CN102512359A - 一种具有抗疱疹病毒作用的芒果苷乳膏 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种有效治疗疱疹病毒(Herpes simplex virus，HSV)1型、2型感染疾病的外用乳膏制剂及其制造方法和用途。该乳膏是以高纯度芒果苷(纯度≥90％)为原料，采用微粉化技术处理芒果苷原料，与适宜辅料制备而成，实验证明，芒果苷原料经过微粉化处理后，抗疱疹病毒的效果好，起效快，痊愈时间明显缩短。芒果苷乳膏的制造方法简单、方便，易于推广到工业规模生产。经抗疱疹病毒药效评价实验及临床预试验证明，芒果苷乳膏在治疗HSV-1、HSV-2感染疗效好，安全性好，无毒副作用。

Description

一种具有抗疱疹病毒作用的芒果苷乳膏

技术领域

本发明涉及一种具有抗1型、2型疱疹病毒作用的芒果苷乳膏制剂。

背景技术

性传播疾病是世界上流行很广、危害十分严重的一类疾病，在我国性病患者人数每年以15％的速度增加。2002年，我国31个省级行政区共累积报告7种性病(HIV/AIDS除外)70多万例，形势十分严峻。性病病人及其病原携带者是性传播疾病的主要传染源，人群对性传播的疾病普遍易感，几乎无年龄、性别的差异，而且人群对性传播疾病既无先天性免疫力，也无稳固的后天获得免疫力，可以反复感染，久治不愈。

单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus，HSV)是一类严重危害人类健康、引起皮肤病和性病的常见病原体，包括HSV-1和HSV-2两型。HSV-1最常见的感染部位是口腔和唇，HSV-2主要通过性传播。HSV经呼吸道(主要鼻咽部)、口腔、眼、生殖器粘膜以及破损皮肤进入体内，造成龈口炎、脑炎、角膜结膜炎、生殖器疱疹等疾病，尤其孕妇感染HSV后，易发生流产，造成胎儿先天畸形和智力低下，约40％～60％的新生儿在通过产道被HSV-2感染后，出现高热、呼吸困难和中枢神经系统病变，其中60％～70％受染新生儿可因此而死亡，幸存者中后遗症可达95％。在人群中约90％以上的人曾感染过HSV，其中很大一部分导致潜伏感染，病毒在体内可维持数年以致终生。临床上使用疱疹净、阿糖腺苷、无环鸟苷等抗毒药物治疗HSV感染时，常出现耐药现象，均难以清除病毒潜伏。临床迫切需要开发新的治疗HSV感染的药物。

芒果苷(Mangiferin)是一种葡萄糖C-糖苷，天然多酚类化合物，又名芒果素、知母宁，分子式C₁₉H₁₈O₁₁，分子量422。芒果苷存在于漆树科植物芒果(Mangifera indica L.)、百合科植物知母(Anemarrhena asphodeloides Bge.)、鸢尾科植物射干(Belamcanda chinensis(L.)DC.)等植物中。芒果苷具有抗炎、抗菌、抗病毒等作用。课题组以阿昔洛韦(ACV)为阳性对照，采用病毒致细胞病变抑制试验，观察芒果苷抗单纯疱疹病毒HSV标准毒株1型(Sm44株)及2型(HSV-2333株)的药效，结果发现芒果苷浓度在65μg/ml以上能抑制细胞抑制病变，可见芒果苷体外能抑制HSV-1、HSV-2病毒，提示芒果苷在HSV-1、HSV-2感染的疾病治疗方面有很大的发展前景。另外根据文献及相关报道，芒果苷的生物药剂学性质如下：(1)在pH 1～7.4的溶解度约为＜1mg·mL-1，而经换算人的口服有效剂量为630mg，溶解单剂量的芒果苷需要的液体体积＞250mL。(2)油水分配系数很低，在酸性环境下P值为1～3，中性及碱性环境下P＜1。(3)在小鼠肠道的生物利用度低，血药浓度非常低(实测值＜5μg·mL-1)。因此简单地通过口服芒果苷，在动物体内芒果苷生物利用度低，在治疗过程中，治疗效果不稳定，个体差异太大，而应用外用制剂可以克服这一缺点，芒果苷可以通过局部给药，提高其疗效。因此发明一种能够提高芒果苷利用率、稳定其疗效的制剂，尤其是开发出抗HSV的外用的药物，这对于治疗疾病，提高人民群众健康，扩大芒果苷的临床应用，将会有极为现实的意义。

