CN102648184B

CN102648184B - Lxr调节剂

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Publication number: CN102648184B
Application number: CN201080033601.2A
Authority: CN
Inventors: B.B.布希; 小威廉.C.史蒂文斯; E.K.基克; 张海鹰; V.博卢; R.马丁; R.莫汉
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co; Exelixis Patent Co LLC
Current assignee: Exelixis Inc
Priority date: 2009-05-28
Filing date: 2010-05-26
Publication date: 2015-09-30
Anticipated expiration: 2030-05-26
Also published as: CA2761934C; TWI488844B; ES2620451T3; CY1119407T1; AU2010254082A1; PT2435410T; CN102648184A; DK2435410T3; US20120071534A1; US8618154B2; MX2011012559A; JP2012528180A; BRPI1013259A2; WO2010138598A2; ZA201108181B; HRP20170194T1; JP5625050B2; CL2011002972A1; MY153958A; AR078049A1

Abstract

公开了本发明的化合物、其药用盐、异构体或前药，其可用作肝脏X受体(LXR)的活性的调节剂，还公开了含有所述化合物的药物组合物和使用所述化合物的方法。

Description

LXR调节剂

技术领域

本发明涉及调节肝脏X受体(LXR)活性的化合物。本发明也提供了包括本发明的化合物的药物组合物和利用那些组合物来调节肝脏X受体活性的方法。具体而言，提供了用于调节LXR活性的咪唑异构体和衍生物。

背景技术

核受体

核受体是在结构和功能上相关的调节蛋白的超家族，并且是例如类固醇、类视色素、维生素D和甲状腺激素的受体(参见例如，Evans(1988)Science240：889-895)。这些蛋白与顺式作用的元件(cis-acting element)在其靶标基因的启动子中结合，并调节应答于所述受体配体的基因表达。

可基于核受体的DNA结合性质而将其分类(参见例如Evans，同上和Glass(1994)Endocr.Rev.15：391-407)。例如，一类核受体包括糖皮质激素、雌激素、雄激素、孕激素和盐皮质激素受体，这些受体作为同二聚体而与以反转重复序列排列的激素应答单元(HRE)结合(参见例如，Glass，同上)。第二类受体包括受视黄酸、甲状腺激素、维生素D₃、脂肪酸/过氧化物酶体增殖物(例如，过氧化物酶体增殖物激活受体或PPAR)和蜕皮激素激活的那些，其作为与普通伴侣类视色素X受体(即，RXR，也称作9-顺式视黄酸受体；参见例如，Levin等，(1992)Nature 355：359-361，和Heyman等，(1992)Cell68：397-406)的异二聚体而与HRE结合。

RXR在核受体中是独特的，因为它们作为同二聚体与DNA结合，并且许多其它核受体与DNA的结合需要它们作为异二聚体伴侣(参见例如，Mangelsdorf等，(1995)Cell 83：841-850)。后一受体被称作II类核受体超家族，其包括被确定或暗示为基因表达的重要调节子的许多受体。

存在编码RXRα、β和γ的三种RXR基因(参见例如，Mangelsdorf等，(1992)Genes Dev.6：329-344)，所有这三种RXR基因都能与任何II类受体发生异二聚合，虽然似乎在体内伴侣受体优选的是不同的RXR亚型(参见例如，Chiba等，(1997)Mol.Cell.Biol.17：3013-3020)。在成人肝脏中，RXRα是三种RXR中最丰富的(参见例如，Mangelsdorf等，(1992)Genes Dev.6：329-344)，这表明它可能在涉及II型核受体的调节的肝功能中具有显著作用。同样参见Wan等，(2000)Mol.Cell.Biol.20：4436-4444。

LXR _α 和LXR _β

LXR_α主要发现于肝脏中，并以较低水平发现于肾脏、肠、脾脏和肾上腺组织中(参见例如，Willy，等，(1995)Gene Dev.9(9)：1033-1045)。LXR_β在哺乳动物中普遍存在，并且发现于几乎所有受检测的组织中。LXR受某些天然存在的胆固醇氧化衍生物激动(参见例如，Lehmann，等，(1997)J.Biol.Chem.272(6)：3137-3140)。LXR_α受羟胆固醇激动，并且促进胆固醇代谢(Peet等，(1998)细胞93：693-704)。因此，LXR似乎在例如胆固醇代谢中发挥作用(参见例如，Janowski，等，(1996)Nature 383：728-731)。

核受体LXR在协调控制胆汁酸、胆固醇和甘油三酯代谢以保持脂类的体内平衡中起着关键作用。LXR和胆汁酸/氧甾醇调节的基因是开发用于降低血清胆固醇以及治疗心血管和肝脏疾病的药物治疗的潜在靶标。在LXR具有活性的化合物能够在脂类的体内平衡上起到深切的影响，并且能更有效地控制涉及LXR的疾病或障碍。这是通过调节与胆固醇的体内平衡有关的多基因(包括Cyp7a1，细胞色素p450酶家族成员)、胆汁酸合成中的限速步骤，以及ABC膜运载体ABCA1、ABCG1、ABCG5和ABCG8来实现的。ABCA1在胆固醇和磷脂向缺乏脂类的脂蛋白诸如ApoA-I的外流中是关键性的，因而促进血浆HDL水平的增加。此外，ABCG5和ABCG8显示出调节降低的胆固醇的肠吸收并促进胆固醇从肝细胞外流至胆汁。不幸地，除了LXR激动剂的抗动脉粥样硬化效果之外，在细胞培养和动物模型系统中的研究已经表明LXR激动剂增加血浆甘油三酯水平和肝脏的脂肪生成并促进VLDL脂蛋白颗粒生成的增加。Schultz等，Genes&Development 14：2831-2838(2000)；Repa等Genes&Development 14：28119-2830(2000)。使不希望的脂类作用最小化的策略包括鉴别LXRβ选择性的也为部分激动剂的化合物。部分激动剂能够显示出组织特异性的活化或者对核受体的抑制，正如抗雌激素他莫昔芬(tamoxifen)所表明的，其在乳腺组织中起到雌激素信号拮抗剂的作用并在子宫中起到激动剂的作用。LXR亚型特异性的敲除小鼠(isoform-specific null mice)的表征显示LXRα为在肝脏中的LXR活性的起决定性作用的调节剂。然而，在巨噬细胞中，单独的LXRβ足以调节LXR配体对于靶标基因表达的作用。因此，具有有限的LXRα活性的化合物应当具有抗动脉粥样硬化活性，并限制不需要的肝脏作用。

发明内容

因此，我们认识到需要以使对胆固醇代谢和动脉粥样化形成的合乎需要的作用与增加的血浆甘油三酯水平和肝脏的脂肪生成的增加相分离的方式调节LXR核受体活性的化合物、组合物和方法。尽管LXR的完全激动剂同时导致了合乎需要的和不希望的作用，本发明描述了在这两者之间具有有益的分离的化合物，并因此具有在增加的胆固醇逆转运和对血浆甘油三酯和LDL-胆固醇的不利作用之间的改善的治疗指数。

在一个方面，本发明包括化合物或其单独的异构体或异构体的混合物、同位素或药用盐，其可用作肝脏X受体(LXR)活性的调节剂。

提供了用于在组合物中使用的化合物和用于调节核受体活性的方法。具体而言，本发明的化合物用于调节肝脏X受体，LXR_α和LXR_β，并且特别是LXR_β。

在一个方面，本申请提供的化合物为LXR的激动剂。在另一个方面，本申请提供的化合物为LXR的拮抗剂。在某些方面，显示出低效力的激动剂为拮抗剂。

本发明的另一方面涉及治疗、抑制或改善疾病或病症的症状的方法，所述疾病或病症被LXR活性调节或以其它方式影响，或者在所述疾病或病症中涉及LXR活性，所述方法包括向有需要的患者给药治疗有效量的本发明的化合物或其单独的异构体或异构体的混合物或药用盐。

本发明的另一方面涉及调节有需要的患者的胆固醇代谢的方法，包括给药有效胆固醇代谢调节量的本发明的化合物或其单独的异构体或异构体的混合物或药用盐。

本发明的另一方面涉及在有需要的患者中预防或治疗动脉粥样硬化的方法，包括给药有效胆固醇水平降低量的本发明的化合物或其单独的异构体或异构体的混合物或药用盐。

本发明的另一方面涉及调节有需要的患者的LXR活性的方法，包括使本发明的化合物或其单独的异构体或异构体的混合物或药用盐与核受体接触。

本发明的另一方面涉及在有需要的患者中治疗、抑制或改善一种或多种低胆固醇血症的症状的方法，包括给药治疗有效量的本发明的化合物或其单独的异构体或异构体的混合物或药用盐。

本发明的另一方面涉及从有需要的患者的细胞中增加胆固醇外流的方法，包括给药有效胆固醇流出量增加量的本发明的化合物或其单独的异构体或异构体的混合物或药用盐。

本发明的另一方面涉及增加ATP-结合盒A1(ABCA1)和ATP-结合盒G1(ABCG1)在有需要的患者的细胞中的表达的方法，包括给药有效ABCA1和ABCG1表达增加量的本发明的化合物或其单独的异构体或异构体的混合物或药用盐。

本发明的另一方面涉及治疗、抑制或改善受胆固醇或胆汁酸水平所影响的疾病或病症的一种或多种症状的方法，包括向有需要的患者给药治疗有效量的本发明的化合物或其单独的异构体或异构体的混合物或药用盐。

本发明的另一方面涉及药物组合物，所述药物组合物包括本发明的化合物或单独的异构体或异构体的混合物或其药用盐和至少一种药用载体或赋形剂。

本发明的另一方面涉及在有需要的患者中对在人类疾病病理学中涉及的胆固醇逆转运和炎性信号通路的调节，所述疾病病理学包括动脉粥样硬化和诸如心肌梗死和缺血性中风的相关疾病，包括给药有效胆固醇逆转运和炎性信号通路调节量的本发明的化合物或其单独的异构体或异构体的混合物或药用盐。

本发明的另一方面涉及对有需要的患者中代谢综合征的治疗，所述代谢综合征汇集了包括肥胖、高血压、胰岛素耐受性(insulin resistance)和糖尿病的身体代谢病症，所述治疗包括由代谢缺乏和免疫力缺乏所导致的疾病(包括动脉粥样硬化和糖尿病以及自身免疫病症和疾病)的治疗，包括给药治疗有效量的本发明的化合物或其单独的异构体或异构体的混合物或药用盐。

本发明的另一方面涉及在有需要的患者中的动脉粥样硬化、胰岛素耐受性、骨关节炎、中风、高血糖、血脂异常、牛皮癣、年龄和UV(紫外线)暴露相关的皮肤起皱、糖尿病、癌症、阿尔茨海默病、炎症、免疫病症、脂代谢紊乱(lipid disorders)、肥胖、黄斑变性、具有表皮屏障作用紊乱特征的病症、表皮或粘膜分化紊乱或过度增殖的病症或心血管病症的治疗，包括给药治疗有效量的本发明的化合物或其单独的异构体或异构体的混合物或药用盐。

发明详述

在一个方面，本发明包括式I的化合物或其药用盐，

其中：

R¹为氯、氟、甲基或三氟甲基；

R²为H或甲基；

R³为H或甲基；

R⁴为H、氯、氟或甲基；且

n为1或2。

在一些实施方案中，式1的化合物为其中R²和R³为甲基的化合物。

在一些实施方案中，式I的化合物为其中R¹为氯或氟的化合物。在一些这样的实施方案中，R²和R³为甲基。

在一些实施方案中，式I的化合物为其中R⁴为氟的化合物。在一些这样的实施方案中，R¹为氯或氟且R²和R³为甲基。

在一些实施方案中，式I的化合物为其中R²和R³为H的化合物。在一些这样的实施方案中，R¹为氯或氟。

在一些实施方案中，式I的化合物为其中R²为甲基且R³为H的化合物。在一些这样的实施方案中，n为2，R¹为氯，为R⁴为氟。

在另一个方面，本发明包括根据任何前述实施方案的结构式1的化合物及一种或多种药用载体、辅料或稀释剂。

在另一个方面，本发明包括治疗疾病或病症的方法，包括向有需要的患者给药治疗有效量的(a)根据任何前述实施方案的结构式I的化合物或(b)包括根据任何前述实施方案的结构式I的化合物及一种或多种药用载体、辅料或稀释剂的药物组合物，其中所述疾病或病症为动脉粥样硬化、高胆固醇血症、高脂蛋白血症、高甘油三酯血症、脂质营养不良、高血糖、糖尿病(diabetesmellitus)、血脂异常、动脉粥样硬化、胆结石病、寻常痤疮、痤疮样的皮肤病症、糖尿病、帕金森病、癌症、阿尔茨海默病、炎症、免疫病症、脂代谢紊乱、肥胖、具有表皮屏障作用紊乱特征的病症、表皮或粘膜分化紊乱或过度增殖的病症或心血管病症。

在一些实施方案中，所述用于治疗的疾病或病症为高胆固醇血症、高脂蛋白血症、高甘油三酯血症、脂质营养不良、高血糖、动脉粥样硬化，糖尿病或血脂异常。

在另一个实施方案中，本发明包括化合物、其同位素或药用盐，所述化合物选自：

在另一个实施方案中，本发明包括化合物、其同位素或药用盐，所述化合物为2-(1-(3-氯-3′-氟-4′-(羟甲基)-5′-(甲磺酰基)-联苯-4-基)-2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1H-咪唑-4-基)丙-2-醇。

在另一个实施方案中，本发明包括化合物、其同位素或药用盐，所述化合物为2-(2-(2-(2-氯-3-氟苯基)丙-2-基)-1-(3′-氟-4′-(羟甲基)-5′-(甲磺酰基)-联苯-4-基)-1H-咪唑-4-基)丙-2-醇。

在另一个实施方案中，本发明包括化合物、其同位素或药用盐，所述化合物为2-(2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1-(3′-氟-4′-(羟甲基)-5′-(甲磺酰基)-联苯-4-基)-1H-咪唑-4-基)丙-2-醇。

在另一个实施方案中，本发明包括化合物、其同位素或药用盐，所述化合物为2-(2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1-(3，3’-二氟-4′-(羟甲基)-5′-(甲磺酰基)-联苯-4-基)-1H-咪唑-4-基)丙-2-醇。

在另一个实施方案中，本发明包括化合物、其同位素或药用盐，所述化合物为2-{2-[1-(2，6-二氯苯基)乙基]-1-[3，3’-二氟-4′-(羟甲基)-5′-(甲磺酰基)-联苯-4-基]-1H-咪唑-4-基}丙-2-醇。

本申请披露的各种化合物或它们的药用盐可包含一个或多个不对称中心并可因此产生异构体，诸如对映体、非对映体和其它立体异构形式。这些形式可以以绝对立体化学的方式定义为(R)-或(S)-，或对于氨基酸而言定义为(D)-或(L)-。本发明意图包括所有这样可能的单独立体异构体和其混合物，包括它们的外消旋体和光学纯的对映体形式或非对映体形式。所述化合物通常被制备成外消旋体并且其可以便利地作为外消旋体使用，或光学活性的(+)和(-)、(R)-和(S)-、或(D)-和(L)-异构体或相应的非对映体可以使用手性合成子或手性试剂来制备，或者它们可以使用常规技术(诸如手性色谱法或反相HPLC)从外消旋混合物中拆分。当本申请所描述的化合物包含烯属的双键或其它几何学上不对称的中心时，并除非另有说明，所述化合物意图包括E和Z几何异构体。

