CN102869254A

CN102869254A - 腺嘌呤核苷酸类似物聚合共轭物

Info

Publication number: CN102869254A
Application number: CN2011800191234A
Authority: CN
Inventors: 赵洪; 夏静
Original assignee: Enzon Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Enzon Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2010-04-16
Filing date: 2011-04-15
Publication date: 2013-01-09
Also published as: US20130018010A1; WO2011130599A1

Abstract

本发明涉及腺嘌呤核苷酸类似物聚合共轭物。特别是，腺嘌呤核苷酸多臂聚乙二醇共轭物及其使用。本发明更具体地提出了丰加霉素聚合共轭物及其衍生物。此外，本发明还提出了一种腺嘌呤核苷酸类似物聚合共轭物的制备方法，以及用于治疗癌症，抑制肿瘤细胞的生长或增殖，治疗病毒感染，治疗与VEGF（血管内皮生长因子）异常表达相关的疾病或状态的方法。丰加霉素的大多数聚合共轭物在PBS中是稳定的，但在体内释放丰加霉素抑制癌细胞的生长。

Description

腺嘌呤核苷酸类似物聚合共轭物

相关申请的交叉引用

本申请要求2010年4月16日提交的美国临时专利申请序号为61/325,050和61/325,059的优先权，其内容为本文参考。

技术领域

本发明涉及腺嘌呤核苷酸类似物聚合共轭物。特别是，腺嘌呤核苷酸多臂聚乙二醇共轭物及其使用。

背景技术

很多核苷类似物的结构类似于天然核苷，已经表现出有效的治疗效果。据报道，许多腺嘌呤核苷酸类似物有细胞毒素，会诱导细胞死亡。这些核苷类似物已被证明是有效的抗癌剂。例如，丰加霉素及其类似物是潜在抗癌剂，已经证实它在体外和体内均具有治疗活性。已知丰加霉素还能抑制RNA（核糖核酸）加工、RNA自我裂解和VEGF（血管内皮生长因子）分泌。据报道，以丰加霉素为基础的治疗在临床前研究中表现出不良的胃肠道副作用。由于丰加霉素严重的毒性及其产生的不良副作用（如局部坏死），涉及丰加霉素治疗的临床试验已经停止。

多年来，已经提出了几种给哺乳动物施用生物有效材料的方法。许多药剂作为水溶性盐，可以很容易地包含在药物配方中。所需药剂会出现下列问题，或者是不溶于水溶液，或者在充分发挥治疗活性之前在体内迅速降解或消失。腺嘌呤核苷酸类似物，一般都有水中溶解度问题和在体内滞留时间过短的问题。因此，给本领域技术人员提供具有生物活性的腺嘌呤核苷酸类似物的替代和/或改进的输药技术是非常有利的。

发明内容

为了改进以腺嘌呤核苷酸类似物为基础的治疗技术，本发明提出腺嘌呤核苷酸类似物的输药系统。本发明其中一个方面提出了通式为(I)或（Ia）的化合物，其通式如下：

其中

R实质上为约有1-32个聚合臂的非抗原性聚合物；

Y为-NHCH-或N；

Q₁，Q₂，和Q₃，独立地选自OH，离去基团，

Q₄，独立地选自OH或离去基团；

R₁，独立地选自H，C_1-10烷基，C_3-10支链烷基，C_3-8环烷基，C_2-10链烯基，或C_2-10炔基；

R₂，独立地选自C_1-10烷基，C_3-10支链烷基，C_3-8环烷基，C_2-10链烯基，或C_2-10炔基；

J₁，独立地选自C或N；

Y₁，独立地选自O，S，或CH₂；

D为：

R_b1，独立地选自氢，羟基，C_2-10链烯基，C_2-10炔基，-(CH₂)_m2-OR_c1，或-(CH₂)_m2-R’_c1；

R_b2，独立地选自氢，羟基，C_2-10链烯基，C_2-10炔基，C_2-10链烯氧基，C_3-10烯丙氧基，卤素，叠氮基，氨基，或OR_c2；

R_b3，独立地选自氢，羟基,C_2-10链烯基，C_2-10炔基，C_2-10链烯氧基，C_3-10烯丙氧基，卤素（F，Cl或Br），叠氮基，氨基，或OR_C3；

当J₁为碳，R_b4独立地选自氢，卤素，C_1-10烷基，芳基，芳烷基，C_2-10链烯基，C_2-10链炔基，C_1-10烷氧基，氰基，氰基烷基，-C（=O）NH₂，羧酰胺，芳氧基，氨基，烷基氨基，芳基氨基，芳烷基，烷硫基或芳硫基；而当J₁为氮，R_b4为空；

R_b5，独立地选自氢，胺，卤素，C_1-10烷基，烷基氨基，烷硫基，-NH-NH₂，或叠氮基；

R_b6，独立地选自氢，C_1-10烷基（低烷基），卤素，C_1-10烷氧基，或C_1-10烷硫基；

R_c1，独立地选自氢，C_1-10酰基，一磷酸，二磷酸，三磷酸，C_1-10烷基，C_3-8环烷基，C_2-10烯基，C_2-10炔基，或非抗原性聚合物；

R’_c1，独立地选自氢，羟基，低级烷基酯或碳酸酯，C_1-10烷基，C_1-10烷氧基，氨基酸，卤素或非抗原性聚合物；

R_c2，独立地选自氢，C_1-10酰基，一磷酸，二磷酸，三磷酸，C_1-10烷基，C_3-8环烷基，C_2-10链烯基，C_2-10炔基，或非抗原性聚合物；

R_c3，独立地选自氢，C_1-10酰基，一磷酸，二磷酸，三磷酸，-CH₂CH₂OH，或CH₂CH₂F，C_1-10烷基，C_3-8环烷基，C_2-10链烯基，C_2-10炔基，或非抗原性聚合物；

当Y为N时，假设（m1）和（m'1）独立地为1或2，那么（m1）和（m'1）独立地为0，1或2；

（m2）约为1-4的整数；

（q1）和（q2）独立地为0或1；且

（q3）为0或约为1-31的正整数。

一个优选方面，腺嘌呤核苷酸类似物的胺基通过一个间隔基连接在多臂聚合物各臂末端。可能会出现不完全装载。或者，至少约为50％（优选至少约为75％）聚合臂包含一个腺嘌呤核苷酸类似物。

本发明还提出了本发明所述化合物的制备和使用方法，以及使用该化合物治疗的方法。

本发明提出了腺嘌呤核苷酸类似物（如丰加霉素）的输药系统，该系统可以使腺嘌呤核苷酸类似物基本上保留其固有的药理优势，并同时减少治疗时产生的毒性和不良副作用（如用丰加霉素治疗时产生的不良胃肠道副作用）。

从下列描述和附图中可以清楚看到本发明的其他优势。

就本发明的目的而言，术语“残基”应理解为化合物的一部分，它是指腺嘌呤核苷酸类似物（如丰加霉素），间隔基，支链基团，聚乙二醇，以及与另一化合物发生取代反应后余下的部分。

就本发明的目的而言，术语“聚合物残基“”或“PEG残基”应分别理解为聚合物或PEG与其他物质（如一个间隔基，一个支链基团）发生反应后余下的部分。

就本发明的目的而言，术语“烷基”指的是饱和脂肪烃，包括直链，支链，循环烷基。术语“烷基”还包括烷基硫代烷基，烷氧基烷基，环烷基烷基，杂环烷基，和C_1-6烷基羰基烷基。优选的烷基有1-12个碳。更优选的约有1-7个碳的低烷基，还更优选的约有1-4个碳。烷基可以被取代，也可以不被取代。当被取代时，优选的取代基包括卤素，氧代，叠氮基，硝基，氰基，烷基，烷氧基，硫代烷基，烷基硫代烷基，烷氧基烷基，烷基氨基，三卤代甲基，羟基，巯基，羟基，氰基，烷基甲硅烷基，环烷基，环烷基烷基，杂环烷基，杂芳基，亚链烯基，亚炔基，C_1-6烃基，芳基和氨基。

就本发明的目的而言，术语“取代”指的是增加或用基团（如卤素，氧代，叠氮基，硝基，氰基，烷基，烷氧基，硫代烷基，烷基硫代烷基，烷氧基烷基，烷基氨基，三卤代甲基，羟基，巯基，羟基，氰基，烷基甲硅烷基，环烷基，环烷基烷基，杂环烷基，杂芳基，亚链烯基，炔基，C_1-6烃基，芳基和氨基）更换一个官能团或化合物中的一个或多个原子。

就本发明的目的而言，术语“烯基”指的是基团中至少含有一个碳碳双键，包括直链，支链和循环基团。优选的烯基约有2-12个碳。更优选的约有2-7个碳的低烯基，还更优选的约有2-4个碳。该烯基可以被取代，也可以不被取代。当被取代时，取代基团包括卤素，氧代，叠氮基，硝基，氰基，烷基，烷氧基，硫代烷基，烷基硫代烷基，烷氧基烷基，烷基氨基，三卤代甲基，羟基，巯基，羟基，氰基，烷基甲硅烷基，环烷基，环烷基烷基，杂环烷基，杂芳基，亚链烯基，炔基，C_1-6烃基，芳基和氨基。

就本发明的目的而言，术语“炔基”指的是基团中至少含有一个碳碳三键，包括直链，支链和循环基团。优选的炔基约有2-12个碳。更优选的约有2-7个碳的低炔基，还更优选的约有2-4个碳。该炔基可以被取代，也可以不被取代。当被取代时，取代基包括卤素，氧代，叠氮基，硝基，氰基，烷基，烷氧基，硫代烷基，烷基硫代烷基，烷氧基烷基，烷基氨基，三卤代甲基，羟基，巯基，羟基，氰基，烷基甲硅烷基，环烷基，环烷基烷基，杂环烷基，杂芳基，亚链烯基，炔基，C_1-6烃基，芳基和氨基。“炔基”的实施例包括炔丙基，丙炔和3-己炔。

就本发明的目的而言，术语“芳基”指的是至少含有一个芳环的芳香烃环族。芳环可以融合，也可以以其他方式连接到其他芳香烃环或者非芳香烃环。芳基的实施例包括，如苯基，萘基，1,2,3,4-四氢化萘和联苯。芳基优选的实施例包括苯基和萘基。

就本发明的目的而言，术语“环烷基”指的是一个C_3-8环状碳氢化合物。环烷基的实施例包括环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基和环辛基。

就本发明的目的而言，术语“环烯基”指的是至少含有一个碳碳双键的C_3-8环状碳氢化合物。环烯基的实施例包括环戊烯基，环戊二烯基，环己烯基，1,3-环己二烯基，环庚烯基，环庚三烯基和环辛烯基。

