CN102702343A - 一种固相合成替莫瑞林的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种固相合成替莫瑞林的方法，主要解决现有合成方法存在的反应时间长、原料贵的技术问题。本发明以RinkAmideAM树脂或RinkAmide MBHA树脂为起始原料，依次连接具有Fmoc保护基团的氨基酸和反式己烯酸，合成得到侧链全保护的替莫瑞林的树脂，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得替莫瑞林粗肽，并经C18或C4柱进行分离纯化，再经冷冻干燥得到产品。本发明的方法具有工艺稳定，原辅材料来源方便，反应操作简单，后处理容易，收率高，成本低，生产气味小等特点。
Description
技术领域
本发明涉及替莫瑞林的制备方法，尤其涉及固相多肽合成替莫瑞林的制备方法。
背景技术
中文名：替莫瑞林或醋酸替莫瑞林。商品名：Egrifta 。英文名：tesamorelin。结构式：trans-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2；分子式：C221H366N72067S1，分子量：5135.9。
艾滋病是严重威胁世界人民健康的公共卫生问题，1983年，人类首次发现HIV。目前，艾滋病已经从一种致死性疾病变为一种可控的慢性病。我国艾滋病患者也逐年增加。艾滋病药物的副作用已经不是什么秘密，药物所产生的副作用就是脂肪代谢障碍。脂肪代谢障碍表现为脂肪重新分布，一种形式为脂肪流失，就是通常所讲的肌肉萎缩。特别容易发生肌肉萎缩的部位有脸、胳膊、腿和屁股。另一种形式为脂肪堆积，容易发生脂肪堆积的部位有后颈部、胸部和肚子。通常脂肪代谢障碍可导致背部和颈部疼痛，同时也可引起头痛和呼吸困难。 Egrifta是FDA批准的首个脂肪代谢障碍治疗药物，属于人生长激素释放因子（GRF）类药物。Egrifta是通过诱导内源性生长激素(GH)的释放来发挥作用。采用Egrifta治疗可刺激GH分泌和增加血清胰岛素样生长因子I(IGF-I)的水平。
中国药物化学杂志第21卷，第三期，2011年6月总101期上报道，替莫瑞林的合成采用Fmoc固相合成法:以Fmoc-Pal-PEG树脂做为固相合成树脂，用Bop/HoBt作为缩合剂，将N 端被Fmoc 保护的氨基酸和( E) -3-己烯酸反应连接到树脂的支臂上，形成多肽链，这种合成方法反应时间长，Fmoc-Pal-PEG树脂来源稀缺，价格贵，该方法限制了替莫瑞林的大规模生产和使用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高收率，低成本，反应原料简单易得，有利用实现产业化的替莫瑞林的固相合成工艺，主要解决现有合成方法存在的反应时间长、原料贵的技术问题。
本发明的技术方案：一种固相合成替莫瑞林的方法，包括如下步骤：
以Rink Amide AM树脂或Rink Amide MBHA树脂为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有Fmoc保护基团的氨基酸和反式己烯酸，合成得到侧链全保护的替莫瑞林的树脂，其间依次脱去Fmoc保护基团，用Bop/HoBt、HBTU∕HoBt、TBTU/HoBt、DIC/HoBt、HATU/HoBt、PyBop/HoBt、HCTU/HoBt、PyAop/HoBt、TATU/HoBt、Bop/HoAt、HBTU∕HoAt、TBTU/HoAt、DIC/HoAt/、HATU/HoAt、PyBop/HoAt、HCTU/HoAt、PyAop/HoAt或TATU/HoAt中的任何一种为缩合剂，进行偶联反应，得保护的替莫瑞林的树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得替莫瑞林粗肽，用C18或C4柱进行分离纯化，经冷冻干燥得到产品。
本发明中一些常用的缩写具有以下含义：
Rink Amide AM：林克氨甲基
Rink Amide MBHA：林克4-甲苯氢胺
Fmoc：芴甲氧羰基
Bop：卡特缩合剂
HOBt：1－羟基苯骈三唑
HBTU：苯并三唑-1-四甲基六氟磷酸酯
TBTU: 苯并三氮唑-N,N,N’,N’四甲基脲六氟磷酸酯
DIC：N,N'-二异丙基碳二亚胺
HATU：O-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯
PyBop: (苯并三唑-1-氧)三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐
HCTU: 6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯
PyAop: （3H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-3氧基）三-1-吡咯烷基鏻六氟磷酸盐
TATU: O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸盐
HOAt：1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑
DIC：N,N-二异丙基碳化二亚胺
NMP：N-甲基吡咯烷酮
DCM：二氯甲烷
NMM：N-甲基吗啡啉
PIP：哌啶
Trans: 反式己烯酸
Tyr:脯氨酸
Tbu:叔丁氧基
Ala:丙氨酸
Asp:天冬氨酸
otbu:叔丁酯基
Ile:异亮氨酸
Phe：苯丙氨酸
Thr：苏氨酸
Asn：天冬酰胺
Ser：丝氨酸
Arg：精氨酸
Pbf：2,2,4,6,7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基
Lys：赖氨酸
Boc：叔丁氧羰基
Val：缬氨酸
Leu：亮氨酸
Gly：苷氨酸
Gln：谷氨酰胺
Trt：三苯甲基
Met：蛋氨酸
Glu：谷氨酸
Fmoc-Leu-OH：芴甲氧羰基亮氨酸
Fmoc-Ala-OH：芴甲氧羰基丙氨酸
Fmoc-Arg(bpf)-OH：芴甲氧羰基（2,2,4,6,7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基）精氨酸
Fmoc-Gly-OH：芴甲氧羰基苷氨酸
Fmoc-Glu(otbu)-OH：芴甲氧羰基叔丁酯基谷氨酸
Fmoc-Gln(Trt)-OH：芴甲氧羰基三苯甲基谷氨酰胺
Fmoc-Asn(Trt)-OH：芴甲氧羰基三苯甲基天冬酰胺
Fmoc-Ser(tbu)-OH：芴甲氧羰基叔丁氧基丝氨酸
Fmoc-Met-OH：芴甲氧羰基蛋氨酸
Fmoc-Ile-OH：芴甲氧羰基异亮氨酸
Fmoc-Asp（otbu）-OH：芴甲氧羰基叔丁酯基天冬氨酸
Fmoc-Lys(Boc)-OH：芴甲氧羰基叔丁氧羰基赖氨酸
Fmoc-Val-OH：芴甲氧羰基缬氨酸
Fmoc-Tyr(tbu)-OH：芴甲氧羰基叔丁氧基脯氨酸
Fmoc-Phe-OH：芴甲氧羰基苯丙氨酸
Fmoc-Thr(tbu)-OH：芴甲氧羰基叔丁氧基苏氨酸。
按照本发明，优选的依次连接具有Fmoc保护基团的氨基酸和反式己烯酸，合成得到侧链全保护的替莫瑞林的树脂，依次包括如下步骤：
（1）将Rink Amide AM树脂或Rink Amide MBHA树脂用DCM浸泡10-40分钟，使树脂溶胀，树脂的重量体积浓度为6-15ml/g；
（2）在上述的树脂中加入脱保护试剂，进行脱保护反应，然后树脂用NMP、DCM依次洗涤，抽干，加入用溶剂溶解的具有Fmoc保护基团的氨基酸，用Bop/HoBt、HBTU∕HoBt、TBTU/HoBt、DIC/HoBt、HATU/HoBt、PyBop/HoBt、HCTU/HoBt、PyAop/HoBt或TATU/HoBt中任何一种混合物作为缩合剂进行偶联反应，抽干，分别用NMP、甲醇、DCM洗涤，抽干，然后再加入脱保护试剂，脱保护反应，再加入用溶剂溶解的具有Fmoc保护基团的氨基酸，如此反复，最后与反式己烯酸反应，获得trans-Tyr(tbu)-Ala-Asp(otbu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile-Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln（Trt）-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser（tbu）-Asn(Trt)-Gln（Trt）-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg(pbf)-Ala-Arg(pbf)-Leu-Rink Amide AM 树脂。
