CN102796203A - 一种抗氧化活性油茶饼粕多糖的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种提取多糖的方法，特别涉及一种以油茶饼粕为原料的抗氧化多糖提取方法，具体步骤为：将油茶饼粕粉碎至60～80目加入预先溶解有纤维素酶(酶活力＞15000u/g)的水溶液中提取；其中饼粕粉与水溶液质量比例为1∶20～40；纤维素酶用量为饼粕粉重量的0.3％～0.4％；提取温度为45-55℃；提取时间3-5小时。提取液过滤，浓缩后用聚酰胺吸附8～12小时，后用去离子水洗脱。收集洗脱液浓缩，加3～5倍的乙醇沉淀12～36小时。离心获得醇沉沉淀，冷冻干燥得到灰白色多糖。本发明充分利用油茶加工废弃物，工艺过程安全环保，不使用有毒化学试剂，为充分利用油茶加工废弃物提供了新的途径。

Description

一种抗氧化活性油茶饼粕多糖的制备方法

技术领域

本发明涉及生物化学领域，是一种提取多糖的方法，特别涉及一种以油茶饼粕为原料的抗氧化多糖提取方法。

背景技术

植物多糖具有许多生物活性功能，包括免疫调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗辐射、抗菌抗病毒、保护肝脏等。植物多糖广泛的生物活性己逐渐被人们利用，其独特活性和来源的天然性在保障人体健康应用中具有很大潜力。因此，如何提高收率是研究植物多糖的首要问题。

目前，我国油茶面积约有4500万亩。全国油茶籽年产量100万吨左右，榨油后的油茶饼粕68.39万吨。

油茶副产品综合开发利用技术目前主要集中在茶皂素的开发与利用方面，其它成分开发利用的报道很少。目前国内生产茶皂素年产1.86万吨，已广泛用于日化，建材，医药等领域。据文献报道，茶皂素在油茶饼粕中的含量为10～15％，而总糖含量则达30～35％，其中相当大比例为多糖。但由于对油茶饼粕多糖的分子结构与功能尚不十分清楚，因此，油茶多糖尚未如茶皂素一样形成规模产业。

传统提取油茶饼粕中多糖的方法是用水提取。由于需要加热至沸腾，既耗能大，同时会导致多糖受热时间过长分解。王元凤等(食品工业，2008，(6)：29～32)通过对水提法、醇提法提取油茶籽多糖、茶皂素的最佳提取条件进行比较，确定了油茶籽多糖、茶皂素的最佳提取条件以水做提取溶剂，温度75℃，2次浸提，固液比分别为1∶9和1∶5，每次各1.5小时，油茶籽多糖得率9.09％，质量分数20.07％。

吴雪辉等(食品工业科技，2008，29(9)：197～199)采用微波技术提取茶粕中的多糖，探讨了各因素对多糖提取效果的影响，通过正交实验及极差和线性回归分析，获知原料粒度对油茶饼粕中多糖提取效果影响显著。得出最佳微波提取工艺条件为：微波功率640W，提取时间3min，固液比1∶25，粒度80～100目，提取次数1次。此条件下油茶多糖的提取率为15.15％。

黄宝生(CN200710191396.2)发明了一种从油茶籽饼粕中提取茶多糖的方法。具体做法是将油茶籽粕按10Kg比100-200L水的比例，在水中浸泡，然后加温同时进行搅拌，趁热进行过滤，将过滤后的液体继续加热，使液体浓缩至1/4体积，在浓缩的溶液中加入的酵母，保持在25-32℃温度下，振动发酵，发酵时间0.5-3天后。停止振动，使其沉淀，取上层清液加入清液体积3倍的乙醇进行搅拌，然后放入冰箱内冷冻，将冷冻液加水使其溶解分层沉淀，取上层液体，将上层液体经喷雾干燥得茶多糖。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗氧化活性多糖的提取方法，尤其是一种以油茶饼粕为原料的提取抗氧化活性多糖的方法，以充分利用油茶加工废弃物。

为达到上述目的，本发明的技术方案是：一种抗氧化活性油茶饼粕多糖的制备方法，其特征在于，具体步骤为：

(1)将油茶饼粕粉碎至60目～80目的饼粕粉，然后将饼粕粉加入预先溶解有纤维素酶的水溶液中提取；其中饼粕粉与水溶液质量比例为1∶20～40，纤维素酶用量为饼粕粉干重量的0.3％～0.4％，提取温度为45℃-55℃，提取时间3小时-5小时；

(2)将提取液过滤，滤液浓缩，调整浓缩后的溶液使得溶液中溶质的质量百分含量为3％～10％，聚酰胺柱吸附8小时～12小时，去离子水洗脱；

(3)收集水洗液浓缩，浓缩液加3～5倍体积的乙醇沉淀12小时～36小时；离心获得醇沉沉淀，干燥得到多糖。

所述纤维素酶的酶活力＞15000u/g。

所述多糖为灰白色多糖。

将所获得的多糖进行体外抗氧化活性测试，发现对DPPH自由基有良好的清除作用。

DPPH全称是1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(1，1-Diphenyl-2-picrylhydrazylradical 2，2-Diphenyl-1-(2，4，6-trinitrophenyl)hydrazyl)，是一种很稳定的氮中心的自由基，它的稳定性主要来自共振稳定作用的3个苯环的空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。

