CN103191466B - 制备人体或动物脱细胞组织的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种制备人体或动物脱细胞组织的制备方法,该方法是将人类或动物的组织如:皮肤、胸腹膜、食道黏膜、小肠黏膜、心包膜、血管、神经、心脏瓣膜、骨、软骨、肌腱等,用病毒灭活、脱脂、脱细胞等工艺处理后得到的脱细胞组织,为一种无细胞的三维网状结构组织,保留细胞外基质成分。该方法制备的组织,可以作为人体植入性的修复材料,也可以作为组织工程细胞培养的支架材料。皮肤、胸腹膜、食道黏膜、小肠黏膜、心包膜等也可作为创面覆盖材料。
Description
技术领域
本发明涉及一种制备人体或动物脱细胞组织的方法。
背景技术
现有的人体或动物脱细胞组织的制备,由于工艺、处理剂等原因,处理时间长,效率低,易造成组织结构的破坏,影响产品质量。
发明内容
本发明的目的在于提供一种生产效率高,产品质量好的制备人体或动物脱细胞组织的方法。
本发明的技术解决方案是:
一种制备人体或动物脱细胞组织的方法,其特征是:包括下列步骤:
(一)组织初加工:将人体或动物的组织用机械方法去除表面脂肪,按临床用途制备成临床所需的各种形状;
(二)病毒灭活、脱脂、脱细胞:
依次经下列步骤处理:
(1)将经过初加工的人体或动物组织,用第一灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理10~30分钟;所述第一灭活、脱脂液由0.1%~2%的过氧乙酸、1%~5%的氯化钠溶液、0.5~2%的表面活性剂及余量的水组成;
(2)将经上述步骤处理的人体或动物组织用第二灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理10~30分钟;所述第二灭活、脱脂液由1%-4%的烧碱、0.5%-2%的表面活性剂及余量的水组成;
(3)将经上述步骤处理的人体或动物组织用灭活、脱细胞液进行病毒灭活和脱细胞处理10~30分钟;所述灭活、脱细胞液由0.1%~2%的过氧乙酸、1%~5%的氯化钠溶液、0.5~2%的表面活性剂、0.2%~2%的胰酶或胰蛋白酶及余量的水组成,并用0.1%-4%的纯碱调pH值为5~7,处理温度为30℃-40℃;
(4)循环操作:根据组织的不同,将上述步骤(1)、(2)、(3)循环操作2~7次;
(5)组织保存:将制备好的组织浸泡于保存液中,用PE或PVC材质的密封袋保存,根据需要保存1~12个月;所述保存液由0.1%~2%的过氧乙酸、1%~5%的氯化钠及余量的水组成,并用0.1%-4%的纯碱调pH值为5~7;
(6)冻干、包装、辐照消毒:将产品低温冷冻干燥,成型包装、再经γ射线辐照或环氧乙烷消毒灭菌,即为成品。
第一灭活、脱脂液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。
第二灭活、脱脂液中的表面活性剂为平平加、十二烷基氨基丙酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。
灭活、脱细胞液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。
步骤(4)循环操作时,皮肤组织循环操作2~3次;胸腹膜、食道黏膜、小肠黏膜、心包膜组织循环操作1~2次;血管、神经、心脏瓣膜、骨、软骨、肌腱组织循环操作3~7次。
本发明生产效率高,产品质量好;将人类或动物的组织如:皮肤、胸腹膜、食道黏膜、小肠黏膜、心包膜、血管、神经、心脏瓣膜、骨、软骨、肌腱等,用病毒灭活、脱脂、脱细胞等工艺处理后得到脱细胞组织,为一种无细胞的三维网状结构组织,保留细胞外基质成分。该方法制备的组织,可以作为人体植入性的修复材料,也可以作为组织工程细胞培养的支架材料。皮肤、胸腹膜、食道黏膜、小肠黏膜、心包膜等也可作为创面覆盖材料。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1:
一种制备人体或动物脱细胞组织的方法,包括下列步骤:
(一)组织初加工:将人体或动物的组织(本实施例为:胸腹膜、食道黏膜、小肠黏膜或心包膜组织)用机械方法去除表面脂肪,按临床用途制备成临床所需的各种形状;
(二)病毒灭活、脱脂、脱细胞:
依次经下列步骤处理:
(1)将经过初加工的人体或动物组织,用第一灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理30分钟;所述第一灭活、脱脂液由2%的过氧乙酸、1的氯化钠溶液、2%的表面活性剂及余量的水组成;用过氧乙酸和氯化钠溶液进行灭活,同时加入表面活性剂进行脱脂,在病毒灭活的同时又达到脱脂的效果,具有脱脂时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。
(2)将经上述步骤处理的人体或动物组织用第二灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理20分钟;所述第二灭活、脱脂液由4%的烧碱、1%的表面活性剂及余量的水组成;用2%的烧碱进行病毒灭活,同时加入0.5%%的表面活性剂进行脱脂,具有脱脂时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。
