JP2011504474A - アルツハイマー氏病を治療するためのＭｎｋインヒビターの使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、タオロパシーの診断、緩和、治療及び／又は予防のための、Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２のキナーゼ活性のモジュレータの使用に関する。特に本発明は、アルツハイマー氏病の診断、緩和、治療及び／又は予防のためのＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼのモジュレータの使用に関する。

Description

本発明は、タウロパシー（tauopathy）の診断、緩和、治療及び／又は予防のための、Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２のキナーゼ活性のモジュレータの使用に関する。特に、本発明は、アルツハイマー氏病の診断、緩和、治療及び／又は予防のための、Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼ活性のモジュレータの使用に関する。

アルツハイマー氏病は、進行性の認知力衰退、記憶力低下、神経精神障害及び挙動変化により特徴付けられる進行性の神経変性疾病である（Cummings、2004）。アルツハイマー氏病の発生率は、年齢と共に増加し、たとえば６０歳の１％及び８５歳の３０％がこの病気を有する(Cummings、2004)。当該人口の増加年齢と組み合わせて得られるアルツハイマーケースの累加的増加は、近年のヘルケアシステムに関する脅迫的な負担となっている。アルツハイマーに対する近年の顕著な薬剤は、最良の状態で、穏やかな症状改善を示すものに過ぎず、市場においては実際の疾病改善治療手段は存在しない(Mount and Downton, 2006; Roberson and Mucke, 2006)。

組織レベルにおけるアルツハイマー氏病の病理の際だった特徴（及び１００年前アルツハイマーにより最初に報告されたもの）は、細胞外プラーク及び細胞間神経原線維変化（ＮＦＴｓ）並びに増加した細胞死によるニューロンの損失である（Goedert and Spillantini, 2006）。プラークは、主にβ−アミロイドペプチド（Ａβ４２）からなる凝集物を示し、この場合、これは、ＡＰＰ膜貫通型タンパク質のプロセッシングにより生じるタンパク質フラグメントである。ＮＦＴｓは、過リン酸化タウ（Ｔａｕ）、微小管結合タンパク質の凝集体である（Goedert and Spillantini, 2006）。双方の場合において、細胞は大きい凝集体によってはではなく、むしろより小さいオリゴマータンパク質複合体により損傷されうる（SantaCruz et al., 2005; Gomez-Isla et al., 1997; Lesne et al., 2006; Jacobsen st al., 2006）。

多年に亘ってβ−アミロイド含有細胞外プラークに注目が集まった後に、タウ翻訳後変性、発現及び凝集における病理学的変化が、アルツハイマー氏病を含む多くの神経変性疾病において重要な役割を示すことが現在、高く評価されている（Goedert and Spillantini, 2006; Kins and Beyreuther 2006）。特定のアミノ酸におけるタウのリン酸化は、微小管からの解離を招き、軸索内微小管網を不安定にし、これによって必須の輸送プロセスの崩壊をニューロン遠位部分において生じさせる（Kins and Beyreuther 2006;Biernat et al., 1993）。

神経変性中のタウの役割の研究において最も有益であるのは、いわゆるタウロパシーであり、この場合、これは、タウの変化が神経変性を招く疾病である。このようなタウ介在型神経変性疾病に関する一つの重要な例は、第１７染色体に関連する前頭側頭型痴呆及びパーキンソン症候群である。タウにおけるミスセンス変異を生じさせる３０以上の疾病は、FTDP-17中に記載されており、その大部分は、微小管結合のための重要な領域であるタウの反復領域に集中発生する(Goedert and Spillantini, 2006)。タウにおける最も多くのミスセンス変異は、微小管からのタウの解離を招き、その一方で、いくつかのみが凝集を生じさせ（Hasegawa et al., 1998, Goedert and Spillantini, 2006）、これは、損なわれたタウ−微小管相互作用が神経変性における原因的役割を有しうることを示す(Kins and Beyreuther)。

ヒトのタウのＳｅｒ２６２は、たとえば反復配列中心（central repeat）に局在するリン酸化部位の例であり、ここでリン酸化は、微小管からのタウの解離を招き、かつ、in vitroでの微小管―タウ−同時インキュベーションアッセイにおける微小管動態を変化させる（Biernat et al., 1993; Drewes et al., 1995 Mandelkow et al., 1995）。Ｓｅｒ２６２のリン酸化は、ヒトアルツハイマー患者からの脳組織中で顕著に増加し、かつ疾病進行における早期の状態であってもよい（Hasegawa et al., 1992; Augustinack et al., 2002）。さらに、タウの病理が観察されるすべての神経変性疾病中で、タウが異常にリン酸化される（Lee et al., 2001）。

さらに、ｅｌＦ４Ｅのリン酸化は、アルツハイマー氏病の患者の脳組織中で顕著に増加し、かつｅｌＦ４Ｆ脳リン酸化レベルは、疾病の重症度と正の相関を示す（Li et al., 2004）。Ｍｎｋ１及びＭｎｋ２は、in vivoでの唯一の適切なｅｌＦ４Ｆキナーゼであり（Ueda et al., 2004）、Ｍｎｋ１、Ｍｎｋ２又はその双方の活性が、アルツハイマー氏病患者の脳において増加することを示唆している。さらにＭｎｋ活性は、炎症性要因により増加し、この要因は、アルツハイマー氏病に関与するものである（Eikelenboom et al., 10 2006; Buxade et al., 2005）。しかしながら、Ｍｎｋ活性における上昇が、単に、アルツハイマー氏病における神経的混乱の取るに足らない副産物であるのか、あるいは、疾病の開始時及び／又は進行時において役割を有するのかについては、研究されていない。

したがって、本発明の基礎となる技術的課題は、タウロパシーが存在する神経変性疾病の診断、緩和、治療及び／又は予防のための手段及び方法を提供することである。特に、本発明の技術的課題は、特にアルツハイマー氏病を含む、タウタンパク質の過リン酸化によって生じる病理学的状態の診断、緩和、治療及び／又は予防のための手段及び方法を提供することである。

前記技術的課題の解決は、請求項に記載された態様を提供することにより達成される。

本発明のアプローチは、タウタンパク質の増加したリン酸化と関連し、かつ特に、タウの微小管結合領域の範囲内におけるアミノ酸残基の増加したリン酸化に関連しうるタンパク質キナーゼの同定及び特徴付けである。微小管結合領域の範囲内のＳｅｒ２６２及び／又はＳｅｒ３５６のリン酸化は、特に重要である。実際に、タウロパシーの病理学的プロセスにおけるタウをリン酸化するタンパク質キナーゼの同定は、タウロパシーが存在する神経変性疾病の治療のための潜在的治療標的を提供しうるものである。特に、このようなタンパク質キナーゼの同定は、アルツハイマー氏病の治療のための潜在的治療標的を提供しうる。

