具体实施方式
下面结合具体实施例对具有降糖降脂作用的咖啡进一步说明。
一实施方式具有降糖降脂作用的咖啡,包括质量百分含量分别为1%~50%的咖啡粉、1%~50%的鲜牛奶、0%~10%的蔗糖、0.05%~30%的活性组合物,余量为水;其中,所述活性组合物包括低聚木糖与L-阿拉伯糖。
低聚木糖(xylooligosaccharide,XOS),又称为木寡糖,是由2-7个木糖分子以β-1,4糖苷键结合而成的功能性聚合糖,其天然存在于竹根、水果、蔬菜、牛乳和蜂蜜中,来源广泛,获得成本低。低聚木糖的甜度约为蔗糖的40%,然而其很难被人体消化酶分解,能量值几乎为零,不会增加血糖浓度,也不会形成脂肪沉积。此外,低聚木糖以其显著的双歧杆菌增殖作用以及其他功效而在食品、医药和保健品中广泛应用,成为最近发展起来的一种功能性食品添加剂,具有极大的开发前景。
L-阿拉伯糖(L-Arabinose),又称果胶糖,也是自然界中广泛存在的糖类,其常与其他单糖结合,以杂多糖的形式存在于植物果浆、胶体、半纤维素、果胶酸,松柏科树木心材,细菌多糖,以及某些糖苷中。近年来,有关L-阿拉伯糖对肠道内糖类代谢的作用已有大量研究,表明L-阿拉伯糖对双糖水解酶具有抑制作用,可抑制人体对蔗糖的吸收,起到降低血糖的效果。
在优选的实施例中,低聚木糖与L-阿拉伯糖的质量比小于等于45:55。当低聚木糖:L-阿拉伯糖的重量比例≤ 45:55时,得到的组合物的脂肪酶活性抑制率大于13.85%,该值大于单独的低聚木糖或L-阿拉伯糖在各种浓度所能达到的脂肪酶活性抑制率的最大值(分别为:低聚木糖咖啡4.27%;L-阿拉伯糖咖啡11.56%)。优选地,低聚木糖与L-阿拉伯糖的质量比为40:60。低聚木糖和L-阿拉伯糖对脂肪酶活性抑制的协同效应最为明显。
上述具有降糖降脂作用的咖啡中的活性组合物包括低聚木糖与L-阿拉伯糖,而L-阿拉伯糖对脂肪酶的活性存在明显的抑制作用,单独的低聚木糖在一定范围内对脂肪酶的活性也有较弱的抑制作用。然而,当采用低聚木糖与L-阿拉伯糖的组合时,脂肪酶活性抑制作用得到增强,组合物的脂肪酶活性抑制率要比相同浓度的L-阿拉伯糖和低聚木糖各自的脂肪酶活性抑制率之和要大,即低聚木糖与L-阿拉伯糖之间产生了协同作用,这种协同作用增强了低聚木糖和L-阿拉伯糖的脂肪酶活性抑制作用。
预备实验-测试不同终浓度的L-阿拉伯糖对脂肪酶活性的抑制率。
采用《QB/T 1803-1993 工业酶制剂通用试验方法》A.4.5.2.2的指示剂滴定法测定脂肪酶的活性。通过该方法测试本实施例的具有降糖降脂作用的咖啡对脂肪酶活性的抑制作用。方法如下:
低聚木糖:苏州先阔生物科技有限公司
L-阿拉伯糖:可以使用由多种已知方法生产的L-阿拉伯糖
配制待测脂肪酶液:将脂肪酶(30000u/mg,购自上海源叶生物科技有限公司)配制成0.02%酶溶液。
配制磷酸缓冲液:分别称取磷酸二氢钾1.96g和无水磷酸氢二钠15.72g,用水溶解并定容到500ml,调节pH至7.5。
配制橄榄油溶液:称取聚乙烯醇(PVA,聚合度为1750±50)40 g,加水800mL,在沸水浴中加热、搅拌,直至全部溶解,冷却后定容至1000mL。以干净的双层纱布过滤,取滤液备用。量取4%PVA溶液150mL,加橄榄油50mL,用高速组织捣碎机处理6min(分2次处理,每次3min,中间休息5min),即成乳白色PVA乳化液。该溶液要现用现配。
