CN102701938B

CN102701938B - 一种在变叶海棠和花叶海棠中提取纯化根皮素的方法

Info

Publication number: CN102701938B
Application number: CN201210190563.2A
Authority: CN
Inventors: 李敏; 王道清; 彭成
Original assignee: Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2012-06-11
Filing date: 2012-06-11
Publication date: 2014-04-23
Anticipated expiration: 2032-06-11
Also published as: CN102701938A

Abstract

本发明提供了根皮素的分离纯化方法。本发明不采用酶解或酸水解，首次从蔷薇科苹果属花楸苹果组植物中分离得到根皮素，制备得到的根皮素纯度在98%以上，且回收率较高，该发明为根皮素的分离纯化提供了新的路径，同时也为变叶海棠和花叶海棠专属性成分的研究奠定了基础。

Description

一种在变叶海棠和花叶海棠中提取纯化根皮素的方法

技术领域

本发明涉及根皮素的提取纯化方法，属于药物领域。

背景技术

根皮素，化学名：3-（4-羟基苯基）-1-（2、4、6-三羟基苯基）-1-丙酮，是黄酮类化合物，溶于甲醇、乙醇和丙酮，几乎不溶于水。根皮素主要分布于苹果、梨等多汁水果的果皮及根皮及马醉木中。最早是作为一种天然皮肤美白剂被使用，具有保湿、治疗分泌旺盛型粉刺、抑制黑素细胞活性，淡化色斑的作用。最近国内一些学者证实，根皮素具有良好的药效活性，如抗炎、提高免疫，预防骨质疏松、降血脂、抗肿瘤、抗心血管硬化、诱导癌症细胞凋亡、抑制胃癌细胞等。因此，根皮素的使用范围广泛，对根皮素的需求量也日趋增加。

目前从植物中分离纯化根皮素时，多是先提取根皮苷，再进行酶解或酸水解后，得到根皮素。如专利申请号：201010510889.x，该发明以苹果叶、海棠叶为原料，将提取液经大孔树脂纯化后，再进行生物酶解，制备得到纯度96%以上的根皮素。徐凯等，以苹果皮为原料，将其提取液通过盐酸水解处理后，在进行进一步提取，并认为根皮素纯度大幅提高（徐凯，等，苹果皮中根皮素的提取工艺研究，食品研究与开发，2009年30卷12期）。

目前，还未见不使用酶解或酸水解操作，直接从苹果属植物中分离纯化根皮素方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从苹果属植物中不使用酶解或酸水解操作直接分离纯化根皮素的方法。

本发明提供了根皮素的提取纯化方法，它包括如下操作步骤：

（1）取苹果属植物的叶，粉碎，加水或不同浓度的乙醇溶液提取，提取液回收溶剂后，在以水-乙酸乙酯系统萃取，取乙酸乙酯萃取层，回收溶剂后，得乙酸乙酯部位浸膏；

（2）将乙酸乙酯部位浸膏上硅胶柱，用氯仿-甲醇=50：（1-3）V/V洗脱除杂后，再依次用氯仿-甲醇=40：1V/V→30：1V/V洗脱，薄层监视，合并相同流分，回收溶剂后，浸膏备用；

（3）取步骤（2）制备的浸膏，上硅胶柱，用石油醚-丙酮=5：（2-4）V/V洗脱，薄层监视，收集洗脱液，回收溶剂后，干燥，即得根皮素。

进一步地，所述苹果属植物为花楸苹果组植物。

更进一步地，所述苹果属花楸苹果组植物为变叶海棠Malus toringoides(Rehd.)Hughes.、花叶海棠Malus tiansitoria(Batal.)Schneid.。

进一步地，步骤（2）的具体操作如下：

将乙酸乙酯部位浸膏上硅胶柱，用氯仿-甲醇=50：（1-3）V/V洗脱除杂后，先用10倍柱体积的氯仿-甲醇=40：1V/V洗脱，均匀收集120份，分别得到B1-B120流分；再以7倍柱体积的氯仿-甲醇=30：1V/V洗脱，均匀收集112份，分别得到C1-C112流分；薄层监视，合并B84-120流分、C1-C32流分，回收溶剂后，浸膏备用。

更进一步地，步骤（2）中，用氯仿-甲醇=50：1V/V洗脱除杂。

进一步地，步骤（3）中，用石油醚-丙酮=5：3V/V洗脱。

进一步地，步骤（1）中，乙醇浓度为95%V/V。

本发明不采用酶解或酸水解，首次从蔷薇科苹果属花楸苹果组植物变叶海棠和花叶海棠中分离得到根皮素，制备得到的根皮素纯度在98%以上，且回收率较高，为根皮素的分离纯化提供了新的路径，同时也为变叶海棠和花叶海棠专属性成分的研究奠定了基础。