タンパク質キナーゼは、多くの細胞性機能の調整において必要とされる重要な酵素である。キイロショウジョウバエ（Drosophila melanogaster）のＬＫＧ−セリン／トレオニン−キナーゼ遺伝子は、微小管と関連しうる短命キナーゼとして報告されている (J. Cell Sci1997, 110(2): 209-219)。ショウジョウバエに着目した化合物の開発における遺伝子分析は、ＲＡＳシグナル経路の調節における役割を示唆している（Genetics 2000 153(3):1219-1230）。ショウジョウバエＬＫ６−キナーゼの最も近いヒトホモログは、ＭＡＰキナーゼ干渉キナーゼ２（MAP kinase interacting kinase 2）（Ｍｎｋ２、例えばＭｎｋ２ａ及びＭｎｋ２ｂ）及びＭＡＰキナーゼ干渉キナーゼ１（MAP kinase interacting kinase 1）（Ｍｎｋ１）及びその変異体である。これらのキナーゼは、細胞質中に主に局在する。Ｍｎｋｓは、ｐ４２−ＭＡＰキナーゼＥｒｋ１及びＥｒｋ２及びｐ３８−ＭＡＰキナーゼによりリン酸化されている。このリン酸化は成長因子、ホルボールエステル及び癌遺伝子、例えばＲａｓ及びＭｏｓに対する応答中で、かつストレスシグナル分子及びサイトカインにより引き起こされる。Ｍｎｋタンパク質のリン酸化は、真核生物開始因子４Ｅ（ｅｌＦ４Ｅ）に対するそのキナーゼ活性を刺激する（EMBO J. 16: 19091920, 1997; Mol Cell Biol 19, 1871-1880, 1990; Mol Cell Biol 21, 743-754, 2001）。マウスにおけるＭｎｋ１及びＭｎｋ２遺伝子の双方の同時破壊は、基礎的かつ刺激されたｅｌＦ４Ｆリン酸化を減少させる（Mol Cell Biol 24, 6539-6549, 2004）。ｅｌＦ４Ｆのリン酸化は、タンパク質翻訳の調整を生じる（Mol Cell Biol 22: 5500-5511 , 2001）。

共有に係る我々の特許出願WO 03/037362 は、ヒトＭｎｋ遺伝子、特にヒトＭｎｋ１及びＭｎｋ２遺伝子と、体重又は熱産生の調整に関与する疾病との関連性を開示している。ヒトＭｎｋ遺伝子、特にＭｎｋ２及びＭｎｋ１が、疾病、例えば肥満症を含む代謝疾患、摂食障害、悪液質、糖尿病、高血圧、冠状動脈疾患、高コレステロール血症、異脂肪症（dyslipidemia）、変形性関節症、胆石、生殖器の癌及び睡眠時無呼吸症、及びＲＯＳ不全に関連する疾病、例えば糖尿病及び癌に関連することが推定される。WO 03/03762は、さらに、ＭＡＰキナーゼ干渉キナーゼ（Ｍｎｋ）遺伝子ファミリー、特にＭｎｋ１及びＭｎｋ２の核酸配列及びこれらをコードするアミノ酸配列の使用及びこれら配列又はＭｎｋ核酸又はポリペプチドのエフェクター、特にＭｎｋインヒビター及びアクチベーターの、体重又は熱産生の調節に関与する疾病の診断、予防又は治療における使用を開示している。

これまで、Ｍｎｋキナーゼ及び特にＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２は、タウタンパク質の過リン酸化に直接的に影響し、かつこれによってタウ病理と関連しうることが記載されてきた。本願において、発明者は、組換えタウヒトタンパク質が、in vitroの組換えヒトＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２に対する基質であることを示した。特に、本発明者は、Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２が、ヒトタウ中で、Ｓｅｒ２６２及びＳｅｒ３５６をリン酸化することができ、この場合、Ｍｎｋ１及びＭｎｋ２の双方が、微小管との結合及びタウ凝集に関与する中心反復領域中に局在化されていることを見出した。したがって、驚くべきことに、Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼの増加した活性が、Ｓｅｒ２６２及び／又はＳｅｒ３５６の増加したリン酸化を導くことができ、この場合、これは、神経微小管網の破壊及び結果として生じる神経変性発生を招きうることを見出した。

これらの発見に基づいて、本発明者は、タウ異常が存在する神経変性疾患の診断、緩和、治療及び／又は予防において有用でありうるＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼのモジュレータを同定することができた。

したがって、本発明の課題は、タウロパシーの診断、緩和、治療及び／又は予防のための薬剤を製造するためのＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼのモジュレータの使用である。好ましい実施態様において、本発明のＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼのモジュレータは、アルツハイマー氏病の診断、緩和、治療及び／又は予防のためのものである。

Ｍｎｋホモログタンパク質及びこれをコードする核酸分子、特に、ヒトＭｎｋ−ホモログポリペプチド及びこのようなペプチドをコードする核酸は、共有に係る我々の出願WO 03/037362中に開示されている（参考のために本発明に含まれる）。特に、この出願は、ポリペプチド及びヒトＭｎｋ２タンパク質及び変異体Ｍｎｋ２ａ及びＭｎｋ２ｂ並びにヒトＭｎｋ１タンパク質及び変異体Ｍｎｋ１ａ及びＭｎｋ１ｂをコードする核酸配列を開示する。

本発明によるＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼ又はこれらの変異体のモジュレータは、キナーゼ活性を変化、減少又は抑制する任意の化合物であってもよい。本発明の特に好ましい実施態様において、ＮｍＫ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼのモジュレータは、キナーゼの活性を減少又は抑制する化合物である。

Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼの好ましいモジュレータは、Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼに対する抗体又は抗体フラグメント、アンチセンス分子、リボザイム又はＲＮＡｉ分子及び／又は低分子量の有機分子から成る群から選択することができる。

したがって、本発明のＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼのモジュレータは、結合分子化合物であってもよく、この場合、この化合物は直接的にキナーゼ分子と相互に作用し、たとえばＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼに対する抗体又は抗体フラグメントである。本発明の抗体は、モノクローナル又はポリクローナル抗体、好ましくはモノクローナル抗体であってもよい。本発明の抗体は、全体抗体（whole antibody）又は抗原結合フラグメント、例えばＦａｂ又はＦ（ａｂ’）２フラグメントであってもよく、この場合、これは、Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２に対する特異的結合部位を含む。抗体は、組換え抗体、すなわち、一本鎖抗体又はこれらのフラグメント、すなわち、ｓｃＦｖフラグメントであってもよい。

一方、Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼのモジュレータは、核酸レベルにおいて、たとえばアンチセンス核酸、ＳｉＲＮＡ分子及び／又はリボザイム上で機能するものであってもよい。

最終的に、本発明の好ましい実施態様によれば、Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼに活性のモジュレータは、Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２のキナーゼ活性を抑制及び／又は減少させる化合物から選択される。極めて好ましい実施態様において、本発明のモジュレータは、Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２のキナーゼ活性のインヒビターである。

