CN102763687B - 一种大孔树脂富集纯化菊芋叶中总黄酮的方法 - Google Patents

Abstract

一种大孔树脂富集纯化菊芋叶中总黄酮的方法，包括下述工艺步骤：将菊芋叶洗净后低温烘干，用粉碎机粉碎，过孔径为4mm的筛子，加入原料重8-12倍的50-90%乙醇回流提取2-3次，每次提取1-2小时，滤过，合并提取液，对提取液进行减压浓缩回收乙醇，浓缩后以达到大孔树脂的上样浓度，即总黄酮浓度为1.5-3.6mg/mL，将溶液加入到大孔树脂柱中进行饱和吸附，最大上样量为1.5倍柱体积，先用5倍柱体积的水洗脱除去杂质，再用5倍柱体积的70%乙醇作为洗脱剂，对洗脱剂进行回收溶剂和浓缩处理，最后进行干燥，即得。用本发明方法获得的总黄酮提取物，纯化后含量可达80%以上。此发明是首次采用大孔树脂法富集纯化菊芋叶总黄酮工艺发明；此发明工艺简单，成本低，易操作，效率高，得到的提取物中总黄酮含量高，具有很好的开发利用价值。

Description

一种大孔树脂富集纯化菊芋叶中总黄酮的方法

技术领域

本发明涉及一种植物有效成分的制备方法，特别是涉及一种从菊芋叶中纯化总黄酮的方法。

背景技术

菊芋(Helianthus tuberosus L.)，俗名洋姜，是菊科向日葵属多年生草本植物。原产北美洲，十七世纪传入欧洲，后传入中国。它分布广，适应性强，极易种植，产量颇高，成本低廉。其块茎可用于发酵产乙醇，也可水解生产高果糖浆，其叶片提取物具有良好的杀菌活性，可用于开发植物源抑菌剂。

黄酮类化合物是植物中普遍存在的次生代谢物，具有多种有益的生理效应和药理作用。研究发现黄酮类化合物具有保护心血管系统、护肝、抗肿瘤、抗病毒、抗消化性溃疡、镇痛、止咳、平喘等重要的药用价值，也可用作食品、化妆品的天然添加剂，还具有清除自由基、抗氧化等生物活性，应用价值广泛，市场开发潜力很大。目前国内外主要是从银杏叶、大豆、山楂叶、荷叶、芹菜叶、水芹、花生壳等中提取黄酮类化合物，其中尤其以银杏和大豆的研究最为深入。但是，对菊芋叶中黄酮类物质的研究却鲜见报道。

大孔吸附树脂是一类不含交换基团并且具有大孔结构的高分子吸附树脂，孔径和比表面积都比较大。与凝胶树脂及天然吸附剂相比，大孔吸附树脂具有吸附容量大、吸附速度快、选择性好、易于解吸附、机械强度高、再生处理简便等优点，尤其适合于从水溶液中分离低极性或非极性的化合物，近年来广泛应用于中草药有效成分的提取、分离纯化工作中。

本发明以菊芋叶为原料，采用大孔树脂法富集纯化其中的主要成分黄酮类化合物，使纯化后的提取物中该类成分含量达到80%以上，为菊芋资源的综合开发利用奠定基础。

发明内容

解决的技术问题：本发明的目的是提供一种工艺简单，成本低，纯化后提取物中总黄酮含量高的大孔树脂富集纯化和检测菊芋叶总黄酮的方法。

技术方案：一种大孔树脂富集纯化菊芋叶总黄酮的方法，包括下述工艺步骤：（1）取粉碎的菊芋叶，加入菊芋叶重8-12倍的提取试剂回流提取2-3次，所述提取试剂为体积分数50-90%乙醇，每次提取1-2小时，滤过，合并提取液；（2）将步骤（1）得到的提取液浓缩到总黄酮质量浓度1.5-3.6mg/mL，调浓缩液pH至5-6，选用D101大孔树脂，用浓缩液上样，上样流速1.0mL/min，最大上样量为1.5倍柱体积，上样完成后先水洗，然后用乙醇洗脱，乙醇体积分数为70%，洗脱流速为2.0mL/min；（3）收集乙醇洗脱液，蒸发浓缩，干燥，即为所需的目标组分。

本发明提供的大孔树脂富集纯化菊芋叶总黄酮的方法，步骤（2）中提取液浓缩物为透明状棕黄色液体。

本发明提供的大孔树脂富集纯化菊芋叶总黄酮的方法，获得纯化的菊芋叶总黄酮质量含量＞80%。

有益效果：本发明所提供的纯化方法与现有技术相比，具有如下优点和积极效果：

首次研究了采用大孔树脂法提取富集纯化菊芋叶总黄酮。本发明工艺简单，成本低，易操作，效率高，以D101大孔吸附树脂为吸附剂，上样液流速为1.0mL/min，上样液浓度为1.5-3.6mg/mL，pH值为5~6时，有最佳的吸附效果；当洗脱液为70%乙醇，洗脱液流速为2mL/min，洗脱液用量为5BV时，有最佳的解析效果。纯化后的提取物中总黄酮含量超过80%，具有进一步开发利用的价值。

