CN102659879A - 一种红霉素c的制备方法 - Google Patents

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李学兵
邹学锋
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Abstract

本发明涉及一种红霉素C的制备方法，该方法是以将含红霉素C较高的红霉素样品溶液注入高效液相色谱仪中，收集红霉素C溶液；将分离出来的红霉素C溶液加至阳离子交换柱上，加水冲洗后，再用甲醇洗脱，收集洗脱液，加热使甲醇挥发至干，即得红霉素C纯品。通过本发明的方法可制备出红霉素C纯品，以它作为红霉素C定性的对照品，可实现红霉素C的准确定性。本发明工艺简便，所生产的产品价格低，纯度高，满足市场需求，同时为未来市场的普及使用奠定了基础。

Description

一种红霉素C的制备方法
技术领域
本发明属于生物制药技术领域，特别是涉及一种红霉素C的制备方法。
背景技术
红霉素(erythromycin，Er)是一类大环内酯类抗生素，主要包括红霉素A(ErA)、红霉素B(ErB)和红霉素C(ErC)，其中以红霉素A的抗菌活力最强，B、C抗菌活力较低。故而，医疗上用的大部分都为红霉素A，而把红霉素B、C作为杂质对待。因此，在红霉素药品生产过程中，需要对其中的红霉素A、B、C进行测定，从而确定药品的药效。
《中国药典》2010版红霉素质量标准中，规定用高效液相色谱法对相关物质红霉素C进行测定，该方法在测定时规定“按红霉素C、红霉素A、杂质1、红霉素B、红霉素烯醇醚峰的顺序出峰（必要时，用红霉素C、红霉素B、红霉素烯醇醚对照品进行峰定位）”，其弊端是，①方法中规定了出峰顺序，如果以此做为定性依据，操作中会有错误的结果，因为在红霉素C附近，还有另一杂质N-去甲基红霉素，这就会使检验人员无法确定哪个是红霉素C，哪个是N-去甲基红霉素；②中国药品标准品唯一的法定机构中国药品生物制品检定研究院未对社会公开销售红霉素C，这使得检验人员无法对红霉素C准确定性。
目前，欧洲药典委员专门出售红霉素C纯品，用此产品可实现红霉素C的准确定性，但是该产品到货价格比较贵，约1700～2000元/支（每支50mg），不利于普及使用。
发明内容
本发明的目的就在于提供一种红霉素C的制备方法。
为实现上述发明目的所采取的技术方案为：
一种从红霉素中制备红霉素C的方法，其特征是：将含红霉素C较高的红霉素样品溶液注入高效液相色谱仪中，收集红霉素C溶液。将分离出来的红霉素C溶液加至阳离子交换柱上，加水冲洗后，再用甲醇洗脱，收集洗脱液，加热使甲醇挥发至干，即得红霉素C纯品。
上述高效液相色谱条件为：以磷酸盐溶液-乙腈为流动相，上述流动相体系中磷酸盐溶液、乙腈体积比为40～60：60～40，磷酸盐溶液配制方法为取磷酸氢二钾8～9g，加水1000ml，用20%磷酸调节pH值为8.0～8.4，    使用Sinochrom 300A ODS-AP 10um制备柱，流动相流速为70～80ml/min，检测波长为210nm。
上述红霉素C溶液收集前，可用欧洲药典委员会红霉素C标准品配制的对照溶液注入高效液相色谱仪，确定红霉素C的出峰时间。
上述阳离子交换柱使用前需进行活化，其特征在于上述用阳离子交换柱进行纯化时，先用2％的盐酸对阳离子交换柱进行活化，活化后用水冲洗至pH为中性。
在上述体系中，磷酸盐溶液、乙腈体积比为45～55：55～45时，所得红霉素C的纯度高达90%～100%。
本发明的优点在于：1、通过本方法可制备出红霉素C纯品，以它作为红霉素C定性的对照品，从而解决了《中国药典》2010版红霉素质量标准中，只规定各组分出峰顺序，且中国药品生物制品研究所未向社会销售红霉素标准品，检验人员在检测过程中对红霉素C准确定性的困难。2、本发明工艺简便，所生产的红霉素C纯品价格比从欧洲购买价格低。
本发明工艺简便，所生产的产品价格低，纯度高，满足市场需求，同时为未来市场的普及使用奠定了基础。
附图说明
图1为本发明工艺流程图。
具体实施方式
下述红霉素C取自宁夏启元药业有限公司生产的红霉素。
实施例1
1 红霉素C的分离：
1.1色谱条件：色谱柱：Sinochrom 300A ODS-AP 10um；流动相：以磷酸盐溶液（取磷酸氢二钾8.7g，加水1000ml，用20%磷酸调节pH值至8.2）-乙腈（45：55）为流动相；流速：75 ml/min；检测波长：210nm。
1.2 仪器型号：大连依利特P230制备液相色谱仪。
1.3溶液制备：
样品溶液制备：抽取一批红霉素C含量较高的样品，准确称取1.0g，加乙腈10ml使溶解，加流动相稀释至200 ml，摇匀，即可。
对照溶液制备：精密称取欧洲药典红霉素C对照品10mg，置50ml容量瓶中，加10ml乙腈使溶解，加流动相稀释至刻度。
1.4溶液分离：取对照溶液10ml注入液相色谱仪，记录色谱图，确定红霉素C保留时间。再取样品溶液10ml，注入液相色谱仪进行分离，在红霉素C对照品出峰起始时间，开始收集红霉素C溶液，至红霉素峰尾部结束，置4℃左右冰箱中保存。反复收集若干次，合并。
2 红霉素C纯化：取阳离子交换树脂，装于直径约为20mm玻璃柱中，高度约30cm，用200ml2%HCl进行活化，再用纯化水冲洗至pH显中性。取20ml红霉素C收集液加至阳离子交换树脂柱上，加阳离子交换柱体积300ml的纯化水冲洗，再用200ml甲醇洗脱。收集洗脱液，加热使甲醇挥发至干，即得红霉素C纯品。
3 红霉素C含量测定：取自制红霉素C纯品，按《中国药典》2010版红霉素含量测定方法色谱条件，以欧洲药典委员会红霉素C对照品为参考，对自制红霉素C含量进行测定，测得其含量为93.2%。
实施例2
1 红霉素C的分离：
1.1色谱条件：色谱柱：Sinochrom 300A ODS-AP 10um，；流动相：以磷酸盐溶液（取磷酸氢二钾8.7g，加水1000ml，用20%磷酸调节pH值至8.2）-乙腈（50：50）为流动相；流速：80 ml/min；检测波长：210nm。
1.2 仪器型号：大连依利特P230制备液相色谱仪。
1.3溶液制备：
样品溶液制备：抽取一批红霉素C含量较高的样品，准确称取1.0g，加乙腈10ml使溶解，加流动相稀释至200 ml，摇匀，即可。
对照溶液制备：精密称取欧洲药典红霉素C对照品10mg，置50ml容量瓶中，加10ml乙腈使溶解，加流动相稀释至刻度。
1.4溶液分离：取对照溶液10ml注入液相色谱仪，记录色谱图，确定红霉素C保留时间。再取样品溶液10ml，注入液相色谱仪进行分离，在红霉素C对照品出峰起始时间，开始收集红霉素C溶液，至红霉素峰尾部结束，置4℃左右冰箱中保存。反复收集若干次，合并。
2 红霉素C纯化：取阳离子交换树脂，装于直径约为20mm玻璃柱中，高度约30cm，用200ml2%HCl进行活化，再用纯化水冲洗至pH显中性。取20ml红霉素C收集液加至阳离子交换树脂柱上，加阳离子交换柱体积300ml的纯化水冲洗，再用200ml甲醇洗脱。收集洗脱液，加热使甲醇挥发至干，即得红霉素C纯品。
3 红霉素C含量测定：取自制红霉素C纯品，按《中国药典》2010版红霉素含量测定方法色谱条件，以欧洲药典委员会红霉素C对照品为参考，对自制红霉素C含量进行测定，测得其含量为95.6%。