好ましいモジュレータ、特にＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２又はこれらの変異体、例えばＭｎｋ１ａ、Ｍｎｋ１ｂ、Ｍｎｋ２ａ又はＭｎｋ２ｂのキナーゼ活性のインヒビターは、共有に係る我々の国際特許出願WO 2006/066937（22 December 2005出願）及びPCT/EP2006/005980（21 June 2006）に記載されており、これらの双方は参考のために本発明に含まれる。

Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２又はこれらの変異体のキナーゼ活性を調整する（好ましくは抑制する）特に好ましい化合物は、一般式（Ｉ）

［式中、Ｒ^１は６〜１０個の炭素原子を有する置換されたアリールであるか、あるいは、５〜１０個の環原子を有する場合により置換されたヘテロアリールであり、その際、置換基は、１又はそれ以上のＲ^４であり、その際、Ｒ^４は独立してハロゲン、ＣＮ、ＣＯＯＲ^５、ＯＲ^５、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^５Ｒ^５ａ）、Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^５Ｒ^５ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^５Ｒ^５ａ）、Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^５、Ｎ（Ｒ^５）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^５Ｒ^５ａ）、ＳＲ^５、Ｎ（Ｒ^５Ｒ^５ａ）、ＯＣ（Ｏ）Ｒ^５、Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（Ｏ）Ｒ^５ａ、Ｎ（Ｒ^５）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^５ａ、Ｎ（Ｒ^５）Ｓ（Ｏ）Ｒ^５ａ、Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^５ａＲ^５ｂ）、Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^５ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^５Ｒ^５ａ）、オキソ（＝Ｏ）であり、その際、当該環は少なくとも部分的に置換されており、Ｃ（Ｏ）Ｒ^５、Ｔ^１であるか、あるいは、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり、その際、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルは場合により１又はそれ以上のＲ^６により置換されており、
Ｒ^５、Ｒ^５ａ及びＲ^５ｂは独立して、Ｈ、Ｔ^１及びＣ_１〜Ｃ_６アルキルから成る群から選択されており、その際、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルは場合によっては１又はそれ以上のＲ^７により置換されており、
Ｒ^６、Ｒ^７は独立して、ハロゲン、ＣＮ、ＣＯＯＲ^８、ＯＲ^８、Ｃ（Ｏ）Ｒ^８、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^８Ｒ^８ａ）、Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^８Ｒ^８ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^８Ｒ^８ａ）、Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^８、Ｎ（Ｒ^８）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^８ａＲ^８ｂ）、ＳＲ^８、Ｎ（Ｒ^８Ｒ^８ａ）、ＯＣ（Ｏ）Ｒ^８、Ｎ（Ｒ^８）Ｃ（Ｏ）Ｒ^８ａ、Ｎ（Ｒ^８）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^８ａ、Ｎ（Ｒ^８）Ｓ（Ｏ）Ｒ^８ａ、Ｎ（Ｒ^８）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^８ａＲ^８ｂ）、Ｎ（Ｒ^８）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^８ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^８Ｒ^８ａ）及びＴ^１から成る群から選択されており、
Ｒ^８、Ｒ^８ａ、Ｒ^８ｂは独立してＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル及びＴ^１から成る群から選択されており、
その際、Ｔ^１はＣ_３〜Ｃ_１０−シクロアリキル、Ｃ_４〜Ｃ_１０−ビシクロアルキル、Ｃ_４〜Ｃ_１０−ヘテロシクリル、Ｃ_４〜Ｃ_１０−ヘテロビシクリル、６〜１０個の炭素原子を有するアリール、５〜１０個の環原子を有するヘテロアリールであり、その際、Ｔ^１は、場合により１又はそれ以上のＲ^９により置換されており、その際、Ｒ^９は独立してハロゲン、ＣＮ、ＣＯＯＲ^１０、ＯＲ^１０、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１０Ｒ^１０ａ）、Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^１０Ｒ^１０ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１０Ｒ^１０ａ）、Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^１０、Ｎ（Ｒ^１０）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^１０ａＲ^１０ｂ）、ＳＲ^１０、Ｎ（Ｒ^１０Ｒ^１０ａ）、ＯＣ（Ｏ）Ｒ^１０、Ｎ（Ｒ^１０）Ｃ（Ｏ）Ｒ^１０ａ、Ｎ（Ｒ^１０）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^１０ａ、Ｎ（Ｒ^１０）Ｓ（Ｏ）Ｒ^１０ａ、Ｎ（Ｒ^１０）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１０ａＲ^１０ｂ）、Ｎ（Ｒ^１０）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１０ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１０Ｒ^１０ａ）、オキソ（＝Ｏ）、その際、環は少なくとも部分的に置換されており、Ｃ（Ｏ）Ｒ^１０、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、フェニル、Ｃ_３〜Ｃ_７−シクロアルキル又はヘテロシクリルであり、その際、Ｃ１〜Ｃ_６−アルキル、フェニル、Ｃ_３〜Ｃ_７−シクロアルキル及びヘテロシクリルは、場合によっては１又はそれ以上のハロゲンにより置換されており、この場合、これは同一又は異なっており；
Ｒ^１０、Ｒ^１０ａ及びＲ^１０ｂは独立してＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、フェニル、Ｃ_３〜Ｃ_７−シクロアルキル、ヘテロアリール及びヘテロシクリルから成る群から選択されており、その際、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、フェニル、Ｃ_３〜Ｃ_７−シクロアルキル及びヘテロシクリルは、場合によっては１又はそれ以上のハロゲンにより置換されており、この場合、これは同一又は異なっており、
Ｒ^２は水素、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、アセチル基又は尿素であり、
Ｒ^３は水素、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル又はアミノ基であり、かつ、
Ｘは結合である］のピラゾロピリミジン化合物又はその製薬学的に認容性の塩である。

Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼの活性を調整、好ましくは抑制するための特に好ましい化合物はピラゾロピリミジン化合物EDJ100869、 EDJ101424、 EDJ101441、 EDJ101457、 EDJ101458、 EDJ101472 及びEDJ101496であり、これらは、共有に係る我々の出願WO 2006/066937及び図４に示されている。このピラゾロピリミジン化合物のこのクラスの最も好ましい化合物は、化合物EDJ100869である。

さらに、Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼ又はこれらの変異体の活性を調整、特に抑制するための極めて好ましい化合物は、一般式（ＩＩ）

