CN102512511B

CN102512511B - 治疗肝损伤的参味护肝片及其制备方法

Info

Publication number: CN102512511B
Application number: CN 201210004007
Authority: CN
Inventors: 韩华; 董培良; 姜海; 吴伦; 苏阳; 张晓娟; 张燕丽
Original assignee: 韩华; 董培良; 姜海
Priority date: 2012-01-09
Filing date: 2012-01-09
Publication date: 2013-05-29
Anticipated expiration: 2032-01-09
Also published as: CN102512511A

Abstract

本发明涉及一种治疗肝损伤的药物组合物及制备方法和制药用途。本发明的药物组合物在临床上用于治疗病毒性肝炎、化学性肝损伤和肝硬化等肝损伤性疾病。该药物组合物是由人参、白芍、树舌、五味子、当归、甘草等中药材，经过合理的提取、精制后，与药用辅料组成的各类口服制剂。本发明的配方合理、安全有效、工艺先进、使用方便，适用于长期服用。经药理学试验证明，该制剂对CCL₄致大鼠慢性肝损伤和D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损具有保护作用，并有降酶的作用；能够促进大鼠胆汁的分泌；明显提高小鼠细胞免疫及体液免疫功能，不仅可以作为肝损伤患者较好的辅助治疗，也可以作为正常人群的保健用品而被长期服用。

Description

治疗肝损伤的参味护肝片及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种药物组合物，特别是一种治疗肝损伤的药物组合物及其制备方法。

背景技术

目前世界各地各种类型的病毒性肝炎、化学性肝损伤和肝硬化的发病率较高，尤其在发展中国家发病率更高。我国是病毒性肝炎的高发区，药物、毒物引起的肝损伤在我国很普遍，而且日益增多。尤其是病毒性肝炎，不但严重影响病人的健康，而且构成对其他健康者的威胁。因此，肝病的防治问题已成为全世界医药界共同关注的重要问题。

大多数肝病患者主要是依靠药物治疗，某些西药的毒性物质需要肝脏代谢消除，这无疑是在治疗肝病的同时又伤害肝脏，成为化学性肝损伤的另一诱因。因此，采用中药治疗，可以从预防入手，兼顾保健功能，可以满足广大患者身体健康的保健需要。因此，开发出一种在临床上治疗病毒性肝炎、化学性肝损伤和肝硬化等肝损伤性疾病的药物，对于减少肝病的危害具有现实意义。

发明内容

本发明人从中医治疗肝病的基本原则出发，通过大量的试验研究，由人参、白芍、树舌、五味子、当归、甘草等六味中药组方，经过合理的加工、提取，制成用于治疗病毒性肝炎、化学性肝损伤、肝硬化的药物组合物。该药物组合物的药理作用较好、无毒副作用。同时本发明还提供了临床适用的剂型的制备方法。

本发明的治疗方案是基于中医药理论，针对肝病发病机理的认识而确定的治疗原则，同时参考了现代药理学研究成果，筛选出具有滋补肝肾、养血柔肝、益气养阴、活血止痛等功能的天然中药，并按照中医治则及组方原则，而开发的新型药物组合物。在药理研究中治疗效果明显。

本发明是以以下的方法实现的：

本发明治疗肝损伤的药物组合物是由下述原料制成的：

人参80-150g，白芍120-240g，树舌160-300g，五味子80-150g，当归80-150g，甘草60-90g。

本发明治疗肝损伤的药物组合物，各原料的最佳配比为：

人参120g，白芍180g，树舌240g，五味子120g，当归120g，甘草80g。

本发明临床应用的药物剂型的制备方法，包括以下步骤：

⑴ 将人参加水煎煮两次，每次1～2小时，煎液滤过，滤液合并，通过D101大孔吸附树脂，水洗脱至无色，再用60%乙醇洗脱，收集60%乙醇洗脱液，减压回收乙醇后得到人参总皂苷提取物。

⑵ 将树舌加水煎煮3次，每次2～3小时，煎液滤过，滤液合并，减压浓缩至相对密度为1.05～1.08之间，加入乙醇使含醇量达到75%，静置12小时，离心除去乙醇溶液，滤渣加入75%的乙醇反复洗涤，即获得树舌多糖提取物。