取数个100 mL三角瓶,分别于空白瓶和样品瓶中,各加橄榄油溶液4.00 mL和磷酸缓冲液5.00mL,再于空白瓶中加人95%乙醇15.0 ml,于40℃±2℃水浴预热5min,样品瓶中,其中一瓶不加入L-阿拉伯糖咖啡。其余样品瓶加入不同量的L-阿拉伯糖咖啡。然后,在各瓶中各加待测酶液 1.00 mL,立即混匀计时,在40 C±0.2℃水浴中准确反应15 min。在B瓶中立即补加95%乙醇15. 0 mL终止反应,取出;
于空白和样品溶液中各加酚酞指示液(10g/L)2滴,用0.05mol/L氢氧化钠标准溶液滴定直至微红色并保持30 s不褪为其终点,记录消耗0. 05 mol/L氢氧化钠标准溶液的体积。测定滴定上述的L-阿拉伯糖咖啡所需要的氢氧化钠的量。
按照《QB/T 1803-1993 工业酶制剂通用试验方法》计算出各组脂肪酶活性,以及加入L-阿拉伯糖后对脂肪酶的抑制率。
按照下式计算抑制率:
抑制率 = (脂肪酶活性-抑制后酶活性) / 脂肪酶活性 × 100%
表1为L-阿拉伯糖对脂肪酶活性的抑制率的影响。
表1
L-阿拉伯糖终浓度(g/L) |
0.25 |
0.5 |
1 |
10 |
脂肪酶活性抑制率 |
6.66% |
11.45% |
12.18% |
12.23% |
从表1中可见,L-阿拉伯糖对脂肪酶活性的抑制率随着其浓度的增加而增加,当L-阿拉伯糖的浓度达到0.5 g/L时,浓度的继续增加对抑制率的影响变得很小。可以认为,当L-阿拉伯糖的浓度在0.5 g/L时其对脂肪酶活性的抑制率趋于稳定。因此,后面的实验中我们使用0.5 g/L终浓度的L-阿拉伯糖作为对照实施例,并且组合物在反应体系中的终浓度也选择为0.5 g/L。
以下实施例中均采用预备实验中的方法测试咖啡对脂肪酶活性抑制率,在以下实施例中低聚木糖与L-阿拉伯糖的浓度总和为0.5 g/L,均已测定滴定相应的含不同配比的低聚木糖与L-阿拉伯糖组合物及单独的低聚木糖与L-阿拉伯糖咖啡所需要的氢氧化钠的量。以下为具体实施方式部分:
实施例一
(1)按照如下质量百分含量配制具有降糖降脂作用的咖啡:
咖啡粉 1%
鲜牛奶 1%
蔗糖 10%
低聚木糖与L-阿拉伯糖组合物 0.05%
余量为水
其中,低聚木糖与L-阿拉伯糖的质量比为1:99。
按以上配方取适量咖啡粉和90℃左右纯净水,加入咖啡壶,开启电源,按个人口味加工50秒至3分钟不等。关闭开关,滤网过滤后倒入杯中,按以上配方加入其余原料搅拌均匀即可。
(2)根据《QB/T 1803-1993 工业酶制剂通用试验方法》A.4.5.2.2指示剂滴定法测定本实施例的具有降糖降脂作用的咖啡对脂肪酶活性的抑制率。
参见表2,咖啡1a为本实施例提供的咖啡对脂肪酶活性的抑制率,咖啡1b为仅含有低聚木糖(与本实施例的咖啡中的低聚木糖浓度相同)的咖啡,咖啡1c为仅含有L-阿拉伯糖(与本实施例的咖啡中的L-阿拉伯糖浓度相同)的咖啡对脂肪酶活性的抑制率。
从表2中可以得出本实施例提供的咖啡对脂肪酶活性抑制率为12.67%,而仅含有低聚木糖的咖啡对脂肪酶活性抑制率(0.12%)与仅含有L-阿拉伯糖的咖啡对脂肪酶活性抑制率(11.23%)之和为11.35%,表明本实施例提供的咖啡对脂肪酶活性抑制率要大于分别含有同样浓度的低聚木糖和L-阿拉伯糖的咖啡对脂肪酶活性抑制率之和。这说明本实施例的咖啡中低聚木糖与L-阿拉伯糖的组合物在对脂肪酶活性的抑制作用上产生了协同作用,使得L-阿拉伯糖和低聚木糖各自的脂肪酶活性抑制作用得以增强。
