CN102846667A - 一种经低温干燥制备纳米美洲大蠊的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种经低温干燥制备纳米美洲大蠊的制备方法，经过低温处理、低温提取、低温减压浓缩、粉碎干燥、分离等步骤得到的纳米美洲大蠊粒径为0~100nm。通过本发明提供的制备方法得到的纳米美洲大蠊颗粒细小、均匀，分散性好，粒径为0~100nm；提高了吸收率和生物利用率；降低患者使用量和提高治疗效果；具有安全性，降低某些对胃肠的刺激。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种经低温干燥制备纳米美洲大蠊的制备方法。
背景技术
据文献记载，美洲大蠊是蜚蠊科中体积最大的昆虫，原产于南美洲，我国各地均有分布，尤以我国南方地区更为常见。美洲大蠊是传统的中药材，以干燥和鲜成虫入药，其性寒味咸，有辛辣味，有散瘀、消积、解毒、利水、消肿等功效；主治儿童疳积、扁桃腺炎、身体包块、痈疮肿痛和蜈蚣、毒蛇咬伤等。
近年来随着科技不断地发展，经多年研究发现，美洲大蠊表皮含有巩膜质和甲壳质、溴、锌、镍、猛、钾、钙、钛、氯、硫、硅、铝、镁等元素。肌肉水解13种氨基酸。此外，身体贮藏微生素B1、维生素B2、烟酸和抗坏血酸等，淋巴含海藻糖、海藻糖酶、糖蛋白、肌醇、原儿茶酸葡萄甙等。全体含麦角硫因、龙虾肌碱、胡芦巴碱、甘氨酸、甜菜碱、肛碱、三甲胺、腺嘌呤等。美洲大蠊的药理作用主要表现在抗肿瘤作用、提高免疫作用、保肝作用、促进组织修复作用、抗炎和镇痛作用等。
纳米中药是采用纳米技术将中药有效成分、有效部位、原药或其复方多种中药制成小于100nm的纳米粒复方制剂。其不是简单的将中药材进行粉碎至纳米数量级，而是针对中药的有效部分/成分进行纳米技术加工处理，达到纳米药物给药系统NDDS（Nanoparticle Drug Delivery System）要求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种制备纳米粒径小于100nm纳米美洲大蠊的制备方法，为了达到上述目的，需要将美洲大蠊鲜虫经低温干燥。
本发明采取的技术方案是：提供一种经低温干燥制备纳米美洲大蠊的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
A、低温处理，美洲大蠊成虫于0～-40℃冷库处死、保存；
B、低温微波提取，从冷库中取出，常温下解冻、除去杂质及非药用部位，将剩余美洲大蠊干燥虫体置于提取罐中，加入剩余美洲大蠊干燥虫体重量2～20倍的水并导入微波提取，使上述剩余美洲大蠊干燥虫体和水的混合液以20~30亿次/秒速度作极性变化运动，微波提取的温度为10~40℃，时间为0.5~8h；
C、低温减压浓缩，将步骤B得到的提取液在温度10~40℃下进行低温减压浓缩，时间为3~72h；
D、一次粉碎干燥，将步骤C低温减压浓缩后得到的块状物料，置于粉碎-干燥机，使物料进行一次粉碎干燥，粉碎-干燥机转速为500-4500转/分；
E、一次分离，经一次粉碎干燥的物料通过分级机排出粉碎-干燥机，得到纳米美洲大蠊和废物料；
F、二次粉碎干燥，一次分离得到的废物料被重新返回粉碎-干燥机进行二次粉碎干燥，粉碎-干燥机转速为500-4500转/分；
G、二次分离，经二次粉碎干燥的物料通过分级机排出粉碎-干燥机，得到纳米美洲大蠊和废物料；经一次分离和二次分离后得到的纳米美洲大蠊合并即为纳米美洲大蠊成品。