⑶ 将白芍、五味子两味药材混合，粉碎，加70%乙醇回流提取3次，每次1～2小时，合并提取液，静置48小时，吸取上清液，减压回收乙醇，即得白芍五味子提取物。

⑷ 将当归、甘草两味药材加水煎煮两次，每次1～2小时，煎液滤过，滤液合并，减压浓缩，即得当归甘草提取物。

⑸ 将制备的人参皂苷提取物、树舌多糖提取物、白芍五味子提取物和当归甘草提取物混合，按照药剂学的制剂方法，加入辅料适量，制成不同的剂型。

本发明其特征在于：临床上用于肝损伤的治疗和预防。

利用本发明生产的药物的药理药效：参味护肝片对肝损伤的治疗作用

一、材料与方法

1.实验动物

Wistar大鼠，体重120-150g，雌雄各半。购于黑龙江中医药大学动物实验中心。

清洁级健康昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄各半。购于黑龙江中医药大学动物实验中心。

2.药品与试剂

参味护肝片：黑龙江中医药大学中医药研究院自制

肝加欣：吉林通化方大药业有限公司

丙氨酸氨基转移酶试剂盒：上海长征公司

草氨酸氨基转移酶试剂盒：上海长征公司

四氯化碳：上海试剂三厂

D-半乳糖：sigma公司

环磷酰胺：江苏恒瑞医药股份有限公司

Hank′s洗液：长沙欧迈生物科技有限公司

1640培养液：长沙欧迈生物科技有限公司

ConA：sigma

3.仪器设备

全自动生化分析仪，低速冷冻离心机，光学显微镜，油镜，自动血球分析仪，酶标仪，超净工作台，恒温培养箱

4.统计方法

所有数据以

表示，组间比较用t检验。

二、参味护肝片对CCL₄致大鼠慢性肝损伤的影响

1.分组及给药

将60只大鼠随机分为六组：正常组、模型组、肝加欣组（390mg/kg）、参味护肝片高剂量组（34mg/kg以下简称高剂量组）、参味护肝片中剂量组（17mg/kg以下简称中剂量组）和参味护肝片低剂量组（8.5mg/kg以下简称低剂量组）。各给药组每日灌胃给药一次，正常组和模型组给予同体积蒸馏水，连续给药三个月。同时，除正常组外，其余各组每周二次30%CCL₄（2ml/kg）橄榄油溶液灌胃，连续三个月。

2.观察指标

三个月后禁食24小时，动物摘眼球取血，取离心血清测定谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST），结果见表1。

3.实验结果

表1参味护肝片对CCL₄致大鼠慢性肝损伤ALT、AST的影响

组别	剂量（mg/kg）	例数（只）	ALT（U/L）	AST（U/L）
					空白组		10	54.8±12.72^**	152.4±37.91^**
模型组		10	158.1±22.44	304.3±72.97
					高剂量组	34	10	86.3±8.98^**	229.4±43.41^*
中剂量组	17	10	116.2±5.86^*	256.5±46.32
					低剂量组	8.5	10	127.8±8.95^*	261.9±40.61
肝加欣组	390	10	90.5±9.63^**	225.4±63.62^*

注：与正常组比 *P<0.05，**P<0.01

由表1结果可见，对血清ALT的影响，模型组与空白组比较差异极显著（P<0.01），提示造模成功；与模型组比较高剂量组和肝加欣组能显著降低ALT的含量（P<0.01）；与模型组比较中剂量组和低剂量组差异也有意义（P<0.05）。对血清AST的影响，模型组与空白组比较差异极显著（P<0.01），提示造模成功；与模型组比较高剂量组和肝加欣组能显著降低AST的含量（P<0.05）；与模型组比较中剂量组和低剂量组对血清AST也处于较低水平，但差异无统计学意义。

三、参味护肝片对D-氨基半乳糖所致小鼠急性肝损伤的影响

1.分组及给药

将60只小鼠随机分为六组：正常组、模型组、肝加欣组（545mg/kg）、高剂量组（48mg/kg）、中剂量组（24mg/kg）和低剂量组（12mg/kg）。各给药组每日灌胃给药一次，正常组和模型组给予同体积蒸馏水，连续给药7天。

2.观察指标

第6天晚间11点禁食，不禁水，于第7天早6点灌胃给药，2小时后造模。造模方法：除空白组外，其余各组腹腔注射0.1%（0.3ml/10g）D-氨基半乳糖，禁食10小时之后摘取眼球取血，取离心血清测定谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST），结果见表2。

