CN102821750A - 从去分化的、非诱发的刺阿甘树细胞的体外培养物产生的制剂、其用于治疗皮肤老化、炎症和疤痕的用途及其生产 - Google Patents

从去分化的、非诱发的刺阿甘树细胞的体外培养物产生的制剂、其用于治疗皮肤老化、炎症和疤痕的用途及其生产 Download PDF

Info

Publication number
CN102821750A
CN102821750A CN2011800170613A CN201180017061A CN102821750A CN 102821750 A CN102821750 A CN 102821750A CN 2011800170613 A CN2011800170613 A CN 2011800170613A CN 201180017061 A CN201180017061 A CN 201180017061A CN 102821750 A CN102821750 A CN 102821750A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cell
biomass
culture
preparation
tree
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2011800170613A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102821750B (zh
Inventor
N·斯图尔德
A·曼代亚
N·卡斯泰-里齐
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
French cosmetics Laboratory
Original Assignee
Pierre Fabre Dermo Cosmetique SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pierre Fabre Dermo Cosmetique SA filed Critical Pierre Fabre Dermo Cosmetique SA
Publication of CN102821750A publication Critical patent/CN102821750A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102821750B publication Critical patent/CN102821750B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/18—Antioxidants, e.g. antiradicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/52—Stabilizers
    • A61K2800/522—Antioxidants; Radical scavengers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及从去分化的、非诱发的刺阿甘树细胞的体外培养物产生的制剂，以及其用于治疗皮肤老化、炎症和瘢痕的用途。