本发明的目的是研制一种含芒果苷成分的具有抗疱疹病毒(1型、2型)作用的外用乳膏。该乳膏的治疗效果优于常规工艺制备的乳膏，在临床预试验初步验证了产品的疗效。

经检索，在现有与芒果苷相关的期刊文献中，未见有关在芒果苷乳膏及其用途的报道；在现已公开的专利文献中，未检索到与芒果苷乳膏及其制造工艺和用途相关的专利。

发明内容

本发明要解决的技术问题：是研制一种新的外用制剂，即芒果苷乳膏，其特征在于外观为淡黄至黄色膏状物，重量组成成分如下：

芒果苷            0.1～20份

基质加至          100份

其基质由以下成分组成

芒果苷在处方中为主药，起抗HSV作用。

处方中选用的辅料及投料量是在预实验及处方优化之后总结出来的。处方中，部分硬脂酸在碱性或三乙醇胺中和时，形成新生皂，作为形成O/W乳膏必需的乳化剂，未被中和的硬脂酸形成O/W型的油相。单硬脂酸甘油酯，在化妆品及医药膏剂中用作乳化剂，使膏体细腻，滑润；三乙醇胺是一种有机碱与硬脂酸形成新生皂，再与水相、油相混合能形成外观细腻的O/W型乳膏；甘油作为保湿剂，也可以选用丙二醇代替甘油作为保湿剂；防腐剂，一般选用尼泊金酯类作为防腐剂，还可以选用山梨酸或山梨酸钾作为防腐剂。

芒果苷需经过微粉化处理，其工艺及特征在于：取芒果苷与十二烷基硫酸钠、交联聚维酮混合均匀(质量比为50∶1∶1)，进行球磨粉碎(球磨机使用不锈钢罐内置玛瑙球)，转速400转/分钟，粉碎45分钟，后取出过200目筛备用，得微粉化芒果苷。

芒果苷乳膏的制备工艺特征在于：

A、按重量组成成分取

硬脂酸            5～20份

单硬脂酸甘油酯    1～20份

混合均匀，加热至60～95℃，熔融后，趁热过滤去杂质，制得油相A

B、按重量组成成分取

混合均匀，加热至60～95℃，溶解后，趁热过滤去杂质，制得水相B

C、将水相B加入到油相A中，使其成为均匀的软膏状，搅拌下冷却至30～70℃时

D、向乳膏内加入芒果苷原料0.1～20份，与基质共为100份，继续搅拌均匀，即得芒果苷乳膏，待冷却至30℃以下，分装，即可。

E、整个工艺过程需提供搅拌，可采用搅拌机、高压均质机、乳匀机、胶体磨等设备提供均质过程从而保证芒果苷分散均匀。水相B与油相A混合顺序，既可以是水相B倒入到油相A中，也可以是油相A倒入到水相B中。

具体实施方式

以下的实施例子用于举例说明本发明，并不是对本发明保护范围的任何限制。

实施例1：芒果苷微粉化处理

取芒果苷(纯度＞98％)与十二烷基硫酸钠、交联聚维酮混合均匀(质量比为50∶1∶1)，进行球磨粉碎(球磨机使用不锈钢罐内置玛瑙球)，转速400转/分钟，粉碎45分钟，后取出过200目筛备用，得微粉化芒果苷。

实施例2：芒果苷乳膏(2.5％)的制备

处方：

芒果苷            25g

基质              975g

其基质处方如下：

制法：取硬脂酸100g、单硬脂酸甘油酯25g，加热至80±2℃，制得油相A。再取三乙醇胺0.5g、甘油100g、尼泊金乙酯1g加适量水(所加水的总量应使油相与水相总重量为1000g)中溶解，加热至85±2℃，得水相B，将水相B加入油相A中，边加边搅拌，搅拌速度为150转/分钟，使其成为均匀的膏体，搅拌下冷却至50±5℃，即得空白基质。取芒果苷微粉适量(相当于含纯芒果苷25g)、乳膏基质975g，置胶体磨中与基质混合均匀，冷至室温，分装，即可。

实施例3：芒果苷乳膏(5％)的制备

处方：

芒果苷            50g

基质              950g

其基质处方如下：

制法：取硬脂酸85g、单硬脂酸甘油酯35g，加热至90±2℃，制得油相A。再取三乙醇胺0.5g、甘油80g、尼泊金乙酯1g加入适量水(所加水的总量应使油相与水相总重量为1000g)中溶解，加热至92±2℃，得水相B，将水相B加入油相A中，边加边搅拌，搅拌速度为100转/分钟，使其成为均匀的膏体，搅拌下冷却至40±5℃，即得空白基质。取芒果苷微粉适量(相当于含纯芒果苷50g)、乳膏基质950g，置胶体磨中与基质混合均匀，冷至室温，分装，即可。

