CN102824607B - 一种抑制肠癌血管拟态和微血管形成的中药组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种抑制肠癌血管拟态和微血管形成的中药组合物，它是由以下重量份的原料药制成：莪术6-12份、马齿苋25-35份、薜荔果10-20份、藤梨根25-35份、冬瓜子10-20份。本发明还提供上述中药组合物在制备治疗肠癌、抑制肠癌血管拟态形成和抑制肠癌微血管生成药物中的应用。其优点在于：能够抑制肠癌生长，具有抑制肠癌血管拟态和微血管形成的作用，且可改善小鼠毛色、活动、饮食以及腹泻等症状，尤其可改善小鼠后期体重情况，因而具备改善肠癌荷瘤鼠生存质量的作用；由纯中药制成，具有无毒副作用、价格低等优点，易于被患者接受；药物药味数少，原材料丰富，制备工艺简单，对环境无危害在，治疗肠癌方面有良好的应用前景。

Description

一种抑制肠癌血管拟态和微血管形成的中药组合物及其应用

技术领域

本发明涉及一种抑制肠癌血管拟态和微血管形成的中药组合物及其应用，具体地说，是一种以中草药为原料制备的中成药。

背景技术

大肠癌是常见恶性肿瘤之一，其全球发病率已位列肿瘤的2-3位。由于肠癌早期的诊断率较低，大部分一经发现，就已属中晚期，导致其死亡率极高。据NCHS（美国国家卫生统计中心）2010年的统计报告，肠癌死亡率占所有肿瘤的第2位，晚期患者5年生存率仅为8.1%。尽管传统的手术、放化疗以及较新的生物靶向治疗有一定疗效，但目前仍有大部分肠癌尤其是肠癌转移得不到有效控制，因此，提高疗效仍是肠癌治疗亟待解决的问题。

肿瘤生长依赖肿瘤微循环，抑制肿瘤微循环从而减少或阻断肿瘤细胞血供是抗肿瘤最重要的研究方向之一。多年来，人们对肿瘤微循环的认识多集中于内皮细胞依赖的肿瘤血管生成上，由此开发了一些包括大肠癌在内的肿瘤血管靶向药物，但临床疗效却差强人意。1999年血管拟态（Vascular Mimicry，VM）的发现为研究提供了新的方向。与经典的肿瘤血管结构完全不同，VM是高侵袭性肿瘤细胞为了满足自身血供，通过自身表型重塑和重构细胞外基质而形成的一种血管样管道，是以肿瘤细胞为结构细胞的一种全新的微循环模式。诸多研究证实，VM与肿瘤的生长、分化、转移以及不良的临床预后都有着密切的关系，VM的存在合理地解释了肿瘤血管靶向药物临床疗效不佳的原因。迄今为止，包括大肠癌在内的大多数肿瘤中都发现了VM的存在，因此，在未来肠癌治疗中重视VM的治疗将有望获得良好疗效。目前，VM尚无有效的治疗方法和药物，研究处于基础阶段。

中药是肠癌综合治疗的重要组成部分，其疗效已得到广泛认可，在肿瘤VM尚无有效解决办法的背景下，从中医药中寻找解决肠癌VM的方法是值得探索的一条路径。中医认为，肠癌属于积聚范畴，病机为正虚邪实，虚实夹杂。正虚以脾虚为主，基本上为众医家所公认；而邪实多为血瘀、痰湿、热毒，其中血瘀更为众医家所强调，如清代高秉均在《疡科心得集》中指出：“癌瘤者，非阴阳正气所结肿块，乃五脏血瘀，浊气痰滞而成”。王清任认为：“肚腹结块，必有形之血凝聚”。因此，归纳起来，肠癌主要病理机制为脾虚，血瘀兼有痰湿或热毒。但是目前关于中药复方抗肠癌VM形成相关的文献报道较少。