Description

从去分化的、非诱发的刺阿甘树细胞的体外培养物产生的制剂、其用于治疗皮肤老化、炎症和疤痕的用途及其生产
技术领域
本发明的目的在于源自去分化、非诱发的阿甘树细胞体外培养物的制剂、含有所述制剂的化妆品或皮肤病学组合物、及其用于治疗皮肤老化、炎症和愈合的用途。
背景技术
阿甘树是一种属于植物山榄科的树，其学名为刺阿甘树（Arganiaspinosa(L.)Scelles）。
它的习性与橄榄树相似；其具有短且扭曲的树干。木材非常坚硬致密。枝非常多刺，且它们有小的、披针形的、互生的、短（约2厘米长）且窄的叶，叶往往汇集成簇。叶是常绿的，但遇严重干旱时，叶死亡并脱落。花是雌雄同株的且为五聚体。它们集中在团伞花序中，并在五月和六月开花。它们是黄绿色的。
阿甘树从5龄开始能结出果实。果实为黄色，椭圆形无柄浆果，约4-5厘米长。它由围绕着坚果的浆组成，坚果含有2至3个粘在一起的扁平种子，各种子包裹着富含油的仁。
阿甘树是摩洛哥特有的并主要位于索维拉和阿加迪尔之间的摩洛哥西南部。阿甘树林覆盖约830000ha。
由于阿甘树特别坚硬的木质，摩洛哥人们最先将其用作燃料供应。其它主要传统用途是手工初步提取的油，但现在使用压榨来提取。这种油的首要用途是作为食物；另一个重要的应用目前是用于化妆品。源自油的生产的浆和残余的粕通常用于动物饲料。
许多美容产品是从阿甘树开发的。已经有若干针对源自种子的油的发明专利，例如通过溶剂获得的油（专利Fr 2 553 788）、富含非皂化物的阿甘树油（专利Fr 2 724 663）。
除油以外的物质也授予了专利，例如源自油提取之后获得的种子粕的肽；来自油和粕的肽的组合物用于治疗皮肤老化有关的问题（专利Fr 2 756 183）。也有来自阿甘树的叶、粕的蛋白质和皂甙的发明专利=来自叶的提取物（专利EP 1 213 025）、粕蛋白质（专利EP 1 213024）、粕皂甙（专利EP 1 430 900）。最近，专利申请EP 1 968 536经保藏公开了来自阿甘树果实的浆的提取物在抗老化化妆品中的用途。
因此，整个阿甘树的组合物对于皮肤病学和/或美容用途是令人感兴趣的。
阿甘树是一种重要的资源植物，因为首先生态学上地，它是一个“生态系统”植物。它完全适应干旱地区，它保护土壤免于水蚀和风蚀，从而防止沙漠逼近摩洛哥内。而且还因为在经济上，它是一种具有多种用途的树。
它是摩洛哥的主导作物。因此，阿甘树林受1925年颁布的诏令（dahir）（法令）的保护，写道国家对于阿甘树林享有最高权利，但当地群众享有用益权（阿甘树下的果实、枯木、作物）。UNESCO最近将阿甘树林列为生物圈储备。
这就是为什么其木材或叶用于化妆品用途的利用可对此受保护的植物产生严重的后果。
从植物获得兴趣分子的另一种手段是制备全能去分化的细胞培养物。使用去分化的植物细胞还可以避免一些化妆品产品开发过程中遇到的工业化问题。采用细胞培养物，不存在不同植物批次或收割之间兴趣物质浓度上的差异。它也是一种非破坏性的技术，相对容易且价格低廉地建立。最后，由于细胞在培养基中且活性化合物在培养基中或在细胞内液体中，这排除了对提取的需求。因此简单的研磨就可以获得这些化合物。
专利申请WO03077881公开了用于局部应用的含有至少一种体外培养物中去分化的且诱发的植物细胞匀浆物来合成至少一种植物抗毒素的组合物。植物材料优选来自藤。
发明内容
因此，本文件公开了可以去分化并诱发的植物细胞的化妆品应用，诱发产生足够量的次级代谢物使得能够具有局部用途中的生物活性。
令人惊奇和意外的是，申请人已证明源自去分化但非诱发的阿甘树细胞的体外培养物在抗老化、炎症和愈合领域具有良好的化妆品和/或皮肤病学活性。
得到的结果表明，在阿甘树的特定情况下，阿甘树细胞培养物的另一种应用（在这种情况下非诱发细胞）可能在上面提到的内容范围内。
此外，按照本发明所公开的而获得制剂可以消除对诱发步骤的需求，诱发步骤在工业上是困难且昂贵的步骤；由于细胞生长缓慢，诱发导致更低的生物质产量。
申请WO03077881提到了进行这种诱发的各种方式，例如UV辐射3天；二氧化碳持续24小时至2天；UV辐射和二氧化碳5天。
在本发明的框架内进行的方法，由来自源自阿甘树的植物材料的细胞去分化然后在悬液中细胞培养组成，其可以快速地产生精细的、丰富的、均匀的和无菌的这种植物的生物质。细胞培养使得有可能将这种植物的生物合成途径直接应用到细胞规模。
因此，本发明目的在于源自去分化的非诱发阿甘树细胞体外培养物的制剂、包括所述制剂的化妆品或皮肤病学组合物及其在美容和/或皮肤病学中的用途，优选用于治疗皮肤老化、炎症和愈合。
更通常地，植物组织在悬液中的体外培养物提供一种生产直接源自一级或次级细胞代谢的活性有机化合物的手段。
植物细胞在悬液中处于去分化状态，与用于动物细胞培养物的干细胞的状态相似。因此，这些植物细胞理论上能够产生整个植物中观察到的所有代谢物。去分化导致生物合成途径的遗传或表观遗传干扰，从而整个植物和获得的细胞株之间的化学谱是定性和定量上的差异。因此，理论上，在整个植物中没有观察到的反应中间体可能会出现在细胞悬液中。这提供了一个新的机会，从而可以获得“休眠的”化学生物多样性。
在本领域的当前状态中，通常细胞培养物的诱发（化学、物理、生物的）可以刺激并产生更多的次级代谢物。在根据本发明的我们的方法中，我们将显示，不像大多数情况，令人惊讶的是，诱发不是必要的，而是不利于生物质的生长和所需的生物活性。
本发明的目的之一涉及源自去分化的非诱发的阿甘树细胞的体外培养物的制剂。
“去分化的植物细胞”是指没有任何特定的特化性质的任何植物细胞，换言之，在与自然状态下植物分生组织相似的生理状态中。这些细胞能够自己生存而不依赖于其它细胞。
去分化的刺阿甘树（Argania spinosa）细胞获自从树或幼芽摘取的活植物材料，其由叶、叶柄、茎、树皮、根、果实、种子、花和花器官或花蕾组成，尤其来自叶。
用于获得去分化的细胞培养物的方法，是通过本领域技术人员已知的任何方法获得的，例如参阅Murashige,T.,Skoog,F.1962.A revisedmedium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures.Physiol.Plant 15:473-496。/Plant Culture Media,Vol-1Formulations andUses E.F.George,D.J.M.Puttock，和H.J.George(1987)Exegetics Ltd.Edington，Westbury，Wilts，BA134QG英国。
根据本发明的制剂可通过按顺序进行以下步骤获得：
a）植物材料的灭菌，
b）细胞的去分化，
c）置于有培养基而没有诱导子的细胞悬液中，
d）用没有诱导子的培养基进行的生物质增殖和生产培养物，以及
获得制剂。
如果目的是生产少量的生物质，制剂可在锥形烧瓶中制备，或者用于更大的量，制剂可在生物反应器中制备。例如，收集于带有500ml细胞悬液的锥形瓶的平均量是100g干燥的生物质（即200g生物质/每L细胞悬液），而收集于10L生物反应器的平均干燥的物质是3000克（300g/L生物质）。
生物反应器中植物细胞培养遇到的三种主要模式：
1.不连续的或分批培养，
2.补给/收集或流加培养，以及
3.连续培养。
a.植物材料灭菌步骤：
采取刺阿甘树（Argania spinosa）外植体，且更特别地叶的外植体，用钠或钙的次氯酸盐溶液或者氯化汞溶液在环境温度下除污几分钟。用无菌蒸馏水漂洗组织，然后在除污的最后用无菌蒸馏水洗涤至少一次。
b.细胞去分化的步骤
除污后的外植体放置在层流罩下接触Murashige＆Skoog琼脂营养培养基，已向其中添加有蔗糖和生长因子（或激素）。这些生长激素将控制外植体的细胞机制从而引起细胞分裂以及引起细胞簇或去分化的愈伤组织（愈伤组织再生）。每3-4周将得到的愈伤组织转移到新的去分化营养培养基中。这种培养基的一些富含琼脂的成分可被愈伤组织代谢或由空气的作用降解。