(3)将经上述步骤处理的人体或动物组织用灭活、脱细胞液进行病毒灭活和脱细胞处理30分钟;所述灭活、脱细胞液由2%的过氧乙酸、1%的氯化钠溶液、0.5%的表面活性剂、0.2%的胰酶或胰蛋白酶及余量的水组成,并用0.1%%的纯碱调pH值为5,处理温度为30℃℃;在病毒灭活的同时,进行脱脂和脱细胞,具有脱脂时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。
(4)循环操作:将上述步骤(1)、(2)、(3)循环操作1~2次;循环操作具有病毒灭活彻底,脱脂、脱细胞时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。一般情况下,在24小时内完成组织脱细胞过程。
(5)组织保存:将制备好的组织浸泡于保存液中,用PE或PVC材质的密封袋保存,根据需要保存1~12个月;所述保存液由0.1%~2%的过氧乙酸、1%~5%的氯化钠及余量的水组成,并用0.1%-4%的纯碱调pH值为5~7;保存液的配方合理,保存工艺有利于进行大规模生产,降低原料采购成本和生产成本。
(6)冻干、包装、辐照消毒:将产品低温冷冻干燥,成型包装、再经γ射线辐照或环氧乙烷消毒灭菌,即为成品。
第一灭活、脱脂液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。
第二灭活、脱脂液中的表面活性剂为平平加、十二烷基氨基丙酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。
灭活、脱细胞液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。
实施例2:
一种制备人体或动物脱细胞组织的方法,包括下列步骤:
(一)组织初加工:将人体或动物的组织(皮肤组织)用机械方法去除表面脂肪,按临床用途制备成临床所需的各种形状;
(二)病毒灭活、脱脂、脱细胞:
依次经下列步骤处理:
(1)将经过初加工的人体或动物的皮肤组织,用第一灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理10分钟;所述第一灭活、脱脂液由0.1%的过氧乙酸、3%的氯化钠溶液、1%的表面活性剂及余量的水组成;用过氧乙酸和氯化钠溶液进行灭活,同时加入表面活性剂进行脱脂,在病毒灭活的同时又达到脱脂的效果,具有脱脂时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。
(2)将经上述步骤处理的人体或动物的皮肤组织用第二灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理30分钟;所述第二灭活、脱脂液由1%%的烧碱、2%的表面活性剂及余量的水组成;用4%的烧碱进行病毒灭活,同时加入1%的表面活性剂进行脱脂,具有脱脂时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。
(3)将经上述步骤处理的人体或动物的皮肤组织用灭活、脱细胞液进行病毒灭活和脱细胞处理20分钟;所述灭活、脱细胞液由1%的过氧乙酸、3%的氯化钠溶液、2%的表面活性剂、1%的胰酶或胰蛋白酶及余量的水组成,并用0.1%的纯碱调pH值为67,处理温度为35℃;在病毒灭活的同时,进行脱脂和脱细胞,具有脱脂时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。
(4)循环操作:将上述步骤(1)、(2)、(3)循环操作2~3次;循环操作具有病毒灭活彻底,脱脂、脱细胞时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。一般情况下,在24小时内完成组织脱细胞过程。
(5)组织保存:将制备好的组织浸泡于保存液中,用PE或PVC材质的密封袋保存,根据需要保存1~12个月;所述保存液由0.1%~2%的过氧乙酸、1%~5%的氯化钠及余量的水组成,并用0.1%-4%的纯碱调pH值为5~7;保存液的配方合理,保存工艺有利于进行大规模生产,降低原料采购成本和生产成本。
(6)冻干、包装、辐照消毒:将产品低温冷冻干燥,成型包装、再经γ射线辐照或环氧乙烷消毒灭菌,即为成品。
第一灭活、脱脂液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。
第二灭活、脱脂液中的表面活性剂为平平加、十二烷基氨基丙酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。
灭活、脱细胞液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。
实施例3:
一种制备人体或动物脱细胞组织的方法,包括下列步骤:
(一)组织初加工:将人体或动物的组织(本实施例为血管、神经、心脏瓣膜、骨、软骨或肌腱组织)用机械方法去除表面脂肪,按临床用途制备成临床所需的各种形状;
(二)病毒灭活、脱脂、脱细胞:
依次经下列步骤处理:
(1)将经过初加工的人体或动物组织,用第一灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理20分钟;所述第一灭活、脱脂液由1%的过氧乙酸、5%的氯化钠溶液、0.5%的表面活性剂及余量的水组成;用过氧乙酸和氯化钠溶液进行灭活,同时加入表面活性剂进行脱脂,在病毒灭活的同时又达到脱脂的效果,具有脱脂时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。