所说的具有Fmoc保护基团的氨基酸，依次包括:
（1）Fmoc-Leu-OH、(2)Fmoc-Arg(pbf)-OH、(3)Fmoc-Ala-OH、(4)Fmoc-Arg(bpf)-OH、(5)Fmoc-Ala-OH、(6)Fmoc-Gly-OH、(7)Fmoc-Arg(pbf)-OH、(8)Fmoc-Glu(otbu)-OH、(9)Fmoc-Gln(Trt)-OH、(10)Fmoc-Asn(Trt)-OH、(11)Fmoc-Ser(tbu)-OH、(12)Fmoc-Glu(otbu)-OH、(13)Fmoc-Gly-OH、（14）Fmoc-Gln(Trt)-OH、（15）Fmoc-Gln(Trt)-OH、（16）Fmoc-Arg(pbf)-OH、（17）Fmoc-Ser(tbu)-OH、（18）Fmoc-Met-OH、（19）Fmoc-Ile-OH、（20）Fmoc-Asp（otbu）-OH、（21）Fmoc-Gln(Trt)-OH、（22）Fmoc-Leu-OH、（23）Fmoc-Leu-OH、（24）Fmoc-Lys(Boc)-OH、（25）Fmoc-Arg(pbf)-OH、（26）Fmoc-Ala-OH、（27）Fmoc-Ser(tbu)-OH、（28）Fmoc-Leu-OH、（29）Fmoc-Gln(Trt)-OH、（30）Fmoc-Gly-OH、(31)Fmoc-Leu-OH、(32)Fmoc-Val-OH、(33)Fmoc-Lys(Boc)-OH、(34)Fmoc-Arg(pbf)-OH、（35）Fmoc-Tyr(tbu)-OH、（36）Fmoc-Ser(tbu)-OH、（37）Fmoc-Asn(Trt)-OH、（38）Fmoc-Thr(tbu)-OH、（39）Fmoc-Phe-OH、（40）Fmoc-Ile-OH、（41）Fmoc-Ala-OH、（42）Fmoc-Asp(otbu)-OH、（43）Fmoc-Ala-OH、（44）Fmoc-Tyr(tbu)-OH。
所述的Fmoc保护基通过哌啶处理来去除去。脱保护试剂的组分和体积比为：PIP:NMP=1:3-6,脱保护试剂的体积与树脂的重量比例为5-16ml/g，即每克树脂加入5-16ml脱保护试剂。
所述的偶联反应，偶联试剂的组分和体积比为：NMM:NMP=1:6-20。偶联试剂的体积与树脂的重量比例为5-16ml/g。
所需具有Fmoc保护基团的氨基酸的摩尔数为树脂的3-6倍。Bop、HBTU、TBTU、DIC、HATU、PyBop、HCTU、PyAop或TATU的摩尔数为树脂的3-6倍；HoBt的摩尔数为树脂的3-6倍。
所述氨基酸偶联与脱保护过程中每一步都经过凯撒试验（Kaiser Test）检测。
脱保护反应温度为10-50℃，时间为10-30分钟。偶联反应温度为10-50℃，时间为30-120分钟。
同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得替莫瑞林的粗品，包括如下步骤：
将预冷至-2～-5℃的裂解试剂加入替莫瑞林侧链保护的树脂中，室温裂解反应2-5小时，过滤加入乙醚沉淀收集沉淀物，再用乙醚洗涤，室温置于干燥器内，真空干燥4-12小时，获得替莫瑞林的粗品；
所说的裂解试剂为：三氟乙酸、三异丙基硅烷、水和苯甲醚的混合液（体积比90:2.5:2.5:5）。
优选的替莫瑞林粗肽，用C18或C4柱进行分离纯化，经冷冻干燥得到替莫瑞林成品（MW: 5135.9）。总收率为9.8%（以替莫瑞林粗肽来计算）。
本发明的有益效果：替莫瑞林的合成工艺具有工艺稳定，原辅材料来源方便，反应操作简单，后处理容易，收率高，成本低，生产气味小，质量稳定，极具市场竞争力。采用裂解试剂三氟乙酸，三异丙基硅烷，水，苯甲醚的混合液进行裂解，加入乙醚沉淀粗品的方法，避免使用氟化氢等剧毒试剂，数废污染少，采用三异丙基硅烷避免使用1,2-乙二硫醇时产生的气味污染，采用C18或C4柱进行分离纯化，总收率约为9.8%。本发明采用Fmoc路线，每步脱Fmoc仅需用哌啶，裂解采用少量三氟乙酸，避免使用氟化氢，1,2乙二硫醇，大大减少了数废，有利于工业化生产。
具体实施方式
实施例1
实施例和前述过程中所采用的原料列表如下：
| NO | 原料及试剂品名 | 来源 |
| 1. | Rink Amide AM树脂 | 吉尔生化（上海）有限公司 |
| 2 | Rink Amide MBHA树脂 | 吉尔生化（上海）有限公司 |
| 3 | Fmoc-Tyr（tbu）-OH | 吉尔生化（上海）有限公司 |
| 4 | Fmoc-Ala-OH | 吉尔生化（上海）有限公司 |
| 5 | Fmoc-Asp(otbu)-OH | 吉尔生化（上海）有限公司 |
| 6 | Fmoc-Ile-OH | 吉尔生化（上海）有限公司 |
| 7 | Fmoc-Phe-OH | 吉尔生化（上海）有限公司 |
| 8 | Fmoc-Thr(tbu)-OH | 吉尔生化（上海）有限公司 |
| 9 | Fmoc-Asn(Trt)-OH | 吉尔生化（上海）有限公司 |
| 10 | Fmoc-Ser(tbu)-OH | 吉尔生化（上海）有限公司 |
| 11 | Fmoc-Arg(pbf)-OH | 吉尔生化（上海）有限公司 |
| 12 | Fmoc-Lys(Boc)-OH | 吉尔生化（上海）有限公司 |
| 13 | Fmoc-Val-OH | 吉尔生化（上海）有限公司 |
| 14 | Fmoc-Leu-OH | 吉尔生化（上海）有限公司 |
| 15 | Fmoc-Gly-OH | 吉尔生化（上海）有限公司 |
| 16 | Fmoc-Gln(Trt)-OH | 吉尔生化（上海）有限公司 |
| 17 | Fmoc-Met-OH | 吉尔生化（上海）有限公司 |
| 18 | Fmoc-Glu(otbu)-OH | 吉尔生化（上海）有限公司 |
| 19 | HoBt(1-羟基苯并三氮唑) | 常州湖滨医药原料有限公司 |
| 20 | HoAt(1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑) | 河南省强生生物技术开发有限公司 |
| 21 | HBTU（苯并三氮唑-N,N,N’,N’四甲基脲六氟磷酸酯） | 河南省强生生物技术开发有限公司 |
| 22 | TBTU(苯并三氮唑-N,N,N’,N’四甲基脲四氟硼酸酯) | 河南省强生生物技术开发有限公司 |
| 23 | Bop(卡特缩合剂) | 河南省强生生物技术开发有限公司 |
| 24 | HATU（O-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-N,N，N’,N’四甲基脲鎓六氟磷酸盐） | 河南省强生生物技术开发有限公司 |
| 25 | HCTU（6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯） | 河南省强生生物技术开发有限公司 |
| 26 | TATU[O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸盐] | 河南省强生生物技术开发有限公司 |
| 27 | PyBop[(苯并三唑-1-氧)三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐] | 河南省强生生物技术开发有限公司 |
| 28 | PyAop{（3H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-3氧基）三-1-吡咯烷基鏻六氟磷酸盐} | 河南省强生生物技术开发有限公司 |
| 29 | DIC(N,N-二异丙基碳化二亚胺) | 淄博天堂山化工有限公司 |