在一般情况下，基于植物生长素（2-4二氯-苯氧基乙酸）和细胞分裂素（激动素）的激素组合物被成功地测试以获得快速和充分的松散型愈伤组织（愈伤组织再生）形式的组织去分化，以及有助于转移到液体培养基中。无菌叶外植体可以保存在近轴面，接触由Murashige和Skoog培养基组成的琼脂培养基（Murashige,T.,Skoog,F.1962.Arevised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissuecultures.Physiol.Plant 15:473-496），其具有30g/L的蔗糖、8g/L琼脂、0.5mg/L激动素和0.75mg/L 2-4二氯-苯氧基乙酸（24D）添加剂，并在121℃（1bar）20分钟的高压灭菌之前调节至pH6。含有外植体的平皿置于28℃下在黑暗中孵育。2周后出现第一个愈伤组织。每3-4周，通过用解剖刀划分愈伤组织以保持在2至3cm的尺寸，将得到的愈伤组织转移到新的培养基。这些转移物保持2至6个月直到获得松散型愈伤组织。
c.在没有诱导子的培养基中产生细胞悬液的步骤
用于将愈伤组织连续转移到琼脂培养基上的细胞去分化导致松散型愈伤组织的形成。这种细胞间的粘附力下降是去分化的后果，去分化取决于植物可在两至六个月之间发生。这种状态有利于转移至液体培养基中，因为它保证愈伤组织在细胞悬液中的分散，同时最大限度地减少诱导的机械应力。因此，松散型愈伤组织的集（按体积10-20％）引入到使用没有胶凝剂的与琼脂去分化培养基相同的制剂制备而成的液体营养培养基中。
因此，松散型愈伤组织在液体培养基中通过2至3天的振动台作用被分散，得到的细胞悬液完全没有未分散的愈伤组织部分，从而形成均匀的细胞悬液。这种悬液保持培养以获得足够致密的细胞群。在此阶段，悬液经过（亚培养）或稀释于新的营养培养基中，并以同样的方式开始培养。
通过在含有200ml培养基的500ml锥形瓶中保藏20至40g松散型愈伤组织开始初始的细胞悬液。因此，松散型愈伤组织在液体培养基中通过2至3天在黑暗中在29℃下，在115rpm下的振动台作用被分散。然后使用移液器收集细胞漂浮物，留下未分散的残留愈伤组织簇。细胞漂浮物从而形成均匀的细胞悬液。这种悬液保持培养以获得“足够”致密的细胞群。得到的细胞悬液培养15天，然后通过在新的培养基中稀释至1:5，持续相同的时间进行增殖。已作出对培养基组合物（营养、生长因子等）的调整，从而最大限度地提高生物质产率。其结果是针对液体细胞悬液而优化的ARGMS生物质增殖培养基（见表1）。这种培养基是Murashige&Skoog培养基针对愈伤组织再生的改良版本。通过加入KOH将这种培养基调整至pH 6，随后是在121℃下（p=1bar）高压灭菌20分钟或者以0.2μm过滤灭菌。
表1：ARGMS培养基是用于在锥形瓶中或生物反应器中于最佳条件下在悬液中培养阿甘树细胞的Murashige & Skoog（ARGMS）培养基的改良版本
Figure BDA00002211165400061
Figure BDA00002211165400071
d.用没有诱导子的培养基进行的生物质增殖和生产培养物
采取若干这样的亚培养之后，当获得的细胞密度在一段时期内恒定时，细胞悬液是稳定的。然后为了最大限度地提高生物质产率，对培养基组合物（营养、生长因子等）的调整是可能的。在本发明的一个特定的实施方式中，用作生物质生产装置的优化培养基是表1中所述的培养基。
细胞悬液经过滤使其从细胞外的培养基或培养漂浮物中分离出来，所收集的生物质放回蒸馏水中的悬液中，在0℃下研磨。获得的匀浆进行冷冻干燥或者在冷冻干燥之前为了使其澄清进行离心。
在“最佳”条件下如此产生的细胞培养物是稳定的，且保持在锥形瓶（增殖培养）中，每15天按1:5稀释细胞悬液。这相当于接种约60g/L鲜生物质的细胞培养物，15天的培养后其产生约300g/L细胞悬液，或根据需要接种在生物反应器中。
在锥形瓶或在生物反应器中获得的制剂可由如下组成：
-细胞悬液（出于本发明的目的，“细胞悬液”是指在其培养基中的细胞（即生物质））；
-生物质（出于本发明的目的，“生物质”是指从培养基中分离的细胞簇，即经过滤之后的细胞悬液）；
-放回（或不放回）蒸馏水中的悬浮中的研磨生物质；
-通过离心或过滤的研磨生物质的澄清液或漂浮物；
-培养漂浮物（出于本发明的目的“培养漂浮物”是指，在其中所保持的细胞在培养期间所居留的培养基，或细胞外的培养基）。
无论关注的是否是研磨生物质的细胞悬液、生物质或漂浮物，它们可以冷冻形式或通过加入保存物质保持不变，保存物质比如苯氧基-2-乙醇、苄基醇或在关于化妆品产品的EU指令附录VI中题为“化妆品中可存在的保存剂列表”中出现的任何其它保存产品。它们也可以在化妆品可接受的介质上按照从10％到60％不等的比例进行稀释，比如二醇（丙二醇、丁二醇、聚乙二醇等）。细胞悬液或生物质也可经研磨，然后作为这样冷冻的或通过加入保存物质或如上所述的介质而保存。
研磨与否，细胞悬液、生物质或生物质漂浮物也可通过冷冻干燥或雾化进行干燥，并就这样保持或干燥于麦芽糖糊精、乳糖或二氧化硅型介基或任何其它化妆品可接受的介质上。
最后，可通过亲和层析采用有用的化合物富集细胞悬液：吸收于树脂上（型聚苯乙烯共聚物等）并用合适的溶剂如乙醇洗脱。
按照本发明的方法获得的鲜生物质代表约100至500g每升的悬液，并且更优选于最佳收集时间（即平均约15天）在200和350g每升悬液之间。
下表表示得到的产量（产量表示为获得的产物克/细胞悬液L）：
Figure BDA00002211165400091
本发明还涉及包括，如上所述的，源自非诱发去分化阿甘树细胞培养物的制剂作为活性成分的化妆品或皮肤病学组合物。
优选地，所述制剂的量是组合物总量的0.1和10％之间。甚至更优选地，所述提取物的量是0.2％和5％之间。
根据本发明的化妆品组合物可有利地为通常用于局部或口服应用，优选局部应用的化妆品中的任何盖仑形式。对于通过局部途径的施用，盖仑形式可以是霜剂、凝胶剂、软膏或喷雾剂。口服配方选自用于可饮用的悬液的片剂、胶囊剂和粉剂。
根据本发明的化妆品组合物还包括通常美容上兼容的赋形剂。
通常和化妆品组合物兼容的赋形剂可以是本领域技术人员已知的任何赋形剂，从而获得如上述那些形式的用于局部应用的化妆品组合物。
根据本发明的化妆品和/或皮肤病学组合物可尤其含有添加剂和制剂助剂（aid），如乳化剂、清洁剂、发泡型表面活性剂等，配位剂、增稠剂、胶凝剂、稳定剂、包括抗微生物剂和抗氧化剂的保存剂、调节剂、酸化剂、碱化剂、软化剂、溶剂、着色剂和芳香剂。
本发明人还表明源自去分化非诱发阿甘树细胞的制剂可具有如下活性：
-抗氧化、抗自由基活性以限制与内在和外在老化有关的氧化过程以及炎症过程。
-通过抑制金属蛋白酶降解胶原蛋白，对细胞外基质的活性改善成熟皮肤的机械性能（坚实度、弹性、紧张性）。
最后，本发明涉及此处公开的用于治疗皮肤老化、炎症和愈合的组合物。
具体实施方式
如下实施例作为非限制性的实例给出。
用于制造根据本发明的制剂的实施例。
实施例1：鲜的生物质/锥形瓶中制备的方法
优选3至4个月龄的阿甘树叶通过按顺序的若干次沐浴进行灭菌：70％乙醇1分钟，2％次氯酸钠3分钟，然后用两个连续的软化水浴持续8分钟和10分钟进行漂洗。
无菌的叶外植体在保存在近轴面，接触由Murashige和Skoog培养基组成的琼脂培养基（Murashige,T.,Skoog,F.1962.A revised mediumfor rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures.Physiol.Plant15:473-496），其具有30g/L的蔗糖、8g/L琼脂、补充有0.5mg/L激动素和0.75mg/L 2-4二氯-苯氧基乙酸（2.4-D），并在121℃高压灭菌（1bar）20分钟之前调节至pH 6。含有外植体的平皿留在28℃下在黑暗中孵育，并增殖直到获得松散型且稳定的愈伤组织。
通过在含有200ml高压灭菌的培养基的500ml锥形瓶中保藏约40g松散型愈伤组织产生初始的细胞悬液，其组合物描述于上述表1中。
将培养物留在振动台上于115RPM下在黑暗中于29℃下持续1周。然后使用移液器收集细胞漂浮物，留下残留的愈伤组织簇。得到的细胞悬液培养15天，然后通过在新的培养基中按1:5稀释，持续相同的时间进行增殖。
