CN102657094A - 一种非洲菊组培增殖苗的瓶外无土扦插生根方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种非洲菊组培增殖苗的瓶外无土扦插生根方法。该方法主要包括将诱导培养的幼芽转接到增殖培养基：MS基本培养液，6-BA0.3～0.7mg/L，NAA0.1mg/L，蔗糖30000mg/L，琼脂6500mg/L中培养，长出增殖苗时，将增殖培养瓶搬入盖有遮光率为70%遮阳网的大棚中进行4～7d炼苗，然后，将增殖苗进行瓶外无土扦插生根培育。本发明将生根阶段在大棚内无土生根培育，增强了生根苗适应环境能力，保障了种苗生根率，提高了扦插移栽成活率，既保持了组织培养技术优点，又克服了组培苗炼苗成活率低、生产成本高、生产环节多等难题，还降低了苗期土传病害，可为非洲菊的无土栽培提供优质种苗。

Description

一种非洲菊组培增殖苗的瓶外无土扦插生根方法

技术领域

本发明涉及一种非洲菊组培增殖苗的瓶外无土扦插生根方法，属于植物生物技术及栽培技术领域。

背景技术

非洲菊( Gerbera jamesonii Bolus) 是菊科大丁草属多年生宿根草本花卉，因其花大、花艳、花色全且花期长,在我国广泛种植。目前通常采用组培快繁技术为生产上提供品质优良的无病、无毒非洲菊种苗。现有的组培快繁技术主要包括培养室培养和培养室外扦插培养两大阶段，培养室培养主要包括外植体的诱导培养、增殖培养和生根培养，培养室外培养主要是将在培养室内培养基中生根的组培苗置于培养室外驯化和移栽培育成活，其存在如下问题：首先，高激素浓度下的高增殖系数会对增殖试管苗的生根、驯化和移栽等生产后续环节产生不利影响；其次，无菌苗从瓶内到瓶外, 由恒温、高湿、弱光、无菌转换到变温、变湿、有菌的生长条件下, 环境变化十分剧烈, 在培养基中进行生根培养，形成的生根苗移植到瓶外其适应性培育需要较长的缓苗时间, 炼苗成活率较低，种苗的质量较差；第三，琼脂是固体培养中最好的固化剂，瓶内培养步骤越多，使用琼脂越多，而琼脂占了培养基成本的80％，是造成培养成本高的关键因素，另外炼苗移栽时，生根苗根系的琼脂清洗困难，附在幼苗根系上未清洗干净的琼脂易造成根系污染，从而影响了移栽成活率。

组培苗的增殖倍数、生根率、生根苗的适应能力，是影响非洲菊工厂化育苗成功与否、效益高低的直接因素。因此，需要寻找一种繁殖速度快、组培苗的移栽成活率高，又能降低组织培养成本低，降低土传病害，创造适合非洲菊组培苗生长且利于移栽成活的环境条件的新方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题主要是针对现有技术非洲菊在培养室条件的瓶内培养基中进行生根培养，导致培育出的生根苗适应能力较弱，缓苗过渡培养时间较长，移栽成活率较低；种苗携带土传病害严重从而制约无土栽培技术在非洲菊生产中广泛应用的缺陷和不足，而提供将非洲菊的生根培养从瓶内移为瓶外，并且生根与过渡培养、扦插移栽在同一步骤进行的一种新的非洲菊组培增殖苗的无土扦插生根方法，以提高生根苗的适应能力，从而提高组培苗的移栽成活率。

    为解决上技术问题和达到本发明目的，本发明所提供的一种非洲菊组培增殖苗的瓶外无土扦插生根方法的技术方案是将经过消毒灭菌处理的非洲菊花托外植体接入诱导培养基中进行诱导培养至分化出幼芽，再将诱导培养分化出的幼芽按如下步骤进行，