| 30 | 苯甲醚 | 浙江寿尔福医药原料有限公司 |
| 31 | TFA（三氟乙酸） | 上海荏苒商贸有限公司 |
| 32 | TIS(三异丙基硅烷) | 江苏维达药业有限公司 |
| 33 | NMM（N-甲基吗啡啉） | 上海力明工贸有限公司 |
| 34 | NMP（N-甲基吡咯烷酮） | 上海力明工贸有限公司 |
| 35 | 甲醇 | 上海力明工贸有限公司 |
| 36 | 哌啶 | 上海力明工贸有限公司 |
| 37 | DCM（二氯甲烷） | 上海力明工贸有限公司 |
| 38 | trans（反式己烯酸） | 梯希爱(上海)化成工业发展有限公司 |
实施例中：偶联试剂为:NMM:NMP=1:6，体积比。偶联试剂的体积与树脂的重量比例为5mg/g。脱保护试剂的组分和体积比为：PIP：NMP=1:3,脱保护试剂的体积与树脂的重量比例为5ml/g。
1)制备Fmoc-Leu-树脂：
称取Rink Amide MBHA树脂100g(100-200目，0.27mmol/g,27mmol)，装入多肽反应器中，用1200mlDCM浸泡40分钟，加入Fmoc-Leu-OH(MW:353.4,108mmol)38g，TBTU（MW:321.08,108mmol）35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30°C反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干。
2）制备Fmoc-Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤1）的Fmoc-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30°C下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Arg(pbf)-OH(MW:648.77,108mmol)70g, TBTU（MW:321.08,108mmol）35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Arg(pbf)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
3）制备Fmoc-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤2）的Fmoc-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Ala-OH(MW:311.34,108mmol)34g, TBTU（MW:321.08,108mmol）35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Ala-OH的摩尔数为树脂的4倍。
4)制备Fmoc-Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤3）的Fmoc-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Arg(pbf)-OH(MW:648.77,108mmol)70g, TBTU（MW:321.08,108mmol）35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Arg(pbf)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
5）制备Fmoc-Ala- Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤4)的Fmoc-Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Ala-OH(MW:311.34,108mmol)34g, TBTU（MW:321.08,108mmol）35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Ala- Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Ala-OH的摩尔数为树脂的4倍。
6）制备Fmoc-Gly- Ala- Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤5)的Fmoc-Ala- Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Gly-OH(MW:297.3,108mmol)32g,TBTU(MW:321.08,108mmol)35g,HoBt(MW:135.1,108mmol)15g,用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Gly- Ala- Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Gly-OH的摩尔数为树脂的4倍。
7)制备Fmoc-Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤6）的Fmoc-Gly- Ala- Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Arg(pbf)-OH(MW:648.77,108mmol)70g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。 Fmoc-Arg(pbf)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
8）Fmoc-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤7）的Fmoc-Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc- Glu(otbu)-OH(MW:425.5,108mmol)46g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc- Glu(otbu)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
9)制备Fmoc-Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：在步骤8）的Fmoc-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc- Gln(Trt)-OH(MW:610.7,108mmol)66g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Gln(Trt)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
10）制备Fmoc-Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤9）的Fmoc-Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc- Asn(Trt)-OH(MW:596.7,108mmol)65g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Asn(Trt)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
11)制备Fmoc-Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：在步骤10）的Fmoc-Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）--Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc- Ser(tbu)-OH(MW:383.4,108mmol)41g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc- Ser(tbu)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
