TWI763265B - 一種結構性蛋白器官修補膜及其處理方法與處理劑 - Google Patents
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Abstract
本發明揭示了一種結構性蛋白器官修補膜及其處理方法與處理劑,其包含一種結構性蛋白器官修補膜的製備方法,脫脂方法,處理劑及所得結構性蛋白器官修補膜,其中涉及一個兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟,其中包含一第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,及一第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟;一個弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟;一個酸鹼調節結構穩定步驟;以及一個深度結構潔淨步驟。
Description
本發明係關於一種結構性蛋白器官修補膜及其處理方法與處理劑,特別是利用有效率製備醫療用結構性蛋白器官修補膜的方法,該結構性蛋白器官修補膜具有適合作為可供組織修復生長之三維支撐體。
組織器官修補薄片,目前在臨床需求有相當大的供應缺口。在臨床應用上,例如肝臟器官組織修補、腸胃器官組織修補、齒骨器官組織修補、皮膚器官組織修補等,都具有多樣且龐大的需求。這樣的組織器官修補薄片必須具備良好生物相容性,良好機械性及組織修復性,其中組織修復性又與其微結構與臨床應用區域組織結構相似性息息相關。在臨床應用上,肝臟器官組織修補值得重視,特別是在華人生活區域。肝臟是人體最大、最重要的腺器官,幾乎參與體內的一切新陳代謝活動。另外,其特有的解毒和吞噬免疫功能使其成為人體最重要的屏障器官。近二十年來,肝臟疾病對人類健康的危害日益加深,每年有逾數萬例患者會患上該病,終末期肝衰竭患者通常伴隨著嚴重的代謝紊亂,神經系統併發症,最終導致多器官功能衰竭。我國是世界上病毒性肝炎和肝癌的高發國家,全球每年死於肝癌的病人多達百萬人。至今為止,肝臟移植目前仍然是治療肝臟衰竭的重要治療方法。然而,移植肝臟的需求量遠遠地超過了目前可用的供體肝
臟的數量。在此背景下,利用組織工程和再生醫學方法及對應醫療器材等來實現組織、器官的功能替代成為緩解移植肝臟供需矛盾的重要手段。儘管已有實驗結果在組織和器官結構的體外重建研究上取得了一些進展,但習知技藝中體外構建的組織器官無法具備原組織的結構型態,因而無法進行有效的修復及臨床應用。天然的動物組織之結構性蛋白是一種不溶於水的多股螺旋纖維蛋白結構體,其存在於天然的動物組織結構中,如,肌肉、皮層、軟組織、軟骨之主要成分。在習知技藝中,對於天然的動物組織之結構性蛋白的處置多是利用酶解的方式來進行,所製備得到大多是蛋白質分解的多胜肽,再利用後加工如凍乾、電紡、3D列印、模塑等方式處置來重建或製作立體結構,這樣的立體結構都不是結構性蛋白的原態。分解衍生製備所得到多胜肽或混和型態蛋白纖維衍生物大都是明膠或多胜肽,不僅方法耗時且效率低(需進行再加工與重製),更重要的是完全破壞組織之細胞外間質(ECM)結構的完整性,使其在臨床組織與器官修復處置例如肝臟修復、整容手術、組織癒合或是生物性支架應用時,效果大打折扣。目前,市面上通過許可的結構性蛋白商品不多,最接近的商品應該是膠原蛋白衍生物,這些膠原蛋白衍生物,因原材料結構緊緻,大多在產品製備上利用酶進行分解仍是重要步驟,而這嚴重破壞結構性蛋白多股及細胞外間質(ECM)結構,最直接的觀察即是產品常呈澄清水溶液,導致該些膠原蛋白衍生物易被宿主吸收,在應用上不容易長時間固定存在於植入的組織部位,需不斷補充植入物或用注入或用埋入,若要作為組織補片更有機械強度不足的問題。因此,本發明滿足此技術領域中亟需一種有效製備結構性蛋白的方法,具有適合用於臨床組織與器官修復處置的天然結構和構型,提供臨床組織與器官修復處置使用,且不會誘發嚴重的免疫反應。
發明內容主旨在提供本揭示內容的簡化摘要,以使閱讀者對本揭示內容具備基本的理解。此發明內容並非本揭示內容的完整概述,且其用意並非在指出本發明實施例的重要/關鍵元件或界定本發明的範圍。
本發明揭示了一種具有兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟之結構性蛋白器官修補膜製法,其包含:一個兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟,其中包含一第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,及一第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟;一個弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟;一個酸鹼調節結構穩定步驟;以及一個深度結構潔淨步驟,其中該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟係利用一第一加壓複合流體在壓力三十到三百巴以及溫度二十五到三十五℃下,處理厚度為零點一到五點零公厘的一原始動物器官組織薄片,進行二到四小時,得到一第一動物器官組織薄片,其中該第一加壓複合流體包含二氧化碳以及一複合尺寸醇水溶液,且該複合尺寸醇水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例,其中該複合尺寸醇水溶液包含濃度五至九十五體積百分率之一短碳鏈醇分子水溶液以及一到五重量百分率之一長碳鏈醇分子水溶液,透過該第一加壓複合流體而多層次去除吸附及包覆該第一動物器官組織薄片之薄片結構外部脂肪;及該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟,係利用一第二加壓複合流體在壓力三十到三百巴以及溫度二十五到三十五℃下,處理該第一動物
器官組織薄片,進行二到四小時,得到一第二動物器官組織薄片,其中該第二加壓複合流體包含二氧化碳,以及濃度為五至九十五體積百分率之一複合極性水溶液,其中該複合極性水溶液係利用一第一極性分子與一第二極性分子依據混和比九十比十到九十九比一所製得,該複合極性水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例混合,透過該第二加壓複合流體中該二氧化碳,該第一極性分子與該第二極性分子之複合滲透作用,可用來多層次去除滲入及吸附於該第一動物器官組織薄片之薄片結構內部脂肪;一弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟,處理經該兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟所得該第二動物器官組織薄片,用來去除該第二動物器官組織薄片之薄片結構細胞內間質,在溫度二十五到三十五℃下,進行四小時到八小時,得到一第三動物器官組織薄片,其中該弱鹼性水溶液,包含一鹼及水,酸鹼值被控制在七到十一之間;該酸鹼調節結構穩定步驟,係利用一強解離酸水溶液,浸泡該第三動物器官組織薄片,在溫度二十五到三十五℃下,進行十五分鐘到三十分鐘,使該第三動物器官組織薄片酸鹼值被加以調節,得到一第四動物器官組織薄片,其中強解離酸水溶液包含一強解離酸及水,該第四動物器官組織薄片之酸鹼值界於五到八之間,使薄片結構穩定;以及該深度結構潔淨步驟,係利用加壓惰性氣體水溶液在溫度二十五到三十五℃下清洗,得到一結構性蛋白器官修補膜,其厚度界於零點一到五點零公厘,其中該結構性蛋白器官修補膜製法不使用交聯劑,而該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟;該弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟;該酸鹼調節結構穩定步驟;及該深度結構潔淨步驟係依序進行。
本發明也揭示一種具有三維支撐體之結構性蛋白器官修補膜,其中該結構性蛋白器官修補膜係利用一複合製程來製得,該複合製程包含一個兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟,其中包含一第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,及一第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟;一個弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟;一個酸鹼調節結構穩定步驟;以及一個深度結構潔淨步驟,其中透過該兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟之處理可完整維持一個三維支撐體結構,並透過該弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟,酸鹼調節結構穩定步驟,與該深度結構潔淨步驟,純化該三維支撐體結構,該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟係利用一第一加壓複合流體在壓力三十到三百巴以及溫度二十五到三十五℃下,處理厚度為零點一到五點零公厘的一原始動物器官組織薄片,進行二到四小時,得到一第一動物器官組織薄片,其中該第一加壓複合流體包含二氧化碳以及一複合尺寸醇水溶液,且該複合尺寸醇水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例,其中該複合尺寸醇水溶液包含濃度五至九十五體積百分率之一短碳鏈醇分子水溶液以及一到五重量百分率之一長碳鏈醇分子水溶液,透過該第一加壓複合流體而多層次去除吸附及包覆該第一動物器官組織薄片之薄片結構外部脂肪;及該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟,係利用一第二加壓複合流體在壓力三十到三百巴以及溫度二十五到三十五℃下,處理該第一動物器官組織薄片,進行二到四小時,得到一第二動物器官組織薄片,其中該第二加壓複合流體包含二氧化碳,以及濃度為五至九十五體積百分率之一
複合極性水溶液,其中該複合極性水溶液係利用一第一極性分子與一第二極性分子依據混和比九十比十~九十九比一所製得,該複合極性水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例混合,透過該第二加壓複合流體中該二氧化碳,該第一極性分子與該第二極性分子之複合滲透作用,可用來多層次去除滲入及吸附於該第一動物器官組織薄片之薄片結構內部脂肪;一弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟,處理經該兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟所得該第二動物器官組織薄片,用來去除該第二動物器官組織薄片之薄片結構細胞內間質,在溫度二十五到三十五℃下,進行四小時到八小時,得到一第三動物器官組織薄片,其中該弱鹼性水溶液,包含一鹼及水,酸鹼值被控制在七到十一之間;該酸鹼調節結構穩定步驟,係利用一強解離酸水溶液,浸泡該第三動物器官組織薄片,在溫度二十五到三十五℃下,進行十五分鐘到三十分鐘,使該第三動物器官組織薄片酸鹼值被加以調節,得到一第四動物器官組織薄片,其中強解離酸水溶液包含一強解離酸及水,該第四動物器官組織薄片之酸鹼值界於五到八之間,使薄片結構穩定;以及該深度結構潔淨步驟,係利用加壓惰性氣體水溶液在溫度二十五到三十五℃下清洗,得到一結構性蛋白器官修補膜,其厚度界於零點一到五點零公厘,其中該結構性蛋白器官修補膜製法不使用交聯劑,而該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟;該弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟;該酸鹼調節結構穩定步驟;及該深度結構潔淨步驟係依序進行。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,及該第二加壓複合流體多層次內部脫脂
