CN102580152A - 一种制备脱细胞骨的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种制备脱细胞骨的方法，将动物骨通过制备骨片、病毒灭活、脱脂、脱细胞、冻干、裁剪、成型、包装和辐照消毒工艺后得到脱细胞骨。本发明的优点：脱脂时间短、效率高、对骨组织结构的保护作用强，脱细胞彻底，对骨细胞外基质天然结构损害轻的优点。

Description

一种制备脱细胞骨的方法

技术领域

本发明涉及一种制备脱细胞骨的方法。

背景技术

骨修复一直是临床上的难题，目前治疗骨缺损的方法仍然以自体和异体骨移植为主。临床上关于异种骨移植存在的抗原性强、排斥反应强的问题尚未有效解决，异种骨的抗原性主要来自于异种骨细胞，目前的工艺制备的异种骨材料存在以下不足：操作较复杂，周期较长，效率较低；脱细胞不彻底，容易造成骨基质的损坏。因此，需要提供一种新的技术方案来解决上述问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种周期较短、效率较高、脱细胞彻底、对骨细胞外基质天然结构损害轻的制备脱细胞骨的方法。

本发明采用的技术方案是：

一种制备脱细胞骨的方法，该脱细胞骨由猪骨、牛骨或羊骨制备而成，其特征在于，包括以下步骤：

 a、制备异种骨工艺：将动物骨切成的0.2-0.4cm片状骨片，清除表面油脂；

b、病毒灭活工艺：将片状骨片用质量浓度0.1%~2%的过氧乙酸和质量浓度1%~5%的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行病毒灭活0.5-1.0小时，片状骨片与病毒灭活溶液的质量比为1: 3-5；

c、脱脂工艺：采用质量浓度3.0%~5.0%纯碱、质量浓度3.0%~5.0%烧碱和质量浓度0.5%~1.0%表面活性剂组成的混合脱脂剂进行脱脂1.0-5.0小时，所述表面活性剂为平平加、十二烷基氨基丙酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚、曲拉酮中的一种，片状骨片与混合脱脂剂的质量比为1: 3-5；

d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.1%-0.5%胰酶、激活剂和脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞工艺1.0-2.0小时，所述激活剂为质量浓度0.1%~0.3%硫酸铵，所述脱脂剂为质量浓度0.2%~0.5%平平加，片状骨片与脱细胞液的质量比为1: 3-5；

e、冻干、裁剪、定型工艺：将经脱细胞工艺后制备好的骨片，放入冷冻干燥机冻干后，进一步将脱细胞骨根据临床不同的适应症的需要，分别裁剪、定型；

f、包装和辐照消毒工艺：成型包装、经γ射线辐照灭菌，即为成品。

    本发明的有益效果：（1）b步骤采用过氧乙酸和氯化钠溶液组成的病毒灭活液进行病毒灭活，既达到了病毒灭活的效果，又避免了过氧乙酸溶液灭活病毒而产生的骨肿胀的问题；（2）c步骤中的由纯碱、烧碱、表面活性剂组成的混合脱脂剂具有脱脂时间短、效率高、对骨组织天然结构的保护作用强的优点；（3）d步骤中采用酶、激活剂和脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞，具有脱细胞彻底，对骨细胞外基质天然结构损害轻的优点。

具体实施方式

实施例1

本发明的一种制备脱细胞骨的方法，该脱细胞骨由猪骨、牛骨或羊骨制备而成，包括以下步骤：

    a、制备异种骨工艺：将动物骨切成的0.2cm片状骨片，清除表面油脂；

b、病毒灭活工艺：将片状骨片用质量浓度0.1%的过氧乙酸和质量浓度1%的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行病毒灭活0.5小时，片状骨片与病毒灭活溶液的质量比为1:3；

c、脱脂工艺：采用质量浓度3.0%纯碱、质量浓度3.0%烧碱和质量浓度0.5%平平加组成的混合脱脂剂进行脱脂1.0小时，片状骨片与混合脱脂剂的质量比为1:3；

d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.1%胰酶、激活剂和脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞工艺1.0小时，激活剂为质量浓度0.1%硫酸铵，脱脂剂为质量浓度0.2%平平加，片状骨片与脱细胞液的质量比为1:3；

e、冻干、裁剪、定型工艺：将经脱细胞工艺后制备好的骨片，放入冷冻干燥机冻干后，进一步将脱细胞骨根据临床不同的适应症的需要，分别裁剪、定型；

f、包装和辐照消毒工艺：成型包装、经γ射线辐照灭菌，即为成品。

实施例2

本发明的一种制备脱细胞骨的方法，该脱细胞骨由猪骨、牛骨或羊骨制备而成，包括以下步骤：

    a、制备异种骨工艺：将动物骨切成的0.3cm片状骨片，清除表面油脂；

b、病毒灭活工艺：将片状骨片用质量浓度1%的过氧乙酸和质量浓度3%的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行病毒灭活0.8小时，片状骨片与病毒灭活溶液的质量比为1:4；