本发明也包括同位素标记的本发明的化合物，其中一个或多个原子被具有相同的原子序数，但不同于通常在自然界中发现的原子质量或质量数的原子质量或质量数的原子所代替。适合于包含在本发明的化合物中的同位素的实例包括氢(诸如²H或D和³H或T)、碳(诸如¹¹C、¹³C和¹⁴C)、氯(诸如³⁶Cl)、氟(诸如¹⁸F)、碘(诸如¹²³I和¹²⁵I)、氮(诸如¹³N和¹⁵N)、氧(诸如¹⁵O、¹⁷O和¹⁸O)、磷(诸如³²P)和硫(诸如³⁵S)的同位素。某些同位素标记的本发明的化合物(例如掺入放射性同位素的那些)可用于药物和/或底物的组织分布的研究。考虑到它们掺入的容易性及现成的检测手段，放射性同位素氚(³H)和碳-14(¹⁴C)对于该目的而言是特别有用的。用更重的同位素诸如氘(²H或D)取代可提供某些治疗上的由更好的代谢稳定性(例如体内半衰期的增加或剂量需求的降低)所导致的优势，并因此在一些情况下可能是优选的。使用放射正电子的同位素(诸如¹¹C、¹⁸F、¹⁵O和¹³N)的取代可用于检查底物受体占位的正电子断层扫描(PET)研究。

通常同位素标记的本发明的化合物可以通过那些本领域的技术人员已知的常规技术或通过类似于本申请描述的使用适当的同位素标记的试剂代替在其它情况下使用的非标记的试剂的那些方法来制备。

定义

本申请所使用的下面的术语和表达具有所指明的含义。

“核受体”涉及通常与其它转录因子联合来激活或抑制核内一个或多个基因的转录(但也能具有第二信使信号传导作用)的受体。核受体由该受体的天然同源配体激活。核受体通常被发现于胞浆或核内，而不是膜结合的。核受体是各种调节蛋白超家族的成员，所述调节蛋白是各种内源性小分子(例如类固醇、类视色素、维生素D和甲状腺激素)的受体。这些蛋白与其靶标基因的启动子中的顺式作用单元结合并从而应答于配体来调节基因表达。核受体可以基于其DNA结合性质来进行分类。例如，糖皮质激素、雌激素、雄激素、孕激素和盐皮质激素受体作为同二聚体与作为反转重复单元的激素应答单元(HRE)结合。另一个例子是与普通伴侣即类视色素X受体(RXR)一同作为异二聚体与HRE结合的受体，包括由视黄酸、甲状腺激素、维生素D₃、脂肪酸/过氧化物酶体增殖物和蜕皮激素激活的那些受体。LXR属于后一种受体。

“肝脏X受体”或“LXR”涉及参与胆固醇生物合成的核受体。如本申请所用，术语LXR涉及LXR_α和LXR_β，在哺乳动物中发现的该蛋白的两种形式。肝脏X受体-α或LXR_α涉及在美国专利第5,571,696、5,696,233和5,710,004号以及Willy等，(1995)Gene Dev.9(9)：1033-1045中描述的受体。肝脏X受体-β或LXR_β涉及在Peet等，(1998)Curr.Opin.Genet.Dev.8(5)：571-575；Song等，(1995)Ann.N.Y.Acad.Sci.761：38-49；Alberti等，(2000)Gene 243(1-2)：93-103；和其中引用的参考文献；以及美国专利第5,571,696、5,696,233和5,710,004号中描述的受体。

“药用”涉及这样的化合物、物质、组合物和/或剂型，它们在可靠的医学评判范围内适合于与人类和动物的组织接触而不产生过度的毒性、刺激、过敏反应或与合理的利益/风险比相称的其它问题或并发症，或者它们已经另行被美国食品与药物管理局(United States Food and Drug Administration)许可从而在人类和家畜中应用是可接受的。

“药用盐”涉及酸和碱加成盐。

“药用酸加成盐”涉及那些保留了游离碱的生物有效性和性质、不是在生物学或其它方面不合需要的、与无机酸和有机酸形成的那些盐，所述无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，而所述有机酸诸如乙酸、三氟乙酸、丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、丁二酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。

“碱加成盐”涉及那些保留了游离酸的生物有效性和性质、不是在生物学或其它方面不合需要的那些盐。这些盐从无机碱或有机碱与所述游离酸的加成来制备。源自无机碱的盐包括但不限于钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐、铝盐等等。优选的无机盐是铵盐、钠盐、钾盐、钙盐和镁盐。源自有机碱的盐包括但不限于一级、二级和三级胺盐，取代胺(包括天然存在的取代胺)盐、环胺盐和碱性离子交换树脂盐，诸如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、海巴明、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡萄糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂等的盐。特别优选的有机碱是异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己胺、胆碱和咖啡因。

“治疗有效量”涉及当给药于患者时，足以对本申请所描述的疾病或病症产生治疗作用的化合物的量。构成“治疗有效量”的化合物的量将根据化合物、病症及其严重性和待治疗的患者的年龄而变化，但可由本领域普通技术人员常规地确定。

“进行调节(modulating)”或“调节(modulate)”涉及对功能、状况或病症的治疗、预防、抑制、增强或诱导。例如，据信本发明的化合物能够通过刺激胆固醇从人体内粥样硬化病变的清除从而调节动脉粥样硬化。

本申请所用“进行治疗(Treating)”或“治疗”涵盖了在患者(优选人)中对本申请所描述的疾病或病症的治疗，并包括：

i.抑制疾病或病症，即控制其发展；或

ii 缓解疾病或病症，即导致病症的复原。

“患者”涉及遭受本申请所描述的一种或多种疾病和病症或存在遭受所述疾病和病症的可能性的温血动物，诸如哺乳动物，优选人类或人类儿童。

“动脉粥样硬化”涉及其中动脉硬化性斑块在动脉壁内层形成从而导致动脉粥样硬化性心血管疾病的过程。动脉粥样硬化性心血管疾病可以由在相关医学领域中实践的医师识别和理解，并且包括但不限于再狭窄、冠心病(也称作冠状动脉心脏病或缺血性心脏病)、包括缺血性中风、多发梗死性痴呆的脑血管疾病以及包括间歇性跛行和勃起功能障碍的外周血管病。

“血脂异常”涉及血浆中脂蛋白的异常水平，包括降低的和/或升高的水平的脂蛋白(例如，升高水平的低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)和降低水平的高密度脂蛋白(HDL))。

“EC₅₀”涉及特定测试化合物的剂量、浓度或量，所述特定测试化合物在受其诱导、激发或加强的特定应答的50％最大表达时引发剂量依赖的应答。

“胆固醇”涉及作为细胞膜和髓鞘的重要成分的类固醇，并且如本申请所用合并了其普通用途。胆固醇还充当类固醇激素和胆汁酸的前体。

“甘油三酯”或“TG”涉及与甘油分子酯化的三个脂肪酸分子并服务于脂肪酸的储存，所述脂肪酸被肌肉细胞用来产生能量或被摄取并储存在脂肪组织中。

“IC₅₀”涉及测试化合物的量、浓度或剂量，所述化合物在测定诸如包括LXR_α或LXR_β活性的核受体调节等应答的测试中达到50％的最大应答的抑制。

“LXR”或“LXRs”涉及LXR_α和LXR_β。

“LXR_α”(LXR alpha)涉及包括例如替代性剪接异构体和天然存在的异构体的这样的受体的所有哺乳动物形式。代表性LXR_α种类包括但不限于该受体的大鼠(Genbank登录号NM_031627)、小鼠(Genbank登录号BC012646)和人类(GenBank登录号U22662)形式。

“LXR_β”(LXR beta)涉及包括例如替代性剪接异构体和天然存在的异构体的这样的受体的所有哺乳动物形式。代表性LXR_β种类包括但不限于该受体的大鼠(GenBank登录号NM_031626)、小鼠(Genbank登录号NM_009473)和人类(GenBank登录号U07132)形式。

“肥胖的”和“肥胖”涉及体重指数(BMI)对男性大于27.8kg/m²和对女性大于27.3kg/m²(BMI等于体重(kg)/(身高)²(m²))。

用途

本发明的化合物展示出有价值的药物学性质，并且特别可用作LXR激动剂、拮抗剂、反向激动剂、部分激动剂和拮抗剂，或对LXR_α或LXR_β是具有选择性的。本发明的化合物可用于治疗本申请所描述的诸如那些与胆固醇转运、胆固醇逆转运、脂肪酸代谢、胆固醇吸收、胆固醇重吸收、胆固醇分泌、胆固醇排泄或胆固醇代谢有关，或具有从其并发症引发的症状的疾病或病症。

这些疾病包括例如，动脉粥样硬化，动脉粥样硬化性心血管疾病(参见例如，国际专利申请公开第WO 00/57915和WO 00/37077号)、血脂异常、高血糖症、胰岛素耐受性、糖尿病、肥胖、X综合症(美国专利申请公开第20030073614号，国际专利申请公开第WO 01/82917号)、诸如皮肤等周围组织中的过度脂质沉积(黄色瘤)(参见例如，美国专利第6,184,215和6,187,814号)、中风、周围血管闭塞性疾病、失忆症(Brain Research(1997)，第752卷，第189-196页)、视神经和视网膜病变(即，黄斑退化、视网膜色素变性)、对中央或周围神经系统的外伤性损伤的修复(Trends inNeurosciences(1994)，第17卷，第525-530页)、对衰老造成的退化过程的预防(American Journal of Pathology(1997)，第151卷，第1371-1377页)，或阿尔茨海默病((参见例如，国际专利申请公开第WO 00/17334号；Trends inNeurosciences(1994)，第17卷，第525-530页)、对诸如糖尿病性神经病变等疾病中出现的退行性神经病变的预防(参见例如，国际专利申请公开第WO01/82917号)、多发性硬化(Annals of Clinical Biochem.(1996)，第33卷，第2期，第148-150页)和自身免疫疾病(J.LipidRes.(1998)，第39卷，第1740-1743页)。

本发明还提供了使用所要求的化合物和组合物来增加ATP结合盒(ABCA1)的表达(参见例如，国际专利申请公开第WO 00/78972号)从而增加哺乳细胞中的逆向胆固醇转运的方法。

本发明还包括从组织沉积物中除去胆固醇的方法，所述组织沉积物诸如在患有动脉粥样硬化或动脉粥样硬化性心血管病的患者中由这样的疾病的临床表现所显现的动脉粥样硬化斑块或黄色瘤，其中所述方法包括对患者给药治疗有效量的本发明的化合物或组合物。此外，本发明还提供了预防或减少包括缺血性心脏病、缺血性中风、多发梗死性痴呆和间歇性跛行的动脉粥样硬化性心血管病事件的首次或后续发作的风险的方法，所述方法包括对处于这类事件的风险中的患者给药预防性有效量的本发明的化合物或组合物。

本发明的化合物还可以用在用于降低高血糖和胰岛素耐受性的方法即用于治疗糖尿病的方法中(国际专利申请公开号WO 01/82917)，并用在治疗、预防或改善与糖尿病、高血糖或胰岛素耐受性有关或由其引发为并发症的病症的方法中，所述病症包括构成“X综合症”的疾病状态、状况或病症的集聚(参见美国专利申请号20030073614)，所述方法包括对需要这样的治疗的患者给药治疗有效量的本发明的化合物或组合物。此外，本发明还提供了预防或降低在患者中发展高血糖、胰岛素耐受性、糖尿病或X综合症的方法，所述方法包括对处于这类事件的风险中的患者施用预防性有效量的本发明的化合物或组合物。

一般称为糖尿病(diabetes)的韦利斯氏病(diabetes mellitus)涉及源自多重诱发因素且特征为升高的血浆葡萄糖水平(称为高血糖，参见例如，LeRoith，D.等，(eds.)，糖尿病MELLITUS(Lippincott-Raven Publishers，Philadelphia，Pa.U.S.A.1996))的疾病过程。未控制的高血糖由于增加了大血管疾病的风险从而与增加的和过早的死亡率有关，所述疾病包括肾病、神经病变、视网膜病变、高血压、脑血管病和冠心病。因此，对葡萄糖体内平衡的控制是糖尿病治疗的极为重要的手段。

糖尿病有两种主要形式：1型糖尿病(以前称为胰岛素依赖型糖尿病或IDEM)；和2型糖尿病(以前称为非胰岛素依赖型糖尿病或NIDDM)。2型糖尿病的特征是伴随相对而不是绝对的胰岛素缺乏的胰岛素耐受性。2型糖尿病的范围从带有相对的胰岛素缺乏的显著胰岛素耐受性到带有一些胰岛素耐受性的显著胰岛素缺乏。胰岛素耐受性是胰岛素在宽广的浓度范围内发挥其生物作用的能力的减弱。在胰岛素耐受性的个体中，身体分泌出异常高的胰岛素量以补偿这种缺陷。当存在不适当的胰岛素量以补偿胰岛素耐受性和适当的葡萄糖控制时，开始发展受损的葡萄糖耐量。在大量个体中，胰岛素分泌进一步降低而血浆葡萄糖水平升高，造成糖尿病的临床状态。2型糖尿病可以是由于对主要胰岛素敏感的组织：肌肉、肝脏和脂肪组织中在葡萄糖和脂质代谢上的胰岛素刺激的调节效果的极深抵抗引起的。这种对胰岛素响应性的抵抗造成了肌肉中葡萄糖摄取、氧化和储存的葡萄糖激活不足，和脂肪组织中脂肪分解以及肝脏中葡萄糖生成和分泌的不当胰岛素抑制。在2型糖尿病中，自由的脂肪酸水平往往在肥胖和某些不肥胖的患者中升高并且脂质氧化增加。

动脉粥样硬化的过早发展以及心血管和周边血管病的患病率增加是糖尿病患者的特征性特点。高脂血症是这些疾病的重要产生因素。高脂血症是通常特征为血流中例如胆固醇和甘油三酯等血清脂质的异常增加的病症，并且是动脉粥样硬化和心脏病的发展中的重要风险因素。对脂质代谢病症的综述参见例如，Wilson，J.等，(ed.)，Disorders of Lipid Metabolism，第23章，内分泌学教科书，第9版，(W.B.Sanders Company，Philadelphia，Pa.U.S.A.1998)。高血脂症通常分为原发性或继发性高血脂症。原发性高血脂症通常由遗传缺陷造成，而继发性高血脂症通常由诸如各种疾病状态、药物和饮食因素等其它因素造成。或者，高血脂症可能由高血脂症的原发性和继发性成因的组合造成。升高的胆固醇水平与多种疾病状态有关，包括冠心病、心绞痛、颈动脉病、中风、脑动脉硬化和黄色瘤。

血脂异常，或血浆中脂蛋白水平异常，在糖尿病中频繁出现，且据显示为糖尿病主体中冠心病事件和死亡的发病率增加的主要贡献者之一(参见例如，Joslin，E.Ann.Chim.Med.(1927)，第5卷，第1061-1079页)。从那时以来的流行病学研究已经证实了该相关性并显示了糖尿病主体中的冠心病死亡与非糖尿病主体相比增加了七倍(参见例如，Garcia，M.J.等，糖尿病(1974)，第23卷，第105-11页(1974)；和Laakso，M.and Lehto，S.，糖尿病Reviews(1997)，第5卷，第4期，第294-315页)。已经对糖尿病主体中几种脂蛋白异常进行了说明(Howard B.，等，Arteriosclerosis(1978)，第30卷，第153-162页)。

此外本发明还提供了使用本发明的化合物来治疗肥胖以及肥胖并发症的方法。肥胖与包括糖尿病和高血脂症的多种医学病症相关联。肥胖也是发展2型糖尿病的已知风险因素(参见例如，Barrett-Conner，E.，Epidemol.Rev.(1989)，第11卷，第172-181页；和Knowler等，Am.J Clin.Nutr.(1991)，第53卷，第1543-1551页)。

给药和制剂

可以通过任何接受的给药途径将本发明的化合物给药需要其的患者。可接受的给药途径包括但不限于含服、经表皮、子宫颈内、窦内(endosinusial)、气管内，肠内，硬脑膜外、经间质(interstitial)、腹内、动脉内、支气管内、粘液囊内(intrabursal)、大脑内、池内、冠状动脉内、皮内、导管内、十二指肠内、硬膜内、表皮内、食管内、胃内、牙龈内、回肠内、淋巴管内、髓内、脑膜内、肌内、卵巢内、腹膜内、前列腺内、肺内、窦内(intrasinal)、脊柱内、滑膜内、睾丸内、鞘内、小管内、瘤内、子宫内、血管内、静脉内、经鼻、经鼻胃、口服、胃肠外、经皮、硬膜外、经直肠、呼吸(吸入)、皮下、舌下、粘膜下、局部、透皮、穿透粘膜(transmucosal)、穿透气管(transtracheal)、经输尿管、经尿道和经阴道。