表2
|
低聚木糖:L-阿拉伯糖 |
咖啡中低聚木糖终浓度(g/L) |
咖啡中L-阿拉伯糖终浓度(g/L) |
脂肪酶活性抑制率(%) |
咖啡1a |
1:99 |
0.005 |
0.495 |
12.67 |
咖啡1b |
100 |
0.005 |
0 |
0.12 |
咖啡1c |
0:100 |
0 |
0.495 |
11.23 |
实施例二
(1)按照如下质量百分含量配制具有降糖降脂作用的咖啡:
咖啡粉 50%
鲜牛奶 50%
低聚木糖与L-阿拉伯糖组合物 40%
余量为水
其中,低聚木糖与L-阿拉伯糖的质量比为40:60。
按以上配方取适量咖啡粉和90℃左右纯净水,加入咖啡壶,开启电源,按个人口味加工50秒至3分钟不等。关闭开关,滤网过滤后倒入杯中,按以上配方加入其余原料搅拌均匀即可。
(2)根据《QB/T 1803-1993 工业酶制剂通用试验方法》A.4.5.2.2指示剂滴定法测定本实施例的具有降糖降脂作用的咖啡对脂肪酶活性的抑制率。
参见表3,咖啡2a为本实施例提供的咖啡对脂肪酶活性的抑制率,咖啡2b为仅含有低聚木糖(与本实施例的咖啡中的低聚木糖浓度相同)的咖啡,咖啡2c为仅含有L-阿拉伯糖(与本实施例的咖啡中的L-阿拉伯糖浓度相同)的咖啡对脂肪酶活性的抑制率。
从表3中可以得出本实施例的具有降糖降脂作用的咖啡对脂肪酶活性抑制率19.53%,而仅含有相同浓度的低聚木糖对脂肪酶活性抑制率(3.65%)与仅含有相同浓度的L-阿拉伯糖单独对脂肪酶活性抑制率(10.44%)之和为14.09%。
表3
|
低聚木糖:L-阿拉伯糖 |
咖啡中低聚木糖终浓度(g/L) |
咖啡中L-阿拉伯糖终浓度(g/L) |
脂肪酶活性抑制率(%) |
咖啡2a |
40:60 |
0.2 |
0.3 |
19.53 |
咖啡2b |
100 |
0.2 |
0 |
3.65 |
咖啡2c |
0:100 |
0 |
0.3 |
10.44 |
实施例三
(1)按照如下质量百分含量配制具有降糖降脂作用的咖啡:
咖啡粉 30%
鲜牛奶 4%
蔗糖 25%
低聚木糖与L-阿拉伯糖组合物 0.05%
余量为水。其中,低聚木糖与L-阿拉伯糖的质量比为45:55。
按以上配方取适量咖啡粉和90℃左右纯净水,加入咖啡壶,开启电源,按个人口味加工50秒至3分钟不等。关闭开关,滤网过滤后倒入杯中,按以上配方加入其余原料搅拌均匀即可。
(2)根据《QB/T 1803-1993 工业酶制剂通用试验方法》A.4.5.2.2指示剂滴定法测定本实施例的具有降糖降脂作用的咖啡对脂肪酶活性的抑制率。
参见表4,咖啡3a为本实施例提供的咖啡对脂肪酶活性的抑制率,咖啡3b为仅含有低聚木糖(与本实施例的咖啡中的低聚木糖浓度相同)的咖啡,咖啡3c为仅含有L-阿拉伯糖(与本实施例的咖啡中的L-阿拉伯糖浓度相同)的咖啡对脂肪酶活性的抑制率。
从表4中可以得出本实施例的具有降糖降脂作用的咖啡对脂肪酶活性抑制率12.59%,而仅含有相同浓度的低聚木糖对脂肪酶活性抑制率(3.25%)与仅含有相同浓度的L-阿拉伯糖单独对脂肪酶活性抑制率(8.58%)之和为11.83%。