然后在真空下过滤悬液，回收生物质。获得的鲜生物质产量是168g/L。
生物质被保持在-20℃。
实施例2：干生物质
实施例2a：干生物质/按分批培养在生物反应器中进行的过程
按实施例1所述获得的四个500ml细胞悬液锥形瓶在接种装置中放在一起并形成一个2L的接种物，其无菌地倒入一个10L生物反应器中。此生物反应器装有8L最佳培养基（见表1）,补充有30mg/L预先灭菌的消泡剂，然后冷却，并通过生物反应器壳体中封闭回路中恒温控制的水循环保持在29.5℃。
通过饱和校准氧探头，并实时将数据输入计算机化的pO2调节装置。这种装置通过向通气系统注射无菌纯氧将pO2保持在80％。此生物反应器还在流出气体（头部空间）处配备了CO2在线测量装置，其同时将数据输入到计算机化的pCO2调节装置，将pCO2保持在6％。这是通过将无菌的混合有氧气的环境空气注入通气装置进行的。生物反应器还配备了转速为75RPM的桨型搅拌系统，来搅拌细胞悬液并防止它沉降。自动装置被安装在生物反应器的输出端以使得能够进行生物质的无菌采样和监测。
在这些恒定温度和溶解气体的条件下将分批培养保持15至17天，直到达到280至320g/L的鲜生物质的细胞密度。完成分批培养后，清空生物反应器，通过用布氏漏斗在过滤器上过滤收集生物质。
使用“超声清洗机”冷研磨溶解于相同蒸馏水体积中的收集的鲜生物质，然后冷冻干燥。
实施例2b：干生物质/按流加培养10.0.0.1在生物反应器中进行的过程
按实施例2a所述将四个500ml细胞悬液锥形瓶用作接种物。按实施例2a中所示的，准备生物反应器。按实施例2a中所示的，准备溶解的气体、温度和搅拌调节系统。
在这些恒定温度和溶解气体的条件下将初始培养保持15至17天，直到到达280至320g/L的鲜生物质的细胞密度。初始培养完成后，取出10L生物反应器中80％的内容物。然后收集8L细胞悬液。通过用布氏漏斗在过滤器上过滤收集此悬液中的生物质。收集到2240g到2560g鲜生物质。当冷却时，使用超声清洗机研磨溶解于相同蒸馏水体积中的收集的鲜生物质，然后冷冻干燥。得到100至130g冷冻干燥的生物质。
在80％的部分收集进行的同时，8L预先高压灭菌并冷却的ARGMS培养基倒入生物反应器，然后含有2L的细胞悬液，从而恢复到10L的培养体积。在这些恒定温度和溶解气体的条件下将流加培养保持5至7天，直到达到280至320g/L的鲜生物质的细胞密度。这种培养比初始培养更快（更高的产率），因为生物质是在持续的生理细胞分裂状态，从而倒入新的营养培养基的特征在于少于24小时的潜伏期并且生物质立即扩增。在这种流加培养结束时，10L生物反应器的80％被除去。然后收集8L的细胞悬液。通过用布氏漏斗在过滤器上过滤收集这种悬液的生物质。然后和之前一样重新开始培养。
实施例2c：干生物质/按连续培养在生物反应器中进行的过程
按实施例2a所述将四个500ml细胞悬液锥形瓶用作接种物。按实施例2a中所示的，准备生物反应器。按实施例2a中所示的，准备溶解的气体、温度和搅拌调节系统。
在这些恒定温度和溶解气体的条件下将初始培养保持10天，直到到达150g/L的细胞密度和0.2d-1的瞬时鲜生物质生长率。在此阶段，每隔1小时20分钟，将10L生物反应器中1.2％的内容物去除。通过向生物反应器中倒入相同体积的新ARGMS培养基，这些样品自动进行补偿。这种方法将细胞保持在一个恒定的生理状态和细胞密度。
然后收集100到120ml的细胞悬液。通过用布氏漏斗在过滤器上过滤收集此悬液中的生物质。每个样本收集15g至18g的鲜生物质。使用超声清洗机冷研磨溶解于相同蒸馏水体积中的收集的鲜生物质，然后冷冻干燥。获得的结果是，对于每次提取0.71到0.85g冻结干燥的生物质。因此，维持至少60天培养。没有时间限制的使其维持这在理论上是可能的。
连续培养较之前模式的优点是，不需要再次准备生物反应器，其需要清洁和灭菌，并且没有细胞潜伏期。自动提取出1至1.5％的细胞悬液，随后通过用新的培养基补充到生物反应器中，引起生物反应器中进展当中的培养基组合物最小程度的变化。因此，细胞群对潜伏期不做任何代谢调整，而这导致在其它培养模式中观察到的生物质体积产率上的损失。
实施例3：鲜生物质漂浮物，所述生物质如实施例2a中描述获得
如实施例2a中描述得到的20g鲜研磨生物质在10000g离心15分钟，收集漂浮物。然后冷冻干燥。
平均产量是每克鲜生物质30mg冻干干燥的漂浮物。
化妆品组合物的实施例：
实施例4：H/E配方
 成分   %
 鲜生物质(实施例1)   5
  甘氨酸  10.0
  Na2EDTA  0.1
  黄原胶  0.3
  C12-C15烷基苯甲酸酯  10.0
  棕榈酸辛酯  5.0
  保存剂  qs
  硬脂酸醇  2.5
  单硬脂酸甘油酯  2.5
  十六烷基磷酸钾  1.8
  软化水  QSP 100
实施例5：E/H配方
  成分  %
  漂浮物（实施例3）  0.5
  甘氨酸  4.0
  Na2EDTA  0.1
  MgSO4  1.0
  黄原胶  0.1
  C12-C15烷基苯甲酸酯  12.5
  异十六烷  3.5
  环甲硅脂  3.0
  保存剂  qs
  聚甘油和山梨醇酯  4.0
  肉豆蔻-3肉豆蔻酸酯  2.0
  软化水  QSP 100
实施例6：抗氧化活性的评价
化学发光
这种方法通过光化学信号生成自由基（超氧自由基O2°-）。氧化的强度高于正常条件下获得的1000倍。通过化学发光进行检测并用于评价脂溶或水溶性抗氧化剂的提取物或分子。结果表示为等量的维生素C或Trolox（6-羟基-2,5,7,8-四甲基色满-2-羧酸）。灵敏度是1纳摩尔数量级。
结果的分析依赖于两个标准，即曲线的形状（积分）以及由软件以纳摩尔给出的数值。（Igor Popov和Gudrun Lewin.Methods inenzymology[44]vol 300.437-456；Maibach I Howard和coll.Journal ofCosmetic Dermatology Vol 7(2)96-100(2008)）。
结果将被表示为，获得相当于1μg标准（trolox（无对应译文））检测到的活性的活性所必要的样品的μg（ACL试剂盒）。
结果：
通过化学发光，本测试中研究的抗氧化活性代表特异性捕获超氧阴离子的能力。
表2：以trolox当量表示的抗氧化能力的评价与定量
Figure BDA00002211165400141
根据实施例2a制备的冷冻干燥的生物质以及根据实施例3制备的研磨冷冻干燥生物质的漂浮物具有整体上来看等价的抗自由基捕获活性。
278μg冷冻干燥的生物质对于得到相当于1μg trolox检测到的活性的活性是必要的：相当于辅酶Q10（参考抗氧化分子）的活性。
171μg研磨冷冻干燥的生物质漂浮物对于得到相当于1μg trolox检测到的活性的活性是必要的。
自由基，作为外部侵袭（冷、污染、烟草、UV）的结果其产生增加，可以导致对皮肤细胞DNA、以及细胞和线粒体膜DNA的破坏。这些自由基在炎症过程中也发挥非常重要的作用。正是这些活性代谢物是细胞氧化应激信号的第二信使，因此是炎症的早期介质（A.VanDer Vliet和coll,Chem Biol Interaction 85:95-116 1992）。
实施例2a和3中描述的制剂的抗自由基活性有助于抵抗内在和外在皮肤老化和炎症。
实施例7：金属蛋白酶活性对胶原蛋白形成细胞外基质的抑制的评价
细胞外基质（MEC）是对组织具有结构和调节作用的动态结构。其赋予皮肤紧张（turgescence）和机械性质。在表皮，其占据了细胞间隙，并为表皮结构提供支持。它也控制表皮细胞间的交流并在细胞活性中发挥作用。它是由纤维，特别是胶原蛋白和基本物质（水、盐、糖蛋白、葡糖胺聚糖）组成。胶原蛋白是纤维状蛋白质，由三个可以是相同的或不同的多肽链通过共价键氢键连接形成。胶原蛋白形成纤维网状结构的主要成分，并为皮肤提供抗性和弹性发挥机械作用。
