CN102822201B - 抗her3抗体及其用途 - Google Patents

抗her3抗体及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN102822201B
CN102822201B CN201080064271.3A CN201080064271A CN102822201B CN 102822201 B CN102822201 B CN 102822201B CN 201080064271 A CN201080064271 A CN 201080064271A CN 102822201 B CN102822201 B CN 102822201B
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
seq
cell
her3
chain variable
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201080064271.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102822201A (zh
Inventor
B.伯森梅尔
N.迪默迪斯
T.弗里斯
G.乔治斯
I.科尔姆
H-W.克雷尔
V.利夫克
E.莫斯纳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Roche Glycart AG
Original Assignee
Roche Glycart AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=42126432&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CN102822201(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Roche Glycart AG filed Critical Roche Glycart AG
Publication of CN102822201A publication Critical patent/CN102822201A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102822201B publication Critical patent/CN102822201B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及结合人HER3的抗体（抗HER3抗体）、其生成方法、含有所述抗体的药物组合物、及其用途。

Description

抗HER3抗体及其用途
本发明涉及结合人HER3的抗体（抗HER3抗体）、其生成方法、含有所述抗体的药物组合物、及其用途。
发明背景
人HER3（ErbB-3、ERBB3、c-erbB-3、c-erbB3、受体酪氨酸蛋白质激酶erbB-3、SEQ ID NO:17）编码表皮生长因子受体(EGFR)受体酪氨酸激酶家族的一名成员，该家族还包括HER1（又称为EGFR）、HER2、和HER4(Kraus,M.H.等,PNAS 86(1989)9193-9197;Plowman,G.D.等,PNAS 87(1990)4905-4909;Kraus,M.H.等,PNAS 90(1993)2900-2904)。与原型表皮生长因子受体一样，跨膜受体HER3由胞外配体结合域(ECD)、ECD内的二聚化域、跨膜域、胞内蛋白质酪氨酸激酶域(TKD)和C端磷酸化域组成。此膜结合蛋白具有胞外域而非活性激酶域内的HER3调蛋白(HRG)结合域。因此，它能结合此配体，但是不能经由蛋白质磷酸化将信号传送入细胞中。然而，它确实与确实具有激酶活性的其它HER家族成员形成异二聚体。异二聚化导致受体介导的信号传导途径的激活及其胞内域的转磷酸化。HER家族成员间的二聚体形成扩大HER3的信号传导潜力，并且是一种不仅用于信号多样化，而且用于信号放大的手段。例如，HER2/HER3异二聚体在HER家族成员间经由PI3K和AKT途径诱导最重要的促有丝分裂信号之一(Sliwkowski M.X.等,J.Biol.Chem.269(1994)14661-14665;Alimandi M.等,Oncogene.10(1995)1813-1821;Hellyer,N.J.,J.Biol.Chem.276(2001)42153-4261;Singer,E.,J.Biol.Chem.276(2001)44266-44274;Schaefer，K.L.,Neoplasia 8(2006)613-622)。
已经在许多癌症，包括前列腺、膀胱、和乳腺肿瘤中报告了此基因的扩增和/或其蛋白质的过表达。已经表征了编码不同同等型的可变转录剪接变体。一种同等型缺乏膜间区，并且分泌到细胞外。此形式作用为调控膜结合形式的活性。还已经报告了别的剪接变体，但是它们尚未彻底表征。
WO 97/35885涉及HER3抗体。WO 2003/013602涉及HER活性抑制剂，包括HER抗体。WO 2007/077028和WO 2008/100624也涉及HER3抗体。
发明概述
本发明包括结合人HER3的抗体，其特征在于：重链可变域包含SEQ IDNO:1的CDR3H区、SEQ ID NO:2的CDR2H区、和SEQ ID NO:3的CDR1H区，且轻链可变域包含SEQ ID NO:4的CDR3L区、SEQ ID NO:5的CDR2L区、和SEQ ID NO:6的CDR1L区或SEQ ID NO:7的CDR1L区。
本发明进一步包括依照本发明的抗体，其特征在于：所述重链可变域VH是SEQ ID NO:8；且所述轻链可变域VL是SEQ ID NO:9，或所述轻链可变域VL是SEQ ID NO:10，或所述轻链可变域VL是SEQ ID NO:11；或其人源化型式。
本发明进一步包括包含重链可变域和轻链可变域的抗体，所述重链可变域包含SEQ ID NO:1的CDR3H区、SEQ ID NO:2的CDR2H区、和SEQ IDNO:3的CDR1H区，所述轻链可变域包含SEQ ID NO:4的CDR3L区、SEQ IDNO:5的CDR2L区、和SEQ ID NO:6的CDR1L区。
本发明进一步包括包含SEQ ID NO:8的重链可变域VH；和SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:11的轻链可变域VL的抗体。
本发明进一步包括包含重链可变域和轻链可变域的抗体，所述重链可变域包含SEQ ID NO:1的CDR3H区、SEQ ID NO:2的CDR2H区、和SEQ IDNO:3的CDR1H区，所述轻链可变域包含SEQ ID NO:4的CDR3L区、SEQ IDNO:5的CDR2L区、和SEQ ID NO:7的CDR1L区。
本发明进一步包括包含SEQ ID NO:8的重链可变域VH；和SEQ ID NO:10的轻链可变域VL的抗体。
本发明的另一方面提供了结合人HER3的抗体，其中所述抗体包含与SEQ ID NO:8具有至少95%序列同一性的重链可变域VH和与SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、或SEQ ID NO:11具有至少95%序列同一性的轻链可变域VL。
在一个实施方案中，依照本发明的抗体的特征在于：所述抗体是单克隆的。
在一个实施方案中，依照本发明的抗体的特征在于：所述抗体是人源化的。
在一个实施方案中，依照本发明的抗体的特征在于：所述抗体是IgG1或IgG4亚类的。
本发明进一步包括一种药物组合物，其特征在于包含依照本发明的抗体。
本发明进一步包括依照本发明的抗体，其用于治疗癌症。
本发明进一步包括依照本发明的抗体用于制造供治疗癌症用的药物的用途。
本发明进一步包括一种用于治疗患有癌症的患者的方法，其特征在于对患者施用依照本发明的抗体。
本发明的另一方面提供了编码本文中提供的抗HER3抗体的重和轻链的核酸。在一个实施方案中，抗体包含与SEQ ID NO:8具有至少95%序列同一性的重链可变域VH和与SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、或SEQ ID NO:11具有至少95%序列同一性的轻链可变域VL。
本发明进一步包括编码结合人HER3的抗体的重和轻链的核酸，其特征在于所述抗体包含SEQ ID NO:8的可变域VH；和SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:10、或SEQ ID NO:11的轻链可变域VL；或其人源化型式。
本发明进一步包括表达载体，其特征在于：包含依照本发明的核酸以在原核或真核宿主细胞中表达依照本发明的抗体。
本发明进一步包括包含依照本发明的载体的原核或真核宿主细胞。
本发明进一步包括一种用于生成依照本发明的重组抗体的方法，其特征在于在原核或真核宿主细胞中表达依照本发明的核酸，并自所述细胞或细胞培养物上清液回收所述抗体。
令人惊讶地，发现了依照本发明的抗体具有高度有价值的特性，诸如对HER3表达癌细胞的强烈生长抑制、对涉及癌细胞增殖的HER3介导的信号转导（诸如例如HER3磷酸化和AKT磷酸化）的强烈抑制、对HER3的高结合亲和力、或卓越的药动学特性（诸如长的半衰期，等等）。
发明详述
本发明包括结合人HER3的抗体，其特征在于：重链可变域包含SEQ IDNO:1的CDR3H区、SEQ ID NO:2的CDR2H区、和SEQ ID NO:3的CDR1H区，且轻链可变域包含SEQ ID NO:4的CDR3L区、SEQ ID NO:5的CDR2L区、和SEQ ID NO:6的CDR1L区或SEQ ID NO:7的CDR1L区。
本发明进一步包括依照本发明的抗体，其特征在于：所述重链可变域VH是SEQ ID NO:8；且所述轻链可变域VL是SEQ ID NO:9，或所述轻链可变域VL是SEQ ID NO:10，或所述轻链可变域VL是SEQ ID NO:11；或其人源化型式。
本发明进一步包括依照本发明的抗体，其特征在于：所述重链可变域VH是SEQ ID NO:8；且所述轻链可变域VL是SEQ ID NO:9，或所述轻链可变域VL是SEQ ID NO:10，或所述轻链可变域VL是SEQ ID NO:11。
在一个实施方案中，依照本发明的抗体的特征在于：包含重链可变域作为SEQ ID NO:1的CDR3H区、SEQ ID NO:2的CDR2H区、和SEQ ID NO:3的CDR1H区，且所述轻链可变域包含SEQ ID NO:4的CDR3L区、SEQ IDNO:5的CDR2L区、和SEQ ID NO:6的CDR1L区。
在一个实施方案中，依照本发明的抗体的特征在于：重链可变域VH是SEQ ID NO:8；且轻链可变域VL是SEQ ID NO:9或轻链可变域VL是SEQ IDNO:11。
在一个实施方案中，依照本发明的抗体的特征在于：作为重链可变域包含SEQ ID NO:1的CDR3H区、SEQ ID NO:2的CDR2H区、和SEQ ID NO:3的CDR1H区，且所述轻链可变域包含SEQ ID NO:4的CDR3L区、SEQ IDNO:5的CDR2L区、和SEQ ID NO:7的CDR1L区。
在一个实施方案中，依照本发明的抗体的特征在于：重链可变域VH是SEQ ID NO:8；且轻链可变域VL是SEQ ID NO:10。
在一个实施方案中，依照本发明的抗体是单克隆的。在一个实施方案中，依照本发明的抗体是人源化的或人的。在一个实施方案中，依照本发明的抗体是IgG1或IgG4亚类的。在一个实施方案中，依照本发明的抗体是IgG1亚类的单克隆人源化抗体。在一个实施方案中，依照本发明的抗体的特征在于：所述抗体是在Asn297处用糖链糖基化的，其中所述糖链内岩藻糖的量是65%或更低。
本发明包括具有其各自VH和VL或CDR的人源化抗体单抗205.10.1、单抗205.10.2和单抗205.10.3。
  抗体   VH   VL
  单抗205.10.1   SEQ ID NO:8   SEQ ID NO:9
  单抗205.10.2   SEQ ID NO:8   SEQ ID NO:10
  单抗205.10.3   SEQ ID NO:8   SEQ ID NO:11
在一个实施方案中，此类抗体包含人起源的恒定区，例如SEQ IDNO:12-16，优选地SEQ ID NO:12-13的。
术语“抗体”涵盖各种形式的抗体结构，包括但不限于全抗体和抗体片段。优选地，依照本发明的抗体是人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、或别的遗传工程化抗体，只要依照本发明的特征性特性得到保留。
“抗体片段”包含全长抗体的一部分，优选地，其可变域，或至少其抗原结合位点。抗体片段的例子包括双抗体、单链抗体分子、和自抗体片段形成的多特异性抗体。例如，scFv抗体记载于Huston,J.S.,Methods in Enzymol.203(1991)46-88。另外，抗体片段包含具有结合HER3的VH域或VL域的特征（即能够与VL域或VH域一起装配成功能性抗原结合位点，并且由此提供依照本发明的抗体的特性）的单链多肽。
如本文中所使用的，术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”指单一氨基酸组成的抗体分子的制备物。
术语“嵌合抗体”指通常通过重组DNA技术制备的，包含来自小鼠的可变区，即结合区和自不同来源或物种衍生的恒定区的至少一部分的单克隆抗体。包含小鼠可变区和人恒定区的嵌合抗体是特别优选的。此类大鼠/人嵌合抗体是包含编码大鼠免疫球蛋白可变区的DNA区段和编码人免疫球蛋白恒定区的DNA区段的所表达免疫球蛋白基因的产物。本发明所涵盖的“嵌合抗体”的其它形式是那些其中类或亚类已经自初始抗体的类或亚类修饰或改变的。此类“嵌合”抗体又称为“类转换抗体”。用于生成嵌合抗体的方法牵涉本领域现在公知的常规重组DNA和基因转染技术。参见例如Morrison,S.L.等,Proc.Natl.Acad Sci.USA 81(1984)6851-6855;US 5,202,238和US5,204,244。
术语“人源化抗体”或“抗体的人源化型式”指其中的框架或“互补决定区”(CDR)已经进行过修饰以包含特异性与亲本免疫球蛋白相比不同的免疫球蛋白的CDR的抗体。在一个优选的实施方案中，将VH和VL的CDR嫁接入人抗体的框架区中以制备“人源化抗体”。见例如Riechmann,L.等,Nature332(1988)323-327;及Neuberger,M.S.等,Nature 314(1985)268-270。重和轻链可变框架区可以自相同或不同人抗体序列衍生。人抗体序列可以是天然存在的人抗体的序列。人重和轻链可变框架区列于例如Lefranc,M.-P.,CurrentProtocols in Immunology(2000)-附录1P A.1P.1-A.1P.37，并且经由IMGT，即国际ImMunoGeneTics信息系统(http://imgt.cines.fr)或经由http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk可存取。任选地，可以通过别的突变修饰框架区。特别优选的CDR对应于上文对嵌合抗体记录的那些代表识别抗原的序列的。优选地，此类人源化型式用人恒定区嵌合化（见例如序列SEQ IDNO:12-16）。如本文中所使用的，术语“人源化抗体”还包括如下的抗体，其在恒定区中进行修饰以生成依照本发明的特性（特别地关于C1q结合/或FcR结合），例如通过“类转换”，即Fc部分的变化或突变（例如自IgG1至IgG4和/或IgG1/IgG4突变）来实现。