DPPH法于1958年被提出，广泛用于地量测定生物试样、药品和食品的抗氧化能力。此法是根据DPPH自由基有单电子，在517nm处有一强吸收，其醇溶液呈紫色的特性。当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行快速的定量分析。经测试1.5mg/ml浓度下DPPH自由基清除率达68.38％-71.38％。

DPPH自由基清除实验的具体步骤为：准确称取DPPH粉末，用甲醇溶解制备成储备液，-20℃保存，临用前用甲醇稀释至120μg/ml。在反应体系中，于10mL比色管中加入2ml不同浓度的样品溶液，再加入3ml DPPH溶液，振荡摇匀，于室温下避光静置30min，然后测定溶液在515nm处的吸光值。依据以下公式计算自由基清除率：清除率％＝(A₀-A_i+A_j)×100/A₀；A₀为DPPH溶液的吸光值，A_i为DPPH溶液与多糖样品溶液反应后吸收值，A_j为多糖样品溶液的吸收值。

相对于现有技术而言，本发明的有益效果在于：

1、通过本发明获得的油茶饼粕多糖抗氧化活性高，充分利用油茶加工废弃物，工艺过程安全环保，不使用有毒化学试剂，为充分利用油茶加工废弃物提供了新的途径。

2、传统的水提取多糖，由于需要加热至沸腾，既耗能大，同时会导致多糖受热时间过长分解。本发明采取酶辅助提取法节约能源，同时较低的提取温度可保护多糖不易分解。

具体实施方式

实施例1：

(1)油茶饼粕多糖的制备：

称取油茶饼粕粉碎至80目粉末250g，加水5000mL，加纤维素酶(酶活力＞15000u/g)875mg，50℃水浴提取3小时后，双层纱布过滤，得淡黄色提取溶液。所得提取液减压浓缩至700ml，使得溶液中溶质的质量百分含量为6％，通过预装500g聚酰胺的层析柱，充分混合均匀，静置吸附12小时，以柱体积4倍的去离子水进行洗脱。收集所获得的洗脱溶液，减压浓缩至较小体积，加入浓缩液体积5倍的95％乙醇，充分搅拌，静置12小时。离心(4500转/min，10min)。取沉淀后真空冷冻干燥，得灰白色多糖2.45g。

(2)油茶饼粕多糖体外抗氧化活性的测试：

将实施例1所得油茶饼粕多糖进行DPPH自由基清除实验以验证抗氧化性效果，结果见表1。

表1多糖清除DPPH自由基效果

多糖浓度(mg/ml)	0.2	0.4	0.6	0.8	1.0	1.5
							清除率％	13.64	24.9	32.61	44.07	55.73	68.38

实施例2：

(1)油茶饼粕多糖的制备：

称取油茶饼粕粉碎至80目粉末250g，加水7500mL，加纤维素酶(酶活力＞15000u/g)1000mg，55℃水浴提取5小时后，双层纱布过滤，得淡黄色提取溶液。所得提取液减压浓缩至1000ml，使得溶液中溶质的质量百分含量为4％，通过预装500g聚酰胺的层析柱，充分混合均匀，静置吸附10小时，以柱体积4倍的去离子水进行洗脱。收集所获得的洗脱溶液，减压浓缩至较小体积，加入浓缩液体积4倍的95％乙醇，充分搅拌，静置24小时。离心(4500转/min，10min)。取沉淀后真空冷冻干燥，得灰白色多糖2.92g。

(2)油茶饼粕多糖体外抗氧化活性的测试：

将实施例2所得油茶饼粕多糖进行DPPH自由基清除实验以验证抗氧化性效果，结果见表2。

表2多糖清除DPPH自由基效果

多糖浓度(mg/ml)	0.2	0.4	0.6	0.8	1.0	1.5
							清除率％	10.26	27.91	30.17	45.58	58.12	71.38

Claims (2)

1.一种抗氧化活性油茶饼粕多糖的制备方法，其特征在于，具体步骤为：

(1)将油茶饼粕粉碎至60目～80目的饼粕粉，然后将油茶饼粕粉加入预先溶解有纤维素酶的水溶液中提取；其中油茶饼粕粉与水溶液质量比例为1∶20～40，纤维素酶用量为饼粕粉干重量的0.3％～0.4％，提取温度为45℃-55℃，提取时间3小时-5小时；

(2)将提取液过滤，滤液浓缩，调整浓缩后使得溶液中溶质的质量百分含量为3％～10％，上聚酰胺柱吸附8小时～12小时，去离子水洗脱；

(3)收集去离子水洗液浓缩，浓缩液(浓缩到什么程度是否有要求？)加3～5倍体积的乙醇沉淀12小时～36小时；离心获得醇沉沉淀，干燥得到多糖。

2.根据权利要求1所述抗氧化活性油茶饼粕多糖的制备方法，其特征在于，所述纤维素酶的酶活力＞15000u/g。