3.实验结果

表2参味护肝片对D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤的影响

组别	剂量（mg/kg）	例数（只）	ALT（U/L）	AST（U/L）
					空白组		10	29.80±11.71^**	100.40±18.91^**
模型组		10	61.17±12.41	198.39±12.97
					高剂量组	48	10	27.28±6.98^**	109.44±13.41^**
中剂量组	24	10	34.26±5.98^**	132.54±16.32^**
					低剂量组	12	10	38.85±8.95^**	131.49±10.61^**
肝加欣组	545	10	32.44±4.63^**	105.43±13.62^**

注：与正常组比**P<0.01

由表2结果可见，对血清ALT的影响，模型组与空白组比较差异极显著（P<0.01），提示造模成功；与模型组比较各给药组均能显著降低ALT的含量（P<0.01），但给药组之间没有统计学意义。对血清AST的影响，模型组与空白组比较差异极显著（P<0.01），提示造模成功；与模型组比较各给药组均能显著降低AST的含量（P<0.01），但给药组之间没有统计学意义。

四、参味护肝片对小鼠免疫功能的影响

（一）对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

1.分组及给药

2.观察指标

给药第3天每只小鼠腹腔注射5%可溶性淀粉1ml，第7天给药后每只小鼠腹腔注射1%鸡红细胞悬液0.4ml，1~1.5h后断锥处死小鼠。固定在桌面上，腹部消毒后腹腔注射生理盐水1ml，按摩腹腔，沿腹部中央将皮肤剪一小口，上下撕开，暴露腹膜，轻提腹膜剪一小口，吸取约0.2ml腹腔液滴于载玻片上水平涂片，将玻片放在湿盒内，置37℃温箱孵育30min，取出，用生理盐水淋洗，自然晾干后，用Giemsa-wright染液染5min，再用生理盐水淋洗，晾干后，油镜下观察，计数200个巨噬细胞中吞噬的鸡红细胞总数。结果见表3。

吞噬指数=（被吞噬的鸡红细胞总数/200个吞噬细胞）/2

吞噬百分率=（吞噬鸡红细胞的巨噬细胞总数/200个吞噬细胞）*100%

3.实验结果

表3参味护肝片对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

组别	剂量（mg/kg）	例数（只）	吞噬百分率（%）	吞噬指数
					空白组		10	46.43±5.67^**	63.40±4.61^**
模型组		10	22.74±7.24	37.39±5.97
					高剂量组	48	10	45.38±6.48^**	61.44±4.41^**
中剂量组	24	10	42.26±5.58^**	60.54±5.32^**
					低剂量组	12	10	38.85±5.55^*	49.49±4.61^*
肝加欣组	545	10	45.84±4.83^**	61.43±4.62^**

注：与正常组比*P<0.05，**P<0.01

由表3结果可见，模型组与空白组比较，腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数差异极显著（P<0.01），提示造模成功；与模型组比较，高剂量、中剂量和肝加欣组的吞噬细胞百分率和吞噬指数均有明显提高，差异具有极显著性（P<0.01），低剂量组的吞噬细胞百分率和吞噬指数差异有显著性（P<0.05）。

（二）对小鼠体液免疫功能的影响

1.分组及给药

将60只小鼠随机分为六组：正常组、模型组、肝加欣组（545mg/kg）、高剂量组（48mg/kg）、中剂量组（24mg/kg）和低剂量组（12mg/kg）。各给药组每日灌胃给药一次，正常组和模型组给予同体积蒸馏水，连续给药14天。

2.观察指标

给药第8天，各组小鼠皮下注射2%绵羊红细胞悬液0.2ml，于给药的第10天开始，除空白组外，各组灌胃后均皮下注射环磷酰胺60mg/kg，复制免疫功能低下模型，空白组皮下注射生理盐水，连续注射4天。末次给药1h后处死小鼠，用75%酒精浸泡30min，无菌条件下取脾，研磨过400目筛，用Hank′s液洗3次，每次1000r·min离心10min，取细胞加入含小牛血清的1640培养液，调整细胞浓度为2×10⁶个/ml，接种于96孔板并分组，每空加入ConA（10g/ml）100μl，使浓度为5μg/ml，恒温培养箱培养48h，MTT法测OD值，以加ConA孔的OD值减去不加ConA孔的OD值代表淋巴细胞的增值能力，结果见表4。