如本文中所使用的，术语“人抗体”意图包括具有自人种系免疫球蛋白序列衍生的可变和恒定区的抗体。人抗体是现有技术中公知的(van Dijk，M.A.和van de Winkel,J.G.,Curr.Opin.Chem.Biol.5(2001)368-374)。也可以在转基因动物（例如小鼠）中生成人抗体，所述转基因动物在免疫后能够在没有内源免疫球蛋白生成的情况中生成人抗体的完整全集和选集。在此类种系突变体小鼠中转移人种系免疫球蛋白基因阵列会导致抗原攻击后生成人抗体（见例如Jakobovits,A.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90(1993)2551-2555;Jakobovits,A.等,Nature 362(1993)255-258;Brueggemann,M.D.等,YearImmunol.7(1993)33-40）。也可以在噬菌体展示文库中生成人抗体(Hoogenboom,H.R.和Winter,G.,J.Mol.Biol.227(1992)381-388;Marks,J.D.等,J.Mol.Biol.222(1991)581-597)。Cole,A.等和Boerner，P.等的技术也可用于制备人单克隆抗体(Cole,A.等,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Liss,A.L.,第77页(1985)；及Boerner,P.等,J.Immunol.147(1991)86-95)。如已经对依照本发明的人源化抗体所提及的，如本文中所使用的，术语“人抗体”还包括如下的抗体，其在恒定区中进行修饰以生成依照本发明的特性（特别地关于C1q结合/或FcR结合），例如通过“类转换”，即Fc部分的变化或突变（例如自IgG1至IgG4和/或IgG1/IgG4突变）来实现。
如本文中所使用的，术语“重组人抗体”意图包括通过重组手段制备、表达、创建或分离的所有人抗体，诸如自宿主细胞诸如NS0或CHO细胞或者自对于使用转染入宿主细胞中的重组表达载体表达的人免疫球蛋白基因或抗体而言转基因的动物（例如小鼠）分离的抗体。此类重组人抗体具有重排形式的可变和恒定区。依照本发明的重组人抗体已经进行过体内体细胞超突变。如此，重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是虽然自人种系VH和VL序列衍生及与其相关，但可以不天然存在于体内的人抗体种系全集内的序列。
如本文中所使用的，术语“结合人HER3”、“特异性结合人HER3”、或“抗HER3抗体”可互换，并且指于25°C以1.0x10-8mol/l或更低的KD值，在一个实施方案中，于25°C以1.0x10-9mol/l或更低的KD值的结合亲和力特异性结合HER3抗原的抗体。于25°C用标准的结合测定法，诸如表面等离振子共振技术(GE-Healthcare Uppsala,Sweden)测定结合亲和力。一种用于测定结合亲和力的KD值的方法记载于实施例2b）。如此，如本文中所使用的，“结合人HER3的抗体”指于25°C以KD 1.0x10-8mol/l或更低（优选地，1.0x10-8mol/l-1.0x10-12mol/l)的结合亲和力特异性结合人HER3抗原的抗体。
人HER3（ErbB-3、ERBB3、c-erbB-3、c-erbB3、受体酪氨酸蛋白质激酶erbB-3、SEQ ID NO:17）编码表皮生长因子受体(EGFR)受体酪氨酸激酶家族的一名成员，该家族还包括HER1（又称为EGFR）、HER2、和HER4(Kraus,M.H.等,PNAS 86(1989)9193-9197;Plowman,G.D.等,PNAS 87(1990)4905-4909;Kraus,M.H.等,PNAS 90(1993)2900-2904)。与原型表皮生长因子受体一样，跨膜受体HER3由胞外配体结合域(ECD)、ECD内的二聚化域、跨膜域、胞内蛋白质酪氨酸激酶域(TKD)和C端磷酸化域组成。此膜结合蛋白具有胞外域而非活性激酶域内的HER3调蛋白(HRG)结合域。因此，它能结合此配体，但是不能经由蛋白质磷酸化将信号传送入细胞中。然而，它确实与确实具有激酶活性的其它HER家族成员形成异二聚体。异二聚化导致受体介导的信号传导途径的激活及其胞内域的转磷酸化。HER家族成员间的二聚体形成扩大HER3的信号传导潜力，并且是一种不仅用于信号多样化，而且用于信号放大的手段。例如，HER2/HER3异二聚体在HER家族成员间经由PI3K和AKT途径诱导最重要的促有丝分裂信号之一(Sliwkowski M.X.等,J.Biol.Chem.269(1994)14661-14665;Alimandi M.等,Oncogene.10(1995)1813-1821;Hellyer,N.J.,J.Biol.Chem.276(2001)42153-421561;Singer,E.,J.Biol.Chem.276(2001)44266-44274;Schaefer，K.L.,Neoplasia 8(2006)613-622)。
HER3抗体单抗205.10.1、单抗205.10.2、和单抗205.10.3显示与配体调蛋白(HRG)竞争结合HER3。
已经在许多癌症，包括前列腺、膀胱、和乳腺肿瘤中报告了此基因的扩增和/或其蛋白质的过表达。已经表征了编码不同同等型的可变转录剪接变体。一种同等型缺乏膜间区，并且分泌到细胞外。此形式作用为调控膜结合形式的活性。还已经报告了别的剪接变体，但是它们尚未彻底表征。
术语“表位”包括能够特异性结合抗体的任何多肽决定子。在某些实施方案中，表位决定子包括分子诸如氨基酸、糖侧链、磷酰基、或磺酰基的化学活性表面聚集，并且在某些实施方案中，可以具有特定的三维结构特征，和或特定的电荷特征。表位是抗原中被抗体结合的区域。
如本文中所使用的，“依照本发明的抗体的可变域”（轻链可变域(VL)、重链可变域(VH)）意为直接牵涉抗体结合抗原的轻和重链域对之每种。可变轻和重链域具有相同的一般结构，并且每个域包含通过三个“高变区”（或互补决定区，CDR）连接的其序列广泛保守的四个框架(FR)区。框架区采用β-片层构象，而CDR可以形成连接β-片层结构的环。每条链中的CDR通过框架区保持其三维结构，并且与来自另一条链的CDR一起形成抗原结合位点。抗体的重和轻链CDR3区在依照本发明的抗体的结合特异性/亲和力中发挥特别重要的作用，并且因此提供本发明的又一个目的。
在本文中使用时，术语“抗体的抗原结合部分”指抗体中负责抗原结合的氨基酸残基。抗体的抗原结合部分包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基。术语本发明的抗体的“抗原结合部分”含有6个互补决定区(CDR)，其以不同程度促成结合位点对抗原的亲和力。存在着三个重链可变域CDR(CDRH1、CDRH2和CDRH3）和三个轻链可变域CDR(CDRL1、CDRL2和CDRL3）。术语“CDRH1”意指依照Kabat计算的重链可变区的CDR1区。CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3意指来自重(H)或轻(L)链的相应区。通过与氨基酸序列的汇编数据库比较来确定CDR和框架区(FR)的范围，在所述数据库中已经依照Kabat等,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,第5版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)依照序列间的可变性限定那些区域。
抗体的“Fc部分”不直接牵涉抗体对抗原的结合，但是展现出各种效应器功能。“抗体的Fc部分”是熟练技术人员公知的术语，并且基于木瓜蛋白酶对抗体的切割限定。根据其重链恒定区的氨基酸序列，抗体或免疫球蛋白分成类：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些中的数种可以进一步分成亚类（同种型），例如IgG1、IgG2、IgG3、和IgG4、IgA1、和IgA2。依照重链恒定区，免疫球蛋白的不同类分别称作α、δ、ε、γ、和μ。抗体的Fc部分直接牵涉ADCC（抗体依赖性细胞介导的细胞毒性）和CDC（补体依赖性细胞毒性），其基于补体激活、C1q结合和Fc受体结合。术语“补体依赖性细胞毒性(CDC)”意指通过补体因子C1q结合大多数IgG抗体亚类的Fc部分启动的过程。C1q对抗体的结合是由所谓的结合位点处的限定的蛋白质-蛋白质相互作用引起的。此类结合位点是现有技术中已知的，并且例如记载于Boackle,R.J.等,Nature 282(1979)742-743,Lukas,T.J.等,J.Immunol.127(1981)2555-2560,Brunhouse,R.和Cebra,J.J.,Mol.Immunol.16(1979)907-917,Burton,D.R.等,Nature 288(1980)338-344,Thommesen,J.E.等,Mol.Immunol.37(2000)995-1004,Idusogie,E.E.等,J.Immunol.164(2000)4178-4184,Hezareh,M.等,J.Virology 75(2001)12161-12168,Morgan,A.等,Immunology86(1995)319-324,EP 0 307 434。此类结合位点是例如L234、L235、D270、N297、E318、K320、K322、P331和P329（依照Kabat,E.A.的EU索引的编号方式，参见下文）。亚类IgG1、IgG2和IgG3的抗体通常显示补体激活及C1q和C3结合，而IgG4不激活补体系统，而且不结合C1q和C3。
在一个实施方案中，依照本发明的抗体包含自人起源衍生的Fc部分，和优选地人恒定区的所有其它部分。如本文中所使用的，术语“自人起源衍生的Fc部分”意指作为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类的人抗体的Fc部分，例如，来自人IgG1亚类的Fc部分、来自人IgG1亚类的突变Fc部分（优选地具有L234A+L235A方面的突变）、来自人IgG4亚类的Fc部分或来自人IgG4亚类的突变Fc部分（优选地具有S228P方面的突变）的Fc部分。优选的是SEQ ID NO:13（人IgG1亚类）、SEQ ID NO:14（具有突变L234A和L235A的人IgG1亚类）的人重链恒定区。
在一个实施方案中，依照本发明的抗体是人IgG1亚类或人IgG3亚类的。在一个实施方案中依照本发明的抗体是人IgG1亚类的。
在一个实施方案中，依照本发明的抗体的特征在于：恒定链是人起源的。此类恒定链是现有技术中公知的，并且例如由Kabat,E.A.（见例如Johnson,G.和Wu,T.T.,Nucleic Acids Res.28(2000)214-218）描述。例如，有用的人重链恒定区包含氨基酸序列SEQ ID NO:13。例如，有用的人轻链恒定区包含κ轻链恒定区氨基酸序列SEQ ID NO:12。
如本申请内所使用的，术语“氨基酸”意指天然存在的羧基α-氨基酸的组，包括丙氨酸（三字母代码：ala，单字母代码：A）、精氨酸(arg,R)、天冬酰胺(asn,N)、天冬氨酸(asp,D)、半胱氨酸(cys,C)、谷氨酰胺(gln,Q)、谷氨酸(glu,E)、甘氨酸(gly,G)、组氨酸(his,H)、异亮氨酸(ile,I)、亮氨酸(leu,L)、赖氨酸(lys,K)、甲硫氨酸(met,M)、苯丙氨酸(phe,F)、脯氨酸(pro,P)、丝氨酸(ser,S)、苏氨酸(thr,T)、色氨酸(trp,W)、酪氨酸(tyr,Y)、和缬氨酸(val,V)。
如本文中所使用的，术语“核酸”或“核酸分子”意图包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链或双链，但是优选的是双链DNA。在将核酸放置在与另一种核酸的功能性关系中时，它是“可操作连接的”。例如，若前序列或分泌前导的DNA以参与多肽分泌的前蛋白表达，则它与多肽的DNA可操作连接；若启动子或增强子影响序列的转录，则它与编码序列可操作连接；或者若核糖体结合位点定位为使得便于翻译，则它与编码序列可操作连接。一般而言，“可操作连接的”意指所连接的DNA序列是共线的，并且在分泌前导的情况中，是连续的且在读码框中。然而，增强子不必是连续的。通过在方便的限制性位点处的连接来实现连接。若不存在此类位点，则依照常规的实践使用合成的寡核苷酸衔接头或接头。如本文中所使用的，表述“细胞”、“细胞系”、和“细胞培养物”可互换使用，并且所有此类名称包括后代。如此，词语“转化体”和“经转化的细胞”包括原代主题细胞和自其衍生的培养物，而不管传递的次数。还应当理解，由于有意或无意的突变，所有后代在DNA内容上可能不是正好相同的。包括具有如在初始转化细胞中筛选的相同功能或生物学活性的变体后代。
优选地，依照本发明的抗体的特征在于：恒定链是人起源的。此类恒定链是现有技术中公知的，并且例如由Kabat等,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD(1991)描述。例如，有用的人轻链恒定区包含κ轻链恒定区的氨基酸序列SEQ ID NO:12。例如，有用的人重链恒定区包含SEQ IDNO:13至16。
本发明的又一个实施方案是编码依照本发明的抗体的重和轻链的核酸。
另外，依照本发明的抗体包括具有“保守序列修饰”（变体抗体），即不影响或改变依照本发明的抗体的上文提及的特征的核苷酸和氨基酸序列修饰的此类抗体。可以通过本领域中已知的标准技术，诸如定点诱变和PCR介导的诱变来引入修饰。保守氨基酸替代包括其中的氨基酸残基用具有相似侧链的氨基酸残基替换的。本领域中已经限定了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链（例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸）、酸性侧链（例如，天冬氨酸、谷氨酸）、不带电荷的极性侧链（例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸）、非极性侧链（例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸）、β-分支的侧链（例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸）和芳香族侧链（例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸）的氨基酸。如此，优选地，可以将人抗HER3抗体中预测的非必需氨基酸残基用来自相同侧链家族的另一种氨基酸残基替换。因此，“变体”抗HER3抗体在本文中指在亲本抗体的一个或多个可变区中在氨基酸序列上与“亲本”抗HER3抗体氨基酸序列相差多至10，优选地约2至约5处添加、删除和/或替代的分子。可以基于分子建模通过诱变实施氨基酸替代，如由Riechmann,L.等,Nature 332(1988)323-327及Queen,C.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86(1989)10029-10033描述的。