表4
|
低聚木糖:L-阿拉伯糖 |
咖啡中低聚木糖终浓度(g/L) |
咖啡中L-阿拉伯糖终浓度(g/L) |
脂肪酶活性抑制率(%) |
咖啡3a |
45:55 |
0.225 |
0.275 |
12.59 |
咖啡3b |
100 |
0.225 |
0 |
3.25 |
咖啡3c |
0:100 |
0 |
0.275 |
8.58 |
实施例四
(1)按照如下质量百分含量配制具有降糖降脂作用的咖啡:
咖啡粉 9%
鲜牛奶 4%
蔗糖 2%
低聚木糖与L-阿拉伯糖组合物 15%
余量为水
其中,低聚木糖与L-阿拉伯糖的质量比为50:50。
按以上配方取适量咖啡粉和90℃左右纯净水,加入咖啡壶,开启电源,按个人口味加工50秒至3分钟不等。关闭开关,滤网过滤后倒入杯中,按以上配方加入其余原料搅拌均匀即可。
(2)根据《QB/T 1803-1993 工业酶制剂通用试验方法》A.4.5.2.2指示剂滴定法测定本实施例的具有降糖降脂作用的咖啡对脂肪酶活性的抑制率。
参见表5,咖啡4a为本实施例提供的咖啡对脂肪酶活性的抑制率,咖啡4b为仅含有低聚木糖(与本实施例的咖啡中的低聚木糖浓度相同)的咖啡,咖啡4c为仅含有L-阿拉伯糖(与本实施例的咖啡中的L-阿拉伯糖浓度相同)的咖啡对脂肪酶活性的抑制率。
从表5中可以得出本实施例的具有降糖降脂作用的咖啡对脂肪酶活性抑制率8.67%,而仅含有相同浓度的低聚木糖对脂肪酶活性抑制率(2.87%)与仅含有相同浓度的L-阿拉伯糖单独对脂肪酶活性抑制率(5.54%)之和为8.41%。
表5
|
低聚木糖:L-阿拉伯糖 |
咖啡中低聚木糖终浓度(g/L) |
咖啡中L-阿拉伯糖终浓度(g/L) |
脂肪酶活性抑制率(%) |
咖啡4a |
50:50 |
0.25 |
0.25 |
8.67 |
咖啡4b |
100 |
0.25 |
0 |
2.87 |
咖啡4c |
0:100 |
0 |
0.25 |
5.54 |
实施例五
(1)按照如下质量百分含量配制具有降糖降脂作用的咖啡:
咖啡粉 8%
鲜牛奶 3%
低聚木糖与L-阿拉伯糖组合物 3%
余量为水
其中,低聚木糖与L-阿拉伯糖的质量比为60:40。
按以上配方取适量咖啡粉和90℃左右纯净水,加入咖啡壶,开启电源,按个人口味加工50秒至3分钟不等。关闭开关,滤网过滤后倒入杯中,按以上配方加入其余原料搅拌均匀即可。
(2)根据《QB/T 1803-1993 工业酶制剂通用试验方法》A.4.5.2.2指示剂滴定法测定本实施例的具有降糖降脂作用的咖啡对脂肪酶活性的抑制率。
参见表6,咖啡5a为本实施例提供的咖啡对脂肪酶活性的抑制率,咖啡5b为仅含有低聚木糖(与本实施例的咖啡中的低聚木糖浓度相同)的咖啡,咖啡5c为仅含有L-阿拉伯糖(与本实施例的咖啡中的L-阿拉伯糖浓度相同)的咖啡对脂肪酶活性的抑制率。
从表6中可以得出本实施例的具有降糖降脂作用的咖啡对脂肪酶活性抑制率5.61%,而仅含有相同浓度的低聚木糖对脂肪酶活性抑制率(1.79%)与仅含有相同浓度的L-阿拉伯糖单独对脂肪酶活性抑制率(2.98%)之和为4.77%。
表6
|
低聚木糖:L-阿拉伯糖 |
咖啡中低聚木糖终浓度(g/L) |
咖啡中L-阿拉伯糖终浓度(g/L) |
脂肪酶活性抑制率(%) |
