)、骨转移、高钙血症、甲状旁腺功能亢进症、骨硬化、骨质疏松症和牙周炎、和骨代谢的异常变化(可能伴随类风湿性关节炎和骨关节炎)。
过多细胞因子产生还会介导某些细菌、真菌和/或病毒感染并发症(例如内毒素性休克、败血性休克和中毒性休克综合征)和介导某些CNS手术或损伤并发症(例如神经外伤和缺血性中风)。
而且，过多细胞因子产生会介导或加剧疾病发展，包括软骨或肌肉再吸收、肺纤维化、硬化、肾纤维化、某些慢性疾病中发现的恶病质，例如恶性疾病和获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、肿瘤侵袭和肿瘤转移和多发性硬化。本发明还包括这些疾病的治疗和/或预防。
另外，本发明的组合物可用于治疗与自身免疫性疾病有关的炎症，包括但不限于系统性红斑狼疮、阿狄森病(Addison's disease)、自身免疫性多内分泌腺疾病(还称为自身免疫性多内分泌腺综合征)、肾小球肾炎、类风湿性关节炎、硬皮病、慢性甲状腺炎、格雷夫斯病(Graves'disease)、自身免疫性胃炎、糖尿病、自身免疫性溶血性贫血、肾小球肾炎、类风湿性关节炎、自身免疫性嗜中性白血球减少症、血小板减少症、异位性皮炎、慢性活动性肝炎、重症肌无力、多发性硬化、炎性肠病、溃疡性结肠炎、节段性回肠炎、牛皮癣和移植物抗宿主疾病。
在另一实施方式中，本发明的组合物可用于治疗和预防传染病，例如败血症、败血性休克、志贺氏菌病(Shigellosis)、和幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)和病毒疾病，包括I型单纯疱疹病毒(HSV-1)、II型单纯疱疹病毒(HSV-2)、巨细胞病毒、EB病毒(Epstein-Barr virus)、人类免疫缺陷病毒(HIV)、急性肝炎感染(包括甲型肝炎、乙型肝炎和丙型肝炎)、HIV感染和CMV视网膜炎、AIDS或恶性肿瘤、疟疾、分支杆菌感染和脑膜炎。这些还包括以下病毒的感染：流感病毒、水痘带状疱疹病毒(VZV)、EB病毒、人类疱疹病毒-6(HHV-6)、人类疱疹病毒-7(HHV-7)、人类疱疹病毒-8(HHV-8)、痘病毒、痘苗病毒、猴痘病毒、假性狂犬病和鼻气管炎。
本发明的组合物还可局部用于治疗或预防由过多细胞因子产生而介导或加剧的局部疾病状态，例如关节炎症、湿疹、牛皮癣和其它炎性皮肤病状(例如晒伤)；炎性眼部病状，包括结膜炎；轻瘫、疼痛和与炎症有关的其它病状。
牙周病还与局部和体表的细胞因子产生有关。因此，使用本发明的组合物来控制这些口腔疾病(例如牙龈炎和牙周炎)中与细胞因子产生有关的炎症为本发明的另一方面。
最后，本发明的组合物还可用于治疗或预防选自以下的神经变性疾病：阿尔兹海默病、帕金森病(Parkinson's disease)、肌萎缩侧索硬化、亨庭顿氏症(Huntington's disease)、额颞叶痴呆、脊髓小脑性共济失调、路易体痴呆(dementia with Lewy bodies)、脑缺血症或由创伤性损伤引起的神经变性疾病、谷氨酸盐神经中毒或低氧症。
在优选实施方式中，本发明的组合物可用于治疗或预防选自以下的疾病：慢性或急性炎症、慢性炎性关节炎、类风湿性关节炎、牛皮癣、COPD、炎性肠病、败血性休克、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎、多发性硬化和哮喘。
蛋白激酶为与许多细胞功能调控有关的重要酶。黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)的LK6-丝氨酸/苏氨酸激酶基因被描述为可能与微管有关的短寿命激酶(J.Cell Sci.1997,110(2):209-219)。果蝇复眼发育的遗传分析表明该激酶在RAS信号通路调节中发挥作用(Genetics 2000 156(3):1219-1230)。果蝇LK6激酶的人类最接近类似物为与MAP激酶相互作用的激酶2(Mnk2，例如变体Mnk2a和Mnk2b)和与MAP激酶相互作用的激酶1(Mnk1)及其变体。这些激酶主要位于细胞质中。Mnk被p42 MAP激酶Erk1和Erk2和p38-MAP激酶磷酸化。此磷酸化响应生长因子、佛波酯(phorbol ester)和癌基因(例如Ras和Mos)和通过应力信号传导分子和细胞因子而触发。Mnk蛋白的磷酸化激发其对真核起始因子4E(eIF4E)的激酶活性(EMBO J.16:1909-1920,1997；Mol Cell Biol 19,1871-1880,1990；Mol Cell Biol 21,743-754,2001)。同时破坏小鼠中的Mnk1和Mnk2基因使基本和刺激的eIF4E磷酸化减弱(Mol Cell Biol 24,6539-6549,2004)。eIF4E磷酸化可调控蛋白翻译(MolCell Biol 22:5500-5511,2001)。
关于Mnk蛋白的蛋白翻译刺激模式存在不同假设。大多数出版物公开与MAP激酶相互作用的激酶激活对帽依赖性蛋白翻译具有正性刺激效果。因此，Mnk蛋白的激活可通过(例如)影响细胞溶质磷脂酶2K而间接刺激或调控蛋白翻译(BBA 1488:124-138,2000)。
WO 03/037362公开人类Mnk基因(尤其人类Mnk2基因的变体)和与体重或产热调控有关的疾病间的联系。认为人类Mnk基因(尤其Mnk2变体)与例如代谢疾病(包括肥胖症、进食障碍、恶病质、糖尿病、高血压、冠心病、高胆固醇血症、血脂异常、骨关节炎、胆管结石、生殖器癌症和睡眠呼吸暂停)等疾病和与ROS防御有关的疾病(例如糖尿病和癌症)有关。另外，WO03/03762公开在与体重或产热调控有关的疾病的诊断、预防或治疗中与MAP激酶相互作用的激酶(Mnk)基因家族的核酸序列和编码这些的氨基酸序列的用途，和这些序列或Mnk核酸或多肽的效应物(尤其Mnk抑制剂和激活剂)的用途。
WO 02/103361公开与人类MAP激酶相互作用的激酶2a和2b (Mnk2a和Mnk2b)在识别尤其用于治疗II型糖尿病的药物活性成份的分析中的用途。而且，WO 02/103361还公开了通过调节Mnk2a或Mnk2b的表达或活性来预防和/或治疗与胰岛素抵抗有关的疾病。除了肽、拟肽、氨基酸、氨基酸类似物、聚核苷酸、聚核苷酸类似物、核苷酸和核苷酸类似物外，还公开4-羟基苯甲酸甲基酯作为结合人类Mnk2蛋白的物质。
Mnk在炎症中起作用的最初证据由证实促炎症刺激物激活Mnk1的研究提供。细胞因子TNFα和IL-1β在体外触发Mnk1激活(Fukunaga和Hunter,EMBO J 16(8):1921-1933,1997)并在体内诱导Mnk特异性受体eIF4E磷酸化(Ueda等人，Mol Cell Biol 24(15):6539-6549,2004)。另外，给予脂多糖(LPS)(炎症应答的强效刺激剂)可诱导小鼠中的Mnk1和Mnk2激活，同时将其受体eIF4E磷酸化(Ueda等人，Mol Cell Biol 24(15):6539-6549,2004)。
此外，已显示Mnk1参与调控促炎症细胞因子的产生。Mnk1使趋化因子RANTES的表达增强(Nikolcheva等人，J Clin Invest 110,119-126,2002)。RANTES为单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和天然杀伤细胞的强效化学吸引剂。其激活并诱导T淋巴细胞增殖，介导嗜碱性粒细胞脱颗粒并诱导嗜酸性粒细胞的呼吸爆发(Conti和DiGioacchino,Allergy Asthma Proc22(3):133-7,2001)。
WO 2005/00385和Buxade等人(Immunity 23:177-189,August 2005)均公开Mnk与TNFα生物合成的控制间的联系。所提出的机制通过TNFαmRNA中的调控型富含AU的组件(ARE)来介导。Buxade等人举例说明由Mnk1和Mnk2磷酸化的结合ARE和控制ARE功能的蛋白质。具体而言，已表明，Mnk介导的ARE结合蛋白hnRNPA1的磷酸化可增强TNFαmRNA的翻译。
TNFα并非受ARE调控的唯一细胞因子。还在数种白介素、干扰素和趋化因子的转录物中发现功能ARE (Khabar,J Interf Cytokine Res 25:1-10,2005)。因此，Mnk介导的ARE结合蛋白的磷酸化具有控制除TNFα外的其它细胞因子的生物合成的潜力。
当前证据证实，Mnk为炎症信号传导的下游靶标以及炎症应答的介质。Mnk参与TNFα、RANTES和其它可能细胞因子的产生，此表明抑制Mnk可作为抗炎症治疗干预策略。
Mnk1和Mnk2(包括所有剪接形式)使丝氨酸209上的翻译因子eIF4E磷酸化。Mnk1/2双重基因敲除小鼠的丝氨酸209完全没有磷酸化，此表明Mnk激酶是能够在体内磷酸化该位点的唯一激酶(Ueda等人，Mol Cell Biol.2004；24(15):6539-49)。eIF4E在大范围的人类恶性肿瘤中过表达，且高eIF4E表达通常导致疾病更具侵袭性和预后较差。此外，当在致癌活性标准分析中分析时，eIF4E可作为癌基因(例如Ruggero等人，Nat Med.，2004年5月；10(5):484-6)。eIF4E通过刺激例如c-myc和cyclinD1等癌基因翻译(Culjkovic等人，J Cell Biol.2006；175(3):415-26)、通过增加例如MCP-1等促存活因子的表达(Wendel等人，Genes Dev.2007；21(24):3232-7)和通过正性调控药物抵抗的通路(Wendel等人，Nature 2004；428(6980):332-7；Graff等人，CancerRes.2008；68(3):631-4；De Benedetti和Graff，Oncogene 2004；23(18):3189-99；Barnhart和Simon,J Clin Invest.2007；117(9):2385-8)来发挥其致癌活性。通过反义寡核苷酸抑制eIF4E表达已在人类肿瘤细胞的临床前期实验中显示希望(Graff等人，J Clin Invest.2007；117(9):2638-48)。已显示，在体外和体内，eIF4E的致癌活性确实需要Ser209磷酸化(Topisirovic等人，Cancer Res.2004；64(23):8639-42；Wendel等人，Genes Dev.2007；21(24):3232-7)。因此，预期抑制Mnk1和Mnk2在人类恶性肿瘤中会具有有益效果。
Mnk抑制剂(称为CGP57380和CGP052088)已有公开(参见Mol.Cell.Biol.21,5500,2001；Mol Cell Biol Res Comm 3,205,2000；Genomics 69,63,2000)。CGP052088为星状孢子素衍生物，对于抑制Mnk1的体外激酶活性，其IC50值为70nM。CGP57380为Mnk2(Mnk2a或Mnk2b)或Mnk1的低分子量选择性非细胞毒性抑制剂：向经Mnk2(Mnk2a或Mnk2b)或Mnk1转染的细胞的细胞培养物中添加CGP57380显示经磷酸化的eIF4E极大减少。
还公开了其它Mnk抑制剂。参见，例如，申请人专利申请WO 06/066937公开吡唑并嘧啶化合物，WO 06/136402公开某些噻吩并嘧啶化合物，WO07/115822公开具有改良核心环的其它噻吩并嘧啶化合物，且WO 08/006547公开吡咯并嘧啶作为Mnk激酶抑制剂。
本发明的问题在于提供强效且选择性Mnk1和/或Mnk2抑制剂，这些抑制剂可有效且安全地用于治疗代谢疾病、炎性疾病、癌症、神经变性疾病及其后续并发症和病症。
现已惊奇地发现，某些噻吩并嘧啶化合物为激酶Mnk1和/或Mnk2和/或其变体的强效抑制剂，且因此可用于预防和/或治疗可通过抑制Mnk1和/或Mnk2(Mnk2a或Mnk2b)和/或其变体的激酶活性而影响的疾病。
与本领域技术人员所熟知的噻吩并嘧啶化合物(例如申请人专利申请WO 06/136402和WO 2007/115822中公开的化合物)相比，本发明的噻吩并嘧啶化合物具有数个优点，即，溶解性增强、可形成稳定盐、代谢稳定性改善、在生物化学或细胞Mnk活性分析中活性增强或保持和针对其它激酶的选择性增强或保持。
WO 06/136402和WO 07/115822中公开的噻吩并嘧啶化合物在Mnk酶分析中呈现高活性和非常高的选择性，然而，其显示非常低的溶解性，且在大多数情形下代谢不稳定，导致不期望的药代谢动力学特性。
已惊奇地发现，在下文通式(I)化合物的R4-位上引入极性基团可令人惊奇地使代谢显著稳定化，使得本发明的噻吩并嘧啶化合物可用于体内药物学应用。
而且，本申请中所公开的化合物还显示改良的溶解性，在生物化学和细胞分析中具有强抑制效能且具有高度选择性，使得药理学特性总体上得到极大改善。
若无另外说明，则本申请中所提及的任一烷基部分可为直链或支链。
本发明的噻吩并嘧啶化合物为通式(I)化合物：
其中
X为CH或N，
R1为H、卤素、CN、CH3或CF3，
R2为选自以下的基团：
Figure BDA00002310982100102
其中该
Figure BDA00002310982100103
基团可在氮原子上被以下基团取代：-SO2-(C1-3烷基)、-CO-(C1-3烷基)、-CO-(CH2)n-O-(C1-3烷基)、-CO-(CH2)n-N(C1-3烷基)2、C1-4烷基、-(CH2)n-CF3、-(CH2)n-CHF2、-(CH2)n-OH、-(CH2)n-O-(C1-3烷基)、-(CH2)n-CN、
Figure BDA00002310982100104
且其中其可在碳原子上被-CH2OH基团取代，
其中n为1或2，
且其中该
Figure BDA00002310982100111
基团可在氮原子上被以下基团取代：直链或支链C1-4烷基、-(CH2)n-CF3、-(CH2)n-CHF2、-(CH2)n-OH、-(CH2)n-O-(C1-3烷基)、-(CH2)n-CN、-(CH2)n-CO-N(C1-3烷基)2、-SO2-(C1-3烷基)、-CO-(C1-3烷基)、-CO2(C1-4烷基)、-CO2-(CH2)n-CF3、-CO2-(CH2)n-O-(C1-3烷基)、-CO2-(CH2)n-CO-N(C1-3烷基)2、
Figure BDA00002310982100112
其中n为1或2，
R3为C1-2烷基，及
R4为-COOH、-CO2-(C1-3烷基)、-CO2-(CH2)n-N(C1-3烷基)2、-CONH2、-CO-NHR5、-CO-NH-(CH2)p-R6、-CO-NH-(CH2)m-R7、-CO-N(CH3)-(CH2)m-R7、CO-N(CH3)-(CH2)-环己基、
Figure BDA00002310982100113
R5为-CN、-OH、直链或支链C1-6烷基、-O(C1-3烷基)、C3-6环烷基、-SO2-(C1-3烷基)；任选被甲基取代的吡唑基；或任选被甲基取代的哌啶基，
其中该C3-6环烷基可被-NH2、-OH或-OCH3取代，
R6为-C(CH3)2Cl；-C(CH3)2OH；任选被OH取代的-CHC3-6环烷基；任选被甲基取代的咪唑基；任选被C1-3烷基或氧代基团取代的吡咯烷基；四氢呋喃基；四氢吡喃基；苯基，其任选被一或两个-F、-Cl、-CN、-OH、C1-3烷基或-O(C1-3烷基)取代；萘基；吡啶基；呋喃基；噻吩基；
Figure BDA00002310982100121
唑基；噻唑基；吡唑基；任选被甲基取代的吗啉基；苯并噻吩基；-CO-苯基；或-SO2-N(C1-3烷基)2，及
R7为F、-OH、-OCF3、-O-(C1-3烷基)、-O-苯基、-O-(CH2)m-OH、-N(C1-3烷基)2、-NH-苯基、哌啶基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基(azetedinyl)或氮杂环丙烷基(aziridinyl)，
且其中这些NH基团中的氢原子可被C1-3烷基置换，
其中p为1、2或3，及
m为2或3，
或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体或盐。
优选的式(I)化合物为以下化合物，其中
X、R1、R2及R4如上文所定义，及
R3为甲基，
或其互变异构体或盐。
优选的亚组涉及那些式(I)化合物，其中
R2至R4如上文所定义，
X为CH，及
R1为F、Cl、CN、CH3或CF3，
或其互变异构体或盐。
另一亚组关注那些式(I)化合物，其中
R2至R4如上文所定义，
X为N，及
R1为H，
或其互变异构体或盐。
更优选的式(I)化合物为那些式(I)化合物，其中
X、R1、R3及R4如上文所定义，及
R2为
Figure BDA00002310982100122
其中该
Figure BDA00002310982100131
基团可在氮原子上被以下基团取代：直链或支链C1-4烷基、-(CH2)n-CF3、-(CH2)n-CHF2、-(CH2)n-OH、-(CH2)n-O-(C1-3烷基)、-(CH2)n-CN、-(CH2)n-CO-N(C1-3烷基)2或-SO2-(C1-3烷基)，
其中n为1或2，
或其互变异构体或盐。
更优选化合物的优选亚组涉及那些式(I)化合物，其中
X、R1、R3及R4如上文所定义，及
R2为
Figure BDA00002310982100132
或其互变异构体或盐。
更优选化合物的第二个优选亚组涉及那些式(I)化合物，其中
X、R1、R3及R4如上文所定义，及
R2为
Figure BDA00002310982100133
其中该
Figure BDA00002310982100134
基团可在氮原子上被以下基团取代：直链或支链C1-4烷基、-(CH2)n-CF3、-(CH2)n-CHF2、-(CH2)n-OH、-(CH2)n-O-(C1-3烷基)、-(CH2)n-CN、-(CH2)n-CO-N(C1-3烷基)2或-SO2-(C1-3烷基)，
其中n为1或2，
且其中该
Figure BDA00002310982100135
基团可在氮原子上被以下基团取代：-SO2-(C1-3烷基)、C1-4烷基、-(CH2)n-CF3、-(CH2)n-CHF2、-(CH2)n-OH、-(CH2)n-O-(C1-3烷基)、-(CH2)n-CN、
或其互变异构体或盐。
更优选那些式(I)化合物，其中
X、R1、R2及R3如上文所定义，及
R4为-CONH2、-CO-NHR5、-CO-NH-(CH2)p-R6、-CO-NH-(CH2)m-R7，R5为-CN、-OH、直链或支链C1-6烷基、-O(C1-3烷基)、C3-6环烷基、-SO2-(C1-3烷基)；任选被甲基取代的吡唑基；或任选被甲基取代的哌啶基，
其中该C3-6环烷基可被-NH2、-OH或OMe取代；
R6为-C(CH3)2Cl；-C(CH3)2OH；任选被OH取代的-CHC3-6环烷基；任选被甲基取代的咪唑基；任选被C1-3烷基或氧代基团取代的吡咯烷基；四氢呋喃基；四氢吡喃基；苯基，其任选被一或两个-F、-Cl、-CN、-OH、C1-3烷基或-O(C1-3烷基)取代；萘基；吡啶基；呋喃基；噻吩基；
Figure BDA00002310982100142
唑基；噻唑基；吡唑基；任选被甲基取代的吗啉基；苯并噻吩基；-CO-苯基；或-SO2-N(C1-3烷基)2，及
