CN102579516A - 一种从大果沙棘果渣中分离纯化沙棘黄酮的方法 - Google Patents

Abstract

一种从大果沙棘果渣中分离纯化沙棘黄酮的方法，本发明涉及一种从大果沙棘果渣中分离纯化沙棘黄酮的方法。本发明解决了现有沙棘黄酮的分离纯化方法存在方法繁琐、工艺复杂、分离纯化成本过高、黄酮活性容易遭到破坏以及黄酮纯度较低的问题。本发明一种从大果沙棘果渣中分离纯化沙棘黄酮的方法按照如下步骤进行：1.原料脱脂；2.超声波提取，离心；3.提取液加入金属盐使黄酮与金属络合反应，搅拌，调溶液pH，收集沉淀；4.加入解络剂溶解沉淀，减压浓缩至干，再用乙醇溶解过滤，将滤液浓缩，干燥后即得到分离纯化后的沙棘黄酮粉末。本发明的一种从大果沙棘果渣中分离纯化沙棘黄酮的方法能保证纯化后的大果沙棘黄酮纯度充分提高，保留天然黄酮原有的生物活性，安全无毒，并具有生产成本低、工艺简易的优点，适合沙棘黄酮的大规模化生产。

Description

一种从大果沙棘果渣中分离纯化沙棘黄酮的方法

技术领域：本发明涉及一种从大果沙棘果渣中分离纯化沙棘黄酮的方法。 

背景技术：

沙棘(Hippophae rhamnoides L.)为胡颓子科(Elaeagnaceae)沙棘属(Hippophae Linn.)多年生落叶灌木或小乔木。原产我国及欧洲，分布于欧亚大陆的温带、寒温带及亚热带高山区，以前苏联、蒙古、中国分布最多。种类主要有肋果沙棘、西藏沙棘、蒙古沙棘、柳叶沙棘等，大果沙棘是近年来我国从俄罗斯引进的并通过杂交选育的新品种，主要集中在黑龙江种植，其主要特点是果实大、营养丰富、黄酮含量较高。 

沙棘作为一种古老的野生植物，自古以来就被人类所利用。沙棘的各部分器官都具有很高的营养和药用价值，素有“神果奇树”之称，尤其是其药用价值，国内外的许多专家研究发现，沙棘含有上百种生物活性物质，其中有维生素类、糖类、氨基酸类、不饱和脂肪酸、多酚类、黄酮类、SOD、5-羟色胺以及各种微量元素等。其中，黄酮是沙棘中一种重要的生物活性物质，沙棘果实中黄酮含量为309～945mg/100g，而叶中黄酮的含量高于果实，为310～1238mg/100g，均高于其他植物和果实。研究实验表明，黄酮的功效是多方面的：它是一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，可以抑制油脂性过氧化物的全阶段溢出，这种阻止氧化的能力是维生素E的十倍以上，这种抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生；黄酮可以改善血液循环，可以降低胆固醇，可大大降低了心脑血管疾病的发病率，也可改善心脑血管疾病的症状；黄酮化合物在动物实验中被证明可以降低26％的血糖和39％的三元脂肪酸丙酯，这种降低血糖的功效是很神奇的，但更重要的是它对稳定胶原质的作用，因此它对糖尿病引起的视网膜病及毛细血管脆化有很好的作用；黄酮可以抑制炎性生物酶的渗出，可以增进伤口愈合和止痛，还可以用 于各类敏感症的治疗。而沙棘黄酮也同样具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、降血脂、抗辐射、抗炎生肌、提高免疫等多项生理功能，现已在功能食品、保健品以及心脑血管疾病、抗癌药物等方面广泛应用。 

现在国内对沙棘开发利用方面还普遍存在比较多的问题，如生产工艺复杂、成本过高，综合利用不够，产品附加值较低，虽然已开发出黄酮产品，但较多为黄酮粗提物，黄酮纯度较低，难以发挥其功效，满足不了国内外市场的需求，限制了在保健食品和天然药物方面的应用。所以，如何采用一种工艺简单、成本低廉的方法纯化出生物活性好、纯度高的沙棘酮是当今急需解决的问题。 

