CN102847146A

CN102847146A - 一种预防罗非鱼链球菌病的疫苗

Info

Publication number: CN102847146A
Application number: CN2012103372670A
Authority: CN
Inventors: 肖丹; 汪开毓; 阳涛
Original assignee: Tongwei Co Ltd
Current assignee: Tongwei Agricultural Development Co Ltd
Priority date: 2011-09-15
Filing date: 2012-09-12
Publication date: 2013-01-02
Anticipated expiration: 2032-09-12
Also published as: CN102847146B

Abstract

本发明公开了一种疫苗，它是由无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）和药学上可接受的辅料或者载体制备而成；本发明公开了该疫苗在制备预防罗非鱼链球菌病的药物中的用途，以及一种联合用药物；本发明还公开了一种新的无乳链球菌菌株。本发明疫苗可有效刺激罗非鱼产生抗链球菌病的免疫力，预防罗非鱼链球菌病，保护率高，有较高的实用价值和良好的经济效益。

Description

一种预防罗非鱼链球菌病的疫苗

技术领域

本发明涉及一种鱼用疫苗，特别涉及一种预防罗非鱼链球菌病的疫苗。

背景技术

罗非鱼（Tilapia）为一种中小型鱼，它是世界水产业重点科研培养的淡水养殖鱼类，且被誉为未来动物性蛋白质的主要来源之一，原产于非洲，属于丽鲷科之热带鱼类，和鲈鱼相似。罗非鱼是我国重要的出口型经济鱼类之一，其健康养殖的意义重大。

但是，近年来在广东、海南、福建等罗非鱼主产区大规模的爆发罗非鱼链球菌病，波及范围广，病害控制难，给养殖户带来了巨大的经济损失。发病鱼表现为精神、食欲很差，体色发黑，离群打转游动，部分病鱼出现晶状体混浊，眼球突出甚至脱落的现象；疾病的发病率接近40%，死亡量与气温呈现明显的正相关性，气温在35℃以上时发病鱼的死亡率可高达100%，养殖户的损失惨重，据不完全统计，2009年该病对华南地区罗非鱼养殖造成的经济损失高达7亿人民币。据调查，罗非鱼病害往年已有发生，然而往年都能以氟苯尼考等药物很快控制，但近年来的病害来势凶猛，因耐药性等原因，药物控制效果差，养殖户损失惨重。“罗非鱼”作为海南人工养殖首要鱼种，若不能有效地预防和控制疾病的发生及蔓延，海南将面临“无鱼可养”的局面。因此，安全有效的治疗方式对于拯救海南罗非鱼养殖业显得迫在眉睫，疫苗免疫不会产生耐药性，是一种安全、有效、环保的方法，

引起链球病菌的病原菌有海豚链球菌、无乳链球菌、副乳房链球菌、格式乳球菌等。申请号：200580013779.X，发明名称：“无乳链球菌疫苗”的专利申请公开了一种疫苗，其中包含免疫有效量的分离β溶血性无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)的完整灭活细胞和β溶血性无乳链球菌培养物的浓缩提取物，菌株是保藏号为：NRRL B-30608和NRRL B-30607的无乳链球菌，根据实施例表2可以得知，将该疫苗以注射的方式免疫时，保护率为70~80%，以浸泡的方式免疫时，保护率为34~35%，该专利申请公开的疫苗实质上是灭活无乳链球菌与外毒素的二联疫苗，其安全性差，接种重量为5g的罗非鱼会致死；申请号：201010207289.6，发明名称：罗非鱼二联链球菌灭活疫苗的制备方法的专利申请公开了一种罗非鱼二联链球菌灭活疫苗，菌种是保藏号：CCTCCNO：M209279的海豚链球菌，以及保藏号为CCTCCNO： M209278的无乳链球菌，二者等比例混合制成罗非鱼二联链球菌灭活疫苗，胸腔或者腹腔注射免疫，保护率为85%左右，但用该无乳链球菌制备的单一疫苗的保护率却并不高。

