CN102649802A

CN102649802A - 一种三叶豆紫檀苷的制备方法

Info

Publication number: CN102649802A
Application number: CN2011100451479A
Authority: CN
Inventors: 李法庆; 刘东锋
Original assignee: Suzhou Baozetang Medical Technology Co Ltd
Current assignee: Suzhou Baozetang Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2011-02-25
Filing date: 2011-02-25
Publication date: 2012-08-29

Abstract

本发明属于天然产物分离领域，提供了一种三叶豆紫檀苷的制备方法。制备方法包括甲醇提取，酸水除杂得总黄酮，再经高效液相制备色谱纯化，最后用甲醇热回流结晶得高纯度的三叶豆紫檀苷。本发明制得产品纯度高，质量好。

Description

一种三叶豆紫檀苷的制备方法

技术领域：

本发明属于天然产物分离领域，尤其是涉及一种采用高效液相制备色谱法从苦参药材中制备三叶豆紫檀苷的方法。

背景技术：

苦参是豆科槐属多年生落叶亚灌木植物苦参(Sophora flavescens Ait.)的干燥根，性味苦寒，归心、肝、脾、肾、大肠、小肠诸经。具有清热燥湿、杀虫利尿的功效，可作苦味健胃剂、利尿剂、消炎药、止泻药和驱虫药。

苦参的主要功能性成分为黄酮类和生物碱类成分，近年来对苦参黄酮类成分研究较多，并取得了相关的成果。现代临床研究表明苦参总黄酮具有抗菌消炎、减慢心率、抗心率失常功能。三叶豆紫檀苷为苦参中一个主要的黄酮类成分，经Yagi A等研究已确定其具有很强的抗真菌作用。

三叶豆紫檀苷，无色针状或棒状结晶；分子式：C₂₂H₂₂O₁₀，分子量：446.41，熔点：142～144℃。难溶于苯，易溶于热甲醇。目前三叶豆紫檀苷主要是通过反复柱层析的方法制备。如温敏等发表的文献“白刺花的花中化学成分研究”，该文献公开的方法是75％乙醇回流提取，浓缩后用乙酸乙酯萃取，萃取液上硅胶柱层析，用石油醚-丙酮混合溶剂系统洗脱，洗脱液再上硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂系统洗脱，洗脱液最后经凝胶柱层析得到纯度较高的三叶豆紫檀苷，该方法步骤繁多，洗脱剂用量大，制备量小，周期长；再如朱丽君发表的硕士论文“苦参有效部位化学研究”，该论文采用的方法是乙醇回流提取，提取液浓缩后加水分散，离心除去上清液，残渣采用硅胶柱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，收集目标洗脱液，回收溶剂，最后用氯仿重结晶得到三叶豆紫檀苷，该方法步骤较简单但制得产品纯度不高。现有提取三叶豆紫檀苷的方法普遍存在着毒性有机溶剂用量大，工艺步骤多，制备量少，产品纯度低等问题，因此提供一种高纯度三叶豆紫檀苷的制备方法是很有必要的。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是提供一种三叶豆紫檀苷的制备方法，该方法操作简单，制得产品含量高。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种三叶豆紫檀苷的制备方法，其特征在于包含以下步骤：

1)提取：取苦参药材粉碎，加40～70％甲醇提取2～3次，药材与溶剂比例为1∶(5～10)，合并提取液，浓缩成浸膏；

2)酸水除杂：向上述浸膏中加入5～12倍量的pH1～5的酸水，超声分散，弃去酸水层，固形物重复以上操作2～4次，得苦参总黄酮；

3)制备高效液相进一步分离纯化：将上述苦参总黄酮用乙醇溶解，滤膜过滤，用高效液相制备色谱对其进行分离纯化，收集目标洗脱液，回收试剂至小体积，放置结晶；

4)重结晶：将上述结晶用甲醇热回流结晶2～3次得三叶豆紫檀苷产品。

所述步骤1)中的提取方法可选用加热回流法或超声提取法，提取温度控制在60～100℃。

所述步骤2)中的酸水可以是盐酸或硫酸水溶液。

所述步骤3)中的滤膜孔径为0.2～0.45μm。

所述步骤3)中的高效液相制备色谱是以反相键合硅胶为固定相，以甲醇水或乙腈水为流动相，紫外检测器监测收集目标流分。

所述的反相键合硅胶是C-8或C-18键合硅胶，甲醇水或乙腈水是含量58～65％的甲醇或乙腈的水溶液。

所述的紫外检测器的波长设定为310nm。

本发明的积极效果是：采用酸水除杂：洗去苦参生物碱类杂质；制备高效液相进一步分离纯化：所用的反相高效液相制备色谱，具有分离度高、重现性好、分离时间短、制备量大等优点，分离的到产品纯度可达98％以上。

本发明使用的溶剂系统较为简单，还具有低成本，回收率高的优点。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