实施例4：芒果苷乳膏(5％)稳定性考察

离心实验：取3份乳膏，适量，置10mL刻度离心管中，离心(3000rpm)30min，无油水分离现象。

耐寒实验：取3份乳膏，适量，置铝管中，于-15℃冰箱保存24h，取出放置至室温，无油水分离现象。

耐热实验：取3份乳膏，适量，置10mL刻度离心管中，水浴55℃保存12h，取出放置至室温，无油水分离现象。

均匀度：取乳膏适量，在皮肤上涂抹，无沙粒感，在涂布至玻璃板上，细腻有光泽，无肉眼可见的单独颗粒。

稠度与涂布性能：乳膏稠度适中，易涂布在皮肤上。

稳定性考察：按照现行版《中国药典》2010年版有关药物制剂稳定性的要求进行。取铝管包装的芒果苷乳膏，分别在(40±2)℃、室温(25±2)℃、冷藏(4±1)℃条件下进行稳定性考察3个月，分别于第0，1，2，3月取样测定芒果苷含量、稠度、均匀度。结果提示芒果苷乳膏稳定性很好。

实施例5：芒果苷体外抗HSV试验

(1)材料

芒果苷：精密称取5.2mg以50μL二甲基亚砜(DMSO)助溶，再用DMEM配成1.04mg/mL的溶液，备用。无环鸟苷(ACV，中科院昆明植物所赠，批号0701020)：用DMEM配成1mg/mL的溶液，备用。兔肾细胞：取自一日龄乳兔(广西中医学院动物中心提供)，用DMEM液培养，培养液添加10％小牛血清，0.03％L-谷氨酰胺，10⁵IU/L青霉素，100mg/L链霉素，5％Na₂CO₃调pH至7.0。毒株：抗单纯疱疹病毒HSV标准毒株1型(Sm44株)及2型(333株)，由北京中国医学科学院医药生物技术研究所提供。

(2)实验方法

兔肾细胞制备：取一日龄乳兔，常规消毒皮肤，在无菌操作下取出双肾，去包膜、去髓质，保留皮质，将其剪碎，用0.25％胰蛋白酶消化4℃过夜，次日用HanK’s将细胞分散成单个细胞悬液，每孔按1×10⁴/0.1mL分种于96孔板，置37℃，5％CO₂培养。

芒果苷细胞毒性测定：将已长成单层兔肾细胞弃掉培养上清，换用含药培养液，每个样品设四个样品浓度(1040、260、65、16μg/mL)，每个浓度设四孔，并设不加样品的细胞对照和阳性药物ACV对照，以MTT法检测细胞存活率。

芒果苷对HSV抑制作用：将已长成单层兔肾细胞弃掉培养上清，换用含药培养液，每个样品设四个样品浓度(1040、260、65、16μg/mL)，每个浓度设四孔同时将病毒100TCID₅₀感染细胞，吸附2h后，再加入不同浓度的样品(1040、260、65、16μg/mL)，置35℃，5％C0₂培养。实验均设阳性样品对照、病毒对照、正常细胞对照。

(3)结果

芒果苷对细胞的毒性作用：样品在1040μg/mL时，对细胞表现为轻微的毒性，约10％-20％细胞出现皱缩、颗粒增多等毒性特征，随着浓度的递减，毒性特征消失。

芒果苷对HSV抑制作用：结果表明，芒果苷浓度在16μg/mL下对细胞无保护作用，镜下可见细胞变圆呈泡状、脱落、破裂等；芒果苷浓度在65μg/mL以上对HSV有抑制作用。阳性药ACV在1.56μg/mL下能完全抑制单纯疱疹病毒I型和II型。

(4)结论

芒果苷对体外细胞毒性小，体外有抗单纯疱疹病毒I型和II型作用。

实施例6：芒果苷乳膏(5％)动物体内抗HSV-1试验(微粉化处理芒果苷对制剂疗效的影响)

(1)材料

豚鼠：体重(200±20)g，雄性，由广西中医学院动物中心提供。阿昔洛韦乳膏(AVC，湖北科益制药厂)，芒果苷乳膏A(5％，微粉化处理，自制)，芒果苷乳膏B(5％，未微粉化处理，自制)。细胞与病毒：Hep-2细胞，HSV-I SM44株，HSV-1在Hep-2细胞上增殖，试验用病毒滴度为100TCID₅₀/mL。