本发明的化合物可以以任何可接受的固体、半固体、液体或气体剂型给药。可接受的剂型包括但不限于气雾剂、胶囊剂、霜剂、乳剂、气体、凝胶剂、颗粒剂、搽剂、洗剂、软膏剂、糊剂、散剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和片剂。可接受的递药系统包括但不限于生物可降解的植入剂(例如聚(DL-丙交酯)、丙交酯/乙交酯共聚物和丙交酯/己内酯共聚物)、胶囊剂、灌洗液(douches)、灌肠剂、吸入剂、宫内避孕器、喷雾器、贴剂、泵和栓剂。

本发明的剂型可以单独包括本发明的化合物，或者本发明的化合物可以与常规辅料、药物载体、辅剂和/或其它医用或药用试剂一起制成制剂。可接受的辅料包括但不限于(a)抗粘着剂，诸如交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、淀粉羟乙酸钠、微晶纤维素、淀粉和滑石；(b)粘合剂，诸如纤维素、明胶、羟丙基纤维素、乳糖、麦芽糖醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、山梨醇、淀粉、糖、蔗糖和木糖醇；(c)包衣料，诸如纤维素、虫胶、玉米蛋白和肠溶剂(enteric agents)；(d)崩解剂，诸如纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、微晶纤维素、淀粉羟乙酸钠和淀粉；(e)填充剂，诸如碳酸钙、纤维素、磷酸氢钙、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇和蔗糖；(f)调味剂；(g)着色剂；(h)助流剂，诸如硬脂酸钙、胶体二氧化硅、二十二烷酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、棕榈酸硬脂酸甘油酯(glycerylpalmitostearate)、氢化植物油、硬脂酸镁、三硅酸镁、矿物油、聚乙二醇、二氧化硅、淀粉、硬脂酸盐(stearate)、硬脂酸、滑石、硬脂基富马酸钠(sodiumstearyl fumarate)、苯甲酸钠和锌；(i)润滑剂，诸如硬脂酸钙、氢化植物油、硬脂酸镁、矿物油、聚乙二醇、硬脂基富马酸钠、硬脂酸甘油酯、硬脂酸和滑石；以及(j)防腐剂，诸如氯丁醇、枸橼酸、半胱氨酸、蛋氨酸、对羟基苯甲酸甲酯、苯酚(phenol)、对羟基苯甲酸丙酯、棕榈酸视黄酯、硒、枸橼酸钠、山梨酸、维生素A、维生素C和维生素E。胶囊剂可包含任何前面列出的辅料，并且可以另外包含半固体或液体载体，诸如聚乙二醇或基于植物的油脂。药物载体包括可溶聚合物、不溶或生物可降解的天然和合成聚合物形成的微粒、微囊或微球、脂蛋白、脂质体和胶束。

药物组合物可以为液体的形式，例如，酏剂、糖浆剂、溶液剂、乳剂、混悬剂或其它类似的形式或可以呈现为用于在使用之前用水或其它合适的媒介物进行重构的干燥产物。液体制剂可以包含常规添加剂，诸如(a)液体稀释剂，诸如水、盐水、林格氏溶液(Ringer’s溶液)、不挥发油诸如合成甘油单酯或甘油二酯，或聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它溶剂；(b)表面活性剂、悬浮剂，或乳化剂，诸如聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、饱和聚二元醇甘油酯，甘油一酯，脂肪酸酯，环氧乙烷和环氧丙烷嵌段共聚物、硬脂酸聚氧乙烯酯(polyoxyl stearates)、乙氧基化蓖麻油和乙氧基化羟硬脂酸；(c)缓冲剂，诸如乙酸盐、枸橼酸盐或磷酸盐；(d)螯合剂，诸如乙二胺四乙酸；(e)抗菌剂，诸如苄醇或对羟基苯甲酸甲酯；(f)抗氧化剂，诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；(g)等渗剂，氯化钠或氯化钠；以及甜味剂和调味剂、染料和防腐剂。

本发明的药物组合物将会包含治疗有效量的本发明的化合物或其药用盐，所述化合物为单独的立体异构体或立体异构体的混合物，所述药物组合物的剩余部分由一种或多种药用辅料构成。通常，对于口服给药，本发明的化合物(所述化合物为单独的立体异构体或立体异构体的混合物)或其药用盐将会构成药用组合物的1％-99％的重量，所述组合物的剩余部分由一种或多种药用辅料构成。典型地，本发明的化合物(所述化合物为单独的立体异构体或立体异构体的混合物)或其药用盐将会构成药用组合物的5％-75％的重量，所述组合物的剩余部分由一种或多种药用辅料构成。对于胃肠外给药，本发明的化合物(所述化合物为单独的立体异构体或立体异构体的混合物)或其药用盐将会构成药用组合物的0.01％-1％重量。用于制备本发明的剂型的方法是已知的，或对于那些本领域的技术人员而言将会是显而易见的；例如，参见Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，(Mack PublishingCompany，Easton，Pa.，1990)。

本发明的化合物的治疗有效量将会随多种因素而变化，所述因素包括活性、代谢稳定性、排泄率和化合物作用的持续时间、年龄、体重、一般健康、性别、日常饮食和患者的种族、化合物的给药方式和时间、辅剂的存在或组合物中额外的治疗活性成分，以及寻找对其疗效的疾病的严重度。

可以将本发明的化合物以每天约0.1至约10,000mg范围内的剂量水平给药人类患者。可以对具有约70千克体重的正常的成年人每天给药从约0.15μg至约150mg每千克体重范围内的剂量。典型地，正常的成年人将会每天给药从约0.1mg至约25mg，或0.5mg至约10mg每千克体重。可以以一个或多个单位剂量的形式给药本发明的化合物。可以每天给药1-4次，或每天两次，或每天1次单位剂量。在另一种描述有效剂量的方法中，口服单位剂量为对在患者中实现约0.05至20μg/ml或约1至20μg/ml的血清水平而言是必需的剂量。对于特定的患者，本发明的化合物的最适剂量可以通过本领域的一名普通技术人员来确定。

本发明的化合物或其单独的异构体或异构体的混合物或药用盐还可以同时与、先于或后于下面描述的一种或多种治疗剂的给药而给药。这样的组合治疗包括含有本发明的化合物和一种或多种额外活性试剂的单一药用剂量制剂的给药，以及本发明的化合物和各个活性试剂以其自身单独的药用剂量制剂的给药。例如，可以将本发明的化合物和HMG-CoA还原酶抑制剂对患者一同给药，所述给药是以诸如片剂或胶囊的单一口服剂量组合物或各个试剂以单独口服剂量制剂给药而进行的。当使用单独剂量制剂时，本发明的化合物和一种或多种额外活性试剂可以在基本相同的时间即并行地，或在分开的交错时间即依次地给药；组合治疗被理解为包括所有这些方案。

在一个实施方案中，本发明的化合物与下述的治疗剂中的一种或多种组合使用来治疗动脉粥样硬化：抗高血脂剂、血浆HDL升高剂、抗高胆固醇血症剂、胆固醇生物合成抑制剂(诸如HMG CoA还原酶抑制剂，诸如洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀和西伐他汀(rivastatin))，脂酰辅酶A：胆固醇酰基转移酶(ACAT)抑制剂、普罗布考、雷洛昔芬、烟酸、烟酰胺，胆固醇吸收抑制剂、胆汁酸多价螯合剂(诸如阴离子交换树脂，或季胺(例如，考来烯胺或考来替泊))、低密度脂蛋白受体诱导剂、氯贝丁酯、非诺贝特、苯扎贝特、cipofibrate、吉非贝齐、维生素B6、维生素B12、抗氧化维生素、β-阻滞剂、抗糖尿病剂、血管紧张素II拮抗剂、血管紧张素转换酶抑制剂、血小板聚集抑制剂、纤维蛋白素原受体拮抗剂、阿司匹林或纤维酸衍生物。

在另一个实施方案中，本发明的化合物与下述的治疗剂中的一种或多种组合使用来治疗胆固醇生物合成抑制剂，特别是HMG-CoA还原酶抑制剂。术语HMG-CoA还原酶抑制剂意图包括所有的药用盐、酯、游离酸和内酯形式的具有HMG-CoA还原酶抑制剂活性的化合物，并且因此这样的盐、酯、游离酸和内酯的用途包括在本发明的范围之内。对HMG-CoA还原酶具有抑制剂活性的化合物可以容易地使用本领域公知的测定方法来鉴定。例如，合适的测定方法描述或公开于美国专利号4,231,938和WO 84/02131中。适合的HMG-CoA还原酶抑制剂的实例包括但不限于洛伐他汀参见美国专利号4,231,938)；辛伐他汀参见美国专利号4,444,784)；普伐他汀钠参见美国专利号4,346,227)；氟伐他丁钠参见美国专利号5,354,772)；阿托伐他汀钙参见美国专利号5,273,995)和西伐他汀(也称为西立伐他汀；参见美国专利号5,177,080)。可以与本发明的化合物组合使用的这些和额外的HMG-CoA还原酶抑制剂的结构式描述于M.Yalpani，“Cholesterol Lowering Drugs，”Chemistry&Industry，第85-89页(1996年2月5日)的第87页中。在目前优选的实施方案中，HMG-CoA还原酶抑制剂选自洛伐他汀和辛伐他汀。

在额外的实施方案中，取决于所需的靶标治疗，本发明的化合物与下述的治疗剂中的一种或多种组合使用来与一种或多种额外的活性糖尿病剂治疗(参见例如，Turner，N.等，Prog.Drug Res.(1998)，第51卷，第33-94页；Haffner，S.，Diabetes Care(1998)，第21卷，第160-178页；和DeFronzo，R.等(eds.)，Diabetes Reviews(1997)，第5卷，第4期)。许多研究已经调查了与口服药剂组合治疗的益处(参见例如，Mahler，R.，J.Clin.Endocrinol.Metab.(1999)，第84卷，第1165-71页；United Kingdom Prospective DiabetesStudy Group：UKPDS 28，Diabetes Care(1998)，第21卷，第87-92页；Bardin，C。W.(ed.)，Current Therapy In Endocrinology And Metabolism，第6版(Mosby--Year Book，InC。，St.Louis，Mo.1997)；Chiasson，J.等，Ann.Intern.Med.(1994)，第121卷，第928-935页；Coniff，R.等，Clin.Ther.(1997)，第19卷，第16-26页；Coniff，R.等，Am.J.Med.(1995)，第98卷，第443-451页；Iwamoto，Y.等，Diabet.Med.(1996)，第13卷，第365-370页；Kwiterovich，P.，Am.J.Cardiol(1998)，第82(12A)卷，第3U-17U页)。这些研究显示糖尿病和高脂血症的调节可以通过在治疗方案中添加第二种药剂而进一步地改善。

在进一步的实施方案中，本发明的化合物与下述的治疗剂中的一种或多种组合使用来治疗糖尿病：磺脲类(诸如氯磺丙脲、甲苯磺丁脲、醋酸己脲、妥拉磺脲、格列本脲、格列齐特、格列本脲微粉(glynase)、格列美脲和格列吡嗪)，双胍类(诸如二甲双胍)、噻唑烷二酮类(诸如环格列酮、吡格列酮、曲格列酮和罗格列酮)和相关的胰岛素增敏剂，诸如PPARα、PPARβ和PPARγ的选择性和非选择性活化剂；脱氢表雄酮(也涉及DHEA或其共轭硫酸酯，DHEA-SO4)；抗糖皮质激素类；TNFα抑制剂；α-糖苷酶抑制剂(诸如阿卡波糖、米格列醇和伏格列波糖)、普兰林肽(人激素支链淀粉素(amylin)的合成类似物)，其它胰岛素促分泌剂(诸如瑞格列奈、格列喹酮和那格列奈)、胰岛素以及上述讨论的用于治疗动脉粥样硬化的治疗剂。

仍在另一个实施方案中，本发明的化合物与下述的治疗剂中的一种或多种组合使用来治疗肥胖或肥胖相关的病症。这样的药剂，包括但不限于苯基丙醇胺、芬特明、安非拉酮、马吲哚、芬氟拉明、右芬氟拉明、非尼拉敏、β3肾上腺素受体激动剂；西布曲明、胃肠脂肪酶抑制剂(诸如奥利司他)和来普汀。其它用于治疗肥胖或肥胖相关的病症的药剂包括神经肽Y、肠抑素、胆囊细胞分裂素(cholecytokinin)、铃蟾肽、支链淀粉、组胺H₃受体、多巴胺D₂受体调节剂、促黑激素、促肾皮素释放因子、促生长激素神经肽和γ-氨基丁酸(GABA)。

合成

本发明的化合物可以用多种那些本领域的技术人员公知的方法来制备，包括但不限于下面描述的那些，或通过运用那些有机合成领域的技术人员已知的标准技术来对这些方法进行修饰。所述化合物用ChemDraw Ultra 9.0或10.0(CambridgeSoft)来命名。试剂和起始原料是可商购的，或是本领域的普通技术人员通过公知技术容易进行合成的。应当理解在下面的描述中，所描述的式的取代基和/或变量的组合仅当这样的贡献导致形成稳定化合物时才是容许的。除非另有指明，所有与NMR和/或质谱数据有关的化合物都进行了制备及NMR和质谱测量。

方案1

(a)Me₃Al，甲苯，0℃-80℃；(b)i.溴丙酮酸乙酯，NaHCO₃，THF，70-80℃；ii.AcOH，甲苯或TFA，EtOH，80℃；(c)R₃MgBr，THF或THF/CH₂Cl₂，0℃-室温；(d)K₂CO₃，PdCl₂(dppf)，DME/H₂O，80℃。

通常，式(0036)的化合物通过首先使式(0032)的苯胺与2-(苯基)-2-甲基丙腈(0031)在三甲基铝的存在下反应在标准分离程序后得到式(0033)的化合物来制备(方案1)。在接下来的步骤中，将脒(0033)在碱性条件下在升高的温度暴露于卤代酯(haloester)(诸如α-溴丙酮酸乙酯)，接着暴漏于脱水条件(诸如三氟乙酸/乙醇)，在标准分离程序后提供式(0034)的1H-咪唑。然后使式(0034)的化合物经历官能团转化(诸如从酯到原醇)。在钯介导的偶合反应(例如Suzuki反应)中，式(0035)的化合物然后与(2-氟-6-(磺酰基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)苯基)甲醇(0017)反应(参见下述方案2)，在标准分离程序后得到式(0036)的化合物。

方案2

a)i.1.0M LHMDS于THF中的溶液；ii.R₄SNa，回流；b)BH₃-THF，0℃-回流；c)mCPBA，CH₂Cl₂；d)PdCl₂(dppf)，双(频那醇合)二硼，KOAc，DMSO，80℃。

方案2：步骤2a

4-溴-2-氟-6-(甲基硫基)苯甲酸的制备

向500mL与冷凝器相连接的圆底烧瓶中加入4-溴-2，6-二氟苯甲酸(16.0g，67.5mmol)和无水THF(110mL)。在滴加1.0M二-(三甲基甲硅烷基)氨基锂(74mL，1.1当量)前将反应烧瓶在冰浴中冷却。在加入甲硫醇钠(5.21g，74.2mmol)前将反应混悬液在室温搅拌20min。将反应溶液在回流状态下搅拌3hr。在使反应的等分试样于稀HCl水溶液中淬灭并运行GCMS：实测m/z＝265,267母离子后，确定反应完成。用H₂O淬灭冷却的反应混合物并用EtOAc(200mL)稀释。将反应混合物转移至分液漏斗，并加入1.0N HCl水溶液，从而得到pH＝2-3的溶液。分离乙酸乙酯层，用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，并真空浓缩，得到14.6g(81％收率)的中间体6-氟-4-溴-2-甲基硫烷基-苯甲酸，为蜡状白色固体。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.18(s，1H)，7.12(dd，J＝8Hz，1H)，2.49(s，3H)；GCMS m/z＝265，267[M]⁺。