R7为F、-OH、-OCF3、-O-(C1-3烷基)、-O-苯基、-O-(CH2)m-OH、-N(C1-3烷基)2、-NH-苯基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基或氮杂环丙烷基，
且其中这些NH基团中的氢原子可被C1-3烷基置换，
其中p为1、2或3，及
m为2或3，
或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体或盐，
尤其为那些式(I)化合物，其中
X、R1、R2及R3如上文所定义，及
R4为-CONH2、-CO-NHR5、-CO-NH-(CH2)p-R6、-CO-NH-(CH2)m-R7，
R5为-CN、直链或支链C1-6烷基、-O(C1-3烷基)、C3-6环烷基、任选被甲基取代的哌啶基，
其中该C3-6环烷基可被-NH2、-OH或OMe取代；
R6为任选被甲基取代的咪唑基；任选被C1-3烷基或氧代基团取代的吡咯烷基；四氢呋喃基；四氢吡喃基；吡啶基；唑基；噻唑基；吡唑基；任选被甲基取代的吗啉基，及
R7为F、-OH、-OCF3、-O-(C1-3烷基)、-O-苯基、-O-(CH2)m-OH、-N(C1-3烷基)2、哌啶基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基或氮杂环丙烷基，
且其中这些NH基团中的氢原子可被C1-3烷基置换，
其中p为1、2或3，及
m为2或3，
或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体或盐。
更优选的R4残基为：
羧基、C1-3烷氧基-羰基、氨基羰基或N-(C1-3烷基)-氨基羰基，
其中上述N-(甲基)-氨基羰基的甲基部分可任选被各自经由碳原子键结的哌啶基、N-甲基-哌啶基或吗啉基取代，且其中上述N-(C2-3烷基)-氨基羰基的乙基与丙基部分可分别任选在末端上被以下基团取代：羟基、甲氧基、氨基、N-甲基-氨基、N,N-二甲基-氨基、吗啉代、咪唑基、4-甲基-哌嗪基、1-甲基-吡咯烷基、哌啶基、吡咯烷基或4-羟基-哌啶子基。
最优选的R4残基为：
氨基羰基或N-(C1-3烷基)-氨基羰基，
其中上述N-(甲基)-氨基羰基的甲基部分可任选被各自经由碳原子键结的哌啶基、N-甲基-哌啶基或吗啉基取代，且其中上述N-(C2-3烷基)-氨基羰基的乙基与丙基部分可分别任选在末端上被以下基团取代：羟基、甲氧基、氨基、N-甲基-氨基、N,N-二甲基-氨基、吗啉代、咪唑基、4-甲基-哌嗪基、1-甲基-吡咯烷基、哌啶基、吡咯烷基或4-羟基-哌啶子基。
尤其优选的式(I)化合物为：
Figure BDA00002310982100152
制备本发明化合物的典型方法描述于下文实验部分中。
本发明化合物的强效抑制作用可通过如实施例中更详细描述的体外酶分析法测定。
本发明化合物可根据下列合成方案来合成：
Figure BDA00002310982100162
可通过将化合物A与去质子化的醇B在合适的溶剂(例如THF或DMF)中，于0℃至150℃的温度反应来合成通式C化合物。B的去质子化形式可通过在0℃的优选温度，用碱(例如氢化钠或六甲基二硅基氨基锂)进行去质子化来获得。可通过在氢和催化剂(例如钯或阮内镍(Raney nickel))存在下将C反应，来将化合物C氢化以获得通式D化合物。氢可以以气体形式引入或源自氢源，例如甲酸铵。
Figure BDA00002310982100171
还可通过将通式E化合物与醇B在三苯基膦和偶氮二甲酸二烷基酯(例如偶氮二甲酸二乙酯、偶氮二甲酸二异丙酯或偶氮二甲酸二叔丁酯)存在下，在例如THF的溶剂中，在-10℃至80℃，优选0℃至30℃的温度进行Mitsunobu反应来获得通式C化合物。
Figure BDA00002310982100172
式G化合物可通过将化合物D与F优选在酸(例如对甲苯磺酸或盐酸)存在下，于例如二
Figure BDA00002310982100173
烷的溶剂中，在10℃至150℃的温度反应来合成。可通过将化合物G与碱(例如氢氧化钠或氢氧化锂)在溶剂(例如甲醇、乙醇、THF和水或其混合物，优选在乙醇/THF或THF/水)中，于10℃至100℃的温度反应来合成通式H化合物。可通过使用酰胺偶合操作，利用例如TBTU、HATU或EDC/N-羟基丁二酰亚胺的试剂，将化合物H与通式I的胺在存在或不存在碱(例如二异丙基乙胺)时，于例如DMF或THF的溶剂中，在0℃至120℃，优选0℃至30℃的温度反应来获得通式J化合物。
式(1)的本发明化合物的药学上可接受的盐可使用多种有机和无机酸和碱形成。示例性的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基磺酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、磺酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(toluene sulfonate或tosylate)、十一烷酸盐等。
碱性含氮部分可用例如下列试剂季铵化：低级烷基卤化物，例如氯代、溴代和碘代的甲烷、乙烷、丙烷和丁烷；硫酸二烷基酯，例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫酸二戊酯；长链烷基卤化物，例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物；或芳烷基卤化物，例如苄基溴化物和苯乙基溴化物；或其它。藉此得到水溶性或水可分散性产物。
药学上可接受的碱加成盐包括但不限于基于碱金属和碱土金属的阳离子盐形成的盐，例如钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐、铝盐等；以及无毒铵、季铵和胺阳离子，其包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲基胺、二甲基胺、三甲基胺、三乙基胺、乙基胺等。可用于形成碱加成盐的其它代表性胺包括N,N'-二苄基乙二胺(benzathine)、二环己基胺、肼、N-甲基-D-葡萄糖胺、N-甲基-D-葡萄糖酰胺、叔丁基胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等，以及与氨基酸(例如精氨酸、赖氨酸等)形成的盐。
式(1)化合物可以以互变异构体形式存在。本发明包含所有互变异构体形式。此外，本发明还包含本发明化合物的所有立体异构体，包括其对映异构体及非对映异构体。本发明化合物的个别立体异构体可以以不含其它异构体的基本上纯的形式、其混合物形式或以外消旋体形式或所选立体异构体形式存在。
本文所用的术语“代谢物”是指(i)代谢产物，包括中间体和产物；(ii)参与代谢的任何物质(代谢产物或代谢所需要的物质)；或(iii)代谢期间所产生或使用的任何物质。具体而言，其为指在代谢后留下的最终产物。
本文所用的术语“前药”是指(i)在于体内转化成可用或活性形式的代谢过程后发挥效果的药物的无活性形式；或(ii)尽管本身无活性(即无活性前体)，但产生药物活性代谢物的物质。
术语“前药”或“前药衍生物”是指母体化合物或活性药物质的共价结合的衍生物或载体，其在经历至少一些生物转化后呈现药理学效果。通常，这些前药具有可以代谢方式裂解的基团，且在体内快速转化以产生母体化合物(例如通过在血液中水解)，且通常包括母体化合物的酯和酰胺类似物。所配方的前药具有下列目标特征：化学稳定性增强、患者接受性和依从性提高、生物利用度提高、作用持续时间延长、器官选择性提高、制剂改良(例如，水溶性提高)和/或副作用(例如，毒性)减少。通常，前药本身具有弱或无生物活性，且在一般条件下稳定。前药可容易地利用本领域技术人员所熟知的方法自母体化合物制备，例如那些公开于以下文献中的方法：A Textbook ofDrug Design and Development,Krogsgaard-Larsen和H.Bundgaard(编辑)，Gordon&Breach,1991，尤其第5章：“Design and Applications of Prodrugs”；Design of Prodrugs,H.Bundgaard(编辑)，Elsevier,1985；Prodrugs:Topical andOcular Drug Delivery,K.B.Sloan(编辑)，Marcel Dekker,1998；Methods inEnzymology,K.Widder等人(编辑)，第42卷，Academic Press,1985，尤其第309-396页；Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery，第5版，M.Wolff(编辑)，John Wiley&Sons,1995，尤其第1卷和第172-178页和第949-982页；Pro-Drugs as Novel Delivery Systems,T.Higuchi和V.Stella(编辑)，Am.Chem.Soc.,1975；Bioreversible Carriers in Drug Design,E.B.Roche(编辑)，Elsevier，1987，各文献的全部内容均以引用方式并入本文中。
本文所用的术语“药学上可接受的前药”是指在合理的医学判断范围内适用于接触人类和低等动物的组织而无异常毒性、刺激、过敏反应等、具有合理的效益/风险比且对其预期用途而言有效的本发明化合物的前药、以及(若可能)两性离子形式。
本文所用的术语“C3-10环烷基”或“C3-8环烷基”是指分别具有3个至10个或3个至8个环原子的单或多环环烷基取代基或基团，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环丁烯基、环戊烯基、环戊二烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚烯基、环庚二烯基、环庚三烯基、全氢化萘或茚、金刚烷基或降莰烷基等。
在本文中单独或与其它术语组合(例如在烷氧基中)使用的术语“C1-8烷基”是指C1-8、优选C1-4直链或支链烷基/烷氧基，例如甲基、乙基、丙基(异-、正-)、丁基(异-、正-、仲-、叔-)、戊基、己基、甲氧基、乙氧基、丙氧基(异-、正-)、丁氧基(异-、正-、仲-、叔-)、戊氧基、己氧基；而且，术语“C1-8烷基”还包括可在链中含有氧且可被卤素取代形成醚或卤代醚基团的烷基。
任何氢原子，尤其烷基、烷氧基或烯基中的氢原子可被氟原子置换。
单独或作为另一基团的一部分的术语“C2-8烯基”是指在主链中具有2个至8个碳、优选2个至6个碳且在主链中包括一个或多个双键的直链或支链烯基，例如乙烯基、2-丙烯基、3-丁烯基、2-丁烯基、4-戊烯基、3-戊烯基、2-己烯基、3-己烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、3-辛烯基。
术语“杂环基”是指具有1个至4个选自N、S和O的杂原子且其余环原子为碳原子且总环原子数优选为3个至10个的单环状饱和或不饱和杂环基，例如吗啉基、哌嗪基、哌啶基、吡啶基、嘧啶基、噻唑基、吲哚基、咪唑基、
Figure BDA00002310982100201
二唑基、四唑基、吡嗪基、三唑基、噻吩基或呋喃基。
术语“杂芳基”是指具有1个至4个选自N、S和O的杂原子且其余环原子为碳原子且总环原子数优选为5个至10个的单或二环状芳香基团。杂芳基的实例为(但不限于)例如苯并呋喃基、呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、噻唑基、咪唑基、
Figure BDA00002310982100202
唑基、二唑基、噻二唑基、苯并噻唑基、三唑基、四唑基、异
Figure BDA00002310982100204
唑基、异噻唑基、吡咯基、吡喃基、四氢吡喃基、吡唑基、吡啶基、喹啉基、异喹啉基、嘌呤基、咔唑基、苯并
Figure BDA00002310982100205
唑基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、吡嗪基、二嗪基、吡嗪、三嗪基三嗪(triazinyltriazine)、四嗪基、四唑基、苯并噻吩基、苯并吡啶基和苯并咪唑基。
在另一方面中，本发明提供包含本发明的噻吩并嘧啶化合物和任选药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明的药物组合物可进一步包含其它治疗药物。特别优选组合物，其中其它治疗药物选自：抗糖尿病药，例如胰岛素、长效和短效胰岛素类似物、磺酰脲、双胍、DPP-IV抑制剂、SGLT2抑制剂、11β-HSD抑制剂、葡糖激酶激活剂、AMPK激活剂、Glp-1受体激动剂、GIP受体激动剂、DGAT抑制剂、PPARγ激动剂、PPARδ激动剂、和衍生自噻唑烷二酮类的其它抗糖尿病药；降脂药，例如他汀类(statines)、贝特类(fibrates)、离子交换树脂、烟酸衍生物或HMG-CoA还原酶抑制剂；心血管治疗药物，例如硝酸酯；抗高血压药，例如β阻断剂、ACE抑制剂、Ca离子通道阻断剂、血管紧张素II受体拮抗剂；利尿剂；血小板聚集抑制剂；或抗肿瘤药，例如生物碱、烷化剂、抗生素或抗代谢物；或减肥药。更优选的组合物为其中其它治疗药物选自以下的组合物：组胺拮抗剂、缓激肽拮抗剂、血清素拮抗剂、白三烯、抗哮喘药、NSAID、退热剂、皮质类固醇、抗生素、止痛药、尿酸排泄剂、化疗药物、抗痛风药、支气管扩张药、环氧合酶-2抑制剂、类固醇、5-脂氧合酶抑制剂、免疫抑制剂、白三烯拮抗剂、细胞生长抑制剂、抗肿瘤药、mTor抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、抗细胞因子和细胞因子受体的可溶性部分(片段)的抗体或其片段。
更特别优选如下化合物，例如人类NPH胰岛素、人类缓释或特慢胰岛素、赖脯胰岛素、门冬胰岛素、谷赖胰岛素、地特胰岛素或甘精胰岛素、二甲双胍、苯乙双胍、阿卡波糖、米格列醇、伏格列波糖、吡格列酮、罗格列酮、来格列酮、阿格列扎、阿格列汀、沙克列汀、西他列汀、维格列汀、依泽那肽、利拉鲁肽、阿必鲁肽、普兰林肽、磺胺丁脲、氯磺丙脲、优降糖(格列本脲)、格列齐特、格列美脲、格列吡嗪、格列喹酮、妥拉磺脲、甲苯磺丁脲、阿替洛尔、比索洛尔、美托洛尔、艾司洛尔、塞利洛尔、他林洛尔、氧烯洛尔、吲哚洛尔、普萘洛尔、布拉洛尔、喷布洛尔、甲吲洛尔、索他洛尔、卡替洛尔、纳多洛尔、卡维地洛、硝苯地平、尼群地平、氨氯地平、尼卡地平、尼索地平、地尔硫卓、依那普利、维拉帕米、戈洛帕米、喹那普利、卡托普利、赖诺普利、贝那普利、雷米普利、培哚普利、福辛普利、群多普利、厄贝沙坦、氯沙坦、缬沙坦、替米沙坦、依普罗沙坦、奥美沙坦、氢氯噻嗪、吡咯他尼、氯噻酮、美夫西特、呋塞米、苄氟噻嗪、氨苯蝶啶、双肼屈嗪、乙酰水杨酸、盐酸替罗非班、双嘧达莫、噻氯匹定、伊洛前列素-氨丁三醇、依替巴肽、氯吡格雷、普利特康、阿昔单抗、曲匹地尔、斯伐他汀、苯扎贝特、非诺贝特、吉非贝齐、乙羟茶碱、氯贝丁酯、依托贝特、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、考来烯胺、盐酸考来替泊、尼可占替诺、肌醇烟酸酯(inositolnicotinate)、阿昔莫司、奈必洛尔、硝酸甘油、单硝酸异山梨酯、硝酸异山梨酯、戊四硝酯、吲达帕胺、西拉普利、乌拉地尔、依普罗沙坦、尼伐地平、美托洛尔、多沙唑嗪、吗多明、莫沙维林、醋丁洛尔、哌唑嗪、曲匹地尔、可乐定、长春花生物碱和类似物，例如长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、鬼臼毒素衍生物、依托泊苷、替尼泊苷、烷基化剂、亚硝基脲、氮芥(N-lost)类似物、环磷酰胺、雌莫司汀、美法仑、异环磷酰胺、米托蒽醌、伊达比星、多柔比星、博莱霉素、丝裂霉素、放线菌素D、达托霉素、多西紫杉醇、紫杉醇、卡铂、顺铂、奥沙利铂、BBR3464、沙铂、白消安、曲奥舒凡、丙卡巴肼、达卡巴嗪、替莫唑胺、苯丁酸氮芥、氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、苯达莫司汀、乌拉莫司汀、塞替派、喜树碱、拓扑替康、伊立替康、卢比替康、依托泊苷、替尼泊苷、西妥昔单抗、帕尼单抗、曲妥珠单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗、阿仑单抗、贝伐单抗、吉姆单抗、氨基乙酰丙酸、氨基乙酰丙酸甲酯、卟菲尔钠、维替泊芬、阿西替尼、博舒替尼、西地尼布、达沙替尼、埃罗替尼、吉非替尼、伊马替尼、拉帕替尼、来他替尼、尼罗替尼、司马沙尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼、类视色素(阿利维甲酸、维甲酸)、六甲蜜胺、安吖啶、阿那格雷、三氧化二砷、门冬酰胺酶(培门冬酶)、贝沙罗汀、硼替佐米、地尼白介素2、雌莫司汀、伊沙匹隆、马索罗酚、米托坦、睾内酯、替吡法尼、阿贝莫司、迪氟莫司(deforolimus)、依维莫司、胍立莫司、吡美莫司、西罗莫司、他克莫司、替西罗莫司、抗代谢物，例如阿糖胞苷、氟尿嘧啶、氟若拉滨(fluoroarabin)、吉西他滨、硫鸟嘌呤、卡培他滨、组合，例如阿霉素/柔红霉素、胞嘧啶阿拉伯糖苷/阿糖胞苷、4-HC或其它磷酰胺。
其它特别优选化合物为以下化合物，例如氯马斯汀、苯海拉明、茶苯海明、异丙嗪、西替利嗪、阿司咪唑、左卡巴斯汀、氯雷他定(loratidine)、特非那定、乙酰水杨酸、水杨酸钠、双水杨酯、二氟尼柳、水杨酰水杨酸、美色拉秦、柳氮磺吡啶、奥沙拉秦、对乙酰胺基酚、吲哚美辛、舒林酸、依托度酸、托美丁、酮咯酸、倍他米松、布地奈德、色甘酸、二甲硅油、西甲硅油、多潘立酮、甲氧氯普胺、阿西美辛、奥沙西罗、布洛芬、萘普生、酮洛芬、氟比洛芬、非诺洛芬、奥沙普秦、甲芬那酸、甲氯芬那酸、保泰松、羟布宗、阿扎丙宗、尼美舒利、安乃近、来氟米特、依他昔布、氯那唑酸、米索前列醇、扑热息痛、醋氯芬酸、伐地昔布、帕瑞昔布、塞来昔布、异丙安替比林、可待因、奥沙普秦、胺苯砜、泼尼松、泼尼松龙、曲安西龙、右布洛芬、地塞米松、氟尼缩松、沙丁胺醇、沙美特罗、特布他林、茶碱、咖啡因、萘普生、硫酸氨基葡萄糖、依那西普、酮洛芬、阿达木单抗、透明质酸、吲哚美辛、二马来酸丙谷美辛、羟氯喹、氯喹、英夫利昔单抗、依托芬那酯、金诺芬、金、[224Ra]氯化镭、噻洛芬酸、右酮洛芬(氨丁三醇)、氯泼尼醇、金硫丁二钠、金硫葡糖、秋水仙碱、别嘌呤醇、丙磺舒、磺吡酮、苯溴马隆、卡马西平、氯诺昔康、氟可龙、双氯芬酸、依法珠单抗、伊达比星、多柔比星、博来霉素、丝裂霉素、更生霉素、达托霉素、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、氟若拉滨、吉西他滨、硫鸟嘌呤、卡培他滨、阿霉素/柔红霉素、胞嘧啶阿拉伯糖苷/阿糖胞苷、4-HC或其它磷酰胺、青霉胺、透明质酸制剂、粘多糖多硫酸酯、葡糖胺、MTX、TNF受体的可溶性片段(例如依那西普(因贝尔(Enbrel)))和抗TNF抗体(例如英夫利昔单抗(类克(Remicade))、那他珠单抗(特萨比(Tysabri))和阿达木单抗(胡米拉(Humira)))。