现有技术公开的使用无乳链球菌制备的疫苗均是二联疫苗，制备方法复杂、成本高，存在安全性问题，需要寻找更为安全、成本低的疫苗。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种新的疫苗和新菌株。

本发明疫苗，它是由无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）和药学上可接受的辅料或者载体制备而成。

所述疫苗包含致免疫有效量的灭活的无乳链球菌以及药学上可接受的辅料或者载体。

所述的无乳链球菌是保藏号为ATCC51487无乳链球菌或者保藏号为CCTCC NO：M 2011271的无乳链球菌 WR-6。

分离株WR-6，鉴定为无乳链球菌 WR-6（Streptococcus agalactiae WR-6），于2011年7月28日保藏于中国典型培养物保藏中心（简称CCTCC，地址：中国.武汉.武汉大学），保藏号为：CCTCC NO：M 2011271。

所述致免疫有效量为不低于1×10⁶CFU/ml；优选地，所述的致免疫有效量为1×10⁶-1×10⁸CFU/ml。

所述辅料或者载体为水或吸附剂。

所述水为生理盐水或蒸馏水，所述吸附剂是沸石或硅藻土。

本发明还提供了前述疫苗在制备预防罗非鱼链球菌病的药物中的用途。

其中，所述的预防罗非鱼链球菌病的药物是通过口服、注射或者浸泡的方式给药的。

本发明还提供了一种联合用药物，它包含前述的疫苗以及透皮吸收促进剂且任选一种或多种药学上可接受的辅料或载体。

其中，所述透皮吸收剂为氮酮，或莨菪碱。

本发明最后提供了一种无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）菌株，它是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号为CCTCC NO：M 2011271的无乳链球菌WR-6。

本发明疫苗，用福尔马林灭活无乳链球菌菌液即得，注射免疫的保护率高达90%，用10倍正常注射剂量的疫苗攻毒时，未出现异常，为临床提供了一种新的、安全、保护率高、制备方法简单、成本低廉的无乳链球菌单联疫苗，可用于预防无乳链球菌引起的链球菌病。本发明保藏号为CCTCC NO：M 2011271的无乳链球菌WR-6灭活制备的单联疫苗的保护率高，临床应用前景良好。

附图说明

图116S rDNA扩增结果，1：空白对照；2：鉴定样品；M：DL2000DNA maker。

具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1菌株的分离鉴定

1、实验材料与方法

1.1实验材料

待鉴定的细菌从海南文昌的患病罗非鱼体内分离，分离培养基为BHI，培养温度为37℃，编号为WR-6。

试剂耗材16S rDNA通用扩增试剂盒(TAKARA)、BHI培养基、细菌生化微量鉴定管(杭州天和生物试剂有限公司)、Taq DNA聚合酶(TAKARA)、琼脂糖(TianGen)、DL2000DNA maker(TianGen)。

1.2实验方法

1.2.1革兰氏染色剂观察

取过夜培养的新鲜斜面一支，用接种环挑取少量菌体，涂在滴有少量无菌生理盐水的载玻片上，进行革兰氏染色，于显微镜下观察染色结果。

1.2.216S rDNA的扩增与分析

以提取的细菌基因组DNA作为模板，使用16S rDNA通用扩增引物扩增细菌的16S rDNA全长(PCR体系及扩增程序如下)，PCR产物经DNA纯化系统纯化后送上海生工生物工程技术服务有限公司进行序列测定。使用RDP数据库和NCBI Blast数据库进行16S rDNA序列比对分析，得到细菌的种属。

