CN103070899B - 一种蒲公英总黄酮的分离纯化方法 - Google Patents
一种蒲公英总黄酮的分离纯化方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开一种蒲公英总黄酮的分离纯化方法，该方法为：将蒲公英全草粉碎成粗粉，加15倍量85％的甲醇回流提取120分钟，滤过；滤液，回收甲醇，浓缩至3波美，用体积比1∶1的盐酸∶水将浓缩液pH值调至2.5，放置20分钟，滤过；滤液上广谱型大孔树脂吸附柱，收集洗脱液，回收甲醇，浓缩干燥得总黄酮半成品；将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱，并以体积比3∶1的丙酮∶甲醇洗杂质，继用体积比7∶1的丙酮∶甲醇洗脱，收集洗脱液；将所收集到的总黄酮洗脱液进行精制得蒲公英总黄酮成品，其含量在96％以上。本发明方法的最大特点是利用大孔吸附树脂‑硅胶层析耦合方便快捷、原料来源丰富、生产成本低廉、分离效果明显、提取纯度高。
Description
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种蒲公英总黄酮的分离纯化方法，特别是涉及种利用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合法富集纯化蒲公英总黄酮的方法。
背景技术：
蒲公英又称尿床草，为菊科植物蒲公英Toraxacum mongolicum Hand.Mazz.、碱地蒲公英Toraxacum borealisinense Kitam。或同属数种植物的干燥全草。全草入药，开花前连根采集，洗净，晒干。蒲公英含有多种活性成分，如蒲公英甾醇、蒲公英苦素、黄酮类、咖啡酸、绿原酸和多糖等。
蒲公英总黄酮具有清热解毒、消肿散结、利尿通淋功能，用于乳痈、瘰疬、疗疮、肿毒、咽痛、肺痈、肠痈、目赤、湿热黄疸、热淋涩痛，是国家颁布的药食两用品种之一。近年来，随着药品和保健食品的发展，蒲公英提取物的需求越来越大。对于蒲公英总黄酮的研究越来越多，李喜凤，郝哲，杜云峰。蒲公英中总黄酮提取工艺的研究。时珍国医国药，2009，20(7)：1695，1696对蒲公英总黄酮的提取工艺做了系统的研究。公开号为CN10198218IA的专利申请，其公开了一种蒲公英提取物的制备方法，产品含量高达90％以上，但该提取分离工艺，树脂前处理试剂消耗较大，后期精制中的色谱成本较高，整体经济效益远不如本专利涉及的分离纯化方法。
发明内容
本发明目的在于提供一种蒲公英总黄酮的分离纯化方法；本发明目的还在于提供一种方便快捷、原料来源丰富、生产成本低廉、分离效果明显、提取纯度高的利用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合法富集纯化蒲公英总黄酮的方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的。
本发明蒲公英总黄酮的分离纯化方法包括如下步骤：
将蒲公英全草粉碎成粗粉，加入粗粉质量15～20倍量的85％～100％甲醇回流提取120～180分钟，滤过；滤液回收甲醇后浓缩至3～5波美得浓缩液，然后用体积比1∶1的盐酸∶水溶液将浓缩液pH值调至2.5～3，放置20～40分钟后滤过；滤液上HPD400、HPD100、DM-130或AB-8广谱型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5％～20％的甲醇洗杂质，然后用50％～80％的甲醇洗脱，得总黄酮半成品洗脱液，总黄酮半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得总黄酮半成品；将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱，并用丙酮甲醇的体积比为1～3∶1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮∶甲醇的体积比为5～7∶1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得总黄酮洗脱液；将总黄酮洗脱液进行精制得蒲公英总黄酮，其含量在96％以上。
本发明蒲公英总黄酮的分离纯化方法包括如下步骤：
称取粉碎成粗粉的蒲公英全草，加入粗粉质量20倍量的85％甲醇回流提取180分钟，滤过；滤液回收甲醇后浓缩至5波美得浓缩液，然后用体积比1∶1的盐酸∶水溶液将浓缩液pH值调至3，放置40分钟后滤过；滤液上HPD400型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5％的甲醇洗杂质，然后用50％的甲醇洗脱，得总黄酮半成品洗脱液，总黄酮半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得总黄酮半成品；将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱，并用丙酮∶甲醇的体积比为1∶1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮∶甲醇的体积比为5∶1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得总黄酮洗脱液；将总黄酮洗脱液进行精制得蒲公英总黄酮。
所述大孔树脂吸附步骤采用湿法装柱，保留液面，将调pH值后的滤液通过吸附柱，流速每分钟0.05ml/g树脂。
所述硅胶层析步骤采用湿法装柱，保留液面，将半成品按重量1∶1拌活化后硅胶，并将拌好的混合物至于硅胶柱上方，洗脱流速每分钟0.1ml/g硅胶。硅胶活化条件为，110摄氏度30分钟。