步驟之溫度是三十五℃,壓力是二百巴。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該原始動物器官組織薄片係選自由器官,軟骨,氣管,角膜,肋軟骨,角質,骨骼,軟甲殼,耳軟骨,腸膜及皮膚的動物器官組織,且厚度為零點一到一點零公厘。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該長碳鏈醇分子係選自由長碳鏈多元醇,環碳鏈多元醇,酯基取代多元醇,芳香族取代長碳鏈醚醇,長碳鏈醚醇,甲醚聚乙二醇,聚乙烯醇,聚醚多元醇,長碳鏈醇及其組合所組成之族群。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該短碳鏈醇分子係選自由甲醇,乙醇,丙醇,異丙醇、丁醇,異丁醇,仲丁醇,叔丁醇和環丁醇及其組合所組成之族群。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該第一加壓複合流體係利用將該複合尺寸醇水溶液與二氧化碳依據體積比一介於一比四到一比一百混合,控制溫度三十℃和壓力三百巴得到,其中該複合尺寸醇水溶液包含該長碳鏈醇分子水溶液與該短碳鏈醇分子水溶液,該長碳鏈醇分子水溶液與該短碳鏈醇分子水溶液的混和體積比為一介於一比四到一比一百。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該複合尺寸水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比五到一比十之間的比例混合。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該複合極性水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比五到一比十之間的比例混合。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該第一極性分子係選自由超純水,甲醇,乙醇及其組合所組成之族群,以及,該第二極性分子係選自由乙醇,丙醇,異丙醇及其組合所組成之族群,並且該第一極性分子相異於該第二極性分子。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該加壓惰性氣體水溶液係利用一加壓氣體過飽和地導入水中來達成,該加壓氣體為一選自二氧化碳,氮氣,氬氣及其組合所組成之族群。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該加壓惰性氣體水溶液係利用三十到三百巴的壓力來達成。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該加壓惰性氣體水溶液係利用加壓一加壓惰性氣體來達成,該加壓惰性氣體為一選自二氧化碳,氮氣,氬氣及其組合所組成之族群。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該加壓惰性氣體水溶液係利用一加壓氣體過飽和地導入水溶液中來達成,該水溶液係選自由乙醇水溶液,甲醇水溶液,丙醇水溶液,丁醇水溶液及其組合所組成族群。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜中,該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,及該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟之溫度是三十五℃,壓力是二百巴。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜中,該原始動物器官組織薄片係選自由器官,軟骨,氣管,角膜,肋軟骨,角質,骨骼,軟甲殼,耳軟骨,腸膜及皮膚的動物器官組織,且厚度為零點一到一點零公厘。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜中,該長碳鏈醇分子水溶液係選自由長碳鏈多元醇水溶液,環碳鏈多元醇水溶液,酯基取代多元
醇水溶液,芳香族取代長碳鏈醚醇水溶液,長碳鏈醚醇水溶液,甲醚聚乙二醇水溶液,聚乙烯醇水溶液,聚醚多元醇水溶液,長碳鏈醇水溶液及其組合所組成之族群。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜中,該短碳鏈醇分子水溶液係選自由甲醇水溶液,乙醇水溶液,丙醇水溶液,異丙醇水溶液、丁醇水溶液,異丁醇水溶液,仲丁醇水溶液,叔丁醇水溶液和環丁醇水溶液及其組合所組成之族群。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜中,該第一加壓複合流體係利用將該複合尺寸醇水溶液與二氧化碳依據體積比一介於一比四到一比一百混合,控制溫度三十℃和壓力三百巴得到,其中該複合尺寸醇水溶液包含該長碳鏈醇分子水溶液與該短碳鏈醇分子水溶液,該長碳鏈醇分子水溶液與該短碳鏈醇分子水溶液的混和體積比為一介於一比四到一比一百。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜中,該複合尺寸醇水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比五到一比十之間的比例混合。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜中,該複合極性水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比五到一比十之間的比例混合。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜中,該第一極性分子係選自由超純水,甲醇,乙醇及其組合所組成之族群,以及,該第二極性分子係選自由乙醇,丙醇,異丙醇及其組合所組成之族群,並且該第一極性分子相異於該第二極性分子。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜中,該加壓惰性氣體水溶液係利用一加壓氣體過飽和地導入水中來達成,該加壓氣體為一選自二氧化碳,氮氣,氬氣及其組合所組成之族群。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜中,該加壓惰性氣體
水溶液係利用三十到三百巴的壓力來達成。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜中,該加壓惰性氣體水溶液係利用加壓一加壓惰性氣體來達成,該加壓惰性氣體為一選自二氧化碳,氮氣,氬氣及其組合所組成之族群。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜中,該加壓惰性氣體水溶液係利用一加壓氣體過飽和地導入水溶液中來達成,該水溶液係選自由乙醇水溶液,甲醇水溶液,丙醇水溶液,丁醇水溶液及其組合所組成族群。
本發明更揭示一種具有加壓複合流體多層次脫脂步驟之結構性蛋白器官修補膜脫脂方法,其包含一第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,一第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟,及一個深度結構潔淨步驟,其中該第一加壓複合流體多層次脫脂步驟,針對一原始動物器官組織薄片之外部脂肪去除,係利用一第一加壓複合流體在壓力三十到三百巴以及溫度二十五到三十五℃下,處理該原始動物器官組織薄片,該原始動物器官組織薄片厚度為零點一到五點零公厘,進行二到四小時,得到一第一動物器官組織薄片,其中該第一加壓複合流體包含二氧化碳以及一複合尺寸醇水溶液,且該複合尺寸醇水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例,其中該複合尺寸醇水溶液包含濃度五至九十五體積百分率之一短碳鏈醇分子水溶液以及一到五重量百分率之一長碳鏈醇分子水溶液,透過該第一加壓複合流體而多層次去除吸附及包覆該第一動物器官組織薄片之薄片結構外部脂肪;及該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟,針對該第一動物器官組
織薄片外部脂肪去除,係利用一第二加壓複合流體在壓力三十到三百巴以及溫度二十五到三十五℃下,處理該第一動物器官組織薄片,進行二到四小時,得到一第二動物器官組織薄片,其中該第二加壓複合流體包含二氧化碳,以及濃度為五至九十五體積百分率之一複合極性水溶液,其中該複合極性水溶液係利用一第一極性分子與一第二極性分子依據混和比九十比十~九十九比一所製得,該複合極性水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例混合,透過該第二加壓複合流體中該二氧化碳,該第一極性分子與該第二極性分子之複合滲透作用,可用來多層次去除滲入及吸附於該第一動物器官組織薄片之薄片結構內部脂肪;以及該深度結構潔淨步驟,係利用加壓惰性氣體水溶液在溫度二十五到三十五℃下進行該第二動物器官組織薄片之清洗,得到一結構性蛋白器官修補膜,其厚度界於零點一到五點零公厘,其中該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟以及該深度結構潔淨步驟係依序進行。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜脫脂方法中,該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,及該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟之溫度是三十五℃,壓力是二百巴。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜脫脂方法中,該原始動物器官組織薄片係選自由器官,軟骨,氣管,角膜,肋軟骨,角質,骨骼,軟甲殼,耳軟骨,腸膜及皮膚的動物器官組織,且厚度為零點一到一點零公厘。
優選地,本發明所揭示該長碳鏈醇分子水溶液係選自由長碳鏈多元醇水溶液,環碳鏈多元醇水溶液,酯基取代多元醇水溶液,芳香族取代長碳