当细胞衰老时，MEC的大部分成分被称为基质金属蛋白酶（MMP）的富锌内肽酶型酶所降解（Hideaki Nagase§和J.Frederick Woessner.JBiol Chem,Vol.274,Issue 31,21491-21494,July 30,1999）。它们是膜型的或分泌型的。所有MMP有很强的序列和结构上的同源性，但对底物的特异性不同。MMP1或“间质胶原酶”主要降解I型胶原蛋白（正常皮肤真皮中80％的内容）并且也降解II VII VIII和X型胶原蛋白。
在人重组酶的模型上使用特异性的肽底物Mca–Lys-Pro-Leu-Gly-Leu-DPA-Ala-Arg-NH2，我们通过荧光定量分析了提取物对直接酶活性的作用（David Leppertd和coll,Analytical Biochemistry 328(2004)166–17）。
用不同制剂预孵育激活的酶，然后置于存在的底物中。酶切割肽，将Mca荧光团（7甲氧基香豆素-4-基）乙酰基）从猝灭剂Dpa（N-3-（2,4-二硝基苯基）-L-2,3二氨基丙酰）分开。然后，当在320nm激发下，肽发出具有405nm波长的荧光。因此，测量MMP-1的酶活性，其正比于所发出的荧光。
在tubo测试中使用其，我们能够检测潜在的MMP1活性抑制剂，一种在起始胶原蛋白降解中具有至关重要作用的酶。我们测量MMP1活性抑制的百分比。
与抑制剂或产物有关的酶抑制百分比的计算：
%抑制=100×(最大净酶活性
Figure BDA00002211165400151
抑制剂存在时净酶活性)/最大净酶活性
结果：
根据实施例3制备的漂浮物显著抑制MMP1活性，并依赖从60至500μg/ml的剂量。
表3：冷冻干燥研磨生物质的漂浮物（根据实施例3制备的），以百分比（%）表示的MMP1抑制的结果
  平均抑制%   以μg/ml计的浓度
  100   500
  58   300
  41   150
  20   60
测试根据实施例2a制备的从60至1000μg/ml的冷冻干燥生物质。由于生物质的物理化学干扰作为一个整体，我们无法测量抑制活性。然而，测试了一个非常相似的提取物，并从60μg/ml至1000μg/ml显示显著的抑制。
当衰老发生时，根据实施例3制备的提取物可以抵抗MMP增加的活性，以及可以有助于维持胶原蛋白的机械作用，从而为皮肤提供抗性和弹性。
实施例8：测量TGF-β1在HaCaT角化细胞中的合成
TGF-β1（转化生长因子-β1）属于不同细胞类型分泌的TGF-β超家族，在控制细胞生长和调节多种细胞反应和生物过程中发挥了重要作用。在这个超家族中的细胞因子的主要活性是它们调节大多数细胞的增殖，它们刺激成纤维细胞增殖和增加细胞外基质的形成（Lawrence,1996）。TGF-β1尤其是通过诱导细胞骨架（肌动蛋白）的重组和促进上皮细胞迁移（Boland等人，1996）还参与损伤修复、愈合过程（Cullen等人，1997）。在皮肤组织最具代表性的细胞群是角化细胞群。它构成可控制和影响皮肤细胞（即成纤维细胞）行为的生长因子的重要来源（Ghahary等人，2001）。
设备和方法
非诱发生物质的生产：根据实施例2a
诱发生物质的制备
制备Murashige＆Skoog培养基，没有生长因子（激动素和24D）。通过加入KOH调节这种培养基至pH 6，随后在121℃（p=1bar）20分钟高压灭菌。然后使用源自增殖培养物的细胞悬液以1:5的体积接种培养基。通过向激动素DMSO中无菌添加浓缩的6-苄氨基嘌呤（BAP或（N-（苯甲基）-7H-嘌呤-6-胺）和诱导剂（乙酰基水杨酸和甲基茉莉酮酸酯）溶液，随后立即产生诱发条件。其结果是EMS诱发培养基（见表4）。诱发培养然后在振动台上在黑暗中于115RPM下于29℃持续15天。然后收集鲜生物质，在研磨并离心之前，在布氏漏斗上干燥，通过冷冻干燥稳定漂浮物。
表4.EMS培养基，即用于在锥形瓶中阿甘树细胞于悬液中在诱发条件下培养的Murashige&Skoog修饰的培养基
Figure BDA00002211165400171
用不同提取物对HaCaT角化细胞处理5h，然后细胞接种于DMEM在37℃下孵育24小时。用ELISA试剂盒将TGF-β1按计量加入到培养物漂浮物中。
根据实施例2a制备的非诱发阿甘树生物质和诱发后得到的阿甘树生物质对在人HaCaT角化细胞中TGF-β1合成的作用显示于附图1中。它们表明在HaCaT角化细胞中，根据实施例2a制备的非诱发阿甘树生物质（50μg/mL）刺激48％的TGF-β1合成，而诱发的阿甘树生物质抑制26％的TGF-β1合成。
实施例9：人角化细胞增殖和细胞迁移的测量
实施例9.a：人角化细胞的细胞增殖的测量
损伤的愈合是一个复杂的动态的生物学过程，在正常的组织修复中涉及许多局部和系统因子的相互作用。愈合进展包括四个相互依存的阶段：止血、炎症、增殖和重塑。增殖意味着三个清晰可见的过程，即颗粒化、收缩和上皮新生。
颗粒化过程中，观察到将会参与其余修复过程的细胞增殖，伴有这些细胞向损伤床的迁移。这些细胞包括巨噬细胞、成纤维细胞和内皮细胞。巨噬细胞不断释放趋化因子和生长因子。成纤维细胞构建损伤基底处细胞生长所必需的新细胞基质。这种支架促进细胞迁移。
损伤的收缩是一种用于减少损伤大小的机制，成纤维细胞在这种收缩中起着主导作用。
表皮再生由上皮新生组成，其覆盖损伤而形成对外部环境的有效阻挡，能够被着色并恢复其感官和免疫功能。因此，这不仅意味着角化细胞的细胞迁移和增殖过程，还意味着这种新生上皮细胞的分化以及恢复重新连接真皮和表皮的基底膜。当基底细胞向损伤的中心迁移时，使得损伤两侧能够结合起来，发生一波细胞有丝分裂以填补迁移留下的空间以及在三维再生中为上皮组织提供细胞。
角化细胞、成纤维细胞和内皮细胞的增殖步骤可视为确认活性成分的愈合活性的功能现象之一。成纤维细胞或内皮细胞的增殖增加将参与真皮的愈合，同时角化细胞增殖的增加将参与上皮新生。
设备和方法：细胞增殖
所用的技术测量核苷酸，5-溴-2'-脱氧尿苷（BrdU）（一种胸苷类似物），在S期细胞的DNA中的掺加。
从手术后丢弃的皮肤中分离的角化细胞在完全KSFM中培养（BPE25μg/ml；EGF 1.5mg/ml）。在待评价的分子存在时，在5％CO2氛围中在37℃下孵育细胞48小时。
通过偶联至过氧化物酶的抗-BrdU抗体的系统进行评价与细胞增殖率成正比的BrdU掺加。过氧化物酶底物的加入显示有色的反应（Biotrak Elisa系统）。在450nm处测量相应的吸光度（OD（对应法文缩写为DO））。因此，这种数据正比于细胞增殖率。
然后使用下面的公式确定增殖百分比：
%增殖=（OD(处理的)-OD(t对照最小)）×100/（OD(t对照最 大)-OD(t对照最小)）
注：
对照最小=用最少的培养基孵育的细胞
对照最大=用完全培养基孵育的细胞
因此，对照最小对应着0％增殖，对照最大对应着100％增殖。
关于细胞增殖的结果显示于图2中，表明根据实施例2a制备的阿甘树生物质对人角化细胞增殖的作用。
它们显示，根据实施例2a制备的阿甘树生物质在0.1μg/ml时，刺激25％的人角化细胞增殖。当在0.01μg/ml测试时没有测量到作用。
实施例9.b：人角化细胞细胞迁移的测量
设备和方法：HaCaT角化细胞的细胞迁移
用于研究细胞迁移的规程是基于96孔试剂盒的使用。本试验的原则由研究细胞向孔中心（96孔板）的迁移组成。要做到这一点，各孔的中心放置一个塞子，从而建立一个2mm直径的检测区域。然后围绕着这个塞子接种HaCaT细胞。一旦细胞在围绕着塞子的表面结合良好，就撤出塞子，细胞因此可迁移到检测区。没有塞子且具有活性成分的板在DMEM 0％SVF中在37℃下孵育24小时。然后分析位于塞子所在区域中的细胞数量，以评价细胞的迁移。用Hoechst 33342标记细胞，并使用cache来观察和计数仅位于此区域的细胞。针对每个条件得到8孔的平均值。
结果表示为
-荧光强度（IF-正比于已迁移的细胞的数量）
-相对于对照0％SVF的活性百分比：
（IF处理的-IF0%迁移的）×100/（IFt对照0%SVF-IF0%迁移的）
注：
IF（0％迁移的）对应着有塞子的孔的IF（荧光强度），因此对应着背景噪声。
图3显示细胞迁移的结果，并说明根据实施例2a制备的阿甘树生物质对HaCaT角化细胞迁移的作用。
它们显示，根据实施例2a制备的阿甘树生物质，在0.01或0.03μg/ml时，分别刺激79％和73％的HaCaT角化细胞迁移。