可替换的，中间体6-氟-4-溴-2-甲基硫烷基-苯甲酸按下述方法来制备：

向20L烧瓶中先后加入二甲基甲酰胺(14.5L，10.0体积)和氢氧化钠(293.7g，1.2当量)并将反应物料冷却至-15至-10℃。在-15至-10℃加入4-溴-2，6-二氟苯甲酸(1450g，1.0当量)，历时10-15min并搅拌额外的10-15min。在-10至-5℃加入甲硫醇钠(514.6g，1.2当量)，历时5-10min。加入完成时，反应的温度历时45至60min升高至25-28℃，并保持在该温度1.5-2h。然后将反应的温度升高至60-65℃(历时30-60min)并保持在60-65℃5h直到确认反应完成。然后将反应混合物冷却至20-25℃并用冷却的(5-10℃)2N HCl(5.045L的12N HCl于30.3L水中的溶液)溶液淬灭。淬灭之后，加入乙酸乙酯(14.5L，10体积)并将混合物搅拌10-15min。分离各相并用乙酸乙酯(7.25L，5体积)萃取水层。分离两相并用盐水溶液(725g的NaCl于3.625L的水中的溶液)洗涤合并的有机层。分离各相并用水(5.0体积，7.25L)洗涤有机层。分离各相并用硫酸钠(1450g)干燥有机层。过滤有机层从而除去硫酸钠，然后将其用乙酸乙酯(2.9L，2体积)洗涤。在45-50℃/30-40mmHg减压浓缩有机层至～1至1.2体积并在40-45℃加入石油醚(7.25L，5体积)，历时15-20min。将溶液冷却至20-25℃，历时20-25min。将固体过滤并用石油醚(2.9L，2.0体积)洗涤并将产物在25-28℃，0.4至0.7mbar真空干燥，得到1410g(87％，99.40面积％)的中间体6-氟-4-溴-2-甲基硫烷基-苯甲酸。

步骤2b

(4-溴-2-氟-6-(甲基硫基)苯基)甲醇的制备

向N₂净化的500mL与冷凝器相连接的圆底烧瓶中加入6-氟-4-溴-2-甲基硫烷基-苯甲酸(14.6g，55.0mmol)和无水THF(70mL)。在滴加1.0MBH₃-THF(83mL，1.5当量)溶液(于THF中)之前将反应溶液冷却至0℃。在室温搅拌反应溶液然后回流额外的2hr。在用1∶1 H₂O/THF溶液淬灭之前冷却反应溶液。将反应溶液转移至加入EtOAc(100mL)和K₂CO₃的水溶液的分液漏斗。分离乙酸乙酯相，用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，并真空浓缩。粗产物通过110g SiO₂柱色谱分离(使用100％Hx至55％EtOAc的溶剂梯度)。获得纯化的标题产物，为固体白色蜡状物(13.7g，99％收率)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.13(s，1H)，7.06(dd，J₁＝8Hz，J₂＝2Hz，1H)，4.77(s，2H)，2.51(s，3H)，2.20-2.05(br s，1H)；GCMS m/z＝251，253[M]⁺。

可替换的，中间体(4-溴-2-氟-6-(甲基硫基)苯基)甲醇按下述方法来制备：

在氮气下向20L烧瓶中先后加入4-溴-2-氟-6-(甲基硫基)苯甲酸(1400g，1.0当量)和THF(14L，10体积)。在25-28℃向该溶液中加入硼烷-二甲硫络合物(802.41g，1000mL)，历时30-45min。历时30-45min将反应温度升高至60-65℃，并保持该温度直到HPLC显示＜1％的4-溴-2-氟-6-(甲基硫基)苯甲酸(～3-4h)。反应完成之后将混合物冷却至10-15℃，历时30-40min。然后在10-15℃用甲醇(2.1L，1.5体积)淬灭反应，历时1至1¹/₂ h。然后将反应物料在40-50℃/0.4至0.7mbar减压浓缩至1-1.5体积。将所得混合物溶解于DCM(8.4L，6体积)中。用氯化铵溶液(560g NH₄Cl于2.8L水中的溶液，2体积)洗涤有机层。分离各相并用10％NaHCO₃溶液(2.8L，2体积)、饱和盐水溶液(2.1L，1.5体积)和水(4.2L，3体积)洗涤有机层。分离有机层并用硫酸钠(700g)干燥。过滤除去硫酸钠并用DCM(2.8L，2体积)洗涤。在40-45℃/0.4至0.7mbar减压浓缩有机层至1-1.2体积，得到产物，将其在45-50℃/0.4至0.7mbar真空干燥。获得90％收率(1200g)及90.07面积％的标题产物。

步骤2c

(4-溴-2-氟-6-(甲磺酰基)苯基)-甲醇的制备

向500mL烧瓶中加入(4-溴-2-氟-6-(甲基硫基)苯基)甲醇(13.7g，54.6mmol)和无水二氯甲烷(125mL)。在分批加入3-氯过氧苯甲酸(77％最大浓度，Aldrich)(18.8g，2当量)之前将溶液在冰浴中冷却至0-3℃。然后将反应溶液温热至室温并在该温度保持18h。然后将反应真空浓缩从而除去二氯甲烷并用乙酸乙酯和1M NaOH水溶液将残余物洗涤至分液漏斗中。分离乙酸乙酯层，用1M NaOH水溶液洗涤，用Na₂SO₄干燥，并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化(Biotage，65x 200mm SiO₂柱，从100％己烷至90％乙酸乙酯梯度洗脱)。合并适当的级份(fractions)并真空浓缩，得到标题化合物，为无色，半结晶固体，收率：8.1g(52％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ7.98(dd，J＝8Hz，1H)，7.91(s，1H)，5.45(t，J＝8Hz，1H)，4.88(dd，J₁＝8Hz，J₂＝2Hz，2H)，3.42(s，3H)；¹⁹F NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ-111.8ppm；GCMS m/z＝283，285[M]⁺。

步骤2d

(2-氟-6-(甲磺酰基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)苯基)甲醇的制备

向干燥N₂净化的100mL圆底烧瓶中称量(4-溴-2-氟-6-(甲磺酰基)苯基)-甲醇(1.98g，6.99mmol)、双(频那醇合)二硼(2.13g 1.2当量)、二氯[1，1’-二(二苯基膦基)二茂络铁]钯(II)二氯甲烷加合物(560mg，10mol％)、碳酸钾(2.06g，3当量)和DMSO(25mL)。使所得的混悬液在90℃搅拌3h。发现反应溶液的等分试样不再包含起始的溴化物(通过LCMS分析确定)。用乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)稀释冷却的反应混悬液并滤过填塞了硅藻土(Celite)的布氏漏斗。将所得的滤液转移至分液漏斗，并分离有机相。用乙酸乙酯萃取水相，并用盐水洗涤合并的乙酸乙酯相，用Na₂SO 4干燥，并真空浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(Biotage SP-1，40g SiO₂柱，从100％己烷至60％乙酸乙酯梯度洗脱)残余物，得到澄清的粘性油状物。通过将所述油状物溶解于二氯甲烷中及再沉淀(加入己烷之后导致的)，分离无定形白色粉末状的产物。分离固体白色粉末状的标题化合物，得到：1.9g(82％收率)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.28(s，1H)，7.79(d，J＝8Hz，1H)，5.03(d，J＝8Hz，2H)，3.23(s，3H)3.05(t，J＝8Hz，1H)，1.35(s，6H)；¹⁹F NMR(400MHz，CDCl₃)δ-116.3ppm。

可替换的，中间体(2-氟-6-(甲磺酰基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)苯基)甲醇按下述方法来制备：

向500mL装备有搅拌棒、温度探针、回流冷凝器和氮气入口的夹套反应釜中先后加入甲基四氢呋喃(methyl tetrahydroran)(MeTHF)(75mL，5体积)和乙酸钾(5.2g，52.98mmoles，1当量)、(氧联二-2，1-亚苯基)二(二苯基膦)(322mg；597.3μmoles，0.01125当量)和双(频那醇合)二硼(17.51g，68.95mmoles，1.3当量)。将反应烧瓶抽真空至小于150托，并且然后用氮气回充。将该脱气过程重复3次。将Pd(OAc)₂(94.2mg；419.6μmoles，0.0075当量)加入至反应器中并将反应烧瓶抽真空至小于150托，并且然后用氮气回充并重复上述顺序3次。将所得的浆状物在20-25℃老化15min。该15min期间完成之后，将所述浆状物加热至80℃的内部温度。当反应器中的混合物加热至该温度时，在单独的烧瓶中先后加入(4-溴-2-氟-6-(甲磺酰基)苯基)-甲醇(15.03g，53.09mmoles，1当量)和MeTHF(75ml，5体积)。在使用之前，将所得的溶液通过在液面下用氮气鼓泡至少15min来脱气。一旦催化剂混合物已经到达回流状态，将(4-溴-2-氟-6-(甲磺酰基)苯基)-甲醇于MeTHF中的脱气的溶液以单独的部分加入至反应中并使其反应。在加入底物之后，典型地花费～20小时以完成反应。完成之后(典型地＜0.75RAP的原料)，将反应冷却至20-25℃。一旦处于室温，将反应用MeTHF(75ml，5体积)稀释并用5wt％NaCl溶液(7.5体积，110ml)洗涤至少15min。分离各相，并将上面的富含产物的MeTHF流滤过硅藻土以除去不溶性的钯残余物。用MeTHF(75ml，5体积)洗涤硅藻土饼。将反应混合物用功能化硅胶(30当量)处理从而除去钯和颜色。将浆状物搅动至少60min并且然后过滤从而除去硅胶。用MeTHF(5体积，75ml)洗涤使用过的硅胶。用水(5体积，75ml)洗涤合并的有机相。将有机物真空(60-70托，浴温为30℃)蒸馏至5体积(75ml)。当到达75ml界标时，停止蒸馏并滴加庚烷(75ml，5体积)至反应溶液中。在已经加入～35ml庚烷时，产物开始从溶液中结晶。加入完成时过滤分离产物并将湿润的饼用MeTHF-庚烷(1∶9)溶液(2x 75ml)洗涤并在50℃干燥。获得标题产物的白色固体，13.64g，(78％收率)面积％为99.58。

实施例1

2-(1-(3-氯-3′-氟-4′(羟甲基)-5′-(甲磺酰基)-联苯-4-基)-2-(2-(2-氟苯基)丙-2-基)-1H-咪唑-4-基)丙-2-醇

实施例1a

2-(2-氟苯基)-2-甲基丙腈的制备

向500mL连接有已经用干燥N₂净化的加料漏斗的3-颈圆底烧瓶中，加入2-氟苯基乙腈(11.0g，81.4mmol)和无水THF(70mL)。在滴加1.0M叔丁醇钾(195mL，2.4摩尔当量)于THF中的溶液之前冷却反应溶液至-10℃。在加入碘甲烷(15.2mL，244mmol)之前将反应溶液在-10℃搅拌20min。将反应溶液搅拌温热至室温持续4hr。通过加入NH₄Cl水溶液使反应溶液淬灭并用EtOAc(200mL)稀释。将有机相分配，用NH₄Cl水溶液洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，真空浓缩并通过240g Biotage SP-1的SiO₂柱(使用100％ Hx至50％EtOAc的溶剂梯度)进行色谱分离，得到10.1g(76％收率)的标题产物。GCMS m/z＝163[M]⁺。

实施例1b

N-(4-溴苯基)-2-(2-氟苯基)-2-甲基丙脒的制备

向烘干的、N₂净化的连接有加料漏斗的250mL圆底烧瓶中加入4-溴苯胺(7.31g，42.5mmol)和无水甲苯(40mL)。在0℃向反应溶液中加入2.0MMe₃Al(32mL，1.5摩尔当量)溶液。将反应溶液在0℃搅拌30min，然后将2-(2-氟苯基)-2-甲基丙腈(7.62g，46.7mmol)于甲苯(25mL)中的溶液加入至反应烧瓶中。将反应溶液在90℃搅拌5hr。用酒石酸钠钾水溶液淬灭冷却的反应溶液。静置20min之后，将有机相分配并用酒石酸钠钾溶液洗涤。将有机溶液用1N HCl(100mL x 3)水溶液萃取。通过加入1N NaOH水溶液使合并的HCl水溶液中和并用二氯甲烷(200mL x 2)萃取。将二氯甲烷产物溶液用Na₂SO ₄干燥、过滤，并真空浓缩，得到标题化合物(5.5g，39％收率)。GCMS m/z＝334、336[M]⁺。

实施例1c

1-(4-溴苯基)-2-(2-(2-氟苯基)丙-2-基)-1H-咪唑-4-羧酸乙酯的制备

向250mL与冷凝器相连接的圆底烧瓶中加入N-(4-溴苯基)-2-(2-氟苯基)-2-甲基丙脒(5.0g，15mmol)、无水THF(80mL)、NaHCO₃(2.52g，30mmol)和90％溴丙酮酸乙酯(1.90mL，15.1mmol)。在通过LCMS分析之前将反应混合物在70℃搅拌2hr。轻轻倒出冷却的反应混合物并真空浓缩。将残余物吸收至甲苯(65mL)和乙酸(1.8mL)中。将溶液回流搅拌1hr。将冷却的溶液用H₂O(150mL x 3)洗涤，用Na₂SO ₄干燥，过滤，真空浓缩，并通过SiO₂柱进行色谱分离(使用100％Hx至70％EtOAc梯度)，得到纯化的标题化合物(4.3g，67％收率)。LCMS(ES)：m/z＝431.3、433.3[M+H]⁺。

实施例1d

2-(1-(4-溴苯基)-2-(2-(2-氟苯基)丙-2-基)-1H-咪唑-4-基)丙-2-醇的制备

向250mL用干燥N₂净化和连接有加料漏斗的圆底烧瓶中加入3.0MMeMgBr(12mL，3.7当量)于Et₂O中的溶液。在滴加1-(4-溴苯基)-2-(2-(2-氟苯基)丙-2-基)-1H-咪唑-4-羧酸乙酯(4.22g，9.78mmol)于无水二氯甲烷(80mL)中的溶液之前将烧瓶冷却至0℃。将反应溶液搅拌，温热至室温，历时1hr。通过加入NH₄Cl水溶液使反应溶液淬灭。将混合物倒入分液漏斗中并将二氯甲烷层进行分配，用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩并通过40g SiO₂柱进行色谱分离(使用100％Hx至70％EtOAc的梯度)从而得到标题化合物(3.19g，78％收率)。LCMS(ES)：m/z＝417.3、419.3[M+H]⁺。

实施例1

2-(1-(3′-氟-4′-(羟甲基)-5′-(甲磺酰基)-联苯-4-基)-2-(2-(2-氟苯基)丙-2-基)-1H-咪唑-4-基)丙-2-醇的制备

向50mL圆底烧瓶中加入2-(1-(4-溴苯基)-2-(2-(2-氟苯基)丙-2-基)-1H-咪唑-4-基)丙-2-醇(380mg，911μmol)、DME(25mL)和H₂O(6mL)。在加入(2-氟-6-(甲磺酰基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)苯基)甲醇(360mg，1.09mmol)、碳酸钾(380mg，2.73mmol)和二氯[1，1’-二(二苯基膦基)二茂络铁]钯(II)二氯甲烷加合物(74mg，91μmol)之前将溶液用N₂鼓泡10min。将反应混合物在80℃搅拌2h。将冷却的反应溶液用EtOAc(30mL)稀释并滤过填塞了硅藻土的布氏漏斗。用NH₄Cl水溶液(150mL x 2)洗涤滤液。将有机相用Na₂SO₄干燥、过滤，并真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(Biotage SP-1，25g SiO₂柱，从5％EtOAc至100％EtOAc梯度洗脱)，得到标题化合物(100mg，20％收率)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.02(d，J＝2Hz，1H)，7.51(dd，J₁＝2Hz，J₂＝10Hz，1H)，7.29(d，J＝92H)，7.08-7.16(多重峰，1H)，6.85-6.92(多重峰，3H)，6.77-6.84(多重峰，2H)，6.65(s，1H)，5.09(d，J＝6Hz，2H)，3.35(s，1H)，3.30(2，3H)，3.02(t，J＝6Hz，1H)，1.72(s，6H)，1.62(s，6H)；¹⁹F NMR(400MHz，CDCl₃)δ-112.1，-113.5ppm；LCMS(ES)m/z＝541.3[M+H]⁺，563.2[M+Na]⁺。