就本发明的目的而言，术语“环烷基烷基”指的是一个烷基被一个C_3-8环烷基取代。环烷基烷基的实施例包括环丙基甲基，环戊基。

就本发明的目的而言，术语“烷氧基”指的是一个含有指定碳原子数的通过氧桥附着在母分子基上的烷基。烷氧基的实施例包括，如甲氧基，乙氧基，丙氧基和异丙氧基。

就本发明的目的而言，“烷基芳基”指的是一个烷基取代了一个芳基。

就本发明的目的而言，“芳烷基”指的是一个芳基取代了一个烷基。

就本发明的目的而言，术语“烷氧基烷基”指的是一个烷氧基取代了一个烷基。

就本发明的目的而言，术语“氨基”指的是众所周知的含氮基团，是以一个或多个氢自由基被有机自由基取代的方式从氨中获取的。例如，术语“酰氨基”和“烷氨基”指的是取代的有机自由基分别为酰基和烷基。

就本发明的目的而言，术语“卤素”或“卤”指的是氟，氯，溴，碘。

就本发明的目的而言，术语“杂原子”指的是氮，氧和硫。

就本发明的目的而言，术语“杂环烷基”指的是一个非芳香环族，其中至少包含一个从氮，氧，硫中筛选的杂原子。该杂环烷基可以融合，也可以通过其他方式连接到其他杂环烷基环和/或非芳烃环上。优选的杂环烷基族有3-7名成员。杂环烷基的实施例包括，如哌嗪，吗啉，哌啶，四氢呋喃，吡咯烷，和吡唑。优选的杂环烷基包括哌啶，哌嗪，吗啉，并吡咯。

就本发明的目的而言，术语“杂芳基”指的是一个芳香环族，其中至少包含一个从氮，氧，硫中筛选的杂原子。该杂芳基环可以融合，也可以通过其他方式连接到一个或多个杂芳基环，芳香或非芳香烃环，或杂环烷基环。杂芳基的实施例包括，如吡啶，呋喃，噻吩，5,6,7,8-四氢异喹啉和嘧啶。杂芳基的优选实施例包括噻吩基，苯并噻吩基，吡啶基，喹啉基，吡嗪基，嘧啶基，咪唑基，苯并咪唑基，呋喃基，苯并呋喃基，苯并噻吩基，噻唑基，苯并噻唑基，异恶唑基，恶二唑基，异噻唑基，苯并异噻唑基，三唑基，四唑基，吡咯基，吲哚基，吡唑基，和苯并吡唑基。

就本发明的目的而言，“正整数”应理解为等于或大于1的整数（如1，2，3，4，5，6），正如本领域的普通技术人员理解的那样。

就本发明的目的而言，术语“连接”应理解为包括化学反应引起的一个基团连接到另一个基团所用的共价键（优选）或非共价键。

就本发明的目的而言，术语“有效数量”和“足够数量”应指施用数量达到了本领域普通技术人员预期的效果或治疗效果。哺乳动物或患者治疗的有效数量是很容易被技术人员在达到预期的临床反应和避免副作用的范围内确定。剂量范围在下文。

就本发明的目的而言，术语“癌症”和“肿瘤”经常交叉使用，除非另有说明。癌症包括良性肿瘤，恶性肿瘤和/或转移性肿瘤，除非另有说明。癌症可分为较大侵略性的或较小侵略性的。“侵略”指的是增殖速度、形成肿瘤的能力以及转移的能力。与较小侵略性癌症相比，较大侵略性癌症增殖速度更快，更容易形成肿瘤以及更容易转移。

就本发明的目的而言，“肿瘤/癌症的治疗”应理解为，与没有接受本发明所述治疗的患者相比，用本发明所述化合物治疗后，在患者身上实现了抑制、减少和改善肿瘤生长、肿瘤负担和肿瘤转移，缓解肿瘤，减少肿瘤的复发与肿瘤的生长。患者达到积极的临床效果视为成功的治疗。例如，成功治疗肿瘤，是指与没有使用本发明所述治疗相比，抑制了至少10％，优选20％，更优选30％或更高（即40％，50％）的肿瘤生长，包括拟由本领域技术人员观测得出的其他临床指标。本发明所述治疗方法导致的肿瘤临床状态的改变的其他测定方法包括：活组织切片检查，如肿瘤活检，使用抗体的免疫组化研究，放射性同位素，染料，全血细胞计数（CBC）。

就本发明的目的而言，短语的使用，如“减少”，“缩小”，“减小”，或“降低”，是指药理活性发生了至少10％的改变，优选更大（减少肿瘤生长或者相关的基因/蛋白表达）。例如，变化范围可能大于25％，35％，45％，55％，65％，或其他大于10％的数值，或者变化范围在25％-99％。

术语“至少约为”包括等于或大于该数值的所有数。在各种实施例中，如抑制肿瘤生长和与肿瘤相关的基因/蛋白的表达，术语“至少约为15%”包括“至少约为16％”，“至少约为17％”，“至少约为18％”等。同样在一些实施例中，术语“至少约为30％”包括“至少约为31％”，“至少约为32％”等。

附图简要说明

图1是实施例5-7中所述的制备化合物6的反应方案的简要说明。

图2是实施例8-10中所述的制备化合物10的反应方案的简要说明。

图3是实施例11-13中所述的制备化合物14的反应方案的简要说明。

图4是实施例14-16中所述的制备化合物19的反应方案的简要说明。

图5是实施例17-19中所述的制备化合物23的反应方案的简要说明。

图6是实施例20-21中所述的制备化合物25和26的反应方案的简要说明。

图7是实施例22-23中所述的制备化合物28和29的反应方案的简要说明。

图8是实施例24-26中所述的制备化合物33的反应方案的简要说明。

图9是实施例27-29中所述的制备化合物36的反应方案的简要说明。

图10是实施例30-31中所述的制备化合物38和39的反应方案的简要说明。

图11是实施例32-33中所述的制备化合物42的反应方案的简要说明。

图12是实施例34中所述的制备化合物43的反应方案的简要说明。

图13是实施例35中所述的制备化合物44的反应方案的简要说明。

图14是实施例36中所述的制备化合物45的反应方案的简要说明。

图15是实施例37中所述的制备化合物46的反应方案的简要说明。

图16是实施例38-39中所述的制备化合物48和49的反应方案的简要说明。

图17是实施例40-42中所述的制备化合物54的反应方案的简要说明。

图18是实施例44中所述的将人的黑色素瘤细胞移植到小鼠体内，该小鼠使用丰加霉素，化合物6，化合物10和化合物54的抗肿瘤效果。

详细说明

A.概述

本发明一个方面提出了通式为(Ia)或(I)的化合物，该化合物通式如下：

其中，

R实质为约有1-32个聚合臂的非抗原性聚合物；

Y为-NHCH-或N，包含在通式（I）中，对应于：

Q₁,Q₂,和Q₃,独立地选自OH，离去基团，

Q₄，独立地选自OH或离去基团；

R₂，独立地选自C_1-10烷基，C_3-10支链烷基，C_3-8环烷基，C_2-10链烯基或C_2-10炔基；

J₁，独立地选自C或N；

Y₁，独立地选自O，S，或CH₂；

D为：

R_b1，独立地选自氢，羟基，C_2-10链烯基，C_2-10炔基，-(CH₂)_m2-OR_c1或-(CH₂)_m2-R’_c1；

R_b3，独立地选自氢，羟基，C_2-10链烯基，C_2-10炔基，C_2-10链烯氧基，C_3-10烯丙氧基，卤素（F，Cl或Br），叠氮基，氨基，或OR_C3；

当J₁为碳，R_b4，独立地选自氢，卤素，C_1-10烷基，芳基，芳烷基，C_2-10链烯基，C_2-10炔基，C_1-10烷氧基，氰基，氰基烷基，C(=O)NH₂，羧酰胺，芳氧基，氨基，烷基氨基，芳基氨基，芳烷基，烷硫基，或芳基硫基；当J₁为氮，R_b4为空；

R_b5，独立地选自氢，胺，卤素，C_1-10烷基，烷基氨基，烷硫基，或叠氮基；独立地选自氢，胺，卤素，C1-10烷基，烷基氨基，烷硫基，-NH-NH₂，或叠氮基；

R_b6，独立地选自氢，C_1-10烷基（低烷基），卤素（F，Cl），C_1-10烷氧基，或C_1-10烷硫基；

R’_c1，独立地选自氢，羟基，低级烷基酯或它们的碳酸酯，C_1-10烷基，C_1-10烷氧基，氨基，叠氮基，卤素或非抗原性聚合物；

（m2）约为1-4的整数（例如1，2，3，4）；

（q1）和（q2）独立地为0或1；且

（q3）为0或约为1-31的正整数，优选为0，1，3，7，15，31；

在这个方面，当（q3）为0时，R还包括封端基团（A）(如H，OH，C_1-6烷基，C_1-6烷氧基，COOH，或NH₂)。

就本发明的目的而言，本发明所述通式为（I）的化合物（以下简称化合物(I)）中腺嘌呤核苷酸类似物数量约为1-64个（如1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16等）。

就本发明的目的而言，术语“腺嘌呤核苷酸类似物”应理解为包含核苷，脱氧核糖核苷，核糖核苷酸，脱氧核糖核苷酸，和它们的衍生物，这些衍生物的核酸碱基包括腺嘌呤，7-脱氮腺嘌呤。一个方面，本发明所述化合物包含的腺嘌呤核苷酸类似物的通式为(ID)：

腺嘌呤核苷酸类似物的实施例包括但不限于腺苷，2'-脱氧腺苷，丰加霉素，桑吉瓦霉素（NSC 65346），ARC（NSC 188491），氟达拉滨，克拉屈滨，氯法拉滨，和一-，二-，或三磷酸盐等。化合物(I)中的腺嘌呤核苷酸类似物包括：

(2'-脱氧腺苷) (氟达拉滨) (克拉屈滨) (氯法拉滨)

(ARC,NSC188491) (桑吉瓦霉素,NSC 65346)

其中R’_b1为氢，一-，二-，或三磷酸。

依照本发明，拟附加的腺嘌呤类似物在美国专利号为5506347，5674998，5721356，5726302，5763596，5763597，5750673，6987177，6670468和7608600专利发明中公开，其中的内容为本文参考。

优选的腺嘌呤类似物为7-脱氮腺嘌呤核糖核苷（如丰加霉素）。在本发明提出的化合物中，生物活性剂为桑吉瓦霉素，丰加霉素（NSC 65346），ARC（NSC 188491），6-氨基-丰加霉素，杀结核菌素，以及一-，二-，或三磷酸盐。依照本发明，化合物（I）中的丰加霉素及其类似物，具有如下通式：