［式中、ＸはＯ、Ｓ、ＳＯ_２、ＣＨ_２、ＣＨＲ_１ａ、ＣＲ_１ａＲ_１ｂ、ＣＨ（ハロゲン）、Ｃ（ハロゲン）_２、Ｃ＝Ｏ、Ｃ（Ｏ）ＮＲ_１ａ、ＮＨ又はＮＲ_１ａ、その際、Ｒ_１ａ及びＲ_１ｂはＣ_１〜Ｃ_６−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルＣ_３〜Ｃ_１０−シクロアルキル、Ｃ_３〜Ｃ_１０−シクロアルキル、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有するＣ_１〜Ｃ_６−アルキル３〜１０員のヘテロシクロアルキル、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有する３〜１０員のヘテロシクロアルキルであり、その際、Ｒ_１ａ及びＲ_１ｂは場合により１又はそれ以上のＲ_９により置換されており、
Ｒ^１は水素、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルＣ_３〜Ｃ_１０−シクロアルキル、Ｃ_３〜Ｃ_１０−シクロアルキル、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有するＣ_１〜Ｃ_６−アルキル３〜１０員のヘテロシクロアルキル、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有する３〜１０員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６〜Ｃ_１０−アリール、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリール、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有するＣ_５〜Ｃ_１０ヘテロアリール、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有するＣ_１〜Ｃ_６−アルキルＣ_５〜Ｃ_１０−ヘテロアリール、その際、Ｒ_１は場合によっては１又はそれ以上のＲ_９により置換されているか、あるいは、
ＸがＮＲ_１ａ、ＣＨＲ_１ａ、Ｃ（Ｏ）ＮＲ_１ａ又はＣＲ_１ａＲ_１ｂである場合には、Ｒ_１はＲ_１ａを有する炭素環又はヘテロ環を形成してもよく、かつＮ又はＣ原子がこれに結合しており、この場合、これはＮ、Ｓ及びＯから選択された１又はそれ以上の付加的なヘテロ原子を含有していてもよく、この場合、これは１又はそれ以上のＲ^９により置換されていてもよく、
Ｒ^２及びＲ^３は同一か又は異なって、かつ独立して水素、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルＣ_３〜Ｃ_１０−シクロアルキル、Ｃ_３〜Ｃ_１０−シクロアルキル、Ｃ_６〜Ｃ_１０−アリール、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルＣ_６〜Ｃ_１０−アリール、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有するＣ_５〜Ｃ_１０−ヘテロアリール、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有するＣ_１〜Ｃ_６−アルキルＣ_５〜Ｃ_１０−ヘテロアリール、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有するＣ_１〜Ｃ_６−アルキル３〜１０員のヘテロシクロアルキル、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有する３〜１０員のヘテロシクロアルキルであるか、あるいは、結合されたＣ原子と一緒になって、Ｃ_３〜Ｃ_７−シクロアルキル又は３〜１０員のヘテロシクロアルキル基を形成し、その際、Ｒ_２及びＲ^３は場合によっては１又はそれ以上のＲ_９により置換されており、さらにＲ_２はＲ^９であってもよく、かつさらにＲ_３はＲ_１０であってもよく、
Ｒ_４は水素、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、尿素、チオ尿素又はアセチルであり、場合によっては１又はそれ以上のＲ^９により置換されているか、
あるいは、Ｒ_４はＲ_１を有する５又は６員のヘテロ環を形成していてもよく、
Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７及びＲ_８は同一か又は異なって、かつ別個にＨ又はＲ_９から選択され、
Ｒ_９は独立してハロゲン、ＣＮ、ＣＯＯＲ_１１、ＯＲ_１１、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１１Ｒ_１１ａ）、Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ_１１Ｒ_１１ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１１Ｒ_１１ａ）、Ｓ（Ｏ_２）Ｒ_１１、Ｎ（Ｒ_１１）Ｓ（Ｏ_２）Ｎ（Ｒ_１１ａＲ_１１ｂ）、ＳＲ_１１、Ｎ（Ｒ_１１Ｒ_１１ａ）、ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１１、Ｎ（Ｒ_１１）Ｃ（Ｏ）Ｒ_１１ａ、Ｎ（Ｒ_１１）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ_１１ａ、Ｎ（Ｒ_１１）Ｓ（Ｏ）Ｒ_１１ａ、Ｎ（Ｒ_１１）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１１ａＲ_１１ｂ）、Ｎ（Ｒ_１１）Ｃ（Ｏ）ＯＲ_１１ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１１Ｒ_１１ａ）、オキソ（＝Ｏ）であり、その際、環は少なくとも部分的に飽和されており、Ｃ（Ｏ）Ｒ_１１、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、フェニル、Ｃ_３〜Ｃ_７−シクロアルキル又はヘテロシクリル、その際、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、フェニル、Ｃ_３〜Ｃ_７−シクロアルキル及びヘテロシクリルは、場合によっては１又はそれ以上のＲ_１０により置換されており、
Ｒ_１０は独立してハロゲン、ＣＮ、ＯＲ_１１、Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ_１１Ｒ_１１ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１１Ｒ_１１ａ）、Ｓ（Ｏ）_２Ｒ_１１、Ｎ（Ｒ_１１）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ_１１ａＲ_１１ｂ）、ＳＲ_１１、Ｎ（Ｒ_１１Ｒ_１１ａ）、ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１１、Ｎ（Ｒ_１１）Ｃ（Ｏ）Ｒ_１１ａ、Ｎ（Ｒ_１１）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ_１１ａ、Ｎ（Ｒ_１１）Ｓ（Ｏ）Ｒ_１１ａ、Ｎ（Ｒ_１１）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１１ａＲ_１１ｂ）、Ｎ（Ｒ_１１）Ｃ（Ｏ）ＯＲ_１１ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１１Ｒ_１１ａ）、オキソ（＝Ｏ）であり、その際、環は少なくとも部分的に飽和されており、Ｃ（Ｏ）Ｒ_１１、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、フェニル、Ｃ_３〜Ｃ_７−シクロアルキル、又はヘテロシクリルであり、その際、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、フェニル、Ｃ_３〜Ｃ_７−シクロアルキル及びヘテロシクリルは場合により１又はそれ以上のＲ_９により置換されており、
Ｒ_１１、Ｒ_１１ａ、Ｒ_１１ｂは独立して水素、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルＣ_３〜Ｃ_１０−シクロアルキル、Ｃ_３〜Ｃ_１０−シクロアルキル、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を含有するＣ_１〜Ｃ_６−アルキル３〜１０員のヘテロシクロアルキル、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を含有する３〜１０員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６〜Ｃ_１０−アリール、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を含有する５〜１０員のヘテロアリールであり、その際、Ｒ_１１、Ｒ_１１ａ、Ｒ_１１ｂは場合により１個又はそれ以上のＲ_９により置換されている］のチエノピリミジン化合物又はその代謝物、プロドラック又は製薬学的に認容性の塩である。

好ましいチエノピリミジン化合物は図５に示されている。本発明によるＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼの極めて好ましいモジュレータ及び特にインヒビターは、チエノピリミジン化合物 EDJ101401、この場合、これは、共有に係る我々の出願PCT/EP2006/005980に記載されており、これは３−エトキシ−４−（５−メチル−チエノ［２，３−Ｄ］ピリミジン−４−イルアミノ）−ベンズアミドである。

Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼの他の好ましいインヒビターは、共有に係る我々の出願EP 06 007 454 （7 April 2006出願）に記載されたチエノピリミジン化合物及び共有に係る我々の欧州特許出願EP 06 014 297（10 July 2006出願）のピロロピリミジン化合物である（双方はここで参考のために引用する）。