目前，对已采用的沙棘黄酮的分离纯化方法主要有几种，如中国专利申请CN 102058634A公开内容所示：将沙棘原料脱脂，稀碱提取，过滤，滤液调节pH，离心分离，沉淀物进行醇溶超声波提取，离心分离，回收乙醇，加纯水稀释并加澄清剂处理，离心分离，清液树脂吸附，水洗，乙醇脱洗，洗脱液浓缩，干燥，获得产品。该工艺采用碱法和超声波法提取沙棘黄酮，再通过树脂吸附法纯化，虽然这一套完整的工程在现有技术中是没有记载的，但酸碱法可能影响黄酮的活性，而且树脂法纯化采用的比较多，效果和安全性方面会影响其应用。再例如中国专利申请CN 102058634A公开内容所示：以沙棘叶或果实经提取、水解和除杂后所得的粗提物为原料，经聚酰胺柱层析，水及低浓度极性有机溶剂洗去杂质，并用极性有机溶剂洗脱沙棘黄酮，洗脱液回收溶剂后真空干燥得到纯度达50～100％的沙棘黄酮。该方法技术合理，但使用的有机溶剂影响黄酮安全使用，而且黄酮产量较低，难以规模化生产。再例如中国专利申请CN1485324公开内容所示：一种以膜分离技术制取沙棘黄酮的方法，它以沙棘果、沙棘果肉、沙棘果皮渣或沙棘叶为原料，干燥、粉碎处理后，对以沙棘果、沙棘果肉、沙棘果皮渣为原料的细粉先进行超临界CO₂萃取其脂溶性成份，除油 后的细粉加乙醇回流提取，得沙棘黄酮粗提液；对以沙棘叶为原料的细粉加水回流提取，得沙棘黄酮粗提液；然后将沙棘黄酮粗提液先用1500-2000dalton的膜进行过滤，其滤液再经200dalton的膜过滤，得沙棘黄酮湿粉；最后将沙棘黄酮湿粉负压干燥，得到沙棘黄酮粉。该发明具有膜过滤装置简单、占地小、投资少、自动化程度高的特点。但工艺复杂，且膜非常容易被污染而导致成本过高，难以实现工业化生产。 

发明内容：

从上述技术背景可知，现有的沙棘黄酮的分离纯化方法存在很多缺陷。本发明的目的是提供一种迄今未见报道的以大果沙棘果渣为主要原料的并具有生产工艺简单、低成本、可工业化生产的大果沙棘果渣黄酮的分离纯化方法。 

本发明的一种从大果沙棘果渣中分离纯化沙棘黄酮的方法具体步骤如下： 

1、一种从大果沙棘果渣中分离纯化沙棘黄酮的方法，其特征是：该方法包括下列步骤： 

(1)原料脱脂 

称取40～60目的大果沙棘果渣粉末置于索式提取器中，用低沸点石油醚在70℃下回流2h，回收溶剂。 

(2)大果沙棘黄酮分离提取 

脱脂后的大果沙棘粉中加入10～15倍体积的70％～95％乙醇水溶液，在超声功率200～300w、频率40KHZ、温度50℃条件下提取三次，加硅藻土助滤，合并提取液，得澄清沙棘黄酮提取液。 

(3)大果沙棘黄酮纯化 

向提取液中加入5～10mg/mL的硫酸锌/乙酸锌进行络合反应，搅拌速度为100～200r/min，边搅拌边用4％的Na0H溶液调溶液pH值至6.5～8.5，4000r/min 离心，收集沉淀。将沉淀分散于30～50％的乙醇水溶液中，向溶液中加入4.0～6.0％EDTA，于40～60℃水浴中振荡反应至沉淀完全溶解，将溶液冷却至室温，过滤，将溶液减压浓缩至干。将干物质用20～30倍乙醇溶解，过滤，将滤液浓缩干燥，既可得总黄酮含量20％～60％的棕黄色大果沙棘黄酮粉末。 

本发明和现有的技术相比具有以下优点： 

一、本发明采用大果沙棘果渣为原料，首先利用超声波提取技术将沙棘黄酮提取分离出来，然后利用黄酮与金属盐之间的络合和解络合作用原理，除去杂质得到纯度较高的大果沙棘黄酮，该纯化技术国内外未见相关资料报道。其分离纯化方法简单，生产成本低，符合中药产业现代化的要求。该方法适用于产业化生产，其纯化工艺具有较强的实用价值。 