取苦参药材1Kg，粉碎，加10L40％甲醇加热回流提取2次，合并提取液，浓缩得浸膏62g，向浸膏中加入310mlpH1的盐酸水溶液超声分散，离心除去酸水层，固形物重复酸水洗涤2次，将所得固形物用少量乙醇溶解，经0.2μm滤膜滤过，再采用反相制备高效液相进一步分离纯化，以C-8键合硅胶为固定相，58％甲醇水溶液为流动相，流速设定为20ml/min，设定紫外检测器波长310nm，指导收集目标洗脱液，回收试剂至小体积，放置结晶，滤出结晶物用甲醇加热回流溶解，放冷析晶2次，滤出晶体，干燥得到三叶豆紫檀苷2.4g，含量98.7％。

实施例2：

取苦参药材1Kg，粉碎，加5L70％乙醇超声提取3次，合并提取液，浓缩得浸膏71g，向浸膏中加入800mlpH5的硫酸水溶液超声分散，离心除去酸水层，固形物重复酸水洗涤3次，将所得固形物用少量乙醇溶解，经0.45μm滤膜滤过，再采用反相制备高效液相进一步分离纯化，以C-18键合硅胶为固定相，60％乙腈水溶液为流动相，流速设定为30ml/min，设定紫外检测器波长310nm，指导收集目标洗脱液，回收试剂至小体积，放置结晶，滤出结晶物用甲醇加热回流溶解，放冷析晶3次，滤出晶体，得到三叶豆紫檀苷2.1g，含量98.3％。

实施例3：

取苦参药材5Kg，粉碎，加40L50％乙醇超声提取2次，合并提取液，浓缩得浸膏286g，向浸膏中加入2.4LpH3的盐酸水溶液超声分散，离心除去酸水层，固形物重复酸水洗涤3次，将所得固形物用少量乙醇溶解经0.3μm滤膜滤过，再采用反相制备高效液相进一步分离纯化，以C-18键合硅胶为固定相，62％甲醇水溶液为流动相，流速设定为60ml/min，设定紫外检测器波长310nm，指导收集目标洗脱液，回收试剂至小体积，放置结晶，滤出结晶物用甲醇加热回流溶解，放冷析晶2次，滤出晶体，得到三叶豆紫檀苷11.4g，含量98.5％。

实施例4：

取苦参药材5Kg，粉碎，加35L55％乙醇加热回流提取3次，合并提取液，浓缩得浸膏308g，向浸膏中加入3LpH4的硫酸水溶液超声分散，过滤除去酸水层，固形物重复酸水洗涤4次，将所得固形物用少量乙醇溶解，经0.45μm滤膜滤过，再采用反相制备高效液相进一步分离纯化，以C-8键合硅胶为固定相，65％乙腈水溶液为流动相，流速设定为40ml/min，设定紫外检测器波长310nm，指导收集目标洗脱液，回收试剂至小体积，放置结晶，滤出结晶物用甲醇加热回流溶解，放冷析晶3次，滤出晶体，得到三叶豆紫檀苷12.9g，含量98.2％。

实施例5：

取苦参药材10Kg，粉碎，加60L65％乙醇超声提取2次，合并提取液，浓缩得浸膏546g，向浸膏中加入5LpH3的盐酸水溶液超声分散，过滤除去酸水层，固形物重复酸水洗涤3次，将所得固形物用少量乙醇溶解，经0.2μm滤膜滤过，再采用反相制备高效液相进一步分离纯化，以C-18键合硅胶为固定相，58％乙腈水溶液为流动相，流速设定为45ml/min，设定紫外检测器波长310nm，指导收集目标洗脱液，回收试剂至小体积，放置结晶，滤出结晶物用甲醇加热回流溶解，放冷析晶2次，滤出晶体，得到三叶豆紫檀苷20.5g，含量98.6％。

实施例6：

取苦参药材10Kg，粉碎，加70L40％甲醇加热回流提取2次，合并提取液，浓缩得浸膏708g，向浸膏中加入12LpH2的硫酸水溶液超声分散，过滤除去酸水层，固形物重复酸水洗涤2次，将所得固形物用少量乙醇溶解，经0.45μm滤膜滤过，再采用反相制备高效液相进一步分离纯化，以C-8键合硅胶为固定相，62％甲醇水溶液为流动相，流速设定为60ml/min，设定紫外检测器波长310nm，指导收集目标洗脱液，回收试剂至小体积，放置结晶，滤出结晶物用甲醇加热回流溶解，放冷析晶3次，滤出晶体，得到三叶豆紫檀苷22.8g，含量98.8％。

Claims

1.一种三叶豆紫檀苷的制备方法，其特征在于包含以下步骤：

2.如权利要求1所述的一种三叶豆紫檀苷的制备方法，其特征在于所述步骤1)中的提取方法可选用加热回流法或超声提取法，提取温度控制在60～100℃。

3.如权利要求1所述的一种三叶豆紫檀苷的制备方法，其特征在于所述步骤2)中的酸水可以是盐酸或硫酸水溶液。

4.如权利要求1所述的一种三叶豆紫檀苷的制备方法，其特征在于所述步骤3)中的滤膜孔径为0.2～0.45μm。

5.如权利要求1所述的一种三叶豆紫檀苷的制备方法，其特征在于所述步骤3)中的高效液相制备色谱是以反相键合硅胶为固定相，以甲醇水或乙腈水为流动相，紫外检测器监测收集目标流分。

6.如权利要求5所述的一种三叶豆紫檀苷的制备方法，其特征在于所述的反相键合硅胶是C-8或C-18键合硅胶。