其中，

R’_b1,R’_b2和R’_b3独立地为氢，一磷酸，二磷酸，或三磷酸；

R_b4为-CN，-C(=O)NH₂，或氢；且

R_b5为氢，胺，或-NH-NH₂，或它们的药用盐。在这个方面，J₁为碳。

在一个优选的实施例中，化合物(I)，包括丰加霉素，其中R’_b1，R’_b2和R’_b3均为氢，R_b ₄为氰基，R_b5为氢。

在另一个优选的实施例中，化合物(I)，包括桑吉瓦霉素，其中R’_b1，R’_b2和R’_b3均为氢，R_b4为–C(=O)NH2，R_b5为氢。

在另一个实施例中，化合物（I），包括ARC，其中R’_b1，R’_b2和R’_b3均为氢，R_b4为-C（=O）NH₂，R_b5为-NH-NH₂。

在另一个实施例中，化合物（I），包括杀结核菌素，其中R’_b1，R’_b2和R’_b3均为氢，R_b4为氢，R_b5为氢。

在另一个实施例中，化合物（I），包括6-氨基-丰加霉素，其中R’_b1，R’_b2和R’_b3均为氢，R_b4为氰基，R_b5为-NH₂。

在又一实施例中，化合物(I)，包括磷酸(一-,二-,或三磷酸)，其中R_b1为–CH₂OR’_b1，R’_b1为一-,二-,或三磷酸。

在优选的实施例中，化合物（I），包括：

Z-M₁-CH₂CH₂O(CH₂CH₂O)_nCH₂CH₂-M₁-Z;与

A-(CH₂CH₂O)_nCH₂CH₂-M₁-Z,

其中

M₁独立地为O,或S;

Z独立地为H，

Y，为-NHCH-或N;

Q₁,Q₂,和Q₃,独立地选自OH,离去基团,

Q₄，独立地选自OH或离去基团;

D为

A为OH，C_1-6烷氧基，-COOH，或NH₂，优选OH，甲氧基，或乙氧基，（在这个方面，（q3）为0）；

（d）为0或一个约为1-10的正整数，优选为0-4，更优选为0，1或2;

（z1）为0或一个约为1-29的正整数（例如，0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13等，优选为1，5，13，29）;

（n）约为一个10-2300的正整数，使得化合物的聚合部分的总平均分子量约为2,000-100,000道尔顿，

假设一个或多个（如1，2，3，4，5，6，7，8）Z为，

化合物(I)包括通过一个Z基团连接的一个或多个腺嘌呤核苷酸类似物（如丰加霉素）。Z基如下：

（ⅰ）Z为H，

其中

（d）为0，1或2；且

至少一个，优选多个（如1，2，3，4，5，6，7，8）Z为

（在这个方面，（q1）和（q2）均为0）；或

（ⅱ）Z为

（在这个方面，（q1）和（q2）均为1），

其中，

（d）为0，1或2；且

至少一个或多个（如1，2，3，4，5，6，7，8）Z为

优选的Q₁均为

在某些实施例中，（q1）和（q2）均为1，通式为（I）的化合物包括一个分支部分。

在一个优选的实施例中，化合物（I）包括通过一个Z基相连的腺嘌呤核苷酸类似物（如丰加霉素或其类似物）。Z基如下：

（ⅰ）Z为H，

通式(II)(在这个方面，(q)为0)

其中，（d）为0，1或2，且至少有一个或多个（如1，2，3，4，5，6，7，8）Z为

(ii)Z为

（（q1）和（q2）均为1，且Y为N），

其中，

（d）为0，1或2；

（m1）和（m'1）为1或2；且

至少一个或多个（如1，2，3，4，5，6，7，8）Z为

(iii)Z为

(（q1）和（q2）均为1，且Y为-NH-CH-），

其中

（d）为0，1或2；且

至少一个或多个（如1，2，3，4，5，6，7，8）Z为

(iv)Z为

(（q1）和（q2）均为1，且Y为NH-CH-），

其中，

（d）为0，1或2；且

至少一个或多个（如1，2，3，4，5，6，7，8）Z为

在另一个优选的实施例中，本发明所述化合物中提出的腺嘌呤类似物包括7-脱氮腺嘌呤核苷酸。在这个方面，Y₁为O；J₁为碳；R_b1，独立地选自氢，羟基，或-CH₂-OR_c1；R_b2，独立地选自氢或OR_c2；R_b3，独立地选自氢或OR_c3；R_b4，独立地选自氢，氰基或-C(=O)NH₂；R_b5为氢，胺或-NH-NH₂；R_b6为氢；R_c1,R_c2,和R_c3，独立地选自氢，酰基，一磷酸，二磷酸，或三磷酸。

在另一个优选的实施例中，本发明所述化合物中，R_b1，为-CH₂-OR_c1，R_c1为氢，一磷酸，二磷酸，或三磷酸；R_b2和R_b3，均为羟基；R_b4，独立地选自氰基或-C(=O)NH₂；R_b5和R_b6均为氢。

在又一优选实施例中，本发明所述化合物中，Y₁为O；J₁为N；R_b1，为-CH₂-OR_c1，其中R_c1为氢，一磷酸，二磷酸，或三磷酸；R_b2，独立地选自为氢或羟基；R_b3，独立地选自氢，羟基或F；R_b5为氢；R_b6为氢，F，或Cl。

化合物（Ⅰ）至少一个臂包括D，即腺嘌呤核苷酸或其衍生物（如丰加霉素，桑吉瓦霉素，或5'-一，二，三磷酸）。

依照本发明，腺嘌呤核苷酸类似物（如丰加霉素及其类似物）在胺基上通过一个含有R₁和R₂间隔基附着在各聚合臂。

在某些实施例中，R₁，独立地选自H，C_1-6烷基，C_3-6支链烷基，或C_3-6环烷基，R₂，独立地选自C_1-6烷基，C_3-6支链烷基或C_3-6环烷基。在一个实施例中，本文所述的化合物中，R₁为氢，甲基，乙基，丙基，丁基，异丁基，环丙基，环丁基，环戊基，或环己基；R₂为甲基，乙基，丙基，丁基，异丁基，环丙基，环丁基，环戊基，或环己基。在这方面，依照通式（I），R₁和R₂的组合拟包括但不限定于，氢/甲基，氢/乙酸乙酯，氢/丙基，氢/异丙酯，氢/丁基，氢/异丁基等等。同样地，该组合包括：甲基/甲基，甲基/乙基，等等。在一个优选的实施例中，R₁为氢，R₂为异丁基，或者R₁和R₂均为甲基。

在本发明的一个优选的方面，化合物（I）包括一个Z基，在Z基中丰加霉素（即丰加霉素和桑吉瓦霉素）与间隔基连接，其结构如下：

在本发明的另一个优选方面，化合物（I）包括多臂聚合物（如四臂聚乙二醇和八臂聚乙二醇）。本发明的一个优选方面，提出的化合物通式如下：

其中

M₁独立地为O,或S;

Z为下列之一：

（ⅰ）Z独立地为H，

其中(d)为0，1或2，

假设一个或多个（如1，2，3，4，5，6，7，8，优选4臂和8臂中的4和8）Z基为

(ii)Z为

其中

（d）为0，1或2；

（m）和（m'）为1或2；且

Q₁,Q₂和Q₃,独立地选自OH或

(iii)Z为

其中，

（m）为1；

（m'）为0；

（d）为0，1或2；且

Q₁,Q₂和Q₃,独立地选自OH或

假设一个或多个（如1，2，3，4，5，6，7，8，优选4臂和8臂中的4和8）的Z基为

(iv)Z为

其中

（m）为0;

（m'）为1;

（d）为0，1或2；

Q₁,Q₂和Q₃,独立地选自OH或

R₁，独立地选自H，C_1-10烷基，C_3-10支链烷基，C_3-8环烷基，C_2-10链烯基;

R₂，独立地选自C_1-10烷基，C_3-10支链烷基，C_3-8环烷基，C_2-10链烯基；且D为

优选地，本文所述多臂化合物中D为

其中

R_b4为–CN，–C(=O)NH₂，或氢；且

R_b5为氢，胺，或-NH-NH₂，或它们的药用盐。

在这方面，（n）约为10-2300的正整数，使得化合物的聚合部分的总平均分子量约为2,000-100,000道尔顿。

在这方面，在一些实施例中，R₁，独立地选自H，C_1-6烷基，C_3-6支链烷基，或C_3-6环烷基。R₂，独立地选自C_1-6烷基，C_3-6支链烷基或C_3-6环烷基。在一个备选实施例中，R₁为氢，甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，环丙基，环丁基，环戊基，或环己基；R₂为甲基，乙基，丙基，丁基，异丁基，环丙基，环丁基，环戊基，或环己基。在这方面，依照通式（I），R₁和R₂的组合拟包括但并不限定于，氢/甲基，氢/乙酸乙酯，氢/丙基，氢/异丙基，丁基，氢/氢/异丁基，等等。同样地，该组合包括：甲基/甲基，甲基/乙基等。在一个优选的实施例中，R₁为氢，R₂为异丁基，或R₁和R₂均为甲基。

在一个优选的实施例中，R’_b1为氢，一磷酸，二磷酸，或三磷酸；R'_b2和R'_b3均为氢。

在另一个优选的方面，（n）约为28-341的整数，本文所述化合物的聚合部分的总平均数分子量约为5,000-60,000道尔顿。在一个备选的优选实施例中，（n）约为114-239的整数，使得化合物（Ⅰ）的聚合部分的总平均分子量约为20,000-42,000道尔顿。

本发明提出了腺嘌呤核苷酸四臂PEG共轭物。共轭部分拟包括：

其中

Z₁,Z₂,Z₃,和Z₄为

其中

Q₁为羟基或

（d）为0，1或2;

（n）约为10-2300的正整数，使得化合物的聚合部分的总平均分子量约为2,000-100,000道尔顿；且

所有其它变量的定义同前。

本发明的优选化合物包括：

在某些实施例中，腺嘌呤核苷酸类似物的部分负荷可能发生，如下所示：

其中

(d)为0，1或2；

M₃，独立地选自OH，或

D为腺嘌呤核苷酸类似物(优选,丰加霉素或其类似物；且，假设一个或多个(如1,2,3,4,5,6,7,8,优选8)M₃为

且D定义如前。

本发明一个优选实施例包括选自下述化合物：

在某些实施例中，四臂聚合共轭物包括D：

其中R’_b1为氢，一磷酸，二磷酸，或三磷酸；

R’_b2和R’_b3均为氢；且

R_b4为–CN或–C(=O)NH₂；

或它们的药用盐。

在另一个优选实施例中，本文所述化合物具有如下结构：

在另一个优选实施例中，药物(D)与-NH-C(R₁)(R₂)-C(=O)-结合形成：

其中R_b1为氢，一磷酸，二磷酸，或三磷酸。

在进一步实施例中，药物与-NH-C(R₁)(R₂)-C(=O)-形成：

就本发明的目的而言，在本发明的范围内，为了使化合物(I)稳定，间隔基和分支基团的变量组合是允许的。

B.非抗原性聚合物

本发明的另一方面提供了本文所述的含有聚合物的化合物。本文所述化合物内的聚合物优选是水溶性和非抗原性的，如聚亚烷基氧化物（PAO’s）。本文所述化合物还包括直链，支链，或多臂的聚亚烷基氧化物。本发明的一个优选方面，聚亚烷基氧化物包括聚乙二醇和聚丙二醇。更优选地，聚亚烷基氧化物包括聚乙二醇（PEG）。