Claims (5)

1. 一种红霉素C的制备方法，其特征是：将含红霉素C较高的红霉素样品溶液注入高效液相色谱仪中，收集红霉素C溶液；将分离出来的红霉素C溶液加至阳离子交换柱上，加水冲洗后，再用甲醇洗脱，收集洗脱液，加热使甲醇挥发至干，即得红霉素C纯品。
2.按照权利要求1所述的红霉素C的制备方法，其特征在于上述高效液相色谱的色谱条件为：
流动相：体积比为40～60：60～40的磷酸盐溶液-乙腈；
色谱柱：Sinochrom 300A ODS-AP 10um；
流动相流速：70～80ml/min；
检测波长：210nm。
3.按照权利要求2所述的红霉素C的制备方法，其特征在于所述流动相为体积比为45～55：55～45的磷酸盐溶液-乙腈。
4.按照权利要求1所述的红霉素C的制备方法，其特征在于上述红霉素C溶液收集前，可用欧洲药典委员会红霉素C标准品配制的对照溶液注入高效液相色谱仪，确定红霉素C的出峰时间。
5.按照权利要求1所述的红霉素C的制备方法，其特征在于上述阳离子交换柱在使用前，先用2％的盐酸对阳离子交换柱进行活化，活化后用水冲洗至pH为中性。
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