A、增殖培养：将诱导培养分化出的幼芽切下转接到盛有下述列增殖培养基的培养瓶中：

MS基本培养液

6-苄胺基嘌呤(6-BA )              0.3～0.7 mg/L

萘乙酸 (NAA )                     0.1mg/L

蔗糖                                  30000mg/L

琼脂                                  6500mg/L

PH                                     5.8～6.0

培养瓶在培养室内光照强度为1500～2000 lx，温度为25±2℃，光照时间为10～12h/d的条件下进行继代增殖培养； 

B、炼苗：当培养瓶内培养出长度为2～3 cm的增殖苗时，将该培养瓶从培养室搬入盖有遮光率为70%遮阳网的移栽大棚中进行4～7d炼苗，移栽大棚的温度控制为18℃-28℃；

 C、瓶外无土扦插生根：在所述的移栽大棚内搭建苗床，苗床的基质为无土混合基质，无土混合基质的厚度为5cm以上，所述的无土混合基质是将珍珠岩、蛭石和泥炭按珍珠岩：蛭石：泥炭的体积比为1：1：2的比例混合而成；将B步骤的增殖苗从瓶内取出，用清水洗净增殖苗上的培养基，使用75%百菌清可湿性粉剂1000倍液消毒1~2 min后，将增殖苗切成单株小苗，将单株小苗基部蘸生根水5～8s后扦插到所述的无土混合基质中，扦插密度为3cm×3cm，扦插前，先用清水喷湿该无土混合基质，使基质湿透，然后用70%敌克松可湿性粉剂1000倍液消毒，扦插后喷定根水，第二天喷施70%甲基托布津可湿性粉剂1000倍液，移栽大棚内空气相对湿度控制在80%以上，温度与步骤B相同，35d后，得生根种苗；所述的生根水是将吲哚丁酸（IBA）用蒸馏水配制成浓度为600～800mg/L的水溶液。

如果生产上需更大量的种苗，可进一步扩大增殖苗的数量，即可以将步骤A增殖培养的增殖苗每隔20d按步骤A相同的操作方法转接一次以上继代增殖培养，然后将得到的增殖苗按步骤B和步骤C进行。

上述方法步骤C中所述的扦插前，先用清水喷湿该无土混合基质，使基质湿透，然后用70%敌克松可湿性粉剂1000倍液消毒，该70%敌克松可湿性粉剂1000倍液的用量为每平方米100毫升药液；所述的扦插后喷定根水，第二天喷施70%甲基托布津可湿性粉剂1000倍液，该70%甲基托布津可湿性粉剂1000倍液的用量为每平方米70毫升药液。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

 1、本发明将常规的非洲菊组培快繁中生根阶段在培养室瓶内培养基中培育改为瓶外大棚无土生根培育，解决了现有技术在瓶内生根，生根苗适应环境能力较弱，移栽时根系易受损，苗易折断，根系上的琼脂难洗干净，易引进烂苗，成活率较低的缺陷；增强了生根苗适应环境能力，保障了种苗生根率，提高了扦插移栽成活率。

2、本发明将组培快繁获得的大量增殖苗移植大棚无土扦插生根培育，并将生根、过渡培养和扦插移栽结合一体，既保持了利用组织培养技术实现非洲菊周年生产、稳定种苗性状、繁殖速度快等优点，又克服了组培苗炼苗成活率低、生产成本高、生产环节多等难题。

3、本发明将无菌增殖苗直接扦插在无土混合基质中，既降低了苗期土传病害，还可为非洲菊的无土栽培提供优质种苗。

4、本发明巧妙科学设置的增殖培养基和相应的无土扦插生根培育措施，不仅使每次增殖倍数可达3～4倍，得大量增殖苗，还使无土扦插的成活率大量提高，苗壮，增殖苗移植到大棚的无土扦插的成活率达85%以上，无土扦插成活苗中生根率达90%以上。

具体实施方式

    下面结合实施例对说明本发明作进一步的描述，但仅是举例，不构成对本发明的限制。各实施例中无特别说明的均为常规方法。百菌清的化学名称为2，4，5，6-四氯-1，3-苯二甲腈，剂型为75%可湿性粉剂；甲基托布津可湿性粉剂的化学名称为1,2-二(3-甲氧羰基-2-硫脲基)苯，剂型为70%可湿性粉剂；敌克松的化学名称为化学名称对二甲胺基苯重氮磺酸钠，剂型为70%可湿性粉剂，所述的百分数为质量分数，所使用的各种农药及各种试剂等为市售。

