CN102781460A - 肌肉萎缩防止剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种肌肉萎缩防止剂,其对肌肉萎缩具有优异的防止效果,并包括乳清蛋白水解物。具体公开了一种包括乳清蛋白水解物的肌肉萎缩防止剂,其中所述乳清蛋白水解物具有10kDa以下的分子量分布(其中主峰出现在200Da至3kDa),2至8的APL(平均肽链长度),相对于全部成分总量的20%以下的游离氨基酸含量,20%以上的支链氨基酸含量,以及β-乳球蛋白抗原性的1/100,000以下的抗原性。
Description
技术领域
本发明涉及包括显示低苦味、优异的稳定性和优异的安全性的乳清蛋白水解物作为活性成分的肌肉萎缩防止剂。
本发明还涉及包括显示低苦味、优异的稳定性和优异的安全性的乳清蛋白水解物作为活性成分的肌肉萎缩防止食品、肌肉萎缩防止饮品、肌肉萎缩防止营养组合物和肌肉萎缩防止饲料。
肌肉萎缩防止剂对于防止老龄化期间的肌肉萎缩(即,肌肉质量的降低)是有效的,并显示低苦味、优异的稳定性和优异的安全性。
背景技术
长期不活动或失重状态引发生物体的各种生理变化(如,骨骼肌萎缩、体重减轻和骨脱钙)。例如,用于治疗骨折等的长期石膏固定(cast immobilization)状态或长期卧床不起的状态与健康个体相比引发肌肉质量的显著降低。已知,在太空长期停留后返回地球的宇航员由于肌肉质量的降低而无法站立。还已知在老龄化期间由于运动量或营养摄取降低而发生肌肉质量的降低,以致发生骨骼肌萎缩。为了解决上述问题,已进行了如下尝试:使用膳食成分(特别是蛋白质和氨基酸营养物)能够防止骨骼肌萎缩或从骨骼肌萎缩中及早恢复。例如,非专利文献1公开了使用大豆蛋白作为膳食蛋白来源来降低由于长期失重状态所造成的骨骼肌萎缩的效果,并表明通过摄取大豆蛋白抑制了腹肌质量的降低。
非专利文献2涉及为了防止老龄化期间肌肉萎缩的发展而应当摄取的蛋白质的数量和质量。
牛乳或乳制品通常被认为是食物过敏的原因。特别地,在人母乳中不包含的乳清蛋白被认为充当变应原。例如专利文献2公开了通过用蛋白酶水解乳清蛋白来降低乳清蛋白的变应原性的方法。
通过抑制ELISA(参见非专利文献3)证实,通过专利文献3中公开的方法所生产的乳清蛋白水解物具有等于或小于β-乳球蛋白和乳清蛋白抗原性的1/10,000的抗原性。
证实乳清蛋白水解物经口服给药具有脂肪累积抑制效果。因此,乳清蛋白水解物作为具有低变应原性和高功能性的材料而引起注意。
相关技术文献
专利文献
专利文献1:JP-A-2-002319
专利文献2:JP-A-2-138991
专利文献3:WO2008/111562
非专利文献
非专利文献1:Tada等,Soy Protein Research,Vol.2,pp.112-117(1999)
非专利文献2:Paddon-Jones等,Am J.Clin.Nutr.,87,pp.1562S-6S(2008)
非专利文献3:Japanese Journal of Pediatric Allergy andClinical Immunology,1,36(1987)
发明内容
发明要解决的问题
大豆肽具有肌肉萎缩防止效果。然而,由于大豆肽具有独特的苦味,并且当大豆肽在水中分散时会产生混浊,因此大豆肽可能不会用于期望的食品或饮品等。特别地,大豆肽不能用于需要透明性的产品。包含在牛乳中的乳清蛋白与大豆蛋白相比具有高含量的支链氨基酸(其参与肌肉合成),并具有高蛋白质净利用率(net protein utilization)。因此,期望乳清蛋白具有类似于或高于大豆肽的肌肉萎缩防止效果。然而,还未系统地报道乳清蛋白或乳清肽(即,乳清蛋白水解物)的摄取对防止肌肉萎缩的效果。由于通过将包含在牛乳中的乳清蛋白水解所获得的乳清蛋白水解物具有低抗原性和低苦味,并且不沉淀,因此可将乳清蛋白水解物适当地添加到食品或饮品中。然而,未报道乳清蛋白水解物具有肌肉萎缩防止效果。