(2)将经上述步骤处理的人体或动物组织用第二灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理10分钟;所述第二灭活、脱脂液由2%的烧碱、0.5%%的表面活性剂及余量的水组成;用1%%的烧碱进行病毒灭活,同时加入2%的表面活性剂进行脱脂,具有脱脂时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。
(3)将经上述步骤处理的人体或动物组织用灭活、脱细胞液进行病毒灭活和脱细胞处理10分钟;所述灭活、脱细胞液由2%的过氧乙酸、1%的氯化钠溶液、0.5%的表面活性剂、2%的胰酶或胰蛋白酶及余量的水组成,并用4%的纯碱调pH值为7,处理温度为40℃;在病毒灭活的同时,进行脱脂和脱细胞,具有脱脂时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。
(4)循环操作:将上述步骤(1)、(2)、(3)循环操作3~7次;循环操作具有病毒灭活彻底,脱脂、脱细胞时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。一般情况下,在24小时内完成组织脱细胞过程。
(5)组织保存:将制备好的组织浸泡于保存液中,用PE或PVC材质的密封袋保存,根据需要保存1~12个月;所述保存液由0.1%~2%的过氧乙酸、1%~5%的氯化钠及余量的水组成,并用0.1%-4%的纯碱调pH值为5~7;保存液的配方合理,保存工艺有利于进行大规模生产,降低原料采购成本和生产成本。
(6)冻干、包装、辐照消毒:将产品低温冷冻干燥,成型包装、再经γ射线辐照或环氧乙烷消毒灭菌,即为成品。
第一灭活、脱脂液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。
第二灭活、脱脂液中的表面活性剂为平平加、十二烷基氨基丙酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。
灭活、脱细胞液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。
Claims (5)
1.一种制备人体或动物脱细胞组织的方法,其特征是:包括下列步骤:
(一)组织初加工:将人体或动物的组织用机械方法去除表面脂肪,按临床用途制备成临床所需的各种形状;
(二)病毒灭活、脱脂、脱细胞:
依次经下列步骤处理:
(1)将经过初加工的人体或动物组织,用第一灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理10~30分钟;所述第一灭活、脱脂液由0.1%~2%的过氧乙酸、1%~5%的氯化钠溶液、0.5~2%的表面活性剂及余量的水组成;
(2)将经上述步骤处理的人体或动物组织用第二灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理10~30分钟;所述第二灭活、脱脂液由1%-4%的烧碱、0.5%-2%的表面活性剂及余量的水组成;
(3)将经上述步骤处理的人体或动物组织用灭活、脱细胞液进行病毒灭活和脱细胞处理10~30分钟;所述灭活、脱细胞液由0.1%~2%的过氧乙酸、1%~5%的氯化钠溶液、0.5~2%的表面活性剂、0.2%~2%的胰酶或胰蛋白酶及余量的水组成,并用0.1%-4%的纯碱调pH值为5~7,处理温度为30℃-40℃;
(4)循环操作:根据组织的不同,将上述步骤(1)、(2)、(3)循环操作2~7次;
(5)组织保存:将制备好的组织浸泡于保存液中,用PE或PVC材质的密封袋保存,根据需要保存1~12个月;所述保存液由0.1%~2%的过氧乙酸、1%~5%的氯化钠及余量的水组成,并用0.1%-4%的纯碱调pH值为5~7;
(6)冻干、包装、辐照消毒:将产品低温冷冻干燥,成型包装、再经γ射线辐照或环氧乙烷消毒灭菌,即为成品。
2.根据权利要求1所述的制备人体或动物脱细胞组织的方法,其特征是:第一灭活、脱脂液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。
3. 根据权利要求1所述的制备人体或动物脱细胞组织的方法,其特征是:第二灭活、脱脂液中的表面活性剂为平平加、十二烷基氨基丙酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。
4. 根据权利要求1、2或3所述的制备人体或动物脱细胞组织的方法,其特征是:灭活、脱细胞液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。
5. 根据权利要求1、2或3所述的制备人体或动物脱细胞组织的方法,其特征是:步骤(4)循环操作时,皮肤组织循环操作2~3次;胸腹膜、食道黏膜、小肠黏膜、心包膜组织循环操作1~2次;血管、神经、心脏瓣膜、骨、软骨、肌腱组织循环操作3~7次。
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