实施例1

1、外植体选择和消毒灭菌：选择非洲菊植株1～2cm大小的花托；将该花托先在自来水下冲洗5min后，用质量浓度为0.1%的洗衣粉水清洗5min，漂洗干净后在无菌超净台中将花托放入质量浓度为70%的乙醇溶液中浸泡10s，用无菌水漂洗2遍，在质量浓度为0.1%的升汞中浸泡10～15min，再在100ml质量浓度为0.2%的次氯酸钠加吐温20两滴的溶液中浸泡10min，最后用无菌水漂洗4遍，在浸泡过程中充分摇动器皿；

2、诱导培养：将经过步骤1消毒灭菌处理的花托，切去花柄和花萼，并切成0.5～1cm大小，接入盛有下述诱导培养基的培养瓶中： 

MS基本培养液

6-苄胺基嘌呤（6-BA）      8  mg/L

吲哚乙酸（IAA）               0.4  mg/L

蔗糖                                30000 mg/L

琼脂                                6500  mg/L

PH                                   5.8

培养瓶在光照强度为1500～2000 lx，温度为25±2℃，光照时间为10h/d的条件下进行外植体诱导，25d用相同诱导培养基转接1次，并在相同培养条件下培养直到分化出幼芽； 如果一次诱导培养可分化出幼芽，可不再转接继续诱导培养；

3、增殖培养：将步骤2诱导培养分化出的幼芽切下转接盛有下述增殖培养基的培养瓶中：

MS基本培养液

6-苄胺基嘌呤（6-BA）         0.3 mg/L

萘乙酸（NAA）                    0.1 mg/L

蔗糖                                   30000 mg/L

琼脂                                   6500 mg/L

_PH                                      5.8

培养瓶在培养室内光照强度为1500～2000 lx，温度为25±2℃，光照时间为10h/d的条件下进行继代增殖培养，增殖倍数可达3倍，为再获得更多的增殖苗，可每20d用相同增殖培养基及培养条件继代转接进行增殖培养；

4、炼苗：当培养瓶内培养出长度为2～3 cm的增殖苗时，将该培养瓶从培养室搬入盖有遮光率为70%遮阳网的移栽大棚中进行4d炼苗，移栽大棚的温度控制为18℃-22℃；

5、瓶外无土扦插生根：在所述的移栽大棚内搭建苗床，苗床的基质为无土混合基质，无土混合基质的厚度为5cm（无土混合基质的厚度还可大于5cm，从节约成本的角度考虑基质厚度为5cm即可），所述的无土混合基质是将珍珠岩、蛭石和泥炭按珍珠岩：蛭石：泥炭的体积比为1：1：2的比例混合而成；将步骤4的增殖苗从瓶内取出，用清水洗净增殖苗上的培养基，使用75%百菌清可湿性粉剂1000倍液消毒1~2 min后，将增殖苗用接种刀切成单株小苗，将单株小苗基部蘸生根水5～8s后扦插在所述的无土混合基质中，扦插密度为3cm×3cm，扦插前，先用清水喷湿该无土混合基质，使基质湿透，然后用70%敌克松可湿性粉剂1000倍液消毒后再扦插，用量为每平方米100毫升70%敌克松可湿性粉剂1000倍液药液，扦插后喷定根水，第二天喷施70%甲基托布津可湿性粉剂1000倍液，用量为每平方米70毫升70%甲基托布津可湿性粉剂1000倍液药液；移栽大棚内的空气相对湿度控制在80%～90%，温度与步骤4相同，35d后，得生根种苗；所述的生根水是将吲哚丁酸（IBA）用蒸馏水配制成浓度为800mg/L的水溶液。