鏈醚醇水溶液,長碳鏈醚醇水溶液,甲醚聚乙二醇水溶液,聚乙烯醇水溶液,聚醚多元醇水溶液,長碳鏈醇水溶液及其組合所組成之族群。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜脫脂方法中,該短碳鏈醇分子水溶液係選自由甲醇水溶液,乙醇水溶液,丙醇水溶液,異丙醇水溶液、丁醇水溶液,異丁醇水溶液,仲丁醇水溶液,叔丁醇水溶液和環丁醇水溶液及其組合所組成之族群。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜脫脂方法中,該第一加壓複合流體係利用將該複合尺寸醇水溶液與二氧化碳依據體積比一介於一比四到一比一百混合,控制溫度三十℃和壓力三百巴得到,其中該複合尺寸醇水溶液包含該長碳鏈醇分子水溶液與該短碳鏈醇分子水溶液,該長碳鏈醇分子水溶液與該短碳鏈醇分子水溶液的混和體積比為一介於一比四到一比一百。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜脫脂方法中,該複合尺寸水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比五到一比十之間的比例混合。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜脫脂方法中,該複合極性水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比五到一比十之間的比例混合。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜脫脂方法中,該第一極性分子係選自由超純水,甲醇,乙醇及其組合所組成之族群,以及,該第二極性分子係選自由乙醇,丙醇,異丙醇及其組合所組成之族群,並且該第一極性分子相異於該第二極性分子。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜脫脂方法中,該加壓惰性氣體水溶液係利用一加壓氣體過飽和地導入水中來達成,該加壓氣體
為一選自二氧化碳,氮氣,氬氣及其組合所組成之族群。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜脫脂方法中,該加壓惰性氣體水溶液係利用三十到三百巴的壓力來達成。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜脫脂方法中,該加壓惰性氣體水溶液係利用加壓一加壓惰性氣體來達成,該加壓惰性氣體為一選自二氧化碳,氮氣,氬氣及其組合所組成之族群。
優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜脫脂方法中,該加壓惰性氣體水溶液係利用一加壓氣體過飽和地導入水溶液中來達成,該水溶液係選自由乙醇水溶液,甲醇水溶液,丙醇水溶液,丁醇水溶液及其組合所組成族群。
本發明更加揭示一種用於製作結構性蛋白脫脂器官修補膜之多層次脫脂處理劑,其包含二氧化碳以及一複合尺寸醇水溶液,且該複合尺寸醇水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例,其中該複合尺寸醇水溶液包含濃度五至九十五體積百分率之一短碳鏈醇分子水溶液以及一到五重量百分率之一長碳鏈醇分子水溶液,控制在一介於二十五到三十五℃之溫度與一介於三十到三百巴之壓力下使用。
優選地,該多層次脫脂處理劑利用高壓鋼瓶保存。
10,10’:原始動物器官組織薄片
20,20’:第一動物器官組織薄片
30,30’:第二動物器官組織薄片
40:第三動物器官組織薄片
50:第四動物器官組織薄片
90,90’:結構性蛋白器官修補膜
100:兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟
101,101’:第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟
105,105’:第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟
111:複合尺寸醇水溶液供應槽
113:二氧化碳供應槽
200:弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟
300:酸鹼調節結構穩定步驟
400,400’:深度結構潔淨步驟
500:壓力儲存瓶
501:壓力儲存腔
503:氣態控制閥
505:液態控制閥
507:壓力計
圖一為(A)本發明第一實施例一種具有兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟之結構性蛋白器官修補膜製法之示意圖,以及(B)本發明第二實施例製備結構性蛋白器官修補膜之示意圖。
圖二為本發明第一實施例一種具有兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟之結構性蛋白器官修補膜製法所使用之(A)動物器官組織薄片掃描式電子
顯微鏡影像圖,(B)第一動物器官組織薄片掃描式電子顯微鏡影像圖,(C)第二動物器官組織薄片掃描式電子顯微鏡影像圖,及(D)結構性蛋白器官修補膜掃描式電子顯微鏡影像圖。
圖三為本發明第一實施例一種具有兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟之結構性蛋白器官修補膜製法所使用之(A)動物器官組織薄片遠紅外線光譜分析圖以及(B)第二動物器官組織薄片遠紅外線光譜分析圖。
圖四為本發明第四實施例關於一種具有加壓複合流體多層次脫脂步驟之結構性蛋白器官修補膜脫脂方法示意圖。
圖五為本發明第四實施例(A)第二動物器官組織薄片經零點五摩爾濃度醋酸3小時處理後之掃描式電子顯微鏡(SEM)影像圖,及圖五(B)第二動物器官組織薄片經零點五摩爾濃度碳酸氫納12小時處理後之掃描式電子顯微鏡(SEM)影像圖。
圖六為本發明第五實施例關於一種用於製作結構性蛋白脫脂器官修補膜之多層次脫脂處理劑之(A)製作示意圖,以及(B)保存示意圖。
圖七為本發明第六實施例之結構性蛋白器官修補膜臨床前評估試驗圖(A)結構性蛋白器官修補膜組織切片試驗圖,(B)結構性蛋白器官修補膜核酸染色試驗,及(C)結構性蛋白器官修補膜細胞培養之掃描式電子顯微鏡影像圖。
為了使本發明所揭示內容的敘述更加詳盡與完備,下文針對了本發明的實施態樣與具體實施例提出了說明性的描述;但這並非實施或運用本發明具體實施例的唯一形式。實施方式中涵蓋了多個具體實施例的特徵以及用以建構與操作這些具體實施例的方法步驟與其順序。然而,亦可利用其
他具體實施例來達成相同或均等的功能與步驟順序。
雖然用以界定本發明較廣範圍的數值範圍與參數皆是約略的數值,已儘可能精確地呈現具體實施例中的相關數值。然而,任何數值本質上不可避免地含有因個別測試方法所致的標準偏差。在此處,「約」通常係指實際數值在一特定數值或範圍的正負10%、5%、1%或0.5%之內。或者是,「約」一詞代表實際數值落在平均值的可接受標準誤差之內,視本發明所屬技術領域中具有通常知識者的考量而定。除了實驗例之外,或除非另有明確的說明,當可理解此處所用的所有範圍、數量、數值與百分比(例如用以描述材料用量、時間長短、溫度、操作條件、數量比例及其他相似者)均經過「約」的修飾。因此,除非另有相反的說明,本說明書與附隨申請專利範圍所揭示的數值參數皆為約略的數值,且可視需求而更動。至少應將這些數值參數理解為所指出的有效位數與套用一般進位法所得到的數值。
除非本說明書另有定義,此處所用的科學與技術詞彙之含義與本發明所屬技術領域中具有通常知識者所理解與慣用的意義相同。此外,在不和上下文衝突的情形下,本說明書所用的單數名詞涵蓋該名詞的複數型;而所用的複數名詞時亦涵蓋該名詞的單數型。
本發明揭示一種具有兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟之結構性蛋白器官修補膜製法之第一實施例,如圖一所示,其中所述結構性蛋白器官修補膜製法,其中至少包含:一個兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟100,其中包含一第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟101,及一第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟105;一個弱鹼性水溶液脫細胞內間
質步驟200;一個酸鹼調節結構穩定步驟300;以及一個深度結構潔淨步驟400,其中該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟101係利用一第一加壓複合流體在壓力為介於三十到三百巴之間以及溫度為介於攝氏二十五到三十五℃之間,處理一厚度介於零點一公厘到五點零公厘之間的動物器官組織薄片10,進行四小時到八小時之處置,得到一第一動物器官組織薄片20,其中該第一加壓複合流體包含二氧化碳,濃度為介於五至九十五體積百分率之短碳鏈醇水分子溶液及濃度為介於一至五重量百分率之長碳鏈醇分子水溶液,在室溫下混合該長碳鏈醇分子水溶液與該短碳鏈醇水分子溶液,形成一複合尺寸醇水溶液,該長碳鏈醇分子水溶液與該短碳鏈醇分子水溶液的混和體積比為介於一比四到~一比一百之間。將該複合尺寸醇水溶液與二氧化碳依據體積比介於一比四到~一比一百之間來進行混合加壓得到該第一加壓複合流體。該短碳鏈醇水分子為一選自甲醇,乙醇,丙醇,異丙醇、丁醇,異丁醇,仲丁醇,叔丁醇和環丁醇。透過該第一加壓複合流體來去除吸附及包覆該第一動物器官組織薄片20之薄片結構外部脂肪;及該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟,將所製得一第二加壓複合流體在壓力介於三十到三百巴之間,以及溫度為介於攝氏溫度二十五到三十五℃之間,進行該脫細胞內間質步驟200處理該第一動物器官組織薄片20,經過介於二小時至四小時之間的處理,得到一第二動物器官組織薄片30,其中該第二加壓複合流體包含二氧化碳,以及濃度為五到九十五體積百分率之一複合極性水溶液,其中該複合極性水溶液係利用一第一極性分子與一第二極性分子依據混和比介於九十比十~九十九比一之間所製得,透過該第二加壓複合流體中該二氧化碳,該第一極性分子與該第二極性分子之複合滲
透作用,可用來去除滲入及吸附於該第一動物器官組織薄片之薄片結構內部脂肪;一弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟,處理經該兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟所得該第二動物器官組織薄片30,用來去除該第二動物器官組織薄片30之薄片結構細胞內間質,在溫度為介於攝氏溫度二十五到三十五℃之間下,進行四小時到八小時之處理,得到一第三動物器官組織薄片40,其中該弱鹼性水溶液,包含一鹼及水,酸鹼值被控制在介於七到十一之間;該酸鹼調節結構穩定步驟,係利用一強解離酸水溶液,浸泡該第三動物器官組織薄片40,在溫度為介於攝氏溫度二十五到三十五℃之間下,進行介於十五分鐘到三十分鐘之處理,使該第三動物器官組織薄片40酸鹼值被加以調節,得到一第四動物器官組織薄片50,其中強解離酸水溶液包含一強解離酸及水,該第四動物器官組織薄片50之酸鹼值介於五到八之間,使薄片結構穩定;以及該深度結構潔淨步驟400,係利用去離子水在溫度二十五至三十五℃下清洗,得到一結構性蛋白器官修補膜90,其厚度界於零點一至五點零公厘,其中該結構性蛋白器官修補膜製法不使用交聯劑,而該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟101,該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟102;該弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟200;該酸鹼調節結構穩定步驟300;及該深度結構潔淨步驟400係依序進行。
