CN102526145A - 一种对酒精性肝损伤具有保护作用的刺五加叶提取物 - Google Patents

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张成城
侯欣池
徐春玲
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Abstract

本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种对酒精性肝损伤具有保护作用的刺五加叶提取物。称取刺五加叶干燥粗粉,加入以粗粉重量为8-10倍量的水浸泡8h-10h,煎煮1.5h-2h,煎煮后真空抽滤,收集滤液;将滤渣再加水煎煮1h-1.5h,然后超声1h-1.5h,温度为30℃,功率为80W,真空抽滤,收集滤液;将滤液浓缩至浸膏状,烘干浸膏,粉碎,得到刺五加叶提取物。该提取物用于制备对酒精性肝损伤具有保护作用的药物制剂。

Description

一种对酒精性肝损伤具有保护作用的刺五加叶提取物
技术领域
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种对酒精性肝损伤具有保护作用的刺五加叶提取物。
背景技术
五加科植物刺五加Acanthopanax senticosus(Rupr.Et Maxim.)Harms,别名:五加皮、刺拐棒(中国东北),俗名:Ciwujia,科属:五加科五加属,使用部位:根和根状茎,生于山坡林中及路旁灌丛中;药圃常有栽培。分布于华中、华东、华南和西南。根皮祛风湿、强筋骨,泡酒制五加皮酒(或制成五加皮散)。根皮含刺五加总苷、刺五加多糖、黄酮类化合物、挥发油、鞣质、棕桐酸、亚麻仁油酸、维生素A,B1。刺五加叶皂苷(ASS)对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有明显保护作用,刺五加茎叶的乙醇提取液对胶原肾上腺素诱导的小鼠血栓形成有显著保护作用,刺五加提取物能扩张脑血管,改善大脑供氧量,刺五加叶皂苷(ASS)对实验性大鼠脑缺血具有明显的保护作用,对II型糖尿病大鼠有显著降血糖作用,刺五加叶皂苷抗肝癌。近年来,刺五加不但药用,还拓宽至保健品、饮料、酒类等行业,并大量出口到日本、韩国、东南亚、欧洲、北美洲等许多国家和港澳台市场。由于刺五加资源连年无序采挖,产量逐年大幅减少,今年东北已无大货供应国内外市场,为保护刺五加资源,已研究天然林下刺五加栽培,目的是能够使刺五加回归原始环境,在天然林中大量繁衍发展,以满足医药和保健品广泛的开发对刺五加大量的需要。将栽培刺五加叶开发成对酒精性肝损伤的保护作用的药品鲜见报道。
发明内容
1、一种对酒精性肝损伤具有保护作用的刺五加叶提取物,其特征在于该提取物的制备包括以下过程:
步骤(1):称取刺五加叶干燥粗粉,加入以粗粉重量为8-10倍量的水浸泡8h-10h,煎煮1.5h-2h,煎煮后真空抽滤,收集滤液;
步骤(2):将步骤(1)中的刺五加叶干燥粗粉的滤渣再加水煎煮1h-1.5h,然后超声1h-1.5h,温度为30℃,功率为80W,真空抽滤,收集滤液;
步骤(3):将步骤(1)和(2)中的滤液合并,将滤液浓缩至浸膏状,烘干浸膏,粉碎,得到刺五加叶提取物。
2、一种对酒精性肝损伤具有保护作用的刺五加叶提取物的用途,其特征在于该提取物用于制备对酒精性肝损伤具有保护作用的药物制剂。
具体实施方式
本发明所述的一种对酒精性肝损伤具有保护作用的刺五加叶提取物包括以下实施例,下面的实施例可进一步说明本发明,但不以任何方式限制本发明。
实施例1:
1、一种对酒精性肝损伤具有保护作用的刺五加叶提取物,其特征在于该提取物的制备包括以下过程:
步骤(1):称取刺五加叶干燥粗粉100g,加入以粗粉重量为8倍量的水浸泡8h,煎煮1.5,煎煮后真空抽滤,收集滤液;
步骤(2):将步骤(1)中的刺五加叶干燥粗粉的滤渣再加水煎煮1h,然后超声1h,温度为30℃,功率为80W,真空抽滤,收集滤液;
步骤(3):将步骤(1)和(2)中的滤液合并,将滤液浓缩至浸膏状,烘干浸膏,粉碎,得到刺五加叶提取物12.5g。
2、该提取物用于制备对酒精性肝损伤具有保护作用的药物制剂。