中国期刊《安徽中医学院学报》第30卷第1期，2011年2月，刊出的论文《抑癌方对小鼠结肠癌移植瘤微血管及血管拟态形成的影响》，公开了一种由莪术、木馒头、藤梨根、冬瓜子、马齿苋组成的中药复方对肠癌有较好的疗效，对小鼠移植瘤有一定的抑制作用，能够抑制结肠癌移植瘤中MV（微血管生成，Microvascular）和VM（血管生成拟态，Vasculogenic Mimicry）的表达，可能是抑癌方抗肠癌的作用机制之一。中国期刊《上海中医药杂志》2011年第45卷第1期，刊出的论文《抑癌方对小鼠移植性肠癌作用的实验研究》，通过动物模型试验证实了抑癌方（主要成分为木馒头、藤梨根、冬瓜子、莪术、马齿苋等）有抑制小鼠肠癌移植瘤生长及提高荷瘤鼠生存质量的作用，可促进肿瘤细胞凋亡，这可能是抑癌方抗肠癌作用的主要机制之一。但是上述论文并未公开该中药复方的原料药配比。本发明旨在提供一种能够在一定程度上抑制小鼠结肠癌移植瘤微血管及血管拟态的形成、进而可用于治疗肠癌的中药组合物。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种抑制肠癌血管拟态和微血管形成的中药组合物。

本发明的再一的目的是，提供一种上述中药组合物的用途。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种抑制肠癌血管拟态和微血管形成的中药组合物，其特征在于，它是由以下重量份的原料药制成：莪术6-12份、马齿苋25-35份、薜荔果10-20份、藤梨根25-35份、冬瓜子10-20份。

所述的莪术是8-10份，所述的马齿苋是27-33份，所述的薜荔果是12-18份，所述的藤梨根是27-33份，所述的冬瓜子是12-18份。

所述的莪术是9份，所述的马齿苋是30份，所述的薜荔果是15份，所述的藤梨根是30份，所述的冬瓜子是15份。

所述的中药组合物的药剂是片剂、胶囊剂、颗粒、口服液、合剂或糖浆剂。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

如上任一所述的中药组合物在制备治疗肠癌药物中的应用。

如上任一所述的中药组合物在制备抑制肠癌血管拟态形成药物中的应用。

如上任一所述的中药组合物在制备抑制肠癌微血管生成药物中的应用。

需要说明的是，所述的莪术的拉丁名为Rhizoma Curcumae Aeruginosae；所述的薜荔果俗称木馒头，是桑科榕属植物薜荔Ficus pumila L.的花序托（俗称果实）。

本发明的中药组合物优点在于：

1、具有抑制肠癌血管拟态形成和微血管生成的作用，能够抑制肠癌肿瘤生长，且可改善小鼠毛色、活动、饮食以及腹泻等症状，尤其可改善小鼠后期体重情况，因而具备改善肠癌荷瘤鼠生存质量的作用；

2、由纯中药制成，具有无毒副作用、价格低等优点，易于被患者接受；

3、药味数少，原材料丰富，制备工艺简单，对环境友好，在治疗肠癌方面有良好的应用前景。

附图说明

附图1是免疫组织化学（CD34）染色检测小鼠肠癌移植瘤组织中MV的形成（CD34^- PSA ⁺）。A：箭头所指（黄褐色物质即CD34^-+阳性物质，为内皮细胞所有）即MV，MV管腔中有血浆和血细胞（管腔中浅灰色物质），光学显微镜×1600；B：阴性对照组，光学显微镜×400；C：5-Fu对照组，光学显微镜×400；D：中药高剂量组，光学显微镜×400；E：中药中剂量组，光学显微镜×400；F：中药低剂量组，光学显微镜×400。

附图2是免疫组织化学（CD34）和PSA双染色检测小鼠肠癌移植瘤组织中VM形成（CD34^-PSA⁺）。A：箭头所指即肿瘤细胞和PAS阳性物质（环状的粉红色物质）形成的VM，VM管腔中有脱落的肿瘤细胞（管腔正中的深染物质）、血浆和血细胞（管腔中浅褐色物质），光学显微镜×4000；B：阴性对照组，光学显微镜×400；C：5-Fu对照组，光学显微镜×400；D：中药高剂量组，光学显微镜×400；E：中药中剂量组，光学显微镜×400；F：中药低剂量组，光学显微镜×400。

