CN102000133B - 一种中药抗氧化制剂的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明所属保健食品加工技术领域，本发明涉及一种中药抗氧化制剂的制备方法。将大叶蟹甲草粉末，分别用10倍，8倍，6倍量的75％乙醇浸泡8h-10h后，超声1h，温度为30℃，功率为80W，静置过滤，将滤液置于旋转蒸发仪中回收乙醇后得流浸膏，将流浸膏加适量水稀释成混悬液，再用4-5倍量石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯层萃取液，将乙酸乙酯层萃取液减压浓缩，冷冻干燥，得到乙酸乙酯萃取物，备用。本发明产品可用于食品、药品等领域开发新的天然抗氧化剂，本发明产品利于工业化生产。

Description

一种中药抗氧化制剂的制备方法
技术领域
本发明所属保健食品加工技术领域，本发明涉及一种中药抗氧化制剂的制备方法，本发明产品可用于食品、药品等领域开发新的天然抗氧化剂，本发明产品利于工业化生产。
背景技术
目前，大量资料已经证明：炎症、肿瘤、衰老、血液病、以及心、肝、肺、皮肤等各方面疑难疾病的发生机理与体内自由基产生过多或清除自由基的能力下降有着密切的关系。由于抗氧化剂对由自由基引起的机体损伤有干扰作用，而被公认为是一种新的治疗途径，在预防医学领域里，对抗氧化剂研究兴趣空前高涨。合成的抗氧化剂虽然抗氧化性能较好，但有一定的副作用。所以，开发研究抗氧化作用的天然药物是目前研究的重中之重。
大叶蟹甲草cacalia firma kom.为菊科compositae蟹甲草属Parasenecio或cacalia植物，又名大叶兔儿伞，在民间作为山野菜食用。蟹甲草属植物约有50种分布在中国，据报道在我国民间大约有26种该属植物可作为传统中药应用，具有祛风除湿、消炎止咳及消肿止痛等功效，用于治疗风湿关节痛、肺结核、支气管炎、跌打损伤、咳血、痢疾、水肿等疑难杂症。近代药理研究表明：蟹甲草属植物具有抗氧化、抗癌、抗菌活性及杀虫作用。经查阅大量文献发现：国内外对大叶蟹甲草的相关研究并无报道。通过本文的研究，为深入研究大叶蟹甲草植物提供了理论依据。
本发明涉及大叶蟹甲草提取物体外抗氧化活性筛选，为其在食品、药品等领域开发新的天然抗氧化剂提供参考依据。
发明内容
本发明所属保健食品加工技术领域，本发明涉及一种中药抗氧化制剂的制备方法，本发明产品可用于食品、药品等领域开发新的天然抗氧化剂，本发明产品利于工业化生产。
1、一种中药抗氧化制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将大叶蟹甲草粉末，分别用10倍，8倍，6倍量的75％乙醇浸泡8h-10h后，超声1h，温度为30℃，功率为80W；
(2)将(1)中溶液静置过滤，将滤液置于旋转蒸发仪中回收乙醇后得流浸膏；
(3)将(2)中流浸膏加适量水稀释成混悬液，再用4-5倍量石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯层萃取液；
(4)将(3)中乙酸乙酯层萃取液减压浓缩，冷冻干燥，得到乙酸乙酯萃取物，备用。
2、根据权利要求1所述的制备方法，所述大叶蟹甲草为大叶蟹甲草cacalia firma kom的地上部分。
3、如权利要求1所述的一种中药制剂在制备抗氧化制剂中的用途。
根据本发明，本发明中的“％”是重量百分比。
具体实施方式
下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1：
1、一种中药抗氧化制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将大叶蟹甲草粉末100g，分别用10倍，8倍，6倍量的75％乙醇浸泡8h后，超声1h，温度为30℃，功率为80W；
(2)将(1)中溶液静置过滤，将滤液置于旋转蒸发仪中回收乙醇后得流浸膏；
(3)将(2)中流浸膏加适量水稀释成混悬液，再用4倍量石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯层萃取液；
(4)将(3)中乙酸乙酯层萃取液减压浓缩，冷冻干燥，得到乙酸乙酯萃取物，备用。