Claims (7)

1.用于治疗皮肤老化、炎症和愈合的源自去分化、非诱发的阿甘树细胞体外培养物的制剂。
2.根据权利要求1所述的制剂，其以细胞悬液、生物质、研磨生物质、研磨生物质漂浮物或培养物漂浮物的形式。
3.一种化妆品或皮肤病学组合物，其包括比如权利要求1或2所定义的源自非诱发去分化的阿甘树细胞培养物的制剂作为活性成分，并联合有化妆品或皮肤病学可接受的赋形剂。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于制剂的量在组合物总量的0.1-10%之间。
5.根据权利要求3或4所述的组合物，其用于治疗皮肤老化、炎症和愈合。
6.一种获得制剂的方法，其特征在于包括如下步骤：
a）植物材料的灭菌
b）细胞的去分化
c）置于有培养基而没有诱导子的细胞悬液中，
d）用没有诱导子的培养基进行生物质增殖和培养物生产，以及
获得制剂。
7.用于皮肤老化的化妆品治疗的方法，其包括利用根据权利要求3-5任一项所定义的组合物。
CN201180017061.3A 2010-03-31 2011-03-30 从去分化的、非诱发的刺阿甘树细胞的体外培养物产生的制剂、其用于治疗皮肤老化、炎症和疤痕的用途及其生产 Active CN102821750B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1001327A FR2958163B1 (fr) 2010-03-31 2010-03-31 Preparation issue d'une culture in vitro de cellules dedifferencieres non elicitees d'arganier, leur utilisation pour le traitement du vieillissement cutane, de l'inflammation et de la cicatrisation, et leur obtention.
FR10/01327 2010-03-31
PCT/EP2011/054965 WO2011121051A2 (fr) 2010-03-31 2011-03-30 Preparation issue d'une culture in vitro de cellules dedifferenciees non elicitees d'arganier, leur utilisation pour le traitement du vieillissement cutane, de l'inflammation et de la cicatrisation, et leur obtention