本發明為了保護結構性蛋白質微結構之完整,特設計不使用激烈化學藥劑條件或高活性、高濃度生物試劑(酶)或激烈的反應條件,替代地,使用多層次及分段處置的方式,達到符合嚴格醫療臨床要求之高純度的產品。在本發明中所製備該結構性蛋白器官修補膜90希望保有原有組織之細緻結構性蛋白之架構,以提供臨床應用器官修復合適細胞成長之微環境,
因此本發明設計利用溫和之多層次極性及物理分層設計所產生之方法來進行處理,在步驟上即是為了嚴格避免習知技藝中組織細胞處理時所利用激烈的化學試劑,生物試劑即機械剪力之加工手段,對本發明該結構性蛋白器官修補膜90微結構造成影響、損害及崩壞,特別是當去除脂質脫覆處理之後。習知技藝利用激烈的化學試劑方面,例如高濃度或高活性之Tris(零點一摩爾濃度)或Triton X系列,常用大於百分之一的Triton X-100,甚至百分之五或是百分之十;或是陰離子型界面活性劑,例如,月桂基磺酸(lauryl sulfonic acid)、十二烷基磺酸(dodecyl sulfonic acid)、十二烷基磺酸鈉(sodium dodecyl sulfate,SDS)、十二烷基苯磺酸(dodecyl benzene sulfonic acid)、十三烷基苯磺酸(tridecyl benzene sulfonic acid)、烷基苯氧基苯二磺酸(alkyl-phenoxy benzene disulfonic acid)、萘磺酸(naphthalene sulfonic acid)、烷基萘磺酸(alkyl-naphthalene sulfonic acid)和烯基萘(alkenyl-naphthalene),特別是十二烷基磺酸鈉(SDS)之使用,更有毒性殘留的疑慮;或是會造成結構脫水崩壞之鹽類,例如,氯化鈉和氯化鉀等。習知技藝利用激烈的高活性或強分解性生物試劑方面,例如動物性的胃蛋白酶(pepsin)、胰蛋白酶(trypsin)、胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)、DNA核酸酶、RNA核酸酶,一般言,動物性酶使用濃度超過百分之零點零零一(0.001),在短時間(如十五分至三十分鐘)就會對結構性蛋白及組織造成強分解性及高度破壞性。又或是在高濃度下使用植物性分解酶,如高濃度木瓜酶(papain)、高濃度木瓜凝乳酶(chymopapain)、高濃度鳳梨酶(bromelain)、高濃度奇異果酶(actinidin)、高濃度無花果酶(ficin)及其組合,也會對結構性蛋白及組織造成相當大程度的分解性及破壞性。在習知技藝為了純化或萃取組織成分,常利用激烈的機
械應力,例如,超音波震盪、高速攪拌、高速破碎及其組合的手段,而在這樣激烈的機械應力下,即便是十分鐘到二十分鐘也會嚴重破壞組織結構之完整性,若是時間過長更會造成嚴重結構崩解,而無法滿足本發明所欲解決器官修補膜之需求,例如長時間的震盪或超音波震盪或超聲波震盪或石英震盪(震盪超過五小時,速率為一百rpm。又更如習知技藝在進行震盪或長時間震盪時,添加生物試劑或化學試劑[濃度為零點一摩爾濃度(M)的Tris水溶液或重量百分率濃度為百分之一的Triton X-100水溶液或重量百分率濃度為百分之一(1wt%)SDS水溶液處理]。震盪超過二十小時,速率為一百rpm,將對微結構造成徹底破壞、侵蝕與崩解,這些條件,都在本發明法中被嚴格免除,而以本發明創新分段多層次處理配方及手段之設計來進行。透過本發明不但免除習知記憶的危害更因多層次及分段處置概念而提升處理效益。本發明利用加壓流體的設計,並進一步採用多層次加壓複合流體的多層次緩衝穿透及攜帶脫附設計,以減少加壓流體單一種類分子的高穿透性及高滲透性及高攜帶脫附性,對微結構之衝擊。在設計上本發明的多層次加壓複合流體單聚焦於二氧化碳氣體之使用,特別地,避免使用具毒性或高揮發性或急性之氣體,例如,一氧化氮,烷類,烯類,丙酮及其組合物。在本發明各步驟處理條件中溫度都低於攝氏溫度三十五℃,在控壓環境下壓力都低於三百巴。
本發明方法之前可以先進行一粗處理步驟,較佳地,粗處理步驟係透過切片法,自一動物身上取得其器官組織薄片,經清洗去脂肪獲得適合用於本發明方法的動物器官組織薄片。在一較佳實施例中,適用於本揭示內容的動物是經濟動物,包含但不限於,豬、牛、羊、驢、兔、鴨、鵝、雞、
鳥、魚、龜、鱉。特定地,亦可考量利用習知任一種物理或化學去除毛髮和脂肪方法來執行所述去除毛髮和脂肪之步驟。舉例而言,利用酸處理動物組織或皮層上的毛髮,利用酵素(例如,脂肪酶),化學物質(例如,清潔劑)處理動物皮膚以去除其上的脂肪,或是透過機械、刀刃直接將脂肪及毛髮切剃除。利用手術刀切削組織(如內臟器官、骨骼、皮膚等),進而產生一厚度約介於零點一公厘至五公厘的動物器官組織薄片,例如,動物器官組織薄片的厚度約零點一公厘、零點二公厘、零點三公厘、零點四公厘、零點五公厘、零點六公厘、零點七公厘、零點八公厘、零點九公厘以及一點零公厘;較佳為約介於零點二公厘至零點六公厘之間,例如,零點二公厘、零點三公厘、零點四公厘、零點五公厘以及零點六公厘,最佳為約二點零公厘,在特定的臨床應用上也有介於三點零公厘至五點零公厘的需求。選擇性地,所述粗處理步驟可以使用一個鹼性溶液來輔助執行,該粗處理步驟於在溫度介於攝氏溫度十五到三十五℃之間,處理前述厚度約為介於零點一公厘至五公厘的動物器官組織薄片約一小時至四小時之間的時間,以去除明顯殘留的毛髮,脂肪,和皮甲等。舉例而言,適用於本方法的鹼試劑包含,但不限於,低濃度的氫氧化銨等。在較佳實施方式中,所述動物器官組織薄片是豬的肝臟,軟骨,氣管,肋軟骨,耳軟骨,腸膜,皮膚等,且厚度為約介於零點一至零點六公厘,並且在攝氏溫度十五℃下,以濃度介於零點一至一點零摩爾濃度之間的氫氧化銨溶液處理大約一小時。
在本發明的兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟,包含該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟101,及該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟102。透過本發明的兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟100可
以對厚度為介於零點一公厘至五公厘之動物器官組織薄片進行深層脫脂。所述深層脫脂步驟的目的是在去除動物組織上吸附或不易清除之脂質,後段的反應步驟不會受脂肪殘留干擾,提升生產品質與效率。因此,在兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟中,加壓流體在壓力約皆於三十到三百巴之間,處理厚度為介於零點一公厘至五點零公厘之動物皮膚;較佳為約介於一百五十巴到二百五十巴之間;更特定地在二百六十巴、二百七十巴、二百八十巴、二百九十巴、三百巴的壓力下進行處理。特定臨床應用,對微結構完整性要求低時,可是適當地提高壓力。
本發明的長碳鏈醇分子包含長碳鏈多元醇,環碳鏈多元醇(十二烷基葡萄糖苷,月桂基葡糖多苷),酯基取代多元醇(酯基甘油,油酸酯清凉茶醇,月桂酸酯清凉茶醇,SPAN),芳香族取代長碳鏈醚醇(例如辛苯基聚乙氧基醇,Triton,壬苯醚醇),長碳鏈醚醇(例如聚氧乙烯嵌段聚氧丙烯醇),甲醚聚乙二醇,聚乙烯醇,聚醚多元醇,碳數大於五之長碳鏈醇(例如十六醇,十八醇)。短碳鏈醇分子係選自由甲醇,乙醇,丙醇,丁醇,戊醇及其組合所組成之族群。
依據本揭示內容某些實施方式,所述長碳鏈醇分子在水溶液中的濃度為一點零至五點零重量百分率(一點零到五點零重量百分率),例如一點零重量百分率、一點五重量百分率、二點零重量百分率、二點五重量百分率、三點零重量百分率、三點五重量百分率、四點零重量百分率、四點五重量百分率、五點零重量百分率。
在一較佳實施方式,所述結構性蛋白器官修補膜的尺寸,其厚度介於零點一公厘至五公厘,例如約零點一、零點一五、零點二、零點二五、零
點三、零點三五、零點四、零點四五、零點五、零點五五、零點六、零點六五、零點七、零點七五、零點八、零點八五、零點九、零點九五及一點零厘米。在其他實施方式中,所述結構性蛋白器官修補膜的尺寸為約一點零厘米至三點零厘米,例如約一點零、一點一、一點二、一點三、一點四、一點五、一點六、一點七、一點八、一點九、二點零、二點一、二點二、二點三、二點四、二點五、二點六、二點七、二點八、二點九及三點零厘米。在其他實施方式,所述結構性蛋白器官修補膜的尺寸為三點零厘米至五點零厘米,例如約三點零、三點五、四點零、四點五、五點零厘米。
依據本方法製備而成的結構性蛋白器官修補膜其特徵在於,結構性蛋白器官修補膜中的保留了天然結構性蛋白例如膠原纖維、彈性纖維等結構和構型,使得本發明的結構性蛋白器官修補膜可作為器官病灶區域組織修補膜,作為修補區域微觀器官組織支架輔助修復之細胞貼附生長。
此外,所述結構性蛋白器官修補膜可以是微型結構性蛋白器官修補膜,可以是介於五厘米乘五厘米乘零點一厘米到五厘米乘五厘米乘一點零厘米的尺寸,利用塗敷器或棉籤將微型結構性蛋白器官修補膜散佈或填充至個體的傷口上,所述傷口但不限於,手術傷口(如,切口)、潰瘍,以及任何身體上的其他損傷,如,皮膚或骨骼或牙齒或其他組織破壞、切割、穿刺或撕裂。
先前技術並未有結構性蛋白器官修補膜及其制法之專利。較接近結構性蛋白器官修補膜之技術領域可能是膠原蛋白萃取與成型之研究。利用膠原蛋白萃取與成型之膠原產品作法與本發明技術因核心目的及材料不同而有很大的差異。例如,膠原蛋白產品在製備過程中常需使用交聯劑或額
外添加鹽類以穩定膠原蛋白基質,也需要從材料中利用蛋白分解酶分解處理膠原蛋白基質,或酶解萃取純化膠原蛋白纖維。
本發明更創新的是為了有效率提升製作高結構性蛋白器官修補膜的效率,特別設計了兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟,大大解決處理過程脂質的污染與干擾,提高結構性蛋白器官修補膜的製作效率,這是經過不斷思考及嘗試的創新技術。在這創新的製程中,還涉及為了實踐深層脫脂步驟所開發之一第一加壓複合流體與一第二加壓複合流體。
本發明兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟100主要設計是結合該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟101與該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟102來達成。該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟101係透過該第一加壓複合流體來去除吸附及包覆該第一動物器官組織薄片20之薄片結構外部脂肪,得到該第一動物器官組織薄片20。一般動物組織的脂肪都要利用大量的介面活性劑來清除,再用大量的水沖洗,但這些介面活性劑與油脂仍然常會吸附在組織的表面,若要深層去除脂肪大都要瓦解結構方能成。本發明利用加壓流體會產生高滲透及油脂高萃取率的優勢,透過低碳醇與高碳醇導入水溶液再灌入二氧化碳,參考加壓流體相圖,控制溫度壓力來制備創新的加壓複合流體,來調節加壓流體活性,特別是短碳鏈醇分子與長碳鏈醇分子的導入會產生尺寸異分子多層次尺寸活化吸附加壓系統的效能。因此,本發明設計短碳鏈醇分子/長碳鏈醇分子/二氧化碳之第一加壓複合流體,可視為是一種多層次吸附活性加壓複合流體,可高效去除組織表面所吸附或沾染或將組織包覆的外部脂肪層。該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟
係利用一第一加壓複合流體在壓力三十到三百巴以及溫度二十五到三十五℃下,處理一厚度為零點一至五點零公厘的動物器官組織薄片10,進行四到八小時,得到該第一動物器官組織薄片20,其中該第一加壓複合流體包含二氧化碳,五至九十五體積百分率之乙醇水溶液及一到五重量百分率之長碳鏈醇分子水溶液,透過該第一加壓複合流體來去除吸附及包覆該第一動物器官組織薄片20之薄片結構外部脂肪,得到該第一動物器官組織薄片,此時該第一動物器官組織薄片20已不見薄片結構外部脂肪(如圖二所示)。
本發明該兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟100中該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟105,特別地,本發明係利用加壓流體會產生高滲透及油脂高萃取率的優勢,先在第一段瓦解阻隔加壓流體深入組織內部的外部包覆脂肪層,再透過利用高極性小分子快速穿透與快速移動特性,設計第二加壓複合流體,包含導入兩種尺寸與極性不同的一種第一極性分子與一種第二極性分子配合高極性的水分子,形成三種極性差異的輔劑來達成該第一極性分子,該第二極性分子,水分子與二氧化碳之複合滲透作用及複合極性作用。需要注意的是,未了達到高效滲透及穿透組織內部,該第一極性分子與該第二極性分子的選擇以不超過三個碳為主,即該第一極性分子與該第二極性分子分別地選自由甲醇,乙醇,丙醇。透過多層次極性複合分子可有效地去除滲入及吸附於該第一動物器官組織薄片之薄片結構內部脂肪,有部分細胞內間質也會因高滲透力與多層次極性複合分子帶走薄片結構內部脂肪的同時被一併帶走。多層次極性複合分子與二氧化碳的共溶關係,可參考加壓流體相圖來達成,並控制溫度壓力來制備
創新的多層次極性加壓複合流體,來調節加壓流體極性,特別是小尺寸之多種極性分子的導入會產生多層次複合極性滲透優化加壓系統的效能。因此,本發明設計第一極性分子/第二極性分子/水分子/二氧化碳之第二加壓複合流體,可視為是一種多層次極性加壓複合流體,該第一極性分子與該第二極性分子之複合滲透作用,可用來去除滲入及吸附於該第一動物器官組織薄片之薄片結構內部脂肪,有部分細胞內間質也會因高滲透力帶走薄片結構內部脂肪的同時被一併帶走。
本發明第二實施例係關於利用本發明第一實施例該具有兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟之結構性蛋白器官修補膜製法所得到之一種具有三維支撐體之結構性蛋白器官修補膜90,如圖一所示,其中該結構性蛋白器官修補膜製法是屬於一種複合製程,包含該兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟100,其中包含該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟101,及該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟105;該弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟200;該酸鹼調節結構穩定步驟300;以及該結構潔淨步驟400,其中該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟101係利用一第一加壓複合流體在壓力介於三十到三百巴之間以及溫度介於攝氏二十五到三十五℃之間,處理厚度為介於零點一公厘到五點零公厘之間的該原始動物器官組織薄片10,進行介於二小時到四小時之時間,得到該第一動物器官組織薄片20,其中該第一加壓複合流體包含二氧化碳以及一複合尺寸醇水溶液,且該複合尺寸醇水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例,其中該複合尺寸醇水溶液包含濃度五至九十五體積百
分率的該短碳鏈醇分子水溶液以及濃度介於一到五重量百分率的一長碳鏈醇分子水溶液,透過該第一加壓複合流體而多層次去除吸附及包覆該第一動物器官組織薄片20之薄片結構外部脂肪;及該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟105,係利用該第二加壓複合流體在壓力介於三十到三百巴之間以及溫度介於攝氏溫度二十五到三十五℃之間,處理該第一動物器官組織薄片20,進行二小時到四小時,得到該第二動物器官組織薄片30,其中該第二加壓複合流體包含二氧化碳,以及濃度為五至九十五體積百分率之該複合極性水溶液,其中該複合極性水溶液係利用該第一極性分子與該第二極性分子依據混和比介於九十比十到九十九比一所製得,該複合極性水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例混合,透過該第二加壓複合流體中該二氧化碳,該第一極性分子與該第二極性分子之複合滲透作用,可用來多層次去除滲入及吸附於該第一動物器官組織薄片20之薄片結構內部脂肪;該弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟300,處理經該兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟100所得該第二動物器官組織薄片30,用來去除該第二動物器官組織薄片30之薄片結構細胞內間質,在溫度介於攝氏溫度二十五度到三十五度(℃)之間,進行四小時到八小時,得到該第三動物器官組織薄片40,其中該弱鹼性水溶液,包含一鹼及水,酸鹼值被控制在七到十一之間;該酸鹼調節結構穩定步驟,係利用一強解離酸水溶液,浸泡該第三動物器官組織薄片,在溫度介於攝氏溫度二十五度到三十五度(℃),進行十五分鐘到三十分鐘,使該第三動物器官組織薄片40酸鹼值被加以調節,得到一第四動物器官組織薄片50,其中強解離酸水溶液包含強解離酸及水,該第四動物器官組織薄片50之酸鹼值(pH)介於五到八之間,使薄片結構穩定;以及該深度結構潔淨步驟400,係利用加壓惰性氣體水溶液在溫度介於攝氏溫度二十五到三十五℃之間清洗,得到
該結構性蛋白器官修補膜90,其厚度界於零點一到五點零公厘,其中該結構性蛋白器官修補膜製法不使用交聯劑,而該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟101,該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟105;該弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟;該酸鹼調節結構穩定步驟300;及該深度結構潔淨步驟400係依序進行,即可得該結構性蛋白器官修補膜90。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟101,及該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟105之溫度為攝氏溫度三十五℃,壓力是二百巴。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該原始動物器官組織薄片10係選自由器官,軟骨,氣管,角膜,肋軟骨,角質,骨骼,軟甲殼,耳軟骨,腸膜及皮膚的動物器官組織,且厚度為介於零點一到一點零公厘之間。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該長碳鏈醇分子係選自由長碳鏈多元醇,環碳鏈多元醇,酯基取代多元醇,芳香族取代長碳鏈醚醇,長碳鏈醚醇,甲醚聚乙二醇,聚乙烯醇,聚醚多元醇,長碳鏈醇及其組合所組成之族群。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該短碳鏈醇分子係選自由甲醇,乙醇,丙醇,異丙醇、丁醇,異丁醇,仲丁醇,叔丁醇和環丁醇及其組合所組成之族群。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該第一加壓複合流體係利用將該複合尺寸醇水溶液與二氧化碳依據體積比一比四到一比一百混合,控制溫度在攝氏溫度三十度℃和壓力為三百巴,其中該複合尺寸醇水溶液包含該長碳鏈醇分子水溶液與該短碳鏈醇分子水溶液,該長碳鏈醇分子水溶液與該短碳鏈醇分子水溶液的混和體積比為介於一比四到一比一百之間。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該複合尺寸水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比五到一比十之間的比例混合。優選地,本發明所揭示在
結構性蛋白器官修補膜製法中,該複合極性水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比五到一比十之間的比例混合。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該第一極性分子係選自由超純水,甲醇,乙醇及其組合所組成之族群,以及,該第二極性分子係選自由乙醇,丙醇,異丙醇及其組合所組成之族群,並且該第一極性分子相異於該第二極性分子。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該加壓惰性氣體水溶液係利用一加壓氣體過飽和地導入水中來達成,該加壓氣體為一選自二氧化碳,氮氣,氬氣及其組合所組成之族群。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該加壓惰性氣體水溶液係利用介於三十巴到三百巴之間的壓力來達成。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該加壓惰性氣體水溶液係利用施加壓力在該加壓惰性氣體來達成,該加壓惰性氣體為一選自二氧化碳,氮氣,氬氣及其組合所組成之族群。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜製法中,該加壓惰性氣體水溶液係利用該加壓氣體過飽和地導入水溶液中來達成,該水溶液係選自由乙醇水溶液,甲醇水溶液,丙醇水溶液,丁醇水溶液及其組合所組成族群。優選地,本發明所揭示結構性蛋白器官修補膜90中,該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟101,及該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟105,係在攝氏溫度三十五度℃及壓力二百巴下完成。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜90中,該原始動物器官組織薄片10係選自由器官,軟骨,氣管,角膜,肋軟骨,角質,骨骼,軟甲殼,耳軟骨,腸膜及皮膚的動物器官組織,且厚度為零點一到一點零公厘。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜90中,該長碳鏈醇分子係選自由長碳鏈多元醇,環碳鏈多元醇,酯基取代多元醇,芳香族取代長碳鏈醚醇,長碳鏈醚醇,甲醚聚乙二醇,聚乙烯醇,聚醚多元醇,長碳鏈醇及其組合