本领域技术人员应当理解，本发明化合物和其它治疗药物可配制于单一剂型中，或可存在于单独剂型中，且可同时(即在相同时间)或依次给予。
本发明药物组合物可为适于拟定给药方法的任何形式。
本发明化合物可口服、肠胃外，例如经肺支气管、经皮下、静脉内、肌内、腹膜内、鞘内、经皮、经粘膜、硬膜下、经离子导入法经局部或体表、经舌下、通过吸入喷雾、气溶胶或经直肠等以任选包含常规的药学上可接受的赋形剂的剂量单元制剂形式给予。
可用于本发明药物组合物制剂的赋形剂包含载体、媒剂、稀释剂、溶剂，例如一元醇(例如乙醇、异丙醇)和多元醇(例如二醇)和食用油，例如大豆油、椰子油、橄榄油、红花油、棉籽油；油酯，例如油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯；粘合剂、佐剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂、崩解剂、助流剂、润滑剂、缓冲剂、乳化剂、润湿剂、悬浮剂、甜味剂、着色剂、矫味剂、涂敷剂、防腐剂、抗氧化剂、加工助剂、药物递送改良剂和增强剂，例如磷酸钙、硬脂酸镁、滑石粉、单糖、二糖、淀粉、明胶、纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、右旋糖、羟基丙基-β-环糊精、聚乙烯基吡咯烷酮、低熔点蜡、离子交换树脂。
其它适宜药学上可接受的赋形剂公开于Remington's PharmaceuticalSciences，第15版，Mack出版公司，New Jersey(1991)中。
用于口服给予的剂型包括片剂、胶囊、锭剂、丸剂、糯米纸囊剂、颗粒剂、口服液体(例如糖浆、悬浮液、溶液、乳液等)、重构粉剂。
用于肠胃外给予的剂型包括用于输注的水性或油性溶液或乳液、用于预填充注射器注射的水性或油性溶液、悬浮液或乳液、和/或重构粉剂。
用于局部/体表(topical)给予的剂型包含吹入散、气溶胶、计量式气溶胶、经皮治疗系统、含药贴剂、直肠栓剂和/或阴道锭(ovula)。
可与赋形剂组合以配方单一剂型的本发明化合物的量将根据所治疗的宿主和特定给药方式而变化。
本发明药物组合物可如(例如)Remington's Pharmaceutical Sciences，第15版，Mack出版公司，New Jersey(1991)中所述按照本领域技术人员本身熟知的方式来制备。
在本发明另一方面中，提供本发明的噻吩并嘧啶化合物在用于制备药物组合物中的用途，该药物组合物用于抑制Mnk1或Mnk2(Mnk2a、Mnk2b)或其它变体的激酶活性，尤其用于预防或治疗代谢疾病、造血系统病症、癌症及其后续并发症和病症。优选利用其来预防和治疗碳水化合物和/或脂质代谢的代谢疾病。
通过抑制Mnk1和/或Mnk2(Mnk2a或Mnk2b)和/或其它变体的激酶活性而所影响的本发明疾病包括与代谢疾病调控有关的疾病，例如肥胖症、进食障碍、恶病质、糖尿病、代谢综合征、高血压、冠心病、高胆固醇血症、血脂异常、骨关节炎、胆管结石和/或睡眠呼吸暂停；以及与反应性氧化合物(ROS防御)有关的疾病，例如糖尿病、神经变性疾病和癌症。
本发明药物的组合物尤其可用于预防和治疗肥胖症、糖尿病和上文所述碳水化合物和脂质代谢的其它代谢疾病，尤其是糖尿病和肥胖症。
因此，在本发明的一个更优选的实施方式中，提供噻吩并嘧啶化合物在制备用于预防或治疗代谢疾病的药物组合物的用途。
在本发明的另一方面中，提供本发明的噻吩并嘧啶化合物在制备用于治疗或预防细胞因子介导病症(例如炎性疾病)的药物组合物中的用途。
因此，本发明药物组合物可用于预防或治疗炎性疾病，尤其慢性或急性炎症、慢性炎性关节炎、类风湿性关节炎、牛皮癣关节炎、骨关节炎、幼年型类风湿性关节炎、痛风性关节炎；牛皮癣、红皮性牛皮癣、脓疱性牛皮癣、炎性肠病、节段性回肠炎和相关病状、溃疡性结肠炎、结肠炎、憩室炎、肾炎、尿道炎、输卵管炎、卵巢炎、子宫内膜炎、脊髓炎、系统性红斑狼疮和相关病症、多发性硬化、哮喘、脑膜炎、脊髓炎、脑脊髓炎、脑炎、静脉炎、血栓性静脉炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、炎性肺病、过敏性鼻炎、心内膜炎、骨髓炎、风湿热、风湿性心包炎、风湿性心内膜炎、风湿性心肌炎、风湿性二尖瓣病变、风湿性主动脉瓣疾病、前列腺炎、前列腺膀胱炎、脊椎关节病变、僵直性脊柱炎、滑膜炎、腱鞘炎、肌炎、咽炎、风湿性多肌痛症、肩部肌腱炎或滑囊炎、痛风、假痛风、血管炎病、甲状腺炎性疾病，选自肉芽肿性甲状腺炎、淋巴细胞性甲状腺炎、侵袭性纤维性甲状腺炎、急性甲状腺炎；桥本甲状腺炎、川崎病、雷诺现象、斯耶格伦综合征、神经炎症疾病、败血症、结膜炎、角膜炎、虹膜睫状体炎、视神经炎、耳炎、淋巴结炎、鼻咽炎、鼻窦炎、咽炎、扁桃腺炎、喉炎、会厌炎、支气管炎、肺炎、口炎、牙龈炎、食道炎、胃炎、腹膜炎、肝炎、胆结石、胆囊炎、肾小球肾炎、古德帕斯彻病、新月体性肾小球肾炎、胰腺炎、皮炎、子宫内膜炎、子宫肌炎、子宫炎、子宫颈炎、子宫颈内膜炎、外子宫颈炎、子宫旁炎、结核病、阴道炎、外阴炎、硅肺病、结节病、肺尘病、炎性多发性关节病变、干癣性关节病、肠纤维化、支气管扩张症和肠病变性关节病。
如先前上文所述，本发明的组合物尤其可用于治疗或预防选自以下的疾病：慢性或急性炎症、慢性炎性关节炎、类风湿性关节炎、牛皮癣、COPD、炎性肠病、败血性休克、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎、多发性硬化和哮喘。
因此，在本发明的一个更优选实施方式中，提供噻吩并嘧啶化合物在制备用于预防或治疗选自以下的炎性疾病的药物组合物中的用途：慢性或急性炎症、慢性炎性关节炎、类风湿性关节炎、牛皮癣、COPD、炎性肠病、败血性休克、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎、多发性硬化和哮喘。
在本发明另一方面中，提供本发明的噻吩并嘧啶化合物在制备用于治疗或预防癌症、病毒疾病或神经变性疾病的药物组合物的用途。
对于本发明，治疗有效剂量通常为约1mg/天至2000mg/天，优选为约10mg/天至约1000mg/天，且最佳为约10mg/天至约500mg/天，此可以一次或多次剂量给予。
然而，应当理解，用于任一特定患者的本发明化合物的具体剂量将根据多种因素而定，例如拟治疗患者的年龄、性别、体重、基本健康状况、饮食、个体应答、给药时间、拟治疗疾病的严重程度、所应用特定化合物的活性、剂型、施用方式和伴随药物。用于给定情形的治疗有效量可通过常规实验容易地确定，且其在普通临床医师或内科医师的技术和判断范围内。
实施例2.激酶荧光偏振分析
分析原理：使用基于那些本领域技术人员所熟知方式的分析以间接(竞争性)荧光偏振来评估化合物对Mnk1、Mnk2a和其它激酶的抑制效能。分析检测系统包含与磷酸特异性抗体结合的小的荧光团标记的磷酸肽(称为配体)。激酶反应所产生的产物与配体竞争与抗体的结合。由于结合配体分子的体积较大，导致在溶液中的旋转速率较低，其发射光较游离配体的发射光具有较高的偏振程度。
特异性同质激酶分析的说明
实施例2a.Mnk1和Mnk2a体外激酶分析
作为酶来源，人类Mnk1和人类Mnk2a在大肠杆菌中以GST融合蛋白形式表达，通过谷胱甘肽亲和色谱纯化至大于80%同质性(homogeneity)，并用预激活的ERK2在体外激活。简言之，分别使用以下正向/反向引物对(所用限制酶切位点加下划线)自cDNA扩增人类Mnk1和Mnk2a的开放读码框：
SEQ ID NO:1  5'TTTAGGATCCGTATCTTCTCAAAAGTTGG/
SEQ ID NO:2  5'CTGGGTCGACTCAGAGTGCTGTGGGCGG和
SEQ ID NO:3  5'ACAGGGATCCGTGCAGAAGAAACCAGCC/
SEQ ID NO:4  5'GATGGTCGACTCAGGCGTGGTCTCCCACC
并克隆至载体pGEX-4T1(Amersham，Sweden，目录号27-4580-01)的BamHI和SalI位点中。这些构建体使得Mnk1或Mnk2a以带有N末端谷胱甘肽S转移酶(GST)标签的融合蛋白(称为GST-Mnk1或GST-Mnk2a)形式原核表达。若不区分该两种同工型(isoforms)，则GST-Mnk1和GST-Mnk2a (统称为GST-Mnk)的以下表达和纯化程序相同。GST-Mnk在大肠杆菌BL21(MerckBiosciences，Germany，目录号69449)中表达。使细胞在37℃于补充有100μg/ml氨苄西林(Sigma，Germany，目录号A9518)的LB-肉汤(Merck，Germany，目录号1.10285)中生长。当培养物达到对应于0.8的A600密度后，添加等体积冰冷的LB/氨苄西林，将培养物转移至25℃并用1mM异丙基硫代半乳糖苷(IPTG，Roth，Germany，目录号2316.4)诱导4小时。将通过离心收集的细胞再悬浮于10ml裂解缓冲液(50mM三(羟基甲基)氨基甲烷盐酸盐(Tris/HCl，Sigma，Germany，目录号T5941)pH 7.5、300mM氯化钠(NaCl，Sigma，Germany，目录号S7653)、5%(w/v)甘油(Sigma，Germany，目录号G5516)、3mM DTT二硫苏糖醇(DTT，Sigma，Germany，目录号D9779))/克湿重细胞沉淀物中。通过用超声破碎细胞且随后通过在38000g下于4℃离心45分钟清理制备裂解物。
将裂解物施加至用裂解缓冲液平衡的GSTPrep FF 16/10柱(Amersham，Sweden，目录号17-5234-01)中。用3柱体积(CV)裂解缓冲液移除未结合的物质。用2CV洗脱缓冲液(50mM Tris/HCl pH 7.5、300mM NaCl、5%(w/v)甘油、20mM谷胱甘肽(Sigma，Germany，目录号G4251))洗脱。收集峰值级分，并通过在PD10脱盐柱(Amersham，Sweden，目录号17-0851-01)上实施凝胶过滤将蛋白转移至储存缓冲液(50mM Tris/HCl pH 7.5、200mM NaCl、0.1m甲二醇-双(2-氨基乙基醚)-N,N,N',N'-四乙酸(EGTA，Aldrich，Germany，目录号23，453-2)、1mM DTT、10%(w/v)甘油、0.5M蔗糖(Sigma，Germany，目录号S0389))中。将等分液在液氮中快速冷冻并在-80℃储存。
以2.5μM浓度纯化的GST-Mnk1或GST-Mnk2a通过与150nM预激活的NHis-ERK2(其制备请参见ERK2分析)和50μM三磷酸腺苷(ATP，Sigma，目录号A2699)在包含20mM N-(2-羟基乙基)哌嗪-N'-(2-乙烷磺酸)(HEPES，Fluka，Germany，目录号54459)/氢氧化钾(KOH，Roth，Germany，目录号6751.1)pH 7.4、10mM氯化镁(MgCl2，Sigma，Germany，目录号M2670)、0.25mM DTT、0.05%(w/v)聚氧乙烯20硬脂酰基醚(Brij 78，Sigma，Germany，目录号P4019)(HMDB缓冲液)的缓冲液中于30℃一起培育45分钟来实施Mnk1和Mnk2a的激活。培育后，将制品等分至单次使用的样品中，在液氮中快速冷冻，在-80℃储存并用于下文详述的Mnk1或Mnk2a激酶分析。已测试证明激活激酶的存在不干扰Mnk活性分析。
底物：已合成羧基末端酰胺化的具有12个单体的肽，序列为：
SEQ ID NO:5    TATKSGSTTKNR，
其衍生自真核翻译起始因子4E(eIF4E)的丝氨酸209周围的氨基酸序列，并通过高效液相色谱(HPLC)纯化至大于95%(Thermo,Germany)。经Mnk激酶磷酸化的丝氨酸残基加下划线。
配体：已合成含有酰胺化的羧基末端并在氨基末端与衍生自下文所示荧光团的
Figure BDA00002310982100271
嗪结合的肽TATKSG-pS-TTKNR，且用作配体。
抗体：按照标准方案，用偶合至钥孔戚血蓝素(KLH)的肽NH2-CTATKSG-pS-TTKNR-CONH2使SPF新西兰白兔(New Zealand WhiteRabbit)免疫。免疫球蛋白G(IgG)级分通过本领域技术人员所熟知的技术自加强免疫动物的血清纯化。简言之，对血清实施蛋白质A亲和色谱。洗脱出的物质于50%冷饱和硫酸铵中沉淀，将沉淀物溶解并脱盐。所得物质适用于下文所述分析，而未进行进一步抗原特异性纯化。
分析设置：使用相同分析系统分别使用预激活的GST-Mnk1或GST-Mnk2a来评估Mnk1和Mnk2a激酶活性的抑制。激酶反应含有30μM底物肽、20μM ATP、60nM配体，以及25nM预激活的Mnk1或2.5nM预激活的Mnk2a中的一者。反应缓冲液条件是16mM HEPES/KOH pH 7.4、8mM MgCl2、0.4mM DTT、0.08%(w/v)牛血清白蛋白(BSA，Sigma，Germany，目录号A3059)、0.008%(w/v)Pluronic F127(Sigma，Germany，目录号P2443)、3%(v/v)DMSO(Applichem，Germany，目录号A3006)。激酶反应在30℃进行40分钟。通过添加0.67反应体积的在20mM HEPES/KOH pH 7.4、50m甲二胺四乙酸二钠盐(EDTA，Sigma，Germany，目录号E5134)、0.5mM DTT、0.05%(w/v)聚氧乙烯-山梨醇酐单月桂酸酯(Tween 20，Sigma，Germany，目录号P7949)中的1μM抗体来终止激酶反应。在室温平衡1小时后，对样品进行荧光偏振测量。在Analyst AD多模式读取器(Molecular Devices,Sunnyvale,CA,USA)上得到荧光偏振读数，该读取器装备有DLRP650分色镜(Omega Opticals,Brattleboro,VT,USA,目录号XF2035)、激发侧上的630AF50带通滤波器(Omega Opticals,Brattleboro,VT,USA,目录号XF1069)和发射侧上的695AF55带通滤波器(Omega Opticals,Brattleboro,VT,USA,目录号XF3076)。
还可通过其它体外激酶分析方式进行分析Mnk蛋白的活性。例如，适宜激酶分析已公开于以下文献中：Knauf等人，Mol Cell Biol.2001年8月；21(16):5500-11或Scheper等人，Mol Cell Biol.2001年2月；21(3):743-54。通常，可实施Mnk激酶分析以使得可包括或不包括下文进一步公开的修饰的Mnk底物(例如蛋白质或肽等)或其它底物在体外经具有酶活性的Mnk蛋白磷酸化。可随后通过其降低Mnk蛋白的酶活性的能力来确定候选试剂的活性。可通过磷酸化引起的底物的化学、物理或免疫特性的变化来检测激酶活性。
在一个实施例中，激酶底物可具有有利于其结合或检测的经设计或内源性特征，以产生适于分析底物磷酸化状态的信号。这些特征可为(但不限于)生物素分子或其衍生物、谷胱甘肽-S转移酶部分、具有6个或更多个连续组氨酸残基的部分、氨基酸序列或半抗原以用作表位标签、荧光染料、酶或酶片段。激酶底物可被分子间隔臂与这些或其它特征连接，以避免空间位阻。
在另一实施例中，激酶底物可用荧光团标记。可通过文献中所述的荧光偏振技术来监测试剂与经标记底物在溶液中的结合。在该实施例的一个变体中，荧光追踪剂分子可与底物竞争分析物，以通过那些本领域技术人员所熟知的间接萤光偏振技术来检测激酶活性。
在另一实施例中，在激酶反应中使用放射性γ-ATP，且测定相对于对照条件测试试剂对在测试底物中掺入放射性磷酸盐的影响。
已经显示，本发明的化合物在如实施例2a中所述的体外生物筛选分析中对于Mnk 1和/或Mnk 2激酶活性的抑制显示出低IC50值。下表含有示例性化合物的测试结果。
Figure BDA00002310982100291
Figure BDA00002310982100301
Figure BDA00002310982100311
Figure BDA00002310982100321
Figure BDA00002310982100331
Figure BDA00002310982100341
HPLC方法
方法A
方法amslstandard：
ZQ 2000MS；Waters 2996PDA(210-600nm)；Waters 2525泵；Waters 515补充泵；Waters 2767进样器/级分收集器、Waters柱及流控处理器(CFO)
流动相：
A：含0.20%三氟乙酸的水
B：甲醇
Figure BDA00002310982100351
固定相：
X-terra MS C18；30×100mm*5μm
温度：25℃
方法B
方法amslpolar1 basic：
ZQ 2000MS；Waters 2996PDA(210-600nm)；Waters 2525泵；Waters 515补充泵；Waters 2767进样器/级分收集器、Waters柱及流控处理器(CFO)
流动相：
A：含0.20%三乙胺的水
B：甲醇
Figure BDA00002310982100352
Figure BDA00002310982100361
固定相：
X-terra MS C18；30×100mm*5μm
温度：25℃
方法C
方法A_ALCMS2_10
Waters ZQ 2000；Waters 1515泵；Waters PDA 996检测器；Waters 2747进样器
DAD 200-420nm
流动相：
A：含0.10%甲酸的水
B：含0.10%甲酸的乙腈
Figure BDA00002310982100362
固定相：
X-terra MS C18；4.6×30mm*2.5μm
方法D
方法AC1
(A_ALCMS1_1及A_ALCMS1_3/A_ALCMS2_1及A_ALCMS2_3)
Waters ZQ 2000；Waters 1515泵；Waters PDA 996检测器；Waters 2747进样器
DAD 210-420nm
流动相：
A：含0.10%甲酸的水
B：含0.10%甲酸的乙腈
Figure BDA00002310982100371
方法E
方法A_ALCMS2_9
(正/负转换法)
Waters ZQ 2000；Waters 1515泵；Waters PDA 996检测器；Waters 2747进样器
DAD 200-420nm
流动相：
A：含0.10%甲酸的水
B：含0.10%甲酸的乙腈
Figure BDA00002310982100372
固定相：
X-terra MS C18；4.6×30mm*2.5μm
方法F
在Waters ZQ2000质谱仪、HP1100HPLC+DAD(波长范围(nm)：210至500)及2700AS上进行RP-HPLC MS分析。
流动相：
A：含0.1%TFA的水
B：MeOH
固定相：Waters,Sunfire,C18,3.5μm,4.6×50mm
柱温：恒定在40℃
方法G
Waters ZQ2000；Waters 1515泵、Waters PDA 996检测器、Waters 2747进样器
流动相：A：水+0.1%甲酸
        B：乙腈+0.1%甲酸
梯度：
固定相：X-terraTMMS C18,2.5μm,4.6mm×30mm
柱温约25℃