实施例2:
1、一种对酒精性肝损伤具有保护作用的刺五加叶提取物,其特征在于该提取物的制备包括以下过程:
步骤(1):称取刺五加叶干燥粗粉200g,加入以粗粉重量为10倍量的水浸泡10h,煎煮2h,煎煮后真空抽滤,收集滤液;
步骤(2):将步骤(1)中的刺五加叶干燥粗粉的滤渣再加水煎煮1.5h,然后超声1.5h,温度为30℃,功率为80W,真空抽滤,收集滤液;
步骤(3):将步骤(1)和(2)中的滤液合并,将滤液浓缩至浸膏状,烘干浸膏,粉碎,得到刺五加叶提取物26.2g。
2、该提取物用于制备对酒精性肝损伤具有保护作用的药物制剂。
刺五加叶提取物对小鼠酒精性肝损伤保护作用的实验
1实验材料、动物、仪器和试剂
1.1实验材料
药材采于吉林省临江市,由吉林农业大学园艺学院胡全德教授鉴定为五加科植物刺五加Acanthopanaxsenticosus(Rupr.Et Maxim.)Harms的叶。
1.2实验动物
实验动物购自吉林大学基础医学院实验动物中心,动物系昆明种小鼠60只,雌雄各半,体重(20±1)g,合格证号:SCXK(吉)2011-0001。实验动物在温度25℃~27℃,湿度55℃~60℃的条件下饲养。
1.3仪器与试剂
LPZ5-2型离心机(北京医用离心机厂),76新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司),百灵LA114型电子天平(110g/0.0001g,常熟市百灵天平仪器有限公司),电子计数天平(500g/0.001g,金羊天平仪器厂),KQ-250DB型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司),高速冷冻离心机(GI-20B上海安亭科学仪器厂)。
丙氨酸转氨酶(ALT)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒(南京建成生物工程研究所);56%(V/V)北京二锅头白酒(北京红星酿酒有限公司),冰醋酸、无水乙醇(北京化工厂);护肝片(吉林修正药业)。
2实验方法
2.1刺五加叶提取物的制备
步骤(1):称取刺五加叶干燥粗粉100g,加入以粗粉重量为8倍量的水浸泡8h,煎煮1.5,煎煮后真空抽滤,收集滤液;
步骤(2):将步骤(1)中的刺五加叶干燥粗粉的滤渣再加水煎煮1h,然后超声1h,温度为30℃,功率为80W,真空抽滤,收集滤液;
步骤(3):将步骤(1)和(2)中的滤液合并,将滤液浓缩至浸膏状,烘干浸膏,粉碎,得到刺五加叶提取物12.5g,用水溶解,使其每克溶液相当于1g原药材(刺五加叶粗粉)。
2.2动物分组及给药
2.2.1动物分组
小鼠50只适应性喂养3d后,随机分为正常组、阴性(模型)对照组、阳性对照组,小叶丁香树皮水提物高、低剂量组,每组10只,雌雄各半,按鼠体重给药。
2.2.2给药设计
A组正常组:正常喂食、喂水。
B组阴性(模型)对照组:只给酒精,不给药。
C组阳性对照组:将阳性药护肝片的成人剂量,按成人体重与小鼠体重的比例折合成小鼠的剂量。每天给小鼠灌胃。
D组刺五加叶低剂量组:每天按5g刺五加叶提取物/kg小鼠的给药量给小鼠灌胃。
E组刺五加叶高剂量组:每天按20g刺五加叶提取物/kg小鼠的给药量给小鼠灌胃。
2.2.3动物给药
除正常组外,其余各组每日均于给药1h后灌胃56%(V/V)二锅头白酒16mL/kg(阴性对照组:只给酒精,不给药),连续7d。自造模第1日起,每日给酒4h前灌胃相应的水煎液1次,共7d。末次给酒24h后(禁食不禁水12h),摘除小鼠眼球取血,静置1h后,3500r/min离心10min分离血清,检测血清ALT活性。小鼠脱臼处死,迅速取出肝脏,剪碎后以4℃生理盐水制成10%肝匀浆,3500r/min离心10min,取肝脏上清液,测定MDA活性。
2.3指标检测
2.3.1动物一般情况
观察并且记录各组小鼠每日的饮食、体重、活动、毛色、死亡等情况。
2.3.2血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)的活性检测