在另一方面，依照本发明的抗HER3抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:8具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%序列同一性的重链可变域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性的VH序列相对于参照序列含有替代（例如，保守替代）、插入、或删除，但是包含所述序列的抗HER3抗体保留结合HER3的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:8中替代、插入和/或删除总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中，在CDR外部的区域（即，在FR中）发生替代、插入、或删除。任选地，抗HER3抗体包含SEQ ID NO:8中的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个具体的实施方案中，VH包含1、2或3个选自下组的CDR：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的CDR1H，(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的CDR2H，和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的CDR3H。
在另一方面，依照本发明的抗HER3抗体包含与氨基酸序列SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:10、或SEQ ID NO:11具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%序列同一性的轻链可变域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性的VL序列相对于参照序列含有替代（例如，保守替代）、插入、或删除，但是包含所述序列的抗HER抗体保留结合HER的能力。在某些实施方案中，已经在SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、或SEQ IDNO:11中替代、插入和/或删除总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中，在CDR外部的区域（即，在FR中）发生替代、插入、或删除。任选地，抗HER3抗体包含SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、或SEQ ID NO:11中的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个具体的实施方案中，VL包含1、2或3个选自下组的CDR：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7的CDR1L，(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的CDR2L，和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的CDR3L。
在另一方面，提供了一种抗HER3抗体，其中所述抗体包含如上文提供的任何实施方案中的VH，和如上文提供的任何实施方案中的VL。在一个实施方案中，抗体包含分别在SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:10中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰；而且具有下列一项或多项特性（在如实施例3和2中所描述的测定法中测定）：
-抗HER3抗体抑制肿瘤细胞诸如MCF7细胞、FaDu细胞或Mel-Juso细胞中的HER3磷酸化（在一个实施方案中，抗HER3抗体在1.0μg/ml的浓度显示对MCF7细胞中HER3磷酸化的至少80%（在一个实施方案中至少90%）的抑制；在一个实施方案中，抗HER3抗体在0.1μg/ml的浓度显示对FaDu细胞中HER3磷酸化的至少80%（在一个实施方案中至少90%）的抑制；在一个实施方案中，抗HER3抗体在0.1μg/ml的浓度显示对Mel-Juso细胞中HER3磷酸化的至少60%（在一个实施方案中至少70%）的抑制）
-抗HER3抗体抑制肿瘤细胞诸如Mel-Juso细胞中的AKT磷酸化（在一个实施方案中，抗HER3抗体以小于0.50μg/ml的IC50值，在一个实施方案中，以小于0.35μg/ml的IC50值抑制Mel-Juso细胞中的AKT磷酸化）
-抗HER3抗体抑制肿瘤细胞诸如MDA-MB-175细胞的增殖（在一个实施方案中，抗HER3抗体以小于10μg/ml的IC50值抑制MDA-MB-175细胞的增殖）
-抗HER3抗体以小于5.0x10-9M的KD值，在一个实施方案中，以小于3.0x10-9M的KD值结合HER3。
-在另一方面，依照本发明的抗HER3抗体包含与氨基酸序列SEQ IDNO:8具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%序列同一性的重链可变域(VH)序列，并且包含与氨基酸序列SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:10、或SEQ ID NO:11具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%序列同一性的轻链可变域(VL)；而且具有下列一项或多项特性（在如实施例3和2中所描述的测定法中测定）：抗HER3抗体抑制肿瘤细胞诸如MCF7细胞、FaDu细胞或Mel-Juso细胞中的HER3磷酸化（在一个实施方案中，抗HER3抗体在1.0μg/ml的浓度显示对MCF7细胞中HER3磷酸化的至少80%（在一个实施方案中至少90%）的抑制；在一个实施方案中，抗HER3抗体在0.1μg/ml的浓度显示对FaDu细胞中HER3磷酸化的至少80%（在一个实施方案中至少90%）的抑制；在一个实施方案中，抗HER3抗体在0.1μg/ml的浓度显示对Mel-Juso细胞中HER3磷酸化的至少60%（在一个实施方案中至少70%）的抑制）
-抗HER3抗体抑制肿瘤细胞诸如Mel-Juso细胞中的AKT磷酸化（在一个实施方案中，抗HER3抗体以小于0.50μg/ml的IC50值，在一个实施方案中，以小于0.35μg/ml的IC50值抑制Mel-Juso细胞中的AKT磷酸化）
-抗HER3抗体抑制肿瘤细胞诸如MDA-MB-175细胞的增殖（在一个实施方案中，抗HER3抗体以小于10μg/ml的IC50值抑制MDA-MB-175细胞的增殖）
-抗HER3抗体以小于5.0x10-9M的KD值，在一个实施方案中，以小于3.0x10-9M的KD值结合HER3。
本发明的一个实施方案是结合人HER3的抗体，其包含与SEQ ID NO:8具有至少95%序列同一性的重链可变域VH和与SEQ ID NO:9、SEQ IDNO:10、或SEQ ID NO:11具有至少95%序列同一性的轻链可变域VL。
本发明的一个实施方案是此类抗体，其中轻链可变域VL与SEQ ID NO:9具有至少95%序列同一性。
本发明的一个实施方案是此类抗体，其中轻链可变域VL与SEQ ID NO:10具有至少95%序列同一性。
本发明的一个实施方案是此类抗体，其中轻链可变域VL与SEQ ID NO:11具有至少95%序列同一性。
本发明的一个实施方案是结合人HER3的抗体，其包含与SEQ ID NO:8具有至少95%序列同一性的重链可变域VH和与SEQ ID NO:9、SEQ IDNO:10、或SEQ ID NO:11具有至少95%序列同一性的轻链可变域VL；而且具有下列一项或多项特性（在如实施例3和2中所描述的测定法中测定）：
-抗HER3抗体抑制肿瘤细胞诸如MCF7细胞、FaDu细胞或Mel-Juso细胞中的HER3磷酸化（在一个实施方案中，抗HER3抗体在1.0μg/ml的浓度显示对MCF7细胞中HER3磷酸化的至少80%（在一个实施方案中至少90%）的抑制；在一个实施方案中，抗HER3抗体在0.1μg/ml的浓度显示对FaDu细胞中HER3磷酸化的至少80%（在一个实施方案中至少90%）的抑制；在一个实施方案中，抗HER3抗体在0.1μg/ml的浓度显示对Mel-Juso细胞中HER3磷酸化的至少60%（在一个实施方案中至少70%）的抑制）
-抗HER3抗体抑制肿瘤细胞诸如Mel-Juso细胞中的AKT磷酸化（在一个实施方案中，抗HER3抗体以小于0.50μg/ml的IC50值，在一个实施方案中，以小于0.35μg/ml的IC50值抑制Mel-Juso细胞中的AKT磷酸化）
-抗HER3抗体抑制肿瘤细胞诸如MDA-MB-175细胞的增殖（在一个实施方案中，抗HER3抗体以小于10μg/ml的IC50值抑制MDA-MB-175细胞的增殖）
-抗HER3抗体以小于5.0x10-9M的KD值，在一个实施方案中，以小于3.0x10-9M的KD值结合HER3。
关于序列的同一性或同源性在本文中定义为在比对序列并在必要时引入缺口以实现最大百分比序列同一性后，候选序列中与亲本序列相同的氨基酸残基的百分比。抗体序列N-末端、C-末端、或内部的延伸、删除、或插入无一应当视为影响序列同一性或同源性。变体保留结合人HER3的可变域的能力，并且优选地具有优于亲本抗体的特性。例如，变体在治疗期间可以具有降低的副作用。
例示性的“亲本”抗体包含抗体单抗205.10.2的CDR区，并且优选地，用于制备变体。优选地，亲本抗体具有人框架区，并且若存在的话，具有人抗体恒定域。例如，亲本抗体可以是人源化的或人的抗体。
术语“抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)”指在存在效应细胞的情况中依照本发明的抗体对人靶细胞的裂解。优选地，通过在存在效应细胞，诸如新鲜分离的PBMC或来自血沉棕黄层的纯化的效应细胞，如单核细胞或天然杀伤(NK)细胞或永久生长NK细胞系的情况中用依照本发明的抗体来处理HER3表达细胞的制备物来测量ADCC。
单克隆抗体的细胞介导的效应器功能如ADCC可以通过工程化改造其寡糖组分来增强，如记载于Umana,P.等,Nature Biotechnol.17(1999)176-180,及US 6,602,684的。IgG1型抗体（最常使用的治疗性抗体）是在每个CH2域中具有Asn297处的保守的N连接的糖基化位点的糖蛋白。两个附着于Asn297的复合双触角寡糖掩埋于CH2域间，这形成与多肽主链的广泛接触，并且其存在对于抗体介导效应器功能诸如抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)是至关重要的(Lifely,M.R.等,Glycobiology 5(1995)813-822;Jefferis,R.等,Immunol.Rev.163(1998)59-76;Wright,A.和Morrison,S.L.,Trends Biotechnol.15(1997)26-32)。Umana,P.等Nature Biotechnol.17(1999)176-180和WO99/54342显示了β(1,4)-N-乙酰葡糖胺转移酶III(“GnTIII”)（即一种催化两分型寡糖形成的糖基转移酶）在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的过表达显著提高抗体的体外ADCC活性。Asn297碳水化合物的组成改变或其消除还影响与FcγR和C1q的结合(Umana,P.等,Nature Biotechnol.17(1999)176-180;Davies,J.等,Biotechnol.Bioeng.74(2001)288-294;Mimura,Y.等,J.Biol.Chem.276(2001)45539-45547;Radaev,S.等,J.Biol.Chem.276(2001)16478-16483;Shields,R.L.等,J.Biol.Chem.276(2001)6591-6604;Shields,R.L.等,J.Biol.Chem.277(2002)26733-26740;Simmons,L.C.等,J.Immunol.Methods 263(2002)133-147)。
在例如WO 2005/044859、WO 2004/065540、WO2007/031875、Umana,P.等,Nature Biotechnol.17(1999)176-180,WO 99/154342、WO 2005/018572、WO 2006/116260、WO 2006/114700、WO 2004/065540、WO 2005/011735、WO 2005/027966、WO 1997/028267、US 2006/0134709、US 2005/0054048、US 2005/0152894、WO 2003/035835和WO 2000/061739或例如Niwa,R.等,J.Immunol.Methods 306(2005)151-160;Shinkawa,T.等,J Biol Chem,278(2003)3466-3473;WO 03/055993和US 2005/0249722中报告了经由糖工程化改造增强单克隆抗体的细胞介导的效应器功能的方法。
在本发明的一个实施方案中，依照本发明的抗体是无岩藻糖基化的，这意味着抗体在Asn297处用糖链糖基化（若它包含IgG1或IgG3亚类的Fc部分），其中所述糖链内岩藻糖的量是80%或更低（依照Kabat的编号方式），例如在80%和1%之间。在另一个实施方案中，所述糖链内岩藻糖的量是65%或更低，在一个实施方案中，在5%和65%之间，且在一个实施方案中，所述糖链内岩藻糖的量是0%。此类抗体在下文中称为“无岩藻糖基化抗体”或“非岩藻糖基化抗体”。此类无岩藻糖基化抗体显示增强的ADCC，而其它抗体特性保持基本上不受影响。
在又一个实施方案中，所述糖链内N-羟乙酰神经氨酸(NGNA)的量是1%或更小和/或N端α-1,3-半乳糖的量是1%或更小。优选地，糖链显示了附着于CHO细胞中重组表达的抗体的Asn297的N连接聚糖的特征。
依照本发明的“Asn297”意指位于Fc区中的约第297位的氨基酸天冬酰胺。基于抗体的微小序列变异，Asn297也可以位于第297位上游或下游的一些氨基酸（通常不超过±3个氨基酸），即第294位和第300位之间。
术语“糖链显示了附着于CHO细胞中重组表达的抗体的Asn297的N连接聚糖的特征”意指依照本发明的全长亲本抗体的Asn297处的糖链与未修饰的CHO细胞中表达的相同抗体的糖链，例如如那些在WO 2006/103100中报告的糖链具有相同的结构和糖残基序列（除了岩藻糖残基外）。
如本申请内所使用的，术语“NGNA”意指糖残基N-羟乙酰基-神经氨酸。
在Asn297处发生人IgG1或IgG3的糖基化，作为以多至两个Gal残基为末端的核心岩藻糖化双触角复合寡糖糖基化。Kabat,E.,A.等,Sequences ofProteins of Immunological Interest,第5版Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,MD.(1991)及Brueggemann,M.等,J.Exp.Med.166(1987)1351-1361;Love,T.W.等,Methods Enzymol.178(1989)515-527详细报告了IgG1或IgG3亚类的人重链恒定区。根据末端Gal残基的量，这些结构称为G0、G1（α-1,6-或α-1,3-）、或G2聚糖残基(Raju,T.,S.,Bioprocess Int.1(2003)44-53)。抗体Fc部分的CHO型糖基化例如由Routier,F.H.,Glycoconjugate J.14(1997)201-207描述。在非糖修饰的CHO宿主细胞中重组表达的抗体在Asn297处通常以至少85%的量进行岩藻糖化。全长亲本抗体的经修饰的寡糖可以是杂合的或复合的。优选地，两分型、还原的/非岩藻糖化的寡糖是杂合的。在另一个实施方案中，两分型、还原的/非岩藻糖化的寡糖是复合的。