12）制备Fmoc-Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤11）的Fmoc-Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入8 00ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc- Glu(otbu)-OH(MW:425.5,108mmol)46g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc- Glu(otbu)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
13）制备Fmoc-Gly- Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤12）的Fmoc-Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Gly-OH(MW:297.3,108mmol)32g, TBTU（MW:321.08,108mmol）35g,HoBt(MW:135.1,108mmol)15g,用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Gly- Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Gly-OH的摩尔数为树脂的4倍。
14)制备Fmoc-Gln(Trt)-Gly- Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤13）的Fmoc-Gly- Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc- Gln(Trt)-OH(MW:610.7,108mmol)66g, TBTU（MW:321.08,108mmol）35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Gln(Trt)-Gly- Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Gln(Trt)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
15)制备Fmoc-Gln(Trt)- Gln(Trt)-Gly- Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤14）的Fmoc-Gln(Trt)-Gly- Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc- Gln(Trt)-OH(MW:610.7,108mmol)66g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly- Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Gln(Trt)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
16）制备Fmoc-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly- Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。
在步骤15）的Fmoc-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc- Arg(pbf)-OH(MW: 648.77,108mmol)70g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly- Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Arg(pbf)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
17)制备Fmoc-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤16）的Fmoc-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Ser(tbu)-OH(MW: 383.4,108mmol)41g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly- Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Ser(tbu)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
18)制备Fmoc-Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤17）的Fmoc-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Met-OH(MW: 371.45,108mmol)40g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Met-OH的摩尔数为树脂的4倍。
19)制备Fmoc-Ile- Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤18）的Fmoc-Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Ile-OH(MW:353.4,108mmol)3g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g用800ml偶联试剂溶解，30℃反8应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Ile- -Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Ile-OH的摩尔数为树脂的4倍。
20)制备Fmoc-Asp(otbu)-Ile- -Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤19）的Fmoc-Ile- -Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc- Asp(otbu)-OH(MW:411.4,108mmol)44g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g,用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Asp(otbu)-Ile- -Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Asp(otbu)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
21)制备Fmoc-Gln(Trt)--Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤20）的Fmoc-Asp(otbu)-Ile- -Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc- Gln(Trt)-OH(MW:610.7,108mmol)66g,TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Gln(Trt)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