咖啡5a |
60:40 |
0.3 |
0.2 |
5.61 |
咖啡5b |
100 |
0.3 |
0 |
1.79 |
咖啡5c |
0:100 |
0 |
0.2 |
2.98 |
实施例六
(1)按照如下质量百分含量配制具有降糖降脂作用的咖啡:
咖啡粉 10%
鲜牛奶 5%
蔗糖 4%
低聚木糖与L-阿拉伯糖组合物 0.8%
余量为水。
其中,低聚木糖与L-阿拉伯糖的质量比为99:1。
按以上配方取适量咖啡粉和90℃左右纯净水,加入咖啡壶,开启电源,按个人口味加工50秒至3分钟不等。关闭开关,滤网过滤后倒入杯中,按以上配方加入其余原料搅拌均匀即可。
(2)根据《QB/T 1803-1993 工业酶制剂通用试验方法》A.4.5.2.2指示剂滴定法测定本实施例的具有降糖降脂作用的咖啡对脂肪酶活性的抑制率。
参见表7,咖啡6a为本实施例提供的咖啡对脂肪酶活性的抑制率,咖啡6b为仅含有低聚木糖(与本实施例的咖啡中的低聚木糖浓度相同)的咖啡,咖啡6c为仅含有L-阿拉伯糖(与本实施例的咖啡中的L-阿拉伯糖浓度相同)的咖啡对脂肪酶活性的抑制率。
从表7中可以得出本实施例的具有降糖降脂作用的咖啡对脂肪酶活性抑制率1.72%,而仅含有相同浓度的低聚木糖对脂肪酶活性抑制率(0.43%)与仅含有相同浓度的L-阿拉伯糖单独对脂肪酶活性抑制率(1.12%)之和为1.57%。
表7
|
低聚木糖:L-阿拉伯糖 |
咖啡中低聚木糖终浓度(g/L) |
咖啡中L-阿拉伯糖终浓度(g/L) |
脂肪酶活性抑制率(%) |
咖啡6a |
99:1 |
0.495 |
0.005 |
1.72 |
咖啡6b |
100 |
0.495 |
0 |
0.43 |
咖啡6c |
0:100 |
0 |
0.005 |
1.12 |
对比例1
(1)按照如下质量百分含量配制咖啡:
咖啡粉 8%
鲜牛奶 3%
蔗糖 5%
L-阿拉伯糖 20%
余量为水
按以上配方取适量咖啡粉和90℃左右纯净水,加入咖啡壶,开启电源,按个人口味加工50秒至3分钟不等。关闭开关,滤网过滤后倒入杯中,按以上配方加入其余原料搅拌均匀即可。
(2)根据《QB/T 1803-1993 工业酶制剂通用试验方法》A.4.5.2.2指示剂滴定法测定本实施例的具有降糖降脂作用的咖啡对脂肪酶活性的抑制率。
参阅表8,表7a为对比例1中的咖啡对脂肪酶活性的抑制率为11.45%,表7b为没有添加低聚木糖及L-阿拉伯糖的咖啡对脂肪酶活性的抑制率0%,表7c为仅含有L-阿拉伯糖(与本实施例的咖啡中的L-阿拉伯糖浓度相同)的咖啡对脂肪酶活性的抑制率11.45%。
从表8中看出,没有添加低聚木糖及L-阿拉伯糖的咖啡对脂肪酶活性的抑制率(0%)与仅含有L-阿拉伯糖的咖啡对脂肪酶活性的抑制率(11.45%)之和为11.45%,单独的L-阿拉伯糖对脂肪酶的活性存在明显的抑制作用。
表8
|
低聚木糖:L-阿拉伯糖 |
咖啡中低聚木糖终浓度(g/L) |
咖啡中L-阿拉伯糖终浓度(g/L) |
脂肪酶活性抑制率(%) |
咖啡7a |
0:100 |
0 |
0.5 |
11.45 |
咖啡7b |
0 |
0 |
0 |
0 |
咖啡7c |
0:100 |
0 |
0.5 |
11.45 |
对比例2
(1)按照如下质量百分含量配制咖啡:
咖啡粉 10%