依照本发明，“岩藻糖的量”意指通过MALDI-TOF质谱术（例如在LC/MS系统中）测量的，并以平均值计算的，相对于附着于Asn297的所有糖结构（例如复合的、杂合的和高甘露糖结构）的总和，Asn297处糖链内所述糖的量（参见例如WO2008/077546）。岩藻糖的相对量是通过MALDI-TOF，含有岩藻糖的结构相对于经N-糖苷酶F处理的样品中鉴定的所有糖结构（例如分别为复合的、杂合的及寡和高甘露糖结构）的百分比。
优选地，通过重组手段来生成依照本发明的抗体。此类方法是现有技术中普遍已知的，并且包括在原核和真核细胞中的蛋白质表达，随后分离抗体多肽，并且通常纯化至药学可接受纯度。对于蛋白质表达，通过标准的方法将编码轻和重链或其片段的核酸插入表达载体中。在合适的原核或真核宿主细胞，如CHO细胞、NS0细胞、SP2/0细胞、HEK293细胞、COS细胞、酵母、或大肠杆菌细胞中实施表达，并且自细胞（自上清液或在细胞裂解后）回收抗体。抗体的重组生成是现有技术中公知的，并且例如记载于综述文章Makrides,S.C.,Protein Expr.Purif.17(1999)183-202;Geisse,S.等,ProteinExpr.Purif.8(1996)271-282;Kaufman,R.J.,Mol.Biotechnol.16(2000)151-161;Werner,R.G.,Drug Res.48(1998)870-880。抗体可以存在于整个细胞中，在细胞溶胞物中，或者为部分纯化的或基本上纯的形式。通过标准的技术，包括柱层析和本领域中公知的其它技术（见Ausubel,F.等编CurrentProtocols in Molecular Biology,Greene Publishing and Wiley Interscience,NewYork (1987)）来实施纯化以消除其它细胞组分或其它污染物，例如其它细胞核酸或蛋白质。NS0细胞中的表达由例如Barnes,L.M.等,Cytotechnology 32(2000)109-123;Barnes,L.M.等,Biotech.Bioeng.73(2001)261-270描述。瞬时表达由例如Durocher，Y.等,Nucl.Acids.Res.30(2002)E9描述。可变域的克隆由Orlandi,R.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86(1989)3833-3837;Carter，P.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89(1992)4285-4289;Norderhaug,L.等,J.Immunol.Methods 204(1997)77-87描述。一种优选的瞬时表达系统(HEK 293)由Schlaeger，E.-J.and Christensen,K.,于Cytotechnology 30(1999)71-83，及由Schlaeger,E.-J.,于J.Immunol.Methods 194(1996)191-199描述。通过常规的免疫球蛋白纯化规程，诸如例如蛋白A-Sepharose、羟磷灰石层析、凝胶电泳、透析、或亲和层析自培养液适当地分离单克隆抗体。容易使用常规规程将编码单克隆抗体的DNA和RNA分离并测序。杂交瘤细胞可以充当此类DNA和RNA的来源。一旦分离，可以将DNA插入表达载体中，然后将所述表达载体转染入不另外生成免疫球蛋白蛋白质的宿主细胞诸如HEK 293细胞、CHO细胞、或骨髓瘤细胞中，以获得重组单克隆抗体在宿主细胞中的合成。自所述细胞系可获得的抗体是本发明的优选实施方案。优选地，经由糖工程化改造制备无岩藻糖基化的抗体，如上文所描述的。
通过将合适的核苷酸变化引入抗体编码DNA中，或者通过肽合成来制备抗HER3抗体的氨基酸序列变体。然而，仅可以在非常有限的范围中实施此类修饰，例如如上文所描述的。例如，修饰不改变上文提及的抗体特征诸如IgG同种型和表位结合，但是可以改善重组蛋白的产量、蛋白质稳定性、或者便于纯化。也可替代任何不涉及维持抗HER3抗体正确构象的半胱氨酸残基，一般替代为丝氨酸，用以改善分子的氧化稳定性并防止异常交联。相反地，可以对抗体加入半胱氨酸键以改善其稳定性（特别是在抗体是抗体片段，诸如Fv片段的情况中）。抗体的另一类氨基酸变体改变抗体的初始糖基化样式。“改变”意指除去抗体中找到的一个或多个碳水化合物模块和/或添加不存在于抗体中的一个或多个糖基化位点。抗体糖基化通常是N-连接的。N-连接的指碳水化合物模块附着于天冬酰胺残基侧链。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸，其中X是除了脯氨酸之外的任何氨基酸，是碳水化合物模块酶促附着于天冬酰胺侧链的识别序列。如此，多肽中存在这些三肽序列之任一创建潜在的糖基化位点。可以通过改变氨基酸序列，使得其含有一个或多个上文所描述的三肽序列（例如N连接的糖基化位点）来方便地实现对抗体添加糖基化位点。
通过本领域中已知的多种方法来制备编码抗HER3抗体的氨基酸序列变体的核酸分子。这些方法包括但不限于自天然来源分离（在天然存在的氨基酸序列变体的情况中）或者通过对较早制备的变体或非变体型式的人源化抗HER3抗体进行寡核苷酸介导的（或定点）诱变、PCR诱变、和盒式诱变来制备。
抗体的另一类共价修饰包括以美国专利No.4,640,835;4,496,689;4,301,144;4,670,417;4,791,192;4,179,337中所列的方式将抗体与多种非蛋白质性质的聚合物之一，例如聚乙二醇、聚丙二醇、或聚氧化烯连接。
将依照本发明的重和轻链可变域与启动子、翻译起始、恒定区、3’非翻译区、多腺苷酸化、和转录终止的序列组合以形成表达载体构建体。可以将重和轻链表达构建体组合入单一载体中，共转染、连续转染、或分开转染入宿主细胞中，然后，将所述宿主细胞融合以形成表达这两条链的单一宿主细胞。
本发明的一方面是包含依照本发明的抗体的药物组合物。本发明的另一方面是依照本发明的抗体用于制造药物组合物的用途。本发明的又一方面是一种用于制造包含依照本发明的抗体的药物组合物的方法。在另一方面，本发明提供了含有与药用载体一起配制的依照本发明的抗体的组合物，例如药物组合物。
此外，依照本发明的抗HER3抗体已经证明了特别可用于治疗癌症。
因此，本发明的一方面是用于治疗癌症的所述药物组合物。
本发明的另一方面是用于治疗癌症的依照本发明的抗体。
本发明的另一方面是依照本发明的抗体用于制造供治疗癌症用的药物的用途。
本发明的另一方面是一种治疗患有癌症的患者的方法，其通过对需要此类治疗的所述患者施用依照本发明的抗体来进行。
如本文中所使用的，“药用载体”包括生理学相容的任何和所有溶剂、分散介质、涂层材料、抗细菌剂和抗真菌剂、等张剂和吸收延迟剂、等等。优选地，载体适合于静脉内、肌肉内、皮下、胃肠外、脊柱或表皮施用（例如通过注射或输注）。
可以通过本领域中已知的多种方法来施用本发明的组合物。如熟练技术人员会领会的，施用的路径和/或模式会随期望的结果而变化。为了通过某些施用路径来施用本发明的化合物，可能有必要用某种材料包被化合物，或者与某种材料共施用化合物以阻止其失活。例如，可以将化合物在合适的载体，例如脂质体或稀释剂中对受试者施用。药学可接受稀释剂包括盐水和水性缓冲溶液。药用载体包括无菌水溶液或分散体和供临场制备无菌可注射溶液或分散体用的无菌粉剂。对药学活性物质使用此类介质和药剂是本领域中已知的。
如本文中所使用的，短语“胃肠外施用”意指通常通过注射进行的与肠和表面施用不同的施用模式，并且包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注。
如本文中所使用的，术语“癌症”可以是例如肺癌、非小细胞肺(NSCL)癌、细支气管肺泡细胞肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛区癌、胃癌(stomach cancer)、胃癌(gastric cancer)、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、何杰金(Hodgkin)氏病、食管癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、间皮瘤、肝细胞癌、胆癌(biliary cancer)、中枢神经系统(CNS)新生物、脊柱轴肿瘤、脑干胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤(glioblastoma multiforme)、星形细胞瘤、神经鞘瘤(schwanoma)、室鼓膜瘤(ependymona)、髓母细胞瘤、脑脊膜瘤、鳞状细胞癌、垂体腺瘤、淋巴瘤、淋巴细胞性白血病，包括任何上述癌症的顽固性型式、或一种或多种上述癌症的组合。优选地，此类癌症是乳腺癌、肺癌、头或颈癌、或胰腺癌，优选的是肺癌、头或颈癌、或胰腺癌。优选地，此类癌症的进一步特征在于HER3表达或过表达，更优选地，HER3过表达。
这些组合物还可以含有佐剂诸如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。可以通过灭菌规程，见上文，及通过包括各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、酚、山梨酸等来确保防止微生物的存在。还可能期望将等张剂，诸如糖、氯化钠等纳入组合物中。另外，可以通过包括延迟吸收的药剂诸如单硬脂酸铝和明胶来引起可注射药物形式的吸收延长。
不管选择的施用路径，通过本领域技术人员已知的常规方法来将本发明的化合物（其可以以合适的水合形式使用）和/或本发明的药物组合物配制成药学可接受剂量形式。
可以改变活性成分在本发明的药物组合物中的实际剂量水平，从而获得对于实现特定患者的期望的治疗响应、组成、和施用模式有效的，而对患者无毒的活性成分量。选定的剂量水平会取决于多种药动学因素，包括所采用的本发明的特定组合物的活性、施用路径、施用时间、所采用的特定化合物的排泄速率、治疗的持续时间、与所采用的特定组合物组合使用的其它药物、化合物和/或材料、所治疗的患者的年龄、性别、重量、状况、一般健康和先前的医学史等医学领域公知的因素。
组合物必须是无菌的，而且是流体的，其程度使得组合物通过注射器可投递。在水外，载体优选地是等张缓冲盐水溶液。
可以例如通过使用涂层材料诸如卵磷脂、在分散体的情况中通过维持所要求的粒度、及通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。在许多情况中，优选在组合物中包含等张剂，例如糖、多元醇诸如甘露醇或山梨醇、和氯化钠。
提供以下实施例、序列表和图以帮助理解本发明，其实际范围在所附权利要求书中列出。应当理解，可以在不背离本发明的精神的前提下对所列规程做出修改。
序列表描述
SEQ ID NO:1    重链CDR3H，单抗205.10
SEQ ID NO:2    重链CDR2H，单抗205.10
SEQ ID NO:3    重链CDR1H，单抗205.10
SEQ ID NO:4    轻链CDR3L，单抗205.10
SEQ ID NO:5    轻链CDR2L，单抗205.10
SEQ ID NO:6    轻链CDR1L（变体1），单抗205.10
SEQ ID NO:7    轻链CDR1L（变体2），单抗205.10
SEQ ID NO:8    重链可变域VH，单抗205.10
SEQ ID NO:9    轻链可变域VL，单抗205.10.1
SEQ ID NO:10   轻链可变域VL，单抗205.10.2
SEQ ID NO:11   轻链可变域VL，单抗205.10.3
SEQ ID NO:12   人κ轻链恒定区
SEQ ID NO:13   自IgG1衍生的人重链恒定区
SEQ ID NO:14   自在L234A和L235A上突变的IgG1衍生的人重链恒定区
SEQ ID NO:15   自IgG4衍生的人重链恒定区
SEQ ID NO:16   自在S228P上突变的IgG4衍生的人重链恒定区
SEQ ID NO:17   人HER3
附图描述
图1A和B：抗HER3抗体在不同浓度中对MCF7细胞中受体磷酸化的百分比(%)抑制
图1C抗HER3抗体在不同浓度中对Mel-Juso细胞中受体磷酸化的百分比(%)抑制
图2单抗205(10mg/kg q7dx3,i.p.)的处理导致移植FaDu SCCHN的异种移植物的肿瘤淤滞
图3单抗205(10mg/kg q7d,i.p.)的处理导致移植MAXF449乳腺癌的异种移植物的肿瘤淤滞
图4单抗205(25mg/kg q7d,i.p.)的处理导致移植7177 NSCLC的异种移植物的肿瘤淤滞
实施例
实施例1
免疫
将NMRI小鼠用hHER3-ECD（自用）免疫，并用hu HER3-ECD加强。通过针对HER1/2/3-ECD-ELISA测试血清样品监测免疫应答。将来自具有足够的抗HER3免疫球蛋白滴度的小鼠的脾细胞冷冻，用于以后通过与小鼠骨髓瘤细胞系P3X63 Ag8.653融合来永生化。完成一次融合，并通过不显示交叉反应性，但结合HER3-ECD的HER1/2/-ECD-ELISA筛选杂交瘤上清液，并选出抗HER3选择性杂交瘤。通过单细胞FACS分选克隆相关杂交瘤。将来自不同杂交瘤的单细胞克隆在体外培养以在组织培养液中生成抗体以供表征。通过测定其抑制HER3磷酸化、AKT磷酸化和MDA-MB-175细胞的肿瘤细胞增殖的能力选出抗体（见下文实施例）。自获得的抗体，将一种抗体进一步人源化以给出下列抗体，即具有其各自VH和VL或CDR的单抗205.10.1、单抗205.10.2和单抗205.10.3。
  抗体   VH   VL
  单抗205.10.1   SEQ ID NO:8   SEQ ID NO:9
  单抗205.10.2   SEQ ID NO:8   SEQ ID NO:10
  单抗205.10.3   SEQ ID NO:8   SEQ ID NO:11
在一个实施方案中，使用人起源的恒定区，例如SEQ ID NO:12-13来制备此类抗体。
实施例2
结合测定法
a)用于结合人HER3 ECD的抗原特异性ELISA
将与链霉亲合素结合蛋白(SBP)融合的可溶性人HER3胞外域在链霉亲合素板上捕获。为了限定抗体对SPB-CDCP1的最佳结合，已经用纯的和逐步稀释的HEK293上清液（在BSA/IMDM缓冲液中：100mg/ml BSA级分V，Roche10735078001，在Iscove氏改良的Dulbeccos培养基中溶解）包被由MicroCoat,Bernried,Germany (ID-No.1734776-001)供应的384孔聚苯乙烯板（NUNC，经链霉亲合素包被的）。使用嵌合205抗体的小鼠校正曲线，鉴定相对于微量滴定板的链霉亲合素结合能力而言HEK293上清液的最佳稀释因子。对于标准包被，将含有SBP-HER3的HEK293上清液稀释（在1:15和1:40之间），并于2-80C温育过夜（每孔25μl）。微量滴定板的强烈清洗对于除去剩余的未结合的SBP-HER3是必需的。
测试未稀释的或使用12步稀释得到的依照本发明的抗体。将每孔12.5μl每种样品于室温温育90分钟。在使用PBS-T（在PBS中的0.1%Tween 20）强烈清洗后，添加25μl用于人抗体的与HRP偶联的山羊抗人IgG抗体（JacksonImmunoResearch,代码号：109-036-098,以1:10000稀释），并温育1小时。在强烈清洗后，用ABTS片(Roche Diagnostics GmbH,产品目录编号：1112422)检测抗体的结合。使用标准光度计测量于405nm/492nm的吸光度。
表显示了不同抗体的相对结合比率。
b)通过Biacore分析表征抗HER3抗体对人HER3的胞外域(ECD)片段的结合：
