CN102532345B

CN102532345B - 一类o-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖及其制备和应用

Info

Publication number: CN102532345B
Application number: CN201010605873.7A
Authority: CN
Inventors: 杜昱光; 刘启顺; 乔莹; 白雪芳; 赵静玫; 崔刚
Original assignee: DALIAN GLYCOBIO Co Ltd
Current assignee: DALIAN GLYCOBIO Co Ltd
Priority date: 2010-12-24
Filing date: 2010-12-24
Publication date: 2014-05-07
Anticipated expiration: 2030-12-24
Also published as: CN102532345A

Abstract

本发明涉及一类O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖，其特征在于：其为混合组分，分子量为800-25000Da，混合组分的脱乙酰度为50％-100％；O-不饱和脂肪酸的取代度为30-200％，其组成成分的结构同时如下：其中R₁为H或CH₃CO-，R₂为碳链长度为12-22的不饱和脂肪酸酰基或H，n＝0-30。其具抗氧化、延缓衰老、抑制肿瘤、抗炎、降血压、防止血栓形成、改善糖尿病、降血糖、抗动脉粥样硬化等活性；可作为医药、保健食品、化妆品的重要原料。

Description

一类O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖及其制备和应用

技术领域

本发明涉及O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖，具体的说是O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖及其制备方法和应用。

背景技术

壳寡糖，其结构为β-(1，4)-2-脱氧-2-氨基葡萄寡糖。是一种难得又有着特殊理化性质和优良生物活性的碱性寡糖。壳寡糖所具有的降血糖、降血酯，降胆固醇，增强免疫功能，抑制肿瘤和抗疲劳、延缓衰老，抑菌，抗病毒等作用，已应用于医药、保健食品、化妆品、农业等方面。

不饱和脂肪酸根据其双键数目的多少分为单不饱和脂肪酸以及多不饱和脂肪酸.单不饱和脂肪酸，是指碳链中含有一个双键的脂肪酸.多不饱和脂肪酸指碳链中含有多个双键的脂肪酸，根据第一个双键距离甲基端碳原子的位置，可以分为ω-3系、ω-6系、ω-7系和ω-9系。

单不饱和脂肪酸中的肉豆蔻油酸、棕榈油酸、油酸；ω-3系列的主要包括十八碳三烯酸(俗称α-亚麻酸)(ALA)；二十碳五烯酸(EPA)；二十二碳六烯酸(DHA)。

ω-6系列包括十八碳二烯酸(俗称亚油酸，LA)；十八碳三烯酸(俗称γ一亚麻酸，GLA)；二十碳四烯酸(俗称花生四烯酸，AA)。研究表明以上单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸均有多种生物活性，如抗氧化、延缓衰老、抑制肿瘤、抗炎、降血压、防止血栓形成、改善糖尿病、降血糖和抗动脉粥样硬化等活性。

目前关于不饱和脂肪酸的食品、保健品不少，但也存在一些问题，如活性不够高；另外，不饱和脂肪酸一般都不够稳定，使用和存储麻烦。

本发明以具有多种生物活性的壳寡糖为原料，将不饱和脂肪酸选择性的连接到壳寡糖的羟基上，制备O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖。新化合物具有比两种原料更好、更广的活性；此外，新化合物使用方便，具有很好的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种O-不饱和脂肪酰化壳寡糖及其制备方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一类O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖，其特征在于：混合组分的脱乙酰度为50％-100％；O-不饱和脂肪酸的取代度为30-200％，其组成成分的结构同时如下：

其中R₁为H或CH₃CO-，R₂为碳链长度为12-22的不饱和脂肪酸酰基或H，n＝0-30，重均分子量为800-25000Da。

所述N-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖的制备方法，其特征在于：

1)壳寡糖氨基的保护

将壳寡糖溶于有机溶剂中，浓度1％-40％，有机溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜中的一种或二种以上混合物；

