CN102579531A - 一种具有抗氧化作用的刺五加叶提取物 - Google Patents

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张成城
侯欣池
徐春玲
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Abstract

本发明所属保健食品加工技术领域，本发明涉及一种具有抗氧化作用的刺五加叶提取物。将刺五加叶粉末，用重量为刺五加叶粉末10倍量的50％乙醇溶液浸泡10h-12h后，依次用10倍量、8倍量、6倍量50％乙醇溶液超声提取3次，每次30min-40min，温度为30℃，功率为80W；将3次滤液合并，上大孔树脂柱，依次用水、10％、30％乙醇洗脱大孔树脂柱，收集30％乙醇洗脱溶液，浓缩至无醇味，蒸干，得到刺五加叶提取物，备用。本发明产品可用于食品、药品等领域开发新的天然抗氧化剂，本发明产品利于工业化生产。

Description

一种具有抗氧化作用的刺五加叶提取物
技术领域
本发明所属保健食品加工技术领域，本发明涉及一种具有抗氧化作用的刺五加叶提取物，本发明产品可用于食品、药品等领域开发新的天然抗氧化剂，本发明产品利于工业化生产。
背景技术
目前，大量资料已经证明：炎症、肿瘤、衰老、血液病、以及心、肝、肺、皮肤等各方面疑难疾病的发生机理与体内自由基产生过多或清除自由基的能力下降有着密切的关系。由于抗氧化剂对由自由基引起的机体损伤有干扰作用，而被公认为是一种新的治疗途径，在预防医学领域里，对抗氧化剂研究兴趣空前高涨。合成的抗氧化剂虽然抗氧化性能较好，但有一定的副作用。所以，开发研究抗氧化作用的天然药物是目前研究的重中之重。
五加科植物刺五加Acanthopanax senticosus(Rupr.Et Maxim.)Harms，别名：五加皮、刺拐棒(中国东北)，俗名：Ciwujia，科属：五加科五加属，使用部位：根和根状茎，生于山坡林中及路旁灌丛中；药圃常有栽培。分布于华中、华东、华南和西南。根皮祛风湿、强筋骨，泡酒制五加皮酒(或制成五加皮散)。根皮含刺五加总苷、刺五加多糖、黄酮类化合物、挥发油、鞣质、棕桐酸、亚麻仁油酸、维生素A，B1。刺五加叶皂苷(ASS)对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有明显保护作用，刺五加茎叶的乙醇提取液对胶原肾上腺素诱导的小鼠血栓形成有显著保护作用，刺五加提取物能扩张脑血管，改善大脑供氧量，刺五加叶皂苷(ASS)对实验性大鼠脑缺血具有明显的保护作用，对II型糖尿病大鼠有显著降血糖作用，刺五加叶皂苷抗肝癌。近年来，刺五加不但药用，还拓宽至保健品、饮料、酒类等行业，并大量出口到日本、韩国、东南亚、欧洲、北美洲等许多国家和港澳台市场。由于刺五加资源连年无序采挖，产量逐年大幅减少，今年东北已无大货供应国内外市场，为保护刺五加资源，已研究天然林下刺五加栽培，目的是能够使刺五加回归原始环境，在天然林中大量繁衍发展，以满足医药和保健品广泛的开发对刺五加大量的需要。经查阅大量文献发现：国内外对五加科植物刺五加叶的相关研究鲜见报道。通过本文的研究，为深入研究五加科植物刺五加提供了理论依据。本发明涉及五加科植物刺五加叶提取物体外抗氧化活性筛选，为其在食品、药品等领域开发新的天然抗氧化剂提供参考依据。
发明内容
1、一种具有抗氧化作用的刺五加叶提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将刺五加叶粉末，用重量为刺五加叶粉末10倍量的50％乙醇溶液浸泡10h-12h后，依次用10倍量、8倍量、6倍量50％乙醇溶液超声提取3次，每次30min-40min，温度为30℃，功率为80W；
(2)将(1)中3次滤液合并，上大孔树脂柱，依次用水、10％、30％乙醇洗脱大孔树脂柱，收集30％乙醇洗脱溶液，浓缩至无醇味，蒸干，得到刺五加叶提取物，备用。
