CN102988471B - 治疗婴幼儿湿疹的复方甘锌乳及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种外用药物，是一种治疗婴幼儿湿疹的复方甘锌乳及其制备方法，主要由甘草酸二钾、黄芩苷、氧化锌、烟酰胺、薄荷脑、维生素E、甘油三蓖麻酸聚氧乙烯酯35、肉豆蔻酸异丙酯等组分组成；制备时，分别取甘油三蓖麻酸聚氧乙烯酯35、肉豆蔻酸异丙酯、维生素E、薄荷脑等制得A液，取氧化锌、黄芩苷等，加50－60℃适量水制得B液，取甘草酸二钾、烟酰胺等制得C液，将上述B液加入C液中，搅拌均匀，再加至A液中搅拌20－30分钟，即制得半透明桔黄色乳液，分装，即得；用本发明方法所制备的复方甘锌乳，经临床疗效观察，治疗婴幼儿湿疹有效率可达91%，可直接涂搽皮肤和毛发部位，分散性好，易清洗，使用方便。

Description

治疗婴幼儿湿疹的复方甘锌乳及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种外用药物，具体是一种治疗婴幼儿湿疹的复方甘锌乳及其制备方法。

背景技术

婴幼儿湿疹，又称特应性皮炎（atopic dermatitis,AD），是婴幼儿常见的皮肤病，多见于0－2岁以下婴幼儿，好发于头面部，臀部及四肢屈侧。一般认为与过度营养，消化不良，对食物过敏或某些外界刺激因素、金葡菌及念珠菌感染、遗传有一定关系。轻者皮肤局部红斑、丘疹、水疱伴有瘙痒，重者出现表皮糜烂，分泌物渗出，瘙痒剧烈，常反复发作，影响婴儿正常健康和发育。目前，常用的治疗药物有外用氧化锌油及皮质类固醇复方制剂（如易菲莎霜、派瑞松霜），其中易菲莎霜、派瑞松霜含激素成分，长期使用可引起皮肤萎缩、干燥、毛细血管扩张、多毛症，甚至发生白细胞减少及肝肾功能异常等不良反应，严重影响儿童的生长发育。而氧化锌油一类的油剂，对于毛发及渗出部位涂擦不便，不易清洗。因此，开发研制疗效可靠、不良反应少，又便于涂擦，容易清洗的治疗婴幼儿湿疹的新药十分必要。

发明内容

本发明的目的就是提供一种治疗婴幼儿湿疹的复方甘锌乳及其制备方法；本发明的复方甘锌乳，经动物抗炎、抗过敏、抗菌及皮肤刺激性试验表明，对二甲苯所致小鼠耳肿胀以及鸡蛋清致大鼠足跖肿胀有明显的抑制作用；对豚鼠完整皮肤和破损皮肤均无刺激性；对小鼠迟发型过敏反应（DTH）和大鼠同种被动皮肤过敏反应（PCA）仅高剂量组有一定效果，对免疫器官无明显毒性；对白色念珠菌有抑制细菌生长的作用，对金黄色葡萄球菌、乙型血溶性链球菌则同时有抑菌和杀菌作用；经临床疗效观察，治疗婴幼儿湿疹有效率为91%。用本发明方法所制备的复方甘锌乳，可直接涂搽皮肤和毛发部位，分散性好，易清洗，使用方便。

本发明的一种治疗婴幼儿湿疹的复方甘锌乳，每1000g乳液由下述用量的组分组成：

其优选配方为，每1000g乳液由下述用量的组分组成：

所述治疗婴幼儿湿疹的复方甘锌乳的制备方法，由下述步骤组成：

a.取甘油三蓖麻酸聚氧乙烯酯35、肉豆蔻酸异丙酯、维生素E、薄荷脑、无水乙醇，混合后搅拌20－30分钟，制得A液；

b.取氧化锌、黄芩苷，加入预热至50－60℃适量水搅拌溶解，2－3分钟后变成桔红色，此为B液；

c.取甘草酸二钾，加入丁二醇搅拌溶解后，再加入烟酰胺，搅拌溶解，制得C液；

d．将上述B液加入C液中，搅拌均匀，控制温度在30－35℃，再将B液与C液的混合液加至A液中，搅拌20－30分钟，即制得半透明桔黄色乳液，分装，即得。

婴幼儿湿疹病因较复杂，目前认为与过度营养、消化不良、对食物过敏或某些外界刺激等因素、金葡菌及念珠菌感染、遗传有一定的关系。中医理论认为，湿疹的成因主要是由于人体湿热内盛、湿热交阻、内邪侵袭皮肤、湿从热化、热毒缠绵，熏蒸与皮肤所致。临床表现为病变部位红斑、丘疹、鳞屑样变或水疱及渗出等，瘙痒剧烈，缠绵难愈，反复发作。

本发明人根据湿疹发病的病因、病理，结合多年在皮肤科治疗婴幼儿湿疹的临床经验以及现有药物的治疗现状，以甘草酸二钾、黄芩苷、氧化锌、烟酰胺、薄荷脑、维生素E等《中国药典》或《国家药品标准》所收载的原料加上适当的乳液基质制成分散均匀、黏度低、热力学稳定的透明或半透明分散体系，用于婴幼儿湿疹的治疗，取得了十分满意的疗效。

其中所使用的甘草酸二钾，具有抗炎、抗过敏、抗溃疡、抗病毒、调节免疫等作用。现代药理研究证实，其抗炎抗过敏作用是通过提高血浆氢化可的松水平，增强皮质激素的抑制应激反应作用，抑制花生四烯酸代谢酶的活化来实现。其免疫调节作用是通过对T细胞活化的调节，对r－干扰素的诱导，活化NK细胞，促进胸腺外T淋巴细胞分化作用来实现。临床常用于治疗各种皮炎、湿疹及各种变态反应性疾病。