经一次分离和二次分离得到的纳米美洲大蠊粒径为0~100nm。
本发明优选的一种粉碎干燥条件为粉碎-干燥机的转速为2000转/分。
通过本发明提供的制备方法得到的纳米美洲大蠊加入药学上可接受的辅料或者辅助性成分制成更适宜于临床应用的剂型，如丸剂、散剂、片剂、栓剂、颗粒剂、膜剂、胶囊剂、微囊剂、滴丸剂、气雾剂、注射剂、膏剂或者口服溶液剂；上述剂型的药物组合物主要用于活血散瘀、解毒利疳、利尿消肿；用于癓瘕积聚，小儿疳积，脚气水肿，疔疮，肿毒及蛇虫咬伤、创面修复、原发性肝癌等。
通过本发明提供的制备方法得到的纳米美洲大蠊具有以下有益效果：
1、经低温处理（美洲大蠊成虫于0~-40℃冷库处死、保存）、低温微波提取（10~40℃）和低温减压浓缩（10~40℃），最大限度的保留了药物活性成分，如丙氨酸等；
2、颗粒细小、均匀，分散性好，粒径为0~100nm；
3、提高了吸收率和生物利用率；
4、降低患者使用量和提高治疗效果；
5、具有安全性，降低某些对胃肠的刺激。
具体实施方式
下面结合实施例和试验例对本发明进行详细的描述，但它们不是对本发明的进一步限制。
实施例1：美洲大蠊成虫于0℃冷库处死、保存；从冷库中取出100Kg美洲大蠊成虫，常温下解冻、除去杂质及非药用部位，将剩余美洲大蠊干燥虫体置于提取罐中，加入剩余美洲大蠊干燥虫体重量2倍的水并导入微波提取，使上述剩余美洲大蠊干燥虫体和水的混合液以20~30亿次/秒速度作极性变化运动，微波提取的温度为10℃，时间为0.5h；将得到的提取液在温度10℃下进行低温减压浓缩，时间为3h；将低温减压浓缩后得到的块状物料，置于粉碎-干燥机，使物料进行一次粉碎干燥，粉碎-干燥机转速为500转/分；经一次粉碎干燥的物料通过分级机排出粉碎-干燥机，得到粒径为0~100nm的纳米美洲大蠊和废物料；一次分离得到的废物料被重新返回粉碎-干燥机进行二次粉碎干燥，粉碎-干燥机转速为500转/分；经二次粉碎干燥的物料通过分级机排出粉碎-干燥机，得到粒径为0~100nm的纳米美洲大蠊和废物料；经一次分离和二次分离后得到的纳米美洲大蠊合并即为纳米美洲大蠊成品。
本实施例得到的纳米美洲大蠊粒径在0~100nm，体表面积大，晶界处的原子数比率高达15~50%；经检测，该美洲大蠊纳米提取物的干燥品中含总氨基酸以丙氨酸（C3H7NO2）计为12.0%（质量百分比）。
实施例2：美洲大蠊成虫于-10℃冷库处死、保存；从冷库中取出100Kg美洲大蠊成虫，常温下解冻、除去杂质及非药用部位，将剩余美洲大蠊干燥虫体置于提取罐中，加入剩余美洲大蠊干燥虫体重量5倍的水并导入微波提取，使上述剩余美洲大蠊干燥虫体和水的混合液以20~30亿次/秒速度作极性变化运动，微波提取的温度为20℃，时间为2h；将得到的提取液在温度20℃下进行低温减压浓缩，时间为15h；将低温减压浓缩后得到的块状物料，置于粉碎-干燥机，使物料进行一次粉碎干燥，粉碎-干燥机转速为4500转/分；经一次粉碎干燥的物料通过分级机排出粉碎-干燥机，得到粒径为0~100nm的纳米美洲大蠊和废物料；一次分离得到的废物料被重新返回粉碎-干燥机进行二次粉碎干燥，粉碎-干燥机转速为4500转/分；经二次粉碎干燥的物料通过分级机排出粉碎-干燥机，得到粒径为0~100nm的纳米美洲大蠊和废物料；经一次分离和二次分离后得到的纳米美洲大蠊合并即为纳米美洲大蠊成品。
本实施例得到的纳米美洲大蠊粒径在0~100nm，体表面积大，晶界处的原子数比率高达15~50%；经检测，该美洲大蠊纳米提取物的干燥品中含总氨基酸以丙氨酸（C3H7NO2）计为14.9%（质量百分比）。