他の好ましい実施態様において、本発明のモジュレータ、特にインヒビター化合物は、一般式（ＩＩＩ）

［式中、ＹはＮＨ又はＳであり、
Ｘは単結合、Ｏ、Ｓ、ＳＯ_２、ＣＨ_２、ＣＨＲ_１ａ、ＣＲ_１ａＲ_１ｂ、ＣＨ（ハロゲン）、Ｃ（ハロゲン）_２、Ｃ＝Ｏ、Ｃ（Ｏ）ＮＲ_１ａ、ＮＨ又はＮＲ_１ａ、その際Ｒ_１ａ及びＲ_１ｂはＣ_１〜Ｃ_６−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルＣ_３〜Ｃ_１０−シクロアルキル、Ｃ_３〜Ｃ_１０−シクロアルキル、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有するＣ_１〜Ｃ_６−アルキル３〜１０員のヘテロシクロアルキル、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有する３〜１０員のヘテロシクロアルキルであり、その際、Ｒ_１ａ及びＲ_１ｂは場合により１又はそれ以上のＲ_９により置換されており、
Ｒ_１は水素、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルＣ_３〜Ｃ_１０−シクロアルキル、Ｃ_３〜Ｃ_１０−シクロアルキル、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有するＣ_１〜Ｃ_６−アルキル３〜１０員のヘテロシクロアルキル、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有する３〜１０員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６〜Ｃ_１０−アリール、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルＣ_６〜Ｃ_１０−アリール、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有するＣ_５〜Ｃ_１０−ヘテロアリール、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有するＣ_１〜Ｃ_６−アルキルＣ_５〜Ｃ_１０−ヘテロアリールであり、その際、Ｒ_１は場合によっては１又はそれ以上のＲ_９により置換されているか、
ＸがＮＲ_１ａ、ＣＨＲ_１ａ、Ｃ（Ｏ）ＮＲ_１ａ又はＣＲ_１ａＲ_１ｂである場合には、Ｒ_１はＲ_１ａを有する５又は６員の飽和、不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環を形成してもよく、かつＮ又はＣ原子が結合しており、この場合、この環は、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された１又はそれ以上の付加的なヘテロ原子を含有していてもよく、この場合、これは１又はそれ以上のＲ_９により置換されていてもよく、
Ｒ_２及びＲ_３は同一又は異なって、かつ独立して水素、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルＣ_３〜Ｃ_１０−シクロアルキル、Ｃ_３〜Ｃ_１０−シクロアルキル、Ｃ_６〜Ｃ_１０−アリール、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルＣ_６〜Ｃ_１０−アリール、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有するＣ_５〜Ｃ_１０−ヘテロアリール、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有するＣ_１〜Ｃ_６−アルキルＣ_５〜Ｃ_１０−ヘテロアリール、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有するＣ_１〜Ｃ_６−アルキル３〜１０員のヘテロシクロアルキル、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有する３〜１０員のヘテロシクロアルキルであるか、あるいは、結合したＣ原子と一緒になってＣ_３〜Ｃ_７−シクロアルキル又は３〜１０員のヘテロシクロアルキル基を形成し、その際、Ｒ_２およびＲ_３は場合によっては１又はそれ以上のＲ_９で置換されており、さらにＲ_２はＲ_９であってもよく、かつさらにＲ_３はＲ_１０であってもよく、
Ｒ_４は水素、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、尿素、チオ尿素又はアセチルであり、場合によっては１又はそれ以上のＲ_９により置換されているか、あるいは、
Ｒ_４はＸを有する５又は６員の飽和、不飽和又は芳香族のヘテロ環を形成してもよく、
Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７及びＲ_８は同じか又は異なって、かつ独立して水素及びＲ_９から選択されるか、あるいは、
Ｒ_６及びＲ_７は５又は６員の飽和、不飽和又は芳香族の炭素環又はヘテロ環を形成してもよく、その際、ヘテロ環はＮ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有し、
Ｒ_９は独立してハロゲン、ＣＮ、ＣＯＯＲ_１１、ＯＲ_１１、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１１Ｒ_１１ａ）、Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ_１１Ｒ_１１ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１１Ｒ_１１ａ）、Ｓ（Ｏ）_２Ｒ_１１、Ｎ（Ｒ_１１）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ_１１ａＲ_１１ｂ）、ＳＲ_１１、Ｎ（Ｒ_１１Ｒ_１１ａ）、ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１１、Ｎ（Ｒ_１１）Ｃ（Ｏ）Ｒ_１１ａ、Ｎ（Ｒ_１１）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ_１１ａ、Ｎ（Ｒ_１１）Ｓ（Ｏ）Ｒ_１１ａ、Ｎ（Ｒ_１１）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１１ａＲ_１１ｂ）、Ｎ（Ｒ_１１）Ｃ（Ｏ）ＯＲ_１１ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１１Ｒ_１１ａ）、オキソ（＝Ｏ）であり、その際、環は、少なくとも部分的に飽和されており、Ｃ（Ｏ）Ｒ_１１、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、フェニル、Ｃ_３〜Ｃ_７−シクロアルキル、又はＮ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有する５又は６員の飽和、不飽和又は芳香族のヘテロシクリルであり、その際、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、フェニル、Ｃ_３〜Ｃ_７−シクロアルキル及びヘテロシクリルは、場合により１又はそれ以上のＲ_１０により置換されており、
Ｒ_１０は独立してハロゲン、ＣＮ、ＯＲ_１１、Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ_１１Ｒ_１１ａ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１１Ｒ_１１ａ）、Ｓ（Ｏ）_２Ｒ_１１、Ｎ（Ｒ_１１）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ_１１ａＲ_１１ｂ）、ＳＲ_１１、Ｎ（Ｒ_１１Ｒ_１１ａ）、ＯＣ（Ｏ）Ｒ_１１、Ｎ（Ｒ_１１）Ｃ（Ｏ）Ｒ_１１ａ、Ｎ（Ｒ_１１）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ_１１ａ、Ｎ（Ｒ_１１）Ｓ（Ｏ）Ｒ_１１ａ、Ｎ（Ｒ_１１）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１１ａＲ_１１ｂ）、Ｎ（Ｒ_１１）Ｃ（Ｏ）ＯＲ_１１ａ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ_１１Ｒ_１１ａ）、オキソ（＝Ｏ）であり、その際、環は少なくとも部分的に飽和されており、Ｃ（Ｏ）Ｒ_１１、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、フェニル、Ｃ_３〜Ｃ_７−シクロアルキル又はヘテロシクリルであり、その際、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、フェニル、Ｃ_３〜Ｃ_７−シクロアルキル及びヘテロシクリルは場合によっては１又はそれ以上のＲ_９により置換されており、
Ｒ_１１、Ｒ_１１ａ、Ｒ_１１ｂは独立して水素、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルＣ_３〜Ｃ_１０−シクロアルキル、Ｃ_３〜Ｃ_１０−シクロアルキル、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有するＣ_１〜Ｃ_６−アルキル３〜１０員のヘテロシクロアルキル、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有する３〜１０員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６〜Ｃ_１０−アリール、Ｎ、Ｓ及びＯから選択された少なくとも１個のヘテロ原子を有する５〜１０員のヘテロアリール、その際、Ｒ_１１、Ｒ_１１ａ、Ｒ_１１ｂは場合によっては１又はそれ以上のＲ_９により置換されている］の化合物又はこれらの製薬学的に認容性の塩である。

