发明内容
本发明的目的在于用超临界二氧化碳萃取去除脑组织中脂类,再酶解生产水解脑蛋白粉;另一个目的是用萃取出的膏状物生产脑磷脂的工业化生产方法,
其发明内容简介如下:
(1)干燥 将新鲜或冷冻的动物脑去除脑膜和血管,压碎,在45℃真空条件下干燥至含水分5%以下,得动物脑干燥品,保存于-5℃下备用;
(2)去脂类 把动物脑干燥品装入超临界二氧化碳萃取机的萃取釜中,萃取条件为:萃取釜压力18~42Mpa,温度35~62℃;分离釜Ⅰ压力10~25Mpa,温度30~48℃;分离釜Ⅱ压力4~15Mpa,温度40~55℃;夹带剂为60%~98%乙醇,用量为脑干燥品的5%~60%,萃取时间0.5~6小时;二氧化碳流量20~80立升/公斤/小时;分离柱填料:颗粒活性碳、硅胶、氧化铝,以吸附腥臭气味;萃取结束后,分离釜Ⅰ中膏状物含脑磷脂类和胆固醇,用于提取脑磷脂;分离釜Ⅱ中为三酸甘油脂类,去掉;萃取釜中残留物含有脑蛋白,用于酶解生产脑蛋白水解粉;在2小时内没用完者,应密封保存于-5℃下备用;
(3)酶解 将萃取釜中残留物置于水解罐中,加纯化水2~8倍, 加入动物蛋白专用水解酶0.3~0.8 %,在一定pH条件下,以40℃~80℃下搅拌酶解3小时,加入风味酶0.08~0.2 %,继续水解3小时;灭酶,加入活性炭脱色除臭,板框压滤除去固体杂质,0.45μm微孔滤膜精滤,得精滤液;
(4)大孔树脂柱吸附 精滤液通过大孔树脂柱分离出脑蛋白水解液,阴树脂和阳树脂脱盐;(5)真空薄膜浓缩过柱后的脑蛋白水解液,喷雾干燥得到脑蛋白水解粉;
(6)取分离釜Ⅰ中含脑磷脂类和胆固醇的膏状物,在真空中干燥,得含脑磷脂和胆固醇的稠膏;
(7)提取脑磷脂 取稠膏加丙酮,用量为稠膏体积3.0~10倍,分三次萃取出胆固醇和油脂类,萃取液与母液分别回收丙酮,丙酮可重复使用;胆固醇和油脂类丢弃;在玻璃柱中装入100份层析用硅胶,另取5.0~10份硅胶与回收丙酮后等量含脑磷脂的母液相混合,将混合物加于硅胶柱上部,接着用含量95%热乙醇,流速3份/分钟,洗脱;收集脑磷脂乙醇液,真空回收乙醇得脑磷脂,含量≥90%,加氮气密闭保存。
实施案例是为了举例说明生产操作规程,不是限制。
实施案例1:
将新鲜或冷冻的动物脑去除脑膜和血管,挤压通过6目筛,平铺于真空干燥箱烘盘上,在真空度为-0.08 Mpa、温度 45℃,干燥至含水分3%以下,得干燥品,保存于-5℃备用;
将干燥的动物脑粉粒,分批装入HA221-40-100型超临界CO2萃取设备的萃取釜中,以萃取釜压力32.5 Mpa,温度41℃;分离釜Ⅰ压力18 Mpa,温度45℃;分离釜Ⅱ压力6Mpa,温度48℃;夹带剂为95%乙醇,用量为脑干燥品的20 %;萃取时间2小时;二氧化碳流量60立升/公斤/小时;取出萃取釜中残留物,用于酶解生产水解脑蛋白粉,取出萃取釜Ⅰ中膏状物,用于提取脑磷脂。萃取釜Ⅱ中膏状物可以去掉;
秤取萃取釜中残留物100公斤,加纯化水3倍,加入动物蛋白水解专用酶,用量0.5 %,开动搅拌机拌均匀,用20 %氢氧化钠调节pH为7.5,温度 65℃±1℃,搅拌酶解3小时;加入风味酶0.16%,在上述pH值和温度条件下继续水解3小时;升温到90℃,灭酶20分钟; 降温到45℃,加活性炭4%,搅拌25分钟,再静置吸附30分钟;板框压滤除去固体杂质,压力0.12Mpa,反复循环直至滤液澄清,经0.45μm微孔滤膜精滤,得精滤液;
按说明书预处理大孔树脂HPD-200型,取经处理的HPD-200型大孔树脂70公斤装入玻璃柱;取精滤液过柱,流速2BV/h,当流出1BV时收集过柱液;加完精滤液后以4BV纯化水洗脱精滤液,过柱液与洗脱液合并,经预处理好的阴树脂201×4FC,阳树脂001×4脱盐;收集脱盐液,供浓缩、干燥;