聚亚烷基氧化物总平均分子量约为2,000-100,000道尔顿，优选约为5,000-60,000道尔顿。聚亚烷基氧化物更优选约为5,000-25,000或20,000-45,000道尔顿。在某些特别优选的实施例中，本文所述化合物包括具有总平均分子量约为30,000-45,000道尔顿的聚亚烷基氧化物。在一个特定的实施例中，聚合部分总平均分子量约为40,000道尔顿。

一个优选方面，本文所述化合物包括多臂聚乙二醇聚合物。本文所述化合物中多臂聚合物是水溶性和非抗原性的。

多臂聚乙二醇总平均分子量约为2,000-100,000道尔顿，优选约为5,000-60,000道尔顿。多臂聚乙二醇更优选约为5,000-25,000或20,000-45,000道尔顿。在某些特别优选的实施例中，本文所述化合物包括具有总平均分子量约为30,000-45,000道尔顿的多臂PEGs。在一个特定的实施例中，聚合部分总平均分子量约为40,000道尔顿。

聚乙二醇一般结构如下：

-(CH₂CH₂O)_n-

其中（n）约为10-2300的正整数，化合物聚合部分平均分子量约为2,000-100,000道尔顿。（n）表示聚合物的聚合度，取决于聚合物的分子量。

可替代的，每一个聚合臂结构如下：

-M₁-CH₂CH₂(OCH₂CH₂)_n-,

-(CH₂)_d-M₁-CH₂CH₂(OCH₂CH₂)_n-or

-C(=O)-(CH₂)_d-M₁-CH₂CH₂(OCH₂CH₂)_n-

其中，

M₁为O，或S；

（d）为0或约为1-10的正整数，优选0，1，2，3，更优选0或1；且

（n）约为10-2300的正整数。

化合物（I）中合适的聚合物，聚合物体系结构（IIIa）-（IIIh）如下：

-(CH₂)_d1-M₁-CH₂CH₂(OCH₂CH₂)_nOCH₂CH₂-M₁-(CH₂)_d1-(IIIe),

-C(=O)-(CH₂)_d1-M₁-CH₂CH₂(OCH₂CH₂)_nOCH₂CH₂-M₁-(CH₂)_d1-C(=O)-(IIIf),

A-CH₂CH₂(OCH₂CH₂)_nOCH₂CH₂-M₁-(CH₂)_d1-(IIIg),且

A-CH₂CH₂(OCH₂CH₂)_nOCH₂CH₂-M₁-(CH₂)_d1-C(=O)-(IIIh),

其中A为OH，C_1-6烷氧基（如甲氧基，乙氧基），COOH，或胺；且

所有其它变量的定义同前。

在本文所述化合物共轭之前，多臂聚合物包括多臂PEG-OH产品（如NOF公司）。2006年4月8日公布的输药系统目录披露的内容为本文参考。使用在美国专利5,122,614或5,808,096中所述的激活技术，将聚合物转换成合适的活化形式。更具体地，该PEG通式如下：

其中，

（n）约为4-455的整数。

在一个实施例中，该聚合物的聚合度（n）约为28-341，聚合物的总平均分子量约为5,000-60,000道尔顿，优选约为114-239，总平均分子量约为20,000-42,000道尔顿。（n）为在聚合链中的重复单元的数目，其数值取决于聚合物的分子量。在一个特定的实施例中，（n）约为227，聚合部分的总平均分子量约为40,000道尔顿。

在某些实施例中，PEG的四臂可以被转换为合适的活化基团，便于连接到其它分子上（如间隔基和分支基团）。在转换之前，该化合物包括：

多臂PEGs通过一个间隔基共轭到本文所述的丰加霉素及其类似物，任选与分支基团结合。使用美国专利第5122614和5808096号中所述的激活技术以及在本领域中已知的其它技术，不需过多的实验，就可以将多臂聚合物转换成合适的活化聚合物，与化合物（I）共轭。例如，激活多臂PEGs与激活线性PEGs的技术类似，除了使用足够过量的活化剂确保大部分聚合臂末端基团被激活。其后的共轭方式一样。

制备化合物(I)的实施例中，使用活化的PEGs，如直链或多臂聚乙二醇-琥珀酰亚胺基碳酸酯（SC-PEG），直链或多臂聚乙二醇-琥珀酰亚胺基琥珀酸酯（SS-PEG），直链或多臂聚乙二醇-羧酸，直链或多臂聚乙二醇琥珀酸酯和直链或多臂聚乙二醇-三氟乙基磺酸酯（PEG-TRES）。

在一些方面，具有末端羧酸基团的聚合物，可以应用在本文所述的聚合物输药系统。美国专利第2007/0173615号中所述的高纯度的具有末端羧酸基团的聚合物的制备方法，其内容为本文参考。该方法包括：首先制备PEG叔烷基酯，然后转换成羧酸衍生物。制备直链或多臂PEG羧酸的第一步中形成中间体(如PEG叔丁基酯)。该中间体是在碱（如叔丁醇钾）存在下，PEG与叔丁基卤代乙酸反应形成的。如果叔丁基酯中间体已经形成，就可以很容易地生成高纯度PEG羧酸衍生物。

就本发明的目的而言，“实质或有效的非抗原性”是指在本领域中，聚合物无毒并且不会在哺乳动物体内引起较大的免疫反应。

C.离去基团与活化基团

在一些方面，合适的离去/活化基团包括但不限于，卤素（氟，溴，氯，碘），活化的碳酸酯，羰基咪唑，环状酰亚胺硫酮，氯甲酸酯，异氰酸酯，N-羟基琥珀酰亚胺基，对-硝基苯氧基（PNP），N-羟基酞酰胺，N-羟基苯并三氮唑（N-HOBT），甲苯磺酸酯，甲磺酸酯，三氟乙基磺酸酯，间硝基苯磺酸甘油酯，C₁-C₆烷氧基，C₁-C₆烷酰氧基，芳基羰基，邻-硝基苯氧基，咪唑基，五氟苯氧基，1,3,5-三氯苯氧基，1,3,5-三氟苯氧基或其它合适的离去基团，对普通技术人员而言，这是明显的。在一个优选的实施例中，离去/活化基团是：N-羟基琥珀酰亚胺基，N-羟基苯并三氮唑（N-HOBT），环状酰亚胺硫酮，或对硝基苯氧基（PNP）。

就本发明的目的而言，离去/活化基团应理解为能够与间隔基上的亲核试剂，分支基团，丰加霉素或类似物，多臂聚合物，丰加霉素间隔基中间体等反应的那些基团。因此，亲核试剂中包含取代基团（如OH，NH₂或SH基）。

D.化合物（I）的合成方法

一般来说，本发明提出的化合物的制备，是在一定的条件下，一当量或多当量活化的直链或多臂聚合物，与一当量或多当量位于聚合臂末端的腺嘌呤核苷酸类似物（如丰加霉素）反应，使得它们通过一个间隔基连接形成腺嘌呤核苷酸类似物聚合共轭物。

更具体地，该方法包括：

1）提供一当量的含有一个可利用氨基的腺嘌呤核苷酸类似物（如丰加霉素或其类似物）和一当量或多当量的含有一个可利用羧酸基团的双官能间隔物；

2）在惰性溶剂（如DCM或二甲基甲酰胺，氯仿，甲苯或它们的混合物）中，并在偶合试剂（如1-（3-二甲基氨基丙基）3-乙基碳化二亚胺（EDC）），1,3-二异丙基碳二亚胺（DIPC）或二烷基碳化二亚胺，向山试剂（2-卤代-1-烷基-吡啶鎓卤化物）或丙烷膦酸环状酸酐（PPACA）等，合适的碱(如DMAP)存在的条件下，使上述两种物质反应形成一个腺嘌呤核苷酸类似物间隔酰胺中间体；或将一个活化的双官能间隔物，腺嘌呤核苷酸类似物以及合适的碱放入惰性溶剂（如DCM或二甲基甲酰胺，氯仿，甲苯或它们的混合物）中反应；且

3）将一当量或多当量具有胺基的中间体的聚合臂末端（如2eq.）和一当量的活化聚合物（如四臂PEG-琥珀酰亚胺基碳酸酯）放在惰性溶剂中（如DCM或二甲基甲酰胺，氯仿，甲苯或它们的混合物），在碱的存在下反应，或一当量的四臂PEG-羧酸与偶合试剂（如1-（3-二甲基氨基丙基）3-乙基碳二亚胺（EDC）），1,3-二异丙基碳二亚胺（DIPC），或二烷基碳化二亚胺与向山试剂（2-卤代-1-烷基-吡啶鎓卤化物）或丙烷膦酸环状酸酐（PPACA）等与合适的碱（如DMAP）；上述物质是可利用的，商业来源如Sigma公司，或使用现有技术在温度0°C-22°C下合成。

在一个优选的方面，腺嘌呤核苷酸类似物（如丰加霉素或其类似物）的羟基在步骤1）之前要被保护，在步骤3）后要去掉保护。有用的羟基保护基包括乙酰基，TBDMS，TMS，TES，烯丙基，或其它已知的合适的羟基保护基。

活化的多臂聚合物（如含有1-4个末端羧酸基的聚合物）的制备，是使用本领域普通技术人员公认的标准技术，将NOF圣豹型或其它具有末端OH基团的支链多臂聚合物转换成相应的羧酸基衍生物。例如，美国专利第5605976号和第2007/0173615号的内容为本文参考。

步骤2）和步骤3）中使用的偶合试剂可以相同，也可以不同。

在一个实施例中，本文所述化合物的制备步骤包括：

(a)一当量的腺嘌呤核苷酸(如丰加霉素)和一或多当量含可用的羧酸基或活化的羧酸基的双功能间隔基在一定条件下反应，有效形成含可用胺基的腺嘌呤核苷酸-间隔酰胺中间体；且

(b)一或多当量步骤(a)所得中间体的每聚合臂末端和一当量活化聚合物在一定条件下反应，有效形成化合物(I)，

优选的双功能间隔连接基的实施例，包括亮氨酸，2-氨基异丁酸等，有腺嘌呤核苷酸类似物聚合共轭物的合成，替代合成和具体合成。

依照本发明，制备化合物的实施例包括但限于：

其中D为，

且

所有其它变量的定义同前。

在一个优选的实施例中，D为2'-脱氧腺苷，丰加霉素，桑吉瓦霉素，ARC，氟达拉滨，克拉屈滨，氯法拉滨，6-氨基丰加霉素，杀结核菌素，以及一-，二-，或三磷酸，并且（n）约为227，化合物聚合部分的总平均分子量约为40,000道尔顿。