PCR体系：

阴性对照使用1μl的16S-free H₂O替代模板DNA。

PCR扩增程序：

1.2.3细菌生化鉴定

根据16S rDNA序列比对分析结果，对分离株进行生化鉴定，鉴定方法按照生化鉴定操作步骤进行。

2、鉴定结果

2.1培养及染色观察

WR-6为革兰氏阳性球菌，单个、成双、链状排列、长短不一。在血琼脂平板上35℃培养18~24h，形成灰白色、表面光滑、有乳光、圆形、β溶血的菌落。

2.216S rDNA扩增及分析

WR6菌株经16SrDNA扩增，结果如图1所示；测序表明该片段有1505bp，其16S rDNA序列为：

CCCGATGACTGACTCGGACGACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTAGAACGCTGATGTTTGGTGTTTACACTAGACTGATGAGTTGCGAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTGCCTCATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAAGAGTGATTAACACATGTTAGTTATTTAAAAGGAGCAATTGCTTCACTGTGAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAAAGGCTCACCAAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATGGACGGAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGAGAAGAACGTTGGTAGGAGTGGAAAATCTACCAAGTGACGGTAACTAACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTCTTTAAGTCTGAAGTTAAAGGCAGTGGCTTAACCATTGTACGCTTTGGAAACTGGAGGACTTGAGTGCAGAAGGGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACACCGGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTAGGCCCTTTCCGGGGCTTAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAG CAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTTCTGACCGGCCTAGAGATAGGCTTTCTCTTCGGAGCAGAAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTATTGTTAGTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTAGCGAGACTGCCGGTAATAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTTGGTACAACGAGTCGCAAGCCGGTGACGGCAAGCTAATCTCTTAAAGCCAATCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAGGAGCCAGCCGCCTAAGGTGGGATAGATGATGGGGTGAAGTCGAGCAGACAGCACCG

将获得的序列在RDP数据库进行在线Classifer，结果表明该菌属于链球菌属的细菌，再将获得的序列与Genbank中已报道的16S rDNA序列进行Blast分析，结果表明WR6在系统发育树上与streptococcus agalactiae聚为一簇，其同源性为99%，结合形态学和生化特征，将其鉴定为streptococcus agalactiae。

2.3生化鉴定结果

表1WR-6菌株的生理生化特征

测定项目	WR6	S.agalactiae^**
			接触酶	-	-
海藻糖	+	+
			山梨醇	-	-
马尿酸	+	+
			CAMP	+	+
VP	+	+
			七叶苷	-	-
6.5%NaCl	-	-
			PYR	-	-
蕈糖	+	+

注：“+”为阳性，“-”为阴性。

WR-6：分离自海南文昌发病的罗非鱼。

^**数据来源：临床微生物学诊断与图解(第二版).

3、结论

结合16S rDNA、形态学及生化特征，将WR6鉴定为无乳链球菌S. agalactiae，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M2011271。

实施例2罗非鱼无乳链球菌（WR-6）灭活疫苗的制备与免疫效果研究

1.材料与方法

1.1材料

罗非鱼无乳链球菌（WR-6）分离并鉴定的来自自然感染发生链球菌病的罗非鱼，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M2011271。

健康罗非鱼购自海南某养殖场，平均体重237±8.6g，实验前于水族箱内驯养1周。

1.2方法

1.2.1疫苗的制备

将无乳链球菌接种到BHI斜面培养基上37℃恒温培养24h，挑取菌落接种于BHI平板培养基上37℃恒温培养24h，用无菌生理盐水洗脱，调整菌液浓度为1.0×10⁸CFU/ml，再加入0.6%的福尔马林在37°C振荡灭活24-48h，即为全菌灭活疫苗，4°C环境中保藏备用。

1.2.2疫苗安全性检查

将制备的灭活全菌苗接种于BHI琼脂平板，37°C恒温培养24-48h后观察平板上是否有细菌生长以判定菌体疫苗灭活是否完全；同时采用腹腔注射的方法，将制备的菌体疫苗按正常接种量的5倍与10倍剂量接种健康罗非鱼进行人工感染实验，接种后观察14d，检查菌体疫苗是否对健康罗非鱼致病。