对于亲和力测量，在SPR仪(Biacore T100)上通过标准的胺偶联和封闭化学将30μg/ml抗Fcγ抗体（来自山羊，Jackson Immuno Research）偶联至CM-5传感器芯片表面。在缀合后，将抗HER3抗体于25°C以5μL/分钟的流速注射，接着以30μL/分钟注射连续稀释（0nM至1000nM）的人HER3 ECD。作为结合实验的运行缓冲液，使用PBS/0.1%BSA。然后，用10mM盐酸甘氨酸(pH 2.0)溶液的60秒脉冲再生芯片。
使用朗缪尔(Langmuir)1∶1结合模型计算热力学参数（KD，对HER3的结合常数）。
在竞争性结合测定法(Biacore)中，单抗205.10.1、单抗205.10.2、和单抗205.10.3都显示对相同表位的结合。在此类测定法中调查记载于WO2007/077028的抗HER3抗体U1-7、U-53和U1-59和记载于WO 2008/100624的Ab#6，并且揭示了它们与抗体单抗205.10.1、单抗205.10.2、和单抗205.10.3结合不同表位。
实施例3
a)对MCF7、FaDu和Mel-Juso细胞中HER3磷酸化的抑制
依照以下方案在MCF7和FaDu细胞中实施测定法：以500,000个细胞/孔将细胞接种入经聚-D-赖氨酸包被的6孔板中在具有10%FCS的RPMI1640培养基中。温育24小时。通过抽吸除去培养基，在500μl/孔具有0.5%FCS的RPMI1640的情况中温育过夜。添加500μl具有0.5%FCS的RPMI 1640中的抗体。温育1小时。添加HRG-1b（终浓度500ng/ml）达10分钟。为了裂解细胞，除去培养基，并添加80μl冰冷的Triton-X-100细胞裂解缓冲液，并在冰上温育5分钟。在将裂解物转移入1.5ml反应管中并以14000rpm于4°C离心15分钟后，将上清液转移入新鲜的反应管中。将SDS加载缓冲液中含有等量蛋白质的样品在SDS PAGE上分离，并通过使用半干Western印迹来印迹至硝酸纤维素膜。通过1xNET缓冲液+0.25%明胶将膜封闭1小时，并分别通过抗体α磷酸-HER3/ErbB3(Tyr1289)(21D3),Cell Signaling,#4791检测pHER3，并通过抗体αErbB3(C-17),Santa Cruz,#sc-285检测HER3。在清洗并通过POD偶联的二抗检测信号后，用密度计扫描条带。调查抗HER3抗体单抗205.10.1、单抗205.10.2、和单抗205.10.3和还有记载于WO 2007/077028的抗HER3抗体U1-7、U-53和U1-59和记载于WO 2008/100624的Ab#6。在下文和图1A中显示了抗HER3抗体对MCF7细胞中受体磷酸化的百分比(%)抑制。
对MCF7细胞中HER3磷酸化的%抑制
在又一个实验中，调查抗HER3抗体单抗205.10.2、和还有记载于WO97/35885的抗HER3抗体8B8.2D9、和记载于WO 2003/013602的1B4C3和2D1D12。在下文和图1B中显示了抗HER3抗体对MCF7细胞中受体磷酸化的百分比(%)抑制。
对MCF7细胞中HER3磷酸化的%抑制
下文显示了抗HER3抗体对FaDu细胞中受体磷酸化的百分比(%)抑制。
对FaDu细胞中HER3磷酸化的%抑制
在又一个实施方案中，在Mel-Juso细胞中调查抗HER3抗体单抗205.10.2、和还有记载于WO 97/35885的抗HER3抗体8B8.2D9、和记载于WO2003/013602的1B4C3和2D1D12、和105.5（Millipore，产品目录编号05-47，在WO 2003/013602中称作α-HERECD）。依照关于MCF7和FaDu细胞的前述方案实施Mel-Juso细胞中的测定法。使细胞数目和培养基体积适应于12孔板。在下文和图1C中显示了抗HER3抗体对Mel-Juso细胞中受体磷酸化的百分比(%)抑制。
对Mel-Juso细胞中HER3磷酸化的%抑制
b)AKT磷酸化(ELISA)
依照以下方案在MCF7细胞中实施测定法：以30000个细胞/孔将MCF7细胞接种入经聚-D-赖氨酸包被的96孔板中在具有10%FCS的RPMI1640培养基中，并温育24小时。通过在干净的纸巾上轻打来除去培养基，用200μl无血清培养基仔细清洗，在100μl/孔具有0.5%FCS的RPMI 1640的情况中温育过夜。如上述的，除去培养基；添加100μl具有0.5%FCS的RPMI 1640中的抗体，并温育1.5小时。添加HRG-1b（终浓度5ng/ml）达10分钟。如上述的，除去培养基。为了裂解细胞，在冰上添加100μl冰冷的细胞裂解缓冲液，并通过移液约5次来重悬。以3000rpm于4°C将板离心10分钟，并将80μl上清液（或等分试样）转移入新鲜的聚丙烯板中，并在LN2中急速冷冻。于-80°C贮存，直至测定法。
AKT1,2（磷酸-Ser473）EIA试剂盒测定法设计#900-162：将样品（1:10稀释的）添加至用对AKT N端特异性的小鼠单抗包被的板。于RT在摇动的情况中温育1小时。清洗5次，于RT在摇动的情况中与生物素化的抗磷酸-AKT(Ser473)一起温育1小时。清洗5次，于RT在摇动的情况中与链霉亲合素-HRP缀合物一起温育30分钟。清洗5次，于RT在摇动的情况中与TMB底物一起温育30分钟。停止，并于450nm读取。
单抗205.10.2显示AKT磷酸化抑制的IC50为0.06μg/ml。
如对MCF7细胞所描述的，实施在Mel-Juso细胞中的pAKT ELISA。单抗205.10.2显示AKT磷酸化抑制的IC50为0.28μg/ml，所有其它分析物抗体显示IC50高于(>)50。
Mel-Juso细胞中的%AKT磷酸化抑制
  抗体   IC50[μg/ml]
  单抗205.10.2   0.28
  105.5(α-HERECD)   0.81
  1B4C3   >50
  2D1D12   >50
  8B8D9   >50
c)对肿瘤细胞增殖的抑制
评估HER3抗体单抗205.10.1、单抗205.10.2、和单抗205.10.3在使用MDA-MB-175细胞（VII人乳腺癌细胞，ATCC产品目录编号HTB-25）的细胞增殖测定法中的抗肿瘤效力。将每孔20,000个细胞接种入具有含有10%FCS的DMEM/F12细胞培养基的无菌96孔组织培养板中，并于37°C±1°C在5%±1%CO2的情况中温育1天。细胞是缓慢生长的细胞，倍增时间是约1.5天。将抗HER3抗体以稀释系列添加，并再温育6天。然后，使用读出评估细胞存活力。若细胞存活力降低至对照的大于50%，则对每个抗体浓度使用一式三份的均值计算IC50值；不然，若在最高浓度对细胞存活力的%抑制低于50%，则不可计算IC50，并且指示IC50[μg/ml]高于(>)最高的浓度。还调查记载于WO 2007/077028的抗HER3抗体U1-59和记载于WO2008/100624的Ab#6。
  抗体   IC50[μg/ml]
  单抗205.10.1   8.0
  单抗205.10.2   3.8
  单抗205.10.3   6.8
  U1-59   12.4
  Ab#6   >60μg/ml
在又一个实验中，调查记载于WO 97/35885的抗HER3抗体8B8.2D9和记载于WO 2003/013602的1B4C3。
实施例5
按1μg/ml比裂解(specLysis)%计，KPL-4肿瘤细胞中的体外ADCC
在指数生长期中用胰蛋白酶/EDTA(Gibco#25300-054)收集靶细胞KPL4(ADCC)，乳腺癌，在RPMI1640+2mM L-丙氨酰-L-谷氨酰胺+10%FCS中培养）。在清洗步骤并检查细胞数目和存活力后，于37°C在细胞培养箱中用钙黄绿素（Invitrogen#C3100MP；将1管形瓶在50μl DMSO中重悬，用于5ml培养基中的5百万(Mio)个细胞）标记所需等分试样30分钟。然后，将细胞用AIM-V培养基清洗3次，检查细胞数目和存活力，并将细胞数目调节至0.3百万/ml。
同时，通过密度梯度离心(Histopaque-1077,Sigma#H8889)依照制造商的方案（清洗步骤以400g 1x和350g 2x，各10分钟）制备作为效应细胞的PBMC（外周血单个核细胞）。检查细胞数目和存活力，并将细胞数目调节至15百万/ml。
将100μl经钙黄绿素染色的靶细胞在圆底96孔板中分配，添加50μl稀释的、无岩藻糖基化的抗体（单抗205.10.1、单抗205.10.2、单抗205.10.3，制备见下文）和50μl效应细胞。在一些实验中，将靶细胞与10mg/ml Redimune浓度的NF液体(ZLB Behring)混合。
通过在没有抗体的情况中共培养靶细胞和效应细胞测定充当对照的自发裂解，并通过仅对靶细胞的1% Triton X 100裂解测定最大裂解。将板于37°C在湿润的细胞培养箱中温育4小时。
使用细胞毒性检测试剂盒（LDH检测试剂盒，Roche#1 644 793）依照制造商的用法说明书通过测量来自受损伤细胞的LDH（乳酸脱氢酶）释放评估对靶细胞的杀伤。简言之，将100μl来自每个孔的上清液在透明平底96孔板中与来自试剂盒的100μl底物混合。在ELISA阅读器中于490nm测定底物的颜色反应的Vmax值至少10分钟。特异性抗体介导的杀伤的百分比如下计算：((A–SR)/(MR–SR)x100，其中A是特定抗体浓度的Vmax的均值，SR是自发释放的Vmax的均值，而MR是最大释放的Vmax的均值。
作为额外的读出，如下评估完整靶细胞的钙黄绿素保留，即在硼酸盐缓冲液（5mM硼酸钠+0.1%Triton）中裂解剩余的靶细胞，并在荧光读板仪中测量钙黄绿素荧光。单抗205.10.1、单抗205.10.2、单抗205.10.3显示约40-60%的按1μg/ml比裂解计的ADCC[KPL-4]。
通过分别在HEK293或CHO细胞中用4种质粒（两种用于抗体表达，一种用于融合GnTIII多肽表达（GnT-III表达载体），及一种用于甘露糖苷酶II表达（高尔基甘露糖苷酶II表达载体））以4:4:1:1的比率共转染来制备无岩藻糖基化的抗体（单抗205.10.1、单抗205.10.2、单抗205.10.3）。
将完整的抗体重和轻链DNA序列在MPSV启动子的控制下且在合成的多聚A位点上游亚克隆入哺乳动物表达载体（一种用于轻链，而一种用于重链）中，每种载体携带EBV OriP序列。使用磷酸钙转染方法通过用抗体重和轻链表达载体共转染HEK293-EBNA细胞或CHO细胞生成抗体。通过磷酸钙方法转染指数生长的HEK293-EBNA细胞。对于糖工程化抗体的生成，分别用4种质粒（两种用于抗体表达，一种用于融合GnTIII多肽表达（GnT-III表达载体），及一种用于甘露糖苷酶II表达（高尔基甘露糖苷酶II表达载体））以4:4:1:1的比率共转染细胞。使用补充有10%FCS的DMEM培养基将细胞以粘附的单层培养物在T烧瓶中培养，并在它们为50-80%汇合时转染。对于T150烧瓶的转染，在转染前24小时将1500万个细胞在25ml补充有FCS（最终为10%V/V）的DMEM培养基中接种，并将细胞于37°C在培养箱中在5%CO2气氛的情况中放置过夜。对于要生成的每种抗体，通过混合188μg总质粒载体DNA（4种载体，两种用于抗体表达（一种用于轻链和一种用于重链），一种用于融合GnTIII多肽表达（GnT-III表达载体），及一种用于甘露糖苷酶II表达（高尔基甘露糖苷酶II表达载体），比率为4:4:1:1）、至终体积938μl的水和938μl 1M CaCl2溶液制备DNA、CaCl2和水的溶液。对此溶液添加1876μl50mM HEPES、280mM NaCl、1.5mM Na2HPO4溶液(pH 7.05)，立即混合10秒，并于室温保持竖立20秒。将悬浮液用46ml补充有2%FCS的DMEM稀释，并分入两个T150烧瓶中，替换现有的培养基。
将细胞于37°C，5%CO2温育约17至20小时，然后用25ml DMEM，10%FCS更换培养基。转染后7天通过以210xg离心15分钟收获条件化培养基，将溶液无菌过滤（0.22μm滤器），并添加终浓度0.01%w/v的叠氮化纳，并于4°C保持。
纯化分泌的无岩藻糖基化抗体，并例如通过MALDI/TOF-MS（如记载于例如WO 2008/077546的）分析附着于抗体Fc区的寡糖。对于此分析，通过PNG酶F消化自抗体用酶释放寡糖，其中抗体固定化于PVDF膜上或在溶液中。将含有释放的寡糖的所得消化溶液直接制备好进行MALDI/TOF-MS分析或者用EndoH糖苷酶进一步消化，之后将样品制备好进行MALDI/TOF-MS分析。Asn297处的糖链内岩藻糖的分析量是50-20%。
实施例6
体内抗肿瘤效力
可以在对SCID米色小鼠或裸鼠移植的各种肿瘤起源（例如，肺癌、SCCHN、乳腺和胰腺癌）的基于细胞和碎块的模型中检测抗体单抗205.10.1、单抗205.10.2、单抗205.10.3的体内抗肿瘤效力。举例而言，对SCCHN异种移植物模型FaDu（基于细胞系的）、乳腺癌模型MAXF449（基于碎块的）和NSCLC模型7177（基于碎块的）显示了数据。
测试剂
以来自Roche,Penzberg,Germany的储备溶液提供无岩藻糖基化的单抗205.10.2（在图2、3、4中称作单抗205）。抗体缓冲液包含组氨酸。将抗体溶液在注射前自储液在缓冲液中适当稀释。
细胞系和培养条件
FaDu人HNSCC细胞最初获自ATCC。将肿瘤细胞系在补充有10%胎牛血清、2mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠和0.1mM NEAA的MEM Eagle培养基中于37°C在水饱和的气氛中于5%CO2常规培养。用胰蛋白酶/EDTA一次实施培养物传代，每三天拆分。
肿瘤碎块
肿瘤碎块最初自患者采集，并s.c.移植至供体裸鼠。随后，将肿瘤碎块在体内连续传代。对于临床前研究，自供体小鼠生成小的肿瘤碎块，并在别的裸鼠(MAXF449,7177)上s.c.放置。
动物
雌性SCID米色小鼠或裸鼠购自育种者（例如，Charles River,Sulzfeld,Germany），并在无特定病原体条件下以12小时光照/12小时黑暗的每日循环依照承诺的准则(GV-Solas;Felasa;TierschG)维持。实验研究方案得到地方政府审阅和批准。在到达后，将动物在动物房的检疫部分中维持1周以习惯新的环境并进行观察。定期实施连续健康监测。任意提供饮食食物(ProvimiKliba 3337)和水（酸化为pH 2.5-3）。
监测
每天对动物控制临床症状并检测不利效果。对于贯穿整个实验的监测，记录动物的体重。
动物的处理
在动物随机化后在细胞或碎块移植后在中值肿瘤大小是约100-150mm3时开始动物处理。将抗体作为单一药剂以10至25mg/kg i.p.q7d每周施用一次，随模型持续3-6周。在同一天施用相应的媒介物。
抗体效力
A)FaDu HNSCC异种移植物
自研究日14至35用抗体单抗205.10.2处理携带FaDu HNSCC异种移植物的小鼠。结果，单抗205.10.2抗体的处理显示显著抗肿瘤效力，伴有s.c.FaDu异种移植物的肿瘤淤滞。肿瘤生长抑制(TGI)计算为98%。
单抗205的处理(10mg/kg q7dx3,i.p.)导致移植FaDu SCCHN的异种移植物的肿瘤淤滞（见图2）。
B)MAXF449乳腺癌异种移植物
自研究日64至91用抗体单抗205.10.2处理携带MAXF449乳腺癌异种移植物的小鼠。结果，单抗205.10.2抗体的处理显示显著抗肿瘤效力，伴有MAXF449异种移植物的肿瘤淤滞。肿瘤生长抑制(TGI)超过100%。
单抗205的处理(10mg/kg q7d,i.p.)导致移植MAXF449乳腺癌的异种移植物的肿瘤淤滞（见图3）。
C)7177 NSCLC异种移植物
自研究日28至56用抗体单抗205.10.2处理携带7177 NSCLC异种移植物的小鼠。结果，单抗205.10.2抗体的处理显示显著抗肿瘤效力，伴有7177NSCLC异种移植物的肿瘤淤滞。肿瘤生长抑制(TGI)超过100%。
单抗205的处理(25mg/kg q7d,i.p.)导致移植7177 NSCLC的异种移植物的肿瘤淤滞（见图4）。

