CN102846674B

CN102846674B - 一种中药微生态组合物及其制备方法

Info

Publication number: CN102846674B
Application number: CN201210320425.1A
Authority: CN
Inventors: 吴红云; 李建正; 王卫芳
Original assignee: Zhengzhou Houyi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Shenyang yunken Feed Co. Ltd.
Priority date: 2012-08-31
Filing date: 2012-08-31
Publication date: 2014-06-11
Anticipated expiration: 2032-08-31
Also published as: CN102846674A

Abstract

本发明公开了一种中药微生态组合物，具体是采用黄芪、白术、防风、党参、黄连、大青叶、连翘、金银花、鱼腥草、柴胡、夏枯草、桂皮、甘草提取液来培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、动物双歧杆菌、乳酸菌和酿酒酵母微生物，得到的复合微生态中药组合物绿色安全，成本低廉，不但具有抑制动物肠道内有害微生物的作用还能增强非特异性免疫功能，对病毒性疾病有一定的预防和治疗效果，可用作畜禽饲料添加剂，也可单独使用。

Description

一种中药微生态组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于医用生物制品，具体涉及中药微生态组合物及其制备方法。

背景技术

20世纪中叶发现抗生素具有促进动物生长作用后，抗生素添加剂得到了广泛应用，对畜牧业的发展做出了巨大贡献。但大量添加亚治疗量的抗生素和促生长剂，除产生耐药性、有毒有害物质残留等严重影响人类健康与生存的问题外，还加剧了环境污染。为解决抗生素添加剂应用中存在问题，国内外学者进行了不懈的努力，研究出了许多可行的措施，其中微生态制剂是被认为替代抗生素的最有前途的产品。微生态制剂是一种由肠道益生菌复合培养而生产活菌制剂，可调节维持肠道内微生态平衡，增强机体的免疫机能和抗应激能力，提高生产性能。微生态制剂与其他药物不同，从理论上讲，它优于抗生素，克服了应用抗生素所造成的菌群失调、耐药菌株的增加以及药物的毒副作用。实践证明，微生态制剂的优越性即健康人群使用它来增进健康素质，提高健康水平，达到防病治病目的。

早在20世纪初(1907年)著名细菌学家梅切尼科夫即提出饮用酸奶可以延年益寿的假说以来．而微生态制剂真正用于防治疾病却是近20年的事。日本是世界上研制开发和利用微生态制剂较早的国家之一，其产品主要是双歧杆菌活菌制剂。在20世纪70年代初，已将双歧杆菌活菌制剂用于临床治疗腹泻。其他许多国家，例如德国、美国、法国、意大利、荷兰、英国、俄罗斯和韩国等亦都有不同类型的微生态制剂的产品，有的产品近年来已进入我国市场。但目前国际上对开发新微生态制品的主要方向已从单纯的“益生菌”或“益生元”转向结构合理、效果更加优越的“合生素”这一方面。即“益生菌”和“益生原”同时并存或并用的制剂。据日本报道：实验研究已经证明，在双歧杆菌活菌制剂中加入双歧因子（例如各种类型低聚糖）后，其效果比不加的制剂提高10～100倍。其次，正在开发能使活菌制剂有更好稳定性的新剂型，例如肠溶胶囊和微胶囊剂型。它们不仅能保持活菌在产品中延长存活时间，而且人体服用时更能通过胃酸这个屏障。保证有更多益生菌进入肠道而使其发挥有益的作用。再者，增加活菌制剂中的活菌数量（为10⁸～10⁹个/g)。此外，有些国家正在利用分子生物学和遗传工程技术、改造生理性细菌的遗传基因，将外源性有益基因转入生理性细菌中，构建成优良的工程菌株等的研究，从而研制出更多更有效的新型微生态制剂，造福于人类。

随着人们生活水平的提高、保健意识的增强，益生菌的研究和应用会更加的系统化，专业化。我国的益生菌研究也在逐渐与国际接轨,不依赖药物的益生菌保健法正在成熟当中，对于益生菌株的风险评估也应该投入更多的研究力量，出台包括筛选，效用，安全性和产品质量等方面的统一技术标准，为益生菌未来的大规模生产奠定良好的基础。有发现指出,在动物生产中将中草药与益生素配伍使用存在协同作用,具有提高机体免疫力、抑制有害菌等功效。然而,两者配伍使用时,中草药也可能对益生素有抑制作用。因此,开发对益生素无抑制作用的中草药对两者复合应用尤其重要。因此,利用现代科技加强研究、合理组方,中草药益生素联合制剂有可能取代饲料中添加的抗球虫药及其他抗生素,进一步解决动物产品中的药物残留问题。