附图3是TUNEL原位凋亡法检测小鼠肠癌移植瘤中细胞凋亡。A：红色箭头所指（深棕色阳性物质为细胞凋亡）光学显微镜×1600；B：阴性对照组，光学显微镜×400；C：5-Fu对照组，光学显微镜×400；D：中药高剂量组，光学显微镜×400；E：中药中剂量组，光学显微镜×400；F：中药低剂量组，光学显微镜×400。

具体实施方式

下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

实施例1  抑制肠癌血管拟态和微血管形成中药组合物的制备（一）

莪术6份、马齿苋35份、薜荔果10份、藤梨根35份、冬瓜子10份，常规方法煎煮。

实施例2  抑制肠癌血管拟态和微血管形成中药组合物的制备（二）

莪术12份、马齿苋25份、薜荔果20份、藤梨根25份、冬瓜子20份，常规方法煎煮。

实施例3  抑制肠癌血管拟态和微血管形成中药组合物的制备（三）

莪术6份、马齿苋25份、薜荔果20份、藤梨根35份、冬瓜子10份，常规方法煎煮。

实施例4  抑制肠癌血管拟态和微血管形成中药组合物的制备（四）

莪术12份、马齿苋25份、薜荔10份、藤梨根25份、冬瓜子10份，常规方法煎煮。

实施例5  抑制肠癌血管拟态和微血管形成中药组合物的制备（五）

莪术8份、马齿苋33份、薜荔果12份、藤梨根33份、冬瓜子12份，常规方法煎煮。

实施例6  抑制肠癌血管拟态和微血管形成中药组合物的制备（六）

莪术10份、马齿苋27份、薜荔果18份、藤梨根27份、冬瓜子18份，常规方法煎煮。

实施例7  抑制肠癌血管拟态和微血管形成中药组合物的制备（七）

莪术8份、马齿苋27份、薜荔果20份、藤梨根25份、冬瓜子10份，常规方法煎煮。

实施例8  抑制肠癌血管拟态和微血管形成中药组合物的制备（八）

莪术9份、马齿苋30份、薜荔果15份、藤梨根30份、冬瓜子15份，常规方法煎煮。

需要说明的是，实施例1-8所述的常规方法煎煮是中药汤剂常规的制作方法，即将所述的原料药加水煎煮成汤剂。

实施例9  抑制肠癌血管拟态和微血管形成中药组合物片剂/胶囊的制备

取实施例1-8任一所述的中药组合物，加9-11倍量水，煎煮2-3.5小时，滤出药汁。再加9倍量水，煎煮2.5小时，滤出药汁，合并二次煎液，静置，滤取上清液，浓缩，放冷，加浓缩液3倍量酒精，搅拌沉淀过夜。取上清液，浓缩至稠浸膏；加入制药辅料，真空干燥，粉碎制粒，压制成片剂或填充装胶囊。

实施例10  抑制肠癌血管拟态和微血管形成中药组合物颗粒的制备

取实施例1-8任一所述的中药组合物，加8-10倍量水，煎煮3小时，滤出药汁。再加10倍量水，煎煮2.5小时，滤出药汁，合并二次煎液，静置，滤取上清液，浓缩，放冷，加浓缩液2倍量酒精，搅拌沉淀过夜。取上清液，浓缩至稠浸膏；加适当制药辅料，制粒，干燥，整粒，得20g颗粒，分装10g/袋。

实施例11  抑制肠癌血管拟态和微血管形成中药组合物合剂/口服液/糖浆剂的制备

取实施例1-8任一所述的中药组合物，加8-11倍量水，煎煮3小时，滤出药汁。再加8倍量水，煎煮3小时，滤出药汁，合并二次煎液，静置，滤取上清液，浓缩，放冷，加浓缩液3.5倍量酒精，搅拌沉淀过夜。取上清液，浓缩至稠浸膏；加适当制药辅料，制成合剂、口服液或糖浆剂。