所組成之族群。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜90中,該短碳鏈醇分子係選自由甲醇,乙醇,丙醇,異丙醇、丁醇,異丁醇,仲丁醇,叔丁醇和環丁醇及其組合所組成之族群。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜90中,該第一加壓複合流體係利用將該複合尺寸醇水溶液與二氧化碳依據體積比一比四到一比一百混合,控制溫度在攝氏溫度三十度℃和壓力三百巴得到,其中該複合尺寸醇水溶液包含該長碳鏈醇分子水溶液與該短碳鏈醇分子水溶液,該長碳鏈醇分子水溶液與該短碳鏈醇分子水溶液的混和體積比為介於一比四到一比一百之間。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜90中,該複合尺寸水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比五到一比十之間的比例混合。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜90中,該複合極性水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比五到一比十之間的比例混合。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜90中,該第一極性分子係選自由超純水,甲醇,乙醇及其組合所組成之族群,以及,該第二極性分子係選自由乙醇,丙醇,異丙醇及其組合所組成之族群,並且該第一極性分子相異於該第二極性分子。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜90中,該加壓惰性氣體水溶液係利用該加壓氣體過飽和地導入水中來達成,該加壓氣體為一選自二氧化碳,氮氣,氬氣及其組合所組成之族群。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜中,該加壓惰性氣體水溶液係利用三十到三百巴的壓力來達成。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜中,該加壓惰性氣體水溶液係利用加壓一加壓惰性氣體來達成,該加壓惰性氣體為一選自二氧化碳,氮氣,氬氣及其組合所組成之族群。優選地,本發明所揭示在結構性蛋白器官修補膜90中,該加壓惰性氣體水溶液係利用加壓氣體過飽和地導入水溶液中來達成,該水溶液係選自由乙醇水溶液,甲醇
水溶液,丙醇水溶液,丁醇水溶液及其組合所組成族群。
本發明第三實施例係關於利用本發明第一實施例該具有兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟之結構性蛋白器官修補膜製法所得到之一種具有三維支撐體之結構性蛋白器官修補膜90生成過程產物,如該原始動物器官組織薄片10,該第一動物器官組織薄片20,該第二動物器官組織薄片30,及該結構性蛋白器官修補膜90等的物化性質分析,如圖二所示為該原始動物器官組織薄片10,該第一動物器官組織薄片20,該第二動物器官組織薄片30,及該結構性蛋白器官修補膜90等之電子顯微鏡分析影像。由圖二可以明顯觀察到透過本發明第一實施例之結構性蛋白器官修補膜製法可以有效率地得到潔淨完整之結構。特別地,該原始動物器官組織薄片10外部脂肪相當緻密地將該原始動物器官組織薄片10包覆,如圖二(A)所示。將該透過原始動物器官組織薄片10經過本發明所揭示該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟101明顯地可移除外部包覆脂肪,並露出內部結構性蛋白組織及內附吸附之脂肪,如圖二(B)所示。接著透過本發明該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟105,可深入去除內部脂肪及相關不純物,得到相當完整的結構性蛋白結構,該第二動物器官組織薄片30,如圖二(C)所示。經過本發明第一實施例所有步驟處理後,包含依次接續的該弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟,該酸鹼調節結構穩定步驟,以及該深度結構潔淨步驟,成功有效率地得到結構完整且潔淨的結構性蛋白器官修補膜90,如圖二(D)所示。透過本實施例進行該原始動物器官組織薄片10及該第二動物器官組織薄片30之遠紅外線光譜分析可知,透過本發明第一實施例的兩段式加壓複合流體
多層次深層脫脂步驟,已經將脂肪去除並保留完整結構,如圖三所示。該原始動物器官組織薄片10之遠紅外線光譜分析顯示結構性蛋白的特性吸收峰位置在AI,AII,AII,AIV,及AV,而脂肪的特性吸收峰位置在LI及LII,如圖三(A)所示。由第三實施例可知透過本發明第一實施例該具有兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟,可以得到具有相當完整脫脂結構性蛋白的第二動物器官組織薄片30,如圖二(C)所示,進一步透過第二動物器官組織薄片30之遠紅外線光譜分析,如圖三(B)顯示結構性蛋白的特性吸收峰位置在AI’,AII’,AII’,AIV’,及AV’等相當明顯地被檢測觀察,而原來處理前在該原始動物器官組織薄片10之脂肪的特性吸收峰LI及LII已經消失。最後,經過本發明第一實施例所有步驟處理後,包含依次接續的該弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟,該酸鹼調節結構穩定步驟,以及該深度結構潔淨步驟,成功有效率地得到結構完整且潔淨的結構性蛋白器官修補膜90,如圖二(D)所示。該結構性蛋白器官修補膜90之遠紅外線光譜分析,如圖三(C)顯示結構性蛋白的特性吸收峰位置在AI”,AII”,AII”,AIV”,及AV”等相當明顯地被檢測觀察,而原來處理前在該原始動物器官組織薄片10之脂肪的特性吸收峰LI及LII已經完全消失,成分顯示本發明成功利用創新多層次處理原則、配方及製程設計得到結構完整且潔淨的結構性蛋白器官修補膜90,如圖三(C)所示。
本發明第四實施例關於一種具有加壓複合流體多層次脫脂步驟之結構性蛋白器官修補膜脫脂方法,如圖四所示,其包含一第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟101’,一第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟105’,及一個深度結構潔淨步驟400’,其中該第一加壓複合流體多層次
外部脫脂步驟101’,針對一原始動物器官組織薄片10’之外部脂肪去除,係利用一第一加壓複合流體在壓力三十到三百巴以及溫度二十五到三十五℃下,處理該原始動物器官組織薄片,該原始動物器官組織薄片厚度為零點一到五點零公厘,進行二到四小時,得到一第一動物器官組織薄片20’,其中該第一加壓複合流體包含二氧化碳以及一複合尺寸醇水溶液,且該複合尺寸醇水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例,其中該複合尺寸醇水溶液包含濃度五至九十五體積百分率之一短碳鏈醇分子水溶液以及一到五重量百分率之一長碳鏈醇分子水溶液,透過該第一加壓複合流體而多層次去除吸附及包覆該第一動物器官組織薄片20’之薄片結構外部脂肪;及該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟105’,針對該第一動物器官組織薄片20’外部脂肪去除,係利用一第二加壓複合流體在壓力三十到三百巴以及溫度二十五到三十五℃下,處理該第一動物器官組織薄片20’,進行二到四小時,得到一第二動物器官組織薄片30’,其中該第二加壓複合流體包含二氧化碳,以及濃度為五至九十五體積百分率之一複合極性水溶液,其中該複合極性水溶液係利用一第一極性分子與一第二極性分子依據混和比九十比十到九十九比一所製得,該複合極性水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例混合,透過該第二加壓複合流體中該二氧化碳,該第一極性分子與該第二極性分子之複合滲透作用,可用來多層次去除滲入及吸附於該第一動物器官組織薄片10’之薄片結構內部脂肪,根據對比相同條件的第一實施例成果,明顯地內部及外部脂肪在不破壞結構蛋白之完整性下可被有效地移除,這是席之技藝所難以克服的,特別是兼顧去除油脂雜質與保留完整結構。本發明創新設計捨去習知純化技術所利用高活性,高反應性,高濃度,及高機械剪應力的條件及製程方法,常會破壞結構性蛋白的結構完整
性,如圖五所示,不論在低濃度酸性或弱鹼下,特別是配合超聲波震盪都會造成結構嚴重破壞,如圖五(A)所示將第二動物器官組織薄片30’經零點五摩爾濃度醋酸3小時處理後之掃描式電子顯微鏡(SEM)影像圖,及如圖五(B)將第二動物器官組織薄片30’經零點五摩爾濃度碳酸氫納12小時處理後之掃描式電子顯微鏡(SEM)影像圖。
本發明第五實施例關於一種用於製作結構性蛋白脫脂器官修補膜之多層次脫脂處理劑110,如圖六所示,其包含一複合尺寸醇水溶液以及二氧化碳,且該複合尺寸醇水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例,其中在一複合尺寸醇水溶液供應槽111中配置該複合尺寸醇水溶液,該合尺寸醇水溶液包含濃度五至九十五體積百分率之一短碳鏈醇分子水溶液以及一到五重量百分率之一長碳鏈醇分子水溶液,先將複合尺寸醇水溶液透過連結該複合尺寸醇水溶液供應槽111之一液態控制閥505導入具有一壓力儲存腔501的一個壓力儲存瓶500,再將儲存該二氧化碳的一個二氧化碳供應槽113透過一氣態控制閥503,在一壓力計507監控下連結在該壓力儲存腔501,並將該該二氧化碳導入該壓力儲存腔501,如圖六所示。在本發明第五實施例中,該壓力儲存瓶500被控制在一介於二十五到三十五℃之溫度與一介於三十到三百巴之壓力下,來保存該多層次脫脂處理劑110。優選地,該多層次脫脂處理劑100利用高壓鋼瓶保存。當充填完畢,可將該複合尺寸醇水溶液供應槽111及該二氧化碳供應槽113移除。在特定實施例中,亦可將該複合尺寸醇水溶液供應槽111,該二氧化碳供應槽113,該液態控制閥505,及該壓力計507移除,保留該氣態控制閥503利於該多層次脫脂處理劑100之使用或作為產品使用之安全
控制。
本發明更加揭示一種用於製作結構性蛋白脫脂器官修補膜之多層次脫脂處理劑,其包含二氧化碳以及一複合尺寸醇水溶液,且該複合尺寸醇水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例,其中該複合尺寸醇水溶液包含濃度五至九十五體積百分率之一短碳鏈醇分子水溶液以及一到五重量百分率之一長碳鏈醇分子水溶液,控制在一介於二十五到三十五℃之溫度與一介於三十到三百巴之壓力下使用。優選地,該多層次脫脂處理劑利用高壓鋼瓶保存。