2、将上述乙酸乙酯萃取物进行抗氧化试验，该乙酸乙酯萃取物具有抗氧化作用。
实施例2：
1、一种中药抗氧化制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将大叶蟹甲草粉末200g，分别用10倍，8倍，6倍量的75％乙醇浸泡10h后，超声1h，温度为30℃，功率为80W；
(2)将(1)中溶液静置过滤，将滤液置于旋转蒸发仪中回收乙醇后得流浸膏；
(3)将(2)中流浸膏加适量水稀释成混悬液，再用5倍量石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯层萃取液；
(4)将(3)中乙酸乙酯层萃取液减压浓缩，冷冻干燥，得到乙酸乙酯萃取物，备用。
2、将上述乙酸乙酯萃取物进行抗氧化试验，该乙酸乙酯萃取物具有抗氧化作用。
药理试验
1材料与方法
1.1实验样品来源
药材采于吉林省临江市，由吉林农业大学园艺学院胡全德教授鉴定为菊科compositae蟹甲草属Parasenecio或cacalia植物大叶蟹甲草cacalia firma kom.地上部分。
1.2仪器
T6新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；百灵LA114型电子天平(110g/0.0001g，常熟市百灵天平仪器有限公司)；电子计数天平(500g/0.001g，金羊天平仪器厂)；KQ-250DB型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；101-2A型数显电热鼓吹干燥箱(上海锦屏仪器仪表有限公司通州分公司)；RE 52-05旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；RE-52AA旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；电子恒温水浴锅(天津泰斯特仪器有限公司)；移液枪(20ul，上海肯强贸易有限公司)。
1.3试剂
DPPH溶液，蒸馏水，无水乙醇，甲醇，ABTS，过硫酸钾，铁氰化钾，磷酸盐缓冲液(PH＝6.6)，三氯乙酸，三氯化铁，抗坏血酸(以下用Vc表示)(上海惠世生化试剂有限公司，批号：080408)，Folin-Ciocalteu试剂，无水碳酸钠。
2实验方法与步骤
2.1药材组分的提取
取大叶蟹甲草样品粉末3.5kg，分别用10倍，8倍，6倍量的75％乙醇浸泡10h后，超声1h，温度为30℃，功率为80W，静置过滤，经抽滤后合并3次滤液，将滤液置于旋转蒸发仪中回收乙醇后得流浸膏，加适量水稀释流浸膏成混悬液，再用4-5倍量石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯层萃取液，减压浓缩，冷冻干燥，得到乙酸乙酯萃取物，备用。
2.2DPPH法测定抗氧化活性
2.2.1样品溶液的制备
准确称取干燥至恒重的乙酸乙酯萃取物30mg，用无水乙醇定容于10mL容量瓶中，配成浓度为3mg/mL的样品母液，将样品母液用无水乙醇逐级稀释成浓度为0.000mg/ml，0.018mg/mL，0.037mg/mL，0.075mg/mL，0.15mg/mL，0.31mg/mL，0.62mg/mL，1.25mg/mL的样品溶液待用。
2.2.2DPPH溶液的制备
精密称取DPPH样品0.01g，加入无水乙醇定容至50ml容量瓶中，得到DPPH母液(浓度0.2mg/mL)。从母液中移取10mL，用无水乙醇定容置50mL容量瓶中，得到DPPH溶液(浓度0.04mg/mL)，整个过程都需要避光。
2.2.3样品测定
乙酸乙酯萃取物样品溶液按表1加入反应液，摇匀后于室温避光静置30min，在515nm处测定吸光度值。用VC作对照。
表1总提取物、石油醚层萃取物样品溶液加样表
Figure BSA00000363598200031
DPPH清除率％＝(A-B+C)/A*100
2.3ABTS法测定抗氧化活性
2.3.1样品溶液的制备
精确称取干燥至恒重的乙酸乙酯萃取物30mg，用水定容于10mL容量瓶中，配成浓度为3mg/mL的样品母液，其中石油醚层加入DMSO(含量小于0.05％)，将样品母液用水逐级稀释成浓度0.000mg/ml，0.018mg/mL，0.037mg/mL，0.075mg/mL，0.15mg/mL，0.31mg/mL，0.62mg/mL，1.25mg/mL，的样品溶液待用。