实施例3：美洲大蠊成虫于-20℃冷库处死、保存；从冷库中取出100Kg美洲大蠊成虫，常温下解冻、除去杂质及非药用部位，将剩余美洲大蠊干燥虫体置于提取罐中，加入剩余美洲大蠊干燥虫体重量10倍的水并导入微波提取，使上述剩余美洲大蠊干燥虫体和水的混合液以20~30亿次/秒速度作极性变化运动，微波提取的温度为30℃，时间为4h；将得到的提取液在温度30℃下进行低温减压浓缩，时间为30h；将低温减压浓缩后得到的块状物料，置于粉碎-干燥机，使物料进行一次粉碎干燥，粉碎-干燥机转速为2000转/分；经一次粉碎干燥的物料通过分级机排出粉碎-干燥机，得到粒径为0~100nm的纳米美洲大蠊和废物料；一次分离得到的废物料被重新返回粉碎-干燥机进行二次粉碎干燥，粉碎-干燥机转速为2000转/分；经二次粉碎干燥的物料通过分级机排出粉碎-干燥机，得到粒径为0~100nm的纳米美洲大蠊和废物料；经一次分离和二次分离后得到的纳米美洲大蠊合并即为纳米美洲大蠊成品。
本实施例得到的纳米美洲大蠊粒径在0~100nm，体表面积大，晶界处的原子数比率高达15~50%；经检测，该美洲大蠊纳米提取物的干燥品中含总氨基酸以丙氨酸（C3H7NO2）计为15.5%（质量百分比）。
实施例4：美洲大蠊成虫于-30℃冷库处死、保存；从冷库中取出100Kg美洲大蠊成虫，常温下解冻、除去杂质及非药用部位，将剩余美洲大蠊干燥虫体置于提取罐中，加入剩余美洲大蠊干燥虫体重量15倍的水并导入微波提取，使上述剩余美洲大蠊干燥虫体和水的混合液以20~30亿次/秒速度作极性变化运动，微波提取的温度为40℃，时间为6h；将得到的提取液在温度40℃下进行低温减压浓缩，时间为50h；将低温减压浓缩后得到的块状物料，置于粉碎-干燥机，使物料进行一次粉碎干燥，粉碎-干燥机转速为3000转/分；经一次粉碎干燥的物料通过分级机排出粉碎-干燥机，得到粒径为0~100nm的纳米美洲大蠊和废物料；一次分离得到的废物料被重新返回粉碎-干燥机进行二次粉碎干燥，粉碎-干燥机转速为3000转/分；经二次粉碎干燥的物料通过分级机排出粉碎-干燥机，得到粒径为0~100nm的纳米美洲大蠊和废物料；经一次分离和二次分离后得到的纳米美洲大蠊合并即为纳米美洲大蠊成品。
本实施例得到的纳米美洲大蠊粒径在0~100nm，体表面积大，晶界处的原子数比率高达15~50%；经检测，该美洲大蠊纳米提取物的干燥品中含总氨基酸以丙氨酸（C3H7NO2）计为14.0%（质量百分比）。
实施例5：美洲大蠊成虫于-40℃冷库处死、保存；从冷库中取出100Kg美洲大蠊成虫，常温下解冻、除去杂质及非药用部位，将剩余美洲大蠊干燥虫体置于提取罐中，加入剩余美洲大蠊干燥虫体重量20倍的水并导入微波提取，使上述剩余美洲大蠊干燥虫体和水的混合液以20~30亿次/秒速度作极性变化运动，微波提取的温度为30℃，时间为8h；将得到的提取液在温度30℃下进行低温减压浓缩，时间为72h；将低温减压浓缩后得到的块状物料，置于粉碎-干燥机，使物料进行一次粉碎干燥，粉碎-干燥机转速为1500转/分；经一次粉碎干燥的物料通过分级机排出粉碎-干燥机，得到粒径为0~100nm的纳米美洲大蠊和废物料；一次分离得到的废物料被重新返回粉碎-干燥机进行二次粉碎干燥，粉碎-干燥机转速为1500转/分；经二次粉碎干燥的物料通过分级机排出粉碎-干燥机，得到粒径为0~100nm的纳米美洲大蠊和废物料；经一次分离和二次分离后得到的纳米美洲大蠊合并即为纳米美洲大蠊成品。