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102821750A true CN102821750A (zh) 2012-12-12
CN102821750B CN102821750B (zh) 2018-02-16

Family

ID=43304061

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201180017061.3A Active CN102821750B (zh) 2010-03-31 2011-03-30 从去分化的、非诱发的刺阿甘树细胞的体外培养物产生的制剂、其用于治疗皮肤老化、炎症和疤痕的用途及其生产

Country Status (21)

Country Link
US (1) US8609086B2 (zh)
EP (1) EP2552401B1 (zh)
JP (1) JP5964288B2 (zh)
KR (1) KR101838309B1 (zh)
CN (1) CN102821750B (zh)
AR (1) AR080816A1 (zh)
AU (1) AU2011234469B2 (zh)
BR (1) BR112012024630B8 (zh)
CA (1) CA2794115C (zh)
ES (1) ES2648058T3 (zh)
FR (1) FR2958163B1 (zh)
IL (1) IL222201A (zh)
MX (1) MX2012011272A (zh)
NZ (1) NZ603282A (zh)
PL (1) PL2552401T3 (zh)
PT (1) PT2552401T (zh)
RU (1) RU2559579C2 (zh)
TN (1) TN2012000452A1 (zh)
TW (1) TWI513474B (zh)
WO (1) WO2011121051A2 (zh)
ZA (1) ZA201207590B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109414600A (zh) * 2016-06-16 2019-03-01 皮埃尔·法布尔皮肤化妆品公司 含羞草未分化细胞的提取物及其在皮肤美容中的用途
US11389392B2 (en) 2017-06-13 2022-07-19 Mary Kay Inc. Cosmetic compositions and methods for their use in firming skin
CN114828820A (zh) * 2019-12-19 2022-07-29 莱雅公司 非诱发去分化薰衣草植物细胞、其提取物及其美容用途

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10463603B2 (en) 2012-01-05 2019-11-05 L'oreal Cosmetic use of dedifferentiated plant cells
WO2017160923A1 (en) * 2016-03-15 2017-09-21 Royal Oil Colorado Llc Formulations of argan oil and cannabidiol
FR3049194B1 (fr) * 2016-03-23 2019-10-04 Sederma Utilisation d’un ingredient cosmetique comprenant un materiel vegetal issu de marrubium vulgare pour un traitement cosmetique
CN110418631A (zh) 2017-03-17 2019-11-05 玫琳凯有限公司 化妆品组合物及方法
CL2018002863A1 (es) * 2018-10-08 2019-03-29 Rubisco Biotechnology Extracto acuosos a partir de células de fitzroya cupressoides (alerce) con propiedades antienvejecimiento y en la regeneración de la piel
US11400043B2 (en) 2019-12-10 2022-08-02 Mary Kay Inc. Cosmetic composition
BG67493B1 (bg) 2020-03-19 2023-01-31 "Инова Бм" Оод Стандартизиран растителен екстракт от биомаса на инвитро култури, метод за неговото получаване и използване

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020197288A1 (en) * 2001-03-23 2002-12-26 L'oreal Compositions for the skin comprising fibers and ubiquinones and methods of using the same
CN1418615A (zh) * 2001-11-12 2003-05-21 北京莱福赛茵生物工程技术有限公司 含有核酸的化妆品
WO2003077880A1 (fr) * 2002-03-20 2003-09-25 Rachid Ennamany Procede d'obtention de phytoalexines
US20040047832A1 (en) * 2000-12-06 2004-03-11 Gilles Pauly Cosmetic and/or dermopharmaceutical preparations containing leaf extracts of the plant argania spinosa

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2553788B1 (fr) 1983-10-19 1985-12-06 Pf Cosmetique Extrait lipidique de fruit d'arganier, procede de preparation et application en cosmetologie
FR2724663B1 (fr) 1994-09-20 1997-01-24 Fabre Pierre Dermo Cosmetique Huile d'argan enrichie, procede de preparation et composition cosmetique la comprenant
FR2756183B1 (fr) 1996-11-25 1999-08-27 Fabre Pierre Dermo Cosmetique Association d'huile et de peptides d'argan utile pour le traitement des troubles lies au vieillissement cutane
FR2756163A1 (fr) 1996-11-26 1998-05-29 Mira Gerard Dispositif pour l'ouverture des huitres
FR2795637A1 (fr) * 1999-07-02 2001-01-05 Oreal Utilisation de cellules vegetales dedifferenciees
EP1213024A1 (de) * 2000-12-06 2002-06-12 Laboratoires Serobiologiques Kosmetische und/oder dermopharmazeutische Zubereitungen enthaltend native Proteine aus der Pflanze Argania spinosa
RU2195259C1 (ru) * 2001-05-14 2002-12-27 Институт химии Коми научного центра Уральского отделения РАН Средство для ухода за кожей тела и лица "мичлун"
EP1485064B1 (fr) 2002-03-20 2014-05-07 Rachid Ennamany Composition cosmétique contenant de phytoalexines et procede d'obtention de phytoalexines
US20090208544A1 (en) 2002-03-20 2009-08-20 Rachid Ennamany Method of obtaining phytoalexins
FR2847476B1 (fr) * 2002-11-25 2006-03-24 Claude Henri Marie Ghi Boucher Utilisation d'huiles obtenues a partir de parties de plantes non chauffees, introduites non chauffees broyees dans la presse, extraites a froid dans les compositions
EP1430900A1 (de) * 2002-12-18 2004-06-23 Cognis France S.A. Verwendung eines Extraktes aus der Pflanze Argania spinosa
FR2864446B1 (fr) * 2003-12-29 2006-03-03 Secma Biotechnologies Marines Utilisation dans une composition cosmetique ou pharmaceutique d'au moins un lyiphilisat de cellules vegetales dedifferenciees afin de depigmenter et/ou eclaircir, de proteger et de regenerer l'epiderme
FR2895677B1 (fr) 2006-01-05 2012-05-25 Fabre Pierre Dermo Cosmetique Utilisation d'un extrait insaponifiable de pulpe vegetale dans le traitement du vieillissement cutane.