c、脱脂工艺：采用质量浓度4.0%纯碱、质量浓度4.0%烧碱和质量浓度0.8%十二烷基氨基丙酸钠组成的混合脱脂剂进行脱脂3.0小时，片状骨片与混合脱脂剂的质量比为1:4；

d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.3%胰酶、激活剂和脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞工艺1.5小时，激活剂为质量浓度0.2%硫酸铵，脱脂剂为质量浓度0.3%平平加，片状骨片与脱细胞液的质量比为1:4；

e、冻干、裁剪、定型工艺：将经脱细胞工艺后制备好的骨片，放入冷冻干燥机冻干后，进一步将脱细胞骨根据临床不同的适应症的需要，分别裁剪、定型；

f、包装和辐照消毒工艺：成型包装、经γ射线辐照灭菌，即为成品。

实施例3

本发明的一种制备脱细胞骨的方法，该脱细胞骨由猪骨、牛骨或羊骨制备而成，包括以下步骤：

    a、制备异种骨工艺：将动物骨切成的0.4cm片状骨片，清除表面油脂；

b、病毒灭活工艺：将片状骨片用质量浓度2%的过氧乙酸和质量浓度5%的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行病毒灭活1.0小时，片状骨片与病毒灭活溶液的质量比为1: 5；

c、脱脂工艺：采用质量浓度5.0%纯碱、质量浓度5.0%烧碱和质量浓度1.0%脂肪醇聚氧乙烯醚组成的混合脱脂剂进行脱脂5.0小时，片状骨片与混合脱脂剂的质量比为1:5；

d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.5%胰酶、激活剂和脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞工艺2.0小时，激活剂为质量浓度0.3%硫酸铵，脱脂剂为质量浓度0.5%平平加，片状骨片与脱细胞液的质量比为1:5；

e、冻干、裁剪、定型工艺：将经脱细胞工艺后制备好的骨片，放入冷冻干燥机冻干后，进一步将脱细胞骨根据临床不同的适应症的需要，分别裁剪、定型；

f、包装和辐照消毒工艺：成型包装、经γ射线辐照灭菌，即为成品。

c步骤脱脂工艺中，表面活性剂还可以为曲拉酮。

本发明的有益效果：（1）b步骤采用过氧乙酸和氯化钠溶液组成的病毒灭活液进行病毒灭活，既达到了病毒灭活的效果，又避免了过氧乙酸溶液灭活病毒而产生的骨肿胀的问题；（2）c步骤中的由纯碱、烧碱、表面活性剂组成的混合脱脂剂具有脱脂时间短、效率高、对骨组织天然结构的保护作用强的优点；（3）d步骤中采用酶、激活剂和脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞，具有脱细胞彻底，对骨细胞外基质天然结构损害轻的优点。

本发明涉及一种脱细胞骨的应用。该脱细胞骨供医疗机构用于各种原因引起的人体骨组织缺损的修复治疗。

Claims (1)

1.一种制备脱细胞骨的方法，该脱细胞骨由猪骨、牛骨或羊骨制备而成，其特征在于，包括以下步骤：

    a、制备异种骨工艺：将动物骨切成的0.2-0.4cm片状骨片，清除表面油脂；

b、病毒灭活工艺：将片状骨片用质量浓度0.1%~2%的过氧乙酸和质量浓度1%~5%的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行病毒灭活0.5-1.0小时，片状骨片与病毒灭活溶液的质量比为1: 3-5；

c、脱脂工艺：采用质量浓度3.0%~5.0%纯碱、质量浓度3.0%~5.0%烧碱和质量浓度0.5%~1.0%表面活性剂组成的混合脱脂剂进行脱脂1.0-5.0小时，所述表面活性剂为平平加、十二烷基氨基丙酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚、曲拉酮中的一种，片状骨片与混合脱脂剂的质量比为1: 3-5；

d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.1%-0.5%胰酶、激活剂和脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞工艺1.0-2.0小时，所述激活剂为质量浓度0.1%~0.3%硫酸铵，所述脱脂剂为质量浓度0.2%~0.5%平平加，片状骨片与脱细胞液的质量比为1: 3-5；

e、冻干、裁剪、定型工艺：将经脱细胞工艺后制备好的骨片，放入冷冻干燥机冻干后，进一步将脱细胞骨根据临床不同的适应症的需要，分别裁剪、定型；

f、包装和辐照消毒工艺：成型包装、经γ射线辐照灭菌，即为成品。