本实施例得到的纳米美洲大蠊粒径在0~100nm，体表面积大，晶界处的原子数比率高达15~50%；经检测，该美洲大蠊纳米提取物的干燥品中含总氨基酸以丙氨酸（C3H7NO2）计为13.6%（质量百分比）。
参比实施例：
美洲大蠊提取物制剂的制备：
a、粗碎：将干燥的美洲大蠊进行粉碎，制得美洲大蠊粗粉，备用；
b、浸泡：按照每100kg的粗粉加入3~5倍量的水，在70~78℃的温度条件下浸泡0.5~2小时制得粗粉混合液，备用；
c、三次提取：粗粉混合液采用煎煮的方法进行三次提取，对粗粉混合液进行第一次提取时，提取时间为7~9小时；然后向经第一次提取后的余液中加入余液2~4倍量的水后进行第二次提取，提取时间为5~7小时；最后向经第二次提取后的余液中加入余液2~4倍量的水后进行第三次提取，提取时间为3~5小时，分别制得三次的提取液，备用；
d、第一次过滤：将三次的提取液合并混合，然后进行过滤制得一级滤液，备用；
e、第一次浓缩：将一级滤液浓缩至70~90℃时相对密度为1.05~1.25的一级浓缩液，备用；
f、醇化处理：向一级浓缩液中逐渐加入浓度为93~97%w/w的乙醇，并充分搅拌，使其含醇量达到45~55%为止，在70~90℃的温度条件下保温20~40分钟，然后静置10~14小时，制得醇化液，备用；
g、第二次过滤：将醇化液弃去上层油脂，下层药液进行过滤制得二级滤液，备用；
h、第二次浓缩：将二级滤液进行乙醇回收处理后，浓缩至70~90℃时相对密度为1.15~1.30的二级浓缩液，备用；
i、膏剂制备：将二级浓缩液在常压条件下浓缩至水分≤25~35%的膏剂，即得含美洲大蠊提取物，备用；
成药：按照有效成分混合物（美洲大蠊提取物）:纯化水:甘油=1000g:800~1200ml:4~6ml的重量比向有效成分混合物中加入纯化水和甘油，充分搅拌均匀，经板框过滤，滤液煮沸30分钟后，分装成100ml/瓶或50ml/瓶，再经高温高压灭菌消毒，冷至室温，即得成药。
试验例：
以本发明提供的制备方法制备的纳米美洲大蠊为活性成分，加入药学上可接受的辅料或者辅助性成分制成用于治疗散瘀消肿病症的药物组合物，可以制成散剂、膏剂、片剂、胶囊等多种形式，以满足不同患者的用药习惯
以实施例1~5制备的纳米美洲大蠊为散剂。
上述散剂用于治疗散瘀消肿病症的临床试验数据：
一、患者分组资料：
散瘀消肿患者（包括原发性肝癌手术切除后复发或转移和无法手术切除带瘤的患者以及经手术治疗需创面修复的患者）175例，符合诊断标准。随即分为治疗组和对照组，治疗组125例，男性65例，女性60例，年龄16~40岁；对照组50例，男性25例，女性25例，年龄16~40岁。两组患者年龄、性别和病程经统计学处理，差异无显著性意义，具有可比性。
二、治疗方法：
治疗组1~5：取按照实施例1~5中制备方法制得的纳米美洲大蠊散剂，四川好医生攀西药业有限责任公司生产，口服，一次2~5g；一日3次；连续服用1个月；
对照组1：云南白药酊，云南白药集团股份限公司生产，口服，一次3~5ml，一日3次；连续服用1个月。
对照组2：美洲大蠊提取物制剂，按照参比实施例方法制备，口服，一次10ml，一日3次；连续服用1个月。
三、疗效比较结果：
表1所示为七组疗效比较，其中治疗组125例，对照组50例，表2所示为七组15天和1个月内疗效比较（表1和表2中n代表人数）。
评判标准：
治愈：无瘀斑，无肿胀，无疼痛；
有效：疼痛轻，可意识到，但不影响日常工作休息，局部略有青紫，以紫为主，面积小于1cm×1cm；肿胀轻，周径增加小于5％；