鉴于上述情况构思了本发明。本发明的目的为提供无苦味、混浊和沉淀并具有肌肉萎缩防止效果的肌肉萎缩防止剂。
用于解决问题的方案
本发明的发明人进行了锐意研究并发现,通过水解包含在牛乳中的乳清蛋白所获得的乳清蛋白水解物具有高肌肉萎缩防止效果。该发现导致本发明的完成。
具体地,本发明提供以下肌肉萎缩防止剂,以及包括所述肌肉萎缩防止剂的以下肌肉萎缩防止食品、肌肉萎缩防止饮品和肌肉萎缩防止饲料。
[1]一种肌肉萎缩防止剂,其包括乳清蛋白水解物作为活性成分,所述乳清蛋白水解物具有(1)10kDa以下的范围内的并具有200Da至3kDa的主峰的分子量分布,(2)2至8的平均肽链长度(APL),(3)20%以下的游离氨基酸含量,(4)20%以上的支链氨基酸含量,和(5)等于或小于β-乳球蛋白抗原性的1/100,000的抗原性。
[2]根据[1]所述的肌肉萎缩防止剂,其中所述乳清蛋白水解物通过进行以下步骤来获得:在pH 6至10和温度50至70℃下用耐热性蛋白酶将乳清蛋白水解并热变性的水解步骤,和通过加热使所述蛋白酶失活的失活步骤。
[3]根据[1]所述的肌肉萎缩防止剂,其中所述乳清蛋白水解物通过进行以下步骤来获得:在pH 6至10和温度20至55℃下用蛋白酶将乳清蛋白水解的初步水解步骤,在pH 6至10和温度50至70℃下用耐热性蛋白酶将未水解的乳清蛋白水解并热变性的水解步骤,和通过加热使所述蛋白酶失活的失活步骤。
[4]根据[1]所述的肌肉萎缩防止剂,其中所述乳清蛋白水解物通过进行以下步骤来获得:在pH 6至10和温度20至55℃下用蛋白酶将乳清蛋白水解的初步水解步骤,在pH 6至10和温度50至70℃下用耐热性蛋白酶将未水解的乳清蛋白水解并热变性的水解步骤,通过加热使所述蛋白酶失活的失活步骤,用具有截留分子量1至20kDa的超滤膜过滤由所述失活步骤获得的反应溶液以获得滤液的超滤步骤,和用具有截留分子量100至500kDa的微滤膜过滤所述滤液的微滤步骤。
[5]一种肌肉萎缩防止食品、肌肉萎缩防止饮品、肌肉萎缩防止营养组合物或肌肉萎缩防止饲料,其包括根据[1]至[4]任一项所述的肌肉萎缩防止剂。
[6]一种生产肌肉萎缩防止剂的方法,其包括在pH 6至10和温度50至70℃下用耐热性蛋白酶将乳清蛋白水解并热变性的水解步骤,和通过加热使所述蛋白酶失活的失活步骤。
[7]根据[6]所述的方法,其进一步包括,在所述水解步骤前,在pH 6至10和温度20至55℃下用蛋白酶将乳清蛋白水解的初步水解步骤。
[8]根据[6]或[7]所述的方法,其进一步包括,在所述失活步骤后,用具有截留分子量1至20kDa的超滤膜过滤由所述失活步骤获得的反应溶液以获得滤液的超滤步骤,和用具有截留分子量100至500Da的微滤膜过滤所述滤液以获得滞留物(retentate)的微滤步骤。
[9]一种肌肉萎缩防止方法,其包括将乳清蛋白水解物以10g/天以上的量给药,所述乳清蛋白水解物具有(1)10kDa以下的范围内的并具有200Da至3kDa的主峰的分子量分布,(2)2至8的平均肽链长度(APL),(3)20%以下的游离氨基酸含量,(4)20%以上的支链氨基酸含量,和(5)等于或小于β-乳球蛋白抗原性的1/100,000的抗原性。
发明的效果
根据本发明的一个方面的肌肉萎缩防止剂显示显著的肌肉萎缩防止效果。
具体实施方式
以下详细描述本发明。
活性成分
用作根据本发明的一个实施方案的肌肉萎缩防止剂的活性成分的乳清蛋白水解物具有(1)10kDa以下的范围内的并具有200Da至3kDa的主峰的分子量分布,(2)2至8的平均肽链长度(APL),(3)20%以下的游离氨基酸含量,(4)20%以上的支链氨基酸含量,和(5)等于或小于β-乳球蛋白抗原性的1/100,000的抗原性。