加入壳寡糖糖残基摩尔数1-5倍醛类化合物，在20-60℃下反应0.5-24小时，醛类化合物为乙醛、丙醛、对甲氧基苯甲醛、苯甲醛、对硝基苯甲醛、间甲氧基对硝基苯甲醛中的一种或二种以上混合物；向反应液加入其体积1-8倍的乙醚、丙酮、乙醇、甲醇、或0.01-1.5摩尔/升NaOH的乙醇或甲醇溶液，产生大量黄色沉淀，抽滤，滤饼用无水丙酮、乙醚、乙醇或甲醇洗1-5次，得黄色粉末，为胺基schiff碱保护的壳寡糖；

2)保护后壳寡糖的O-不饱和脂肪酸酰化反应

取1)中制备得到的氨基保护的壳寡糖溶于有机溶剂中，浓度1％-40％，有机溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜中的一种或二种以上混合物；再加入二甲胺基吡啶，加入量为壳寡糖摩尔数的0.5％-10％；

在加入碳链长度为12-22的不饱和脂肪酸的有机溶剂的溶液，加入量为壳寡糖中氨基摩尔数的1-4倍，有机溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜，甲醇、乙醇、二氯甲烷和四氢呋喃中的一种或二种以上混合物；

将上述溶液在40-80℃下反应1-10小时，向反应液加入其体积1-8倍的乙醚、丙酮、乙醇、甲醇、石油醚中的一种或二种以上混合物，产生大量浅黄色沉淀，抽滤，滤饼用无水丙酮、乙醚、乙醇或甲醇洗1-5次，得黄色粉末，真空干燥，得到氨基保护的O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖粉末固体；

3)O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖的保护基脱除

加2)制备得到氨基保护的O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖溶于有机溶剂中，有机溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜中的一种或二种以上混合物；

加入酸，酸为甲酸、乙酸、盐酸、硫酸、硝酸、磷酸，三氟乙酸和三氯乙酸中的一种或二种以上混合物，调整pH值小于5；在20-80℃下反应0.5-24小时，向反应液加入其体积1-8倍的乙醚、丙酮、乙醇、甲醇、石油醚中的一种或二种以上混合物，产生大量浅黄色沉淀，抽滤，滤饼用无水丙酮、乙醚、乙醇或甲醇洗1-5次，得黄色粉末，真空干燥，得到脱除保护基的O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖粉末固体。

所述步骤2)中，于反应体系加入不饱和脂肪酸后再加入催化剂，其加入量为不饱和脂肪酸摩尔数的1-3倍，所述催化剂为N，N′-二环己基碳二亚胺、N，N′-二异丙基碳二亚胺或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。

所述N-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖作为活性成份用于制备降血压药物、延缓衰老保健食品、改善糖尿病保健药物、抑制肿瘤保健药物、抗炎症药物、或抗动脉粥样硬化药物、或抗氧化保健食品。

本发明具有如下优点：

本发明公开了一类O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖，本化合物结构上以壳寡糖为主体，在每个结构单元的羟基上接上不饱和脂肪酸。本化合物集合两种活性分子的活性，在系列活性方面超过壳寡糖和不饱和脂肪酸的活性，既具有壳寡糖本身具有的一系列生物活性，又具有较好的抗氧化活性、降血压活性、延缓衰老活性、抗血栓活性、改善糖尿病活性、抑制肿瘤活性、抗炎症活性、抗动脉粥样硬化活性可作为医药、保健食品、化妆品的重要原料。

本发明提供的O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖的制备方法，不饱和脂肪酸只与壳寡糖的羟基发生反应，与胺基不反应，选择性高，结构明确；此外，本发明提供的过程反应条件温和，对不饱和脂肪酸结构无破坏，操作简单，具有很强的应用前景。