E.成分/配方

含本发明所述化合物的药物组合物的制备步骤有：本领域众所周知的混合，溶解，制粒，磨擦混合，乳化，封装，包埋或冷冻干燥。配制时可使用一种或多种生理可接受的载体，包括赋形剂与辅料，这些载体对活性化合物加工成为药剂有促进作用。合适的配方取决于所选择的给药途径。本发明的许多方面优选的给药方式为非肠道途径。

注射给药，是指本发明所述化合物可配制成水溶液，优选生理相容缓冲液如生理盐水缓冲液或极性溶剂（包括但不限于吡咯烷酮或二甲亚砜），其注射方式包括但不限于静脉内注射，肌内注射与皮下注射。

本发明所述化合物可配制单次静脉注射或连续注射的肠胃外给药。注射药剂以剂量为单位，例如安瓿(装一次用量的针剂)或多剂量容器。有用的组合物包括但不限于悬浮液，溶液或在油性或水性载体中的乳液，可能还包括辅助剂如悬浮剂，稳定剂与/或分散剂。肠胃外给药的药物组合物，包括但不限于水溶液，优选活性化合物盐。此外，活性化合物悬浮液可在亲脂载体中制备。合适的亲脂载体包括脂肪油（如芝麻油），合成脂肪酸酯（如油酸乙酯与甘油三酯），或其他物质（如脂质体）。含水注射悬浮液含有增加悬浮液粘度的物质（如羧甲基纤维素钠，山梨糖醇，或葡聚糖）。任选地，该悬浮液也可含有合适的稳定剂与/或增加化合物溶解度的物质，促进该悬浮液高度浓缩。可替代地，为了便于与合适的载体（如无菌，无热原的水）组合，活性成分在使用之前以粉末状存在。

口服给药，是指本发明所述化合物可以与本领域众所周知的生理可接受载体一起配制。这些载体可以使本发明所述化合物配制成片剂，丸剂，锭剂，糖锭剂，胶囊，液体，凝胶，糖浆，糊剂，淤浆，溶液，悬浮液，浓溶液与浓悬浮液（可以将之稀释在病人的饮用水中），混合物（可提前混合在病人的饭菜中），等等。口服药在制备过程中，加入固体赋形剂，研磨所得的混合物（任选），加工的颗粒混合物，其它制备片剂或糖衣丸芯必需的合适的辅助剂。有用的赋形剂包括填充物（如糖，包括乳糖，蔗糖，甘露糖醇或山梨糖醇），纤维素制剂（如玉米淀粉，小麦淀粉，大米淀粉，马铃薯淀粉），与其他物质（如明胶，黄蓍胶，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，羧甲基纤维素钠，与/或聚乙烯吡咯烷酮（PVP））。必要时可以添加崩解剂（如交联聚乙烯吡咯烷酮，琼脂或藻酸）。也可使用盐（如藻酸钠）。

吸入给药，是指本发明所述化合物可以使用加压包或喷雾器，合适的推进器以气溶胶喷雾的形式摄入。

本发明所述化合物也可配制成直肠组合物（如栓剂或保留灌肠剂），使用常规栓剂的基质（如可可脂或其它甘油酯）。

除了上述制剂，本发明所述化合物也可以被配制为储存制剂。这种长效制剂可以通过植入（如皮下或肌内）给药或通过肌内注射给药。针对该给药途径，本发明所述化合物可以与合适的聚合物/疏水性材料（如在与药理学上可接受的油中的乳剂），离子交换树脂，或微溶性衍生物（包括但不限于难溶性盐）等一起配制。

也可使用其他的输药系统，如脂质体与乳剂。

此外，本发明所述化合物可使用缓释体系输药，如含有治疗剂的固体疏水聚合物的半透矩阵。各种缓释体系在本领域中是众所周知的。缓释胶囊依据其化学特性释放化合物可达几个星期甚至超过100天。根据特殊化合物的化学性质与生物稳定性，可以另外使用稳定化策略。

F.化合物（I）的使用方法

一个方面，本发明所述化合物在使用腺嘌呤核苷酸类似物（如丰加霉素或其类似物）治疗哺乳动物时是非常有效的。该方法包括给需要该药治疗的哺乳动物施用或输送本文所述化合物。该方法包括：

（a）形成腺嘌呤核苷酸类似物聚合共轭物（如丰加霉素或其类似物）；且

（b）给需要该药治疗的哺乳动物施用有效数量的化合物（I）。

在一个实施例中，给具有恶性肿瘤或癌症的患者施用有效数量的含本发明所述化合物的药物组合物。能够治疗的癌症种类如下：实体瘤，淋巴瘤，小细胞肺癌，急性髓细胞性白血病（AML），急性淋巴细胞白血病（ALL），肾癌，乳癌，胰脏癌，胶质母细胞瘤，卵巢癌，胃癌，大肠癌，前列腺癌，宫颈癌，脑肿瘤，KB癌，肺癌，结肠癌，表皮癌，黑色素瘤等。本发明所述化合物在治疗哺乳动物的肿瘤疾病，减少肿瘤负担，减少肿瘤转移与减少肿瘤复发或肿瘤生长方面非常有效。在一个实施例中，治疗时使用本发明所述化合物中的丰加霉素。在另一个实施例中，治疗哺乳动物的白血病，肉瘤，腺癌，乳房癌等时使用化合物（I）（含杀结核菌素）。在另一实施例中，治疗哺乳动物肾癌时使用本文所述化合物（含有6-氨基丰加霉素）。

在这个方面，“治疗”应理解为在患者完成治疗后，抑制、减少和改善肿瘤生长，肿瘤负担与转移，缓解肿瘤，或减少肿瘤复发与/或肿瘤生长。

在另一实施例中，本发明提出了一种抑制哺乳动物体内肿瘤细胞的生长或增殖的方法。该方法包括给有癌症的哺乳动物施用本发明所述化合物。

成功的治疗是指患者达到积极的临床效果。例如，成功治疗肿瘤指，与没有使用本文所述治疗观测结果相比，至少减少了20％，或30％（优选）或40％（更优选）或更高（即50％）肿瘤生长，包括由本领域技术人员考虑的其他临床指标。其他本文所述治疗引起的肿瘤临床状态的改变的测定方法包括：活组织切片检查（如肿瘤活检）；免疫组化研究（使用抗体），放射性同位素，染料；全血细胞计数（CBC）。

在某些方面，依据RECIST定义了临床反应标准。完全缓解（CR）是指衡量与评估癌症的临床症状完全消失。部分缓解（PR）是指所有可测量的肿瘤区域面积至少减少了50％。逐行病（PD）是指所有可测量的肿瘤区域面积增加大于25％（相对于基线或最佳响应）。疾病稳定（SD）是指既没有部分缓解（PR），也没有逐行病（PD）。CR，PR与/或SD视为完成治疗。

然而，本发明的另一实施例提出了在哺乳动物体内调制/抑制血管生成或血管生成活性的方法。血管生成分为肿瘤血管生成与与肿瘤相关的血管生成。血管生成引起改变的测定方法有鸡尿囊绒膜检测（CAM）。其他方法：牛毛细血管内皮细胞测定法（BCE）（如美国专利号6024688），与人脐静脉内皮细胞（人脐带血管内皮细胞）的生长抑制试验（如美国专利号6060449）。

在又一实施例中，本发明提出了治疗哺乳动物体内病毒感染（如C型肝炎感染）的方法。该方法包括给患病的哺乳动物施用有效数量的本发明所述化合物。

在又一实施例中，本发明提出的治疗VEGF表达异常高的疾病患者（与正常人相比）方法是非常有效的。VEGF的表达水平可通过某些技术测定，包括VEGF mRNA表达，这些技术在本领域中是众所周知的。

然而，本发明进一步提出了另一种实施例，提高丰加霉素在哺乳动物体内治疗效果的方法。该方法包括施用有效数量的本发明所述化合物，其中，10分钟内在血液中释放丰加霉素T_1/2约10％-300％，优选10分钟内释放约10％-80％。该方法使用本文所述化合物中，R₁为氢，R₂为异丁基。可替代地，4小时内在血液中释放丰加霉素T_1/2约50％-150％，优选4小时内释放约80％-100％。该方法使用本发明所述化合物中，R₁与R₂均为甲基化合物。

在本发明许多方面，给哺乳动物施用化合物(I)或药物盐，其中D为丰加霉素或桑吉瓦霉素。在一个实施例中，方法中所使用的本发明所述化合物具有如下结构：

其中D为

与

（n）约为227，化合物聚合部分的总平均分子量约为40,000道尔顿。

优选地，所述施用步骤包括通过哺乳动物血液（静脉注射）。

治疗的有效数量是指有效地减少、减轻或改善疾病症状或延长寿命时所用的本发明所述化合物的数量。该数量可依据最初在体外的实验数据来估计。然后根据在哺乳动物体内使用的有效数量，确定一个有效数量在内的较窄的范围。这种信息便于更准确地确定病患的施用有效数量。

组合物用作前药时的施用数量取决于母体分子。通常，治疗方法中施用的前药数量，是在哺乳动物体内有效达到治疗效果的数量。当然，前药的施用数量取决于母体化合物，在体内的水解速率，该聚合物的分子量等。此外，施用数量还取决于剂型与给药途径。

一般情况下，腺嘌呤核苷酸类似物（如丰加霉素与类似物）给哺乳动物的施用范围约为0.1-5毫克/公斤/剂量。例如，丰加霉素的施用量为约1或5毫克/公斤/剂量。在一个实施例中，丰加霉素及其类似物给病人的施用量约为10-200微克/千克/剂量（如约10-100微克/千克/剂量，约10-80微克/公斤/剂量，约70-150微克/千克/剂量）。

治疗方案分为单剂量治疗方案，和将一个数周的治疗方案分为多个剂量的治疗方案。还可以将治疗方案分为一个或多个周期，直到得到所需的临床结果。本发明所述化合物的使用数量、用药频率与周期，取决于病人的性别、年龄与身体状况，以及由主治医生确定的疾病严重程度。

本发明所述的聚合共轭物的施用数量取决于腺嘌呤核苷酸类似物（如丰加霉素及其类似物）的数量，而不是聚合共轭物的数量。PEG共轭腺嘌呤核苷酸类似物（如丰加霉素）的实际重量取决于直链或多臂PEG的重量与多臂PEG的活性剂的加载重量（如高达4当量的四臂PEG腺嘌呤核苷酸类似物（如丰加霉素），高达8当量的四臂PEG支链的腺嘌呤核苷酸类似物（如丰加霉素））。

上述范围是说明性质的，本领域的技术人员会根据临床经验与治疗指征从而确定前体药物的最佳剂量。具体讲，确切的药物配方、给药方式与剂量由医师个人鉴于患者的病情来选择。精确的剂量取决于病人所处的病情阶段与疾病的严重程度，以及接受治疗的患者的个体特征，正如本领域的普通技术人员理解的那样。