发明内容

本发明目的在于提供一种中药微生态组合物。

本发明的另一个目的还在于提供上述中药微生态组合物的制备方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种由益生菌发酵生产动物用中药微生态组合物，含有的益生菌组成枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、动物双歧杆菌、乳酸菌、酿酒酵母比例为：15～25：10～15：35～40：10～20：10～20。

该微生态中药组合物所用发酵液中添加中药成分，所属的中药成分包含黄芪、白术、防风、党参、黄连、大青叶，连翘，金银花，鱼腥草，柴胡，夏枯草，桂皮，甘草。

本发明中药微生态生组合物制备方法可分为以下几个步骤：

（1）将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、动物双歧杆菌、乳酸菌和酿酒酵母每种菌种斜面培养生产的悬浮液分别单独扩大培养，枯草芽孢杆菌用液体完全培养基、地衣芽孢杆菌用肉汤培养基、双歧杆菌用PYG培养基、乳酸菌用MRS培养基、酿酒酵母用YPDA培养基；培养条件为25～32℃，培养时间为24-48h，活菌数为10⁸～10⁹个/mL；

（2）中药有效成分提取：将中药成分分别按比例混合后加入8～10倍水浸泡1～2h后，煎煮2～3h，第二次加入2～4倍体积的水再次煎煮1～2h,合并煎液，混匀，静置12～14h，用0.22μm孔径滤膜过滤，滤液浓缩至相对密度为0.86～0.89，制成浸膏，然后在浓缩液中加入30～50%乙醇，搅拌后静置12～24h,过滤回收乙醇，得到中药提取液；

（3）复合培养液培养微生物：酵母膏和磷酸二氢钠在121℃高压灭菌后,加入中药提取液,接着再按枯草芽孢杆菌：地衣芽孢杆菌：动物双歧杆菌：乳酸菌：酿酒酵母=15～25：10～15：35～40：10～20：10～20的比例在培养液中接种各种发酵微生物,余量为水；厌氧发酵，发酵时间24～48h，温度30～37℃，转速200～400r/min，当pH降为4时停止发酵。

其中,步骤(2)中各中药成分重量份数为：黄芪10～20份、白术5～10份、防风5～10份、党参3～5份、黄连5～10份、大青叶3～5份、连翘5～10份、金银花10～20份、鱼腥草5～10份、柴胡15～20份、夏枯草5～10份、桂皮5～10份、甘草5～10份。

步骤（3）中，酵母膏和磷酸二氢钠在培养液中的浓度分别为：5mg/mL，2mg/mL；中药提取液体积含量占培养液总体积的5%；微生物接种量占培养液总体积的4%。

研究表明,芽孢杆菌能促进肠道相关淋巴组织,使之处于高度反应的“准备状态”,同时使免疫器官的发育增快,淋巴细胞的数量增多,使动物的体液免疫和细胞免疫水平提高,增强机体抗病能力；乳杆菌以免疫调节因子的形式起作用,刺激肠道局部型免疫反应,提高机体抗体水平或巨噬细胞的活性,增强机体免疫功能。多种益生菌组合能够刺激动物产生干扰素,提高免疫球蛋白浓度和巨噬细胞活性,增强机体体液免疫和细胞免疫功能,防止疾病发生，该微生态中药组合物所含的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、动物双歧杆菌、乳酸菌、酿酒酵母五种益生菌在增强动物抗病能力及维持肠道菌群生态平衡方面发挥协同作用，实现了复合微生态制剂的最佳有效配比。

本发明所述中药组分各药物功能为：黄芩具有抑菌、利尿、抗炎、抗变态及解痉作用；白术健脾益气，燥湿利水；祛风解表，胜湿止痛，止痉；党参具有补中益气，健脾益肺的功效；黄连清热燥湿,泻火解毒；大青叶清热，解毒，凉血，止血；连翘清热解毒，消肿散结；金银花有抗病原微生物、疏热散邪抗炎解毒作用；鱼腥草具有清热解毒、利尿消肿、止血等功效；柴胡有疏散退热，舒肝，升阳之功能；夏枯草清肝、散结、利尿；桂皮有镇静、镇痛、解热、增加冠脉流量、升白、抑菌等抗放射作用；甘草有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药功效。将中草药与益生素配伍使用存在增强协同作用，中草药益生素联合制剂有可能取代饲料中添加的抗球虫药及其他抗生素，进一步解决动物产品中的药物残留问题。