由于乳清蛋白水解物具有等于或小于β-乳球蛋白和乳清蛋白抗原性的1/100,000的抗原性,因此乳清蛋白水解物在抑制食物过敏方面是极其安全的。乳清蛋白水解物的水溶液是透明的,并具有约2的苦味。因此,乳清蛋白水解物在风味(口感)和外观方面不限制肌肉萎缩防止剂。特别地,大量乳清蛋白水解物甚至可存在于特别期望透明性的肌肉萎缩防止剂中。可通过用超滤(UF)膜或微滤(MF)膜过滤乳清蛋白水解物来改进乳清蛋白水解物的水溶性。
可将该肌肉萎缩防止剂用作具有上述肌肉萎缩防止效果且非常安全的肌肉萎缩防止食品、肌肉萎缩防止饮品、肌肉萎缩防止营养组合物或肌肉萎缩防止饲料的活性成分。
由于使用乳清蛋白作为原料生产根据本发明的一个实施方案的肌肉萎缩防止剂,因此可容易且经济地生产肌肉萎缩防止剂。
生产方法
通过以下步骤获得包括在根据本发明的一个实施方案的肌肉萎缩防止剂中的乳清蛋白水解物:在pH 6至10和温度50至70℃下用耐热性蛋白酶将乳清蛋白水解并热变性,并通过加热使所述蛋白酶失活。可通过在pH 6至10和温度20至55℃下用蛋白酶将乳清蛋白初步水解,然后在未冷却乳清蛋白的上述条件下,立即将乳清蛋白水解来改进乳清蛋白水解物的收率。
肌肉萎缩防止效果可通过以下步骤进一步改进:用具有截留分子量1至20kDa(优选2至10kDa)的超滤(UF)膜和/或具有截留分子量100至500Da(优选150至300Da)的微滤(MF)膜浓缩如上所述制备的乳清蛋白水解物。由此获得的乳清蛋白水解物显示较低苦味和改进的透明性。
本文所使用的术语“乳清蛋白”是指哺乳动物(例如,牛、水牛、山羊或人)的乳清,其聚集体、粉末或纯化蛋白质。当用蛋白酶将乳清蛋白水解时,乳清蛋白以水溶液的状态使用。
将乳清蛋白水溶液的pH调整为6至10。因为乳清蛋白水溶液通常具有上述范围内的pH,因此通常不需要调整乳清蛋白水溶液的pH。当必须调整乳清蛋白水溶液的pH时,使用酸(例如,盐酸、柠檬酸或乳酸)或碱(例如,苛性钠、氢氧化钙或磷酸钠)的溶液将乳清蛋白水溶液的pH调整为6至10。将乳清蛋白水溶液加热到50至70℃。优选在加热乳清蛋白水溶液前添加耐热性蛋白酶,以便在加热期间也发生水解(即,改善收率)。
普通蛋白酶的最佳温度为40℃以下,耐热性蛋白酶的最佳温度为45℃以上。可使用任意耐热性蛋白酶,只要该耐热性蛋白酶具有45℃以上的最佳温度即可。此耐热性蛋白酶的实例包括木瓜蛋白酶、蛋白酶S(商标名称)、Proleather(商标名称)、Thermoase(商标名称)、Alcalase(商标名称)和Protin A(商标名称)等。优选使用当在80℃下加热30分钟时还具有10%以上剩余活性的耐热性蛋白酶。组合使用多种蛋白酶更加有效。反应时间优选约30分钟至约10小时。
然后加热反应溶液以使蛋白酶失活。可通过在100℃以上加热反应溶液10秒以上来使蛋白酶失活。
蛋白酶失活后,离心反应溶液。然后收集上清液并干燥,从而获得粉末产物。因为由离心所形成的沉淀与上清液相比,其低变应原性处于较低水平,因此优选除去沉淀。注意,只要不存在抗原性问题,则可干燥并直接使用反应溶液。
已证实当通过抑制ELISA法测定时,通过所述方法获得的乳清蛋白水解物具有等于或小于β-乳球蛋白和乳清蛋白抗原性的1/100,000的抗原性。因此,乳清蛋白水解物极其安全。乳清蛋白水解物的水溶液是透明的,并具有约2的苦味。因此,乳清蛋白水解物很少引起有关风味(口感)和外观的问题。注意,通过以下方法评价乳清蛋白水解物的透明性和苦味。
透明性的评价方法:制备1%乳清蛋白水解物溶液并测量650nm下的吸光度。
苦味的评价方法:制备10%乳清蛋白水解溶液,并使用盐酸奎宁(苦味物)评价溶液的苦味。具有2以下苦味(参见表1)的乳清蛋白水解物可用于食品或饮品等。