さらに前記化合物の製薬学的に認容性の塩の使用は、本発明に包含される。式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の本発明の化合物の製薬学的に認容性の塩は、多くの有機又は無機の酸及び塩基と一緒に形成することができ、かつ、特に、前記の共有に係る我々の出願は中で開示されている（この出願は、ここで参考のために引用される）。

タウロパシーは、微小管結合性タウに関与する疾病である。タウは、微小管動態、軸索内輸送及び神経線維成長を調整する上で重要な役割を有し、かつタウのこれらすべての機能は、部位特異的リン酸化により調整される。正常なリン酸化状態の破壊は、タウの不全及び結果としての神経変性疾病を生じる。神経変性状態を生じる異常なタウのリン酸化、いわゆるタウロパシーは、減少した微小管結合及び増加したタウ−タウ相互作用を生じ、これにより過リン酸化したタウたんぱく質が、神経原線維変化（ＮＦＴｓ）を形成する対になったらせん状フィラメント（ＰＨＦｓ）中で凝集する。

本発明によれば、タウロパシーは、タウ含有細胞間神経原線維変化とアミロイド−βプラークとの同時の存在を示す疾病から選択される。たとえば、神経線維損傷は、アルツハイマー氏病、クロイツフェルトヤコブ病、拳闘家痴呆、ダウン症候群、ゲルストマン−ストロイスラー−シャインカー病、封入体性筋炎、プリオンタンパク質大脳アミロイド血管障害中で、アミロイド−βプラークと同時に存在する。

一方、さらに本発明は、特異なアミロイド−β含有プラークを含まない疾病から選択されたタウロパシーを含む。明らかにアミロイド−β異常を含まない疾病の例は、前頭側頭型痴呆（ＦＴＤ）、第１７染色体に関連するパーキンソン症を伴う前頭側頭型痴呆（ＦＴＤＴ−１７）、ピック病、もつれ（tangle）優勢型アルツハイマー氏病、皮質基底核変性、筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン症痴呆症候群、好銀性顆粒痴呆、石灰沈着を伴うび慢性神経原繊維変性、ハラーホルデンスパッツ病、多発性統萎縮症、ニーマンピッグ病Ｃ型、進行性皮質下部神経膠症（progressive subcortial gliosis）、進行性核上性麻痺及び亜急性硬化性全脳炎である。

極めて好ましい実施態様において、本発明のタウロパシーはアルツハイマー氏病に関する。

本発明のＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼのモジュレータは、診断又は治療的適用のために使用されていてもよい。診断的適用に関して、このモジュレータは、標識化された形で存在してもよく、たとえば、同位元素、たとえば放射性同位元素又は核磁気共鳴により検出されてもよい同位元素を含む形であってもよい。

本発明のＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼのモジュレータは、単一治療のための薬剤又は併用治療のために薬剤として使用することができる。したがって、本発明のモジュレータ化合物は、単独又は少なくとも１種の他の活性剤との組み合わせにおいて投与することができる。好ましくは、本発明の化合物は、タウロパシーの緩和、治療及び／又は予防に適した他の１種の薬剤と一緒に投与される。本発明の特に好ましい実施態様において、 本発明のモジュレータ化合物は、アルツハイマー氏病の緩和、治療及び／又は予防のために適した少なくとも１種の他の薬剤と一緒に投与する。特に、本発明のモジュレータ化合物と一緒に使用することができる他の薬剤は、ＮＭＤＡアンタゴニスト、たとえばメマンチン又はアセチルコリンエステラーゼインヒビター、たとえばドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンである。

適切には当業者によって、本発明による化合物及び付加的な治療剤は、単一の投与形で処方されるか、あるいは、別個の投与形で存在していてもよく、かつ一緒に、すなわち同時にかあるいは連続的に投与してもよい。

本発明の薬剤は、意図する投与方法に適した医薬組成物の形で処方されてもよい。本発明の化合物は、当業者に公知の方法で、たとえば注入によって、特に静脈内、筋肉内、経粘膜、皮下又は経会陰的（interperintoneal）注入及び／又は経口、局所、鼻腔内、吸入、エーロゾル及び／又は直腸投与等によって投与されてもよい。投与は局所的又は全身的であってもよい。

この目的のために、本発明によるモジュレータ化合物は、製薬学的組成物として処方されていてもよい。製薬学的組成物は、適した製薬学的認容性の担持物質を含有していてもよく、この場合、この担持物質は賦形剤及び製剤への活性化合物の加工を容易にする助剤を含む。処方及び投与に関する技術及び適した製薬学的認容性の担持物質及び賦形剤は、Remington's Pharmaceutical Science Mack Publishing, Eston, PAの最新の版において見出すことができる。

単一の投与形を処方するために担持物質及び／又は賦形剤と組み合わせてもよい本発明による化合物の量は、治療されるホスト及び投与の特別な様式により多様であってもよい。

本発明における使用に適した製薬学的組成物は、活性成分が目的を達成するための有効量で含有されている組成物を包含する。有効量の決定は、当業者の能力の範囲内でおこなうことが可能である。本発明の目的のために、治療学的有効量は、一般には１〜５００ｍｇ／日、好ましくは約１０〜２００ｍｇ／日及び最も好ましくは、１０〜１００ｍｇ／日から約１ｇ／日の総用量までであり、この場合、これらは、一又は複数の用量で投与されてもよい。

しかしながら、適切には、任意の特別な患者のための本発明の化合物の特定の投与レベルは、様々の要因、たとえば年齢、性別、体重、一般的な健康状態、食事、治療すべき患者の個々の応答、投与時間、治療すべき疾病の重症度、投与された特定の化合物の活性、投与形、投与様式及び同時投与の薬物に依存する。与えれられた状態のための治療的有効用量は、通常の試験により簡単に測定することができ、かつこれは、通常の医師又は薬剤師の能力及び判断の範囲内である。

本発明の他の課題は、タウロパシーの診断、緩和、治療及び／又は予防のための薬剤をスクリーニングするための方法であり、この場合、この方法は、
（ａ）化合物を、少なくとも部分的に単離及び／又は精製されたＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼと接触させ、
（ｂ）タウたんぱく質のリン酸化上で、Ｍｎｋ１及び／又はＫｎＫ２キナーゼの活性を決定し、かつ、
（ｃ）Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼの活性を減少させる化合物を選択する、
工程を含む。