二极管阵列检测波长：210-420nm
质谱：m/z 80至800
方法H
在Waters SQD质谱仪、HP1100HPLC+DAD(波长范围(nm)：210至500)上进行RP-HPLC MS分析。
流动相：
A：含0.032%NH4OH的水
B：MeOH
梯度
Figure BDA00002310982100391
固定相：Waters,XBridge,C18,1.7μm;2.1×50mm
柱温：恒定在60℃
方法I
在Waters ZQ2000质谱仪上进行RP-HPLC MS分析。
流动相：
A：含0.1%TFA的水
B：含0.08%TFA的乙腈
梯度
Figure BDA00002310982100392
固定相：Waters,Sunfire,C18,3.5μm,4.6×50mm
柱温：恒定在40℃
方法J
在Waters ZQ2000质谱仪上进行RP-HPLC MS分析。
流动相：
A：含0.1%TFA的水
B：甲醇
梯度
Figure BDA00002310982100393
固定相：Waters,Sunfire,C18,3.5μm,4.6×50mm
柱温：恒定在40℃
方法K
在Waters ZQ2000质谱仪上进行RP-HPLC MS分析。
流动相：
A：含0.1%TFA的水
B：甲醇
梯度
Figure BDA00002310982100402
固定相：Waters,Sunfire,C18,3.5μm,4.6×50mm
柱温：恒定在40℃
方法L
在Waters ZQ2000质谱仪上进行RP-HPLC MS分析。
流动相：
A：含0.1%TFA的水
B：甲醇
梯度
Figure BDA00002310982100403
Figure BDA00002310982100411
固定相：Waters,Sunfire,C18,3.5μm,4.6×50mm
柱温：恒定在60℃
方法M
在Waters ZQ2000质谱仪上进行RP-HPLC MS分析。
流动相：
A：含0.1%TFA的水
B：甲醇
梯度
Figure BDA00002310982100412
固定相：Waters,Sunfire,C18,3.5μm,4.6×50mm
柱温：恒定在60℃
方法X：
管柱：Ascentis Express,C18,2.1×50mm,2.7μm
溶剂：A%：含0.1%TFA的H2O；B%：含0.1%TFA的乙腈
梯度：
Figure BDA00002310982100413
柱温(℃)65.0
缩写：
HATU：2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲
Figure BDA00002310982100414
六氟磷酸
        盐
TBTU：  2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲
Figure BDA00002310982100421
四氟硼酸盐
THF：   四氢呋喃
EtOH：  乙醇
MeOH：  甲醇
DCM：   二氯甲烷
DMF：   N,N-二甲基甲酰胺
EtOAc： 乙酸乙酯
HCl：   盐酸
t-BuOH：叔丁醇
DTAD：  偶氮二甲酸二叔丁酯
DEAD：  偶氮二甲酸二乙酯
DIAD：  偶氮二甲酸二异丙酯
LiHMDS：六甲基二硅基氨基锂
DIPEA： 二异丙基乙胺
EDC：   1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
CDI：   羰基二咪唑
TFA：   三氟乙酸
brine： 饱和氯化钠水溶液
rt：    室温
min：   分钟
TLC：   薄层色谱
中间体
中间体I
(S)-3-(2-氨基-5-氟苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982100422
I.1.(S)-3-(5-氟-2-硝基苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982100431
将LiHMDS于THF(6.4ml)中的1M溶液添加至(S)-1-Boc-3-羟基哌啶(1.3g)于无水THF(20.0ml)中的溶液中。在0℃搅拌反应物0.5小时。接着一次性添加2,4-二氟-1-硝基-苯(703μl)。在TLC指示起始原料消耗时将反应物升温至室温过夜。通过添加饱和NH4Cl(5.0ml)淬灭反应且用EtOAc(100.0ml)稀释。用饱和NH4Cl(50.0ml)洗涤有机层且用EtOAc反萃取水层。用盐水洗涤合并的有机相，干燥，过滤且在真空中浓缩。通过色谱纯化残余物，得到预期产物。
产率：1.78g。
I.2：(S)-3-(2-氨基-5-氟苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
向(S)-3-(5-氟-2-硝基苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(6.41g)于MeOH(70.0ml)中的溶液中添加钯/炭(600.0mg)，在室温及50psi下将混合物氢化。滤除催化剂且在减压下浓缩滤液。通过二氧化硅色谱纯化残余物，得到所需产物。
产率：1.45g
ESI质谱：m/z=311(M+H)+。
中间体II
(R)-3-(2-氨基-5-氟苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982100433
II.1.(R)-3-(5-氟-2-硝基苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982100441
在0℃将DTAD(1.140g)添加至5-氟-2-硝基-苯酚(0.650g)、(S)-1-Boc-3-羟基哌啶(1.0g)及三苯基膦(1.34g)于无水二氯甲烷(10.0ml)中的溶液中。将反应物升温至室温。在真空中浓缩反应混合物且通过色谱纯化残余物，得到所需产物。
产率：1.25g。
II.2：(R)-3-(2-氨基-5-氟苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982100442
在室温将甲酸铵(1.0g)添加至(R)-3-(5-氟-2-硝基苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯及钯/炭(125.0mg)于无水MeOH(10.0ml)中的悬浮液中。在LCMS分析指示起始原料消耗时，在室温搅拌反应物过夜。经硅藻土过滤溶液且用MeOH洗涤。在真空中浓缩滤液。用乙醚研磨残余物以移除甲酸铵残余物。过滤溶液且在真空中浓缩。通过色谱纯化残余物。
产率：0.33g。
中间体III
(2S,4S)-4-(2-氨基-5-氟苯氧基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982100443
III.1.(2S,4S)-4-(5-氟-2-硝基苯氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯
Figure BDA00002310982100451
在0℃冷却下，将偶氮二甲酸二乙酯(1.76ml)逐滴添加至N-Boc-反-4-羟基-L-脯氨酸甲酯(2.74g)、5-氟-2-硝基苯酚(1.47g)及三苯基膦(2.93g)于二氯甲烷中的溶液中。在20分钟后移除冷却剂，且反应混合物在室温搅拌过周末。蒸发溶剂且通过色谱纯化残余物，得到所需产物。
产率：1.25g。
III.2.(2S,4S)-4-(2-氨基-5-氟苯氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯
Figure BDA00002310982100452
使用(2S,4S)-4-(5-氟-2-硝基苯氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯，类似于实施例II.2来制备。
产率：2.52g。
III.3.(2S,4S)-4-(2-氨基-5-氟苯氧基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982100453
将氢化铝锂(540.0mg)添加至(2S,4S)-4-(2-氨基-5-氟苯氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(3.36g)于THF(30.0ml)中的经冷却(0℃-4℃)溶液中。在此温度搅拌反应混合物4小时。之后，用水(0.54ml)、NaOH(2M；0.54ml)及水(3×0.54ml)淬灭混合物。搅拌混合物1.5小时，接着用EtOAc稀释且添加MgSO4。经硅藻土过滤悬浮液且蒸发滤液。通过色谱纯化残余物。
产率：2.69g。
中间体IV
(S)-3-(2-氨基-5-氟苯氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982100461
IV.1.(S)-3-(5-氟-2-硝基苯氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
使用(S)-(+)-N-Boc-3-羟基吡咯烷，类似于实施例I.1来制备。
产率：0.435g。
IV.2.(S)-3-(2-氨基-5-氟苯氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在室温将甲酸铵(0.41g)添加至(S)-3-(5-氟-2-硝基苯氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯及钯/炭(90.0mg)于MeOH(5.0ml)中的悬浮液中。在35℃加热混合物30分钟。经硅藻土垫过滤悬浮液且用二氯甲烷洗涤滤饼。用水洗涤滤液，接着通过疏水性玻璃料(frit)且蒸发。
产率：0.37g。
中间体V
4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100471
V.1.4-(4-氟-2-羟基-苯基氨基)-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100472
将4-氯-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(2.43g)、2-氨基-5-氟苯酚(2.43g)及对甲苯磺酸(190.0mg)溶解于二
Figure BDA00002310982100473
烷(50.0ml)中，且在120℃于氮气下加热4小时。冷却反应混合物且用3M NH4OH处理。过滤所得悬浮液，用乙醚洗涤固体且于60℃经P2O5真空干燥。
产率：2.97g。
V.2.4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100474
将4-(4-氟-2-羟基-苯基氨基)-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(445.0mg)、(S)-1-Boc-3-甲磺酰基氧基-吡咯烷(708.0mg)及碳酸钾(368.0mg)溶解于DMF(7.0ml)中。在70℃加热反应混合物过夜且在80℃再加热4小时。添加EtOAc及H2O且过滤所得悬浮液。用水及EtOAc洗涤固体且经P2O5真空干燥。将残余物溶解于二氯甲烷中，通过疏水性玻璃料且蒸发溶剂。用乙醚研磨残余物。
产率：482.0mg。
中间体VI
(R)-4-氟-2-(四氢呋喃-3-基氧基)苯胺
Figure BDA00002310982100481
VI.1.(R)-3-(5-氟-2-硝基苯氧基)四氢呋喃
Figure BDA00002310982100482
使用(S)-(+)-3-羟基四氢呋喃及偶氮二甲酸二异丙酯，类似于实施例III.1来制备。
产率：1.8g。
VI.2：(R)-4-氟-2-(四氢呋喃-3-基氧基)苯胺
Figure BDA00002310982100483
向(R)-3-(5-氟-2-硝基苯氧基)四氢呋喃(1.8g)于MeOH(60.0ml)中的溶液中添加Ra/Ni(200.0mg)，在室温将混合物氢化。滤除催化剂，且浓缩滤液。
产率：1.6g。
ESI质谱：m/z=198(M+H)+。
中间体VII
(S)-3-(2-氨基-5-(三氟甲基)苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982100491
VII.1.(S)-3-(2-硝基-5-(三氟甲基)苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982100492
将LiHMDS于THF中的1M溶液添加至(S)-(+)-N-Boc-3-羟基哌啶于THF中的经冰冷却的溶液(4.0ml)中。45分钟后，添加THF(2.0ml)中的3-氟-4-硝基三氟甲苯(418.0mg)。将反应混合物缓慢升温至室温过夜。用二氯甲烷稀释混合物且与10%KHSO4水溶液一起振荡。将混合物通过疏水性玻璃料且蒸发有机相。通过色谱纯化残余物。
产率：576.0mg。
VII.2.(S)-3-(2-氨基-5-(三氟甲基)苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982100493
使用(S)-3-(2-硝基-5-(三氟甲基)苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，类似于实施例IV.2来制备。
产率：494.0mg。
中间体VIII
(S)-1-(3-(2-氨基-5-氯苯氧基)哌啶-1-基)-2,2,2-三氟乙酮
VIII.1.(S)-3-(5-氯-2-硝基苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982100502
使用(S)-(+)-N-Boc-3-羟基哌啶及4-氯-2-氟硝基苯，类似于实施例VII.1来制备。
产率：515.0mg。
VIII.2.(S)-1-(3-(5-氯-2-硝基苯氧基)哌啶-1-基)-2,2,2-三氟乙酮
Figure BDA00002310982100503
将HCl的二
Figure BDA00002310982100504
烷溶液(4M；10.0ml)添加至(S)-3-(5-氯-2-硝基苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(505.0mg)中，且搅拌1小时。真空移除溶剂且将残余物溶解于MeOH中。向反应混合物中依次添加三乙胺(395.0μl)、三氟乙酸乙酯(170.0μl)，且在室温搅拌过夜。再添加三氟乙酸乙酯(170.0μl)及三乙胺(198.0μl)。再搅拌混合物2小时。之后，蒸发溶剂。将所得残余物再溶解于二氯甲烷中，且用10%KHSO4水溶液洗涤。分离有机层且通过疏水性玻璃料。蒸发溶剂。
产率：476.0mg。
VIII.3.(S)-1-(3-(2-氨基-5-氯苯氧基)哌啶-1-基)-2,2,2-三氟乙酮
将(S)-1-(3-(5-氯-2-硝基苯氧基)哌啶-1-基)-2,2,2-三氟乙酮(465.0mg)及SnCl2*H2O(1.49g)溶解于EtOAc(10.0ml)中，且在回流下加热3.5小时。用EtOAc及10%K2CO3水溶液稀释反应混合物。分离混合物且用水及盐水洗涤有机层。干燥有机相且倾倒通过疏水性玻璃料。蒸发溶剂，得到预期产物。
产率：346.0mg。
中间体IX
(S)-1-(3-(2-氨基-5-甲基苯氧基)哌啶-1-基)-2,2,2-三氟乙酮
Figure BDA00002310982100512
IX.1.(S)-3-(5-甲基-2-硝基苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982100513
使用(S)-(+)-N-Boc-3-羟基哌啶及3-氟-4-硝基甲苯，类似于实施例VII.1来制备。
产率：302.0mg。
IX.2.(S)-2,2,2-三氟-1-(3-(5-甲基-2-硝基苯氧基)哌啶-1-基)乙酮
使用(S)-3-(5-甲基-2-硝基苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，类似于实施例VIII.2来制备。
产率：259.0mg。
IX.3.(S)-1-(3-(2-氨基-5-甲基苯氧基)哌啶-1-基)-2,2,2-三氟乙酮
在室温将甲酸铵(0.238g)添加至(S)-2,2,2-三氟-1-(3-(5-甲基-2-硝基苯氧基)哌啶-1-基)乙酮及钯/炭(50.0mg)于MeOH(6.0ml)中的悬浮液中。在回流下加热混合物40分钟。经硅藻土垫过滤混合物且用二氯甲烷洗涤滤饼。用水及洗涤滤液。通过色谱纯化残余物。
产率：168.0mg。
中间体X
(S)-3-(3-氨基吡啶-2-基氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982100523
X.1.(S)-3-(3-硝基吡啶-2-基氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
使用(S)-1-Boc-3-羟基哌啶及2-氟-3-硝基-吡啶，类似于实施例VII.1来制备。
产率：2.19g。
X.2.(S)-3-(3-氨基吡啶-2-基氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982100532
使用(S)-3-(3-硝基吡啶-2-基氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，类似于实施例IX.3来制备。
产率：1.60g。
中间体XI
(S)-4-氨基-3-(1-(2,2,2-三氟乙酰基)哌啶-3-基氧基)苯甲腈
Figure BDA00002310982100533
XI.1.(S)-3-(5-氰基-2-硝基苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982100534
使用(S)-1-Boc-3-羟基哌啶及3-氟-4-硝基苯甲腈，类似于实施例VII.1来制备。
产率：0.633g。
XI.2.(S)-4-硝基-3-(1-(2,2,2-三氟乙酰基)哌啶-3-基氧基)苯甲腈
使用(S)-3-(5-氰基-2-硝基苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，类似于实施例VIII.2来制备。
产率：541.0mg。
XI.3.(S)-4-氨基-3-(1-(2,2,2-三氟乙酰基)哌啶-3-基氧基)苯甲腈
Figure BDA00002310982100542
使用(S)-4-硝基-3-(1-(2,2,2-三氟乙酰基)哌啶-3-基氧基)苯甲腈，类似于实施例IX.3来制备。
产率：99.0mg。
中间体XII
4-[4-氟-2-((S)-1-异丙氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100543
XII.1.