鲜牛奶 5%
蔗糖 5%
低聚木糖 20%
余量为水
按以上配方取适量咖啡粉和90℃左右纯净水,加入咖啡壶,开启电源,按个人口味加工50秒至3分钟不等。关闭开关,滤网过滤后倒入杯中,按以上配方加入其余原料搅拌均匀即可。
(2)根据《QB/T 1803-1993 工业酶制剂通用试验方法》A.4.5.2.2指示剂滴定法测定本实施例的具有降糖降脂作用的咖啡对脂肪酶活性的抑制率。
参阅表9,表8a为对比例2中的咖啡对脂肪酶活性的抑制率为0.41%,表8b为仅含有低聚木糖的咖啡对脂肪酶活性的抑制率0.41%,表8c为没有低聚木糖及L-阿拉伯糖的咖啡对脂肪酶活性的抑制率0.05%
从表9中看出,没有添加低聚木糖及L-阿拉伯糖的咖啡对脂肪酶活性的抑制率(0%)与仅含有低聚木糖的咖啡对脂肪酶活性的抑制率(0.41%)之和为0.41%,单独的低聚木糖对脂肪酶的活性也有较弱的抑制作用。
表9
上述具有咖啡中的活性组合物包括低聚木糖与L-阿拉伯糖,而L-阿拉伯糖对脂肪酶的活性存在明显的抑制作用,单独的低聚木糖对脂肪酶的活性也有较弱的抑制作用。然而,当采用低聚木糖与L-阿拉伯糖的组合时,脂肪酶活性抑制作用得到增强,组合物的脂肪酶活性抑制率要比相同浓度的L-阿拉伯糖和低聚木糖各自的脂肪酶活性抑制率之和要大,即低聚木糖与L-阿拉伯糖之间产生了协同作用,这种协同作用增强了低聚木糖和L-阿拉伯糖的脂肪酶活性抑制作用。因此,上述咖啡具有较好降脂作用。
进一步通过实验测试含低聚木糖与L-阿拉伯糖组合物咖啡对α-葡萄糖苷酶分解蔗糖作用的研究。
实验主要材料试剂:
低聚木糖:苏州先阔生物科技有限公司
L-阿拉伯糖:可以使用由多种已知方法生产的L-阿拉伯糖
α-葡萄糖苷酶(5000U/g,为上海源叶公司产品)
磷酸盐缓冲液(1L): 1mol/L K2HPO4 497ml, 1mol/L KH2PO4 503ml, 缓冲液PH值6.8
α-葡萄糖苷酶溶液(500U/ml):取1gα-葡萄糖苷酶(5000U/g)定容至10ml
含低聚木糖咖啡或L-阿拉伯糖咖啡或者含组合物咖啡作为抑制剂加入
预实验:
本实验设定:空白对照组(缓冲液+蔗糖+酶液)。反应体系为500ul,37℃反应30min,放入沸水中5min终止反应,用HPLC测定在酶作用下释放出的葡萄糖含量。
样品测定组(缓冲液+蔗糖+酶液+抑制剂):先向磷酸钾缓冲液的酶活力测定系统中加入α-葡萄糖苷酶、抑制剂,37℃保温10min,再加入底物37℃反应30 min, 放入沸水中5min终止反应,用HPLC测定葡萄糖产量。
蔗糖浓度为2.5 g/L。L-阿拉伯糖终浓度为0.075g/L,0.375g/L,0. 75g/L。测定出L-阿拉伯糖对α-葡萄糖苷酶抑制率分别40.02%,66.2%,68.02%。
低聚木糖与L-阿拉伯糖的浓度总和固定为0.375 g/L
表10为不同比例低聚木糖:L-阿拉伯糖比例的组合物中的α-葡萄糖苷酶酶活抑制率
从实施例7~10,可以看出当采用低聚木糖与L-阿拉伯糖的组合时,α-葡萄糖苷酶酶活抑制作用得到增强,含组合物咖啡的α-葡萄糖苷酶酶活性抑制率要比含相同浓度的L-阿拉伯糖咖啡和含低聚木糖咖啡各自的α-葡萄糖苷酶酶活抑制率之和要大,即低聚木糖与L-阿拉伯糖之间产生了协同作用,这种协同作用增强了低聚木糖和L-阿拉伯糖的α-葡萄糖苷酶酶活性抑制作用,因此,上述的咖啡具有较好降糖作用。