以含0.3 %的盐酸纯化水,洗涤大孔树脂HPD-200,再用纯化水洗至流出液的Ph值为5.0~6.5;接着以含0.4%的氢氧化钠纯化水洗涤大孔树脂,再用纯水洗直至Ph值为7.0~7.5;以1%硫酸铜在碱性条件下检测不到双缩脲反应为止;所述的大孔树脂可以再重复使用;阴树脂201×4FC,阳树脂001×4分别以2.1~5%的氢氧化钠水溶液,3.0~4.5%的盐酸再生;
真空薄膜浓缩脱盐液,真空薄膜浓缩条件为:全程控制在65℃以下,真空度为-0.09Mpa;浓缩后溶液含固量22~25%;浓缩液喷雾干燥,喷雾干燥条件:喷嘴入口温度170℃;出料口温度50~70℃,得脑蛋白水解粉5公斤;
取出分离釜Ⅰ中含脑磷脂类和胆固醇的膏状物,在真空中干燥,真空度为-0.08 Mpa,温度62℃,干燥4小时,得稠膏;
用4倍体积丙酮,分三次萃取稠膏中胆固醇和油脂类,萃取液与母液分别回收丙酮, 丢弃萃取液回收丙酮后得到的胆固醇和油脂类;在玻璃柱中装入100份层析用硅胶;另取6份硅胶与回收丙酮后等量的母液混合,将混合物加于硅胶柱上部,接着用95%热乙醇6倍, 温度75℃,流速3份/分钟,洗脱硅胶柱,收集脑磷脂乙醇液,真空回收乙醇,真空度为-0.06 Mpa,温度60℃,直到馏出液没有乙醇味为此;膏状物为脑磷脂,含量≥90%,充氮气密封保存。
实施案例2:
将新鲜或冷冻的动物脑去除脑膜和血管,挤压通过6目筛,平铺于真空干燥箱烘盘上,在真空度为-0.08 Mpa、温度 45℃,干燥至含水分3%以下,得干燥品,保存于-5℃备用;
将干燥的动物脑粉粒,分批装入HA221-40-100型超临界CO2萃取设备的萃取釜中,以萃取釜压力31.5 Mpa,温度40℃;分离釜Ⅰ压力20 Mpa,温度46℃;分离釜Ⅱ压力5Mpa,温度48℃;夹带剂为95%乙醇,用量为脑干燥品的25 %;萃取时间2小时;二氧化碳流量60立升/公斤/小时;取出萃取釜中残留物,用于酶解生产水解脑蛋白粉,取出萃取釜Ⅰ中膏状物,用于提取脑磷脂;萃取釜Ⅱ中膏状物可以去掉;
秤取萃取釜中残留物100公斤,加纯化水3倍,加入动物蛋白水解专用酶,用量0.6%,开动搅拌机拌均匀,用20 %氢氧化钠调节pH为7.5,温度 65℃±1℃,搅拌酶解3.5小时;加入风味酶0.15%,在上述pH值和温度条件下继续水解2.5小时;升温到90℃,灭酶20分钟; 降温到45℃,加活性炭3%,搅拌20分钟,再静置吸附30分钟;板框压滤除去固体杂质,压力0.15Mpa,反复循环直至滤液澄清,经0.45μm微孔滤膜精滤,得精滤液;
按说明书预处理大孔树脂HPD-100型,取经处理的HPD-100型大孔树脂70公斤装入玻璃柱;取精滤液过柱,流速2BV/h,当流出0.7BV时收集过柱液;加完精滤液后以4BV纯化水洗脱精滤液,过柱液与洗脱液合并,经预处理好的阴树脂201×4FC,阳树脂001×4脱盐;收集脱盐液,供浓缩、干燥;
以含0.3 %的盐酸纯化水,洗涤大孔树脂HPD-100,再用纯化水洗至流出液的Ph值为5.0~6.5;接着以含0.4%的氢氧化钠纯化水洗涤大孔树脂,再用纯水洗直至Ph值为7.0~7.5;以1%硫酸铜在碱性条件下检测不到双缩脲反应为止;所述的大孔树脂可以再重复使用;阴树脂201×4FC,阳树脂001×4分别以2.1~5%的氢氧化钠水溶液,3.0~4.5%的盐酸再生;
真空薄膜浓缩脱盐液,真空薄膜浓缩条件为:全程控制在65℃以下,真空度为-0.09Mpa;浓缩后溶液含固量22~25%;浓缩液喷雾干燥,喷雾干燥条件:喷嘴入口温度175℃;出料口温度50~70℃,得脑蛋白水解粉5.8公斤;