小鼠眼球取血后,静置1h,3500r/min离心10min分离血清,测定管用移液枪加入待测血清0.1ml加入试管中,对照管不加待测血清。将试剂盒中的基质液先于37℃的水浴锅中预热5min后,取出0.5ml加入测定管和对照管中,充分混匀后,于37℃水浴30min。然后测定管和对照管同时加入0.5ml的2,4-二硝基苯肼液,混匀。再取0.1ml待测血清只加入对照管中,混匀后于37℃水浴20min。最后在测定管和对照管中都加入5ml0.4mol/l的氢氧化钠液混匀。室温放置10min,于505nm处,蒸馏水调零,测定对照管和测定管的OD值。每组重复三次。
绝对OD值=测定管OD值-对照管OD值
查标准曲线,通过拟合公式求得相应的ALT活性
2.3.3肝组织匀浆MDA的检测
各组小鼠处死后,剖腹取肝脏,在4℃生理盐水清洗,洗去血液,滤纸拭干后,取肝右叶相同部位的一小块肝组织约0.5g,剪碎后以4℃生理盐水制成10%肝匀浆,匀浆液以3500r/min,离心10min,取其上清液,具体操作按试剂盒说明书测定MDA的含量。
组织中MDA含量的计算公式:
组织中MDA含量=(测定管吸光度-测定空白管吸光度/标准管吸光度-标准空白管吸光度)×标准品浓度÷待测样本蛋白浓度
2.4数据处理
数据应用SPSS 10.0软件包进行处理。各项数据以x±s表示,用方差分析及t检验比较组间差异的显著性,P<0.05表示差异显著,有统计学意义。
3实验结果
3.1动物一般情况
A组小鼠活动正常,被毛整齐、光泽,反应灵敏,食量及大便正常,体重逐渐增减。B组小鼠在每日给酒后,活动明显减少,行走不稳,反应迟钝,倦卧少动,多在30min~1h内醉倒酣睡,随着给酒时间的延长,其醉酒时间逐渐缩短。造模3天左右,小鼠饮食减少,大便稀软,被毛蓬松无光泽,体重无明显增加甚至有下降。C组、D组、E组、F组小鼠每日给酒给药后,醉酒症状较轻,活动减少,反应尚灵敏,被毛整齐,体重递增,各组小鼠无死亡。
3.2血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)的活性检测
见表1。
表1刺五加叶提取物对酒精性肝损伤小鼠血清ALT活性的影响
Figure BSA00000674281700051
统计正常、阳性对照、阴性对照及2个实验组受试小鼠的ALT值,经过方差分析及多重比较结果显示:阴性对照组ALT值最高,且与其他处理组之间具有显著性差异(P<0.01),因此可以说明本次造模达到酒精致肝损伤的目的。
同时,与阴性对照组比较,各处理组均对酒精性肝损伤小鼠ALT活性具有显著性降低的作用。高剂量组的ALT活性具有显著性降低的作用(P<0.01,P<0.05)。
3.3肝组织匀浆MDA的检测
见表2。
表2刺五加叶提取物对酒精性肝损伤小鼠肝组织匀浆中的MDA活性的影响
Figure BSA00000674281700052
统计正常、阴性对照、阳性对照、低剂量、高剂量五个实验小组的受试小鼠的MDA值,经过方差分析及多重比较得出:阴性对照组与其他组比较均具有显著性差异,且MDA含量最高(P<0.001),因此说明本实验造模成功。
高、低两个实验组与阴性对照组比较其MDA含量具有显著性差异,因此说明刺五加叶水煎液可以有效降低酒精性肝损伤小鼠MDA含量(P<0.01,P<0.05)。实验结果表明,刺五加叶水煎液对酒精性肝损伤小鼠具有明显的保护作用。

Claims (2)

1.一种对酒精性肝损伤具有保护作用的刺五加叶提取物,其特征在于该提取物的制备包括以下过程:
步骤(1):称取刺五加叶干燥粗粉,加入以粗粉重量为8-10倍量的水浸泡8h-10h,煎煮1.5h-2h,煎煮后真空抽滤,收集滤液;
步骤(2):将步骤(1)中的刺五加叶干燥粗粉的滤渣再加水煎煮1h-1.5h,然后超声1h-1.5h,温度为30℃,功率为80W,真空抽滤,收集滤液;
步骤(3):将步骤(1)和(2)中的滤液合并,将滤液浓缩至浸膏状,烘干浸膏,粉碎,得到刺五加叶提取物。
2.如权利要求1中所述的一种对酒精性肝损伤具有保护作用的刺五加叶提取物的用途,其特征在于该提取物用于制备对酒精性肝损伤具有保护作用的药物制剂。
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