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040047832A1 (en) * 2000-12-06 2004-03-11 Gilles Pauly Cosmetic and/or dermopharmaceutical preparations containing leaf extracts of the plant argania spinosa
US20020197288A1 (en) * 2001-03-23 2002-12-26 L'oreal Compositions for the skin comprising fibers and ubiquinones and methods of using the same
CN1418615A (zh) * 2001-11-12 2003-05-21 北京莱福赛茵生物工程技术有限公司 含有核酸的化妆品
WO2003077880A1 (fr) * 2002-03-20 2003-09-25 Rachid Ennamany Procede d'obtention de phytoalexines

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109414600A (zh) * 2016-06-16 2019-03-01 皮埃尔·法布尔皮肤化妆品公司 含羞草未分化细胞的提取物及其在皮肤美容中的用途
US11389392B2 (en) 2017-06-13 2022-07-19 Mary Kay Inc. Cosmetic compositions and methods for their use in firming skin
CN114828820A (zh) * 2019-12-19 2022-07-29 莱雅公司 非诱发去分化薰衣草植物细胞、其提取物及其美容用途

Also Published As

Publication number Publication date
PL2552401T3 (pl) 2018-01-31
IL222201A (en) 2016-07-31
NZ603282A (en) 2014-05-30
BR112012024630A2 (pt) 2020-08-25
FR2958163A1 (fr) 2011-10-07
ZA201207590B (en) 2014-03-26
MX2012011272A (es) 2012-11-06
CA2794115A1 (fr) 2011-10-06
EP2552401A2 (fr) 2013-02-06
US20130017178A1 (en) 2013-01-17
CA2794115C (fr) 2018-11-27
AU2011234469A1 (en) 2012-11-22
TW201201864A (en) 2012-01-16
TN2012000452A1 (fr) 2014-01-30
FR2958163B1 (fr) 2014-06-13
WO2011121051A3 (fr) 2012-05-24
ES2648058T3 (es) 2017-12-28
BR112012024630B8 (pt) 2022-06-28
US8609086B2 (en) 2013-12-17
AU2011234469B2 (en) 2014-04-24
EP2552401B1 (fr) 2017-08-23
JP2013523691A (ja) 2013-06-17
AR080816A1 (es) 2012-05-09
WO2011121051A2 (fr) 2011-10-06
KR101838309B1 (ko) 2018-04-26
BR112012024630B1 (pt) 2021-03-09
TWI513474B (zh) 2015-12-21
RU2559579C2 (ru) 2015-08-10
KR20130010904A (ko) 2013-01-29
IL222201A0 (en) 2012-12-31
CN102821750B (zh) 2018-02-16
PT2552401T (pt) 2017-11-30
RU2012144287A (ru) 2014-05-10
JP5964288B2 (ja) 2016-08-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102821750A (zh) 从去分化的、非诱发的刺阿甘树细胞的体外培养物产生的制剂、其用于治疗皮肤老化、炎症和疤痕的用途及其生产
US9155916B2 (en) Cosmetic preparation and method for preparing the same
CN102670438B (zh) 一种抗衰老美容护肤品及其制备方法
CN103520014B (zh) 含有来自水耕栽培人参的人参皂苷f2的皮肤外用剂组合物
US20180000722A1 (en) Preparation for protecting against extrinsic and intrinsic skin aging
CN1863503A (zh) 生发剂组合物
US20230248639A1 (en) Whitening cosmetic composition comprising exosomes derived from rose stem cells as active ingredient
KR101415996B1 (ko) 화산석 송이를 함유하는 화장료 조성물
KR101143717B1 (ko) 연 캘러스 추출물을 함유한 피부외용제 조성물 및 그 제조방법
CN111202777B (zh) 一种细梗蔷薇愈伤细胞提取物及其在制备皮肤外用剂中的应用
CN111281938B (zh) 可活化能量、抗皱、抗发炎及美白的兰花芽胚组织萃取物
CN111281904B (zh) 可活化能量、伤口愈合及保护修复的牛樟芽胚组织萃取物
CN1995371A (zh) 胚胎细胞的活性蛋白制备方法及其在皮肤护理品中的应用
KR20150031312A (ko) 배양된 테오브로마 카카오 세포 또는 그의 추출물을 함유하는 피부과용 조성물 및 관련 방법
CN116159006B (zh) 一种富含多种牡丹成分的组合物及其应用
KR101291460B1 (ko) 섬오갈피나무의 캘러스 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물
US20220175654A1 (en) Phytocomplex and extract of a meristematic cell line selected from a plant belonging to the genus rosa
CN109069408A (zh) 生产用于保护皮肤免于干燥和/或uv损伤和/或炎症的组合物的方法
CN117695368A (zh) 一种防脱发组合物及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1179173

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: GR

Ref document number: 1179173

Country of ref document: HK

TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20210420

Address after: 3 Rue de Cologne morel, Paris, France

Patentee after: Gemini cosmetics Laboratory

Address before: Bologna-Biyangu, France

Patentee before: PIERRE FABRE DERMO-COSMETIQUE

TR01 Transfer of patent right
CP03 Change of name, title or address

Address after: Paris France

Patentee after: French cosmetics Laboratory

Address before: 3 Rue de Cologne morel, Paris, France

Patentee before: Gemini cosmetics Laboratory

CP03 Change of name, title or address