Figure BDA00002310982100551
此起始原料描述于V.1中。
XII.2(S)-4-(2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-基氧基)-4-氟苯基氨基)-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100552
使用4-(4-氟-2-羟基苯基氨基)-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯及(R)-3-(甲磺酰基氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，类似于实施例V.2来制备。
中间体XIII
(S)-4-氟-2-(四氢-2H-吡喃-3-基氧基)苯胺
Figure BDA00002310982100553
XIII.1.(S)-3-(5-氟-2-硝基苯氧基)四氢-2H-吡喃
使用(R)-四氢-2H-吡喃-3-醇，类似于实施例II.1来制备。
产率：1.17g。
XIII.2(S)-4-氟-2-(四氢-2H-吡喃-3-基氧基)苯胺
Figure BDA00002310982100555
使用(S)-3-(5-氟-2-硝基苯氧基)四氢-2H-吡喃，类似于实施例IX.3来制备。
产率：0.26g。
中间体XIV
(R)-4-氟-2-(四氢-2H-吡喃-3-基氧基)苯胺
Figure BDA00002310982100561
XIV.1.(R)-3-(5-氟-2-硝基苯氧基)四氢-2H-吡喃
Figure BDA00002310982100562
使用(R)-四氢-2H-吡喃-3-醇，类似于实施例II.1来制备。
产率：0.87g。
XIV.2(R)-4-氟-2-(四氢-2H-吡喃-3-基氧基)苯胺
Figure BDA00002310982100563
使用(R)-3-(5-氟-2-硝基苯氧基)四氢-2H-吡喃，类似于实施例IX.3来制备。
产率：0.61g。
中间体XV
4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100564
XV.1.
Figure BDA00002310982100571
此起始原料描述于V.1中。
XV.24-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100572
将甲磺酰氯(232.0μl)添加至(S)-1-N-Boc-3-羟基吡咯烷(374.0mg)及三乙胺(556.0μl)于二氯甲烷(10.0ml)中的经冰冷却的溶液中。在此温度搅拌混合物3小时。之后，用二氯甲烷稀释反应混合物，用10%KHSO4水溶液、10%K2CO3水溶液洗涤且通过疏水性玻璃料。蒸发溶剂。
将残余物与4-(4-氟-2-羟基苯基氨基)-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(333.3mg)及碳酸钾(276.0mg)在DMF(7.0ml)中合并，且在80℃加热过夜。添加EtOAc及水且过滤悬浮液。分离滤液，弃去水层且用盐水(2次)洗涤有机层。干燥后，使有机物通过疏水性玻璃料且蒸发溶剂。用MeOH研磨残余物且合并固体。用Et2O洗涤固体且干燥。
产率：311.0mg。
中间体XVI
4-[4-氟-2-(1-甲磺酰基-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100581
XVI.1甲磺酸1-(甲磺酰基)吡咯烷-3-基酯
Figure BDA00002310982100582
将甲磺酰氯(1.93ml)添加至3-吡咯烷醇(871.0mg)及三乙胺(3.47ml)于二氯甲烷(30.0ml)中的经冰冷却的溶液中。10分钟后，移除冷却剂且在室温搅拌混合物2小时。用10%KHSO4及10%K2CO3水溶液洗涤混合物。将有机层通过疏水性玻璃料且蒸发溶剂。
产率：1.18g。
XVI.24-[4-氟-2-(1-甲磺酰基-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100583
将4-(4-氟-2-羟基苯基氨基)-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(描述于V.1中)(1.0g)、甲磺酸1-(甲磺酰基)吡咯烷-3-基酯及碳酸钾(664.0mg)于DMF(15.0ml)中混合，且在60℃加热过夜。使温度升高至80℃且再加热6小时。冷却反应混合物过夜。将混合物分配于EtOAc与水之间。过滤悬浮液，用EtOAc洗涤固体且在真空下风干。
中间体XVII
4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100591
XVII.1(R)-3-(甲磺酰基氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982100592
使用(R)-(-)-N-Boc-3-吡咯烷醇，类似于实施例XVI.1来制备。
产率：0.89g。
XVII.24-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
使用(R)-3-(甲磺酰基氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，类似于实施例XVI.2来制备。
产率：0.61g。
中间体XVIII
4-[4-氟-2-(吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100602
XVIII.13-(甲磺酰基氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982100603
向3-羟基吡咯烷盐酸盐(5.0g)于无水MeOH(40.0ml)中的溶液中添加三乙胺(8.45ml)且溶液在冰浴中冷却至0℃。经30分钟逐份添加焦碳酸二叔丁酯(8.80g)。将反应物升温至室温且搅拌5小时。移除溶剂且将残余物溶解于二氯甲烷(50.0ml)中且用水洗涤。将有机相通过PTFE分离玻璃料且真空蒸发溶剂。
残余物不经进一步纯化即使用。
将二氯甲烷(20.0ml)添加至残余物中且溶液在冰浴中冷却至0℃。接着添加三乙胺(8.4ml)，然后逐滴添加甲磺酰氯(3.13ml)。将溶液升温至室温且搅拌18小时。将反应物分配于水与二氯甲烷之间，且分离有机层，干燥，过滤且蒸发。
产率：8.26g。
XVIII.24-[2-(1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100611
使用3-(甲磺酰基氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，类似于实施例XVI.2来制备。
产率：1.25g。
XVIII.34-[4-氟-2-(吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100612
向4-[2-(1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(1.2g)于MeOH(4.0ml)中的经搅拌悬浮液中逐滴添加HCl的二
Figure BDA00002310982100613
烷溶液(4N；4.0ml)。搅拌反应混合物8小时。在减压下移除溶剂。通过色谱纯化残余物。
中间体XIX
(S)-4-氟-2-(四氢呋喃-3-基氧基)苯胺
Figure BDA00002310982100621
XIX.1.(S)-3-(5-氟-2-硝基苯氧基)四氢呋喃
Figure BDA00002310982100622
使用(S)-(+)-3-羟基四氢呋喃及2,4-二氟硝基苯，类似于实施例I.1来制备。
产率：1.265g。
XIX.2：(S)-4-氟-2-(四氢呋喃-3-基氧基)苯胺
Figure BDA00002310982100623
使用(S)-3-(5-氟-2-硝基苯氧基)四氢呋喃，类似于II.2来制备。
产率：1.01g。
中间体XX
4-氟-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氧基)苯胺
Figure BDA00002310982100624
XX.1 4-(5-氟-2-硝基苯氧基)四氢-2-H-吡喃
Figure BDA00002310982100631
将5-氟-2-硝基苯酚(13g)及四氢-4H-吡喃-4-醇(9.9g)溶解于二氯甲烷(50ml)中。添加三苯基膦(33g)。用冰水冷却混合物且添加偶氮二甲酸二异丙酯(25.1g)。在室温搅拌反应物过夜。再添加一等份的三苯基膦(10.7g)及偶氮二甲酸二异丙酯(8.3g)，且在室温再搅拌反应混合物2小时。
通过色谱(环己烷:EE 70/30->50/50)纯化反应物。合并所需的级分且蒸发。通过色谱(环己烷:EE 90/10->80/20)纯化粗产物。合并产物级分且蒸发。
使残余物自热环己烷中结晶，得到所需产物。
产率：8.42g。
ESI质谱：m/z=259(M+NH4)+。
保留时间HPLC：2.09(方法F)。
XX.24-氟-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氧基)苯胺
Figure BDA00002310982100632
将4-(5-氟-2-硝基苯氧基)四氢-2-H-吡喃(8.4g)溶解于乙酸乙酯(30ml)中，且添加Pd/C(500mg)。在室温及50PSI下将反应物氢化。真空浓缩混合物，得到预期产物。
产率：7.17g。
ESI质谱：m/z=212(M+NH4)+。
中间体XXI
2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基胺
Figure BDA00002310982100641
XXI.1 3-硝基-2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-吡啶
使用2-氟-3-硝基吡啶及(R)-四氢-吡喃-3-醇，类似于I.1来制备。
产率：4.2g(96%)。
ESI质谱：m/z=225(M+H)+。
XXI.2 2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基胺
Figure BDA00002310982100643
使用3-硝基-2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-吡啶，类似于VI.2来制备。
产率：3.5g(96%)。
ESI质谱：m/z=195(M+H)+。
中间体XXII
2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基胺
Figure BDA00002310982100644
XXII.1 3-硝基-2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶
Figure BDA00002310982100645
使用2-氟-3-硝基吡啶及(R)-四氢-呋喃-3-醇，类似于I.1来制备。
产率：208mg(99%)。
ESI质谱：m/z=211(M+H)+。
XII.2 2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基胺
Figure BDA00002310982100651
使用3-硝基-2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶，类似于I.2来制备。
产率：166mg(93%)。
ESI质谱：m/z=181(M+H)+。
中间体XXIII
2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基胺
Figure BDA00002310982100652
XXIII.1 3-硝基-2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶
Figure BDA00002310982100653
使用2-氯-3-硝基吡啶及(S)-四氢-呋喃-3-醇，类似于I.1来制备。
产率：168mg(80%)。
ESI质谱：m/z=211(M+H)+。
XXIII.2 2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基胺三氟乙酸盐
Figure BDA00002310982100654
使用3-硝基-2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶，类似于I.2来制备。
产率：77mg(32%)。
ESI质谱：m/z=181(M+H)+。
中间体XXIV
2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-吡啶-3-基胺
Figure BDA00002310982100661
XXIV.1 3-硝基-2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-吡啶
Figure BDA00002310982100662
使用2-氟-3-硝基吡啶及四氢-吡喃-4-醇，类似于I.1来制备。
产率：2.33g(54%)。
ESI质谱：m/z=247(M+Na)+。
XXIV.22-(四氢-吡喃-4-基氧基)-吡啶-3-基胺
使用3-硝基-2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶，类似于I.2来制备。
产率：3.8g(87%)。
ESI质谱：m/z=195(M+H)+。
最终化合物
实施例1
4-{4-氟-2-[(S)-1-(2-甲氧基-乙基)-哌啶-3-基氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100664
1.14-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100671
将4-氯-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(1.17g)、(S)-3-(2-氨基-5-氟苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体I，1g)溶解于二
Figure BDA00002310982100672
烷(10ml)中，且添加对甲苯磺酸(61mg)。在70℃加热反应物1.5小时。将溶液倾倒于饱和NaHCO3(50ml)中且用氯仿萃取。将有机相通过相分离器且真空浓缩。通过色谱(硅胶；溶剂：异己烷:EtOAc 3:1->2:1)纯化样品，得到所需产物。
产率：1.56g。
1.24-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
将氢氧化锂(0.732g)添加至4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(1.5g)于THF/水(2:1；75ml)中的溶液中。在室温搅拌反应物过夜。反应物在冰浴中冷却且用HCl(2M)中和(约pH6)。真空移除THF且用水及氯仿稀释残余物。分离有机层且用氯仿萃取水层。将合并的有机相通过相分离器且真空浓缩。将粗产物自热乙腈中重结晶。
产率：1.18g。
1.3 4-[4-氟-2-((S)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
Figure BDA00002310982100681
在室温将HCl的甲醇溶液(4M；0.250ml)添加至4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(50mg)于二
Figure BDA00002310982100682
烷(2.5ml)中的溶液中。将反应物搅拌过周末。通过色谱纯化反应混合物。自热MeOH中研磨产物，得到预期产物。
产率：20mg。
ESI质谱：m/z=403(M+H)+。
保留时间HPLC：1.18(方法X)。
1.4(S)-3-[2-(6-氨基甲酰基-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)-5-氟-苯氧基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯
在0℃将HATU(1.1g)添加至4-[4-氟-2-((S)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(1.2g)及DIPEA(0.490ml)于无水DMF(10ml)中的溶液中。在添加氨的甲醇溶液(7M；3.4ml)时搅拌反应物0.5小时，且将反应物升温至室温过夜。通过自甲苯中共蒸发移除DMF，且自甲醇中研磨残余物，得到所需产物。
产率：1.03g。
1.5 4-[4-氟-2-((S)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100691
将HCl的甲醇溶液(4M；2.5ml)添加至(S)-3-[2-(6-氨基甲酰基-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)-5-氟-苯氧基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.96g)于甲醇(10ml)中的悬浮液中。在室温搅拌反应物3.5小时。真空移除溶剂，且将残余物与氯仿共蒸发。通过色谱纯化粗HCl盐。
产率：0.73g。
ESI质谱：m/z=402(M+H)+。
1.64-{4-氟-2-[(S)-1-(2-甲氧基-乙基)-哌啶-3-基氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100692
在室温将2-溴乙基甲基醚(21μl)添加至4-[4-氟-2-((S)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺(100mg)及K2CO3(63mg)于无水DMF(2ml)中的悬浮液中。将反应物搅拌过周末。再添加一等份的2-溴乙基甲基醚(5μl)及K2CO3(16mg)且搅拌反应物过夜。通过色谱纯化混合物。
产率：26mg。
ESI质谱：m/z=460(M+H)+。
保留时间HPLC：1.15(方法X)。
使用4-[4-氟-2-((S)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺及相应卤化物(参见表1中)，类似于1.6来制备下列化合物。
表1：
Figure BDA00002310982100701
化合物6
(S)-4-(4-氟-2-(1-(2-羟基乙基)哌啶-3-基氧基)苯基氨基)-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100702
将4-[4-氟-2-((S)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺(50mg)及(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醛(235μl)溶解于二氯甲烷:甲醇(1∶1；2ml)中。向此溶液中添加乙酸(11μl)，然后添加氰基硼氢化钠(91mg)。反应物在室温搅拌过周末。通过色谱直接纯化反应混合物。
产率：10mg。
ESI质谱：m/z=446(M+H)+。
保留时间HPLC：1.12(方法X)。
使用4-[4-氟-2-((S)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺及相应醛(参见表2中)，类似于实施例6来制备下列化合物。
表2：
Figure BDA00002310982100711
化合物10
(S)-4-(4-氟-2-(1-(甲磺酰基)哌啶-3-基氧基)苯基氨基)-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100712
10.1 4-[4-氟-2-((S)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
向4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(300mg)于甲醇(3ml)中的溶液中添加HCl的二烷溶液(4M；3ml)且搅拌溶液3小时。移除溶剂且通过色谱纯化残余物。
产率：240mg。
10.2 4-[4-氟-2-((S)-1-甲磺酰基-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
在0℃向4-[4-氟-2-((S)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(110mg)于二氯甲烷(3ml)中的溶液中添加DIPEA(55μl)，然后添加甲磺酰氯(25μl)，且将反应物升温至室温，且搅拌2小时。
产率：130mg。
10.3 4-[4-氟-2-((S)-1-甲磺酰基-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
Figure BDA00002310982100724
将4-[4-氟-2-((S)-1-甲磺酰基-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(130mg)溶解于THF(3ml)中，且添加氢氧化锂*H2O(60mg)于水(3ml)中的溶液。搅拌混合物4小时。添加HCl(2M)将pH值调节至5，且部分移除挥发性溶剂直至发生结晶为止。通过过滤收集固体。用水洗涤滤饼且干燥，得到所需产物。
产率：125mg。
10.4(S)-4-(4-氟-2-(1-(甲磺酰基)哌啶-3-基氧基)苯基氨基)-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100731
在0℃向4-[4-氟-2-((S)-1-甲磺酰基-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(120mg)的溶液中添加DIPEA(49μl)，然后添加HATU(104mg)，且搅拌溶液30分钟。添加氨的甲醇溶液(7M；0.3ml)，且将溶液升温至室温且搅拌1小时。蒸发溶剂，且通过与甲苯共蒸发移除痕量DMF。用MeOH研磨残余物，且通过过滤收集固体，得到所需产物。
产率：45mg。
ESI质谱：m/z=480(M+H)+。
保留时间HPLC：1.28(方法X)。
化合物11
4-[4-氟-2-((S)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲基酰胺
Figure BDA00002310982100732
11.1
4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸2,5-二氧代-吡咯烷-1-基酯
Figure BDA00002310982100741
将EDC(290mg)添加至4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(640mg)及N-羟基丁二酰亚胺(218mg)于无水DMF(10ml)中的溶液中。在室温搅拌反应物过夜。再添加一等份的EDC(58mg)及N-羟基丁二酰亚胺(44mg)，且再搅拌反应物2小时。真空移除DMF且自甲苯中共蒸发残余物。将固体分配于EtOAc与水之间。分离有机层且用盐水洗涤。将合并的有机物通过相分离器且真空浓缩。
产率：710mg。
11.2 4-[4-氟-2-((S)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲基酰胺
Figure BDA00002310982100742
将甲胺的THF溶液(2M；0.420ml)添加至4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸2,5-二氧代-吡咯烷-1-基酯(100mg)于无水DMF(2ml)中的溶液中。在室温搅拌反应物过夜。移除DMF且将甲醇(2ml)添加至残余物中。
添加HCl的二烷溶液(4M；0.5ml)。在室温搅拌反应混合物过夜。真空移除挥发物且通过RP色谱纯化残余物，得到所需产物。
产率：40mg。
ESI质谱：m/z=416(M+H)+。
保留时间HPLC：1.15(方法X)。
使用化合物11.1及相应胺，类似于11.2来制备下列化合物。
在手性未指定的结构的情况下，使用4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸2,5-二氧代-吡咯烷-1-基酯与4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸2,5-二氧代-吡咯烷-1-基酯的混合物。
表3：
Figure BDA00002310982100751
Figure BDA00002310982100761
Figure BDA00002310982100771
Figure BDA00002310982100781
Figure BDA00002310982100791
Figure BDA00002310982100811
Figure BDA00002310982100821
Figure BDA00002310982100831
Figure BDA00002310982100841
化合物64
4-[4-氟-2-((S)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-酰胺
Figure BDA00002310982100851
64.1(S)-3-{5-氟-2-[5-甲基-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基氨基甲酰基)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-苯氧基}-哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982100852
在0℃将HATU添加至4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(100mg)及DIPEA于无水DMF(2ml)中的溶液中。在添加1-甲基-1H-吡唑-3-胺(100μl)时搅拌反应物0.5小时，且将反应物升温至室温且搅拌2小时。通过自甲苯中共蒸发移除DMF且通过色谱纯化残余物，得到预期产物。
产率：120mg。
64.2 4-[4-氟-2-((S)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-酰胺
Figure BDA00002310982100853
使用(S)-3-{5-氟-2-[5-甲基-6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基氨基甲酰基)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-苯氧基}-哌啶-1-甲酸叔丁酯，类似于实施例1.3来制备。
产率：80mg。
ESI质谱：m/z=482(M+H)+。