1.2.3保护性实验

试验分组：将240尾健康罗非鱼随机平均分成12组，每组20尾。将制备的灭活全菌苗10倍逐级稀释，分别采用浸泡、口服与注射三种免疫途径对罗非鱼进行免疫，同时采用生理盐水设置对照组（见表2），免疫后3周，采用罗非鱼无乳链球菌（WR-6）对免疫组与对照组的试验鱼进行人工攻毒感染，每尾试验鱼腹腔注射罗非鱼无乳链球菌（WR-6）1.0×10⁸CFU/ml病原菌0.2ml，观察各实验组的发病死亡情况，得出保护率，评定疫苗的免疫效果。

2 结果

2.1疫苗的安全性

经平板计数法得出福尔马林灭活疫苗中的含菌量1.0×10⁸CFU/ml。将该疫苗0.1ml接种于BHI平板，在28°C下培养24-48h，未发现细菌生长。制备灭活全菌疫苗对健康罗非鱼进行攻毒感染，观察14d未发现接种鱼发现异常。实验结果表明浓度为0.6%（V/V）的福尔马林在37°C条件下对病原菌进行48h的灭活，能将病原菌彻底灭活，制备的疫苗是安全的。

2.2疫苗的保护性

罗非鱼浸泡、口服与注射3周后，用无乳链球菌（WR-6）对免疫后的实验鱼进行人工感染实验。

实验结果如表2所示：

表2罗非鱼无乳链球菌（WR-6）灭活疫苗免疫后的保护情况

由表2可以看出，本发明全菌灭活疫苗，经浸泡的方式免疫后，保护率为30~60%，经口服的方式免疫后，保护率为35~75%，经注射的方式免疫后，保护率为50~90%；本发明疫苗以浸泡、口服与注射的方式免疫，最佳剂量均为1.0×10⁸CFU/ml；三种免疫途径中，注射免疫方式最优，口服免疫途径次之。

实验证明，本发明保藏号为CCTCC NO：M 2011271的无乳链球菌WR-6制备的疫苗在注射剂量为0.2ml/尾，菌体浓度为1.0×10⁸CFU/ml时，保护率高达90%，并且，用10倍正常注射剂量的疫苗攻毒时，未出现异常，安全性好，显著优于现有单一无乳链球菌制备的疫苗。

实施例3罗非鱼无乳链球菌（WR-6）与无乳链球菌标准菌株（ATCC51487）制备的灭活全菌疫苗的免疫效果比较研究

1.材料与方法

1.1菌种

罗非鱼无乳链球菌（WR-6）分离并鉴定的来自自然感染发生链球菌病的罗非鱼，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M 2011271

无乳链球菌标准菌株（ATCC51487）由四川农业大学鱼病研究中心赠送

1.2试验鱼

购于海南文昌某养殖场的健康罗非鱼（Tilapia），平均体重372±5.9g，实验前于水族箱内驯养1周。

1.3疫苗的制备

将罗非鱼无乳链球菌（WR-6）和无乳链球菌标准菌株（ATCC51487）分别接种于BHI平板，再用PBS洗下接种一系列的TSB肉汤经逐寄增菌培养，采用平板计数法确定细菌浓度后，用浓度为0.6%（V/V）福尔马林，37°C灭活48h，制成全菌灭活疫苗。

1.4疫苗安全性检查

将制备的灭活全菌苗接种BHI琼脂平板，37°C恒温培养24-48h后观察平板上是否有细菌菌生长以判定菌体疫苗中是否含有未灭活的病原菌；同时采用腹腔注射的方法，将制备的菌体疫苗按正常接种量的5倍与10倍剂量接种健康罗非鱼进行人工感染实验，接种后观察14d，检查菌体疫苗是否对健康罗非鱼致病。