(2)方法

豚鼠分组：将豚鼠20只，随机分为4组，分别为芒果苷乳膏A组(微粉化处理)及B组(未微粉化处理)，1％阿昔洛韦乳膏组(阳性对照组)，空白组(阴性对照组)；每组各5只豚鼠，其中一个平行组用于观察疱疹愈后时间。

豚鼠皮肤单纯疱疹模型的建立：豚鼠背部皮肤经8％的Na₂S脱毛后，温水洗净，直径约为3cm的圆形。正常饲养24h，观察皮肤有无红斑、破损。取背部皮肤无破损豚鼠，皮肤经酒精消毒，皮下注射0.1mL HSV-1病毒液(100TCID₅₀)，观察并记录疱疹出现时间和特征。

豚鼠皮肤疱疹模型的观察与确立：豚鼠皮肤在皮下接种HSV-1病毒液24h内无变化；48h皮肤出现红色丘疹，成点状分布；随后丘疹数量逐渐增多且发生融合，皮肤红肿范围逐渐增大；60h融合的丘疹出现脓包，局部有结痂，红肿范围约0.6×0.6cm²，呈现典型的皮肤单纯疱疹病变。

芒果苷乳膏对皮肤单纯疱疹的治疗：豚鼠出现明显的疱疹时(HSV-I接种后60h)，取芒果苷乳膏A与B各20mg，擦于皮肤破损处，涂抹范围为1×1cm²，3次/日，连用5天。以结痂完全脱落(即愈合)的时间为疗效观察指标，用药后每隔12h观察并记录。

(3)结果

芒果苷乳膏A在给药12h后疱疹开始结痂，在接种后第5天，即给药后第2天结痂开始脱落，至接种第7天，结痂完全脱落，疱疹痊愈；芒果苷乳膏B在给药36h后疱疹开始结痂，在接种后第7天，即给药后第4天结痂开始脱落，至接种第9天，结痂完全脱落，疱疹痊愈。空白组皮肤无变化。

(4)结论

通过豚鼠背部皮肤皮下接种HSV-1病毒液，建立并确证HSV-1感染模型，对HSV-1模型豚鼠给予芒果苷乳膏，考察微粉化处理芒果苷对制剂疗效的影响，结果显示芒果苷经过微粉化处理，起效快，痊愈时间明显缩短，优于常规方法制备的制剂。

实施例7：芒果苷乳膏(5％)抗带状疱疹病毒疗效的初步临床评价试验

(1)病例选择

选择临床上有典型发作的可见的疼痛性皮肤粘膜损害的感染疱疹病毒病人，病程在7天内，1周内未服用或外用过抗病毒药物。按病情评分标准对皮损自觉症状(痛、痒、烧灼感)、全身症状(头痛、发热、乏力)、皮疹特征(大小、数目、形态、周围红肿)、附近淋巴结肿大等作病情严重程度的临床评分：0为无，1为轻度，2为中度，3为重度。

(2)一般临床资料

带状疱疹病毒患者22例，男15例，女7例，年龄34±7.1岁，病程4.7±1.3天。

(3)方法

局部给药，4～6次/日。给药前，患处清洗晾干。于用药后1、2、3、5、7、9、11、13天观察患者疗效，并注意不良反应。

(4)疗效判定标准

痊愈：为皮疹完全消退，疗效指数100％。

显效：为皮疹为大部分消退，局部疼痛明显减轻，疗效指数＞60％。

有效：为皮疹部分消退，局部疼痛减轻，疗效指数＞20％。

无效：为皮疹小部分消退或加重，局部疼痛无减轻，疗效指数＜20％。

疗效指数＝(治疗前评分-治疗后评分)/治疗前评分×100％。

(5)结果

在观察的22例病人中，痊愈3例，显效9例，有效5例，无效5例，不良反应0例，总有效率为77.3％。

(6)结论

芒果苷乳膏是一个安全、有效的药物，可用来治疗带状疱疹病毒感染。

Claims (4)

1.一种芒果苷乳膏，其特征在于外观为淡黄至黄色膏状物，重量组成成分如下：

芒果苷        0.1～20份

基质加至      100份

其基质由以下成分组成

。

2.根据权利要求1所述的芒果苷乳膏，其特征在于，所用的芒果苷原料纯度≥90％，芒果苷可以是从植物中提取得到的，也可以是化学合成得到的。

3.根据权利要求1所述的芒果苷乳膏，其特征在于制备芒果苷乳膏的芒果苷原料需经过微粉化技术处理。

4.根据权利要求1所述的芒果苷乳膏，其特征在于，该乳膏在制备治疗抗疱疹病毒药物中的应用。