实施例12  本发明中药组合物抑制肠癌血管拟态和微血管形成的试验（一）

1 材料

1.1 动物与瘤株

清洁级昆明小鼠，雄性，体重20±2g，购于上海市斯莱克实验动物有限公司，许可证号：SCXK（沪）2003-2003；CT26细胞（小鼠结肠癌细胞），由中科院上海分院细胞库所提供。

1.2 药品与试剂

实施例8制备的中药组合物，煎煮至4g（生药含量）/ml的溶液，密封，4℃保存，临用前稀释（中药中剂量组按4倍生理盐水稀释，高剂量组按2.5倍稀释，低剂量按6.4倍稀释）。5-Fu，250mg/10ml，购于江苏恒瑞医药股份有限公司；CD34兔抗多克隆抗体，克隆号ZDP01，购于美国R&D公司；PAS溶液。

2 方法

2.1 小鼠皮下移植瘤造模及分组处理

①造模：取对数生长期的CT26细胞，用胰酶消化后制备单细胞悬液，浓度1×10⁶/ml，按0.2ml/只接种于小鼠右腋部皮下。

②分组及处理：待全部出瘤后，按瘤体大小随机分为五组，每组12只。阴性对照（NS）组：每只灌胃0.5mL生理盐水；本发明中药组合物高（YAH）、中（YAM）、低剂量（YAL）组：分别按5mg/d、10mg/d、15mg/d给药，每只0.5mL；化疗组：采用5-Fu（25mg/kg只）0.2ml腹腔注射，2次/周，共12天。

2.2 观察和检测

①观察项目：每日观察小鼠饮食、排便、活动状态、体重、移植瘤生长情况；实验结束后脱臼处死全部动物，称重；剥离瘤体，称瘤重。

②抑瘤率：按抑瘤率=[（阴性对照组平均瘤重－实验组平均瘤重）/阴性对照组平均瘤重]×100%计算。

2.3 CD34染色及MVD（微血管密度）测定

方法可参见文献：Weidner N. Current pathologic methods for measuring intratumoral microvessel density within breast carcinoma and other solidtumor. Breast Cancer Res Trent, 1995, 36(1):169-173. 具体如下：免疫组化Envision两步法检测CD34的表达，各组肿瘤组织切片常规脱蜡，柠檬酸高温抗原修复后，加3%过氧化氢，PBS洗，滴加CD34兔抗多克隆抗体1:200（50μl/组织块）4℃过夜，PBS洗，加二抗37℃孵育，DAB显色，苏木精复染，脱水封片。

MV判定标准：CD34阳性内皮细胞被染成黄褐色。由内皮细胞形成的条状、隙状等孤立或簇状结构并有管腔，且管腔小于8个红细胞大小者为微血管；相互分离的内皮细胞但无明显管腔亦按微血管计数。血管腔大于8个红细胞或管壁可见平滑肌者不计入内。

MV密度计数方法：先在低倍镜下（100倍）确定3个CD34阳性着色最密集的区域，然后在高倍视野（400倍）下计数微血管，取3个视野的均值作为微血管密度（MVD）。肿瘤内硬化区域和肿瘤细胞稀少区域内的微血管不进行计数。

2.4 CD34及PAS双重染色及VMD（血管生成拟态密度）测定

方法可参见文献：张诗武，郭华，张丹芳，赵秀兰，谷彦军，孙保存.恶性黑色素瘤血管生成拟态的形态学观察.中国肿瘤临床, 2005, 32(23):1329-1332. 本发明的方法在文献提供的方法上略有改动，具体如下：按Envision法进行CD34免疫组织化学染色，DAB显色后光学显微镜下观察，待血管内皮细胞染成棕黄色后，用水冲洗终止显色，用0.5%高碘酸溶液还原切片10 min，水流冲洗2 min后置于Schiff液中，避光处理10 min，随后用自来水冲洗，光学显微镜下观察出现樱桃红色（或粉红色）时，即用苏木精浅染细胞核，盐酸乙醇分化，氨水返蓝，乙醇梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶固封。光学显微镜下观察内皮细胞特异标记CD34阴性，细胞外基质PAS染色阳性者为有VM形成。每张病理切片任意选取5个视野计数VM数目，求其平均值即为肿瘤内VM密度。