1.5保护性实验

实验分组：将180尾健康罗非鱼随机平均分成9组，每组20尾。罗非鱼无乳链球菌（WR-6）和无乳链球菌标准菌株（ATCC51487）制备的灭活全菌疫苗分别采用浸泡、口服与注射三种途径对罗非鱼进行免疫，同时采用生理盐水设置对照组。

免疫后3周，采用罗非鱼无乳链球菌（WR-6）对免疫组与对照组的实验鱼进行人工攻毒感染，每尾实验鱼腹腔注射罗非鱼无乳链球菌（WR-6）1.0×10⁸CFU/ml病原菌0.2ml，观察各实验组的发病死亡情况，得出保护率。

2.结果

2.1疫苗的安全性

通过平板计数法得出福尔马林灭活疫苗中含菌量为1.0×10⁸CFU/ml。将该疫苗0.1ml接种于BHI琼脂平板，在37°C下培养24-48h，未发现细菌生长。制备灭活全菌疫苗对健康罗非鱼进行攻毒感染，观察14d未发现接种实验鱼异常。试验结果表明浓度为0.6%（V/V）的福尔马林在37°C条件下对病原菌进行48h的灭活，能将病原菌彻底灭活，制备的疫苗是安全的。

2.2疫苗的保护性

将罗非鱼无乳链球菌（WR-6）和无乳链球菌标准菌株（ATCC51487）制备的全菌灭活苗，采用浸泡、口服与注射三种免疫途径对健康罗非鱼进行免疫3周后，用罗非鱼无乳链球菌（WR-6）对免疫后的实验鱼进行人工感染实验。按照下列公式计算相对免疫保护率（RPS）：

RPS（%）=（对照组死亡率-实验组死亡率）/对照组死亡率×100%

结果如表3所示：

表3罗非鱼无乳链球菌（WR-6）与无乳链球菌标准菌株（ATCC51487）制备的疫苗的保护性比较

由表3可知，本发明两种全菌灭活疫苗，注射剂量为1.0×10⁸CFU/ml时，保护率分别为65~90%和50~65%；本发明两种疫苗的三种免疫途径中，注射免疫方式最优，保护率分别为65%和90%，口服免疫途径次之；罗非鱼无乳链球菌（WR-6）制备的全菌灭活疫苗免疫罗非鱼后对链球菌病的保护率明显高于无乳链球菌标准菌株（ATCC51487）制备的全菌灭活疫苗。

实验证明，本发明两种疫苗的安全性好，保护率高，其中，以保藏号为CCTCC NO：M 2011271的无乳链球菌WR-6制备的疫苗更优。

实施例4灭活疫苗水剂的制备

1.无乳链球菌灭活疫苗的制备

1.1菌种复苏

在无菌条件下，取4°C条件下保存的无乳链球菌种用接种环从菌种管中挑取少量细菌接种到10ml BHI肉汤，将接种后的肉汤放入水浴振荡器中，37°C，110r/min，振荡培养24h。

1.2菌液增殖培养

①初级培养

把复苏培养的菌液10ml接种再次接种到500ml BHI肉汤，将接种后的肉汤放入水浴振荡器中，37°C，110r/min，振荡培养24h。

②菌液次级培养

将初级培养的BHI肉汤均匀的涂布在制备好的BHI平板上，将涂布好的BHI平板放入37°C恒温培养箱中，培养48h（注意培养时间以菌苔长满整个平板为度）；在无菌工作室中，用灭菌的生理盐水冲洗平板上生长的菌苔，将洗下的菌悬液置于灭菌的输液瓶中。

③洗脱菌液扩大培养

将从平板上洗脱的菌液按每10ml接种200ml BHI肉汤，进行菌液的扩大培养，37°C，110r/min，振荡培养24h，得到高浓度的细菌悬液。

（1）菌液的计数

对增殖培养后的菌液采用平板稀释细菌计数方法进行计数

①选取大小一致的平板经清洗、高压灭菌后，制备BHI平板备用；

②无菌操作将在菌苗制备过程中取的菌液进行倍比（10n）稀释备用；

③将稀释的菌液取0.1ml涂布BHI平板，37°C，恒温箱中培养24小时，计数菌落个数；

④选择平均菌落数在30-300个之间稀释度的平板，以该稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数，则为该菌的细菌总数。