此外，本文所述化合物的毒性与疗效可以通过使用在本领域中公知的方法在细胞培养或实验哺乳动物中标准的制药程序来测定。

本发明的另一方面，本文所述化合物与其他抗癌疗法（如采用其它化疗剂的放疗或化疗）可以相互配合。因此，本文所述化合物可以在使用其他的抗癌疗法之前、期间或之后使用。一个实施例就是关于在治疗癌症中本文所述化合物与放射治疗一起使用。

具体实施方式

下列实施例进一步评析此项发明，但并不旨在以任何方式限制本发明的有效范围。实施例中所述的标有下划线的字和粗体字都与图中所示相对应。

通则所有反应均在干燥的氮气或氩气的环境下进行。商业试剂无需进一步的净化可被使用。所有的PEG（聚乙二醇）化合物均在真空中进行干燥或通过共沸蒸馏(甲苯)提纯后使用。缩写式DCM（二氯甲烷），DIEA（N，N-二异丙基乙胺），DMAP（4-（二甲基氨基）吡啶），DMF（N，N-二甲基甲酰胺），DSC（N，N'-二琥珀酰亚胺基碳酸酯），EDC（1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺），IPA（2-丙醇），HOBT（1-羟基苯并三唑），NMM（N-甲基吗啉），TBDMS-Cl（叔丁基二甲基甲硅烷基氯），TFA（三氟乙酸），TEAA（四乙基醋酸盐）。

实施例1.一般NMR（核磁共振）法。

¹H光谱可通过美国Varian公司的MercuryVX-300型核磁共振波谱仪，用氚代氯作为溶剂获得(特别注明除外)。¹³C NMR光谱75.46MHz通过美国Varian公司的MercuryVX-300型核磁共振波谱仪获得。化学位移（δ）按百万分率（ppm）记录，以四甲基硅烷（TMS）为基准，耦合常数（J值）的单位为赫兹（Hz）。

实施例2.HPLC（高效液相色谱法）。

在同等条件下，以1:1(体积/体积)的甲醇-水混合物作为流动相，运用尺寸排阻色谱柱(PolySep-GFC-P3000,Phenomenex)，进行HPLC(高效液相色谱法)分析。洗脱峰在275nm处使用紫外（UV）检测器监测。要检测是否存在游离PEG和确认聚乙二醇化共轭物的存在，需要使用蒸发光散射检测器（ELSD），即型号为5000的蒸发光散射检测器（Alltech公司）。在蒸发光散射检测器和UV分析的基础上，最终聚乙二醇化产品是不含原生药，通过高效液相色谱法检测其纯度≥95％

实施例3.分析丰加霉素和聚乙二醇共轭物中丰加霉素的含量。

在室温下，用pH10.8的50mM的Na₂CO₃对的测试样品溶液（1mg/mL）和四到五种不同浓度的标准丰加霉素溶液（从10ug/mL到100ug/mL）进行处理，时间为两个小时。运用反相高效液相色谱法（色谱柱为Aqua C18,150×4.6mm

）测量275nm处紫外吸光度，通过该吸光度分析所得溶液中丰加霉素的含量（按标准溶液计量）。

实施例4.聚乙二醇轭合物水解率的含量测定。

利用由（a）0.05M的TFA缓冲液和（b）乙腈组成的梯度流动相通过C18反相色谱柱（朱皮特）得到水解率。使用1ml/min流量，并使用UV检测器在260nm处监测丰加霉素。对于在血浆中水解，衍生物是溶解在浓度为20mg/ml的乙腈/甲醇溶液中。该溶液分装入容积为100μL的小瓶中，并在真空中除去溶剂。残余物中，加入100μL的血浆，然后振荡10秒钟。溶液在37℃条件下的不同时期内进行培养。在适当的时间间隔里，将甲醇-乙腈的混合物（1:1，v/v，400μL）加入到小瓶中，并将混合物震荡1分钟，然后通过0.2mm的过滤膜进行过滤。将40μL等分滤液注入HPLC中。依据峰面积，估算出原生化合物和PEG共轭物的量，从PEG衍生物的消失，用线性回归分析计算不同介质中各化合物的半衰期。

实施例5.叔丁氧羰基-亮氨酸-丰加霉素（化合物3）的制备。

0℃下，无水DCM（3mL）加入到混有无水DMF(3mL)的丰加霉素（1，0.742mmol）溶液中，然后加入N-叔丁氧羰基-亮氨酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(2，0.742mmol)和DMAP(0.742mmol)。把该反应混合物加热至室温并搅拌一夜。在真空下浓缩该混合物，并将残余物用HPLC纯化，通过C18色谱柱，得到产物。¹H和¹³C NMR证实了这些结构。

实施例6.三氟乙酸亮氨酸-丰加霉素（化合物4）的制备。

将叔丁氧羰基-亮氨酸-丰加霉素（3，0.2mmol）和无水DCM-TFA（1mL/1mL）的混合溶液，在0℃下搅拌30分钟，用薄层色谱（TLC）监测反应进程。反应完成后，在真空中除去溶剂，并将残余物用无水乙醚洗涤数次，真空干燥。高效液相色谱法证实反应完成，将粗产物不经进一步纯化用于下一步骤。

实施例7.40k四臂聚乙二醇-氨基甲酸酯-亮氨酸-丰加霉素（化合物6）的制备。

在无水DCM-DMF（6mL/1mL）中，将40k四臂SC-聚乙二醇（5，800mg，0.02mmol），亮氨酸-丰加霉素三氟乙酸盐（4，0.2mmol），DIEA（0.2mmol）和DMAP（0.04mmol）混合后从0℃到室温搅拌一夜。在真空下浓缩该混合物，将残余物用DMF/IPA重结晶两次，得到700mg产物。¹³C NMR证实该产品的结构。通过UV测量丰加霉素的含量约为2.3-2.9％wt/wt，通过HPLC测量纯度为100％。

实施例8.叔丁氧羰基-Aib-丰加霉素（化合物8）的制备。

在无水DMF-DCM（3mL/3mL）中，将丰加霉素（1，0.963mmol），叔丁氧羰基-2-氨基异丁酸（7，0.963mmol），EDC HCL（1.059mmol），和DMAP（1.44mmol）混合后搅拌，经一夜从0℃升至室温。在真空下浓缩该混合物，并将残余物用HPLC纯化，通过C18色谱柱，得到产物。¹H和¹³C NMR证实了这些结构。

实施例9.三氟乙酸Aib-丰加霉素（化合物9）的制备。

叔丁氧羰基-Aib-丰加霉素（8，0.26mmol）和无水DCM-TFA（1mL/1mL）的混合物在0℃下搅拌30分钟，并用TLC监测反应进程。反应完成后，在真空中除去溶剂，并将残余物用无水乙醚洗涤数次，真空干燥。高效液相色谱法证实反应完成，将粗产物不经进一步纯化用于下一步骤。

实施例10.40k四臂聚乙二醇-氨基甲酸酯-Aib-丰加霉素（化合物10）的制备。

在无水DCM（15mL）中，将40k四臂SC-聚乙二醇（5，1.47g，0.037mmol），Aib-丰加霉素TFA盐（9，0.26mmol），DIEA（0.514mmol），DMAP（0.0735mmol）混合后从0℃到室温搅拌一夜。将反应混合物在真空下浓缩，将残余物用DMF/IPA重结晶两次，得到产物。¹³C NMR证实该产品结构。通过UV测量丰加霉素的含量约为2.3-2.9％wt/wt，通过HPLC测量纯度为96.7％。

实施例11.叔丁氧羰基-缬氨酸-丰加霉素（化合物12）的制备。

在无水DMF/DCM（3mL/3mL）中，将丰加霉素（1,0.963mmol），叔丁氧羰基-缬氨酸-氨基异丁酸（11,0.963mmol），EDC HCl（1.059mmol）和DMAP（1.44mmol）混合后从0℃到室温搅拌一夜。该混合物在真空下浓缩，将残余物用HPLC纯化，通过C18色谱柱，得到产物。

实施例12.TFA缬氨酸-丰加霉素（化合物13）的制备。

将叔丁氧羰基-缬氨酸-丰加霉素（12，0.26mmpl）和无水DCM-TFA（1mL/1mL）的混合物在0℃下搅拌30分钟，用TLC监测反应进程。反应完成后，在真空下除去溶剂，残余物用无水乙醚洗涤数次，真空干燥。用HPLC确认反应的完成，粗产物不经进一步纯化用于下一步骤。

实施例13.40k四臂聚乙二醇-氨基甲酸酯-缬氨酸-丰加霉素（化合物14）的制备。

无水DCM（15mL）中，将40K四臂SC-聚乙二醇（5，1.47g，0.037mmol），缬氨酸-丰加霉素三氟乙酸盐（13，0.26mmol），DIEA（0.514mmol）混合后从0℃到室温搅拌一夜。将反应混合物在真空下浓缩，并将残余物用DMF/IPA重结晶两次，得到产物。

实施例14.40k四臂聚乙二醇-天冬氨酸二甲酯（化合物17）的制备。

在无水DCM（15mL)中，将40K四臂PEG酸（15，0.037mmol），L-天冬氨酸二甲酯·盐酸（16，0.26mmol），EDC·HCl（0.52mmol），和DMAP（0.52mmol）混合后在室温下搅拌一夜。除去溶剂，并将残余物用2-丙醇结晶，得到产物。

实施例15.40k四臂聚乙二醇-二羟基天冬氨酸（化合物18）的制备。

化合物17（0.094mmol）和氢氧化锂（2.28mmol）溶解于水（20mL）中，在室温下搅拌6小时，然后用1N HCl酸化至pH值为3。该粗产物用DCM萃取，用冷藏DCM-乙醚结晶，得到产物。

实施例16.40k四臂聚乙二醇-天冬氨酸-2-（亮氨酸-丰加霉素）（化合物19）的制备。

在0℃中，把EDC·HCl（380.7mg，1.98mmol）加入到18（0.025mmol)，4（1.24mmol），NMM（3.97mmol），混有无水DCM（10mL）和DMF（10mL）的HOBT（1.49mmol）中，从0℃到室温搅拌该混合物一夜。除去溶剂，并将残余物用IPA重结晶，得到产物。

实施例17.40k四臂聚乙二醇-二甲酯亚氨基二乙酸（化合物21）的制备。

在无水DCM（15mL)中，将40k四臂聚乙二醇酸(15，1.47g，0.037mmol），化合物20（0.26mmol），DIEA（0.514mmol），和DMAP（0.0735mmol）混合后从0℃到室温搅拌一夜。将反应混合物在真空下浓缩，并将残余物用DMF/IPA重结晶两次，得到产物。实施例18.40k四臂聚乙二醇-二羟基亚氨基二乙酸（化合物22）的制备。