实施例2-8

使用合适的苯胺和2-(苯基)-2-甲基丙腈，以类似于实施例1中描述的方法制备下述所有化合物。如果是非可商购的，则使用对于一名本领域的技术人员而言是非常显而易见的标准技术来制备腈。

化合物2具有下述NMR特征：1H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.02(s，1H)，7.56-7.49(m，1H)，7.35(d，J＝2.0，1H)，7.12-6.96(m，3H)，6.68(d，J＝8.2，1H)，6.66-6.60(m，1H)，6.56(s，1H)，5.08(d，J＝5.4，2H)，3.36(s，1H)，3.29(s，3H)，2.92(t，J＝7.0，1H)，2.07(s，3H)，1.97(d，J＝2.4，3H)，1.72(d，J＝7.4，3H)，1.59(s，6H)。

化合物3具有下述NMR特征：1H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.00(m，1H)，7.57(d，J＝2.1，1H)，7.55-7.49(m，1H)，7.13(s，1H)，7.11(s，1H)，7.07(dd，J＝8.3，2.1，1H)，7.01-6.95(m，1H)，6.81(d，J＝8.3，1H)，6.59(s，1H)，5.09(d，J＝5.4，2H)，3.30(s，3H)，3.26(m，1H)，2.89(t，J＝7.0，1H)，2.06(s，3H)，1.92(s，3H)，1.61(s，3H)，1.59(s，3H)。

化合物4具有下述NMR特征：1H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.97(s，1H)，7.47(dd，J＝10.0，1.8，1H)，7.31-7.20(m，2H)，7.00(d，J＝8.3，2H)，6.92-6.71(m，3H)，6.65(s，1H)，5.08(dd，J＝7.0，1.6，2H)，3.29(s，3H)，3.27(s，1H)，2.90(t，J＝7.0，1H)，1.82(s，6H)，1.60(s，6H)。

化合物5具有下述NMR特征：1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.89-7.90(多重峰，1H)，7.82-7.85(多重峰，1H)，7.52(d，J＝8.6Hz，2H)，7.16(d，J＝8.6Hz 2H)，7.07-7.09(多重峰，2H)，6.94-6.98(多重峰，1H)，6.80(s，1H)，5.55(t，J＝5.2Hz，1H)，4.93-4.95(多重峰，2H)，4.65(s，1H)，3.45(s，3H)，1.96(s，6H)，1.45(s，6H)。

化合物6具有下述NMR特征：1H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.97(s，1H)，7.46(dd，J＝9.9，1.8，1H)，7.23-7.18(m，1H)，7.12(dd，J＝10.3，1.9，1H)，6.97(ddd，J＝23.4，9.0，4.0，2H)，6.88-6.79(m，2H)，6.61(s，1H)，5.08(d，J＝5.4，2H)，3.30(s，3H)，3.27-3.23(m，1H)，2.92(t，J＝6.9，1H)，1.61(s，12H)。

化合物7具有下述NMR特征：1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.95-7.90(m，2H)，7.62(dd，1H，J＝11，1.5Hz)，7.33(dd，1H，J＝9.5，1.5Hz)，7.13-7.08(m，3H)，6.85(s，1H)，6.80-6.70(m，1H)，5.57(t，1H，J＝5.3Hz)，4.95(d，2H，J＝4.3Hz)，4.71(s，1H)，3.47(s，3H)，1.85(s，6H)，1.46(s，6H)。

化合物8具有下述NMR特征：1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.96-7.90(m，2H)，7.49(dd，1H，J＝11，1.5Hz)，7.34(dd，1H，J＝9.5，1.5Hz)，7.20-7.10(m，1H)，7.05-6.94(m，2H)，6.90-6.75(m，3H)，5.57(t，1H，J＝5.3Hz)，4.94(d，2H，J＝4.3Hz)，4.70(s，1H)，3.47(s，3H)，1.68(s，6H)，1.47(s，6H)。

实施例9

2-(2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1-(3，3’-二氟-4′-(羟甲基)-5′-(甲磺酰基)-联苯-4-基)-1H-咪唑-4-基)丙-2-醇

实施例9a

2-(2，6-二氯苯基)-2-甲基丙腈的制备

在-66℃(丙酮/干冰)向1M叔丁醇钾(403mL，403mmol)溶液中缓慢加入2-(2，6-二氯苯基)乙腈(25.0g，134mmol)于无水THF(150mL)中的溶液。将混合物在-66℃搅拌20分钟。然后，在-66℃滴加碘甲烷(33.6mL，538mmol)，历时25分钟。在这个阶段，其为放热的并且观察到大量淡黄色沉淀。将混悬液在-60℃搅拌30分钟。将反应混合物用200mL冰水淬灭，并用醚(3x 150mL)萃取。合并有机物，用150mL盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，并用旋转蒸发仪浓缩。将粗产物(30g，黄色油状物)通过柱色谱法(ISCO，330g硅胶，20％EtOAc于己烷中的溶液)纯化，得到2-(2，6-二氯苯基)-2-甲基丙腈(28.2g，132mmol，98％收率)，为带淡黄色的油状物。

¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)δ7.35(d，2H，J＝8.03Hz)，7.16(t，1H，J＝8.0Hz)，2.09(s，6H)；¹³C-NMR(CDCl₃，126MHz)δ134.6，133.8，131.4，129.0，124.1，38.6，29.2；MS m/e 214.10(M+H⁺)；HPLC(XBridge 5μC18 4.6x50mm，4mL/min，溶剂A：10％MeOH/水与0.2％H₃PO₄，溶剂B：90％MeOH/水与0.2％H₃PO₄，用0-100％B的梯度，历时4分钟)：3.16分钟。

实施例9b

N-(4-溴-2-氟苯基)-2-(2，6-二氯苯基)-2-甲基丙脒的制备

将2-(2，6-二氯苯基)-2-甲基丙腈(20g，93mmol)和4-溴-2-氟苯胺(28.4g，149mmol)溶解于无水邻二甲苯(200mL)中并在N₂下加热至100℃。滴加(约每分钟0.9mL)三甲基铝(2M)/甲苯(140mL，280mmol)(历时2.5小时)，同时将反应混合物在100℃搅拌。加入之后，将反应混合物在100℃搅拌30分钟，并且然后冷却至-5℃。将反应混合物非常小心地用酒石酸钾钠(20g于100mL水中的溶液)淬灭(注意：产生气体和热)。将反应混合物滤过硅藻土545。用1N HCl(4X 70mL)洗涤滤液。将水溶液用2N NaOH中和并用EtOAc(4X 100mL)萃取。合并有机物，用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，并用旋转蒸发仪浓缩，得到24g的粗产物。将粗产物用72mL MTBE和240mL己烷重结晶从而得到N-(4-溴-2-氟苯基)-2-(2，6-二氯苯基)-2-甲基丙脒(17.5g，43.3mmol，46.4％收率)，为白色固体(纯度：99％)。¹H-NMR(MeOD，400MHz)δ7.42(d，2H，J＝8.0Hz)，7.30(m，2H)，7.16(t，1H，J＝8.0Hz)，6.93(t，1H，J＝8.0Hz)，2.11(s，6H)；¹³C-NMR(DMSO-d₆，100MHz)δ166.5，156.1，153.7，140.6，138.5，135.9，131.4，128.6，128.0，125.7，119.5，112.9，50.0，29.2；MS m/e 403.09(M+H⁺)；HPLC(XBridge 5μC18 4.6x50mm，4mL/min，溶剂A：10％MeOH/水与0.2％H₃PO₄，溶剂B：90％MeOH/水与0.2％H₃PO₄，用0-100％B的梯度，历时4分钟)：2.32分钟。

实施例9c

1-(4-溴-2-氟苯基)-2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-4-羟基-4，5-二氢-1H-咪唑-4-羧酸乙酯的制备

在55℃向N-(4-溴-2-氟苯基)-2-(2，6-二氯苯基)-2-甲基丙脒(48.0g，119mmol)、K₂CO₃(41.0g，297mmol)于甲苯(180mL)和THF(180mL)中的混合物中缓慢加入3-溴-2-氧代丙酸乙酯(23.3mL，166mmol)于24mL THF中的溶液，历时50分钟。将反应混合物保持在55℃1.5小时。观察到白色浆状物。将反应混合物冷却至5℃。滴加HCl(0.5N，450mL)(终点pH＝9～10)。加入之后，将混悬液冷却至0℃。过滤收集固体，用水(2x 50mL)洗涤，并且然后在60℃真空干燥箱中干燥过夜。获得1-(4-溴-2-氟苯基)-2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-4-羟基-4，5-二氢-1H-咪唑-4-羧酸乙酯(59g，114mmol，96％收率)，为白色固体。¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)δ7.11(m，3H)，6.96(m，2H)，6.72(t，1H，J＝8.28Hz)，4.35(m，2H)，4.25(d，1H，J＝10.5Hz)，3.80(d，1H，J＝10.8Hz)，1.98(s，3H)，1.93(s，3H)，1.38(t，3H，J＝7.03Hz)；¹³C-NMR(CDCl₃，126MHz)δ173.0，171.5，159.8，157.8，137.3，135.7，132.1，131.1，128.1，127.4，125.6，122.2，120.1，93.5，62.5，45.5，30.2，14.0；MS m/e 517.05(M+H⁺)；HPLC(XBridge 5μC18 4.6x50mm，4mL/min，溶剂A：10％MeOH/水与0.2％H₃PO₄，溶剂B：90％MeOH/水与0.2％H₃PO₄，用0-100％B的梯度，历时4分钟)：2.74分钟。

实施例9d

1-(4-溴-2-氟苯基)-2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1H-咪唑-4-羧酸乙酯的制备

向1-(4-溴-2-氟苯基)-2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-4-羟基-4，5-二氢-1H-咪唑-4-羧酸乙酯(38g，73mmol)于EtOH(200mL)中的混合物中加入TFA(25.0g，220mmol)。接着将混合物加热至95℃。2.5小时后，HPLC分析显示剩余＜1％的醇中间体。将混合物用300mL的CH₂Cl₂稀释并用冰浴冷却至大约5℃。将混合物用1N NaOH(120mL)中和并分离有机层。用CH₂Cl₂(2x 100mL)萃取水层。将合并的有机层用旋转蒸发仪浓缩从而得到粗物质。于EtOH(5mL/1g)中重结晶提供32g 1-(4-溴-2-氟苯基)-2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1H-咪唑-4-羧酸乙酯，为米色(off-white)固体(86％收率)。¹H-NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ7.92(s，1H)，7.16(d，1H，J＝8.0Hz)，7.22(m，3H)，7.11(m，1H)，7.04(t，1H，J＝12.0Hz)，4.25(q，2H，J＝8.0Hz)，1.94(s，6H)，1.27(t，3H，J＝8.0Hz)；MS m/e 502.68(M+H⁺)；HPLC(XBridge 5μC18 4.6x50mm，4mL/min，溶剂A：10％MeOH/水与0.2％H₃PO₄，溶剂B：90％MeOH/水与0.2％H₃PO₄，用0-100％B的梯度，历时4分钟)：3.87分钟。

实施例9e

2-(1-(4-溴-2-氟苯基)-2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1H-咪唑-4-基)丙-2-醇的制备

向用冰/盐浴(-15至-17℃)冷却的甲基溴化镁(60.0mL，180mmol，3M于乙醚(ether)中的溶液)于120mL THF的混合物中缓慢加入1-(4-溴-2-氟苯基)-2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1H-咪唑-4-羧酸乙酯(30g，60mmol)于65mLCH₂Cl₂和87mL THF中的溶液，历时45分钟。将内部温度小心地保持在低于0℃。将另外的2X 20mL CH₂Cl₂用于洗涤(wash forward)残余物质。将反应混合物温度在低于0℃保持1小时并伴随搅拌。然后将反应混合物用100mL CH₂Cl₂稀释，并缓慢加入饱和NH₄Cl。将所得的混合物用CH₂Cl₂(2X80mL)萃取。合并有机物，用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，并用旋转蒸发仪浓缩，得到2-(1-(4-溴-2-氟苯基)-2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1H-咪唑-4-基)丙-2-醇(28.5g，58.6mmol，98％收率)，为白色固体。¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)δ7.13(dd，1H，J＝9.03，2.01Hz)，7.09(s，1H)，7.07(s，1H)，6.93(m，2H)，6.75(t，1H，J＝8.16Hz)，6.55(s，1H)，3.18(s，1H)，2.00(s，6H)，1.58(s，6H)；¹³C-NMR(CDCl₃，126MHz)δ158.1，156.1，154.5，147.8，139.3，135.7，131.3，130.3，127.8，126.9，122.7，119.8，115.1，68.7，44.8，31.1，29.9；MS m/e 485.05(M+H⁺)；HPLC(XBridge 5μC18 4.6x50mm，4mL/min，溶剂A：10％MeOH/水与0.2％H₃PO₄，溶剂B：90％MeOH/水与0.2％H₃PO₄，用0-100％B的梯度，历时4分钟)：2.78分钟。

实施例9

2-(2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1-(3，3’-二氟-4′(羟甲基)-5′-(甲磺酰基)-联苯-4-基)-1H-咪唑-4-基)丙-2-醇的制备

在氮气下向1L 3-颈圆底烧瓶中加入2-(1-(4-溴-2-氟苯基)-2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1H-咪唑-4-基)丙-2-醇(12.0g，24.7mmol)、[2-氟-6-甲磺酰基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼杂环戊-2-基)-苯基]-甲醇(9.78g，29.6mmol)、K₂CO₃(10.2g，74mmol)、DME(120mL)和水(12mL)。将混合物加热至60℃，并且然后在氮气下加入氯化1，1′-二(二苯基膦基)二茂络铁钯(II)络合物(4.06g，4.94mmol)。将反应混合物加热至80℃30分钟。将所得的深色混合物用冰浴冷却，并在200mL CH₂Cl₂和200mL水中分配。合并有机层并用Na₂SO₄干燥。浓缩之后，将粗产物通过快速色谱法纯化(ISCO，330g硅胶，0％至100％EtOAc于己烷中的溶液)，得到12.79g的粗产物(85％收率)，为淡黄色固体。

通过在65℃将9.5g粗产物溶解于丙酮(80mL)中来进行重结晶。将所得的溶液缓慢冷却至25℃，历时5小时，并且然后冷却至0℃持续额外的30分钟。晶体在45℃开始形成。过滤收集固体并用冷丙酮漂洗。在45℃烘箱中真空干燥14小时之后，获得4.9g的纯净产物。为回收额外的结晶产物，将母液浓缩至大约10mL并通过硅胶垫。用EtOAc(100mL)洗脱化合物。真空浓缩滤液从而得到粗固体。上述操作之后，将粗固体在丙酮中重结晶，得到额外的2.5g的产物。在重结晶后的两批的合并的回收率为78％收率。¹H-NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ7.94(m，2H)，7.63(dd，1H，J＝11.29，1.51Hz)，7.34(d，1H，J＝9.54Hz)，7.14(m，3H)，7.05(m，1H)，6.83(s，1H)，5.58(t，2H，J＝5.27Hz)，4.96(d，2H，J＝4.27Hz)，4.70(s，1H)，3.46(s，3H)，1.96(s，6H)，1.45(s，6H)；MS m/e 609.16(M+H⁺)；HPLC(XBridge 5μC184.6x50mm，4mL/min，溶剂A：10％MeOH/水与0.2％H₃PO₄，溶剂B：90％MeOH/水与0.2％H₃PO₄，用0-100％B的梯度，历时4分钟)：2.56分钟。