该生物组合物能开发动物机体自身免疫调节机制，能刺激动物产生干扰素,提高免疫球蛋白浓度和巨噬细胞的活性,通过非特异性免疫调节因子等激发机体免疫力的增强，同时与添加的中药成分相互协同，达到从根源上预防动物患病的目的，从而减少抗生素药物的使用。

具体实施方式

实施例1

中药组分：黄芪10份、白术5份、防风5份、党参3份、黄连5份、大青叶3份，连翘5份，金银花10份，鱼腥草5份，柴胡15份，夏枯草5份，桂皮5份，甘草5份；

制备方法:

（1）将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、动物双歧杆菌、乳酸菌和酿酒酵母每种菌种斜面培养生产的悬浮液分别单独扩大培养，枯草芽孢杆菌用液体完全培养基、地衣芽孢杆菌用肉汤培养基、双歧杆菌用PYG培养基、乳酸菌用MRS培养基、酿酒酵母用YPDA培养基；培养条件为25℃，培养时间为48h，活菌数为10⁸个/mL；

（2）中药有效成分提取：将上述中药成分分别按比例混合后加入8倍水浸泡1h后，煎煮2h，第二次加入2倍体积的水再次煎煮1h,合并煎液，混匀，静置12h，用0.22μm孔径滤膜过滤，滤液浓缩至相对浓度为0.88，制成浸膏，然后在浓缩液中加入35%乙醇，搅拌后静置12h,过滤回收乙醇，得到中药提取液；

（3）复合培养液培养微生物：酵母膏0.5g和磷酸二氢钠0.2g在121℃高压灭菌后,加入中药提取液5mL，接着再按枯草芽孢杆菌：地衣芽孢杆菌：动物双歧杆菌：乳酸菌：酿酒酵母=15：10：35：20：20的比例在培养液中接种各种发酵微生物,微生物接种量为4mL，水定容至100mL；采用厌氧发酵，发酵时间48h，温度30℃，转速200r/min，当pH降为4时停止发酵。

实施例2

中药组分：黄芪15份、白术8份、防风8份、党参4份、黄连8份、大青叶4份，连翘8份，金银花15份，鱼腥草8份，柴胡18份，夏枯草8份，桂皮8份，甘草8份；

制备方法:

（1）将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、动物双歧杆菌、乳酸菌和酿酒酵母每种菌种斜面培养生产的悬浮液分别单独扩大培养，枯草芽孢杆菌用液体完全培养基、地衣芽孢杆菌用肉汤培养基、双歧杆菌用PYG培养基、乳酸菌用MRS培养基、酿酒酵母用YPDA培养基；培养条件为30℃，培养时间为30h，活菌数为6×10⁸个/mL；

（2）中药有效成分提取：将上述中药成分分别按比例混合后加入10倍水浸泡2h后，煎煮3h，第二次加4倍体积的水再次煎煮2h,合并煎液，混匀，静置14h，用0.22μm孔径滤膜过滤，滤液浓缩至相对密度为0.86，制成浸膏，然后在浓缩液中加入35%乙醇，搅拌后静置14h,过滤回收乙醇，得到中药提取液；

（3）复合培养液培养微生物：酵母膏0.5g和磷酸二氢钠0.2g在121℃高压灭菌后,加入中药提取液5mL，接着再按枯草芽孢杆菌：地衣芽孢杆菌：动物双歧杆菌：乳酸菌：酿酒酵母=20：15：38：15：10的比例在培养液中接种各种发酵微生物,微生物接种量为4mL，水定容至100mL；采用厌氧发酵，发酵时间24h，温度37℃，转速400r/min，当pH降为4时停止发酵。

实施例3

中药组分：黄芪20份、白术10份、防风10份、党参5份、黄连10份、大青叶5份，连翘10份，金银花20份，鱼腥草10份，柴胡20份，夏枯草10份，桂皮10份，甘草10份；

制备方法：

（1）将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、动物双歧杆菌、乳酸菌和酿酒酵母每种菌种斜面培养生产的悬浮液分别单独扩大培养，枯草芽孢杆菌用液体完全培养基、地衣芽孢杆菌用肉汤培养基、双歧杆菌用PYG培养基、乳酸菌用MRS培养基、酿酒酵母用YPDA培养基；培养条件为32℃，培养时间为24h，活菌数为10⁹个/mL；