具体实施方式

下面结合实施实例对本发明做进一步说明：

实施例1：O-亚油酸酰化壳寡糖的制备

取1.62g聚合度为2-8的壳寡糖溶于30mL的N，N-二甲基甲酰胺，加入1.63g对甲氧基苯甲醛，在室温下搅拌4小时，向反应液加入其5倍体积的乙醇，产生大量浅黄色沉淀，抽滤，滤饼用无水丙酮洗3次，真空干燥，得浅黄色粉末2.5g，为胺基schiff碱保护壳寡糖。

取2.8g氨基保护的壳寡糖溶于N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺中；再加入0.1g二甲胺基吡啶；在加入3.0g亚油酸N，N-二甲基甲酰胺，将上述溶液在60℃下反应6小时，向反应液加入其体积4倍的乙醇产生大量浅黄色沉淀，抽滤，滤饼用无水丙酮洗3次，得黄色粉末，真空干燥，得到氨基保护的O-亚油酸酰化壳寡糖粉末固体4.06g。

取氨基保护的O-亚油酸酰化壳寡糖3g溶于有50mL二甲亚砜中；加入2mL盐酸，在40℃下反应4小时，向反应液加入其体积5倍的丙酮产生大量浅黄色沉淀，抽滤，滤饼用无水丙酮洗3次，得黄色粉末，真空干燥，得到脱除保护基的O-亚油酸酰化壳寡糖粉末固体2.5g。

红外光谱(KBr)主要吸收峰(IRu，cm^-1)：3580～3390(OH，NH)；3095(HC＝CH)2939；2860(CH+CH₂)；1700(C＝C)；1710(酯的C＝O)；1116，1054，1033(C-O)；891(β，C-H)。

通过用核磁共振法测定亚油酸的取代度为85％。

实施例2：O-亚麻酸酰化壳寡糖的制备

取1.62g聚合度为2-15的壳寡糖溶于30mL的N，N-二甲基甲酰胺，加入1.63g苯甲醛，在室温下搅拌4小时，向反应液加入其5倍体积的乙醇，产生大量浅黄色沉淀，抽滤，滤饼用无水丙酮洗3次，真空干燥，得浅黄色粉末2.5g，为胺基schiff碱保护壳寡糖。

取2.8g氨基保护的壳寡糖溶于N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺中；再加入0.1g二甲胺基吡啶；在加入4.1g亚麻酸N，N-二甲基甲酰胺，将上述溶液在60℃下反应8小时，向反应液加入其体积4倍的乙醇产生大量浅黄色沉淀，抽滤，滤饼用无水丙酮洗3次，得黄色粉末，真空干燥，得到氨基保护的O-亚麻酸酰化壳寡糖粉末固体5.2g。

取氨基保护的O-亚麻酸酰化壳寡糖3g溶于有50mL二甲亚砜中；加入2mL磷酸，在40℃下反应4小时，向反应液加入其体积5倍的丙酮产生大量浅黄色沉淀，抽滤，滤饼用无水丙酮洗3次，得黄色粉末，真空干燥，得到脱除保护基的O-亚麻酸酰化壳寡糖粉末固体2.4g。

红外光谱(KBr)主要吸收峰(IRu，cm^-1)：3580～3390(OH，NH)；3095(HC＝CH)2939；2860(CH+CH₂)；1705(C＝C)；1715(酯的C＝O)；1116，1054，1033(C-O)；891(β，C-H)。

通过用核磁共振法测定亚麻酸的取代度为92％。

实施例3：肉豆蔻油酸、棕榈油酸、油酸、十八碳三烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸、十八碳二烯酸、十八碳三烯酸、二十碳四烯酸等O-酰化壳寡糖的制备