可替换的，实施例9按下述方法来制备：

在氮气下向1L 3-颈圆底烧瓶加入甲基四氢呋喃(“MeTHF”，6.9kg)、2-(1-(4-溴-2-氟苯基)-2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1H-咪唑-4-基)丙-2-醇(1.994kg，4.1摩尔)和(2-氟-6-(甲磺酰基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)苯基)甲醇(1.38kg，4.19摩尔)。将混合物在23℃搅动15min，直到所有的固体溶解。在该期间的末尾，通过表面下的线(subsurface line)加入呈浆状物的(氧联二-2，1-亚苯基)二(二苯基膦)(0.022kg，0.041摩尔)和Pd(OAc)₂(0.01kg，0.045摩尔)。加入完成之后，将混合物用额外的MeTHF(1.65kg)漂洗。将所得的混合物抽真空至小于80托并用氮气回充。将该过程再重复两次。在完成脱气序列时，将反应混合物搅动至少15min并观察到澄清的金色。在单独的反应容器中，制备氢氧化钾(0.352kg)于水(10.00kg)中的溶液并且在使用之前通过将溶液用氮气鼓泡至少15min来脱气。通过抽真空将KOH溶液(10.35kg)转移至反应器中。反应温度呈现出从20℃至29℃的已知的放热。加入完成之后，通过一系列的变压使所得的双相混合物脱气。将混合物温热至45-50℃之间，并在该温度将其搅拌至少2h。该时间段过后，通过HPLC分析反应混合物，其显示反应已经结束。将反应混合物冷却至23℃并停止搅拌。将混合物分离30min并除去下层的用尽的KOH流。以每分钟～0.1kg的速度将富含产物的有机物通过硫脲功能化硅胶(0.782kg)(Silicycle)柱从而除去钯。用5％NaHCO₃溶液(5体积)洗涤富含产物的有机相并分离各相。将有机相用水(5体积)洗涤并分离有机和水相。

将富含产物的有机相精密过滤至干净的反应容器中并且然后在真空下(80托，T_夹套＝60℃)浓缩至～8体积(～16L)。一旦到达规定的体积，将反应混合物冷却至25℃。一旦到达规定的温度，将反应混合物用2-(2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1-(3，3’-二氟-4′-(羟甲基)-5′-(甲磺酰基)-联苯-4-基)-1H-咪唑-4-基)丙-2-醇(0.5％，0.008kg)种晶。将所得的浆状物在25℃搅拌约18h。在该期间的末尾，将反应混合物在真空下(150托，T_夹套＝60℃)浓缩至～8L。一旦到达预定的体积，将反应混合物加热至50℃并在90min的期间内将乙酸异丙酯(IPAc，13.90kg)加入至反应器中。加入完成之后，在3h期间内将反应混合物冷却至25℃。一旦到达预定的温度，将反应混合物在室温搅拌约16h。在该期间的末尾，将反应混合物过滤，脱液(deliquored)，并用额外的IPAc(10.4kg)洗涤。通过在干燥的氮气流下从滤器上抽吸干燥滤饼从而得到白色固体。将白色固体转移至干燥器中并在完全真空的条件下在50℃干燥，得到2.03kg的产物(81％收率，99.40AP，98wt％)。

实施例10

2-(2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1-(3，3’-二氟-4′-(羟甲基)-5′-(甲磺酰基)-联苯-4-基)-1H-咪唑-4-基)[(¹³CD₃)₂]丙-2-醇

2-(1-(4-溴-2-氟苯基)-2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1H-咪唑-4-基)[(¹³CD₃)₂]丙-2-醇的制备

在氩气下将烘干的镁(86mg，3.52mmol)和无水乙醚(3.20mL)转移至烘干的25mL 14/20圆底烧瓶中。在室温加入[¹³CD₃]-碘甲烷(467mg，3.20mmol)并在33℃搅拌1小时。视觉迹象显示形成格林试剂(澄清的混悬液转变成混浊混合物，同时起泡和放热)。将溶液冷却至室温并在氩气下通过套管转移至1-(4-溴-2-氟苯基)-2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1H-咪唑-4-羧酸乙酯(400mg，0.800mmol)于无水二氯甲烷(2.60mL)中的冷冻的溶液(冰/水浴)中。将在其中制备有格氏试剂的烧瓶用无水乙醚(2x 400μL)漂洗并通过套管转移至含有乙酯的烧瓶中。将反应混合物缓慢温热至室温并搅拌1小时。HPLC分析显示存在＜0.3％的原料。将反应冷却至0℃，用无水二氯甲烷(800μL)稀释并通过缓慢、小心的加入饱和氯化铵水溶液(8mL)使其淬灭。将两层分离，并用二氯甲烷(3x 4mL)萃取水层。真空浓缩合并的有机萃取物从而得到443.5mg的粗产物，为白色固体。将上述粗产物与从类似的反应中获得的244.3mg(白色固体)合并。合并的产物通过硅胶快速色谱法纯化(IscoRediSep柱，12g)并用10至20％EtOAc于己烷中的溶液洗脱。收集30mL级份。通过TLC(硅胶，50％EtOAc，50％己烷，R_f＝0.41)和HPLC检验级份。合并含有纯净产物的级份并真空浓缩从而得到531.2mg的产物，为白色固体(90％收率)：¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)δppm：6.47-7.58(m，7H)，2.01(br s，6H)。HPLC：(YMC ODS-AQ，3μm，150x 4.6mm，流动相A＝0.05％TFA于H₂O中的溶液，流动相B＝0.05％TFA于ACN中的溶液，0min 50％B，9min 95％B，15min 95％B，15.5min 50％B。流速＝1ml/min)T_r＝9.23min(220nm，化学纯度＝98.8％)，LCMS(+离子)m/z＝487(0％)，493(59％)，495(100％)，497(47％)，498(8％)。

2-(2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1-(3，3’-二氟-4′-(羟甲基)-5′-(甲磺酰基)-联苯-4-基)-1H-咪唑-4-基)[(¹³CD₃)₂]丙-2-醇的制备

在氩气下向25mL 14/20圆底烧瓶中加入2-(1-(4-溴-2-氟苯基)-2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1H-咪唑-4-基)[(¹³CD₃)₂]丙-2-醇(0.283g，0.572mmol)、(2-氟-6-(甲磺酰基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊-2-基)苯基)甲醇(0.227g，0.686mmol)、二氯化1，1′-二(二苯基膦基)-二茂络铁-钯(II)二氯甲烷络合物(0.094g，0.114mmol)、碳酸钾(0.237g，1.716mmol)、DME(4.30ml)和已经预先用氩气鼓泡的水(0.215ml)。将混合物加热至80℃持续1小时。HPLC和LCMS分析显示原料已经被消耗掉。将反应混合物用冰-水浴冷却，在二氯甲烷(10mL)和水(10mL)之间分配。用二氯甲烷(3x 10mL)萃取水层。真空浓缩合并的有机萃取物从而得到643.6mg的深色半固体。

在此之前，已经完成了用于制备2-(2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1-(3，3’-二氟-4′-(羟甲基)-5′-(甲磺酰基)-联苯-4-基)-1H-咪唑-4-基)[(¹³CD₃)₂]丙-2-醇的类似的反应，得到462.3mg的深色固体。合并来自两个实验的粗产物并在溶解于二氯甲烷中并预先吸附至硅胶上之后通过硅胶快速色谱法纯化(IscoRediSep柱，80g)。用25-50％EtOAc于己烷中的溶液洗脱快速柱。收集30mL级份。在合并含有纯净产物的级份和真空浓缩之前通过TLC(硅胶，50％EtOAc，50％己烷，R_f＝0.09)和HPLC检验级份从而得到468.3mg的2-(2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1-(3，3’-二氟-4′-(羟甲基)-5′-(甲磺酰基)-联苯-4-基)-1H-咪唑-4-基)[(¹³CD₃)₂]丙-2-醇，为黄色固体。

将该物质进一步通过在65℃在丙酮(4mL)中重结晶而纯化，历时5小时缓慢冷却至25℃(晶体在40℃开始形成)，然后冷却至0℃持续额外的30分钟。过滤收集固体，用冷丙酮漂洗并真空干燥从而得到66.2mg的标题化合物，为米色固体。

浓缩来自该初次重结晶的母液并使用与上面所列出的步骤相同的步骤，将残余物从最少量的丙酮(1mL)中重结晶从而得到第二批的276.4mg的结晶产物，为米色固体。

浓缩来自第二次重结晶的母液并通过制备HPLC纯化，T_r＝15.0min(制备HPLC条件：Synergi Hydrdro-RP柱，4μ，21.2x 250mm，流动相A＝H₂O，流动相B＝ACN，0min 30％B，25min 100％B。流速＝16.0ml/min。UV为220nm。)

合并3次纯化的分离物从而得到401.1mg的2-(2-(2-(2，6-二氯苯基)丙-2-基)-1-(3，3’-二氟-4′-(羟甲基)-5′-(甲磺酰基)-联苯-4-基)-1H-咪唑-4-基)[(¹³CD₃)₂]丙-2-醇，为淡黄色固体(64％收率)。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆))δppm：7.86-7.96(m，2H)，7.62(dd，J＝11.33Hz，2.01Hz，1H)，7.33(dd，J＝8.31Hz，1.76Hz，1H)，7.09-7.19(m，3H)，6.99-7.09(m，1H)，6.81(s，1H)，5.53-5.62(m，1H)，4.89-4.99(m，2H)，4.67(t，J＝3.15Hz，1H)，3.45(s，3H)，2.08(残余丙酮，8mol％)，1.95(s，6H)。¹³C-NMR(400MHz，D6-DMSO)29.61(t，J＝109.88Hz)

HPLC：(YMC ODS-AQ，3μm，150x 4.6mm，流动相A＝0.05％TFA于H₂O中的溶液，流动相B＝0.05％TFA于ACN中的溶液，0min 50％B，9min 95％B，15min 95％B，15.5min 50％B。流速＝1ml/min)T_r＝9.66min(在220nm，化学纯度＝99.8％)。LCMS(+离子)m/z＝609(0％)，617(100％)，618(31％)，619(74％)，620(22％)，621(16％)，622(4.3％)，623(1.3％)。

实施例11-20

通过用各种苯基乙腈试剂取代2-(苯基)-2-甲基丙腈作为原料，以类似于实施例1中描述的方法制备下述化合物：

实施例21

化合物21的实施例

在1L烧瓶中称量25.0g(134mmol)的2，6-二氯苯基乙腈和250mL无水THF。将所得的溶液冷却至-70℃并先后加入134mL 1.0M叔丁醇钾(1.0M)于THF中的溶液和8.4mL碘甲烷(1.0eq)。将反应在-70℃搅拌1h，然后将其温热至室温，历时3h。将反应真空浓缩从而除去THF，然后用乙酸乙酯和1M HCl将其洗涤至分液漏斗中。分离乙酸乙酯，用亚硫酸氢盐、盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，并真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(Biotage，300g SiO₂，从100％己烷至10％乙酸乙酯梯度洗脱，历时1h)。合并适当的级份并真空浓缩，得到所需的产物，为无色油状物，通过GC测定为～99％纯，收率：12.2g(45％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ7.36(d，J＝8Hz，2H)，7.22(t，J＝8Hz，1H)，4.84(q，J＝7Hz，1H)，1.07(d，J＝7Hz，3H)。

使用合适的苯胺和2-(苯基)丙腈为原料，以类似于实施例1中描述的方法制备化合物21。

化合物11具有下述NMR特征：1H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.10(d，J＝1.2，1H)，7.59(dd，J＝9.9，1.8，1H)，7.47-7.37(m，2H)，7.24(dd，J＝5.3，3.2，2H)，7.13(dd，J＝8.3，2.1，1H)，7.05(d，J＝8.4，1H)，6.89(s，1H)，5.10(d，J＝4.4，2H)，4.09(s，2H)，3.30(s，3H)，3.25(d，J＝17.4，1H)，2.86(s，1H)，1.63(s，6H)。

化合物12具有下述NMR特征：1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.06(d，J＝8.7，2H)，7.99-7.86(m，1H)，7.70(d，J＝8.3，1H)，7.58(m，3H)，7.40(t，J＝7.6，1H)，7.21(d，J＝7.7，1H)，7.13(s，1H)，5.57(t，J＝5.3，1H)，4.95(d，J＝4.7，2H)，4.81(s，1H)，4.13(s，2H)，3.45(s，3H)，1.46(s，6H)。

化合物13具有下述NMR特征：1H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.10(s，1H)，7.71(d，J＝2.0，1H)，7.60(dd，J＝9.9，1.8，1H)，7.49(dd，J＝8.2，2.1，1H)，7.22(d，J＝8.2，1H)，7.12(dd，J＝8.6，6.1，1H)，6.96(dd，J＝8.5，2.6，1H)，6.89-6.78(m，2H)，5.10(s，2H)，4.05(s，2H)，3.31(s，3H)，3.00(s，1H)，2.77(s，1H)，1.63(2，J＝5.5，6H)。

化合物14具有下述NMR特征：1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.85(t，J＝4.5，2H)，7.70(dd，J＝11.4，1.8，1H)，7.50(dd，J＝8.3，1.7，1H)，7.35(t，J＝8.2，1H)，7.09(dd，J＝8.8，2.6，1H)，7.03-6.80(m，3H)，5.35(t，J＝5.3，1H)，4.73(d，J＝4.1，2H)，4.56(s，1H)，3.80(s，2H)，3.38(t，J＝6.4，1H)，3.23(s，3H)，1.21(s，6H)。

化合物15具有下述NMR特征：1H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.11(d，J＝1.2，1H)，7.72-7.53(m，3H)，7.28(dd，J＝18.0，4.9，5H)，7.15(dd，J＝8.3，2.1，1H)，7.05(d，J＝8.4，1H)，6.96(s，1H)，5.09(s，2H)，4.12(s，2H)，3.30(s，3H)，3.28(s，1H)，2.93(s，1H)，1.64(s，6H)。

化合物16具有下述NMR特征：1H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.09(s，1H)，7.60(dd，J＝9.9，1.8，1H)，7.39(m，2H)，7.23(t，J＝8，1H)，7.18-7.06(m，2H)，7.00(m，1H)，6.89-6.81(m，2H)，5.10(dd，J＝7.0，1.6，2H)，4.06(s，2H)，3.30(s，3H)，2.92(t，J＝7.0，1H)，2.70(s，1H)，1.64(s，6H)。

化合物17具有下述NMR特征：1H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.10(s，1H)，7.64-7.55(m，3H)，7.25(m，2H)，7.16-7.00(m，3H)，6.92(s，1H)，6.81(d，J＝7.5，1H)，5.08(dd，J＝7.1，1.7，2H)，4.02(s，2H)，3.28(s，3H)，2.90(t，J＝7.1，1H)，2.76(s，1H)，2.16(d，J＝8.6，3H)，1.64(s，6H)。

化合物18具有下述NMR特征：1H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.12(s，1H)，7.70-7.59(m，3H)，7.45(d，J＝8.4，2H)，7.24(d，J＝8.0，2H)，7.16-7.07(m，1H)，6.85(s，1H)，5.10(d，J＝5.6，2H)，4.31(s，2H)，3.30(s，3H)，3.07(s，1H)，2.94(t，J＝7.0，1H)，1.55(s，6H)。

化合物19具有下述NMR特征：1H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.11(d，J＝1.1，1H)，7.62(ddd，J＝12.0，8.4，1.8，3H)，7.28-7.26(m，3H)，6.97(s，1H)，6.93-6.76(m，2H)，5.09(s，2H)，4.14(s，2H)，3.29(br s，4H)，2.91(s，1H)，1.65(s，6H)。

化合物20具有下述NMR特征：1H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.08(d，J＝1.1，1H)，7.57(dd，J＝9.9，1.8，1H)，7.38(ddd，J＝10.3，9.2，2.0，2H)，7.23-7.17(m，2H)，7.18-7.01(m，3H)，6.89(d，J＝0.7，1H)，5.09(s，2H)，4.14(s，2H)，3.37(s，1H)，3.30(s，3H)，2.92(s，1H)，1.64(s，6H)。

化合物21具有下述NMR特征：1H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.97(s，1H)，7.47(dd，J＝9.8，1.6，1H)，7.18(d，J＝10.6，1H)，7.12-7.04(m，2H)，6.96(d，J＝7.9，2H)，6.90-6.81(m，1H)，6.79(s，1H)，5.13(s，2H)，4.94(q，J＝7.0，1H)，3.82(s，1H)，3.39(d，J＝24.5，1H)，3.36(s，3H)，1.81(d，J＝7.1，3H)，1.63(s，6H)。