可通过HPLC等测量乳清蛋白水解物的APL。
表1
用法
根据本发明的一个实施方案的乳清蛋白水解物可直接用作肌肉萎缩防止剂,或可使用常规方法制成粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂或饮剂(drinkable prepareation)等。用超滤(UF)膜或微滤(MF)膜获得的乳清蛋白水解物可直接用作肌肉萎缩防止剂,或可干燥后使用。还可使用常规方法将乳清蛋白水解物制成药物等。
可将制成药物等的乳清蛋白水解物添加到营养制剂、食品或饮品(例如,酸奶、乳类饮料或薄饼(wafer))、饲料或补充剂等。
肌肉萎缩防止食品、肌肉萎缩防止饮品、肌肉萎缩防止营养组合物或肌肉萎缩防止饲料中的乳清蛋白水解物的含量不特别限制,但优选使成人可以以10g/天以上、优选20g/天以上的量摄取乳清蛋白水解物来确定。
用作活性成分的乳清蛋白水解物可与适当的佐剂混合,并成形为任意口服制剂(肌肉萎缩防止剂)。
可将根据本发明的一个实施方案的肌肉萎缩防止剂施用给任何人,但优选施用给中年人(30岁以上)、老年人、长期处于不活动状态(例如,长期石膏固定状态或长期卧床不起的状态)的人群以及在太空停留的人群。
以下通过实施例和比较例进一步解释本发明。注意本发明不受以下实施例限制。
实施例1
向1L 10%乳清蛋白水溶液中添加木瓜蛋白酶(50U/g·乳清蛋白)和Proleather(由Amano Enzyme Inc.制造)(150U/g·乳清蛋白)。将混合物的pH调整到8后,在55℃下将乳清蛋白水解变性6小时。在100℃下加热反应溶液15秒以上使蛋白酶失活。然后离心反应溶液,收集上清液并干燥以获得乳清蛋白水解物(实施例1产物)。
乳清蛋白水解物(实施例1产物)具有10kDa以下的范围内并具有1.3kDa的主峰的分子量分布,APL为7.2,游离氨基酸含量为18.9%。
乳清蛋白水解物(实施例1产物)具有等于或小于β-乳球蛋白抗原性的1/100,000的抗原性(抑制ELISA法测定)。收率(即,上清液干重与原料干重的比(%))为80.3%。苦味为2。
由此获得的乳清蛋白水解物(实施例1产物)可直接用作根据本发明的一个实施方案的肌肉萎缩防止剂。
实施例2
向1L 10%乳清蛋白水溶液中添加木瓜蛋白酶(50U/g·乳清蛋白)和Proleather(150U/g·乳清蛋白)。将混合物的pH调整到8后,在50℃下将乳清蛋白水解3小时。将该混合物加热至55℃,在55℃下将乳清蛋白水解并变性3小时。接下来,在100℃下加热混合物15秒以上使蛋白酶失活。通过具有截留分子量10kDa的UF膜(由STC制造)和具有截留分子量300Da的MF膜(由STC制造)过滤反应溶液,从而收集浓缩液级分。然后干燥该级分以获得乳清蛋白水解物(实施例2产物)。
乳清蛋白水解物(实施例2产物)具有10kDa以下的范围内并具有500Da的主峰的分子量分布,APL为3.0,游离氨基酸含量为15.2%。
乳清蛋白水解物(实施例2产物)具有等于或小于β-乳球蛋白抗原性的1/100,000的抗原性(抑制ELISA法测定)。收率为65.4%。苦味为2。由此获得的乳清蛋白水解物(实施例2产物)可直接用作根据本发明的一个实施方案的肌肉萎缩防止剂。
比较例1
将120g乳清蛋白溶解于1800ml的纯水中,用1M苛性钠溶液将该溶液的pH调整为7.0。在60℃下将该溶液灭菌10分钟,并保持在45℃。在添加20g Amano A(由Amano Enzyme Inc.制造)后,使混合物反应2小时。然后在80℃下将混合物加热10分钟从而使蛋白酶失活,并冷冻干燥,从而获得乳清蛋白水解物(比较例1产物)。乳清蛋白水解物的水解率为18%,收率为80.6%。