2.5 统计学方法

应用SPSS 15.0软件进行统计学分析，数据用                                                

±S表示，进行单因素方差分析LSD两两比较，P<0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 小鼠一般状况

小鼠皮下移植瘤成功率均为100%（60/60）。实验过程中，阴性对照组及中药高剂量组荷瘤小鼠表现为皮毛无光泽，竖毛现象明显，活动迟缓。阴性对照组小鼠出现明显地厌食、腹泻、精神萎靡、消瘦及被毛脱落等症状，中药各组及化疗组不良反应相对较小。

3.2 各组小鼠皮下移植瘤瘤重及抑瘤率的比较

    小鼠皮下移植瘤瘤重及抑瘤率结果见表1。由表1可知，中药各组中肿瘤瘤重与阴性对照组相比较具有统计学意义，说明本发明的中药组合物确有一定抑制肠癌生长的作用。

表1　各组小鼠瘤重及抑瘤率的比较（

±S，n=12）

组别	瘤重	抑瘤率
			NS	3.275±0.21213
5-FU	1.012±0.44335 **	69.09
			YAH	2.487±0.55918 * Δ	24.06
YAM	2.310±0.45591 **Δ	29.47
			YAL	2.725±0.66076 * Δ	16.79

注意：*表示与阴性对照组比较：*P<0.05，**P<0.01；Δ表示与阳性对照药物5-FU比较：P<0.05。

3.3 各组肿瘤组织MV生成的比较

CD34是血管内皮细胞的标记物，表达于血管内皮细胞胞浆，黄褐色为染色阳性；其MVD表示微血管密度，反映肿瘤组织微血管生长情况。实验结果显示，中药各组及化疗组MVD均减少，与阴性对照组比较有统计学意义（P＜0.05），中药各组组间比较无统计学差异（P＞0.05）。具体结果见图1、表2。

表2  各组肠癌CT26 细胞小鼠移植瘤微血管密度的比较（

±S）

组别	MVD
		NS	13.3833±1.2226
5-FU	6.7556±0.96424 *
		YAH	7.6200±0.82379 *
YAM	5.9870±0.97950 **
		YAL	7.2591±0.75193 *

与阴性对照组比较：*P<0.05，**P<0.01。

3.4 各组肿瘤组织VM的比较

免疫组织化学/PAS双重染色显示部分肿瘤细胞表达PAS阳性物质，PAS阳性物质将外周肿瘤细胞同VM管腔分离，肿瘤细胞和PAS构成的VM结构中没有CD34阳性的内皮细胞衬覆，VM管腔结构的中间可以发现红细胞存在。阴性对照组肿瘤内VM数量较多，中药各组和化疗组VM减少，与阴性对照组比较均有统计学意义（P<0.05）；与化疗组比较，虽然中药各组VM无统计学差异（P＞0.05），但有减少的趋势。具体结果见图2、表3。

表3  各组肠癌CT26细胞小鼠移植瘤VMD的比较（

±S）

组别	VMD
		NS	7.8667±0.45802
5-FU	5.2288±0.27361 *
		YAH	4.3621±0.51914 **
YAM	4.7128±0.57866 *
		YAL	4.8109±0.23593 *

与阴性对照组比较：*表示P<0.05，**表示P<0.01。

以上实验结果表明，中药三个剂量组中肿瘤瘤重与阴性对照组相比较具有统计学意义，说明本发明中药组合物确有一定抑制肠癌生长的作用。免疫组化染色和免疫组化/PAS双染结果分别显示，阴性对照组癌巢间MV和VM丰富，与之相比较，中药各组瘤组织中MV和VM均减少（P<0.05），说明本发明中药组合物具有抑制肠癌微循环形成的作用。在抑制MV和VM上，中药各组与化疗组无统计学差异，甚至有个别剂量有强于化疗组的趋势，但在抑制移植瘤的生长上，中药各组均弱于化疗组（P<0.05），说明本发明中药组合物与5-FU在作用机制上存在差异，进一步提示抑制MV和VM形成可能是本发明中药组合物抗肠癌的主要作用机制。