タウたんぱく質は、好ましくはヒトタウたんぱく質又はこれらの変異体である。

本発明の好ましい実施態様において、前記スクリーニング方法の工程（ｂ）及び（ｃ）中のＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼの活性は、残基Ｓｅｒ２６２及び／又はＳｅｒ３５６上のタウたんぱく質のリン酸化を測定することによって決定する。

本発明の他の課題は、タウロパシーを診断、緩和、治療及び／又は予防するための薬剤であり、この場合、この方法は、
（ａ）Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼを発現する能力を有する細胞を提供するか、及び／又はＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼを含有する脳抽出物を提供し、
（ｂ）化合物と細胞及び／又は脳抽出物とを接触させ、
（ｃ）Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼの量及び／又は活性を決定し、かつ、
（ｄ）Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼの量及び／又は活性を減少させる化合物を選択する工程を含む。

このスクリーニングの他の方法の工程（ｃ）及び工程（ｄ）中のＭｎｋ１及びＭｎｋ２キナーゼの活性は、タウたんぱく質のリン酸化の度合いによって測定される。タウたんぱく質は、好ましくはヒトタウたんぱく質である。

本発明の極めて好ましい実施態様において、前記スクリーニング方法の工程（ｃ）及び（ｄ）中のＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼの活性は、残基Ｓｅｒ２６２及び／又はＳｅｒ３５６上のタウたんぱく質のリン酸化を測定することによって決定する。

さらに本発明は、Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼのモジュレータの製薬学的有効量をこれを必要とする対象に投与することを含む、タウロパシーの診断、緩和、治療及び／又は予防のための方法に関する。

in vitroでＭｎｋ１及びＭｎｋ２によるヒトタウ中でＳｅｒ２６２及びＳｅｒ３５６のリン酸化を示すウエスタンブロット分析を示す図 in vitroでＭｎｋ１及びＭｎｋ２によるヒトタウ中でのＳｅｒ２６２（Ａ）及びＳｅｒ３５６（Ｂ）のリン酸化の、特異的ＭｎｋインヒビターEDJ101401での阻害を示すウエスタンブロット分析を示す図 in vitroでＭｎｋ１及びＭｎｋ２によるヒトタウ中でのＳｅｒ２６２（Ａ）及びＳｅｒ３５６（Ｂ）のリン酸化の、特異的ＭｎｋインヒビターEDJ100869での阻害を示すウエスタンブロット分析を示す図 Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２のインヒビターとしての好ましいピラゾロピリミジン化合物を示す表 Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２のインヒビターとしての好ましいチエノピリミジン化合物を示す表

図１は、in vitroでＭｎｋ１及びＭｎｋ２によるヒトタウ中でＳｅｒ２６２及びＳｅｒ３５６のリン酸化を示すウエスタンブロット分析を示す。Ｅｒｋ２は、Ｍｎｋを活性化するために使用され、かつＭｎｋ反応中に含まれる。Ｅｒｋ２単独では、ヒトタウ中Ｓｅｒ２６２及びＳｅｒ３５６をリン酸化しない。ＰＫＡリン酸化は、ポジティブコントロールとして使用される。キナーゼ反応は、０．５μＭのヒトタウ及び５００μＭのＡＴＰの存在下で、１２０分に亘って３７℃でインキュベートする。全量タウ（total Tau）は、ローディングコントロールとして役立つ。

図２において、特異的ＭｎｋインヒビターEDJ101401は、Ｍｎｋ１及びＭｎｋ２によるヒトタウ中のＳｅｒ２６２（Ａ）及びＳｅｒ３５６（Ｂ）のin vitroリン酸化を、用量依存的に阻害する。Ｅｒｋ２（５ｎＭ）は、Ｍｎｋを活性化するために使用し、かつＭｎｋ反応中に含まれる。Ｅｒｋ２は、ヒトタウ中のＳｅｒ２６２及びＳｅｒ３５６をリン酸化しない。ＰＫＡリン酸化は、ポジティブコントロールとして使用される。キナーゼ反応は、０．５μＭのヒトタウ及び５００μＭのＡＴＰの存在下で、１２０分に亘って３７℃でインキュベートする。全量タウは、ローディングコントロールとして役立つ。

図３において、特異的ＭｎｋインヒビターEDJ100869は、Ｍｎｋ２によるヒトタウ中のＳｅｒ２６２（Ａ）及びＳｅｒ３５６（Ｂ）のin vitroリン酸化を、用量依存的に阻害する。ＰＫＡリン酸化は、ポジティブコントロールとして使用される。キナーゼ反応は、０．５μＭのヒトタウ及び５００μＭのＡＴＰの存在下で、１２０分に亘って３７℃でインキュベートする。全量タウは、ローディングコントロールとして役立つ。

図４において、Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２のインヒビターとしての好ましいピラゾロピリミジン化合物を示す。

図５において、Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２のインヒビターとしての好ましいチエノピリミジン化合物を示す。

例１
１．Ｍｎｋキナーゼによるヒトタウのin vitroリン酸化
キナーゼ反応：キナーゼ反応は、３０μｌの全量の反応バッファー（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ／ＫＯＨ ｐＨ７．４、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、２ｍＭ ＤＴＴ、０．１％ Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ１２７、０．０１％ ＢＳＡ）中で実施し、この場合、このバッファーは、５００μＭのＡＴＰ、０．５μＭのヒト組換えタウ(USBiological, T1040-10)、インヒビター及びキナーゼを図のように含むものである。ヒトMnk1-GST 及びMnk2-GSTは、Ｅ．Ｃｏｌｉ中で発現させ、かつAkta Explorer 100 (Amersham)により精製し、ヒト組換えＥｒｋ２ (DeveloGen)により前活性化した。アリコートを−８０℃で使用するまで貯蔵した。組換えヒトＰＫＡ(Calbiochem, 539482)は、ポジティブコントロールとして使用した。反応のすべての成分を、反応バッファー中で前希釈した。反応を１２０分に亘って３０℃でインキュベートし、かつ２０ｍＭのＥＤＴＡの添加により停止させた。試料をイムノブロッティングにより分析した。

イムノブロッティング：Laemmli試料バッファー(Biorad)を、停止させたキナーゼ反応に添加し、SDS-PAGEをおこない、かつニトロセルロースメンブレン(Schleicher & Schull)上でエレクトロブロットをおこなった。トランスファーされたメンブレンを１／１０００（ｖ／ｖ）抗タウ（anti Tau）(phospho S262)又は抗タウ(phospho S356)抗体(Abeam、ab4856及び ab4857)を含有するＮＥＴ−Ｇバッファー(50 mM Tris/HCI pH 7.5、 5 mM EDTA、 150 mM NaCI、 0.05% Triton X-100、 0.25% (w/v) ゼラチン)を用いて、４℃で一晩に亘ってインキュベートした。ＮＥＴ−Ｇバッファーで洗浄した後に、メンブレンを１／５０００（ｖ／ｖ）ＨＲＰ 結合抗ウサギＩｇＧ抗体(Pierce)を含有するＮＥＴ−Ｇバッファーで、２時間に亘って室温で処理した。