本发明中采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制。按4g/100ml洗脱液加入针剂活性炭，25～40摄氏度搅拌20～40分钟，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体；中间体用7～9倍甲醇40摄氏度热溶，滤过；滤液放凉析出晶体，抽滤得蒲公英总黄酮成品。
本发明中精制过程包括如下步骤：
按4g/100ml洗脱液加入针剂活性炭，25摄氏度搅拌40分钟，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体；中间体用9倍甲醇40摄氏度热溶，滤过；滤液放凉析出晶体，抽滤得蒲公英总黄酮成品。
本发明中精制过程中成品用7倍甲醇重结晶，过滤母液，回收甲醇，浓缩干燥得总黄酮半成品。
本发明应用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合法富集纯化蒲公英总黄酮，对蒲公英总黄酮的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量45％以上的总黄酮半成品和含量96％以上的总黄酮终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。
本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附总黄酮，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
本发明选用硅胶层析法纯化并结合活性炭与重结晶精制，分离效果更佳。
具体实施方式：
实施例1：
称取蒲公英全草10kg，粉碎成粗粉，加18倍量90％的甲醇回流提取140分钟，滤过；滤液，回收甲醇，浓缩至4波美，用体积比1∶1的盐酸∶水溶液将浓缩液pH值调至2.8，放置40分钟，滤过；滤液上HPD100型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用15％的甲醇洗杂质，然后用70％的甲醇洗脱，得总黄酮半成品洗脱液，总黄酮半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得总黄酮半成品；将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱，并用丙酮∶甲醇的体积比为2∶1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮∶甲醇的体积比为6∶1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得总黄酮洗脱液2L；加入80g针剂活性炭，30摄氏度搅拌30分钟，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体35g；中间体用8倍甲醇40摄氏度热溶，滤过；滤液放凉析出晶体，抽滤得蒲公英总黄酮成品20g，含量98％。
实施例2：
称取蒲公英全草15kg，粉碎成粗粉，加20倍量95％的甲醇回流提取160分钟，滤过；滤液，回收甲醇，浓缩至5波美，用体积比1∶1的盐酸∶水溶液将浓缩液pH值调至3，放置40分钟，滤过；滤液上HPD400型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用10％的甲醇洗杂质，然后用60％的甲醇洗脱，得总黄酮半成品洗脱液，总黄酮半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得总黄酮半成品；将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱，并用丙酮∶甲醇的体积比为1∶1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮∶甲醇的体积比为7∶1的丙醇与甲醇混合物洗脱，得总黄酮洗脱液3.5L；加入140g针剂活性炭，40摄氏度搅拌40分钟，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体60g；中间体用9倍甲醇40摄氏度热溶，滤过；滤液放凉析出晶体，抽滤得蒲公英总黄酮成品32g，含量96.3％。
实施例3：
称取蒲公英全草20kg，粉碎成粗粉，加15倍量87％的甲醇回流提取120分钟，滤过；滤液，回收甲醇，浓缩至3波美，用体积比1∶1的盐酸∶水溶液将浓缩液pH值调至2.5，放置40分钟，滤过；滤液上AB-8型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5％的甲醇洗杂质，然后用80％的甲醇洗脱，得总黄酮半成品洗脱液，总黄酮半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得总黄酮半成品；将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱，并用丙酮∶甲醇的体积比为3∶1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮∶甲醇的体积比为5∶1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得总黄酮洗脱液5L；加入200g针剂活性炭，25摄氏度搅拌20分钟，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体70g；中间体用8倍甲醇40摄氏度热溶，滤过；滤液放凉析出晶体，抽滤得蒲公英总黄酮成品36g，含量97.5％。