按照实施例1和2的方法，不饱和脂肪酸原料选为肉豆蔻油酸、棕榈油酸、油酸、十八碳三烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸、十八碳二烯酸、十八碳三烯酸、二十碳四烯酸，可制备得到O-肉豆蔻油酸酰化壳寡糖、O-棕榈油酸酰化壳寡糖、O-油酸酰化壳寡糖、O-十八碳三烯酸酰化壳寡糖、O-二十碳五烯酸酰化壳寡糖、O-二十二碳六烯酸酰化壳寡糖、O-十八碳二烯酸酰化壳寡糖、O-十八碳三烯酸酰化壳寡糖、O-二十碳四烯酸酰化壳寡糖。

实施例4：O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖的抗炎活性

抗炎实验：对炎症因子的抑制作用

实验材料：内皮细胞株，O-亚麻酸酰化壳寡糖，TNF-α

细胞培养条件：在完全培养基RPMI1640培养液中添加10％小牛血清、100U/mL青霉素、100μug/mL链霉素；37℃，CO₂体积含量为5％的细胞培养箱培养。

药物处理如下：

收集对数生长期细胞，调整细胞培养密度为1-2×10⁶个/mL分到细胞培养六孔板中，加入(100mg/mL及200mg/mL)的O-亚麻酸酰化壳寡糖处理24小时后，再加入TNF-α(20ng/mL)，处理6小时。随后弃去细胞培养上清，提取细胞RNA，进行逆转录PCR，扩增条件为：94℃，45秒，54℃，45秒，72℃，45秒，扩增28个循环以检测白细胞介素-6(IL-6)基因水平的变化。实验结果表明，相比于未处理组，100mg/mL及200mg/mL的O-亚麻酸酰化壳寡糖使IL-6的生成量降低了18％及27％。实验结果说明O-亚麻酸酰化壳寡糖可以降低炎症因子IL-6的产生，具有抗炎活性。

实施例5：O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖的抗肿瘤活性

实验材料：肝癌细胞株，O-花生四烯酸酰化壳寡糖

细胞培养条件：在完全培养基DMEM培养液中添加10％小牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素；37℃，CO₂体积含量为5％的细胞培养箱培养。

药物处理：

收集对数生长期细胞，调整细胞密度为1-2×10⁶个/mL，分别加入200mg/mL及400mg/mL的O-花生四烯酸酰化壳寡糖处理24小时后，采用碘化丙锭(PI)染色法检测细胞凋亡情况。具体操作为：收集各组处理后的细胞，弃去培养液；用PBS洗涤2次；随后离心弃去上清，加入冰预冷的70％的乙醇固定2小时。随后再次离心弃去固定液，PBS洗涤2遍再加入PI染液染色，4℃避光染色30分钟，通过流式细胞仪检测细胞凋亡。实验结果表明，相比于未处理组，100mg/mL及200mg/mL的O-花生四烯酸酰化壳寡糖的肝癌细胞凋亡增加64％及81％。实验结果说明，O-花生四烯酸酰化壳寡糖可促使肝癌细胞凋亡增加，从而发挥抗癌作用效果。

实施例6：O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖的清除自由基活性

抗氧化实验：DPPH自由基清除实验。

实验材料：二苯代苦味酰自由基(DPPH)，O-二十碳五烯酸酰化壳寡糖。

试剂配制：DPPH应用液，称取DPPH3.5mg，溶于甲醇10ml，再加水定溶至100mL，充分混匀后避光保存。

取4支试管，分别标记为空白对照组，200mg/mL和400mg/mL O-二十碳五烯酸酰化壳寡糖实验组及维生素C阳性对照组。分别加入0.1mL甲醇，200ng/mLO-二十碳五烯酸酰化壳寡糖的甲醇溶液及400ng/ml O-二十碳五烯酸酰化壳寡糖的甲醇溶液及100μg/ml维生素C甲醇溶液。随后，分别加入200μL的DPPH溶液，摇匀，在黑暗中放置30分钟，以甲醇组为空白对照组在515nm分别测定各组吸光度。实验结果表明，200mg/mL的O-二十碳五烯酸酰化壳寡糖清除自由基为65％，而400mg/mL的O-二十碳五烯酸酰化壳寡糖对自由基的清除能力与100μg/mL维生素C效果相当，清除率为80％。实验结果说明，400mg/mL的O-二十碳五烯酸酰化壳寡糖具有良好的自由基清除效果。