3.实验结果

表4参味护肝片对小鼠体液免疫功能的影响

组别	剂量（mg/kg）	例数（只）	吞噬指数
				空白组		10	0.022±0.002^**
模型组		10	0.012±0.004
				高剂量组	48	10	0.020±0.002^**
中剂量组	24	10	0.019±0.004^*
				低剂量组	12	10	0.017±0.004
肝加欣组	545	10	0.021±0.003^**

注：与正常组比*P<0.05，**P<0.01

由表4结果可见，模型组与空白组比较（P<0.01），说明应用环磷酰胺后，脾淋巴细胞增值能力显著下降，造模成功；高剂量和肝加欣组与模型组比较（P<0.01），说明其对脾淋巴细胞的增值有极显著的影响；中剂量组能显著影响脾淋巴细胞的增值（P<0.05）；低剂量组虽能升高脾淋巴细胞的OD值，但无统计学意义。

五、参味护肝片对大鼠胆汁排出量的影响

1.分组及给药

将40只大鼠随机分为五组：正常组、肝加欣组（390mg/kg）、高剂量组（34mg/kg）、中剂量组（17mg/kg）和低剂量组（8.5mg/kg）。

2.手术及观察指标

手术前禁食12~16h，用20%乌拉坦（0.8g/kg）麻醉，背位固定，开腹后找到胃幽门部，以幽门部为准翻转十二指肠，即可见到白色的十二指肠乳头部，从乳头部追踪到胆小管，暴露胆总管，结扎下端，向胆总管近端插入外径1mm左右的塑料管，形成漏管引流胆汁。待胆汁流量稳定20min后，各给药组于十二指肠注射药物，正常组给予同体积生理盐水，测定给药后30，60， 90，120，180min胆汁流量，结果见表5。

3.实验结果

表5参味护肝片对大鼠胆汁排出量的影响

注：与正常组比 *P<0.05，**P<0.01

由表5结果可见，与空白组比较，各给药组均有增加胆汁排出量的作用，90min时各给药组差异有显著意义（P<0.01，P<0.05）；120min时高剂量和中剂量组差异有显著意义（P<0.01）；180min时只有高剂量组胆汁排出量增加显著。在作用时间上，高剂量组在给药60min时便出现胆汁排出量增加，至120min达高峰，之后缓慢减少，180min时仍有较强的利胆作用，说明高剂量组有较持久的利胆作用。

具体的实施方式

实施例1

称取下述重量份数的中药原料：人参120g，白芍180g，树舌240g，五味子120g，当归120g，甘草80g。

制法：将人参加水煎煮两次，每次1～2小时，煎液滤过，滤液合并，通过D101大孔吸附树脂，水洗脱至无色，再用60%乙醇洗脱，收集60%乙醇洗脱液，减压回收乙醇后得到人参总皂苷提取物。将树舌加水煎煮3次，每次2～3小时，煎液滤过，滤液合并，减压浓缩至相对密度为1.05～1.08之间，加入乙醇使含醇量达到75%，静置12小时，离心除去乙醇溶液，滤渣加入75%的乙醇反复洗涤，即获得树舌多糖提取物。将白芍、五味子两味药材混合，粉碎，加70%乙醇回流提取3次，每次1～2小时，合并提取液，静置48小时，吸取上清液，减压回收乙醇，即得白芍五味子提取物。将当归、甘草两味药材加水煎煮两次，每次1～2小时，煎液滤过，滤液合并，减压浓缩，即得当归甘草提取物。

将制备的人参皂苷提取物、树舌多糖提取物、白芍五味子提取物和当归甘草提取物混合，并浓缩至相对密度为1.30左右的清膏（60℃），80℃减压干燥，粉碎，加入辅料适量，制成片剂。