实施例13  本发明中药组合物抑制肠癌血管拟态和微血管形成的试验（二）

1 材料

1.1 动物与瘤株

清洁级昆明小鼠，雄性，体重20±2g，购于上海市斯莱克实验动物有限公司，许可证号：SCXK（沪）2003-2003；CT26细胞（小鼠结肠癌细胞），由中科院上海分院细胞库所提供。

1.2 药品与试剂

实施例8制备的中药组合物，煎煮成4g生药含量/ml的溶液，密封，4℃保存，临用前稀释（中药中剂量组按4倍生理盐水稀释，高剂量组按2.5倍稀释，低剂量按6.4倍稀释）；5-Fu，250mg/10ml，购于江苏恒瑞医药股份有限公司；TUNEL试剂盒，购于南京凯基生物科技发展有限公司。

2 方法

2.1 小鼠皮下移植瘤造模及分组处理

①造模：取对数生长期的CT26细胞，用胰酶消化后制备单细胞悬液，浓度1×10⁶/ml，按0.2ml/只接种于小鼠右腋部皮下。

②分组及处理：待全部出瘤后，按瘤体大小随机分为五组，每组12只。阴性对照（NS）组：每只灌胃0.5mL生理盐水；本发明中药组合物高（YAH）、中（YAM）、低剂量（YAL）组：分别按5mg/d、10mg/d、15mg/d给药，每只0.5mL；化疗组：采用5-Fu（25mg/kg只）0.2ml腹腔注射，2次/周，共12天。

2.2 观察和检测　

①观察项目：每日观察小鼠饮食、排便、活动状态、体重（每三天称小鼠体重一次）、移植瘤生长情况；实验结束后脱臼处死全部动物，称重；剥离瘤体，称瘤重。

②抑瘤率：按抑瘤率=[（阴性对照组平均瘤重-实验组平均瘤重）/阴性对照组平均瘤重]×100%计算。

2.3 HE染色

取肿瘤组织，10%中性甲醛固定、石蜡包理，5μm连续切片，HE染色，光镜下观察。

2.4 TUNEL原位凋亡法检测

肿瘤细胞凋亡用TUNEL原位凋亡法检测，方法步骤严格按试剂盒说明书进行，同时设立阳性对照与阴性对照。细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞。凋亡细胞半定量分析：在400高倍视野下，每张切片计数5个高倍视野，分别计算每个视野细胞核数及凋亡阳性细胞核数，取均值，计算凋亡指数（AI）：AI（%）=（凋亡阳性的细胞核数/总计数的细胞核）×100%。

2.5 统计学方法

应用SPSS 15.0软件进行统计学分析，数据用（

±S）表示，进行单因素方差分析LSD两两比较，P<0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 小鼠一般状况

小鼠皮下移植瘤成功率均为100%（60/60）。实验过程中，阴性对照组及中药低剂量组荷瘤小鼠表现为皮毛无光泽，竖毛现象明显，活动迟缓。阴性对照组小鼠出现明显地厌食、腹泻、精神萎靡、消瘦及被毛脱落等症状，中药各组及化疗组不良反应相对较小。

3.2  各组小鼠体重变化比较

    各组小鼠体重变化结果见表4。由表4可知，从用药第6天开始，中药各组和化疗组小鼠体重均高于阴性对照组，到实验结束第12天，阴性对照组小鼠消瘦最明显，体重与化疗组，中药高、中剂量组比差别有统计学意义，与中药低剂量组差别无统计学意义。