保留时间HPLC：1.19(方法X)。
化合物65
5-甲基-4-[2-((S)-哌啶-3-基氧基)-4-三氟甲基-苯基氨基]-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100861
65.1 4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-三氟甲基-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100862
将4-氯-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(326mg)及(S)-3-(2-氨基-5-(三氟甲基)苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(485mg)溶解于二
Figure BDA00002310982100863
烷(4ml)中，添加对甲苯磺酸(26mg)。在80℃加热反应混合物约5小时。用二氯甲烷及10%K2CO3水溶液稀释混合物。分离有机层，通过疏水性玻璃料且在真空中浓缩。通过管柱色谱(硅胶；溶剂：100%异己烷->4:1H:E)纯化残余物。
产率：181mg。
65.2 4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-三氟甲基-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
Figure BDA00002310982100871
将4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-三氟甲基-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(181mg)溶解于THF(1ml)/甲醇(1ml)中，且添加NaOH(2M；0.8ml)。在回流下加热反应物10分钟。蒸发有机溶剂，且用10%KHSO4水溶液处理残余物。添加水且过滤悬浮液。用水洗涤固体且经P2O5真空干燥固体。
产率：200mg。
65.3 4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-三氟甲基-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
将EDC(74mg)添加至4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-三氟甲基-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(177mg)及N-羟基丁二酰亚胺(55mg)于无水DMF(4ml)中的混合物中。在室温搅拌反应混合物过夜。用EtOAc稀释反应物且用水及盐水洗涤。使有机物通过疏水性玻璃料且蒸发溶剂。将残余物溶解于DMF(2ml)中且添加氨的甲醇溶液(2ml)。搅拌反应物1小时。再添加氨的甲醇溶液(2ml)且再搅拌反应物。30分钟后，用EtOAc稀释反应物且用水及盐水洗涤。
产率：77mg。
65.4(S)-5-甲基-4-(2-(哌啶-3-基氧基)-4-(三氟甲基)苯基氨基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100881
将4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-三氟甲基-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺(77mg)溶解于二氯甲烷(1ml)中，且添加HCl的二
Figure BDA00002310982100882
烷溶液(4M；1.5ml)。在室温搅拌反应物1小时。真空移除溶剂且通过色谱纯化残余物，得到预期产物。
产率：30.5mg。
ESI质谱：m/z=452(M+H)+。
保留时间HPLC：1.24(方法X)。
化合物66
4-[4-氯-2-((S)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100883
66.1 4-{4-氯-2-[(S)-1-(2,2,2-三氟-乙酰基)-哌啶-3-基氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100884
使用4-氯-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯及(S)-1-(3-(2-氨基-5-氯苯氧基)哌啶-1-基)-2,2,2-三氟乙酮，类似于实施例65.1来制备。温度为110℃维持2小时，且不必通过色谱纯化。
产率：420mg。
66.2 4-[4-氯-2-((S)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100891
合并4-{4-氯-2-[(S)-1-(2,2,2-三氟-乙酰基)-哌啶-3-基氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(150mg)与氨的甲醇溶液(7M；5ml)，且在100℃在密封管中加热。在这些条件下加热反应物48小时。通过色谱纯化残余物，得到预期产物。
产率：30mg。
ESI质谱：m/z=418(M+H)+。
保留时间HPLC：1.18(方法X)。
化合物67
4-[4-氰基-2-((S)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100892
67.1 4-{4-氰基-2-[(S)-1-(2,2,2-三氟-乙酰基)-哌啶-3-基氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100901
使用4-氯-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯及(S)-4-氨基-3-(1-(2,2,2-三氟乙酰基)哌啶-3-基氧基)苯甲腈，类似于实施例65.1来制备。
产率：72mg。
67.2 4-[4-氰基-2-((S)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100902
使用4-{4-氰基-2-[(S)-1-(2,2,2-三氟-乙酰基)-哌啶-3-基氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯，类似于实施例66.2来制备。
产率：20mg。
ESI质谱：m/z=409(M+H)+。
保留时间HPLC：1.17(方法X)。
化合物68
4-[4-甲基-2-((S)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100911
68.1 4-{4-甲基-2-[(S)-1-(2,2,2-三氟-乙酰基)-哌啶-3-基氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100912
使用4-氯-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯及(S)-1-(3-(2-氨基-5-甲基苯氧基)哌啶-1-基)-2,2,2-三氟乙酮，类似于实施例65.1来制备。
产率：196mg。
68.2 4-[4-甲基-2-((S)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100913
使用4-{4-甲基-2-[(S)-1-(2,2,2-三氟-乙酰基)-哌啶-3-基氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯，类似于实施例66.2来制备。
产率：55mg。
ESI质谱：m/z=398(M+H)+。
保留时间HPLC：1.15。
HPLC方法：方法X。
化合物69
5-甲基-4-[2-((S)-哌啶-3-基氧基)-吡啶-3-基氨基]-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100921
69.1 4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-吡啶-3-基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100922
使用4-氯-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯及(S)-3-(3-氨基吡啶-2-基氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体X)，类似于实施例1.1来制备。
产率：810mg。
69.2 4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-吡啶-3-基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
Figure BDA00002310982100923
使用4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-吡啶-3-基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯，类似于实施例1.2来制备。
产率：915mg。
69.3 4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-吡啶-3-基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100931
使用4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-吡啶-3-基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸，类似于实施例1.4来制备。
69.4 5-甲基-4-[2-((S)-哌啶-3-基氧基)-吡啶-3-基氨基]-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100932
将HCl的二
Figure BDA00002310982100933
烷溶液(4M；4ml)添加至(S)-3-(3-(6-氨基甲酰基-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)吡啶-2-基氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(250mg)于甲醇(8ml)中的溶液中。在室温搅拌反应物1.5小时。通过色谱纯化溶液。
产率：40mg。
ESI质谱：m/z=385(M+H)+。
保留时间HPLC：1.12(方法X)。
化合物70
4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸乙酯
Figure BDA00002310982100934
使用4-氯-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯及(S)-3-(2-氨基-5-氟苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体I)，类似于实施例1.1来制备。
产率：1.14g。
ESI质谱：m/z=331(M+H)+。
保留时间HPLC：3.98(方法g)。
化合物71
4-[4-氟-2-((R)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100941
71.1 4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982100942
使用4-氯-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯及(R)-3-(2-氨基-5-氟苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体II)，类似于实施例65.1来制备。
产率：1.65g。
71.2 4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
Figure BDA00002310982100951
用NaOH(2M；8ml)处理4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(1.65g)于MeOH/THF(1∶1；20ml)中的混合物且在回流下加热10分钟。真空移除有机溶剂。添加HCl(2M；8ml)达pH1且添加水。过滤悬浮液且用水洗涤。将固体悬浮于EtOH中且蒸发。用乙腈研磨残余物，得到所需产物。
产率：1.41g。
71.3 4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
使用4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸，类似于实施例65.3来制备。
产率：417mg。
71.4 4-[4-氟-2-((R)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100961
使用(R)-3-(2-(6-氨基甲酰基-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)-5-氟苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，类似于实施例68.4来制备。
产率：222mg。
ESI质谱：m/z=402(M+H)+。
化合物72
4-[4-氟-2-((R)-1-[1,2,4]
Figure BDA00002310982100962
二唑-3-基甲基-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100963
使用4-[4-氟-2-((R)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺，类似于实施例1.6来制备。
产率：31.4mg。
ESI质谱：m/z=484(M+H)+。
保留时间HPLC：1.14(方法X)。
使用4-[4-氟-2-((R)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺及三氟甲磺酸2,2,2-三氟乙酯，类似于实施例72来制备下列化
表4：
化合物74
4-{2-[(R)-1-(2,2-二氟-乙基)-哌啶-3-基氧基]-4-氟-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
将4-[4-氟-2-((R)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺(80mg)、2,2-二氟溴乙烷(58mg)及三乙胺(56μl)溶解于乙腈(1ml)中。在微波辐射下于120℃加热反应物4小时。再添加2,2-二氟溴乙烷(50mg)且再加热反应物2小时。混合物用二氯甲烷稀释，用水洗涤且通过疏水性玻璃料。蒸发有机相且通过色谱纯化残余物。
产率：57mg。
ESI质谱：m/z=466(M+H)+。
保留时间HPLC：1.15(方法X)。
使用4-[4-氟-2-((R)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺及3-溴乙基甲基醚，类似于实施例74来制备下列化合物。
表5：
Figure BDA00002310982100981
化合物76
4-[4-氟-2-((R)-1-甲基-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982100982
使用(R)-4-(4-氟-2-(哌啶-3-基氧基)苯基氨基)-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺及甲醛，类似于实施例6.1来制备。
产率：86mg。
ESI质谱：m/z=416(M+H)+。
保留时间HPLC：1.12(方法X)。
使用4-[4-氟-2-((R)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺及相应醛或酮，类似于76.1来制备下列化合物。
表5
Figure BDA00002310982100991
Figure BDA00002310982101001
化合物82
4-{2-[(R)-1-(2-氰基-乙基)-哌啶-3-基氧基]-4-氟-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101002
将丙烯腈(20μl)添加至4-[4-氟-2-((R)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺(60mg)及三乙胺(42μl)于甲醇(1ml)中的悬浮液中。1小时后添加DMF(0.5ml)。在室温搅拌反应混合物过夜。用EtOAc稀释反应物且用水及盐水洗涤。将有机相通过疏水性玻璃料且蒸发。用乙醚研磨残余物。
产率：60mg。
ESI质谱：m/z=455(M+H)+。
保留时间HPLC：1.14。
HPLC方法：方法X。
化合物83
(4-[2-((R)-1-乙酰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
83.14-[4-氟-2-((R)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101012
使用4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯，类似于实施例1.5来制备。
产率：280mg。
83.2(4-[2-((R)-1-乙酰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101013
将无水二氯甲烷(2.5ml)中的4-[4-氟-2-((R)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(128mg)及DIPEA(64μl)冷却至0℃。向此溶液中添加乙酰氯(35μl)且将反应物升温至室温过夜。用二氯甲烷稀释溶液且用KHSO4洗涤，然后用10%K2CO3洗涤。将有机层通过相分离器且在真空中浓缩。
产率：160mg。
83.3(4-[2-((R)-1-乙酰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
Figure BDA00002310982101021
使用(4-[2-((R)-1-乙酰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯，类似于实施例1.2来制备。
产率：130mg。
83.4(4-[2-((R)-1-乙酰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
使用(4-[2-((R)-1-乙酰基-哌啶-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸，类似于实施例1.4来制备。
产率：60mg。
ESI质谱：m/z=444(M+H)+。
保留时间HPLC：1.22(方法X)。
化合物84
4-[4-氟-2-((R)-1-甲磺酰基-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101031
84.1 4-[4-氟-2-((R)-1-甲磺酰基-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101032
使用4-[4-氟-2-((R)-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯，类似于实施例10.2来制备。
产率：180mg。
84.2 4-[4-氟-2-((R)-1-甲磺酰基-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
Figure BDA00002310982101033
使用4-[4-氟-2-((R)-1-甲磺酰基-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯，类似于实施例10.3来制备。
产率：170mg。
84.3 4-[4-氟-2-((R)-1-甲磺酰基-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101041
使用4-[4-氟-2-((R)-1-甲磺酰基-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及氨的甲醇溶液，类似于实施例10.4来制备。
产率：100mg。
ESI质谱：m/z=480(M+H)+。
保留时间HPLC：1.28(方法X)。
使用4-[4-氟-2-((R)-1-甲磺酰基-哌啶-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及相应胺，类似于84.3来制备下列化合物。
表5：
Figure BDA00002310982101042
Figure BDA00002310982101051
化合物87
4-{4-氟-2-[(S)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(3-二甲基氨基-丙基)-酰胺
Figure BDA00002310982101052
87.1 4-{4-氟-2-[(S)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101053
使用4-氯-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯及(S)-4-氟-2-(四氢-2H-吡喃-3-基氧基)苯胺(中间体XIII)，类似于实施例1.1来制备。
在回流下搅拌反应物且在2小时后冷却至室温。冷却后，形成沉淀物，将其过滤。
产率：310mg。
87.2 4-{4-氟-2-[(S)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101061
使用4-{4-氟-2-[(S)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯，类似于实施例1.2来制备。
将氢氧化锂替换为NaOH(2M)。
产率：280mg。
87.3 4-{4-氟-2-[(S)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(3-二甲基氨基-丙基)-酰胺
Figure BDA00002310982101062
使用4-{4-氟-2-[(S)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯及N,N-二甲基-1,3-丙二胺，类似于实施例10.4来制备。
产率：20mg。
ESI质谱：m/z=488(M+H)+。
保留时间HPLC：1.25(方法X)。
化合物88
4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(3-二甲基氨基-丙基)-酰胺
Figure BDA00002310982101063
88.1 4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101071
使用4-氯-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯及(R)-4-氟-2-(四氢-2H-吡喃-3-基氧基)苯胺(中间体XIV)，类似于实施例87.1来制备。
产率：910mg。
88.2 4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
Figure BDA00002310982101072
使用4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯，类似于实施例87.2来制备。
产率：450mg。
88.3 4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(3-二甲基氨基-丙基)-酰胺
Figure BDA00002310982101073
使用4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及N,N-二甲基-1,3-丙二胺，类似于实施例10.4来制备。
产率：30mg。
ESI质谱：m/z=488(M+H)+。
保留时间HPLC：1.25(方法X)。
化合物89
4-[4-氟-2-(1-甲磺酰基-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101081
89.1 4-[4-氟-2-(1-甲磺酰基-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
Figure BDA00002310982101082
将NaOH(2M；5.6ml)添加至中间体XVII(1g)于EtOH/THF(1:1；20ml)中的混合物中。在回流下加热混合物45分钟。真空移除溶剂。用10%KHSO4水溶液处理残余物且过滤所得悬浮液。用水及乙醚洗涤滤饼。
产率：30mg。
89.2 4-[4-氟-2-(1-甲磺酰基-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
使用4-[4-氟-2-(1-甲磺酰基-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及氨的甲醇溶液，类似于实施例10.4来制备。
产率：65mg。
ESI质谱：m/z=466(M+H)+。
保留时间HPLC：1.25(方法X)。
使用4-[4-氟-2-(1-甲磺酰基-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及相应胺，类似于89.2来制备下列化合物。
表6：
Figure BDA00002310982101092
Figure BDA00002310982101101
化合物94
4-{4-氟-2-[1-(2-甲氧基-乙酰基)-吡咯烷-3-基氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101102
94.1 4-{4-氟-2-[1-(2-甲氧基-乙酰基)-吡咯烷-3-基氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101103
将甲氧基乙酰氯(27μl)添加至XVIII(0.1g)及DIPEA(52μl)于无水二氯甲烷(2ml)中的溶液中。将反应物升温至室温过夜。用二氯甲烷稀释溶液且用KHSO4及10%K2CO3转移有机层。将有机层通过相分离器且真空浓缩，得到所需产物。