ローディングコントロールのために、メンブレンをストリッピングバッファー（200 mM グリシン/HCI(pH2.2)、0.1% SDS、0.1% Tween 20)で、３時間に亘って室温でストリッピングした。その後にメンブレンを１／４０００（ｖ／ｖ）抗タウ抗体(Abeam、ab19326)を含むＮＥＴ−Ｇバッファーで処理した。ＮＥＴ−Ｇで洗浄した後に、メンブレンを１／５０００（ｖ／ｖ）ＨＲＰ−結合抗ヤギＩｇＧ抗体 (DakoCytomation)を含有するＮＥＴ−Ｇバッファーでインキュベートした。シグナルをECL Super Signal West Dura kit (Pierce)を用いて化学ルミネセンスで検出した。

２．結果
図１は、タウのリン酸化が、微小管結合領域上の適切な部位に相当するリン酸化部位Ｓｅｒ２６２及びＳｅｒ３５６でＭｎｋ１及びＭｎｋ２により影響を受けることを示す。これらのリン酸化部位は、タウロパシーの発生及び特にアルツハイマー氏病に関与する。

図２は、チエノピリミジン物質EDJ101401によるＭｎｋ１及びＭｎｋ２依存型タウリン酸化の用量依存的阻害を示す。

図３はピラゾロピリミジン化合物EDJ100869によるＭｎｋ１及びＭｎｋ２依存型タウリン酸化の用量依存的阻害を示す。

図４及び５は、Ｍｎｋインヒビターの他の好ましい例を示す。

Claims (27)

1. タウロパシーの診断、緩和、治療及び／又は予防のための薬剤を製造するためのＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼのモジュレータの使用
2. モジュレータが、Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼに対する抗体又は抗体フラグメント、アンチセンス分子、リボザイム又はＲＮＡｉ分子及び／又は低分子量有機性分子である、請求項１に記載の使用。
3. モジュレータがインヒビターである、請求項１又は２に記載の使用。
4. モジュレータが、チエノピリミジン、ピラゾロピリミジン又はピロロピリミジン化合物又はその製薬学的に認容性の塩である、請求項１から３までのいずれか１項に記載の使用。
5. インヒビターが、ＥＤＪ１０１４０１化合物又はその製薬学的に認容性の塩である、請求項１から４までのいずれか１項に記載の使用。
6. インヒビターが、ＥＤＪ１００８６９化合物又はその製薬学的に認容性の塩である、請求項１から４までのいずれか１項に記載の使用。
7. タウロパシーが、タウ含有細胞間神経原線維変化（ＮＦＴｓ）及びアミロイド−β含有プラークの同時発生を示す疾病から選択される、請求項１から６までのいずれか１項に記載の使用。
8. タウロパシーが、アルツハイマー氏病、クロイツフェルトヤコブ病、拳闘家痴呆、ダウン症候群、ゲルストマン−ストロイスラー−シャインカー病、封入体性筋炎、プリオンタンパク質大脳アミロイド血管障害から成る群から選択される、請求項１から７までのいずれか１項に記載の使用。
9. タウロパシーが、特異なアミロイド−β含有プラークを有しない疾患から選択される、請求項１から６までのいずれか１項に記載の使用。
10. タウロパシーが、前頭側頭型痴呆（ＦＴＤ）、第１７染色体に関連するパーキンソン症を伴う前頭側頭型痴呆（ＦＴＤＴ−１７）、ピック病、もつれ優勢型アルツハイマー氏病、皮質基底核変性、筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン症痴呆症候群、好銀性顆粒痴呆、石灰沈着を伴うび慢性神経原繊維変性、ハラーホルデンスパッツ病、多発性統萎縮症、ニーマンピッグ病Ｃ型、進行性皮質下部神経膠症、進行性核上性麻痺及び亜急性硬化性全脳炎から成る群から選択される、請求項１から６及び９のいずれか１項に記載の使用。
11. タウロパシーがアルツハイマー氏病である、請求項１から１０までのいずれか１項に記載の使用。
12. 薬剤が診断薬である、請求項１から１１までのいずれか１項に記載の使用。
13. 薬剤が治療薬である、請求項１から１１までのいずれか１項に記載の使用。
14. 単一治療のための薬剤を製造するための、請求項１から１３までのいずれか１項に記載の使用。
15. 併用治療のための薬剤を製造するための、請求項１から１３までのいずれか１項に記載の使用。
16. タウロパシーの緩和、治療及び／又は予防のために適した少なくとも１種の薬剤と組合せての請求項１５に記載の使用。
17. アルツハイマー氏病の緩和、治療及び／又は予防のために適した少なくとも１種の薬剤と組み合わせての請求項１５に記載の使用。
18. 他の薬剤がＮＭＤＡアンタゴニスト又はアセチルコリンエステラーゼインヒビターである、請求項１７に記載の使用。
19. ＮＭＤＡアンタゴニストがメマンチンであり、かつアセチルコリンエステラーゼインヒビターがドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択される、請求項１８に記載の使用。
20. タウロパシーの診断、緩和、治療及び／又は予防のための薬剤をスクリーニングする方法において、
    （ｄ）化合物を、少なくとも部分的に単離及び／又は精製されたＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼと接触させ、
    （ｅ）Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼの活性を、タウたんぱく質のリン酸化上で決定し、かつ、
    （ｆ）Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼの活性を減少させる化合物を選択する、
    工程を含む、前記方法。
21. タウたんぱく質がヒトタウたんぱく質である、請求項１７に記載のスクリーニング方法。
22. 工程（ｂ）及び（ｃ）中のＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼの活性を、残基Ｓｅｒ２６２及び／又はＳｅｒ３５６上のタウたんぱく質のリン酸化を測定することによって決定する、請求項１７又は１８に記載のスクリーニング方法。
23. （ｅ）Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼを発現する能力を有する細胞を提供するか、及び／又はＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼ含有脳抽出物を提供し、
    （ｆ）化合物を細胞及び／又は脳抽出物と接触させ、
    （ｇ）Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼの量及び／又は活性を決定し、かつ、
    （ｈ）Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼの量及び／又は活性を減少させる化合物を選択する工程を含む、タウロパシーの診断、緩和、治療及び／又は予防のための薬剤をスクリーニングする方法。
24. 工程（ｃ）及び（ｄ）中でＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼの活性を、タウたんぱく質のリン酸化度合いにより決定する、請求項２０に記載のスクリーニングの方法。
25. タウがヒトタウたんぱく質である、請求項２４に記載のスクリーニング方法。
26. 工程（ｃ）及び（ｄ）中のＭｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼの活性を、残基Ｓｅｒ２６２及び／又はＳｅｒ３５６上のタウたんぱく質のリン酸化を測定することにより決定する、請求項２３又は２５に記載の方法。
27. Ｍｎｋ１及び／又はＭｎｋ２キナーゼのモジュレータの薬剤的有効量をこれを必要とする対象に投与することを含む、タウロパシーの診断、緩和、治療及び／又は予防のための方法。

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