附图说明

图1根皮素H—NMR谱图

图2根皮素C-NMR谱图

图3根皮素的HPLC纯度检测图

具体实施方式

实施例1本发明根皮素的分离纯化方法

（1）取变叶海棠干燥叶8kg,用手揉碎或粉碎，每次称取1kg左右，加5倍95%的乙醇回流提取，提取两次，过滤，收集续滤液，减压回收，得乙醇部位浸膏563g。将乙醇部位的浸膏加水溶解，然后加入2倍的乙酸乙酯反复萃取直至乙酸乙酯溶液无色，合并乙酸乙酯溶液，减压回收得乙酸乙酯部位浸膏240g。

（2）将乙酸乙酯部位加适量甲醇溶解，同时加入200g硅胶（200-300目）进行拌样。取3000g硅胶进行湿法装柱，待硅胶柱沉淀均匀后加入样品，用氯仿-甲醇=50：（1-3）V/V洗脱除杂后，先用10倍柱体积的氯仿-甲醇=40：1V/V洗脱，均匀收集120份，分别得到B1-B120流分；再以7倍柱体积的氯仿-甲醇=30：1V/V洗脱，均匀收集112份，分别得到C1-C112流分；薄层监视，合并B84-120流分、C1-C32流分，回收溶剂后，得浸膏42g，备用。

（3）取步骤（2）制备的浸膏，上样于400g的硅胶柱，用石油醚-丙酮=5：3V/V洗脱，薄层监视，收集洗脱液，回收溶剂后，干燥，即得根皮素4g。

本实验先后用石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮、氯仿-甲醇为三种洗脱剂进行了预实验，结果表明，氯仿-甲醇对变叶海棠黄酮类物质洗脱较为完全，且极性范围广。

实施例2实施例1所得产品的结构鉴定

取实施例1得到的根皮素进行结构鉴定，数据如下：

本品为浅粉红色粉末（甲醇）,TLC紫外灯下喷三氯化铝显色剂显亮蓝色。盐酸镁粉反应显阳性，初步判断为黄酮类或黄酮醇类化合物。分子式：C₁₅H₁₄O₅

1H-NMR(600MHz,DMSO-d612.23(2H,s,2’,6’-OH),10.33(1H,s,4’-OH),9.12(1H,s,4-OH),7.03(2H,s,H-3’,5’),6.68(2H,d,J=8.5Hz),5.82(2H,s,H-3’,5’),3.23(2H,d,J=7.6Hz),2.78(2H,d,J=7.6Hz),13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)205.0(C=O),164.7(C-4’),164.4(C-2’,C-6’),155.0(C-4),132.5(C-1),128.9(C-2,C-6),114.7(C-3,C-5)103.9(C-1’)94.4(C-3’,C-5’),45.9(C-α)，30.0（C-β）经与文献数据对比鉴定为化合物根皮素(Phloretin).

实施例3本发明方法制备的根皮素的纯度分析

对实施例1制备的根皮素的纯度进行检测，条件如下：

仪器：Agilent1200高效液相色谱仪，DiamonsilTM C18HPLC色谱柱（250×4.6mm，5μm），BP211D型电子分析天平（十万分之一，Sartorius德国赛多利斯股份公司）。

流动相：27％乙腈-水

检测波长：286nm

温度：30摄氏度

进样量：20μl

洗脱条件：等度洗脱

结果：

经高效液相色谱法测定，本发明方法制备的根皮素的纯度达到了98.61%，其回收率为65.12%。

本发明不采用酶解或酸水解，首次从蔷薇科苹果属花楸苹果组植物中分离得到根皮素，且制备得到的根皮素纯度均在98%以上，且回收率较高，为根皮素的分离纯化提供了新的路径，同时也为变叶海棠和花叶海棠专属性成分的研究奠定了基础。

Claims

1.根皮素的提取纯化方法，其特征在于：它包括如下操作步骤：

（1）取苹果属花楸苹果组植物的叶，粉碎或揉碎，加水或不同浓度的乙醇溶液提取，提取液回收溶剂后，在以水-乙酸乙酯系统萃取，取乙酸乙酯萃取层，回收溶剂后，得乙酸乙酯部位浸膏；

（2）将乙酸乙酯部位浸膏上硅胶柱，用氯仿-甲醇=50：（1-3）V/V洗脱除杂后，再依次用氯仿-甲醇=40：1 V/V→30：1V/V洗脱，薄层监视，合并相同流分，回收溶剂后，浸膏备用；

2.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于：所述苹果属花楸苹果组植物为变叶海棠Malus toringoides(Rehd.)Hughes.、花叶海棠Malus tiansitoria(Batal.)Schneid.。

3.根据权利要求1或2所述的提取纯化方法，其特征在于：步骤（2）的具体操作如下：

4.根据权利要求3所述的提取纯化方法，其特征在于：步骤（2）中，用氯仿-甲醇=50：1V/V洗脱除杂。

5.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于：步骤（3）中，用石油醚-丙酮=5：3V/V洗脱。

6.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于：步骤（1）中，乙醇浓度为95%V/V。