2、一种具有抗氧化作用的刺五加叶提取物的用途，其特征在于该提取物用于制备具有抗氧化作用的药物制剂。
根据本发明，本发明中的“％”是重量百分比。
具体实施方式
本发明所述的一种具有抗氧化作用的刺五加叶提取物包括以下实施例，下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1：
1、一种具有抗氧化作用的刺五加叶提取物的制备方法，其特征在手包括以下步骤：
(1)将刺五加叶粉末，用重量为刺五加叶粉末10倍量的50％乙醇溶液浸泡10h后，依次用10倍量、8倍量、6倍量50％乙醇溶液超声提取3次，每次30min，温度为30℃，功率为80W；
(2)将(1)中3次滤液合并，上大孔树脂柱，依次用水、10％、30％乙醇洗脱大孔树脂柱，收集30％乙醇洗脱溶液，浓缩至无醇味，蒸干，得到刺五加叶提取物，备用。
2、一种刺五加叶提取物的用途，其特征在于该提取物用于制备具有抗氧化作用的药物制剂。
实施例2：
1、一种具有抗氧化作用的刺五加叶提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将刺五加叶粉末，用重量为刺五加叶粉末10倍量的50％乙醇溶液浸泡12h后，依次用10倍量、8倍量、6倍量50％乙醇溶液超声提取3次，每次40min，温度为30℃，功率为80W；
(2)将(1)中3次滤液合并，上大孔树脂柱，依次用水、10％、30％乙醇洗脱大孔树脂柱，收集30％乙醇洗脱溶液，浓缩至无醇味，蒸干，得到刺五加叶提取物，备用。
2、一种刺五加叶提取物的用途，其特征在于该提取物用于制备具有抗氧化作用的药物制剂。
药理试验
1材料与方法
1.1实验样品来源
药材采于吉林省临江市，由吉林农业大学园艺学院胡全德教授鉴定为五加科植物刺五加Acanthopanaxsenticosus(Rupr.Et Maxim.)Harms的叶。
1.2仪器
T6新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；百灵LA114型电子天平(110g/0.0001g，常熟市百灵天平仪器有限公司)；电子计数天平(500g/0.001g，金羊天平仪器厂)；KQ-250DB型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；101-2A型数显电热鼓吹干燥箱(上海锦屏仪器仪表有限公司通州分公司)；RE 52-05旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；RE-52AA旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；电子恒温水浴锅(天津泰斯特仪器有限公司)；移液枪(20ul，上海肯强贸易有限公司)。
1.3试剂
DPPH溶液，蒸馏水，无水乙醇，甲醇，ABTS，过硫酸钾，铁氰化钾，磷酸盐缓冲液(PH＝6.6)，三氯乙酸，三氯化铁，抗坏血酸(以下用Vc表示)(上海惠世生化试剂有限公司，批号：080408)，Folin-Ciocalteu试剂，无水碳酸钠。
2实验方法与步骤
2.1药材组分的提取
将刺五加叶粉末3.0kg，用重量为刺五加叶粉末10倍量的50％乙醇溶液浸泡10h后，依次用10倍量、8倍量、6倍量50％乙醇溶液超声提取3次，每次30min，温度为30℃，功率为80W；将3次滤液合并，上大孔树脂柱，依次用水、10％、30％乙醇洗脱大孔树脂柱，收集30％乙醇洗脱溶液，浓缩至无醇味，蒸干，得到刺五加叶提取物，备用。
2.2DPPH法测定抗氧化活性
2.2.1样品溶液的制备
准确称取干燥至恒重的刺五加叶提取物30mg，用无水乙醇定容于10mL容量瓶中，配成浓度为3mg/mL的样品母液，将样品母液用无水乙醇逐级稀释成浓度为0.000mg/ml，0.018mg/mL，0.037mg/mL，0.075mg/mL，0.15mg/mL，0.31mg/mL，0.62mg/mL，1.25mg/mL的样品溶液待用。
2.2.2DPPH溶液的制备