进一步通过实验测试低聚木糖与L-阿拉伯糖组合物对胆固醇酯酶的研究。
实验材料:
总胆固醇试剂盒-CHO。购自上海源叶生物科技有限公司。
低聚木糖:苏州先阔生物科技有限公司
L-阿拉伯糖:可以使用由多种已知方法生产的L-阿拉伯糖
乙酸胆固醇酯:购自上海源叶生物科技有限公司。
预实验
测定L-阿拉伯糖对胆固醇酯酶的抑制率
步骤 :按试剂盒操作步骤。
1.将酶剂用适量的缓冲液溶解,配成工作液,稳定10分钟后使用。
2.测定参数:波长:500nm;光径:10mm;温度:37℃。
3. 设置对照管,标准管和样品管。不同的对照管中加入工作液或者工作液与L-阿拉伯糖咖啡(抑制剂);样品管中加入不同量的L-阿拉伯糖咖啡(抑制剂)。
4.按照试剂盒的公式进行计算。先分别用胆固醇标品测定抑制剂对胆固醇氧化酶和过氧化物酶的作用,再通过胆固醇酯测定抑制剂对胆固醇酯酶,胆固醇氧化酶和过氧化物酶的总体抑制率,进而计算出抑制剂对胆固醇酯酶的抑制作用。结果如下:
表11为L-阿拉伯糖咖啡中对胆固醇酯酶活性的抑制率:
L-阿拉伯糖浓度(g/L) |
0.08 |
0.5 |
1 |
10 |
胆固醇酯酶活性抑制率 |
1.78% |
4.63% |
9.89% |
9.95% |
从表11中可见,L-阿拉伯糖对胆固醇酯酶活性的抑制率随着其浓度的增加而增加,当L-阿拉伯糖的浓度达到1 g/L时,浓度的继续增加对抑制率的影响变得很小。可以认为,当L-阿拉伯糖的浓度在1 g/L时其对胆固醇酯酶活性的抑制率趋于稳定。因此,后面的实验中我们使用1 g/L终浓度的L-阿拉伯糖作为对照实施例,并且组合物(作为抑制剂)在反应体系中的终浓度也选择为1 g/L。
表12是不同比例低聚木糖:L-阿拉伯糖组合物豆制饮品对胆固醇酯酶活性抑制率
*浓度数据下方括号内斜体数字为含该浓度的低聚木糖咖啡单独对胆固醇酯酶活性的抑制率(%);
**浓度数据下方括号内斜体数字为含该浓度的L-阿拉伯糖咖啡单独对胆固醇酯酶活性的抑制率(%);
***该列括号内斜体数字为含低聚木糖咖啡和含L-阿拉伯糖咖啡分别单独对胆固醇酯酶活性的抑制率的加和(%)。
从实施例11~16,可以看出当采用低聚木糖与L-阿拉伯糖的组合时,胆固醇酯酶活性抑制作用得到增强,组合物的胆固醇酯酶活性抑制率要比相同浓度的L-阿拉伯糖和低聚木糖各自的胆固醇酯酶活性抑制率之和要大,即低聚木糖与L-阿拉伯糖之间产生了协同作用,这种协同作用增强了低聚木糖和L-阿拉伯糖的胆固醇酯酶活性抑制作用,因此,上述的咖啡具有较好降胆固醇作用。
综上所述,上述咖啡中的活性组合物包括低聚木糖与L-阿拉伯糖,酶活性抑制作用得到增强,即低聚木糖与L-阿拉伯糖之间产生了协同作用,这种协同作用增强了低聚木糖和L-阿拉伯糖的脂肪酶活性、α-葡萄糖苷酶酶活性及胆固醇酯酶活性的抑制作用,可抑制由饮食摄入糖类,脂肪,胆固醇吸收,降糖降脂效果明显;同时,由于低聚木糖很难被人体消化酶分解,能量值几乎为零,不会增加血糖的浓度;另外,低聚木糖与L-阿拉伯糖能大量增殖人体肠道双歧杆菌,双歧杆菌可以使结合型胆酸盐变为去结合型胆酸盐,可以与胆固醇结合排出体外导致血液中的胆固醇含量下降。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。