附图说明

图1为本发明技术方案提取的菊芋叶总黄酮提取物。

具体实施方式：

以下列举实例对本发明的上述内容作更具体和详细的说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实例。

实施例1：

将烘干的菊芋叶用粉碎机粉碎，过孔径为4mm的筛子，得粒径小于4mm的粉末，加入原料重量8倍的50%vt的乙醇对粉碎后的原料回流提取3次，每次提取2小时，滤过，合并滤液，对过滤后的提取液减压浓缩回收乙醇，检测浓缩浓度至大孔树脂上样浓度，即总黄酮质量浓度1.5mg/mL，提取液浓缩物为透明状棕黄色液体，调浓缩液pH至5-6，将溶液加入到D101大孔树脂柱中进行饱和吸附，上样流速1.0mL/min，最大上样量为1.5倍柱体积，先用5倍柱体积的水洗脱除去杂质，再用5倍柱体积的70%乙醇作为洗脱剂，对洗脱剂进行回收溶剂和浓缩处理，最后进行干燥，获得纯化的菊芋叶总黄酮质量含量达82%。提取物总黄酮质量含量测定如下：

1）芦丁标准溶液制备及标准曲线绘制

称取芦丁对照品12.35mg，用70%甲醇（体积分数）溶解，转入50mL量瓶中，用70%甲醇定容，配成0.247mg/mL的芦丁对照品溶液。分别吸取对照品溶液0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL于50mL容量瓶中，各加水至25mL；加入5%wt NaNO₂溶液2mL，摇匀；加入10%wt Al(NO₃)₃溶液2mL，摇匀，放置6min；加入4%wt NaOH溶液10mL，用70%vt甲醇定容，摇匀。以第一管为空白，于510nm下检测吸光值。以吸光值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。用最小二乘法作线性回归，其回归方程为：A=8.369C+0.008（r²=0.9972）。

2）总黄酮含量的测定

称取10mg提取物置于50mL容量瓶中，按上述芦丁标准曲线绘制方法配制溶液，并以试剂空白为参比液调零，510nm测取其吸光度。通过标准曲线计算提取液中的总黄酮含量，总黄酮含量为：

$Y/\%=\frac{C\×V\×D\×{10}^{-3}}{m}\×100$

式中：Y为提取物总黄酮质量含量；C为由标准曲线计算得出的待测试液的总黄酮质量浓度（mg/mL）；V为待测试液的体积（mL）；D为待测试液的稀释倍数；m为提取物质量（g）。

实施例2：

将烘干的菊芋叶用粉碎机粉碎，过孔径为4mm的筛子，得粒径小于4mm的粉末，加入原料重量10倍的70%的乙醇对粉碎后的原料回流提取3次，每次提取2小时，滤过，合并滤液，对过滤后的提取液减压浓缩回收乙醇，检测浓缩浓度至大孔树脂上样浓度，即总黄酮质量浓度2.4mg/mL，提取液浓缩物为透明状棕黄色液体，调浓缩液pH至5-6，将溶液加入到D101大孔树脂柱中进行饱和吸附，上样流速1.0mL/min，最大上样量为1.5倍柱体积，先用5倍柱体积的水洗脱除去杂质，再用5倍柱体积的70%乙醇作为洗脱剂，对洗脱剂进行回收溶剂和浓缩处理，最后进行干燥，获得纯化的菊芋叶总黄酮质量含量达84%。提取物总黄酮质量含量测定方法如实施例1。

实施例3：

将烘干的菊芋叶用粉碎机粉碎，过孔径为4mm的筛子，得粒径小于4mm的粉末，加入原料重量12倍的90%的乙醇对粉碎后的原料回流提取3次，每次提取2小时，滤过，合并滤液，对过滤后的提取液减压浓缩回收乙醇，检测浓缩浓度至大孔树脂上样浓度，即总黄酮质量浓度3.6mg/mL，提取液浓缩物为透明状棕黄色液体，调浓缩液pH至5-6，将溶液加入到D101大孔树脂柱中进行饱和吸附，上样流速1.0mL/min，最大上样量为1.5倍柱体积，先用5倍柱体积的水洗脱除去杂质，再用5倍柱体积的70%乙醇作为洗脱剂，对洗脱剂进行回收溶剂和浓缩处理，最后进行干燥，获得纯化的菊芋叶总黄酮质量含量达87%。提取物总黄酮质量含量测定方法如实施例1。

Claims (1)

1.一种大孔树脂富集纯化菊芋叶总黄酮的方法，其特征在于，包括下述工艺步骤：将烘干的菊芋叶用粉碎机粉碎，过孔径为4mm的筛子，得粒径小于4mm的粉末，加入原料重量12倍的90%的乙醇对粉碎后的原料回流提取3次，每次提取2小时，滤过，合并滤液，对过滤后的提取液减压浓缩回收乙醇，检测浓缩浓度至大孔树脂上样浓度，所述上样浓度为总黄酮质量浓度3.6 mg/mL，提取液浓缩物为透明状棕黄色液体，调浓缩液pH至5-6，将溶液加入到D101大孔树脂柱中进行饱和吸附，上样流速1.0 mL/min，最大上样量为1.5倍柱体积，先用5倍柱体积的水洗脱除去杂质，再用5倍柱体积的70%乙醇作为洗脱剂，对洗脱剂进行回收溶剂和浓缩处理，最后进行干燥，获得纯化的菊芋叶总黄酮质量含量达87%。

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