22）制备Fmoc-Leu- Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤21）的Fmoc-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc- Leu-OH(MW:353.4,108mmol)38g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g,用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Leu- Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Leu-OH的摩尔数为树脂的4倍。
23）制备Fmoc-Leu-Leu- Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤22）的Fmoc-Leu- -Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc- Leu-OH(MW:353.4,108mmol)38g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g,用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Leu-Leu- Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Leu-OH的摩尔数为树脂的4倍。
24）制备Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Leu- Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤23）的Fmoc-Leu-Leu- -Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc- Lys(Boc)-OH(MW:468.5,108mmol)50g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Leu- Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc- Lys(Boc)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
25)制备Fmoc-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu- Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤24）的Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)- Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)- Ser(tbu)- Asn(Trt)- Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc- Arg(pbf)-OH(MW: 648.77,108mmol)70g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu- Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Arg(pbf)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
26）制备Fmoc-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu- Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤25）的Fmoc-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)- Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Ala-OH(MW: 311.34,108mmol)34g,TBTU(MW:321.08,108mmol)35g,HoBt(MW:135.1,108mmol)15g,用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu- Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Ala-OH的摩尔数为树脂的4倍。
27)制备Fmoc-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu- Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤26）的Fmoc-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)- Glu(otbu)- Arg(pbf)- Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Ser(tbu)-OH(MW: 383.4,108mmol)41g,TBTU(MW:321.08,108mmol)35g,HoBt(MW:135.1,108mmol)15g,用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Ser(tbu)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
28)制备Fmoc-Leu- Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤27）的Fmoc-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Leu-OH(MW: 353.4,108mmol)38g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Leu-OH的摩尔数为树脂的4倍。
29)制备Fmoc-Gln(Trt)- Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)- Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤28）的Fmoc-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Gln(Trt)-OH(MW: 610.7,108mmol)66g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Gln(Trt)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
30）制备Fmoc-Gly- Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)- Gly- Ala- Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤29）的Fmoc Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Gly-OH(MW: 297.3,108mmol)32g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Gly-OH的摩尔数为树脂的4倍。