效果：增殖苗移植到大棚的无土扦插的成活率达85%以上，无土扦插成活的增殖苗中生根率达95%以上，获得了适应性强的生根种苗。

实施例2

步骤1外植体选择和消毒灭菌与实施例1步骤1相同； 

步骤2诱导培养与实施例1步骤2相同； 

步骤3、除以下操作不同外，其余操作方法与实施例1步骤3相同： 

     增殖培养基中的6-苄胺基嘌呤（6-BA）为0. 7mg/L，_PH为6.0

增殖效果：每次继代增殖倍数达4倍

步骤4炼苗，除以下操作不同外，其余操作方法与实施例1步骤4相同：

炼苗时间为7d，移栽大棚的温度控制为23℃～28℃；

步骤5瓶外无土扦插生根，除以下操作不同外，其余操作方法与实施例1步骤5相同：

   生根水是将吲哚丁酸（IBA）用蒸馏水配制成浓度为600mg/L的水溶液。

  效果：增殖苗移植到大棚的无土扦插成活率达90%以上，无土扦插成活的增殖苗中生根率达90%以上，获得了适应性强的生根种苗。

本发明的核心是将非洲菊外植体诱导出幼苗进行所述的增殖培养、炼苗和无土扦插生根，此三步是协调配合的，达到了特别好的效果，除实施例1列举的步骤1外植体选择和消毒灭菌和步骤2所述的诱导培养外，采用其它方法将非洲菊外植体消毒灭菌和其它诱导培养基诱导培养，只要能将非洲菊外植体诱导出幼苗，再将该幼苗按本发明所述的增殖培养、炼苗和瓶外无土扦插生根方法也能实现本发明目的。

Claims (3)

1.一种非洲菊组培增殖苗的瓶外无土扦插生根方法，将经过消毒灭菌处理的非洲菊花托外植体接入诱导培养基中进行诱导培养至分化出幼芽，其特征在于：再将诱导培养分化出的幼芽按如下步骤进行，

A、增殖培养：将诱导培养分化出的幼芽切下转接到盛有下述增殖培养基的培养瓶中：

MS基本培养液

6-苄胺基嘌呤          0.3～0.7 mg/L

萘乙酸                    0.1mg/L

蔗糖                          30000mg/L

琼脂                          6500mg/L

PH                             5.8～6.0

培养瓶在培养室内光照强度为1500～2000 lx，温度为25±2℃，光照时间为10～12h/d的条件下进行继代增殖培养； 

B、炼苗：当培养瓶内培养出长度为2～3 cm的增殖苗时，将该培养瓶从培养室搬入盖有遮光率为70%遮阳网的移栽大棚中进行4～7d炼苗，移栽大棚内的温度控制为18℃-28℃；

 C、瓶外无土扦插生根：在所述的移栽大棚内搭建苗床，苗床的基质为无土混合基质，无土混合基质的厚度为5cm以上，所述的无土混合基质是将珍珠岩、蛭石和泥炭按珍珠岩：蛭石：泥炭的体积比为1：1：2的比例混合而成；将B步骤的增殖苗从瓶内取出，用清水洗净增殖苗上的培养基，使用75%百菌清可湿性粉剂1000倍液消毒1~2 min后，将增殖苗切成单株小苗，将单株小苗基部蘸生根水5～8s后扦插到所述的无土混合基质中，扦插密度为3cm×3cm，扦插前，先用清水喷湿该无土混合基质，使基质湿透，然后用70%敌克松可湿性粉剂1000倍液消毒，扦插后喷定根水，第二天喷施70%甲基托布津可湿性粉剂1000倍液，移栽大棚内空气相对湿度控制在80%以上，移栽大棚内温度与步骤B相同，35d后，得生根种苗；所述的生根水是将吲哚丁酸用蒸馏水配制成浓度为600～800mg/L的水溶液。

2.根据权利要求1所述的非洲菊组培增殖苗的瓶外无土扦插生根方法，其特征在于：将步骤A增殖培养的增殖苗每隔20d按步骤A相同的操作方法转接一次以上继代增殖培养，然后将得到的增殖苗按步骤B和步骤C进行。

3.根据权利要求1或2所述的非洲菊组培增殖苗的瓶外无土扦插生根方法，其特征在于：步骤C中所述的扦插前，先用清水喷湿该无土混合基质，使基质湿透，然后用70%敌克松可湿性粉剂1000倍液消毒，该70%敌克松可湿性粉剂1000倍液的用量为每平方米100毫升药液；所述的扦插后喷定根水，第二天喷施70%甲基托布津可湿性粉剂1000倍液，该70%甲基托布津可湿性粉剂1000倍液的用量为每平方米70毫升药液。