实施例7：O-不饱和脂肪酸的改善糖尿病活性

实验材料：SD大鼠诱导糖尿病模型；O-二十碳五烯酸酰化壳寡糖。

雄性SD大鼠随机分为正常对照组，模型诱导组，300mg/kg O-二十碳五烯酸酰化壳寡糖实验组，500mg/kg O-二十碳五烯酸酰化壳寡糖实验组灌胃喂养4周，每组6只，注射链脲霉素(streptozotocin，STZ)诱导糖尿病并继续饲喂高糖高脂饲料，自由饮水。8周后，在大鼠尾部剪尾取血样，室温放置不超过30分钟，2000转/分钟离心10分钟，分离血清，随后立即测定血糖。实验结果表明，与模型诱导组相比，300mg/kg O-二十碳五烯酸酰化壳寡糖实验组可使大鼠血糖降低19％，500mg/kg O-二十碳五烯酸酰化壳寡糖实验组可使大鼠血糖降低26％。结果说明，O-二十碳五烯酸酰化壳寡糖可使糖尿病模型大鼠血糖降低，具有潜在的治疗糖尿病的潜力。

实施例8：O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖的抗衰老活性

实验材料：成纤维细胞，O-二十碳五烯酸酰化壳寡糖

实验方法：成纤维细胞在完全培养基DMEM培养液中添加10％小牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素；37℃，CO₂体积含量为5％的细胞培养箱培养。

主要操作如下：收集对数生长期细胞，调整细胞密度为1-2×10⁴个/孔接种于6孔板，2mL培养液，分别加入空白组生理盐水，100μg/ml的O-二十碳五烯酸酰化壳寡糖生理盐水溶液及200μg/mL的O-二十碳五烯酸酰化壳寡糖生理盐水溶液处理24小时后，紫外光UVB为光源290nm，照射剂量为10mJ/cm²，共计照射5次。随后采用SAβ-gal染色试剂盒检测。室温下用1mL固定液固定细胞15min，再以染色液37℃孵育过夜。阳性细胞被染成蓝绿色，显微镜下计数SAβ-gal染色阳性的细胞，每皿计数400个，计算阳性细胞的百分比。实验结果表明，空白照射组阳性细胞数为82％，100μg/mL的O-二十碳五烯酸酰化壳寡糖处理组使阳性细胞数降低到56％，200μg/mL的O-二十碳五烯酸酰化壳寡糖处理组使阳性细胞数降低到43％。实验结果说明，不同浓度的O-二十碳五烯酸酰化壳寡糖可使紫外线诱导的衰老细胞数降低，从而具有抗衰老潜能。