产率：120mg。
94.2 4-{4-氟-2-[1-(2-甲氧基-乙酰基)-吡咯烷-3-基氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101111
使用4-{4-氟-2-[1-(2-甲氧基-乙酰基)-吡咯烷-3-基氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯，类似于实施例1.2来制备。
产率：100mg。
94.3 4-{4-氟-2-[1-(2-甲氧基-乙酰基)-吡咯烷-3-基氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101112
使用4-{4-氟-2-[1-(2-甲氧基-乙酰基)-吡咯烷-3-基氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯及氨的甲醇溶液，类似于实施例1.4来制备。
产率：90mg。
ESI质谱：m/z=460(M+H)+。
保留时间HPLC：1.22(方法X)。
化合物95
4-{2-[1-(2-二甲基氨基-乙酰基)-吡咯烷-3-基氧基]-4-氟-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101113
95.1 4-{2-[1-(2-二甲基氨基-乙酰基)-吡咯烷-3-基氧基]-4-氟-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101121
使用中间体XVIII及二甲基氨基乙酰氯盐酸盐，类似于实施例94.1来制备。
产率：120mg。
95.2 4-{2-[1-(2-二甲基氨基-乙酰基)-吡咯烷-3-基氧基]-4-氟-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
Figure BDA00002310982101122
使用4-{2-[1-(2-二甲基氨基-乙酰基)-吡咯烷-3-基氧基]-4-氟-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯，类似于实施例1.2来制备。
产率：98mg。
95.3 4-{2-[1-(2-二甲基氨基-乙酰基)-吡咯烷-3-基氧基]-4-氟-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101123
使用4-{2-[1-(2-二甲基氨基-乙酰基)-吡咯烷-3-基氧基]-4-氟-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及氨的甲醇溶液，类似于实施例1.4来制备。
产率：36mg。
ESI质谱：m/z=473(M+H)+。
保留时间HPLC：1.16(方法X)。
化合物96
4-[2-((S)-1-乙酰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101131
96.1 4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
Figure BDA00002310982101132
将NaOH(2M；3ml)添加至中间体XVII于THF中的混合物中。在50℃加热混合物1小时。添加10%KHSO4水溶液且搅拌悬浮液1小时。过滤悬浮液且用水及乙醚洗涤滤饼。
产率：543mg。
96.2 4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101141
使用4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及氨的甲醇溶液，类似于实施例1.4来制备。
产率：363mg。
96.3 4-[4-氟-2-((S)-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺盐酸盐
Figure BDA00002310982101142
使用4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺，类似于实施例1.3来制备。
ESI质谱：m/z=388(M+H)+。
保留时间HPLC：1.12(方法X)。
96.4 4-[2-((S)-1-乙酰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101151
将乙酸酐(28μl)添加至4-[4-氟-2-((S)-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺盐酸盐(85mg)及三乙胺(83μl)于二氯甲烷(2ml)中的悬浮液中。在室温搅拌反应物过夜。用二氯甲烷及10%KHSO4水溶液稀释反应物且过滤所得悬浮液。用水及乙醚洗涤滤饼。将残余物溶解于甲醇中且加热至回流。冷却反应物且通过过滤收集固体。
产率：64mg。
ESI质谱：m/z=430(M+H)+。
保留时间HPLC：1.21(方法X)。
使用4-[4-氟-2-((S)-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺盐酸盐及甲磺酰氯，类似于96.4来制备下列化合物。
表7：
Figure BDA00002310982101152
化合物98
4-[2-((R)-1-乙酰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101161
98.1 4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
Figure BDA00002310982101162
使用中间体XV，类似于实施例96.1来制备。
产率：393mg。
98.2 4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101163
使用4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及氨的甲醇溶液，类似于实施例1.4来制备。
产率：324mg。
98.3 4-[4-氟-2-((R)-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺盐酸盐
Figure BDA00002310982101171
使用4-[2-((S)-1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺，类似于实施例10.1来制备。
产率：184mg。
ESI质谱：m/z=388(M+H)+。
保留时间HPLC：1.12(方法X)。
98.4 4-[2-((R)-1-乙酰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101172
使用4-[4-氟-2-((R)-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺盐酸盐及乙酸酐，类似于实施例99.4来制备。
产率：62mg。
ESI质谱：m/z=430(M+H)+。
保留时间HPLC：1.21(方法X)。
化合物99
4-[4-氟-2-((R)-1-甲磺酰基-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101181
99.1 4-[4-氟-2-((R)-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101182
使用4-[2-((R)-1-叔丁氧基羰基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯，类似于实施例10.1来制备。
产率：418mg。
99.2 4-[4-氟-2-((R)-1-甲磺酰基-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101183
使用4-[4-氟-2-((R)-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯及甲磺酰氯，类似于实施例10.2来制备。
产率：128mg。
99.3 4-[4-氟-2-((R)-1-甲磺酰基-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
Figure BDA00002310982101191
使用4-[4-氟-2-((R)-1-甲磺酰基-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯，类似于实施例96.1来制备。
产率：110mg。
99.4 4-[4-氟-2-((R)-1-甲磺酰基-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101192
使用4-[4-氟-2-((R)-1-甲磺酰基-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及氨的甲醇溶液，类似于实施例1.4来制备。
产率：66mg。
ESI质谱：m/z=466(M+H)+。
保留时间HPLC：1.24(方法X)。
化合物100
(R)-N-氰基-4-(4-氟-2-(四氢呋喃-3-基氧基)苯基氨基)-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101201
100.1(R)-4-(4-氟-2-(四氢呋喃-3-基氧基)苯基氨基)-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101202
将4-氯-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(100mg)及(R)-4-氟-2-(四氢呋喃-3-基氧基)苯胺(中间体VI)(81mg)溶解于二
Figure BDA00002310982101203
烷(2ml)中，且添加对甲苯磺酸(15mg)。在微波辐射下于110℃加热反应物。过滤所得沉淀物且溶解于二氯甲烷/甲醇中。干燥溶液且浓缩，得到所需产物。
产率：150mg。
ESI质谱：m/z=404(M+H)+。
100.2 4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
Figure BDA00002310982101204
将4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸乙酯(150mg)溶解于甲醇(5ml)中，且添加NaOH(1M；1.9ml)。将反应物搅拌过周末。蒸发有机溶剂且用HCl中和残余物。过滤所得沉淀物且干燥。
产率：130mg。
ESI质谱：m/z=404(M+H)+。
100.3
Figure BDA00002310982101211
使用4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及HATU，类似于实施例1.4来制备。
产率：85mg。
ESI质谱：m/z=508(M+H)+。
100.4(R)-N-氰基-4-(4-氟-2-(四氢呋喃-3-基氧基)苯基氨基)-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101212
将氰胺(6.7mg)溶解于THF(2ml)中，且添加LiHMDS(1M；158μl)，搅拌反应物10分钟。之后，添加化合物103.4(80mg)且搅拌反应物2至3周。真空移除溶剂。通过RP色谱(方法B)纯化残余物，得到所需产物。
产率：15mg。
ESI质谱：m/z=414(M+H)+。
保留时间HPLC：1.28(方法E)。
化合物101
N-(4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-羰基)-甲磺酰胺
Figure BDA00002310982101221
将4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(150mg)、4-二甲基氨基吡啶(61mg)及1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(96mg)溶解于二氯甲烷中。向此混合物中添加甲磺酰胺(48mg)且搅拌反应物过夜。用KHSO4稀释反应混合物。分离有机层，干燥且浓缩。通过二氧化硅色谱(二氯甲烷/MeOH/NH310:1:0.1)纯化残余物。
产率：40mg。
ESI质谱：m/z=467(M+H)+。
保留时间HPLC：1.85(方法E)。
化合物102
4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲氧基-酰胺
将4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(100mg)溶解于DMF(3ml)中，且添加三乙胺(79μl)。向此混合物中添加TBTU(90mg)且搅拌反应物10分钟。之后，添加甲基羟胺盐酸盐(27mg)且在40℃搅拌反应物过夜。通过RP色谱(方法A)纯化混合物。
产率：40mg。
ESI质谱：m/z=419(M+H)+。
保留时间HPLC：1.68(方法E)。
化合物103
4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(3-二甲基氨基-丙基)-酰胺
Figure BDA00002310982101231
103.1
Figure BDA00002310982101232
使用4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及N-羟基丁二酰亚胺，类似于实施例11.1来制备。
产物直接用于下一步中。
103.2 4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(3-二甲基氨基-丙基)-酰胺
Figure BDA00002310982101233
将化合物103.1(130mg)及N,N-二甲基-1,3-丙二胺溶解于DMF(2ml)中，且在室温搅拌反应物过夜。移除溶剂且通过RP色谱纯化残余物。
产率：100mg。
ESI质谱：m/z=474(M+H)+。
保留时间HPLC：1.22(方法X)。
使用化合物103.1及相应胺，类似于103.2来制备下列化合物。
表8：
Figure BDA00002310982101241
化合物108
4-{4-氟-2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(3-二甲基氨基-丙基)-酰胺
Figure BDA00002310982101242
108.1 4-{4-氟-2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101251
使用4-氯-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯及(S)-4-氟-2-(四氢呋喃-3-基氧基)苯胺(中间体XIX)，类似于实施例100.1来制备。
产率：780mg。
108.2 4-{4-氟-2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
Figure BDA00002310982101252
使用4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯，类似于实施例96.1来制备。
产率：650mg。
108.3
使用4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及N-羟基丁二酰亚胺，类似于实施例11.1来制备。
产物直接用于下一步中。
108.4 4-{4-氟-2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(3-二甲基氨基-丙基)-酰胺
Figure BDA00002310982101261
使用化合物108.3及N,N-二甲基-1,3-丙二胺，类似于实施例103.2来制备。
产率：120mg。
ESI质谱：m/z=474(M+H)+。
保留时间HPLC：1.22(方法X)。
使用化合物108.3及相应胺，类似于108.4来制备下列化合物。
表8：
Figure BDA00002310982101262
Figure BDA00002310982101271
化合物113
4-[4-氟-2-((3S,5S)-5-羟基甲基-1-甲磺酰基-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101272
113.1 4-[2-((3S,5S)-1-叔丁氧基羰基-5-羟基甲基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101273
使用4-氯-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯及(2S,4S)-4-(2-氨基-5-氟苯氧基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，类似于实施例1.1来制备。
产率：754mg。
113.2 4-[2-((3S,5S)-1-叔丁氧基羰基-5-羟基甲基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
使用4-[2-((3S,5S)-1-叔丁氧基羰基-5-羟基甲基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯，类似于实施例65.2来制备。
将甲醇替换为乙醇。
产率：1.49g。
113.3 4-[2-((3S,5S)-1-叔丁氧基羰基-5-羟基甲基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101282
使用4-[2-((3S,5S)-1-叔丁氧基羰基-5-羟基甲基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及氨的甲醇溶液，类似于实施例1.4来制备。
产率：557mg。
113.4(2S,4S)-2-乙酰氧基甲基-4-[2-(6-氨基甲酰基-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)-5-氟-苯氧基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982101291
使用4-[2-((3S,5S)-1-叔丁氧基羰基-5-羟基甲基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺及乙酸酐，类似于实施例96.4来制备。
在0℃添加乙酸酐且使用催化量的DMAP。
产率：533mg。
113.5乙酸(2S,4S)-4-[2-(6-氨基甲酰基-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)-5-氟-苯氧基]-吡咯烷-2-基甲酯盐酸盐
Figure BDA00002310982101292
使用(2S,4S)-2-乙酰氧基甲基-4-[2-(6-氨基甲酰基-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)-5-氟-苯氧基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，类似于实施例10.1来制备。
产率：453mg。
113.6乙酸(2S,4S)-4-[2-(6-氨基甲酰基-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)-5-氟-苯氧基]-1-甲磺酰基-吡咯烷-2-基甲酯
Figure BDA00002310982101301
使用乙酸(2S,4S)-4-[2-(6-氨基甲酰基-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)-5-氟-苯氧基]-吡咯烷-2-基甲酯盐酸盐及甲磺酰氯，类似于实施例10.2来制备。在0℃添加甲磺酰氯。
产率：367mg。
113.7 4-[4-氟-2-((3S,5S)-5-羟基甲基-1-甲磺酰基-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101302
将碳酸钾(278mg)添加至乙酸(2S,4S)-4-[2-(6-氨基甲酰基-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)-5-氟-苯氧基]-1-甲磺酰基-吡咯烷-2-基甲酯(360mg)于MeOH(5ml)及THF(2ml)中的溶液中。在室温搅拌反应物90小时。添加10%KHSO4水溶液且过滤所得悬浮液。用二氯甲烷及乙醚洗涤滤饼。
产率：157mg。
ESI质谱：m/z=496(M+H)+。
保留时间HPLC：1.18(方法X)。
化合物114
4-[4-氟-2-((6S,7aS)-3-氧代-四氢-吡咯并[1,2-C]
Figure BDA00002310982101311
唑-6-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101312
114.1 4-[4-氟-2-((3S,5S)-5-羟基甲基-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
将三氟乙酸(1ml)添加至4-[2-((3S,5S)-1-叔丁氧基羰基-5-羟基甲基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺(754mg)于二氯甲烷(10ml)中的溶液中。搅拌反应混合物4小时，且再添加一等份三氟乙酸。再搅拌反应混合物1小时。真空移除溶剂。用二氯甲烷稀释混合物且用10%K2CO3水溶液洗涤。浓缩有机层且通过快速柱色谱(硅胶，溶剂：100%二氯甲烷->20:1:0.1二氯甲烷:MeOH:NH4OH)纯化残余物。
产率：149mg。
ESI质谱：m/z=433(M+H)+。
保留时间HPLC：1.22(方法X)。
114.2 4-[4-氟-2-((6S,7aS)-3-氧代-四氢-吡咯并[1,2-c]
Figure BDA00002310982101321
唑-6-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
将CDI(64mg)添加至4-[4-氟-2-((3S,5S)-5-羟基甲基-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(86mg)于二氯甲烷(2ml)中的悬浮液中。在室温搅拌反应物3小时。真空缩减溶剂且用DMF处理混合物。将混合物升温且搅拌18小时。用EtOAc及水稀释混合物。用10%KHSO4水溶液及10%K2CO3洗涤有机相。过滤所得悬浮液且用乙醚洗涤。蒸发滤液。
产率：26mg。
ESI质谱：m/z=459(M+H)+。
保留时间HPLC：1.35(方法X)。
化合物115
4-[4-氟-2-((3S,5S)-5-羟基甲基-吡咯烷-3-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101323
使用4-[2-((3S,5S)-1-叔丁氧基羰基-5-羟基甲基-吡咯烷-3-基氧基)-4-氟-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺，类似于实施例65.4来制备。
产率：32mg。
ESI质谱：m/z=418(M+H)+。
保留时间HPLC：1.1(方法X)。
化合物116
4-[4-氟-2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(4-甲基-吗啉-2-基甲基)-酰胺三氟乙酸盐
Figure BDA00002310982101331
116.1 4-[4-氟-2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101332
向4-氯-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(8.5g)及4-氟-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氧基)苯胺(7.4g)(中间体XX)于二
Figure BDA00002310982101333
烷(100ml)中的混合物中添加HCl的二
Figure BDA00002310982101334
烷溶液(4M；0.9ml)。在100℃搅拌反应物过夜。将反应混合物升温至室温且添加水(50ml)。通过过滤分离沉淀物。
产率：13.45mg。
ESI质谱：m/z=418(M+H)+。
保留时间HPLC：2.47(方法F)。
116.2 4-[4-氟-2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
Figure BDA00002310982101341
将4-[4-氟-2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(13.45g)溶解于THF(100ml)中且添加氢氧化锂(1M；80.5ml)。在室温搅拌反应混合物5小时。用HCl(1M)将混合物酸化至pH2，过滤所得沉淀物且用水洗涤。
产率：12.15g。
ESI质谱：m/z=404(M+H)+。
保留时间HPLC：2.35(方法F)。
116.3 4-[4-氟-2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(4-甲基-吗啉-2-基甲基)-酰胺三氟乙酸盐
Figure BDA00002310982101342
将4-[4-氟-2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(155mg)溶解于DMF(10ml)中且添加二异丙基乙胺(65μl)。向此混合物中添加TBTU(126mg)且在室温搅拌反应物数分钟。之后，添加C-(4-甲基-吗啉-2-基)-甲胺(50mg)且在室温搅拌混合物过夜。添加K2CO3(2M；0.5ml)且真空浓缩混合物。通过RP色谱(H2O+0.1%TFA/MeOH=35%-->55%)纯化粗产物。
产率：2.6mg。
ESI质谱：m/z=516(M+H)+。
保留时间HPLC：1.89(方法F)。
类似于116.3制备下列化合物：
Figure BDA00002310982101351
Figure BDA00002310982101352
Figure BDA00002310982101361
Figure BDA00002310982101371
Figure BDA00002310982101391
Figure BDA00002310982101411
Figure BDA00002310982101421
Figure BDA00002310982101431
Figure BDA00002310982101441
化合物256
4-[4-氟-2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(3-二甲基氨基-2-羟基-丙基)-酰胺盐酸盐