化合物21（0.094mmol）和氢氧化锂（2.28mmol）在溶解于水（20mL）中，在室温下搅拌6小时，然后用1N HCl酸化至pH为3。该粗产物用DCM萃取并用冷藏DCM-乙醚结晶，得到产物。

实施例19.40k四臂聚乙二醇-亚氨基二乙酸（亮氨酸-丰加霉素）（化合物23）的制备。

在0℃下，无水DCM（10mL）和DMF(10mL）中，将EDC·HCl（380.7mg，1.98mmol）加入到化合物22（0.025mmol），化合物4（1.24mmol），NMM（3.97mmol），和HOBT（1.49mmol）的混合物中。从0℃到室温搅拌该混合物一夜。除去溶剂，并将残余物用IPA重结晶，得到产物。

实施例20.40k四臂聚乙二醇-酰胺-亮氨酸-丰加霉素（化合物25）的制备。

在0℃下，无水DCM（10mL）和DMF（10mL）中，将EDC·HCl(380.7mg,1.98mmol)加入到化合物24(0.025mmol)，化合物4(1.24mmol)，NMM(3.97mmol)和HOBT(1.49mmol)的混合物中。从0℃到室温搅拌该混合物一夜。除去溶剂，并将残余物用IPA重结晶，得到产物。

实施例21.40k四臂聚乙二醇-酰胺-Aib-丰加霉素（化合物26）的制备。

在0℃下，无水DCM（10mL）和DMF（10mL）中，将EDC·HCl(380.7mg,1.98mmol)加入到化合物24(0.025mmol)，化合物9(1.24mmol),NMM(3.97mmol)，和HOBT(1.49mmol)的混合物中。从0℃到室温搅拌该混合物一夜。除去溶剂，并将残余物用IPA重结晶，得到产物。

实施例22.40k 4-star聚乙二醇-氨基甲酸酯-亮氨酸-丰加霉素（化合物28）的制备。

在无水DCM（15mL）中将40k 4-star琥珀酰亚胺碳酸酯基聚乙二醇(27,1.47g,0.037mmol)，亮氨酸-丰加霉素三氟乙酸盐(4,0.26mmol)，DIEA(0.514mmol,，和DMAP(0.0735mmol)混合从0℃到室温搅拌一夜。将反应混合物在真空下浓缩，并将残余物用DMF/IPA重结晶两次，得到产物。

实施例23.40k 4-star聚乙二醇-氨基甲酸酯-氨基异丁酸-丰加霉素（化合物29）的制备。

在无水DCM（15mL）中，将40k 4-star琥珀酰亚胺碳酸酯基聚乙二醇(27,1.47g,0.037mmol)，氨基异丁酸-丰加霉素三氟乙酸盐(9,0.26mmol)，DIEA(0.514mmol)，和DMAP(0.0735mmol)混合从0℃到室温搅拌一夜。将反应混合物在真空下浓缩，并将残余物用DMF/IPA重结晶两次，得到产物。

实施例24.40k 4-star聚乙二醇-天冬氨酸二甲酯（化合物31）的制备。

在无水DCM（15mL）中，将40k 4-star聚乙二醇酸(30，0.037mmol)，L-天冬氨酸二甲酯盐酸(16,0.26mmol)，EDC·HCl(0.52mmol),和DMAP(0.52mmol)混合，在室温下搅拌一夜。除去溶剂，并将残余物用2-丙醇结晶，得到产物。

实施例25.40k 4-star聚乙二醇-二羟基天冬氨酸（化合物32）的制备。

化合物31（0.094mmol）和氢氧化锂（2.28mmol）溶解于水（20mL）中，在室温下搅拌6小时，然后用1N HCl酸化至pH为3。该粗产物DCM萃取并用冷藏DCM-乙醚结晶，得到产物。

实施例26.40k 4-star聚乙二醇-天冬氨酸（亮氨酸-丰加霉素）2（化合物33）的制备。

在0℃下，无水DCM（10mL）和DMF（10mL）中，将EDC·HCl（380.7mg,1.98mmol）加入到化合物32（0.025mmol），化合物4（1.24mmol），NMM（3.97mmol)，和HOBT（1.49mmol）的混合物中。从0℃到室温搅拌该混合物一夜。除去溶剂，并将残余物用IPA重结晶，得到产物。

实施例27.40k 4-star聚乙二醇-二甲酯亚氨基二乙酸（化合物34）的制备。

在无水DCM（15mL）中，将40k 4-star聚乙二醇酸(30，1.47g，0.037mmol)，化合物20（0.26mmol)，DIEA(0.514mmol)，和DMAP(0,0735mmol)混合从0℃到室温搅拌一夜。将反应混合物在真空下浓缩，并将残余物用DMF/IPA重结晶两次，得到产物。

实施例28.40k 4-star聚乙二醇-二羟基亚氨基二乙酸（化合物35）的制备。

化合物34（0.094mmol）和氢氧化锂（2.28mmol）溶解于水（20mL）中，在室温下搅拌6小时，然后用1NHCl酸化至pH为3。该粗产物DCM萃取和用冷藏DCM-乙醚结晶，得到产物。

实施例29.40k 4-star-聚乙二醇-2-（亮氨酸-丰加霉素）亚氨基二乙酸（化合物36）的制备。

在0℃下，无水DCM（10mL）和DMF（10mL）中，将EDC·HCl(380.7mg,1.98mmol)加入到化合物35(0.025mmol)，化合物4(1.24mmol)，NMM(3.97mmol)，和HOBT(1.49mmol)的混合物中。从0℃到室温搅拌一夜。除去溶剂，并将残余物用IPA重结晶，得到产物。

实施例30.40k八臂聚乙二醇-氨基甲酸酯-亮氨酸-丰加霉素（化合物38）的制备。

在无水DCM（15mL）中，将40k八臂琥珀酰亚胺碳酸酯基-聚乙二醇(37，0.019mmol)，亮氨酸-丰加霉素三氟乙酸盐（4，0.26mmol)，DIEA(0.514mmol)，和DMAP(0,0735mmol)混合，从0℃到室温搅拌一夜。将反应混合物在真空下浓缩，并将残余物用DMF/IPA重结晶两次，得到产物。

实施例31.40k八臂聚乙二醇-氨基甲酸酯-氨基异丁酸-丰加霉素（化合物39）的制备。

在无水DCM（15mL）中，将40k八臂琥珀酰亚胺碳酸酯基-聚乙二醇(37，0.019mmol)，氨基异丁酸-丰加霉素三氟乙酸盐（9，0.26mmol)，DIEA(0.514mmol)，和DMAP(0,0735mmol)混合，从0℃到室温搅拌一夜。将反应混合物在真空下浓缩，并将残余物用DMF/IPA重结晶两次，得到产物。

案例32.40k八臂聚乙二醇-二甲酯天冬氨酸（化合物41）的制备。

在无水DCM（15mL）中，将40k八臂聚乙二醇酸(40，0.019mmol)，L-天冬氨酸二甲酯盐酸(16,0.26mmol)，EDC·HCL(0.52mmol)，和DMAP(0,52mmol)混合，在室温下搅拌一夜。除去溶剂，并将残余物用2-丙醇结晶，得到产物。

实施例33.40k八臂聚乙二醇-二羟基天冬氨酸（化合物42）的制备。

化合物41（0.094mmol）和氢氧化锂（2.28mmol）溶解于水（20mL）中，在室温下搅拌6小时，然后用1N HCl酸化至pH为3。该粗产物用DCM萃取并用冷藏DCM-乙醚结晶，得到产物。

实施例34.40k八臂聚乙二醇-2-（亮氨酸-丰加霉素）天冬氨酸（化合物43）的制备。

在0℃下，无水DCM（10mL）和DMF（10mL）中，将EDC·HCl(380.7mg,1.98mmol)加入到化合物42(0.025mmol)，化合物4(1.2mmol)，NMM(3.97mmol)，和HOBT(1.49mmol)的混合物中。从0℃到室温搅拌该混合物一夜。除去溶剂，并将残余物用IPA重结晶，得到产物。

实施例35.40k八臂聚乙二醇-二甲酯亚氨基二乙酸（化合物44）的制备。

在无水DCM（15mL）中，将40k八臂聚乙二醇酸(40，1.47g，0.037mmol)，化合物20（0.26mmol），DIEA(0.514mmol)，和DMAP(0,0735mmol)混合后从0℃到室温搅拌一夜。将反应混合物在真空浓缩，并将残余物用DMF/IPA重结晶两次，得到产物。

实施例36.40k八臂聚乙二醇-二羟基亚氨基二乙酸（化合物45）的制备。

化合物44（0.094mmol）和氢氧化锂（2.28mmol）溶解于水（20mL）中，在室温下搅拌6小时，然后用1N HCl酸化至pH为3。该粗产物用DCM萃取并用冷藏DCM-乙醚结晶，得到产物。

实施例37.40k八臂聚乙二醇-2-（亮氨酸-丰加霉素）-亚氨基二乙酸（化合物46）的制备。

在0℃下，无水DCM（10mL）和DMF（10mL）中，将EDC·HCl(380.7mg,1.98mmol)加入到化合物45(0.025mmol)，化合物4(1.24mmol)，NMM(3.97mmol)，和HOBT(1.49mmol)的混合物中。从0℃到室温搅拌一夜。除去溶剂，并将残余物用IPA重结晶，得到产物。

实施例38.20km聚乙二醇-亮氨酸-丰加霉素（化合物48）的制备。

在0℃下，无水DCM（10mL）和DMF（10mL）中，将EDC·HCl(380.7mg,1.98mmol)加入到20km聚乙二醇-琥珀酰亚胺碳酸酯基(化合物47，0.050mmol)，化合物4(1.24mmol)，NMM(3.97mmol)，和HOBT(1.49mmol)的混合物中。从0℃到室温搅拌该混合物一夜。除去溶剂，并将残余物用IPA重结晶，得到产物。

实施例39.20km聚乙二醇-氨基异丁酸-丰加霉素（化合物49）的制备。

在0℃下，无水DCM（10mL）和DMF（10mL）中，将EDC·HCl(380.7mg,1.98mmol)加入到20km聚乙二醇-琥珀酰亚胺碳酸酯基(化合物47，0.050mmol)，化合物9(1.24mmol)，NMM(3.97mmol)，和HOBT(1.49mmol)的混合物中。从0℃到室温搅拌该混合物一夜。除去溶剂，并将残余物用IPA重结晶，得到产物。

实施例40.叔丁氧羰基-ext-尿素-丰加霉素（化合物52）的制备。

在0℃，在无水DMF（3mL）中，无水DCM（3ml）加入到丰加霉素（1，0.742mmol）溶液中，然后加入羰基二咪唑（50，0.742mmol），将混合物搅拌3小时，然后加入Boc-ext-NH₂（51，0.742mmol）。该反应混合物加热至室温，并搅拌一夜。在真空下浓缩该混合物，并将残余物用HPLC纯化，通过C18色谱柱，得到产物。¹H和¹³C NMR证实该结构。