比较例2
将120g乳清蛋白溶解于1800ml的纯水中,用1M苛性钠溶液将该溶液的pH调整为7.0。在60℃下将该溶液灭菌10分钟,并保持在45℃。在添加20g Amano A(由Amano Enzyme Inc.制造)后,使混合物反应8小时。然后在80℃下将混合物加热10分钟从而使蛋白酶失活,并冷冻干燥,从而获得乳清蛋白水解物。乳清蛋白水解物的水解率为30%,收率为80.6%。
试验例1
透明性试验
制备实施例1和2以及比较例1和2中所获得的各乳清蛋白水解物的1%水溶液,并测量650nm下的吸光度。结果示于表2。
表2
由此证实,实施例1和2中获得的乳清蛋白水解物具有低吸光度(即,高透明性)。与实施例1和2中所获得的乳清蛋白水解物相比,比较例1和2中所获得的乳清蛋白水解物具有高吸光度(即,低透明性)。与实施例1中所获得的乳清蛋白水解物相比,进行膜处理的实施例2中所获得的乳清蛋白水解物具有低吸光度(即,高透明性)。
试验例2
肌肉萎缩防止试验
将购自Japan SLC Inc.的SAM-P雌性大鼠(20周大)分成五组,使各组的重量相等(n=6至10,144±6.8g)。
用AIN93标准食物或其中用未水解乳清蛋白(WPC)、实施例1中所获得的乳清蛋白水解物、实施例2中所获得的乳清蛋白水解物或比较例1中所获得的乳清蛋白水解物代替酪蛋白的AIN93标准食物随意喂养大鼠。每2至3天测量食物摄取量。
在将各组大鼠饲养到45周大后,在用戊巴比妥钠(50mg/kg)麻醉下取出趾长伸肌(EDL)、胫骨前肌(TA)、比目鱼肌(SOL)和腓肠肌(GAS),并测量肌肉质量。基于大鼠重量的相对肌肉质量的测量结果示于表3。
表3
a观察到与实施例产物的显著差异(p<0.05)。
b观察到与实施例产物的显著差异(p<0.05)。
c观察到与实施例产物的显著差异(p<0.05)。
与用实施例1中所获得的乳清蛋白水解物喂养的组和用实施例2中所获得乳清蛋白水解物喂养的组相比,基于大鼠重量的胫骨前肌的相对质量在标准食物组和乳清蛋白组中显著降低。与用实施例1中所获得的乳清蛋白水解物喂养的组和用实施例2中所获得乳清蛋白水解物喂养的组相比,趾长伸肌、比目鱼肌和腓肠肌的相对质量在标准食物组和乳清蛋白组中趋于降低。与用实施例1中所获得的乳清蛋白水解物喂养的组和用实施例2中所获得乳清蛋白水解物喂养的组相比,基于大鼠重量的相对肌肉质量在标准食物组、乳清蛋白组和用比较例1中所获得的乳清蛋白水解物饲养的组中显著降低。与用实施例1中所获得的乳清蛋白水解物喂养的组和用实施例2中所获得乳清蛋白水解物喂养的组相比,趾长伸肌、比目鱼肌和腓肠肌的相对质量在标准食物组、乳清蛋白组和用比较例1中所获得的乳清蛋白水解物饲养的组中趋于降低。具体地,由于SAM-P雌性大鼠为衰老促进鼠,因此在老龄化期间发生肌肉萎缩并且当用标准食物喂养时肌肉质量降低。另一方面,在用实施例1中所获得的乳清蛋白水解物喂养的组和用实施例2中所获得乳清蛋白水解物喂养的组中,肌肉萎缩(即,肌肉质量降低)受到抑制。上述结果阐明,根据本发明的一个实施方案的肌肉萎缩防止剂显示优异的肌肉萎缩防止效果。
实施例3
肌肉萎缩防止片剂的生产
以表4中所示的比例混合原料。通过常规方法成形并制锭1g混合物,从而生产根据本发明的一个实施方案的肌肉萎缩防止片剂。
表4
实施例4
肌肉萎缩防止营养组合物的生产
将500g实施例2产物溶于4500g去离子水中。将溶液加热到50℃,并使用TK-均质混合器(由PRIMIX Corporation制造的“TKROBO MICS”)在6000rpm下搅拌30分钟,从而获得溶液A。将5.0kg酪蛋白、5.0kg大豆蛋白、1.0kg鱼油、3.0kg紫苏子油、18.0kg糊精、6.0kg矿物混合物、1.95kg维生素混合物、2.0kg乳化剂、4.0kg稳定剂和0.05kg香料添加到5.0kg溶液A中,将混合物装入蒸煮袋(200ml)。然后使用杀菌釜(retort sterilizer)(第一型压力容器;“RCS-4CRTGN”,由Hisaka Works,Ltd.制造)在121℃下灭菌20分钟,从而产生50kg根据本发明的一个实施方案的肌肉萎缩防止营养组合物。