取出分离釜Ⅰ中含脑磷脂类和胆固醇的膏状物,在真空中干燥,真空度为-0.08 Mpa,温度65℃,干燥4小时,得稠膏;
用4倍体积丙酮,分三次萃取稠膏中胆固醇和油脂类,萃取液与母液分别回收丙酮,丢弃萃取液回收丙酮后得到的胆固醇和油脂类;在玻璃柱中装入100份层析用硅胶;另取6份硅胶与回收丙酮后等量的母液混合,将混合物加于硅胶柱上部,接着用95%热乙醇6倍, 温度72℃,流速3份/分钟,洗脱硅胶柱,收集脑磷脂乙醇液,真空回收乙醇,真空度为-0.06 Mpa,温度60℃,直到馏出液没有乙醇味为此;膏状物为脑磷脂,含量≥90%,充氮气密封保存。
实施案例3:
将新鲜或冷冻的动物脑去除脑膜和血管,挤压通过6目筛,平铺于真空干燥箱烘盘上,在真空度为-0.08 Mpa、温度 45℃,干燥至含水分3%以下,得干燥品,保存于-5℃备用;
将干燥的动物脑粉粒,分批装入HA221-40-100型超临界CO2萃取设备的萃取釜中,以萃取釜压力32.0 Mpa,温度41℃;分离釜Ⅰ压力17 Mpa,温度46℃;分离釜Ⅱ压力5Mpa,温度48℃;夹带剂为95%乙醇,用量为脑干燥品的23%;萃取时间1.6小时;二氧化碳流量70立升/公斤/小时;取出萃取釜中残留物,用于酶解生产水解脑蛋白粉,取出萃取釜Ⅰ中膏状物,用于提取脑磷脂;萃取釜Ⅱ中膏状物可以去掉;
秤取萃取釜中残留物100公斤,加纯化水3倍,加入动物蛋白水解专用酶,用量0.6%,开动搅拌机拌均匀,用20 %氢氧化钠调节pH为7.5,温度 65℃±1℃,搅拌酶解4小时;加入风味酶0.17%,在上述pH值和温度条件下继续水解3小时;升温到90℃,灭酶20分钟; 降温到45℃,加活性炭3%,搅拌20分钟,再静置吸附30分钟;板框压滤除去固体杂质,压力0.15Mpa,反复循环直至滤液澄清,经0.45μm微孔滤膜精滤,得精滤液;
按说明书预处理大孔树脂HPD-300型,取经处理的HPD-300型大孔树脂75公斤装入玻璃柱;取精滤液过柱,流速2BV/h,当流出0.7BV时收集过柱液;加完精滤液后以4BV纯化水洗脱精滤液,过柱液与洗脱液合并,经预处理好的阴树脂201×4FC,阳树脂001×4脱盐;收集脱盐液,供浓缩、干燥;
以含0.3 %的盐酸纯化水,洗涤大孔树脂HPD-300,再用纯化水洗至流出液的Ph值为5.0~6.5;接着以含0.4%的氢氧化钠纯化水洗涤大孔树脂,再用纯水洗直至Ph值为7.0~7.5;以1%硫酸铜在碱性条件下检测不到双缩脲反应为止;所述的大孔树脂可以再重复使用;阴树脂201×4FC,阳树脂001×4分别以2.1~5%的氢氧化钠水溶液,3.0~4.5%的盐酸再生;
真空薄膜浓缩脱盐液,真空薄膜浓缩条件为:全程控制在60℃以下,真空度为-0.09Mpa;浓缩后溶液含固量25%;浓缩液喷雾干燥,喷雾干燥条件:喷嘴入口温度175℃;出料口温度50~70℃,得脑蛋白水解粉6.0公斤;
取出分离釜Ⅰ中含脑磷脂类和胆固醇的膏状物,在真空中干燥,真空度为-0.08 Mpa,温度65℃,干燥4小时,得稠膏;
用4倍体积丙酮,分三次萃取稠膏中胆固醇和油脂类,萃取液与母液分别回收丙酮,丢弃萃取液回收丙酮后得到的胆固醇和油脂类;在玻璃柱中装入100份层析用硅胶;另取6份硅胶与回收丙酮后等量的母液混合,将混合物加于硅胶柱上部,接着用95%热乙醇6倍, 温度70℃,流速3份/分钟,洗脱硅胶柱,收集脑磷脂乙醇液,真空回收乙醇,真空度为-0.06 Mpa,温度60℃,直到馏出液没有乙醇味为此;膏状物为脑磷脂,含量≥90%,充氮气密封保存;