表4　各组小鼠体重变化的比较（

±S，n=12）

组别	重量/g（3d）	重量/g（6d）	重量/g（9d）	重量/g（12d）
					NS	26.275±2.1213	27.033±2.8404	24.254±2.064	23.450±1.896
5-FU	27.365±2.4335	29.363±2.1478*	28.383±2.125 *	27.625±3.474 *
					YAH	26.390±2.5918	28.918±2.0262	27.285±2.013	27.106±2.178 *
YAM	26.703±2.3291	29.417±3.0423*	28.152±3.130 *	27.826±2.421 *
					YAL	27.025±2.6640	28.272±2.3932	25.023±2.381	24.908±2.013

*表示与阴性对照组比较：*P<0.05。

3.3 各组小鼠皮下移植瘤瘤重及抑瘤率的比较

各组小鼠皮下移植瘤瘤重及抑瘤率结果见表5。

表5　各组小鼠瘤重及抑瘤率的比较（

±S，n=12）

组别	瘤重/g	抑制率/%
			NS	3.275±0.21213
5-FU	1.012±0.44335 **	69.09
			YAH	2.487±0.55918 * Δ	24.06
YAM	2.310±0.45591 **Δ	29.47
			YAL	2.725±0.66076 * Δ	16.79

*表示与阴性对照组比较：*P<0.05，**P<0.01；Δ表示与阳性对照药物5-FU比较：P<0.05。

3.4 小鼠移植瘤组织病理学观察

HE染色后，小鼠移植瘤呈圆形、椭圆形或分叶状生长，质地硬，切面灰白，大部分与周围组织分界清楚。镜下移植瘤细胞形状不规则，大小不一，核大，浓染，核异形性明显，可见病理性核分裂相，核质比例明显增大。各组内均可见组织坏死区，阴性对照组相对较少。化疗组及中药低、中、高剂量组癌细胞出现不同程度的退变，可见明显的坏死区，尤其以化疗组及中药高、中剂量组明显。

3.5各组肿瘤细胞凋亡情况的比较

TUNEL染色显示，凋亡细胞明显固缩，核致密，深染为棕褐色或棕黄色多叶状或新月状颗粒；未凋亡的细胞核呈蓝绿色。用Leica-QV3成像分析系统分析结果显示，化疗组及中药高、中、低剂量组AI较阴性对照组明显升高，差异均有显著性（P<0.01），但中药低剂量组AI与阴性对照组比较，差异无显著性（P>0.05），表明本发明中药组合物能明显促进肿瘤细胞凋亡，具体参见表6、图3。

表6　各组肿瘤细胞凋亡指数（AI）的比较

组别	AI(%)
		NS	3.22±0.1643
5-FU	38.45±0.5343 **
		YAH	30.19±0.2459 *
YAM	34.02±0.6605 **
		YAL	20.65±0.4096

*表示与阴性对照组比较：*P<0.05，**P<0.01。

综上所述，本发明中药组合物各组的肠癌移植瘤瘤重与阴性对照组比较均有统计学意义（P<0.05），说明本发明中药组合物具有延缓肠癌移植瘤生长的作用；同时在实验过程中，中药组合物各组中小鼠在毛色、活动、饮食以及腹泻等症状上明显好于阴性对照组，尤其表现在小鼠后期的体重上（P<0.05），说明本发明中药组合物具有改善肠癌荷瘤鼠生存质量的作用。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种抑制肠癌血管拟态和微血管形成的中药组合物，其特征在于，它是由以下重量份的原料药制成：莪术9份、马齿苋30份、薜荔果15份、藤梨根30份、冬瓜子15份。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物的药剂是片剂、胶囊剂、颗粒或合剂。

3.权利要求1所述的中药组合物在制备治疗肠癌药物中的应用。

4.权利要求1所述的中药组合物在制备抑制肠癌血管拟态形成药物中的应用。

5.权利要求1所述的中药组合物在制备抑制肠癌微血管生成药物中的应用。

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