可获得用于测试所述化合物的标准的生理学、药理学和生物化学操作，从而鉴定具备调节LXR(LXR_α和LXR_β)活性的生物活性的那些。这样的测定包括例如生物化学测定(诸如结合测定、荧光偏振测定、基于FRET的共活化物募集测定)(通常参见Glickman等，J.Biomolecular Screening(2002)，第7卷，第1期，第3-10页)，以及基于细胞的测定(包括共转染测定、LBD-Gal4嵌合体的使用和蛋白-蛋白相互作用测定(参见Lehmann.等，J.BiolChem.(1997)，第272卷，第6期，第3137-3140页)。

本发明的化合物相对于在本领域先前公开的化合物(诸如公开于PCT公开号WO 2007/002563中的那些)显示出预料不到的优势。已经在测定(诸如下述的那些)中显示，本化合物具备合乎需要的部分LXR激动剂的特性，同时在人全血中具有增加的效价和低的LXRα有效性。另外，本发明的化合物在人肝微粒体测定中也显示出代谢稳定性。这样的化合物应当在治疗、抑制或改善本申请中所讨论的一种或多种疾病或病症中是更为有用的。

实施例A

闪烁迫近测定(SPA)

SPA测定测量³H-24，25-环氧胆固醇与LXR_α-RXR_α或LXR_β-RXR_α异二聚体的结合产生的放射性信号。该测定的基础是含有闪烁体的SPA珠子的使用，以至于当结合至受体时使标记的配体进入到珠子附近，来自标记物的能量刺激闪烁体发光。使用标准的微量培养板闪烁阅读器测量光线。可以通过评价化合物能够竞争掉对受体具有已知亲和力的放射性标记的配体的程度来测量配体与受体结合的能力。

所需的物质：

1.标记物：³H-24，25-环氧-胆固醇(NEN Life Science Products/PerkinElemer))

2.LXR_α裂解物：作为粗制裂解物制备的杆状病毒表达的LXR_α/RXR异源二聚体，每个具有6-HIS标记

3.LXR_β裂解物：作为粗制裂解物制备的杆状病毒表达的LXR_β/RXR异源二聚体，每个具有6-HIS标记

4.SPA珠子：Ysi铜His-标记SPA珠子(Amersham)

5.板：非结合的表面384孔板(Corning)

6.蛋白裂解物稀释缓冲液：(20mM Tris-HCl pH 7.9，500mM NaCl，5mM咪唑)。

7.2x SPA缓冲液：(40mM K₂HPO₄/KH₂PO₄pH7.3，100mM NaCl，0.05％吐温20，20％甘油，4mM EDTA)

8.2x SPA缓冲液w/o EDTA：(40mM K₂HPO₄/KH₂PO₄pH7.3，100mMNaCl，0.05％吐温20，20％甘油)

储备液

0.5M K₂HPO₄/KH₂PO₄pH 7.3

0.5M EDTA pH 8.0

5M NaCl

10％吐温-20

甘油

蛋白裂解物的制备

根据标准的操作，通过将合适的全长cDNA克隆至pBacPakhis2载体(Clontech，CA)中来制备人RXR α(登记号NM_002957)、LXR_α(登记号U22662)和LXR_β(登记号U07132)的杆状病毒表达质粒。cDNA向pBAcPakhis2载体聚合接头(polylinker)中的插入产生cDNA与pBacPakhis1中存在的N-末端聚组氨酸标记之间的框内融合。通过限制性内切酶谱图法和/或测序来证实恰当的克隆。

细胞裂解物是通过感染健康的Sf9昆虫细胞来制备的，所述细胞在27℃以大约1.25x10⁶/ml的密度，在每1L大小的转瓶(spinner flasks)中以500mL的总体积，在标准条件下培养。为制备LXR_α裂解物，昆虫细胞与LXR_α表达盒共转染(M.O.I.为2.0)并且与RXR表达盒共转染(M.O.I.为大约1.0)。为制备LXR_β裂解物，昆虫细胞与LXR_β表达盒共转染(M.O.I为大约2.0)并且与RXR表达盒共转染(M.O.I.为大约1.0)。在两种情况下，在收获之前将细胞在27℃孵育48小时，同时不断地振摇。

孵育后，通过离心和沉淀(pelleted)收获细胞。将细胞沉淀物(pellets)重新悬浮于两体积冰冷的新鲜配制的提取缓冲液(20mM Tris pH 8.0，10mM咪唑，400mM NaCl，每10mL提取缓冲液含有一片不含EDTA的蛋白酶抑制剂片(Roche目录号：1836170))中。

使用Dounce匀浆器缓慢地将细胞在冰上进行匀浆从而实现80-90％的细胞裂解。在4℃将匀浆在预先冷冻的旋转器(Ti50或Ti70，或等价物)中以45,000rpm离心30分钟。将上清液的等分试样在干冰上冷冻并在-80℃冷冻储存直到进行定量和质量控制。在SPA测定中对裂解物的等分试样进行测试以确保逐批一致性，并且在筛选测定中使用之前，通过在纯化之后使用Ni-NTA树脂(Qiagen)进行SDS-PAGE分析以及调节蛋白浓度和表达水平。

筛选试剂的制备

[³H]24，25环氧胆固醇(EC)溶液：对于单个384孔板(或400孔)，将21μL的[³H]EC(比活76.5Ci/mmol，浓度3.2mCi/mL)加入至4.4mL2x SPA缓冲液中以提供200nM的终浓度。对于每个额外的384孔板，将额外的19.1μL的[³H]EC加入至4.0mL额外的2x SPA缓冲液中。[³H]EC于孔中的终浓度为50nM。

将LXR_α裂解物(如上述制备的)用蛋白裂解物稀释缓冲液稀释。每个384孔板(或200孔)制备1400μL的稀释的LXR_α裂解物，并且为每个额外的384孔板制备1120μL的稀释的LXR_α裂解物。

将LXR_β裂解物(如上述制备的)用蛋白裂解物稀释缓冲液稀释。每个384孔板(或200孔)制备1400μL的稀释的LXR_β裂解物，并且为每个额外的384孔板制备1120μL的稀释的LXRβ裂解物。

SPA珠子溶液：对于384孔板(或400孔)，将3.75mL 2x SPA缓冲液w/o EDTA、2.25mL H₂O，以及1.5mL Ysi组氨酸标记SPA珠子(在取用之前将孔进行涡旋)一起混合。对于每个额外的384孔板，将额外的3.5mL 2xSPA缓冲液w/o EDTA、2.1mL H₂O，以及1.4mL Ysi组氨酸标记SPA珠子一起混合。

操作：

在96孔板中制备每种化合物的适当稀释液，并吸量至384孔板的适当的孔中(每孔3.5μl)。

将9.1μL的[³H]EC加入至多孔板的2-23栏的每个孔中。

将5μL的稀释的LXR_α裂解物加入至多孔板的奇数列的2-23栏的每个孔中。

将5μL的稀释的LXR_β裂解物加入至多孔板的偶数列的2-23栏的每个孔中。

将17.5μL的SPA珠子溶液加入至多孔板的2-23栏的每个孔中。

将板用澄清的封闭剂覆盖并放置于培养箱中在环境温度持续大约30分钟。

孵育之后，将板使用发光板阅读器(MicroBeta，Wallac)(使用n ABASE3H 384DPM程序)进行分析。n ABASE 3H 384DPM的设置为：

计数模式：DPM；

样品种类：SPA；

ParaLux模式：低背景；

计数时间：30秒。

LXR_α和LXR_β的测定采用相同的方法进行。所确定的Ki表示至少两个独立的剂量响应实验的平均值。每种化合物的亲合力可以通过非线性回归分析使用单部位竞争公式(one site competition formula)来确定，从而确定IC₅₀，其中：

Y＝底部+(顶部-底部)/(1+10^X-logIC50)。

然后使用Cheng和Prusoff方程(Cheng and Prusoff equation)计算Ki，其中：

Ki＝IC₅₀/(1+[配体浓度]/配体Kd)。

对于该测定，典型地，配体浓度＝50nM，受体的EC的Kd为200nM，如通过饱和结合确定。

当在该测定中进行测试时，本发明的化合物显示出结合LXR_α和/或LXR_β的能力。

实施例B

共转染测定

为测量化合物在基于细胞的测定中活化或抑制LXR的转录活性的能力，使用了共转染测定。已经显示LXR以与RXR的异源二聚体的形式发挥作用。对于共转染测定，通过与含有被LXR-RXR异二聚体束缚的DNA序列的一个拷贝的萤光素酶报告质粒一起瞬时转染至哺乳动物细胞中将LXRα和LXRβ的表达质粒分别引入(LXRE；Willy，P.等1995)。LXR与内源性RXR形成异二聚体。用LXR激动剂处理转染的细胞增加LXR的转录活性，其通过萤光素酶活性的增加来测量。类似地，可以通过确定化合物竞争性抑制LXR激动剂的活性的能力来测量LXR拮抗剂的活性。

所需的物质

CV-1非洲绿猴肾细胞

共转染表达质粒，包括全长LXR_α(pCMX-h LXR_α或LXR_β(pCMX-hLXR_β)、报告质粒(LXREx1-Tk-萤光素酶)，以及对照(pCMX-半乳糖苷酶表达载体)(Willey等Genes&Development 91033-1045(1995))

转染试剂诸如FuGENE6(Roche)。

1x细胞裂解缓冲液：

22.4mM Tricine pH 8.0

0.56mM EGTApH 8.0

5.6mM MgSO₄

0.6％Triton X-100

5.6％甘油

10x萤光素酶底物溶液：

10mM HEPES pH 6.52.75mM D-Luciferin

0.75mM辅酶-A

3.7mMATP

96mM DTT

筛选试剂的制备

在实验之前24小时，将CV-1细胞通过涂板于T-175烧瓶或500cm²的皿中制备，从而在转染的当天实现70-80％的融合。通过要进行筛选的板的数目来确定要被转染的细胞的数目。384孔板的每个孔需要～8000个细胞。按照所述试剂提供的说明书，通过混合所需的质粒DNA与阳离子脂质转染试剂FuGENE6(Roche)来制备DNA转染试剂。根据要转染的细胞系和容器的尺寸，以经验确定最适的DNA量。对于每个T175cm²烧瓶，混合并加入总共20μg的DNA、60μl的Fugene 6和1mL Optimem。然后将细胞在37℃孵育至少5小时从而制备筛选细胞。

通过在使用前合并下述试剂来制备萤光素酶测定试剂：

1份10x萤光素酶底物溶液

9份1X细胞裂解缓冲液。

操作

通过在384孔板中配制每孔5μL的化合物来制备测定板，从而实现化合物终浓度为10μM且DMSO不超过0.5％。将介质从筛选细胞移除，用胰蛋白酶处理细胞，离心收集细胞，计数，并以每孔大约8000个细胞的密度以约45μL的体积涂板于上面制备的384孔测定板中。将含有化合物和筛选细胞(总体积50μL)的测定板在37℃孵育20小时。

在与化合物一起孵育后，从细胞移除介质并加入萤光素酶测定试剂(30μL/孔)。在环境温度保持～2分钟后，将测定板在发光剂上读数(PE BiosystemsNorthstar读数器，具有器载注射器(on-board injectors)，或等价物)。

LXR/LXRE共转染测定可用于确定效价的EC₅₀/IC₅₀值和有效性的百分比活性或百分比抑制。有效性定义了化合物相对于高对照((N-(3-((4-氟苯基)-(萘-2-磺酰基)氨基)丙基)-2，2-二甲基丙酰胺))或低对照(DMSO/载体)的活性。从浓度以1/2 LOG单位区分的10点曲线产生剂量应答曲线。各点代表来自384孔板的4孔数据的平均值。

将来自本测定的数据套入下述方程中，从该方程可以解出EC₅₀值：

Y＝底部+(顶部-底部)/(1+10^{((logEC50-X)*坡斜率)})。

因此，EC₅₀/IC₅₀被定义为激动剂或拮抗剂引发了在顶部(最大)值和底部(基线)值之间的中间值的应答的浓度。EC₅₀/IC₅₀值表示至少2次并且通常是3次独立实验的平均值。对激动剂的相对有效性或％对照是通过比较由((N-(3-((4-氟苯基)-(萘-2-磺酰基)氨基)丙基)-2，2-二甲基丙酰胺))达到的最大应答来确定，所述最大应答在各个剂量应答实验中独立测定。

对于拮抗剂测定，可以将LXR激动剂加入384孔板的每个孔内以引发应答。因次对每种拮抗剂的％抑制就是对所述激动剂的活性的抑制的测量。在该实施例中，100％抑制将表明LXR激动剂的特定浓度的活性已经减少至基线水平，所述基线水平被定义为仅在DMSO存在时测定的活性。

在紧临的上面描述的LXRα测定中测试了本发明的化合物，所述化合物显示出具有小于或等于25％的对照化合物的有效性。

在紧临的上面描述的LXRβ测定中测试了本发明的化合物，所述化合物显示出具有大于或等于30％的对照化合物的有效性。

实施例C

人全血测定

将人全血收集在含有EDTA的管中，并将0.5mL的等分试样立刻在96孔板(block)中与适当的测试化合物于0.5％DMSO中的连续稀释液混合。将化合物与血一起在37℃孵育，同时不断地振摇4小时。孵育之后，将细胞在ABI核酸纯化裂解溶液(适用Biosystems目录号4305895)中裂解并在-80℃冷冻。细胞裂解之后，根据制造商提供的规程，使用ABI 6100 RNA prepstation来纯化总RNA。合成了cDNA，并且使用SYBR-Green定量PCR(Q-PCR)(利用ABI Prism 7900HT序列检测系统，试剂来自QuantaBioscience Inc(Quanta Bioscience目录号95047和95055))定量分析了RNA。

通过ΔΔCT方法(Michael W.Pfaffl.A new mathematical model for relativequantification in real-time RT-PCR.Nucleic Acids Research，2001，Vol.29，No.9e45)确定每种mRNA的量并使这些量相对于两种对照mRNA(即核糖体蛋白L-30(L-30)和β-2-微球蛋白(B2M))的量标准化。测试化合物对ABCA1和ABCG1的诱导被图示为参照化合物2-(4-(5-(5-氰基-1-(2，4-二氟苄基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1，6-二氢吡啶-2-基)噻吩-2-基)-3-甲基苯基)乙酸的百分比，并且通过使用XLFit软件(根据方程y＝A+((B-A)/(1+((C/x)^D))))拟合作为log转化的化合物浓度的函数的S形的应答曲线来计算效价(EC₅₀)和活性(％MAX)。完全LXRα和LXRβpan激动剂2-(4-(5-(5-氰基-1-(2，4-二氟苄基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1，6-二氢吡啶-2-基)噻吩-2-基)-3-甲基苯基)乙酸(EC₅₀ 1-2μM)被用作参照化合物，且其最大活性被定义为100％。

在紧临的上面描述的测定中测试了本发明的化合物，所述化合物显示出通常小于1,000nM，优选小于100nM，更有选小于20nM的效价。

实施例D

人微粒体中的高通量(HT)代谢稳定性

代谢稳定性测定评价体外CYP介导的代谢稳定性(在十分钟的孵育之后使用人肝微粒体)。

将测试化合物作为在100％DMSO中的3.5mM储备溶液接收。将化合物稀释以产生50μM含有1.4％DMSO的乙腈(ACN)溶液，然后将其用作用于与人肝微粒体一起孵育的100x储备液。对每种化合物进行重复两次的测试。将化合物、NADPH和肝微粒体溶液合并，用于在三个步骤中孵育：