精密称取DPPH样品0.01g，加入无水乙醇定容至50ml容量瓶中，得到DPPH母液(浓度0.2mg/mL)。从母液中移取10mL，用无水乙醇定容置50mL容量瓶中，得到DPPH溶液(浓度0.04mg/mL)，整个过程都需要避光。
2.2.3样品测定
刺五加叶提取物样品溶液按表1加入反应液，摇匀后于室温避光静置30min，在515nm处测定吸光度值。用Vc作对照。
表1刺五加叶提取物溶液加样表
Figure BSA00000676142900041
DPPH清除率％＝(A-B+C)/A*100
2.3ABTS法测定抗氧化活性
2.3.1样品溶液的制备
精确称取干燥至恒重的刺五加叶提取物30mg，用水定容于10mL容量瓶中，配成浓度为3mg/mL的样品母液，将样品母液用水逐级稀释成浓度0.000mg/ml，0.018mg/mL，0.037mg/mL，0.075mg/mL，0.15mg/mL，0.31mg/mL，0.62mg/mL，1.25mg/mL，的样品溶液待用。
2.3.2ABTS+溶液的制备
5mL，14mM的ABTS和5mL，4.9mMk2S2O8混合产生ABTS+，黑暗中静止16h，使用之前用乙醇稀释成备用的ABTS+，要求其在734nm波长下的吸光度为0.70±0.02。
2.3.3样品测定
取3ml样品溶液加入158μLABTS+(Asample)，用乙醇做空白，158μLABTS+和3ml水为标准液(Acontrol)，6min后在734nm波长下测定吸光度，用Vc作对照。
清除率(％)＝[(Acontrol-Asample)/Acontrol]×100％
2.4半数抑制率的计算
半数抑制率(IC50)指清除率为50％时所需抗氧化剂的浓度，根据不同浓度抗氧化剂的清除率作曲线求出。
3结果与讨论
3.1结果
3.1.1DPPH法测定抗氧化活性
见表2。
表2.不同浓度下刺五加叶提取物DPPH法清除自由基活性
Figure BSA00000676142900042
随着刺五加叶提取物浓度的增加，清除自由基能力呈逐渐上升趋势。
3.1.2ABTS法测定抗氧化活性
见表3。
表3不同浓度下刺五加叶提取物ABTS法清除自由基活性
Figure BSA00000676142900051
随着刺五加叶提取物浓度的增加，清除自由基能力呈逐渐上升趋势。
3.1.3刺五加叶提取物清除DPPH和ABTS的IC50值
表4刺五加叶提取物的抗氧化活性
Figure BSA00000676142900052
3.2讨论
3.2.1由表2、表3可知，随着刺五加叶提取物浓度的增加，清除自由基能力呈逐渐上升趋势。由表4可知，DPPH法测得的VC的IC50值为0.001mg/ml，刺五加叶提取物的IC50值为0.028mg/ml，接近于VC。ABTS法测得的VC的IC50值为0.025mg/ml，刺五加叶提取物的IC5O值接近于VC，为0.065mg/ml。刺五加叶提取物具有较强的抗氧化能力，能明显地清除DPPH、ABTS自由基。
3.2.2通过对刺五加叶提取物的抗氧化活性的研究，为其在食品、药品等领域开发新的天然抗氧化剂提供了参考。

Claims (2)

1.一种具有抗氧化作用的刺五加叶提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将刺五加叶粉末，用重量为刺五加叶粉末10倍量的50％乙醇溶液浸泡10h-12h后，依次用10倍量、8倍量、6倍量50％乙醇溶液超声提取3次，每次30min-40min，温度为30℃，功率为80W；
(2)将(1)中3次滤液合并，上大孔树脂柱，依次用水、10％、30％乙醇洗脱大孔树脂柱，收集30％乙醇洗脱溶液，浓缩至无醇味，蒸干，得到刺五加叶提取物，备用。
2.如权利要求1所述的一种具有抗氧化作用的刺五加叶提取物的用途，其特征在于该提取物用于制备具有抗氧化作用的药物制剂。
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