实施例9：O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖的抗动脉粥样硬化活性

实验材料：脐静脉内皮细胞，TNF-α，O-二十二碳六烯酸酰化壳寡糖。

主要操作如下：用0.125％胰蛋白酶消化单层培养细胞，用DMEM-F12培养液(10％FBS)稀释成细胞悬液后，按1-2×10⁶个/孔接种到细胞培养瓶中。将培养瓶放入CO₂孵箱，在37℃、5％CO₂及饱和湿度条件下培养24h。对照组及TNF-α模型组加入3ml新鲜的空白培养基；各O-二十二碳六烯酸酰化壳寡糖预保护组分别加入含有不同浓度O-二十二碳六烯酸酰化壳寡糖的培养液，继续培养24h。取出培养瓶，吸弃瓶内上清液，以PBS洗涤2次，对照组加入3mL空白培养液；TNF-α模型组及各O-二十二碳六烯酸酰化壳寡糖预保护组分别加入3mL含TNF-α(20ng/mL)的培养液。加药完毕将细胞置于培养箱中继续培养6h。取出培养瓶，吸弃瓶内上清液，以PBS洗涤2次，进行RNA抽提并进行VCAM-1及ICAM-1的PCR检测。实验结果表明，O-二十二碳六烯酸酰化壳寡糖在100μg/mL及200μg/mL的浓度范围，可显著抑制TNF-α对人脐静脉内皮细胞内VCAM-1及ICAM-1的转录，抑制率为40％和65％。其中O-二十二碳六烯酸酰化壳寡糖在200μg/mL时的抑制作用最为明显。实验结果表明，O-二十二碳六烯酸酰化壳寡糖可抑制脐静脉内皮细胞中粘附分子VCAM-1及ICAM-1的表达，具有潜在抗动脉粥样硬化潜力。

实施例10：O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖的降血压活性

ACE可把HHL降解成马尿酸和组氨酰亮氨酸，通过高效液相色谱在228nm的波长下检测马脲酸生成量来计算样品对ACE活性的影响。

实验方法：流动相的配制：300mL甲醇加入0.5mL冰醋酸和1mL的三氟乙酸(TFA)，用蒸馏水定容至1000mL，后用NaOH调节pH至3.3。

ACE抑制活性测定：在5μL的50mg/mL的O-油酸酰化壳寡糖样品，加入15μL的ACE，5min后再加入25μL底物，30min后加5μL的TFA终止反应，上述操作过程全部在37℃恒温条件下进行。高效液相检测ACE酶抑制活性为81％。

实施例11：O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖的降血压活性

选择自发性高血压大鼠为实验模型，大鼠饲养一周后，将其分组，用100-800mg/kg剂量的O-十八碳三烯酸酰化壳寡糖口服，结果表明，4周后对照组大鼠的血压持续升高，而治疗组自发性高血压大鼠的血压明显下降，说明珠蛋白酶解液具有很好的降血压效果。

Claims

1.一类O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖，其特征在于：其为混合组分，脱乙酰度为50%-100%；O-不饱和脂肪酸的取代度为30-200%，其组成成分的结构通式如下：

其中R₁为H或CH₃CO-，R₂为碳链长度为12-22的不饱和脂肪酸酰基或H，n=0-30，重均分子量为800-25000Da。

2.一种权利要求1所述O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖的制备方法，其特征在于：

1）壳寡糖氨基的保护

将壳寡糖溶于有机溶剂中，浓度1%-40%，有机溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜中的一种或二种以上混合物；

2)保护后壳寡糖的O-不饱和脂肪酸酰化反应

取1）中制备得到的氨基保护的壳寡糖溶于有机溶剂中，浓度1%-40%，有机溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜中的一种或二种以上混合物；再加入二甲胺基吡啶，加入量为壳寡糖摩尔数的0.5%-10%；

在加入碳链长度为12-22的不饱和脂肪酸的有机溶剂的溶液，加入量为壳寡糖中氨基摩尔数的1-4倍，有机溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜，甲醇、乙醇、二氯甲烷和四氢呋喃中的一种或二种以上混合物；

3）O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖的保护基脱除

加2）制备得到氨基保护的O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖溶于有机溶剂中，有机溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜中的一种或二种以上混合物；

3.按照权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

所述步骤2）中，于反应体系加入不饱和脂肪酸后再加入催化剂，其加入量为不饱和脂肪酸摩尔数的1-3倍，所述催化剂为N,N'-二环己基碳二亚胺、N,N'-二异丙基碳二亚胺或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。

4.一种权利要求1所述O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖的应用，其特征在于：

所述O-不饱和脂肪酸酰化壳寡糖作为活性成份用于制备降血压药物、延缓衰老保健食品、改善糖尿病保健药物、抑制肿瘤保健药物、抗炎症药物、或抗动脉粥样硬化药物、或抗氧化保健食品。