（2）中药有效成分提取：将上述中药成分分别按比例混合后加入9倍水浸泡1.5h后，煎煮2.5h，第二次加入3倍体积的水再次煎煮1.5h,合并煎液，混匀，静置13h，用0.22μm孔径滤膜过滤，滤液浓缩至相对密度为0.89，制成浸膏，然后在浓缩液中加入35%乙醇，搅拌后静置13h,过滤回收乙醇，得到中药提取液；

（3）复合培养液培养微生物：酵母膏0.5g和磷酸二氢钠0.2g在121℃高压灭菌后,加入中药提取液5mL，接着再按枯草芽孢杆菌：地衣芽孢杆菌：动物双歧杆菌：乳酸菌：酿酒酵母=25：12：40：10：15的比例在培养液中接种各种发酵微生物,微生物接种量为4mL，水定容至100mL；采用厌氧发酵，发酵时间32h，温度35℃，转速300r/min，当pH降为4时停止发酵。

抑菌试验

取中药微生态成品口服液1mL，进行常规活菌计数，结果表明各种活菌数均在10⁸～10⁹个之间，完全符合国家对于微生态制剂益生菌活菌数的要求标准。观察3个实施例制备的微生态制剂对动物肠道主要有害菌群的抑制效果。

表1微生态制剂对大肠杆菌的抑制效果

由上表结果综合分析表明，相对于空白对照，本发明三种实施例的微生态中药组合物均能不同程度抑制大肠杆菌，不同的配比组成对大肠杆菌抑制效果不同，其中以实施例3配比效果最佳。

动物试验

将本发明实施例3的微生态中药组合物添加家畜饲料，分别在不同时期测定仔猪重量，发现与未添加本专利微生态制剂的对照组相比，同期同等饲养条件下添加组的增重率及生产状况明显优于未添加组。

表2仔猪增重情况统计表

Claims

1.一种中药微生态组合物，其特征在于：将微生物接种到包含中药的培养液中进行发酵制备而成,包括以下步骤：

（1）将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、动物双歧杆菌、乳酸菌和酿酒酵母每种菌种斜面培养生产的悬浮液分别单独扩大培养；

（2）中药有效成分提取：将中药成分混合后加入8～10倍水浸泡1～2h后，煎煮2～3h，第二次加入2～4倍体积的水再次煎煮1～2h,合并煎液，混匀，静置12～14h，用0.22μm孔径滤膜过滤，滤液浓缩至相对密度为0.86～0.89，制成浸膏，然后在浓缩液中加入终浓度为30～50%乙醇，搅拌后静置12～24h,过滤回收乙醇，得到中药提取液；

（3）复合培养液培养微生物：酵母膏和磷酸二氢钠在121℃高压灭菌后,加入中药提取液,接着在培养液中接种枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、动物双歧杆菌、乳酸菌、酿酒酵母发酵微生物,余量为水；厌氧发酵，发酵时间24～48h，温度30～37℃，转速200～400r/min，当pH降为4时停止发酵；

上述步骤（2）中各中药成分重量份数为：黄芪10～20份、白术5～10份、防风5～10份、党参3～5份、黄连5～10份、大青叶3～5份、连翘5～10份、金银花10～20份、鱼腥草5～10份、柴胡15～20份、夏枯草5～10份、桂皮5～10份、甘草5～10份；

上述步骤（3）中接种微生物的悬浮液的体积比为：枯草芽孢杆菌：地衣芽孢杆菌：动物双歧杆菌：乳酸菌：酿酒酵母=15～25：10～15：35～40：10～20：10～20；

上述步骤（1）中枯草芽孢杆菌用液体完全培养基、地衣芽孢杆菌用肉汤培养基、双歧杆菌用PYG培养基、乳酸菌用MRS培养基、酿酒酵母用YPDA培养基；培养条件均为25～32℃，培养时间为24-48h，活菌数为10⁸～10⁹个/ml。

2.如权利要求1所述的一种中药微生态组合物，其特征在于：产品剂型可以为口服液、粉剂、片剂、颗粒剂、注射剂或其它药剂学上可以接受的剂型。

3.如权利要求2所述的一种中药微生态组合物，其特征在于：产品剂型为口服液。

4.如权利要求1所述的中药微生态组合物，其特征在于：步骤（3）中酵母膏和磷酸二氢钠在培养液中的浓度分别为：5mg/mL，2mg/mL；中药提取液体积含量占培养液总体积的5%；微生物接种量占培养液总体积的4%。