Claims (17)

1.一种结合人HER3的抗体，其特征在于：重链可变域VH是SEQ ID NO:8；且轻链可变域VL是SEQ ID NO:9，或轻链可变域VL是SEQ ID NO:10，或轻链可变域VL是SEQ ID NO:11。
2.依照权利要求1的抗体，其特征在于：所述重链可变域VH是SEQ IDNO:8；且所述轻链可变域VL是SEQ ID NO:10。
3.依照权利要求1的抗体，其特征在于：所述重链可变域VH是SEQ IDNO:8；且所述轻链可变域VL是SEQ ID NO:9，或所述轻链可变域VL是SEQ ID NO:11。
4.依照权利要求1至3中任一项的抗体，其特征在于：所述抗体是单克隆的。
5.依照权利要求1至3中任一项的抗体，其特征在于：所述抗体是IgG1亚类的。
6.依照权利要求4的抗体，其特征在于：所述抗体是IgG1亚类的。
7.依照权利要求1至3和6中任一项的抗体，其特征在于：所述抗体是在Asn297处用糖链糖基化的，其中所述糖链内岩藻糖的量是65％或更低。
8.依照权利要求4的抗体，其特征在于：所述抗体是在Asn297处用糖链糖基化的，其中所述糖链内岩藻糖的量是65％或更低。
9.依照权利要求5的抗体，其特征在于：所述抗体是在Asn297处用糖链糖基化的，其中所述糖链内岩藻糖的量是65％或更低。
10.依照权利要求7的抗体，其中所述糖链内岩藻糖的量在5％和65％之间。
11.依照权利要求8或9的抗体，其中所述糖链内岩藻糖的量在5％和65％之间。
12.一种药物组合物，其特征在于包含依照权利要求1至11中任一项的抗体。
13.依照权利要求1至11中任一项的抗体用于制造供治疗癌症用的药物的用途。
14.一种编码依照权利要求1至11中任一项的抗体的核酸。
15.一种表达载体，其特征在于：包含依照权利要求14的核酸以在原核或真核宿主细胞中表达依照权利要求1至11中任一项的抗体。
16.一种原核或真核宿主细胞，其包含依照权利要求15的载体。
17.一种用于生成依照权利要求1至11中任一项的重组抗体的方法，其特征在于在原核或真核宿主细胞中表达依照权利要求14的核酸，并自所述细胞或细胞培养物上清液回收所述抗体。
CN201080064271.3A 2009-12-22 2010-12-17 抗her3抗体及其用途 Active CN102822201B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP09015831.2 2009-12-22
EP09015831 2009-12-22
PCT/EP2010/070062 WO2011076683A1 (en) 2009-12-22 2010-12-17 Anti-her3 antibodies and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102822201A CN102822201A (zh) 2012-12-12
CN102822201B true CN102822201B (zh) 2014-09-24