2.3.2ABTS+溶液的制备
5mL，14mM的ABTS和5mL，4.9mMk2S2O8混合产生ABTS+，黑暗中静止16h，使用之前用乙醇稀释成备用的ABTS+，要求其在734mm波长下的吸光度为0.70±0.02。
2.3.3样品测定
取3ml样品溶液加入158μLABTS+(Asample)，用乙醇做空白，158μLABTS+和3ml水为标准液(Acontrol)，6min后在734nm波长下测定吸光度，用Vc作对照。
清除率(％)＝[(Acontrol-Asample)/Acontrol]×100％
2.4半数抑制率的计算
半数抑制率(IC50)指清除率为5O％时所需抗氧化剂的浓度，根据不同浓度抗氧化剂的清除率作曲线求出。
2.5总酚含量测定
2.5.1标准曲线的绘制
精密称取对照品没食子酸0.0040g，甲醇溶解转入100ml容量瓶，制成浓度为0.04mg/ml的标准品溶液，备用。
分别吸取0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、8.0ml于25ml容量瓶中加2.5ml Folin-Ciocalteu试剂，摇匀，在0-8min再加入2ml7.5％Na2CO3溶液，于50℃水浴反应5min，冷却至室温加蒸馏水定容。以空白溶液为参比溶液，于760nm测定吸光度。对所测得的数据采用直线回归法计算出标准曲线的回归方程，并以对照品的质量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。将数据进行回归分析得到标准曲线的回归方程为：Y＝6.2168X-0.0421，R2＝0.9991，在0.02-0.32mg范围内线性关系良好。
2.5.2样品测定
取样品20mg于10mL容量瓶中，用甲醇定容，取0.5ml样品溶液于25mL容量瓶中，加入Folin-Ciocalteu(福林酚试剂)2.5mL，在0.5至8分钟范围内间断加入2mL无水Na2co3(75g/L)，在50℃水浴中加热5min，冷却后用蒸馏水配平，760nm处测吸光度值，用蒸馏水作对照。
3结果与讨论
3.1结果
大叶蟹甲草清除DPPH和ABTS的IC50值及总酚含量
见表2.
表2大叶蟹甲草乙酸乙酯萃取物的抗氧化活性及总酚含量
Figure BSA00000363598200041
3.2讨论
3.2.1由表2可知，乙酸乙酯萃取物的总酚含量较高，为2.9mg/20mg，DPPH法测得的VC的IC50值为0.001mg/ml，大叶蟹甲草的乙酸乙酯层的IC50值为0.004mg/ml，接近于VC。ABTS法测得的VC的IC50值为0.025mg/ml，大叶蟹甲草的乙酸乙酯层萃取物的IC5O值接近于VC，为0.066mg/ml。大叶蟹甲草乙酸乙酯萃取物具有较强的抗氧化能力，能明显地清除DPPH、ABTS自由基。
3.2.2通过对大叶蟹甲草乙酸乙酯萃取物的抗氧化活性的研究，为其在食品、药品等领域开发新的天然抗氧化剂提供了参考。

Claims (3)

1.一种中药抗氧化制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将大叶蟹甲草粉末，分别用10倍，8倍，6倍量的75％乙醇浸泡8h-10h后，超声1h，温度为30℃，功率为80W；
(2)将(1)中溶液静置过滤，将滤液置于旋转蒸发仪中回收乙醇后得流浸膏；
(3)将(2)中流浸膏加适量水稀释成混悬液，再用4-5倍量石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯层萃取液；
(4)将(3)中乙酸乙酯层萃取液减压浓缩，冷冻干燥，得到乙酸乙酯萃取物，备用。
2.根据权利要求1所述的制备方法，所述大叶蟹甲草为大叶蟹甲草cacalia firma kom的地上部分。
3.如权利要求1所述的一种中药抗氧化制剂的用途，其特征在于该制剂用于制备具有抗氧化作用的制剂。
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