31)制备Fmoc-Leu- Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤30）的Fmoc-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Leu-OH(MW: 353.4,108mmol)38g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Leu -Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Leu-OH的摩尔数为树脂的4倍。
32)制备Fmoc-Val-Leu-Gly -Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤31）的Fmoc-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Val-OH(MW: 322.4,108mmol)35g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Val-OH的摩尔数为树脂的4倍。
33)制备Fmoc-Lys(Boc)- Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤32）的Fmoc-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Lys(Boc)-OH(MW: 468.5,108mmol)50g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
34)制备Fmoc-Arg(pbf)- Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤33）的Fmoc-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Arg(pbf)-OH(MW: 648.77,108mmol)70g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Arg(pbf)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
35)制备Fmoc-Tyr(tbu)- Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤34）的Fmoc-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Tyr(tbu)-OH(MW:459.5,108mmol)50g,TBTU(MW:321.08,108mmol)35g,HoBt(MW:135.1,108mmol)15g,用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Tyr(tbu)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
36)制备Fmoc-Ser(tbu)- Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤35）的Fmoc-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Ser(tbu)-OH(MW:383.4,108mmol)41g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Ser(tbu)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
37)制备Fmoc-Asn(Trt)- Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤36）的Fmoc-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Asn(Trt)-OH(MW: 596.7,108mmol)65g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Asn(Trt)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
38)制备Fmoc-Thr(tbu)- Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤37）的Fmoc-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Thr(tbu)-OH(MW: 397.5,108mmol)43g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g,用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Thr(tbu)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
39)制备Fmoc-Phe- Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤38）的Fmoc-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Phe-OH(MW: 386.4,108mmol)42g,TBTU(MW:321.08,108mmol)35g,HoBt(MW:135.1,108mmol)15g,用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Phe-OH的摩尔数为树脂的4倍。
40)制备Fmoc-Ile- Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤39）的Fmoc-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Ile-OH(MW: 353.4,108mmol)38g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Ile-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Ile-OH的摩尔数为树脂的4倍。
41)制-备Fmoc-Ala Ile-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤40）的Fmoc-Ile-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Ala-OH(MW: 311.34,108mmol)34g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Ala-Ile-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Ala-OH的摩尔数为树脂的4倍。
42)制备Fmoc-Asp(otbu)- Ala-Ile-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤41）的Fmoc-Ala-Ile-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Asp(otbu)-OH(MW: 411.4,108mmol)44g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Asp(otbu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Asp(otbu)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