无效：疼痛重，肿胀重，周径增加大于10％。局部青紫明显，以青为主，面积大于4cm×4cm。
表1：
表2：
| 组别 | n | 15天总有效率（%） | 1个月总有效率（%） |
| 治疗组1 | 25 | 37.0 | 88.0 |
| 治疗组2 | 25 | 39.0 | 88.0 |
| 治疗组3 | 25 | 45.0 | 96.0 |
| 治疗组4 | 25 | 41.0 | 92.0 |
| 治疗组5 | 25 | 40.0 | 92.0 |
| 对照组1 | 25 | 31.0 | 84.0 |
| 对照组2 | 25 | 36.0 | 88.0 |
四、试验结论：
表1所示为七组在治疗1个月时疗效比较，其中治疗组125例，总有效率治疗组分别为88%，88%，96.0%，92.0%，92.0%，对照组分别为84.0%，88.0%；治疗组优于对照组；表2所示为七组15天和1个月内疗效比较；治疗组治疗15天内，总有效率分别为37.0%，39.0%，45.0%，41.0%，40.0%；对照组分别为31.0%，36.0%；1个月的总有效率治疗组分别为88%，88%，96.0%，92.0%，92.0%，；对照组分别为84.0%，88.0。治疗组均优于对照组。由此可见，治疗组在治愈、有效、无效指标中均优于对照组，从数据显示来看，治疗组明显缩短患者治疗周期，效果更好，同时减少患者肝、肾、胃的不良反应。
本发明提供的以纳米美洲大蠊为活性成份的散剂，提高了细胞破壁率、比表面积、分子量小，能直接作用于病灶，显著提高其活性成分的溶出率和体内吸收率以及生物利用度，从而减少用药剂量和提高治疗效果；此外，该散剂相较传统工艺制得的的口感更好，更加卫生，由于提高了药剂吸收率和利用率，也相应的降低了成本，进而降低了患者使用门槛，值得临床推荐使用。
Claims (3)
1.一种经低温干燥制备纳米美洲大蠊的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
A、低温处理，美洲大蠊成虫于0～-40℃冷库处死、保存；
B、低温微波提取，从冷库中取出，常温下解冻、除去杂质及非药用部位，将剩余美洲大蠊干燥虫体置于提取罐中，加入剩余美洲大蠊干燥虫体重量2～20倍的水并导入微波提取，使上述剩余美洲大蠊干燥虫体和水的混合液以20~30亿次/秒速度作极性变化运动，微波提取的温度为10~40℃，时间为0.5~8h；
C、低温减压浓缩，将步骤B得到的提取液在温度10~40℃下进行低温减压浓缩，时间为3~72h；
D、一次粉碎干燥，将步骤C低温减压浓缩后得到的块状物料，置于粉碎-干燥机，使物料进行一次粉碎干燥，粉碎-干燥机转速为500-4500转/分；
E、一次分离，经一次粉碎干燥的物料通过分级机排出粉碎-干燥机，得到纳米美洲大蠊和废物料；
F、二次粉碎干燥，一次分离得到的废物料被重新返回粉碎-干燥机进行二次粉碎干燥，粉碎-干燥机转速为500-4500转/分；
G、二次分离，经二次粉碎干燥的物料通过分级机排出粉碎-干燥机，得到纳米美洲大蠊和废物料；经一次分离和二次分离后得到的纳米美洲大蠊合并即为纳米美洲大蠊成品。
2.根据权利要求1所述的经低温干燥制备纳米美洲大蠊的制备方法，其特征在于：所述粉碎-干燥机转速为2000转/分。
3.根据权利要求1所述的经低温干燥制备纳米美洲大蠊的制备方法，其特征在于：经一次分离和二次分离得到的纳米美洲大蠊粒径为0~100nm。
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