实施例41.三氟乙酸ext-尿素-丰加霉素（化合物53）的制备。

Boc-ext-urea-丰加霉素(52,0.2mmol)和无水DCM-TFA(1mL/1mL)的混合物在0℃下搅拌30分钟，并用TLC监测反应进程。反应完成后，在真空中除去溶剂，并将残余物用无水乙醚洗涤数次，真空干燥。高效液相色谱法证实反应完成后，粗产物不经进一步纯化用于下一步骤。

实施例42.40k四臂聚乙二醇-氨基甲酸酯-ext-urea-丰加霉素(化合物54)的制备。

DCM-DMF（6mL/1mL）的混合物，与40k四臂琥珀酰亚胺碳酸酯基-聚乙二醇（化合物5，800mg,0.02mmol），ext-urea-丰加霉素三氟乙酸盐(化合物53，0.2mmol)，DIEA(0.2mmol)，和DMAP(0.04mmol)的混合物从0℃到室温搅拌一夜。将反应混合物在真空下浓缩，并将残余物用DMF/IPA重结晶两次，得到700mg产物。¹³C NMR证实该产品的结构。通过UV测量丰加霉素的含量约为2.3-2.9％wt/wt，通过HPLC监测纯度为100％。

实施例43：化合物（Ⅰ）母体分子的再生

通过监测聚合共轭物的消失和母体分子的出现来测量水解率，以上监测采取HPLC进程检测法，例如实施例4中关于PBS和老鼠血浆的描述。化合物6，10，和54中稳定性如下表所示。结果表明，本发明所述聚合共轭物在PBS（碳酸盐缓冲盐水）中是相当稳定的，在体内释放母体药物。

化合物	在血浆中t¹/₂	在PBS中t¹/₂
			6	2分钟	12.8小时
10	4.1小时	稳定
			54	稳定	稳定

实施例44：关于小鼠异种移植人类黑色素瘤的抑制肿瘤生长的功效

化合物6，10和54的抗癌功效已在移植人类黑色素瘤的实验鼠身上得到验证。首先，将人体黑色素瘤细胞（A375）注射入实验鼠体内以实现肿瘤的异种移植。然后分别在第1、5、9及13天，给这些实验鼠按5mg/kg的剂量施用丰加霉素，并按1或5mg/kg的剂量施用化合物6、10及54（具体用量视丰加霉素含量而定）。对照组的实验鼠只施用生理盐水。实验表明，与丰加霉素相比，化合物6和10可显著抑制肿瘤生长。实验结果如图18所示。在施用化合物6和10的实验鼠中，仅有一例尾部血管坏死的病案。相较不施用任何药物和只施用丰加霉素及只施用化合物54（实施例43结果表明：54未在实验鼠血浆及PBS中释放丰加霉素），化合物6和10可更有效地治疗黑色素瘤。在第二次试验中，所有实验鼠都未出现尾部血管坏死的症状。

Claims

1.一种含腺嘌呤核苷酸的化合物，其通式(I)如下：

其特征在于：

R为有1-32个聚合臂的非抗原性聚合物；

Y为-NHCH-或N；

Q₁，Q₂，和Q₃，独立地选自OH，离去基团，

Q₄，独立地选自OH或离去基团；

R₁，独立地选自H，C_1-10烷基，C_3-10支链烷基，C_3-8环烷基，C_2-10链烯基或C_2-10炔基；

J₁，独立地选自C或N；

Y₁，独立地选自O，S或CH₂；

R_b2，独立地选自氢，羟基，C_2-10链烯基，C_2-10炔基，C_2-10链烯氧基，C_3-10烯丙氧基，卤素，叠氮基，氨基或OR_c2；

R_b3，独立地选自氢，羟基，C_2-10链烯基，C_2-10炔基，C_2-10链烯氧基，C_3-10烯丙氧基，卤素(F)，叠氮基，氨基或OR_c3；

当J₁为碳，R_b4，独立地选自氢，卤素，C_1-10烷基，芳基，芳烷基，C_2-10链烯基，C_2-10炔基，C_1-10烷氧基，氰基，氰基烷基，-C(＝O)NH₂，羧酰胺，芳氧基，氨基，烷基氨基，芳基氨基，芳烷基，烷硫基，或芳硫基；当J₁为氮，R_b4为空；

R_b6，独立地选自氢，C_1-10烷基，(低烷基)，卤素(F，Cl)，C_1-10烷氧基，或C_1-10烷硫基；

R′_c1，独立地选自氢，羟基，低级烷基酯或它们的碳酸酯，C_1-10烷基，C_1-10烷氧基，氨基，叠氮基，卤素或非抗原性聚合物；

R_C3，独立地选自氢，C_1-10酰基，一磷酸，二磷酸，三磷酸，-CH₂CH₂OH，或CH₂CH₂F，C_1-10烷基，C_3-8环烷基，C_2-10链烯基，C_2-10炔基，或基本上非抗原性的聚合物；

(m1)和(m′1)独立地为0，1或2，假设当Y是N时，(m1)和(m′1)独立地为1或2；

(m2)为1-4的整数；

(q1)和(q2)独立地为0或1；且

(q3)为0或1-31的正整数。

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：化合物(I)中所含的腺嘌呤核苷酸数为1-64。

3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：R的总平均分子量为2,000-100,000道尔顿。

4.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：R包括聚亚烷基氧化物。

5.根据权利要求1所述的化合物，选自：

Z-M₁-CH₂CH₂O(CH₂CH₂O)_nCH₂CH₂-M₁-Z；与

A-(CH₂CH₂O)_nCH₂CH₂-M₁-Z，

其特征在于：

M₁，独立地为O或S；

Z，独立地为H，

Y，为-NHCH-或N；

Q₁，Q₂，和Q₃，独立地选自OH，离去基团；

Q₄，独立地选自OH或离去基团；

D为

A，为OH，C_1-6烷氧基，-COOH，或NH₂；

(d)为0或为1-10的正整数；

(z1)为或为1-29的正整数；

(n)为10-2300的正整数，使得R的总平均分子量为2,000-100,000道尔顿；

假设至少一个Z为

6.根据权利要求5所述的化合物，其特征在于：

Z为H，

其中，

(d)为0，1或2；

(m1)和(m′1)为1或2；且

至少一个Z为：

7.根据权利要求5所述的化合物，其特征在于：(q1)和(q2)均为0；Z独立地选自H，

(d)为0，1或2；且

至少一个Z为

8.根据权利要求5所述的化合物，其特征在于：(q1)和(q2)均为1；Z独立地选自

(d)为0，1或2；且

至少一个Z为

9.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：

Y₁为O；

J₁为碳；

R_b1，独立地选自羟基，或-CH₂-OR_c1；

Rb₂，独立地选自氢或OR_c2；

R_b3，独立地选自氢，或OR_c3；

R_b4，独立地选自氢，氰基或-C(＝O)NH₂；

R_b5为氢，胺，或-NH-NH₂；

R_b6为氢，F，或Cl；

R_c1，Rc₂，和R_c3，独立地选自氢，酰基，一磷酸，二磷酸，或三磷酸。

10.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：

R_b1，为-CH₂-OR_c1，其中R_c1为氢，一磷酸，二磷酸，或三磷酸；

R_b2与R_b3，均为羟基；

R_b4，独立地选自氰基，或-C(＝O)NH₂；且

R_b5和R_b6均为氢。

11.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：

Y₁为O；

J₁为N；R_b1为-CH₂-OR_c1，其中，R_c1为氢，一磷酸，二磷酸，或三磷酸；

R_b2，独立地选自氢或羟基；

R_b3，独立地选自氢，羟基或F；

R_b5为氢；且

R_b6为氢，F，或Cl。

12.根据权利要求5所述的化合物，其特征在于：D包括：

其中，

R’_b1，R’_b2与R’_b3为氢，一磷酸，二磷酸，或三磷酸；

R_b4为-CN，-C(＝O)NH₂，或氢；且

R_b5为氢，胺，或-NH-NH₂，或它们的药用盐。

13.根据权利要求1-12所述的化合物，其特征在于：R₁独立地选自H，C_1-6烷基，C_3-6支链烷基，或C_3-6环烷基；且R₂独立地选自C_1-6烷基，C_3-6支链烷基或C_3-6环烷基。

14.根据权利要求1-12所述的化合物，其特征在于：R₁为氢，且R₂为异丁基，或R₁和R₂均为甲基。

15.根据权利要求5所述的化合物，其特征在于：(n)为28-341的整数，使得R的总平均分子量为5,000-60,000道尔顿。

16.根据权利要求5所述的化合物，其特征在于：(n)为114-239的整数，使得R的总平均分子量为20,000-42,000道尔顿。

17.根据权利要求5所述的化合物，该化合物选自：

其中，

Z₁，Z₂，Z₃，和Z₄选自：

其中，

Q₁为羟基或

(d)为0，1或2；

(n)为10-2300的正整数，使得化合物聚合部分的总平均分子量为2,000-100,000道尔顿；且

所有其它变量的定义同前。

18.根据权利要求17所述的化合物，该化合物包括：

19.根据权利要求17所述的化合物，该化合物选自：

20.根据权利要求5所述的化合物，其特征在于：

选自：

21.根据权利要求1所述的化合物，该化合物选自：

其中，D为

且

所有其它变量的定义同前。

22.一种权利要求1所述的化合物(I)的制备方法，其特征在于：该方法包括，

(a)使一当量的腺嘌呤核苷酸与一或多当量的含有可用羧酸基团或活化羧酸基团的双功能间隔基在一定条件下反应，有效形成具有一个可用胺基的腺嘌呤核苷酸间隔酰胺中间体；

(b)使一或多当量的步骤(a)所得的中间体的聚合臂末端与一当量的活化的聚合物在一定条件下反应，有效形成化合物(I)：

23.一种使用权利要求1所述的化合物治疗癌症，抑制肿瘤细胞生长或增殖，治疗病毒感染，治疗动物体内VEGF的表达异常的疾病或病症的方法，其特征包括给动物施用有效数量的权利要求1所述的化合物或其药物盐。

24.根据权利要求23所述的方法，其特征在于：通过动物血流施用药物。

25.一种将腺嘌呤核苷酸酸类似物输送给哺乳动物的方法，该方法包括：

(a)形成一种腺嘌呤核苷酸酸类似物的聚合共轭物；且

(b)给该哺乳动物施用有效数量的权利要求1所述的化合物。

26.一种提高丰加霉素在哺乳动物体内治疗效果的方法，包括施用有效数量的权利要求1所述的化合物，其特征在于：丰加霉素附着到每聚合臂末端；R₁为氢，R₂为异丁基；且10分钟内，血液中释放的丰加霉素的T_1/2为10％-80％。