本發明第六實施例係關於利用本發明第一實施例該具有兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟之結構性蛋白器官修補膜製法所得到之一種具有三維支撐體之結構性蛋白器官修補膜90之臨床前評估試驗。對於末端產品商品化並須進行人體臨床試驗評估,而臨床前評估試驗則是進行人體臨床試驗評估之重要依據。因此,本發明第一實施例該具有兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟之結構性蛋白器官修補膜製法所得到之一種具有三維支撐體之結構性蛋白器官修補膜90,透過本發明第六實施例,進行該結構性蛋白器官修補膜90之結構性蛋白器官修補膜組織切片試驗,結構性蛋白器官修補膜核酸染色試驗,及結構性蛋白器官修補膜細胞培養等項目之臨床前評估試驗,結果如圖七所示,透過圖七(A)之組織切片結果與圖七(B)切片螢光染色結果顯示本發明所得該結構性蛋白器官修補膜90已完全將結構性蛋白之外的游離細胞等細胞內間質去除。進一步,進行纖維母細胞培養評估細胞在本發明所得該結構性蛋白器官修補膜90上是否可以貼附生長,圖七(C)顯示,纖維母細胞可以順利在本發明所得該結構性蛋白器官修補膜90上生長並透過電子顯微鏡影像觀察。
下文提出多個實驗例來說明本發明的某些態樣,以利本發明所屬技術領域中具有通常知識者實作本發明,且不應將這些實驗例視為對本發明範圍的限制。據信習知技藝者在閱讀了此處提出的說明後,可在不需過度解讀的情形下,完整利用並實踐本發明。此處所引用的所有公開文獻,其全文皆視為本說明書的一部分。
雖然上文實施方式中揭露了本發明的具體實施例,然其並非用以限定本發明,本發明所屬技術領域中具有通常知識者,在不悖離本發明之原理與精神的情形下,當可對其進行各種更動與修飾,因此本發明之保護範圍當以附隨申請專利範圍所界定者為準。
10:原始動物器官組織薄片
20:第一動物器官組織薄片
30:第二動物器官組織薄片
40:第三動物器官組織薄片
50:第四動物器官組織薄片
90:結構性蛋白器官修補膜
100:兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟
101:第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟
105:第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟
200:弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟
300:酸鹼調節結構穩定步驟
400:深度結構潔淨步驟
Claims (40)
- 一種具有兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟之結構性蛋白器官修補膜製法,其包含:一個兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟,其中包含一第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,及一第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟;一個弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟;一個酸鹼調節結構穩定步驟;以及一個深度結構潔淨步驟,其中該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟係利用一第一加壓複合流體控制在一介於二十五到三十五℃之溫度與一介於三十到三百巴之壓力下,處理厚度介於零點一到五點零公厘的一原始動物器官組織薄片,進行一介於二到四小時的反應時間,得到一第一動物器官組織薄片,其中該第一加壓複合流體包含二氧化碳以及一複合尺寸醇水溶液,且該複合尺寸醇水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例,其中該複合尺寸醇水溶液包含濃度五至九十五體積百分率之一短碳鏈醇分子水溶液以及一到五重量百分率之一長碳鏈醇分子水溶液,透過該第一加壓複合流體而多層次去除吸附及包覆該第一動物器官組織薄片之薄片結構外部脂肪;及該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟,係利用一第二加壓複合流體控制在一介於二十五到三十五℃之溫度與一介於三十到三百巴之壓力下,處理該第一動物器官組織薄片,持續進行時間介於二到四小時, 得到一第二動物器官組織薄片,其中該第二加壓複合流體包含二氧化碳,以及濃度介於五至九十五體積百分率之一複合極性水溶液,其中該複合極性水溶液係利用一第一極性分子與一第二極性分子依據混和比介於九十比十~九十九比一所製得,該複合極性水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例混合,透過該第二加壓複合流體中該二氧化碳,該第一極性分子與該第二極性分子之複合滲透作用,可用來多層次去除滲入及吸附於該第一動物器官組織薄片之薄片結構內部脂肪;一弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟,處理經該兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟所得該第二動物器官組織薄片,用來去除該第二動物器官組織薄片之薄片結構細胞內間質,在溫度介於二十五到三十五℃下,持續進行時間介於四小時到八小時,得到一第三動物器官組織薄片,其中該弱鹼性水溶液,包含一鹼及水,被控制在酸鹼值介於七到十一之間;該酸鹼調節結構穩定步驟,係利用一強解離酸水溶液,浸泡該第三動物器官組織薄片,在溫度介於二十五到三十五℃下,持續進行時間介於十五分鐘到三十分鐘,使該第三動物器官組織薄片酸鹼值被加以調節,得到一第四動物器官組織薄片,其中強解離酸水溶液包含一強解離酸及水,該第四動物器官組織薄片之酸鹼值介於五到八之間,使薄片結構穩定;以及該深度結構潔淨步驟,係利用加壓惰性氣體水溶液在溫度介於二十五到三十五℃下清洗,得到一結構性蛋白器官修補膜,其厚度介於零點一-五點零公厘,其中該結構性蛋白器官修補膜製法不使用交聯劑,而該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟;該弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟;該酸鹼調節結構穩定 步驟;及該深度結構潔淨步驟係依序進行。
- 一種具有三維支撐體結構之結構性蛋白器官修補膜,其中該結構性蛋白器官修補膜係利用一複合製程來製得,其中該複合製程包含一個兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟,其中包含一第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,及一第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟;一個弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟;一個酸鹼調節結構穩定步驟;以及一個深度結構潔淨步驟,其中透過該兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟之處理可完整維持一個三維支撐體結構,並透過該弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟,酸鹼調節結構穩定步驟,與該深度結構潔淨步驟,純化該三維支撐體結構,另外,該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟係利用一第一加壓複合流體在壓力介於三十到三百巴以及溫度介於二十五到三十五℃下,處理厚度介於零點一到五點零公厘的一原始動物器官組織薄片,持續進行時間介於二到四小時,得到一第一動物器官組織薄片,其中該第一加壓複合流體包含二氧化碳以及一複合尺寸醇水溶液,且該複合尺寸醇水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例,其中該複合尺寸醇水溶液包含濃度介於五至九十五體積百分率之一短碳鏈醇分子水溶液以及介於濃度一到五重量百分率之一長碳鏈醇分子水溶液,透過該第一加壓複合流體而多層次去除吸附及包覆該第一動物器官組織薄片之薄片結構外部脂肪;及該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟,係利用一第二加壓 複合流體在壓力介於三十到三百巴以及溫度介於二十五到三十五℃下,處理該第一動物器官組織薄片,持續進行時間二到四小時,得到一第二動物器官組織薄片,其中該第二加壓複合流體包含二氧化碳,以及濃度為五至九十五體積百分率之一複合極性水溶液,其中該複合極性水溶液係利用一第一極性分子與一第二極性分子依據混和比介於九十比十~九十九比一所製得,該複合極性水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例混合,透過該第二加壓複合流體中該二氧化碳,該第一極性分子與該第二極性分子之複合滲透作用,可用來多層次去除滲入及吸附於該第一動物器官組織薄片之薄片結構內部脂肪;一弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟,處理經該兩段式加壓複合流體多層次深層脫脂步驟所得該第二動物器官組織薄片,用來去除該第二動物器官組織薄片之薄片結構細胞內間質,在溫度介於二十五到三十五℃下,持續進行時間介於四小時到八小時,得到一第三動物器官組織薄片,其中該弱鹼性水溶液,包含一鹼及水,酸鹼值被控制在七到十一之間;該酸鹼調節結構穩定步驟,係利用一強解離酸水溶液,浸泡該第三動物器官組織薄片,在溫度介於二十五到三十五℃下,持續進行時間介於十五分鐘到三十分鐘,使該第三動物器官組織薄片酸鹼值被加以調節,得到一第四動物器官組織薄片,其中強解離酸水溶液包含一強解離酸及水,該第四動物器官組織薄片之酸鹼值界於五到八之間,使薄片結構穩定;以及該深度結構潔淨步驟,係利用加壓惰性氣體水溶液在溫度二十五到三十五℃下清洗,得到一結構性蛋白器官修補膜,其厚度界於零點一到五點零公厘,其中該結構性蛋白器官修補膜製法不使用交聯劑,而該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,該第二加壓複合流體多層次內部 脫脂步驟;該弱鹼性水溶液脫細胞內間質步驟;該酸鹼調節結構穩定步驟;及該深度結構潔淨步驟係依序進行。
- 如申請專利範圍第1項的結構性蛋白器官修補膜製法,其中該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,及該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟之溫度是三十五℃,壓力是二百巴。
- 如申請專利範圍第1項的結構性蛋白器官修補膜製法,其中該原始動物器官組織薄片係選自由器官,軟骨,氣管,角膜,肋軟骨,角質,骨骼,軟甲殼,耳軟骨,腸膜及皮膚的動物器官組織,且厚度為零點一到一點零公厘。