43)制备Fmoc-Ala- Asp(otbu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤42）的Fmoc-Asp(otbu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Ala-OH(MW: 311.34,108mmol)34g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Ala-Asp(otbu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Ala-OH的摩尔数为树脂的4倍。
44)制备Fmoc-Tyr(tbu)- Ala-Asp(otbu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤43）的Fmoc-Ala-Asp(otbu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入Fmoc-Tyr(tbu)-OH(MW: 459.5,108mmol)50g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g,用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得Fmoc-Tyr(tbu)-Ala-Asp(otbu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。Fmoc-Tyr(tbu)-OH的摩尔数为树脂的4倍。
45)制备trans -Tyr(tbu)-Ala-Asp(otbu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂：
在步骤44）的Fmoc-Tyr(tbu)-Ala-Asp(otbu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala-Arg(pbf)-Leu-树脂中加入800ml脱保护试剂，30℃下反应20分钟，抽干，用NMP、DCM依次洗涤，抽干。加入反式己烯酸(MW: 163.17,108mmol)1.8g，TBTU(MW:321.08,108mmol)35g，HoBt(MW:135.1,108mmol)15g，用800ml偶联试剂溶解，30℃反应1小时。抽干，分别用NMP,甲醇，DCM洗涤数次，抽干,获得trans -Tyr(tbu)-Ala-Asp(otbu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂。trans的摩尔数为树脂的4倍。
46）制备trans-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2：
在步骤45）的Fmoc-Tyr(tbu)-Ala-Asp(otbu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tbu)-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser(tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile--Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(otbu)-Arg(pbf)-Gly-Ala-Arg（pbf）-Ala- Arg(pbf)-Leu-树脂中加入-2℃的裂解试剂（三氟乙酸/水/苯甲醚/三异丙基硅烷 90:2.5:2.5:5 体积比）1200ml，30℃反应3.5小时，过滤，加入2000ml乙醚沉淀，收集沉淀物，再用乙醚洗涤数次，室温置于干燥器中，真空干燥12小时，获得切割后的替莫瑞林粗肽，约124.7g，粗肽纯度35.25。
将替莫瑞林粗肽，用C18或C4柱进行分离纯化，经冷冻干燥得到替莫瑞林成品，约12.23g（MW: 5135.9），成品纯度98.49%，收率为9.8%（以替莫瑞林粗肽来计算）。
实施例2
以Rink Amide AM树脂做起始原料，称取树脂100g(100-200目，0.27mmol/g,27mmol)，DCM溶胀20分钟后，加入Fmoc-Leu-OH,HBTU,HoBt,用偶联试剂溶解混合物，40℃反应2小时，NMP,无水乙醚分别洗涤3-6次。偶联试剂体积比为:NMM:NMP=1:12，偶联试剂的体积与树脂的重量比例为10ml/g。脱保护试剂的组分和体积比为：PIP：NMP=1:4,脱保护试剂的体积与树脂的重量比例为10ml/g。
加入脱保护试剂，20℃反应30分钟，充分洗涤后加入用偶联试剂溶解的Fmoc-氨基酸，HBTU/HoBt或DIC/HoBt的混合物，40℃反应2小时，其余同实施例1操作，直至得到替莫瑞林粗肽树脂，再经裂解等反应，得到替莫瑞林粗品131.7g，粗品纯度25.50%。
将替莫瑞林粗肽，用C18或C4柱进行分离纯化，经冷冻干燥得到替莫瑞林成品，约10.37g（MW: 5135.9），成品纯度98.37%,收率为7.87%（以替莫瑞林粗肽来计算）。
实施例3
以Rink Amide AM树脂做起始原料，称取树脂100g(100-200目，0.27mmol/g,27mmol)，DCM溶胀10分钟后，加入Fmoc-Leu-OH,Bop,HoBt,用偶联试剂溶解混合物，50℃反应30分钟，NMP,无水乙醚分别洗涤3-6次。偶联试剂体积比为:NMM:NMP=1:20，偶联试剂的体积与树脂的重量比例为15ml/g。脱保护试剂的组分和体积比为：PIP：NMP=1:6,脱保护试剂的体积与树脂的重量比例为15ml/g。
加入脱保护试剂，50℃反应10分钟，充分洗涤后加入用偶联试剂溶解的Fmoc-氨基酸，Bop/HoBt或PyBop/HoBt的混合物，50℃反应30分钟，其余同实施例1操作，直至得到替莫瑞林粗肽树脂，再经裂解等反应，得到替莫瑞林粗品110.9g,粗品纯度29.36%。
将替莫瑞林粗肽，用C18或C4柱进行分离纯化，经冷冻干燥得到替莫瑞林成品，约10.85g（MW: 5135.9），精品纯度98.15%,收率为9.78%（以替莫瑞林粗肽来计算）。
Claims (10)
1.一种固相合成替莫瑞林的方法，其特征在于，包括如下步骤：
以林克氨甲基树脂或林克4-甲苯氢胺树脂为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有芴甲氧羰基保护基团的氨基酸和反式己烯酸，合成得到侧链全保护的替莫瑞林的树脂，其间依次脱去芴甲氧羰基保护基团，用卡特缩合剂/1－羟基苯骈三唑、苯并三唑-1-四甲基六氟磷酸酯∕1－羟基苯骈三唑、苯并三氮唑-N,N,N’,N’四甲基脲六氟磷酸酯/1－羟基苯骈三唑、N,N'-二异丙基碳二亚胺/1－羟基苯骈三唑、O-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯/1－羟基苯骈三唑、(苯并三唑-1-氧)三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐/1－羟基苯骈三唑、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯/1－羟基苯骈三唑、（3H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-3氧基）三-1-吡咯烷基鏻六氟磷酸盐/1－羟基苯骈三唑、O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸盐/1－羟基苯骈三唑、卡特缩合剂/1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、苯并三唑-1-四甲基六氟磷酸酯∕1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、苯并三氮唑-N,N,N’,N’四甲基脲六氟磷酸酯/1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、N,N'-二异丙基碳二亚胺/1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、O-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯/1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、(苯并三唑-1-氧)三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐/1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯/1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、（3H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-3氧基）三-1-吡咯烷基鏻六氟磷酸盐/1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑或O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸盐/1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑中的任何一种混合物为缩合剂，进行偶联反应，得保护的替莫瑞林的树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得替莫瑞林粗肽，用C18或C4柱进行分离纯化，经冷冻干燥得到产品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，依次连接具有芴甲氧羰基保护基团的氨基酸和反式己烯酸，合成得到侧链全保护的替莫瑞林的树脂，依次包括如下步骤：
1）将林克氨甲基树脂或林克4-甲苯氢胺树脂用二氯甲烷浸泡10-40分钟，使树脂溶胀，树脂的重量体积浓度为6-15ml/g；
2）在上述的树脂中加入脱保护试剂，进行脱保护反应，然后树脂用N-甲基吡咯烷酮、二氯甲烷洗涤，抽干，加入用溶剂溶解的具有芴甲氧羰基保护基团的氨基酸，用卡特缩合剂/1－羟基苯骈三唑、苯并三唑-1-四甲基六氟磷酸酯∕1－羟基苯骈三唑、苯并三氮唑-N,N,N’,N’四甲基脲六氟磷酸酯/1－羟基苯骈三唑、N,N'-二异丙基碳二亚胺/1－羟基苯骈三唑、O-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯/1－羟基苯骈三唑、(苯并三唑-1-氧)三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐/1－羟基苯骈三唑、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯/1－羟基苯骈三唑、（3H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-3氧基）三-1-吡咯烷基鏻六氟磷酸盐/1－羟基苯骈三唑或O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸盐/1－羟基苯骈三唑中任何一种混合物作为缩合剂进行偶联反应，抽干，分别用N-甲基吡咯烷酮、甲醇、二氯甲烷依次洗涤，抽干，然后再加入脱保护试剂，脱保护反应，再加入用溶剂溶解的具有芴甲氧羰基保护基团的氨基酸，如此反复，最后与反式己烯酸反应，获得保护的替莫瑞林树脂；
所说的具有芴甲氧羰基保护基团的氨基酸，依次为：
芴甲氧羰基亮氨酸
芴甲氧羰基（2,2,4,6,7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基）精氨酸
芴甲氧羰基丙氨酸
芴甲氧羰基（2,2,4,6,7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基）精氨酸
芴甲氧羰基丙氨酸
芴甲氧羰基苷氨酸
芴甲氧羰基（2,2,4,6,7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基）精氨酸
芴甲氧羰基叔丁酯基谷氨酸
芴甲氧羰基三苯甲基谷氨酰胺
芴甲氧羰基三苯甲基天冬酰胺
芴甲氧羰基叔丁氧基丝氨酸
芴甲氧羰基叔丁酯基谷氨酸
芴甲氧羰基苷氨酸
芴甲氧羰基三苯甲基谷氨酰胺
芴甲氧羰基三苯甲基谷氨酰胺
芴甲氧羰基（2,2,4,6,7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基）精氨酸
芴甲氧羰基叔丁氧基丝氨酸
芴甲氧羰基蛋氨酸
芴甲氧羰基异亮氨酸
芴甲氧羰基叔丁酯基天冬氨酸
芴甲氧羰基三苯甲基谷氨酰胺
芴甲氧羰基亮氨酸
芴甲氧羰基亮氨酸
芴甲氧羰基叔丁氧羰基赖氨酸
芴甲氧羰基（2,2,4,6,7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基）精氨酸
芴甲氧羰基丙氨酸
芴甲氧羰基叔丁氧基丝氨酸
芴甲氧羰基亮氨酸
芴甲氧羰基三苯甲基谷氨酰胺
芴甲氧羰基苷氨酸
芴甲氧羰基亮氨酸
芴甲氧羰基缬氨酸
芴甲氧羰基叔丁氧羰基赖氨酸
芴甲氧羰基（2,2,4,6,7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基）精氨酸
芴甲氧羰基叔丁氧基脯氨酸
芴甲氧羰基叔丁氧基丝氨酸
芴甲氧羰基三苯甲基天冬酰胺
芴甲氧羰基叔丁氧基苏氨酸
芴甲氧羰基苯丙氨酸
芴甲氧羰基异亮氨酸
芴甲氧羰基丙氨酸
芴甲氧羰基叔丁酯基天冬氨酸
芴甲氧羰基丙氨酸
芴甲氧羰基叔丁氧基脯氨酸。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的芴甲氧羰基保护基通过哌啶处理来去除去，脱保护试剂的组分和体积比为：哌啶: N-甲基吡咯烷酮=1:3-6,脱保护试剂的体积与树脂的重量比例为5-16ml/g。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所说的偶联试剂的组分和体积比为: N-甲基吗啡啉: N-甲基吡咯烷酮=1:6-20，偶联试剂的体积与树脂的重量比例为5-16ml/g。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所需具有芴甲氧羰基保护基团的氨基酸的摩尔数为树脂的3-6倍。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，卡特缩合剂、苯并三唑-1-四甲基六氟磷酸酯、苯并三氮唑-N,N,N’,N’四甲基脲六氟磷酸酯、N,N'-二异丙基碳二亚胺、O-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯、(苯并三唑-1-氧)三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、（3H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-3氧基）三-1-吡咯烷基鏻六氟磷酸盐或O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸盐的摩尔数为树脂的3-6倍；1－羟基苯骈三唑的摩尔数为树脂的3-6倍。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述氨基酸偶联与脱保护过程中每一步都经过凯撒试验检测。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得替莫瑞林的粗品，包括如下步骤：
将预冷至-2～-5°C的裂解试剂加入替莫瑞林侧链保护的树脂中，室温裂解反应2-5小时，过滤加入乙醚沉淀收集沉淀物，再用乙醚洗涤，室温置于干燥器内，真空干燥4-12小时，获得替莫瑞林的粗品。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，裂解反应用裂解试剂为：三氟乙酸、三异丙基硅烷、水和苯甲醚的混合液。
10.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，脱保护反应温度为10-50℃，时间为10-30分钟；偶联反应温度为10-50℃，时间为30-120分钟。
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