⑤疫苗中含有的细菌数合适的浓度为1.0×10⁸CFU/ml

（2）菌液的灭活

对扩大培养的菌液，按体积比例添加5-6%0的甲醛，放入水浴振荡器中，37°C，110r/min，振荡48h灭活。

（3）灭活效果检查

灭活后的菌悬液每次需进行灭活效量的检查，在无菌操作下用接种环挑取少量灭活的菌苗在BHI平板上划线，将划线后的BHI平板置于入37°C恒温培养箱中，培养48h，检查有无细菌生长，若有细菌生长需再进行灭活处理，若无细菌生长则进行下面的操作程序。

（4）菌苗的分装

灭活完全的疫苗，无菌操作条件下进行分装于500ml灭菌高温瓶中，并对橡胶塞有孔隙的采用石蜡封闭。分装好的灭活疫苗应置于4°C保存，备用。

制备成水剂时，浸泡免疫使用时可以与10mg/L的氮酮促渗剂联合应用，可同时混合使用，也可单独使用。

实施例5灭活疫苗粉剂的制备

1 冷冻干燥法

将无菌操作条件下分装好的福尔马林灭活全菌疫苗水溶液，放入真空冷冻干燥机进行预冻，待预冻达到一定温度时抽真空干燥。冻干结束后，充入干燥无菌的空气进入干燥箱，然后尽快地进行加塞封口，以防重新吸入空气中的水分。

2 低温烘干法

将无菌操作条件下分装好的福尔马林灭活全菌疫苗水溶液在低温条件下进行水分蒸发烘干，加入吸附剂沸石或硅藻土低温烘干，烘干后的粉剂存放于无菌的玻璃瓶中。整个操作过程需在无菌条件下进行，烘干温度在40°C-50°C，以免影响抗原性。

干燥后加入辅料可溶性淀粉，得到全菌苗粉剂，规格：1.0×10⁸CFU/g。

综上，本发明疫苗安全性强、保护率高，制备方法简单、成本低廉，具有较高的实用价值和良好的经济效益，本发明保藏号为CCTCC NO：M2011271的无乳链球菌WR-6，制备的疫苗保护率高，工业应用前景良好。

Claims

1.一种疫苗，其特征在于：它是由无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）和药学上可接受的辅料或者载体制备而成。

2.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于：所述疫苗包含致免疫有效量的灭活的无乳链球菌以及药学上可接受的辅料或者载体。

3.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于：所述无乳链球菌是保藏号为ATCC51487无乳链球菌或者保藏号为CCTCC NO：M 2011271的无乳链球菌WR-6。

4.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于：所述致免疫有效量为不低于1×10⁶CFU/ml。

5.根据权利要求4所述的疫苗，其特征在于：所述致免疫有效量为1×10⁶~1×10⁸CFU/ml。

6.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于：所述辅料或者载体为水或吸附剂。

7.根据权利要求6所述的疫苗，其特征在于：所述水为生理盐水或蒸馏水，所述吸附剂是沸石或硅藻土。

8.权利要求1-7任意一项所述的疫苗在制备预防罗非鱼链球菌病的药物中的用途。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述的预防罗非鱼链球菌病的药物是通过口服、注射或者浸泡的方式给药的。

10.一种联合用药物，包含权利要求1-7任意一项所述的疫苗以及透皮吸收促进剂且任选一种或多种药学上可接受的辅料或载体。

11.根据权利要求10所述的联合用药物，其特征在于：所述透皮吸收剂为氮酮，或莨菪碱。

12.一种无乳链球菌（Streptococcus agalactiae)，其特征在于：它是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号为CCTCC NO：M 2011271的无乳链球菌WR-6。