Family

ID=42126432

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201080064271.3A Active CN102822201B (zh) 2009-12-22 2010-12-17 抗her3抗体及其用途

Country Status (33)

Country Link
US (4) US8859737B2 (zh)
EP (1) EP2516469B1 (zh)
JP (2) JP5680671B2 (zh)
KR (2) KR20120098911A (zh)
CN (1) CN102822201B (zh)
AR (1) AR079551A1 (zh)
AU (1) AU2010335282B2 (zh)
BR (1) BR112012015255A2 (zh)
CA (1) CA2782571C (zh)
CL (1) CL2012001649A1 (zh)
CO (1) CO6551674A2 (zh)
CR (1) CR20120284A (zh)
CY (1) CY1117563T1 (zh)
DK (1) DK2516469T3 (zh)
EC (1) ECSP12011995A (zh)
ES (1) ES2571226T3 (zh)
HK (1) HK1175183A1 (zh)
HR (1) HRP20160737T1 (zh)
HU (1) HUE029026T2 (zh)
IL (1) IL220162A (zh)
MA (1) MA33892B1 (zh)
MX (1) MX2012007340A (zh)
MY (1) MY161909A (zh)
NZ (1) NZ600262A (zh)
PE (1) PE20121616A1 (zh)
PL (1) PL2516469T3 (zh)
RS (1) RS54795B1 (zh)
RU (1) RU2560583C2 (zh)
SG (1) SG181894A1 (zh)
SI (1) SI2516469T1 (zh)
TW (1) TWI421092B (zh)
UA (1) UA107821C2 (zh)
WO (1) WO2011076683A1 (zh)

Families Citing this family (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MY152068A (en) 2009-03-20 2014-08-15 Genentech Inc Bispecific anti-her antibodies
PE20120550A1 (es) * 2009-04-07 2012-05-21 Roche Glycart Ag ANTICUERPOS BIESPECIFICOS ANTI-ErbB-3/ANTI-C-MET
KR20120098911A (ko) * 2009-12-22 2012-09-05 로슈 글리카트 아게 항-ｈｅｒ3 항체 및 이의 용도
MX348739B (es) 2010-03-10 2017-06-27 F Hoffmann-La Roche Ag * Metodo para purificar soluciones de inmunoglobulina.
ES2566602T3 (es) 2010-04-09 2016-04-14 Aveo Pharmaceuticals, Inc. Anticuerpos anti-ErbB3
SI2606070T1 (sl) 2010-08-20 2017-04-26 Novartis Ag Protitelesa za receptor 3 epidermalnega rastnega faktorja (HER3)
ITRM20100577A1 (it) 2010-11-02 2012-05-03 Takis Srl Immunoterapia contro il recettore erbb-3
US20120258073A1 (en) 2011-02-10 2012-10-11 Christian Gerdes Immunotherapy
US20150231238A1 (en) 2011-03-15 2015-08-20 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Overcoming resistance to erbb pathway inhibitors
DK2699602T3 (en) 2011-04-19 2017-06-06 Merrimack Pharmaceuticals Inc BISPECIFIC ANTI-IGF-1R AND ANTI-ERBB3 ANTIBODIES
BR112014003598B1 (pt) 2011-08-23 2022-05-31 Roche Glycart Ag Molécula de ligação de antígeno biespecífica, composição farmacêutica e uso da molécula de ligação de antígeno biespecífica
US9273143B2 (en) 2011-09-30 2016-03-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions comprising a combination of an anti-ErbB3 antibody and an anti-EGFR antibody
ES2694153T3 (es) * 2011-09-30 2018-12-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anticuerpos anti-ErbB3 y usos de los mismos
US9828635B2 (en) 2011-10-06 2017-11-28 Aveo Pharmaceuticals, Inc. Predicting tumor response to anti-ERBB3 antibodies
BR112014012539B1 (pt) 2011-11-23 2022-12-20 Medimmune, Llc Anticorpo que se liga especificamente a her3, composição compreendendo o mesmo, e usos do anticorpo
SG11201402510TA (en) 2011-11-30 2014-06-27 Genentech Inc Erbb3 mutations in cancer
ES2758433T3 (es) * 2011-12-05 2020-05-05 Novartis Ag Anticuerpos contra el receptor 3 del factor de crecimiento epidérmico (HER3)
JP2015514710A (ja) 2012-03-27 2015-05-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｈｅｒ３阻害剤に関する診断及び治療
ES2848732T3 (es) 2012-08-07 2021-08-11 Roche Glycart Ag Inmunoterapia mejorada
AR094403A1 (es) * 2013-01-11 2015-07-29 Hoffmann La Roche Terapia de combinación de anticuerpos anti-her3
WO2014114595A1 (en) 2013-01-23 2014-07-31 Roche Glycart Ag Predictive biomarker for cancer treatment with adcc-enhanced antibodies
WO2014159915A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Her3 specific monoclonal antibodies for diagnostic and therapeutic use
US20140271634A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 The Regents Of The University Of California Combinations of a mek inhibitor compound with an her3/egfr inhibitor compound and methods of use
CN105121471A (zh) * 2013-04-16 2015-12-02 豪夫迈·罗氏有限公司 帕妥珠单抗变体及其评估
US11305012B2 (en) 2013-09-24 2022-04-19 Medimmune, Llc Binding molecules specific for HER3 and uses thereof
US10519247B2 (en) * 2013-11-01 2019-12-31 Board Of Regents,The University Of Texas System Targeting HER2 and HER3 with bispecific antibodies in cancerous cells
EP3087394A2 (en) 2013-12-27 2016-11-02 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Biomarker profiles for predicting outcomes of cancer therapy with erbb3 inhibitors and/or chemotherapies
WO2015157634A1 (en) 2014-04-11 2015-10-15 Kolltan Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbb antibodies and methods of use thereof
CA2944895A1 (en) 2014-05-14 2015-11-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-her3 antibodies binding to the beta-hairpin of her3
EP3143049B1 (en) 2014-05-14 2019-08-21 F. Hoffmann-La Roche AG Her3/her2 bispecific antibodies binding to the beta-hairpin of her3 and domain ii of her2
CN105367657B (zh) * 2014-08-14 2019-09-13 上海生物制品研究所有限责任公司 抗her3抗体、其制法及其应用
EP3091033A1 (en) * 2015-05-06 2016-11-09 Gamamabs Pharma Anti-human-her3 antibodies and uses thereof
US10184006B2 (en) 2015-06-04 2019-01-22 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Biomarkers for predicting outcomes of cancer therapy with ErbB3 inhibitors
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
WO2017100642A1 (en) 2015-12-11 2017-06-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing or preventing growth of tumors resistant to egfr and/or erbb3 blockade
CA3011949A1 (en) 2016-03-15 2017-09-21 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating er+, her2-, hrg+ breast cancer using combination therapies comprising an anti-erbb3 antibody
KR101923641B1 (ko) * 2016-11-25 2018-11-29 재단법인 목암생명과학연구소 항her3 항체 및 이를 포함하는 암 예방 또는 치료용 조성물
TW202039567A (zh) 2018-12-21 2020-11-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 靶向腫瘤之促效cd28抗原結合分子

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1214695A (zh) * 1996-03-27 1999-04-21 基因技术股份有限公司 ErdB3抗体
CN1541109A (zh) * 2001-08-09 2004-10-27 ���տƼ��ٽ�Э�� Her3活性抑制剂
CN101365723A (zh) * 2005-12-30 2009-02-11 U3制药股份公司 针对her-3的抗体及其用途