二、本发明能利用沙棘果加工副产物一大果沙棘果渣分离纯化出黄酮成分，充分利用了沙棘资源，且分离纯化过程的有机溶剂可全部回收利用，充分保护了环境，降低了成本。 

三、本发明分离纯化的大果沙棘果渣黄酮，其黄酮纯度可达50％以上，纯化效率较高。 

四、本发明所纯化出的黄酮安全无污染，具有较高的生物活性和多种生理功能，直接作为保健食品、药品的原料和营养强化剂。 

五、本发明方法所使用的材料来源广泛，所用溶液可二次利用，节约了能源，降低了环境污染。是一种简单方便、低成本、高效的大果沙棘黄酮分离纯化方法。 

具体实施方式：

【实施例1】 

(1)原料脱脂 

称取120g40目颗粒大小的大果沙棘果渣粉末置于索式提取器中，用低沸点石油醚在70℃下回流2h，脱去沙棘果渣中的油脂，并回收溶剂。 

(2)大果沙棘黄酮分离提取 

取脱脂后的大果沙棘粉100g，加入1.5L 85％乙醇水溶液，在超声功率300w、频率40KHZ、温度50℃条件下超声30min，提取三次，加硅藻土助滤，合并提取液得澄清的沙棘黄酮提取液2.5L。 

(3)大果沙棘黄酮纯化 

向提取液中加入12.5g硫酸锌进行络合反应，搅拌速度为150r/min，边搅拌边用4％的NaOH溶液调溶液pH值至8.5，4000r/min离心10min，收集沉淀。将沉淀分散于30％的乙醇水溶液中，向溶液中加入4.0％EDTA，于50℃水浴中振荡反应至沉淀完全溶解，将溶液冷却至室温，过滤，将溶液减压浓缩至干。将干物质用20倍乙醇溶解，过滤，将滤液浓缩干燥，既得棕色大果沙棘黄酮粉末，其沙棘总黄酮含量大于52.5％。 

【实施例2】 

(1)原料脱脂 

称取100g 40目颗粒大小的大果沙棘果渣粉末置于索式提取器中，用低沸点石油醚在70℃下回流2h，脱去沙棘果渣中的油脂，并回收溶剂。 

(2)大果沙棘黄酮分离提取 

取脱脂后的大果沙棘粉80g，加入1.2L 85％乙醇水溶液，在超声功率300w、频率40KHZ、温度50℃条件下超声30min，提取三次，加硅藻土助滤，合并提取液得澄清的沙棘黄酮提取液2.0L。 

(3)大果沙棘黄酮纯化 

向提取液中加入10.0g乙酸锌进行络合反应，搅拌速度为150r/min，边搅拌边用4％的NaOH溶液调溶液pH值至7.5，4000r/min离心，收集沉淀。将沉淀分散于30％的乙醇水溶液中，向溶液中加入4.0％EDTA，于50℃水浴中振荡反应至沉淀完全溶解，将溶液冷却至室温，过滤，将溶液减压浓缩至干。将干物质用20倍乙醇溶解，过滤，将滤液浓缩干燥，既得棕色大果沙棘黄酮粉末，其沙棘总黄酮含量大于50.2％。

Claims (4)

1.一种从大果沙棘果渣中分离纯化沙棘黄酮的方法，其特征是：该方法包括下列步骤：

(1)原料脱脂

大果沙棘果渣粉用石油醚在70℃下脱脂2h，回收溶剂。

(2)大果沙棘黄酮分离提取

大果沙棘粉中加入10～15倍体积的乙醇水溶液，在50℃下超声提取三次，过滤后得到沙棘黄酮提取液。

(3)大果沙棘黄酮纯化

将提取液中加入5～10mg/mL的锌盐进行络合反应，搅拌速度为100～200r/min，边搅拌边用NaOH溶液调溶液pH值至6.5～8.5，离心，收集沉淀。将沉淀分散于30～50％的乙醇水溶液中，加入解络剂EDTA，于40～60℃水浴中振荡反应至沉淀完全溶解，将溶液冷却至室温，过滤，将溶液减压浓缩至干。将干物质用乙醇溶解，过滤，将滤液浓缩干燥，得到棕黄色黄酮粉末，即可。

2.根据权利要求1所述的一种从大果沙棘果渣中分离纯化沙棘黄酮的方法，其特征是：在所述的原料脱脂步骤中，大果沙棘黄酮粉末颗粒大小为40～60目。

3.根据权利要求1所述的一种从大果沙棘果渣中分离纯化沙棘黄酮的方法，其特征是：在所述的大果沙棘黄酮分离提取步骤中，乙醇浓度为70％～95％，过滤时候加入助滤剂硅藻土。

4.根据权利要求1所述的一种从大果沙棘果渣中分离纯化沙棘黄酮的方法，其特征是：在所述的大果沙棘黄铜纯化步骤中，加入黄酮提取液中的锌盐为硫酸锌或乙酸锌，加入解络剂EDTA的量为沙棘黄酮提取液的4.0～6.0％，乙醇用量为干物质的20～30倍。