1)将152μl的肝微粒体混悬液(蛋白浓度为1.1mg/ml，于100mM NaP_i，pH 7.4，5mM MgCl₂缓冲液中)在37℃预温热。

2)将1.7μl的50μM化合物(98.6％ACN，1.4％DMSO)加入至相同的管中并在37℃预孵育5分钟。

3)通过加入17μl的预温热的10mM NADPH溶液(于100mM NaP_i中，pH 7.4)来启动反应。

将反应组分充分混合，并且将75μl立刻转移至150μl淬灭/终止溶液中(零时间点，T₀)。将反应在37℃孵育10分钟并且然后将额外的75μl等分试样转移至150μl淬灭溶液中。将含有100μM DMN的乙腈(用于注射质量控制的UV标准)用作淬灭溶液以终止代谢反应。

将淬灭的混合物在Allegra X-12离心机，SX4750旋转器(BeckmanCoulter InC.，Fullerton，CA)中以1500rpm(～500Xg)离心15分钟以粒化变性的微粒体。然后将90μl体积的上清液萃取物(含有母体化合物和其代谢物的混合物)转移至单独的96孔板中进行UV-LC/MS-MS分析从而确定在混合物中剩余的母体化合物的百分比。

UV-LC/MS-MS样品分析-结构完整性预分析

代谢稳定性结构完整性预分析用于评价被测定的化合物的纯度。将化合物在96孔板中以57μl的3.5mM DMSO溶液的形式接收。将3.5mM化合物DMSO储备液用含有相同体积的乙腈、异丙醇和MilliQ-H₂O的溶液稀释18次。对所得的溶液(200μM)通过LC-UV/MS(Thermo LCQ Deca XP Plus离子捕获质谱，使用Waters XBridge C18，5μm，2x 50mm柱，带有WatersSentry 2.1mm保护柱，且LC条件描述于下表中，注射量为5μl且流速为1ml/min)进行了结构完整性分析。所获得的数据反映了纯度(通过在220nm的UV吸收)。仅报道了纯度大于50％的那些化合物的结果。

*结构完整性预分析的流动相：(A)98％水，2％乙腈，含10mM乙酸铵；(B)10％水，90％乙腈，含10mM乙酸铵

样品分析-孵育的样品

MS/MS条件优化在装备有加热-电喷射(Heated-electrospray，H-ESI)源的Thermo TSQ Quantum三重四极杆质谱上进行，所述优化通过自动化注入(automated infusion)从而获得SRM转换和它们的相应的碰撞能值。将浓度为20μM的于1∶1甲醇∶水中的化合物溶液以90μL/min的流速注入，然后在被引入至源之前以50μL/min的流速与流动相合并。所有化合物首先用流动相A和B(50％A和50％B)进行优化，并如果必要的话，用流动相C和D进行优化(同样具有50∶50的组成)。将优化后的参数(包括极性、SRM转换和碰撞能)存储于Microsoft Access数据库中。

由自动化注入获得的质谱条件用于分析来自代谢稳定性测定的孵育样品。注射体积为5μl且流速为0.8ml/min。所使用的梯度示于下表中。所有样品用首先使用流动相A和B的梯度注射。如果必要的话(例如，由于色谱的原因)，将样品用相同的梯度重复注射，但使用流动相C和D。将所有LC-MS/MS分析参数以电子形式获取在原始的数据文件中。

*反应样品分析的流动相：(A)98％水，2％乙腈，含有0.1％甲酸；(B)2％水，98％乙腈，含有0.1％甲酸；(C)0.1％氢氧化铵于水中的溶液；(D)0.1％氢氧化铵于乙腈中的溶液

用Xcalibur^TM软件进行峰积分。通过将每种化合物的来自T_10分钟样品的LC-MS/MS峰面积与来自T_0分钟样品的那些相比较来进行剩余百分比的计算。

在紧临的上面描述的测定中测试了本发明的化合物，所述化合物在10分钟时显示出具有大于80％的母体化合物的剩余。

下表1呈现了测量LXRαEC50和有效性的LXR/LXRE共转染测定、测量所述化合物相对于参照化合物的结合至LXR并诱导ABCA1基因表达的能力的人全血测定(hWBA)，以及微粒体代谢稳定性测定的的结果。给出的EC₅₀值范围为其中A≤100nM，B为101nM至＜1,000nM和C＞1,000nM。

表1

上述代表性数据说明了与先前在本领域中公开的化合物(诸如公开于PCT公开号WO 2007/002563中的那些)相比，本发明的化合物所具有的预料不到的、合乎需要的部分LXR激动剂特征、在人全血中增加的效价、低LXRα有效性和在人肝微粒体测定中的代谢稳定性。

实施例E

在短尾猴中的体内效价和最大ABCG1诱导

测试了当口服给药短尾猴时，本发明的化合物在血细胞中诱导LXR靶标基因ABCG1的mRNA的活性。

通过研磨将测试化合物配制于0.5％羧甲基纤维素(CMC，Sigma)和2％吐温80(Sigma)中。每个治疗组包括三只雄性猴，在研究开始时每只重3.0-6.0kg。每个早晨将测试化合物现配制于媒介物中，并且对已经在之前的夜晚中禁食的动物在7至7∶30 AM之间通过口服强饲法进行给药。对于基线血细胞mRNA测定，将1mL静脉血收集于EDTA干燥涂覆的管中并加入1体积的不含钙或镁的Dulbecco磷酸盐缓冲盐水和2体积的核酸纯化裂解溶液(Applied Biosystems，InC.)。在RNA分离和分析之前将样品在-80℃冷冻。在基线样品收集之后对测试化合物进行给药。在给药后5hr时，收集静脉血并按照上述RNA测定的方法进行操作。也收集了额外的0.5mL血并分析了化合物的血浆浓度。

RNA分离。将冷冻的样品在室温解冻，并且然后放置于冰上。根据制造商的说明书(ABI手册#4332809 Rev.B)，使用预先装载的规程将总RNA在ABI 6100上分离。

cDNA合成和Q-PCR反应。将来自Quanta Biosciences，InC.的qScriptcDNA合成试剂盒用于产生第一股的来自每个总RNA样品的cDNA。在MJResearch，InC.型号PTC-200 DNA引擎上在96-孔Eppendorf AG twin-tec PCR板中进行20μl反应。将大约500ng的总RNA用于每个反应。反应由如下构成：4μl 5X q-Script反应混合物加上3-5μl无核酸酶的水加上1μl q-Script逆转录酶加上10-12μl输入RNA。在混合之后，将反应在室温以3750rpm离心2分钟并在MJ Research热循环仪(thermocycler)上执行“q-Script”规程(25℃5分钟，随后42℃30分钟，并且然后85℃5分钟)。将每个反应用30μl无核酸酶的水稀释并立刻将其用于SYBR-green Q-PCR或在-20℃储存。按如下方式进行SYBR-Green Q-PCR反应。LXR靶标基因的反应混合物、ABCG1，以及内标标准化基因核糖体蛋白L30使用经确证的正向/反向引物集合[ABCG1(X-Mmul-ABCG1-F1和X-Mmul-ABCG1-R1)；核糖体蛋白L30(SYBR-hL30-F1和SYBR-hL30-R1)]来制备。这些引物集合的序列的信息得自“Primer Bank”网站(http：//pga.mgh.harvard.edu/primerbank/index.html)(L30(Primer Bank#4506631a1))和Exelixis，InC.(美国加利福尼亚州南圣弗兰西斯科)(ABCG1(Mmul_ABCG1.TaqMan F1/R1))。

引物序列

Mmul_ABCG1.TaqMan.F15’-ACGCAGACAGCACTGGTGAA-3’

Mmul_ABCG1.TaqMan.R15’-CTTCCCTCCACCTGGAACCT-3’

hL30-F15’-GCTGGAGTCGATCAACTCTAGG-3’

hL30-R25’-CCAATTTCGCTTTGCCTTGTC-3’

按照下述方法进行SYBR-Green反应。对于每个反应，将10μl 2XGreen Supermix(Applied Biosystems目录号4367659)加上2μl的10μM基因特异性正向/反向引物混合物(引物的终浓度为每种500nM)加上4μl水与4μl的稀释的RT反应混合在一起。将反应混合物在室温以3750rpm离心2分钟并在Applied Biosystems型号7900HT SDS-Taqman系统上运行。

相对mRNA的量，以及体内化合物的效价和最大活性的计算。使用第二种衍生的比较性的Ct方法(derivative comparative Ct method)(2^-ΔΔCt)来计算ABCG1 mRNA的相对量。在相对于核糖体蛋白L30mRNA标准化(normalization)之后获得了定量结果(Quantification)。每个样品重复测试两次并且将Ct的平均值用于计算。

化合物在短尾猴中的体内效价的计算。将给药后5小时时测试化合物在来自每只单独的动物的血浆中的浓度相对诱导的倍数(fold induction)以及相对所有给药组的每只动物在给药后5小时时ABCG1 mRNA在血细胞中的基线作图。将来自所有给药组的数据包括在每种化合物的相同的图中。通过非线性曲线拟合使用S型剂量应答曲线(Graphpad Prism 4.03软件)来确定每种化合物的体内效价(EC₅₀)和对ABCG1 mRNA的最大诱导。

通过LC/MS/MS确定血浆化合物浓度。下面为用于定量分析在短尾猴血浆中的化合物的基于液体色谱法与串联质谱(LC/MS/MS)的生物分析方法的细节。

测试化合物的LC/MS/MS分析用从1至5000nM范围内的标准曲线来进行。标准曲线用反平方(1/x²)加权的线性回归来拟合。对标准的分析进行了单次重复。在空白的生物基质中制备了在标准曲线范围内的3个浓度的质量控制样品，且对所述样品在每个分析集合内进行了重复分析。大于75％的QC的确定的浓度在其标称值的20％的范围内。

在Janus 8-端和Janus Mini 96-端自动化液体处理器上进行样品的制备。将来自体内研究的生物基质(血浆)的等分试样(50μL)和标准/QC样品先后用1M碳酸铵于水中的溶液(pH 9.2，未调节(50μL)，含有200nM的两种内标(IS))和300μL甲基叔丁基醚(MTBE)处理并通过液体-液体提取(LLE)进行分配(使用四十个填充-排出端(fill-expel tip)重复大约3分钟)。然后将水和有机层以3900rpm离心2-min。将顶部有机层萃取溶剂MTBE(250μL)转移至另一个干净的96孔板中并放置于氮气蒸发器中在40℃持续15min至干。将等分试样(100μL)用于用由1∶1乙腈/水构成的流动相重组干燥萃取物。将10μL等分试样首先注入高涡流性能液相色谱(high-Turboflow performanceliquid chromatography，HTLC)提取柱，然后在第二个高效液相色谱法(HPLC)柱上洗脱从而用于基于LC/MS/MS的分析。

用于所有分析的LC系统为Aria TX-2(Thermo Scientific，Waltham，MA，USA)HPLC系统，所述系统由8个Shimadzu LC10AD泵与2个SCL-10AVP系统控制器(Columbia，MD，USA)和一个装备有在分析过程中使样品保持在10℃的冷却组件(cooling stack)的双臂CTC Analytics HTS PAL自动采样器(Switzerland)组成。HPLC在线提取柱为在室温保存的Cyclone-P混合聚合物(0.5x 50mm，50μM particle，Thermo Scientific，Waltham，MA，USA)。所使用的HPLC C18分析柱为在室温保存的XBridge C18(2.1mm x 50mm，5μM颗粒，Waters Corporation，Milford，MA，USA)。流动相(由0.1％甲酸于水(A)中的溶液和0.1％甲酸于乙腈(B)中的溶液构成)以1.5mL/min的流速递送至HTLC在线提取柱并且以0.5mL/min的流速递送至HPLC C18分析柱。这些流速在转移步骤(0.5至1.0min之间)期间发生变化。记录测试化合物和内标的保留时间。总分析时间为5.0min。梯度概述于下述表中。

HPLC C18 XBridge分析柱的流动相梯度

HTLC在线提取Cyclone-P柱的流动相梯度

用于所有分析的质谱为装备有在阳离子化和阴离子化模式下运行的加热电喷射界面的Finnigan Quantum Ultra串联质谱(Thermo Scientific，Waltham，MA，USA)。超高纯度(UHP)的氮气用作套管(sheath)气体和辅助(aux)气体，套管的流速为55psi且辅助的流速为25个单位。去溶剂化温度为350℃且源温度为350℃。通过选择性反应监测(SRM)来实现每个被分析物的检测。阳离子化模式用于定量分析测试化合物和内标。压力为1.5x10^-3托的UHP氩气保持在四极2的碰撞室中。记录了对本发明的化合物和其内标所监测的转换。

测试化合物在短尾猴中的体内效价，以及得自于在给药后5小时时血浆中化合物浓度对在给药后5小时时mRNA的诱导倍数所作的图的最大ABCG1诱导示于下述表2中。

表2

在短尾猴中给药后，本发明实施例4和9比本领域已知的化合物更有效约四倍和六十倍。类似地，与本领域已知的化合物相比(诱导约十二倍)，实施例4和9对血中ABCG1 mRNA的诱导最大为约六倍和九倍，从而在短尾猴血中表明了部分的LXR活性。

应当理解本申请所描述的实施例和实施方案仅用于说明的目的，而根据其的各种修改和变化均可向本领域技术人员建议并且并入本申请的精神和范围以及所附权利要求的范畴之内。因此出于所有目的本申请通过参考引入了本文引用的所有公开、专利和专利申请。

Claims

1.化合物或其药用盐，所述化合物选自：

2.权利要求1的化合物或其药用盐，所述化合物选自：

3.权利要求1的化合物或其药用盐，所述化合物选自：

4.权利要求1的化合物或其药用盐，所述化合物选自：

5.化合物或其药用盐，所述化合物为2-(1-(3-氯-3'-氟-4'-(羟甲基)-5'-(甲磺酰基)-联苯-4-基)-2-(2-(2,6-二氯苯基)丙-2-基)-1H-咪唑-4-基)丙-2-醇。

6.化合物或其药用盐，所述化合物为2-(2-(2-(2-氯-3-氟苯基)丙-2-基)-1-(3'-氟-4'-(羟甲基)-5'-(甲磺酰基)-联苯-4-基)-1H-咪唑-4-基)丙-2-醇。

7.化合物或其药用盐，所述化合物为2-(2-(2-(2,6-二氯苯基)丙-2-基)-1-(3'-氟-4'-(羟甲基)-5'-(甲磺酰基)-联苯-4-基)-1H-咪唑-4-基)丙-2-醇。

8.化合物或其药用盐，所述化合物为2-(2-(2-(2,6-二氯苯基)丙-2-基)-1-(3,3’-二氟-4'-(羟甲基)-5'-(甲磺酰基)-联苯-4-基)-1H-咪唑-4-基)丙-2-醇。

9.化合物或其药用盐，所述化合物为2-{2-[1-(2,6-二氯苯基)乙基]-1-[3,3’-二氟-4'-(羟甲基)-5'-(甲磺酰基)-联苯-4-基]-1H-咪唑-4-基}丙-2-醇。

10.化合物或其药用盐，所述化合物为2-(2-(2-(2,6-二氯苯基)丙-2-基)-1-(3,3’-二氟-4'-(羟甲基)-5'-(甲磺酰基)-联苯-4-基)-1H-咪唑-4-基)[(¹³CD₃)₂]丙-2-醇。

11.组合物，包括权利要求1-10中任一项的化合物或其药用盐和一种或多种药用载体。

12.权利要求1-10中任一项的化合物或其药用盐在制备用于治疗疾病或病症的药物中的用途，其中所述疾病或病症为胰岛素耐受性、骨关节炎、中风、高血糖、牛皮癣、年龄和UV暴露相关的皮肤起皱、糖尿病、癌症、阿尔茨海默病、炎症、免疫病症、脂代谢紊乱、肥胖、黄斑变性、具有表皮屏障作用紊乱特征的病症、表皮或粘膜分化紊乱或过度增殖的病症或心血管病症。

13.权利要求12的用途，其中所述疾病或病症为心血管病症、脂代谢紊乱、糖尿病或阿尔茨海默病，其中所述心血管病症为动脉粥样硬化，所述脂代谢紊乱为血脂异常。

14.权利要求12的用途，其中所述疾病或病症为动脉粥样硬化。

15.权利要求12的用途，其中所述疾病或病症为糖尿病。

16.权利要求12的用途，其中所述疾病或病症为阿尔茨海默病。