Family Cites Families (58)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
JPS6023084B2 (ja) 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
DE3675588D1 (de) 1985-06-19 1990-12-20 Ajinomoto Kk Haemoglobin, das an ein poly(alkenylenoxid) gebunden ist.
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2, Inc., Danville, Calif. Geänderte antikörper.
US5202238A (en) 1987-10-27 1993-04-13 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US5204244A (en) 1987-10-27 1993-04-20 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US5183884A (en) 1989-12-01 1993-02-02 United States Of America Dna segment encoding a gene for a receptor related to the epidermal growth factor receptor
US6750334B1 (en) 1996-02-02 2004-06-15 Repligen Corporation CTLA4-immunoglobulin fusion proteins having modified effector functions and uses therefor
ES2340112T3 (es) 1998-04-20 2010-05-28 Glycart Biotechnology Ag Ingenieria de glicosilacion de anticuerpos para la mejora de la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos.
CA2704600C (en) 1999-04-09 2016-10-25 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. A method for producing antibodies with increased adcc activity
AUPQ105799A0 (en) 1999-06-18 1999-07-08 Victor Chang Cardiac Research Institute, The Cell growth inhibition
FR2807767B1 (fr) 2000-04-12 2005-01-14 Lab Francais Du Fractionnement Anticorps monoclonaux anti-d
EP1228766A1 (en) 2001-01-31 2002-08-07 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. PYK2 phosphorylation by HER3 induces tumor invasion
US7744882B2 (en) * 2001-05-31 2010-06-29 Tumor Biology Investment Group, Inc. Soluble ErbB3 methods of detection and antibodies
MXPA04003798A (es) 2001-10-25 2004-07-30 Genentech Inc Composiciones de glicoproteina.
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
US7919098B2 (en) 2002-03-26 2011-04-05 Zensun ( Shanghai ) Sci & Tech Co., Ltd. ErbB-3 based methods and compositions for treating neoplasms
EP2248892B1 (en) 2003-01-22 2015-04-22 Roche Glycart AG Fusion constructs and use of same to produce antibodies with increased FC receptor binding affinity and effector function
WO2005011735A1 (en) 2003-07-29 2005-02-10 Morphotek, Inc. Antibodies and methods for generating genetically altered antibodies with enhanced effector function
WO2005018572A2 (en) 2003-08-22 2005-03-03 Biogen Idec Ma Inc. Improved antibodies having altered effector function and methods for making the same
WO2005027966A2 (en) 2003-09-05 2005-03-31 Genentech, Inc. Antibodies with altered effector functions
SI2380911T1 (en) 2003-11-05 2018-07-31 Roche Glycart Ag ANTIGEN-RELATED PATIENTS WITH INCREASED ATTENTION ON THE RECEPTOR FC AND EFFECTORAL FUNCTION
KR20070050951A (ko) 2004-09-08 2007-05-16 제넨테크, 인크. 사멸 수용체 리간드 및 ｃｄ20 항체의 사용 방법
CA2587766A1 (en) 2004-11-10 2007-03-01 Macrogenics, Inc. Engineering fc antibody regions to confer effector function
TW200720289A (en) 2005-04-01 2007-06-01 Hoffmann La Roche Antibodies against CCR5 and uses thereof
WO2006114700A2 (en) 2005-04-26 2006-11-02 Bioren, Inc. Method of producing human igg antibodies with enhanced effector functions
WO2006116260A2 (en) 2005-04-26 2006-11-02 Medimmune, Inc. Modulation of antibody effector function by hinge domain engineering
BRPI0615397B1 (pt) 2005-08-26 2023-10-03 Roche Glycart Ag Anticorpo anti-cd20, composição farmacêutica que o contém e uso do mesmo
EP1914242A1 (en) 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
EP2097754B2 (en) 2006-11-28 2018-01-24 Daiichi Sankyo Europe GmbH Activated her3 as a marker for predicting therapeutic efficacy
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
PL2129396T3 (pl) * 2007-02-16 2014-02-28 Merrimack Pharmaceuticals Inc Przeciwciała przeciw ERBB3 i ich zastosowania
EP2138511A1 (en) 2008-06-27 2009-12-30 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. HER3 as a determinant for the prognosis of melanoma
BRPI0917871A2 (pt) 2008-08-15 2017-06-20 Merrimack Pharmaceuticals Inc agente terapêutico anti-erbb3 para uso em terapia de um tumor, métodos para predizer responsividade de um tumor de um agente terapêutco anti-erbb3, para selecionar terapia anti-erbb3 para um paciente, para predizer a resposta de células ao tratamento com um agente terapêutico, para identificar um biomarcador, e para evitar administração de uma droga para câncer anti-erbb3, e, kit para predizer a resposta das células ao tratamento com um agente terapêutico
US8349574B2 (en) 2009-01-15 2013-01-08 Laboratory Corporation Of America Holdings Methods of determining patient response by measurement of Her-3
MY152068A (en) 2009-03-20 2014-08-15 Genentech Inc Bispecific anti-her antibodies
PE20120550A1 (es) 2009-04-07 2012-05-21 Roche Glycart Ag ANTICUERPOS BIESPECIFICOS ANTI-ErbB-3/ANTI-C-MET
WO2010127181A1 (en) 2009-04-29 2010-11-04 Trellis Bioscience, Inc. Improved antibodies immunoreactive with heregulin-coupled her3
MX336091B (es) 2009-08-21 2016-01-08 Merrimack Pharmaceuticals Inc Anticuerpos contra el extodominio de erbb3 y usos de los mismos.
JP2013507378A (ja) 2009-10-09 2013-03-04 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション 抗ｈｅｒ３抗体の製造、特徴づけ及びその用途
US10208128B2 (en) 2009-11-04 2019-02-19 Affibody Ab HER3 binding polypeptides
JP5931736B2 (ja) 2009-11-13 2016-06-08 ウー３・フアルマ・ゲー・エム・ベー・ハーＵ３ Ｐｈａｒｍａ Ｈｅｒ−３関連疾患を治療または予防するための物質および方法
KR20120098911A (ko) * 2009-12-22 2012-09-05 로슈 글리카트 아게 항-ｈｅｒ3 항체 및 이의 용도
EP2859893A1 (en) 2010-03-11 2015-04-15 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Use of ERBB3 inhibitors in the treatment of triple negative and basal-like breast cancers
ES2566602T3 (es) 2010-04-09 2016-04-14 Aveo Pharmaceuticals, Inc. Anticuerpos anti-ErbB3
WO2012019024A2 (en) 2010-08-04 2012-02-09 Immunogen, Inc. Her3-binding molecules and immunoconjugates thereof
US20120156130A1 (en) 2010-08-06 2012-06-21 Thore Hettmann Use of her3 binding agents in prostate treatment
SI2606070T1 (sl) 2010-08-20 2017-04-26 Novartis Ag Protitelesa za receptor 3 epidermalnega rastnega faktorja (HER3)
TW201302793A (zh) 2010-09-03 2013-01-16 Glaxo Group Ltd 新穎之抗原結合蛋白
CA2811747A1 (en) 2010-09-30 2012-04-05 Merck Sharp & Dohme Corp. Generation, characterization and uses thereof of anti-her3 antibodies
CA2813796C (en) 2010-10-18 2019-01-15 Mediapharma S.R.L. Erbb3 binding antibody
US9155802B2 (en) * 2010-11-01 2015-10-13 Symphogen A/S Pan-HER antibody composition
ES2692379T3 (es) 2010-11-01 2018-12-03 Symphogen A/S Anticuerpos anti-HER3 y composiciones
ITRM20100577A1 (it) 2010-11-02 2012-05-03 Takis Srl Immunoterapia contro il recettore erbb-3
ES2694153T3 (es) 2011-09-30 2018-12-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anticuerpos anti-ErbB3 y usos de los mismos

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1214695A (zh) * 1996-03-27 1999-04-21 基因技术股份有限公司 ErdB3抗体
CN1541109A (zh) * 2001-08-09 2004-10-27 ���տƼ��ٽ�Э�� Her3活性抑制剂
CN101365723A (zh) * 2005-12-30 2009-02-11 U3制药股份公司 针对her-3的抗体及其用途

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Matsumiya Set al.Structural comparisonof fucosylated and nonfucosylated Fc fragments of human immunoglobulin G1.《J Mol Biol,》.2007,767-779.
Quantitative in vivocomparisons of the Fcγ receptor-dependent agonist activities of different fucosylation variants of an immunoglobulin G antibody;Scallon B;《Int Immunopharmacol》;20071231;761-772 *
Scallon B.Quantitative in vivocomparisons of the Fcγ receptor-dependent agonist activities of different fucosylation variants of an immunoglobulin G antibody.《Int Immunopharmacol》.2007,761-772.
Structural comparisonof fucosylated and nonfucosylated Fc fragments of human immunoglobulin G1;Matsumiya Set al;《J Mol Biol,》;20071231;767-779 *

Also Published As

Publication number Publication date
US10196456B2 (en) 2019-02-05
CA2782571C (en) 2018-01-23
US9611331B2 (en) 2017-04-04
IL220162A0 (en) 2012-07-31
PE20121616A1 (es) 2012-12-05
HRP20160737T1 (hr) 2016-07-15
WO2011076683A1 (en) 2011-06-30
RU2560583C2 (ru) 2015-08-20
JP5680671B2 (ja) 2015-03-04
SG181894A1 (en) 2012-08-30
CA2782571A1 (en) 2011-06-30
US20140377273A1 (en) 2014-12-25
NZ600262A (en) 2013-06-28
CR20120284A (es) 2012-09-04
US20140377272A1 (en) 2014-12-25
KR20140130751A (ko) 2014-11-11
JP2015109848A (ja) 2015-06-18
US20110171222A1 (en) 2011-07-14
TWI421092B (zh) 2014-01-01
HUE029026T2 (en) 2017-01-30
KR20120098911A (ko) 2012-09-05
CO6551674A2 (es) 2012-10-31
CY1117563T1 (el) 2017-04-26
MY161909A (en) 2017-05-15
DK2516469T3 (en) 2016-05-02
CN102822201A (zh) 2012-12-12
ES2571226T3 (es) 2016-05-24
BR112012015255A2 (pt) 2017-01-10
JP2013514793A (ja) 2013-05-02
IL220162A (en) 2017-04-30
PL2516469T3 (pl) 2017-08-31
MA33892B1 (fr) 2013-01-02
AU2010335282A1 (en) 2012-07-12
EP2516469A1 (en) 2012-10-31
AU2010335282B2 (en) 2015-05-21
MX2012007340A (es) 2012-08-01
CL2012001649A1 (es) 2012-10-12
ECSP12011995A (es) 2012-07-31
US8859737B2 (en) 2014-10-14
RS54795B1 (sr) 2016-10-31
UA107821C2 (en) 2015-02-25
EP2516469B1 (en) 2016-03-30
HK1175183A1 (zh) 2013-06-28
TW201130510A (en) 2011-09-16
AR079551A1 (es) 2012-02-01
US20170174784A1 (en) 2017-06-22
RU2012129735A (ru) 2014-01-27
SI2516469T1 (sl) 2016-05-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102822201B (zh) 抗her3抗体及其用途
CN108752476B (zh) 一种pdl-1抗体、其药物组合物及其用途
CN102482357B (zh) 人源化抗cdcp1抗体
US9180185B2 (en) Combination therapy of anti-HER3 antibodies
CN102164960A (zh) 双特异性抗-egfr/抗-igf-1r抗体
CN102369214A (zh) 三价、双特异性抗体
CN102481366A (zh) 用于治疗癌症的针对cdcp1的抗体
WO2021093760A1 (zh) 含有TGF-β受体的融合蛋白及其医药用途

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1175183

Country of ref document: HK

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: GR

Ref document number: 1175183

Country of ref document: HK