实施例4：
称取蒲公英全草5kg，粉碎成粗粉，加20倍量98％的甲醇回流提取160分钟，滤过；滤液，回收甲醇，浓缩至3波美，用体积比1∶1的盐酸∶水溶液将浓缩液pH值调至2.6，放置40分钟，滤过；滤液上DM-130型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5％的甲醇洗杂质，然后用50％的甲醇洗脱，得总黄酮半成品洗脱液，总黄酮半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得总黄酮半成品；将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱，并用丙酮甲醇的体积比为1∶1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮∶甲醇的体积比为7∶1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得总黄酮洗脱液1200ml；加入48g针剂活性炭，40摄氏度搅拌25分钟，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体20g；中间体用7倍甲醇40摄氏度热溶，滤过；滤液放凉析出晶体，抽滤得蒲公英总黄酮成品12g，含量98.2％。
Claims (7)
1.一种蒲公英总黄酮的分离纯化方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
将蒲公英全草粉碎成粗粉，加入粗粉质量15～20倍量的85％～100％甲醇回流提取120～180分钟，滤过；滤液回收甲醇后浓缩至3～5波美的浓缩液，然后用体积比1：1的盐酸：水溶液将浓缩液pH值调至2.5～3，放置20～40分钟后滤过；滤液上HPD400、HPD100、DM-130或AB-8广谱型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5％～20％的甲醇洗杂质，然后用50％～80％的甲醇洗脱，得总黄酮半成品洗脱液，总黄酮半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得总黄酮半成品；将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱，并用丙酮:甲醇的体积比为1～3:1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮:甲醇的体积比为5～7:1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得总黄酮洗脱液；将总黄酮洗脱液进行精制得蒲公英总黄酮。
2.如权利要求1所述的蒲公英总黄酮的分离纯化方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
称取粉碎成粗粉的蒲公英全草，加入粗粉质量20倍量的85％甲醇回流提取180分钟，滤过；滤液回收甲醇后浓缩至5波美的浓缩液，然后用体积比1：1的盐酸：水溶液将浓缩液pH值调至3，放置40分钟后滤过；滤液上HPD400型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5％的甲醇洗杂质，然后用50％的甲醇洗脱，得总黄酮半成品洗脱液，总黄酮半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得总黄酮半成品；将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱，并用丙酮:甲醇的体积比为1:1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮:甲醇的体积比为5:1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得总黄酮洗脱液；将总黄酮洗脱液进行精制得蒲公英总黄酮。
3.如权利要求1或2所述的蒲公英总黄酮的分离纯化方法，其特征在于，该方法中所述大孔树脂吸附步骤采用湿法装柱，保留液面，将调pH值后的滤液通过吸附柱，流速每分钟0.05mL/g树脂。
4.如权利要求1或2所述的蒲公英总黄酮的分离纯化方法，其特征在于该方法中所述硅胶层析步骤采用湿法装柱，保留液面，将半成品按重量1：1拌活化后硅胶，并将拌好的混合物至于硅胶柱上方，洗脱流速每分钟0.1mL/g硅胶，硅胶活化条件为，110摄氏度30分钟。
5.如权利要求1或2所述的蒲公英总黄酮的分离纯化方法，其特征在于，该方法中采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制，按4g/100mL总黄酮洗脱液加入针剂活性炭，25～40摄氏度搅拌20～40分钟，滤过；滤液回收混合试剂后浓缩干燥得中间体；中间体用7～9倍甲醇40摄氏度热溶，滤过：滤液放凉析出晶体，抽滤得蒲公英总黄酮成品。
6.如权利要求5所述的蒲公英总黄酮的分离纯化方法，其特征在于，该方法中精制过程包括如下步骤：
按4g/100mL洗脱液加入针剂活性炭，25摄氏度搅拌40分钟，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体；中间体用9倍甲醇40摄氏度热溶，滤过：滤液放凉析出晶体，抽滤得蒲公英总黄酮成品。
7.如权利要求6所述的蒲公英总黄酮的分离纯化方法，其特征在于，该方法中成品用7倍甲醇重结晶，过滤母液，回收甲醇，浓缩干燥得总黄酮半成品。
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