- 如申請專利範圍第1項的結構性蛋白器官修補膜製法,其中該長碳鏈醇分子水溶液係選自由長碳鏈多元醇水溶液,環碳鏈多元醇水溶液,酯基取代多元醇水溶液,芳香族取代長碳鏈醚醇水溶液,長碳鏈醚醇水溶液,甲醚聚乙二醇水溶液,聚乙烯醇水溶液,聚醚多元醇水溶液,長碳鏈醇水溶液及其組合所組成之族群。
- 如申請專利範圍第1項的結構性蛋白器官修補膜製法,其中該短碳鏈醇分子水溶液係選自由甲醇水溶液,乙醇水溶液,丙醇水溶液,異丙醇水溶液、丁醇水溶液,異丁醇水溶液,仲丁醇水溶液,叔丁醇水溶液和環丁醇水溶液及其組合所組成之族群。
- 如申請專利範圍第1項的結構性蛋白器官修補膜製法,其中該第一加 壓複合流體係利用將該複合尺寸醇水溶液與二氧化碳依據體積比一比四到一比一百混合,控制溫度三十℃和壓力三百巴得到,其中該複合尺寸醇水溶液包含該長碳鏈醇分子水溶液與該短碳鏈醇分子水溶液,該長碳鏈醇分子水溶液與該短碳鏈醇分子水溶液的混和體積比為一比四到一比一百。
- 如申請專利範圍第1項的結構性蛋白器官修補膜製法,其中該複合尺寸醇水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比五到一比十之間的比例混合。
- 如申請專利範圍第1項的結構性蛋白器官修補膜製法,其中該複合極性水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比五到一比十之間的比例混合。
- 如申請專利範圍第1項的結構性蛋白器官修補膜製法,其中該第一極性分子係選自由超純水,甲醇,乙醇及其組合所組成之族群,以及,該第二極性分子係選自由乙醇,丙醇,異丙醇及其組合所組成之族群,並且該第一極性分子相異於該第二極性分子。
- 如申請專利範圍第1項的結構性蛋白器官修補膜製法,其中該加壓惰性氣體水溶液係利用一加壓氣體過飽和地導入水中來達成,該加壓氣體為一選自二氧化碳,氮氣,氬氣及其組合所組成之族群。
- 如申請專利範圍第1項的結構性蛋白器官修補膜製法,其中該加壓 惰性氣體水溶液係利用三十到三百巴的壓力來達成。
- 如申請專利範圍第1項的結構性蛋白器官修補膜製法,其中該加壓惰性氣體水溶液係利用加壓一加壓惰性氣體來達成,該加壓惰性氣體為一選自二氧化碳,氮氣,氬氣及其組合所組成之族群。
- 如申請專利範圍第1項的結構性蛋白器官修補膜製法,其中該加壓惰性氣體水溶液係利用一加壓氣體過飽和地導入水溶液中來達成,該水溶液係選自由乙醇水溶液,甲醇水溶液,丙醇水溶液,丁醇水溶液及其組合所組成族群。
- 如申請專利範圍第2項的結構性蛋白器官修補膜,其中該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,及該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟之溫度是三十五℃,壓力是二百巴。
- 如申請專利範圍第2項的結構性蛋白器官修補膜,其中該原始動物器官組織薄片係選自由器官,軟骨,氣管,角膜,肋軟骨,角質,骨骼,軟甲殼,耳軟骨,腸膜及皮膚的動物器官組織,且厚度為零點一到一點零公厘。
- 如申請專利範圍第2項的結構性蛋白器官修補膜,其中該長碳鏈醇分子水溶液係選自由長碳鏈多元醇水溶液,環碳鏈多元醇水溶液,酯基取代多元醇水溶液,芳香族取代長碳鏈醚醇水溶液,長碳鏈醚醇水溶液,甲醚聚乙二醇水溶液,聚乙烯醇水溶液,聚醚多元醇水溶液,長碳鏈醇 水溶液及其組合所組成之族群。
- 如申請專利範圍第2項的結構性蛋白器官修補膜,其中該短碳鏈醇分子水溶液係選自由甲醇水溶液,乙醇水溶液,丙醇水溶液,異丙醇水溶液、丁醇水溶液,異丁醇水溶液,仲丁醇水溶液,叔丁醇水溶液和環丁醇水溶液及其組合所組成之族群。
- 如申請專利範圍第2項的結構性蛋白器官修補膜,其中該第一加壓複合流體係利用將該複合尺寸醇水溶液與二氧化碳依據體積比一比四到一比一百混合,控制溫度三十℃和壓力三百巴得到,其中該複合尺寸醇水溶液包含該長碳鏈醇分子水溶液與該短碳鏈醇分子水溶液,該長碳鏈醇分子水溶液與該短碳鏈醇分子水溶液的混和體積比為一比四到一比一百。
- 如申請專利範圍第2項的結構性蛋白器官修補膜,其中該複合尺寸醇水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比五到一比十之間的比例混合。
- 如申請專利範圍第2項的結構性蛋白器官修補膜,其中該複合極性水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比五到一比十之間的比例混合。
- 如申請專利範圍第2項的結構性蛋白器官修補膜,其中該第一極性分子係選自由超純水,甲醇,乙醇及其組合所組成之族群,以及,該第二 極性分子係選自由乙醇,丙醇,異丙醇及其組合所組成之族群,並且該第一極性分子相異於該第二極性分子。
- 如申請專利範圍第2項的結構性蛋白器官修補膜,其中該加壓惰性氣體水溶液係利用一加壓氣體過飽和地導入水中來達成,該加壓氣體為一選自二氧化碳,氮氣,氬氣及其組合所組成之族群。
- 如申請專利範圍第2項的結構性蛋白器官修補膜,其中該加壓惰性氣體水溶液係利用三十到三百巴的壓力來達成。
- 如申請專利範圍第2項的結構性蛋白器官修補膜,其中該加壓惰性氣體水溶液係利用加壓一加壓惰性氣體來達成,該加壓惰性氣體為一選自二氧化碳,氮氣,氬氣及其組合所組成之族群。
- 如申請專利範圍第2項的結構性蛋白器官修補膜,其中該加壓惰性氣體水溶液係利用一加壓氣體過飽和地導入水溶液中來達成,該水溶液係選自由乙醇水溶液,甲醇水溶液,丙醇水溶液,丁醇水溶液及其組合所組成族群。
- 一種具有加壓複合流體多層次脫脂步驟之結構性蛋白器官修補膜脫脂方法,其包含一第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,一第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟,及一個深度結構潔淨步驟,其中 該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,針對一原始動物器官組織薄片之外部脂肪去除,係利用一第一加壓複合流體控制在一介於二十五到三十五℃之溫度與一介於三十到三百巴之壓力下,處理該原始動物器官組織薄片,該原始動物器官組織薄片厚度為零點一到五點零公厘,進行二到四小時,得到一第一動物器官組織薄片,其中該第一加壓複合流體包含二氧化碳以及一複合尺寸醇水溶液,且該複合尺寸醇水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例,其中該複合尺寸醇水溶液包含濃度五至九十五體積百分率之一短碳鏈醇分子水溶液以及一到五重量百分率之一長碳鏈醇分子水溶液,透過該第一加壓複合流體而多層次去除吸附及包覆該第一動物器官組織薄片之薄片結構外部脂肪;及該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟,針對該第一動物器官組織薄片外部脂肪去除,係利用一第二加壓複合流體控制在一介於二十五到三十五℃之溫度與一介於三十到三百巴之壓力下,處理該第一動物器官組織薄片,進行二到四小時,得到一第二動物器官組織薄片,其中該第二加壓複合流體包含二氧化碳,以及濃度為五至九十五體積百分率之一複合極性水溶液,其中該複合極性水溶液係利用一第一極性分子與一第二極性分子依據混和比九十比十~九十九比一所製得,該複合極性水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例混合,透過該第二加壓複合流體中該二氧化碳,該第一極性分子與該第二極性分子之複合滲透作用,可用來多層次去除滲入及吸附於該第一動物器官組織薄片之薄片結構內部脂肪;以及該深度結構潔淨步驟,係利用加壓惰性氣體水溶液在溫度二十五到三十五℃下進行該第二動物器官組織薄片之清洗,得到一結構性蛋白 脫脂器官修補膜,其厚度界於零點一到五點零公厘,其中該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟以及該深度結構潔淨步驟係依序進行。
- 如申請專利第27項的結構性蛋白器官修補膜脫脂方法,其中該第一加壓複合流體多層次外部脫脂步驟,及該第二加壓複合流體多層次內部脫脂步驟之溫度是三十五℃,壓力是二百巴。
- 如申請專利範圍第27項的結構性蛋白器官修補膜脫脂方法,其中該原始動物器官組織薄片係選自由器官,軟骨,氣管,角膜,肋軟骨,角質,骨骼,軟甲殼,耳軟骨,腸膜及皮膚的動物器官組織,且厚度為零點一到一點零公厘。
- 如申請專利範圍第27項的結構性蛋白器官修補膜脫脂方法,其中該長碳鏈醇分子水溶液係選自由長碳鏈多元醇水溶液,環碳鏈多元醇水溶液,酯基取代多元醇水溶液,芳香族取代長碳鏈醚醇水溶液,長碳鏈醚醇,甲醚聚乙二醇水溶液,聚乙烯醇水溶液,聚醚多元醇水溶液,長碳鏈醇水溶液及其組合所組成之族群。
- 如申請專利範圍第27項的結構性蛋白器官修補膜脫脂方法,其中該短碳鏈醇分子水溶液係選自由甲醇水溶液,乙醇水溶液,丙醇水溶液,異丙醇水溶液、丁醇水溶液,異丁醇水溶液,仲丁醇水溶液,叔丁醇水溶液和環丁醇水溶液及其組合所組成之族群。
- 如申請專利範圍第27項的結構性蛋白器官修補膜脫脂方法,其中該第一加壓複合流體係利用將該複合尺寸醇水溶液與二氧化碳依據體積比一比四到一比一百混合,控制溫度三十℃和壓力三百巴得到,其中該複合尺寸醇水溶液包含該長碳鏈醇分子水溶液與該短碳鏈醇分子水溶液,該長碳鏈醇分子水溶液與該短碳鏈醇分子水溶液的混和體積比為一比四到一比一百。
- 如申請專利範圍第27項的結構性蛋白器官修補膜脫脂方法,其中該複合尺寸醇水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比五到一比十之間的比例混合。
- 如申請專利範圍第27項的結構性蛋白器官修補膜脫脂方法,其中該複合極性水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比五到一比十之間的比例混合。
- 如申請專利範圍第27項的結構性蛋白器官修補膜脫脂方法,其中該第一極性分子係選自由超純水,甲醇,乙醇及其組合所組成之族群,以及,該第二極性分子係選自由乙醇,丙醇,異丙醇及其組合所組成之族群,並且該第一極性分子相異於該第二極性分子。
- 如申請專利範圍第27項的結構性蛋白器官修補膜脫脂方法,其中該加壓惰性氣體水溶液係利用一加壓氣體過飽和地導入水中來達成,該加壓氣體為一選自二氧化碳,氮氣,氬氣及其組合所組成之族群。
- 如申請專利範圍第27項的結構性蛋白器官修補膜脫脂方法,其中該加壓惰性氣體水溶液係利用三十到三百巴的壓力來達成。
- 如申請專利範圍第27項的結構性蛋白器官修補膜脫脂方法,其中該加壓惰性氣體水溶液係利用加壓一加壓惰性氣體來達成,該加壓惰性氣體為一選自二氧化碳,氮氣,氬氣及其組合所組成之族群。
- 如申請專利範圍第27項的結構性蛋白器官修補膜脫脂方法,其中該加壓惰性氣體水溶液係利用一加壓氣體過飽和地導入水溶液中來達成,該水溶液係選自由乙醇水溶液,甲醇水溶液,丙醇水溶液,丁醇水溶液及其組合所組成族群。
- 一種用於製作結構性蛋白器官修補膜之多層次脫脂處理劑,其包含二氧化碳以及一複合尺寸醇水溶液,且該複合尺寸醇水溶液與該二氧化碳混合體積比為一介於一比四到一比一百之間的比例,其中該複合尺寸醇水溶液包含濃度五至九十五體積百分率之一短碳鏈醇分子水溶液以及一到五重量百分率之一長碳鏈醇分子水溶液,控制在一介於二十五到三十五℃之溫度與一介於三十到三百巴之壓力下使用。
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