向4-[4-氟-2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(3-氨基-2-羟基-丙基)-酰胺(11mg，0.02mmol)、甲醛溶液(10μl，37%溶液，0.13mmol)及2ml甲醇的混合物中添加氰基硼氢化钠(10mg，95%，0.15mmol)。在室温搅拌混合物两小时。通过色谱纯化。
产率：3mg (30%)。
ESI质谱：m/z=504(M+H)+。
保留时间HPLC：1.70(方法L)。
化合物257
4-[4-氟-2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸((S)-3-羟基-1-甲基-哌啶-4-基)-酰胺盐酸盐
Figure BDA00002310982101481
使用4-[4-氟-2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-苯基氨基]-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸((S)-3-羟基-哌啶-4-基)-酰胺，类似于化合物251来制备。
产率：22mg(53%)。
ESI质谱：m/z=516(M+H)+。
保留时间HPLC：1.70(方法L)。
化合物258
4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(3-吡咯烷-1-基-丙基)-酰胺
Figure BDA00002310982101482
使用4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及3-吡咯烷-1-基-丙胺，类似于实施例10.4来制备。
产率：36mg(47%)。
ESI质谱：m/z=514(M+H)+。
保留时间HPLC：1.23(方法E)。
化合物259
4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(1-甲基-哌啶-4-基)-酰胺
Figure BDA00002310982101491
使用4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及1-甲基-哌啶-4-基胺，类似于实施例10.4来制备。
产率：51mg(69%)。
ESI质谱：m/z=500(M+H)+。
保留时间HPLC：1.21(方法E)。
化合物260
5-甲基-4-{2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(2-羟基-乙基)-酰胺
Figure BDA00002310982101492
260.1 5-甲基-4-{2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101493
使用4-氯-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯及2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基胺，类似于实施例1.1来制备。
产率：1.4g(76%)。
ESI质谱：m/z=401(M+H)+。
260.2 5-甲基-4-{2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
Figure BDA00002310982101501
将1.4g(3.14mmol)的5-甲基-4-{2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯、20ml甲醇、7ml THF及6.29ml氢氧化钠溶液(1M)的混合物在室温搅拌48小时。接着添加6.3ml盐酸溶液(1M)，然后添加水。过滤混合物。用水及二异丙基醚洗涤固体且在烘箱(真空)中干燥。
产率：1.3g(96%)。
ESI质谱：m/z=387(M+H)+。
260.3 5-甲基-4-{2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(2-羟基-乙基)-酰胺
Figure BDA00002310982101502
使用5-甲基-4-{2-[(R)-(四氢-吡喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及乙醇胺，类似于实施例10.4来制备。
产率：45mg(41%)。
ESI质谱：m/z=430(M+H)+。
保留时间HPLC：1.54(方法E)。
类似于260.3制备下列化合物：
Figure BDA00002310982101511
Figure BDA00002310982101512
化合物267
5-甲基-4-{2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101513
267.1 5-甲基-4-{2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101521
将166mg(0.92mmol)的2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基胺、364mg(1.5mmol)的4-氯-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯及39μl盐酸(4M的二烷溶液)及30ml二
Figure BDA00002310982101523
烷的混合物在100℃搅拌1.5天。浓缩反应混合物且不经进一步纯化即用于下一合成步骤。
产率：569mg。
267.2 5-甲基-4-{2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
Figure BDA00002310982101524
使用5-甲基-4-{2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯，类似于实施例1.2来制备。
产率：823mg(97%)。
保留时间HPLC：2.3(方法K)。
267.3 5-甲基-4-{2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101525
使用5-甲基-4-{2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及氨，类似于实施例10.4来制备。
产率：72mg(44%)。
ESI质谱：m/z=372(M+H)+。
保留时间HPLC：2.12(方法K)。
化合物268
5-甲基-4-{2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(3-二甲基氨基-丙基)-酰胺三氟乙酸盐
使用5-甲基-4-{2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及N1,N1-二甲基-丙烷-1,3-二胺，类似于实施例10.4来制备。
产率：211mg(84%)。
ESI质谱：m/z=457(M+H)+。
保留时间HPLC：1.79(方法K)。
化合物269
5-甲基-4-{2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101532
269.1 5-甲基-4-{2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101533
使用2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基胺及4-氯-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯类似地制备。
产率：70mg(69%)。
269.2 5-甲基-4-{2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
Figure BDA00002310982101541
使用5-甲基-4-{2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯，类似于实施例1.2来制备。
产率：301mg。
保留时间HPLC：2.33(方法K)。
269.3 5-甲基-4-{2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺
Figure BDA00002310982101542
使用5-甲基-4-{2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及氨，类似于实施例10.4来制备。
产率：7mg(31%)。
ESI质谱：m/z=372(M+H)+。
保留时间HPLC：2.03(方法K)。
化合物270
5-甲基-4-{2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(3-二甲基氨基-丙基)-酰胺
Figure BDA00002310982101551
使用5-甲基-4-{2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-吡啶-3-基氨基}-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及N1,N1-二甲基-丙烷-1,3-二胺，类似于实施例10.4来制备。
产率：26mg(94%)。
ESI质谱：m/z=456(M)+。
保留时间HPLC：1.57(方法M)。
化合物271
4-{4-氟-2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(1-甲基-哌啶-4-基)-酰胺
Figure BDA00002310982101552
使用4-{4-氟-2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及1-甲基-哌啶-4-基胺，类似于实施例1.4来制备。
产率：222mg(89%)。
ESI质谱：m/z=486(M+H)+。
保留时间HPLC：1.28(方法C)。
化合物272
4-[(4-{4-氟-2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-羰基)-氨基]-氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA00002310982101561
使用4-{4-氟-2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及4-氨基-氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯，类似于实施例1.4来制备。
产率：457mg(100%)。
ESI质谱：m/z=586(M+H)+。
保留时间HPLC：1.95(方法C)。
化合物273
4-{4-氟-2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸氮杂环庚烷-4-基酰胺三氟乙酸盐
Figure BDA00002310982101562
380mg(0.65mmol)的4-[(4-{4-氟-2-[(S)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-羰基)-氨基]-氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯及0.15ml三氟乙酸及10ml二氯甲烷的混合物在室温搅拌过夜。真空浓缩反应混合物。
产率：382mg(98%)。
ESI质谱：m/z=486(M+H)+。
保留时间HPLC：1.29(方法D)。
类似于1.4制备下列化合物：
Figure BDA00002310982101572
化合物277
4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸氮杂环庚烷-4-基酰胺三氟乙酸盐
Figure BDA00002310982101573
使用4-[(4-{4-氟-2-[(R)-(四氢-呋喃-3-基)氧基]-苯基氨基}-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-羰基)-氨基]-氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯，类似于273来制备。
产率：435mg(100%)。
ESI质谱：m/z=486(M+H)+。
保留时间HPLC：1.88(方法D)。
化合物278
5-甲基-4-[2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-吡啶-3-基氨基]-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸((1S,2S)-2-羟基-环戊基)-酰胺
Figure BDA00002310982101581
278.1 5-甲基-4-[2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-吡啶-3-基氨基]-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA00002310982101582
使用4-氯-5-甲基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯及2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-吡啶-3-基胺，类似于1.1来制备。
产率：635mg(77%)。
ESI质谱：m/z=401(M+H)+。
278.2 5-甲基-4-[2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-吡啶-3-基氨基]-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
使用5-甲基-4-[2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-吡啶-3-基氨基]-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯，类似于1.2来制备。将氢氧化锂替换为氢氧化钠(2M)。
产率：571mg(93%)。
ESI质谱：m/z=387(M+H)+。
保留时间HPLC：2.87(方法D)。
278.3 5-甲基-4-[2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-吡啶-3-基氨基]-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸((1S,2S)-2-羟基-环戊基)-酰胺
Figure BDA00002310982101591
使用5-甲基-4-[2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-吡啶-3-基氨基]-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸及反-(1S,2S)-2-氨基环戊醇盐酸盐，类似于1.4来制备。
产率：100mg(82%)。
ESI质谱：m/z=470(M+H)+。
保留时间HPLC：2.62(方法D)。
类似于1.4制备下列化合物：
Figure BDA00002310982101592
Figure BDA00002310982101593
Figure BDA00002310982101601
化合物282
5-甲基-4-[2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-吡啶-3-基氨基]-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(3-甲烷亚磺酰基-丙基)-酰胺
将100mg(0.21mmol)的5-甲基-4-[2-(四氢-吡喃-4-基氧基)-吡啶-3-基氨基]-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(3-甲硫基-丙基)-酰胺、52mg(0.21mmol)的3-氯-过苯甲酸与5ml二氯甲烷的混合物在室温搅拌过夜。接着用水萃取混合物。用硫酸镁干燥有机相。过滤后蒸发滤液。将DMF添加至残余物中。通过过滤分离沉淀物。
产率：37mg(36%)。
ESI质谱：m/z=490(M+H)+。
保留时间HPLC：2.33(方法D)。
Figure IDA00002310982400011
Figure IDA00002310982400021

Claims (25)

1.以下通式的化合物，
其中
X为CH或N，
R1为H、卤素、CN、CH3或CF3，
R2为选自以下的基团：
Figure FDA00002310982000012
其中该
Figure FDA00002310982000013
基团可在氮原子上被以下基团取代：-SO2-(C1-3烷基)、-CO-(C1-3烷基)、-CO-(CH2)n-O-(C1-3烷基)、-CO-(CH2)n-N(C1-3烷基)2、C1-4烷基、-(CH2)n-CF3、-(CH2)n-CHF2、-(CH2)n-OH、-(CH2)n-O-(C1-3烷基)、-(CH2)n-CN、
Figure FDA00002310982000014
且其中其可在碳原子上被-CH2OH基团取代，
其中n为1或2，
且其中该
Figure FDA00002310982000021
基团可在氮原子上被以下基团取代：直链或支链C1-4烷基、-(CH2)n-CF3、-(CH2)n-CHF2、-(CH2)n-OH、-(CH2)n-O-(C1-3烷基)、-(CH2)n-CN、-(CH2)n-CO-N(C1-3烷基)2、-SO2-(C1-3烷基)、-CO-(C1-3烷基)、-CO2(C1-4烷基)、-CO2-(CH2)n-CF3、-CO2-(CH2)n-O-(C1-3烷基)、-CO2-(CH2)n-CO-N(C 1-3烷基)2、
Figure FDA00002310982000022
其中n为1或2，
R3为C1-2烷基，及
R4为-COOH、-CO2-(C1-3烷基)、-CO2-(CH2)n-N(C1-3烷基)2、-CONH2、-CO-NHR5、-CO-NH-(CH2)p-R6、-CO-NH-(CH2)m-R7、-CO-N(CH3)-(CH2)m-R7、CO-N(CH3)-(CH2)-环己基、
R5为-CN、-OH、直链或支链C1-6烷基、-O(C1-3烷基)、C3-6环烷基、-SO2-(C1-3烷基)；任选被甲基取代的吡唑基；或任选被甲基取代的哌啶基，
其中该C3-6环烷基可被-NH2、-OH或-OCH3取代，R6为-C(CH3)2Cl；-C(CH3)2OH；任选被OH取代的-CHC3-6环烷基；任选被甲基取代的咪唑基；任选被C1-3烷基或氧代基团取代的吡咯烷基；四氢呋喃基；四氢吡喃基；苯基，其任选被一或两个-F、-Cl、-CN、-OH、C1-3烷基或-O(C1-3烷基)取代；萘基；吡啶基；呋喃基；噻吩基；唑基；噻唑基；吡唑基；任选被甲基取代的吗啉基；苯并噻吩基；-CO-苯基；或-SO2-N(C 1-3烷基)2，及R7为F、-OH、-OCF3、-O-(C1-3烷基)、-O-苯基、-O-(CH2)m-OH、-N(C1-3烷基)2、-NH-苯基、哌啶基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基或氮杂环丙烷基，
且其中这些NH基团中的氢原子可被C1-3烷基置换，
其中p为1、2或3，及
m为2或3，
或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体或盐。
2.权利要求1的式(I)化合物，其中
X、R1、R2及R4如权利要求1中所定义，及
R3为甲基，
或其互变异构体或盐。
3.权利要求1或2的式(I)化合物，其中
R2至R4如权利要求1中所定义，及
X为CH，及
R1为F、Cl、CN、CH3或CF3，
或其互变异构体或盐。
4.权利要求1或2的式(I)化合物，其中
R2至R4如权利要求1中所定义，及
X为N，及
R1为H，
或其互变异构体或盐。
5.权利要求1至4中任一项的式(I)化合物，其中
X、R1、R3及R4如权利要求1至4中任一项的所定义，及
R2为
Figure FDA00002310982000032
其中该
Figure FDA00002310982000041
基团可在氮原子上被以下基团取代：直链或支链C1-4烷基、-(CH2)n-CF3、-(CH2)n-CHF2、-(CH2)n-OH、-(CH2)n-O-(C1-3烷基)、-(CH2)n-CN、-(CH2)n-CO-N(C1-3烷基)2或-SO2-(C1-3烷基)，其中n为1或2，
或其互变异构体或盐。
6.权利要求1至4中任一项的式(I)化合物，其中
X、R1、R3及R4如权利要求1至4中任一项所定义，及
R2为
Figure FDA00002310982000042
或其互变异构体或盐。
7.权利要求1至4中任一项的式(I)化合物，其中
X、R1、R3及R4如权利要求1至4中任一项所定义，及
R2为
Figure FDA00002310982000043
其中该
Figure FDA00002310982000044
基团可在氮原子上被以下基团取代：直链或支链C1-4烷基、-(CH2)n-CF3、-(CH2)n-CHF2、-(CH2)n-OH、-(CH2)n-O-(C1-3烷基)、-(CH2)n-CN、-(CH2)n-CO-N(C1-3烷基)2或-SO2-(C 1-3烷基)，
其中n为1或2，
且其中该
Figure FDA00002310982000045
基团可在氮原子上被以下基团取代：-SO2-(C1-3烷基)、C1-4烷基、-(CH2)n-CF3、-(CH2)n-CHF2、-(CH2)n-OH、-(CH2)n-O-(C1-3烷基)、-(CH2)n-CN、
或其互变异构体或盐。
8.权利要求1的式(I)化合物，其中
X、R1、R2及R3如权利要求1至7中任一项所定义，及
R4为-CONH2、-CO-NHR5、-CO-NH-(CH2)p-R6、-CO-NH-(CH2)m-R7，R5为-CN、-OH、直链或支链C1-6烷基、-O(C1-3烷基)、C3-6环烷基、-SO2-(C1-3烷基)；任选被甲基取代的吡唑基；或任选被甲基取代的哌啶基，
其中该C3-6环烷基可被-NH2、-OH或OMe取代；
R6为-C(CH3)2Cl；-C(CH3)2OH；任选被OH取代的-CHC3-6环烷基；任选被甲基取代的咪唑基；任选被C1-3烷基或氧代基团取代的吡咯烷基；四氢呋喃基；四氢吡喃基；苯基，其任选被一或两个-F、-Cl、-CN、-OH、C1-3烷基或-O(C1-3烷基)取代；萘基；吡啶基；呋喃基；噻吩基；
Figure FDA00002310982000051
唑基；噻唑基；吡唑基；任选被甲基取代的吗啉基；苯并噻吩基；
-CO-苯基；或-SO2-N(C1-3烷基)2，及
R7为F、-OH、-OCF3、-O-(C1-3烷基)、-O-苯基、-O-(CH2)m-OH、-N(C1-3烷基)2、-NH-苯基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基或氮杂环丙烷基，
且其中这些NH基团中的氢原子可被C1-3烷基置换，
其中p为1、2或3，及
m为2或3，
或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体或盐。
9.权利要求1的式(I)化合物，其中
X、R1、R2及R3如权利要求1至7中任一项所定义，及
R4为-CONH2、-CO-NHR5、-CO-NH-(CH2)p-R6、-CO-NH-(CH2)m-R7，R5为-CN、直链或支链C1-6烷基、-O(C1-3烷基)、C3-6环烷基、任选被甲基取代的哌啶基，
其中该C3-6环烷基可被-NH2、-OH或OMe取代；
R6为任选被甲基取代的咪唑基；任选被C1-3烷基或氧代基团取代的吡咯烷基；四氢呋喃基；四氢吡喃基；吡啶基；
Figure FDA00002310982000052
唑基；噻唑基；吡唑基；任选被甲基取代的吗啉基，及
R7为F、-OH、-OCF3、-O-(C1-3烷基)、-O-苯基、-O-(CH2)m-OH、-N(C1-3烷基)2、哌啶基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基或氮杂环丙烷基，
且其中这些NH基团中的氢原子可被C1-3烷基置换，
其中p为1、2或3，及
m为2或3，
或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体或盐。
10.权利要求1的式(I)化合物，其选自：
Figure FDA00002310982000061
11.权利要求1至10中任一项的化合物的药学上可接受的盐。
12.药物组合物，其包含权利要求1至10中任一项的化合物或权利要求11的盐，以及任选的药学上可接受的载体。
13.权利要求12的药物组合物，其还包含其它治疗剂。
14.权利要求13的药物组合物，其中该其它治疗剂选自抗糖尿病药、降脂药、心血管药物、抗高血压药、利尿剂、血小板聚集抑制剂、抗肿瘤药或减肥药。
15.权利要求1至10中任一项的化合物或权利要求11的盐，其用于抑制Mnk1或Mnk2(Mnk2a、Mnk2b)或其变体的激酶活性。
16.权利要求1至10中任一项的化合物或权利要求11的盐，其用于预防或治疗代谢疾病、造血系统病症、神经变性疾病、肾损伤、炎性病症及癌症，及其后续并发症和疾病。
17.权利要求1至10中任一项的化合物或权利要求11的盐，其用于预防或治疗碳水化合物和/或脂质代谢的代谢疾病及其后续并发症和病症。
18.权利要求1至10中任一项的化合物或权利要求11的盐，其用于预防或治疗糖尿病。
19.权利要求1至10中任一项的化合物或权利要求11的盐，其中所述药物组合物与其它治疗剂组合用于并行或依次给予患者。
20.权利要求1至10中任一项的化合物或权利要求11的盐，其用于治疗或预防细胞因子相关病症。
21.权利要求20的化合物，其中所述药物组合物与其它治疗剂组合用于并行或依次给予患者。
22.权利要求21的化合物，其中该其它治疗剂选自组胺拮抗剂、缓激肽拮抗剂、血清素拮抗剂、白三烯、抗哮喘药、NSAID、退热剂、皮质类固醇、抗生素、止痛药、尿酸排泄剂、化疗药物、抗痛风药、支气管扩张药、环氧合酶-2抑制剂、类固醇、5-脂氧合酶抑制剂、免疫抑制剂、白三烯拮抗剂、细胞生长抑制剂、抗肿瘤药、mTor抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、抗细胞因子及细胞因子受体的可溶性部分(片段)的抗体或其片段。
23.权利要求1至22中任一项的药物组合物或化合物，其中该药物组合物适合于口服、肠胃外(例如经支气管肺)、局部或表面施用。
24.权利要求1至10中任一项的化合物或权利要求11的盐在制备药物中的用途。
25.权利要求1至10中任一项的化合物或权利要求11的盐在制备用于预防或治疗糖尿病的药物中的用途。
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