实施例2

称取下述重量份数的中药原料：人参150g，白芍240g，树舌300g，五味子150g，当归150g，甘草90g。

将制备的人参皂苷提取物、树舌多糖提取物、白芍五味子提取物和当归甘草提取物混合，并浓缩至相对密度为1.20左右的清膏（60℃），加入辅料适量，制成颗粒剂。

实施例3

称取下述重量份数的中药原料：人参80g，白芍120g，树舌160g，五味子80g，当归80g，甘草60g。

制法：将人参加水煎煮两次，每次1～2小时，煎液滤过，滤液合并，通过D101大孔吸附树脂，水洗脱至无色，再用60%乙醇洗脱，收集60%乙醇洗脱液，减压回收乙醇后得到人参总皂苷提取物。将树舌加水煎煮3次，每次2～3小时，煎液滤过，滤液合并，减压浓缩至相对密度为1.05～1.08之间，加入乙醇使含醇量达到75%，静置12小时，离心除去乙醇溶液，滤渣加入75%的乙醇反复洗涤，即获得树舌多糖提取物。将白芍、五味子两味药材混合，粉碎，加70%乙醇回流提取三次，每次1～2小时，合并提取液，静置48小时，吸取上清液，减压回收乙醇，即得白芍五味子提取物。将当归、甘草两味药材加水煎煮两次，每次1～2小时，煎液滤过，滤液合并，减压浓缩，即得当归甘草提取物。

将制备的人参皂苷提取物、树舌多糖提取物、白芍五味子提取物和当归甘草提取物混合，并浓缩至相对密度为1.30左右的清膏（60℃），80℃减压干燥，粉碎，加入辅料适量，制成胶囊剂。

实施例4

制法：将人参加水煎煮两次，每次1～2小时，煎液滤过，滤液合并，通过D101大孔吸附树脂，水洗脱至无色，再用60%乙醇洗脱，收集60%乙醇洗脱液，减压回收乙醇后得到人参总皂苷提取物。将树舌加水煎煮3次，每次2～3小时，煎液滤过，滤液合并，减压浓缩至相对密度为1.05～1.08之间，加入乙醇使含醇量达到75%，静置12小时，离心除去乙醇溶液，滤渣加入75%的乙醇反复洗涤，即获得树舌多糖提取物。将白芍、五味子两味药材混合，粉碎，加70%乙醇回流提取三次，每次1～2小时，合并提取液，静置48小时，吸取上清液，减压回收乙醇，即得白芍五味子提取物。将当归、甘草两味药材加水煎煮两次，每次1～2小时，煎液滤过，滤液合并，减压浓缩至相对密度为1.05～1.08之间，加入乙醇使含醇量达到70%，静置12小时，滤过。滤液回收乙醇并浓缩至清膏状，即得当归甘草提取物。

将制备的人参皂苷提取物、树舌多糖提取物、白芍五味子提取物和当归甘草提取物混合，加入辅料适量，制成口服液。

Claims

1.一种治疗肝损伤的药物组合物，其特征在于，药物组合物是由下述原料制成的药剂：人参120g，白芍180g，树舌240g，五味子120g，当归120g，甘草80g。

2.根据权利要求1所述的治疗肝损伤的药物组合物的制备方法，其特征在于，它具体由以下步骤组成：

（1）将人参加水煎煮两次，每次1～2小时，煎液滤过，滤液合并，通过D101大孔吸附树脂，水洗脱至无色，再用60%乙醇洗脱，收集60%乙醇洗脱液，减压回收乙醇后得到人参总皂苷提取物；

（2）将树舌加水煎煮3次，每次2～3小时，煎液滤过，滤液合并，减压浓缩至相对密度为1.05～1.08之间，加入乙醇使含醇量达到75%，静置12小时，离心除去乙醇溶液，滤渣加入75%的乙醇反复洗涤，即获得树舌多糖提取物；

（3）将白芍、五味子两味药材混合，粉碎，加70%乙醇回流提取3次，每次1～2小时，合并提取液，静置48小时，吸取上清液，减压回收乙醇，即得白芍五味子提取物；

（4）将当归、甘草两味药材加水煎煮两次，每次1～2小时，煎液滤过，滤液合并，减压浓缩，即得当归甘草提取物；

（5）将制备的人参皂苷提取物、树舌多糖提取物、白芍五味子提取物和当归甘草提取物混合，按照药剂学的制剂方法，加入辅料适量，制成不同的剂型。

3.根据权利要求1所述的药物组合物在制备治疗肝损伤的药物中的用途，其特征在于，所述药物在临床上用于治疗病毒性肝炎、化学性肝损伤和肝硬化。