实施例5
肌肉萎缩防止饮品的生产
将30g脱脂奶粉溶于670g去离子水中,并在溶液中溶解10g实施例1产物。将所得溶液加热到50℃,并使用超分散机(“ULTRA-TURRAX T-25”,由IKA Japan制造)在9500rpm下搅拌30分钟。在添加100g麦芽糖醇、2g酸化剂、20g还原淀粉糖浆、2g香料和166g去离子水后,将混合物装入玻璃瓶(100ml)。在90℃下灭菌15分钟后,将瓶密封,由此获得10瓶(100ml)根据本发明的一个实施方案的肌肉萎缩防止饮品。
Claims (9)
1.一种肌肉萎缩防止剂,其包括乳清蛋白水解物作为活性成分,所述乳清蛋白水解物具有(1)10kDa以下的范围内的并具有200Da至3kDa的主峰的分子量分布,(2)2至8的平均肽链长度(APL),(3)20%以下的游离氨基酸含量,(4)20%以上的支链氨基酸含量,和(5)等于或小于β-乳球蛋白抗原性的1/100,000的抗原性。
2.根据权利要求1所述的肌肉萎缩防止剂,其中所述乳清蛋白水解物通过进行以下步骤来获得:在pH 6至10和温度50至70℃下用耐热性蛋白酶将乳清蛋白水解并热变性的水解步骤,和通过加热使所述蛋白酶失活的失活步骤。
3.根据权利要求1所述的肌肉萎缩防止剂,其中所述乳清蛋白水解物通过进行以下步骤来获得:在pH 6至10和温度20至55℃下用蛋白酶将乳清蛋白水解的初步水解步骤,在pH 6至10和温度50至70℃下用耐热性蛋白酶将未水解的乳清蛋白水解并热变性的水解步骤,和通过加热使所述蛋白酶失活的失活步骤。
4.根据权利要求1所述的肌肉萎缩防止剂,其中所述乳清蛋白水解物通过进行以下步骤来获得:在pH 6至10和温度20至55℃下用蛋白酶将乳清蛋白水解的初步水解步骤,在pH 6至10和温度50至70℃下用耐热性蛋白酶将未水解的乳清蛋白水解并热变性的水解步骤,通过加热使所述蛋白酶失活的失活步骤,用具有截留分子量1至20kDa的超滤膜过滤由所述失活步骤获得的反应溶液以获得滤液的超滤步骤,和用具有截留分子量100至500Da的微滤膜过滤所述滤液的微滤步骤。
5.一种肌肉萎缩防止食品、肌肉萎缩防止饮品、肌肉萎缩防止营养组合物或肌肉萎缩防止饲料,其包括根据权利要求1至4任一项所述的肌肉萎缩防止剂。
6.一种生产肌肉萎缩防止剂的方法,其包括在pH 6至10和温度50至70℃下用耐热性蛋白酶将乳清蛋白水解并热变性的水解步骤,和通过加热使所述蛋白酶失活的失活步骤。
7.根据权利要求6所述的方法,其进一步包括,在所述水解步骤前,在pH 6至10和温度20至55℃下用蛋白酶将乳清蛋白水解的初步水解步骤。
8.根据权利要求6或7所述的方法,其进一步包括,在所述失活步骤后,用具有截留分子量1至20kDa的超滤膜过滤由所述失活步骤获得的反应溶液以获得滤液的超滤步骤,和用具有截留分子量100至500Da的微滤膜过滤所述滤液以获得滞留物的微滤步骤。
9.一种肌肉萎缩防止方法,其包括将乳清蛋白水解物以10g/天以上的量给药,所述乳清蛋白水解物具有(1)10kDa以下的范围内的并具有200Da至3kDa的主峰的分子量分布,(2)2至8的平均肽链长度(APL),(3)20%以下的游离氨基酸含量,(4)20%以上的支链氨基酸含量,和(5)等于或小于β-乳球蛋白抗原性的1/100,000的抗原性。
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