所使用的黄芩苷，为唇科草本植物黄芩的提取物。黄芩具有清热燥湿、泻火解毒等功效，其主要成分黄芩苷具有抗病原微生物、抗病毒、抗炎、抗过敏、抗氧化、抗变态反应，抑制过氧化脂质的生成，能清除自由基，延长皮肤细胞寿命，增强皮肤修复功能等多重功效。现代研究证实，黄芩苷对LPS制作的HPLFS合成和分泌TNF－A有显著抑制作用，与地塞米松抗炎效果相近；此外，经灌胃给予小鼠黄芩苷，在2,4－二硝基氯苯致小鼠迟发型变态反应，小鼠同种被动皮肤过敏反应实验，以及低分子右旋糖酐致小鼠瘙痒、组织胺致豚鼠足痒实验，豚鼠离体回肠收缩试验和二甲苯致小鼠耳肿实验中，证明了黄芩素具有明显的抗过敏、拮抗组胺和一定的抗炎作用，研究黄芩苷的脱敏作用机理，发现主要是抑制巯氢基酶的活化并防止肥大（嗜碱性）细胞脱颗粒以及组织胺、5－羟色胺等介质的释放，同时还具有降低毛细血管通透性的作用。

所使用的氧化锌，具有收敛剂特性，可舒缓皮肤刺激和瘙痒，具有抗炎、消炎、修复表皮的作用；

所使用的烟酰胺，为抗糙皮病因子，有维护表皮功能、止痒、抗衰老等作用。

所使用的薄荷脑，有清凉、消炎、止痒作用。

所使用的维生素E，具有抗氧化，修复表皮的作用。

考虑到本发明的复方甘锌乳主要使用对象为婴幼儿，因此，选用的主要乳剂基质，包括甘油三蓖麻酸聚氧乙烯酯35（亦称Cremophor EL，蓖麻油聚氧乙烯35醚）、肉豆蔻酸异丙酯（亦称IPM），其中甘油三蓖麻酸聚氧乙烯酯35由德国BASF公司生产，有良好的增溶与乳化作用；所制成的乳液亦具有促渗、缓释、减少药物对皮肤刺激性的作用，同时可提高药物稳定性，利于婴幼儿娇嫩的皮肤。

依据本发明技术方案中所提供的组方及制备方法所制成的乳液，按“中药新药稳定性试验要求”进行6个月质量稳定性考察表明：乳液稳定性良好。

本发明乳液经抗炎、抗过敏、抗菌及皮肤刺激性实验表明：对二甲苯所致小鼠耳肿胀以及鸡蛋清致大鼠足跖肿胀有明显的抑制作用；对豚鼠完整皮肤和破损皮肤均无刺激性；对小鼠迟发型过敏反应（DTH）和大鼠同种被动皮肤过敏反应（PCA）仅高剂量组有一定效果，对免疫器官无明显毒性；对白色念珠菌有抑制细菌生长的作用，对金黄色葡萄球菌、乙型血溶性链球菌则同时有抑菌和杀菌作用。

本发明乳液经华中科技大学高分子化学与物理实验室动静态激光散射检测，中位径（D50）：155nm；平均粒径：189nm。说明本发明方法所制备的乳液粒径达到亚纳米级。提示本发明乳液具有高度分散性和稳定性，利于婴幼儿的皮肤吸收。

本发明乳液治疗婴幼儿湿疹的临床观察表明：有效率91%；远远高于对照组67%（现用的氧化锌油），表明疗效显著。也说明本发明配方科学合理，具有协同作用。

具体实施方式

实施例1：

a.取甘油三蓖麻酸聚氧乙烯酯220g、肉豆蔻酸异丙酯40g、维生素E5.0g、薄荷脑1.0g、无水乙醇30ml，混合后搅拌20－30分钟，制得A液（即油相）；

b.取氧化锌2.0g、黄芩苷2.0g，加入预热至50－60℃的纯化水622ml搅拌溶解，2－3分钟后变成桔红色，即为B液（即水相）；

c.取甘草酸二钾8.0g，加入丁二醇60ml搅拌溶解后，再加入烟酰胺10.0g，搅拌溶解，制得C液；

d．将上述B液加入C液中，搅拌均匀，控制溶液温度在30－35℃，再将B液与C液的混合液加至A液中，搅拌20－30分钟，即制得半透明桔黄色乳液，分装，即制得本发明的治疗婴幼儿湿疹的复方甘锌乳。

实施例2：

a.取甘油三蓖麻酸聚氧乙烯酯200g、肉豆蔻酸异丙酯30g、维生素E2.0g、薄荷脑1.0g、无水乙醇25ml，混合后搅拌20－30分钟，制得A液；

b.取氧化锌1.0g、黄芩苷1.0g，加预热至50－60℃的纯化水683ml搅拌溶解，2－3分钟后即制得桔红色B液；

c.取甘草酸二钾2.0g，加入丁二醇50ml搅拌溶解后，再加入烟酰胺5g，搅拌溶解，制得C液；

d．将上述B液加入C液中，搅拌均匀，控制温度在30－35℃，再加至A液中搅拌20－30分钟，即制得半透明桔黄色乳液，分装，即得。

实施例3：

a.取甘油三蓖麻酸聚氧乙烯酯240g、肉豆蔻酸异丙酯50g、维生素E8.0g、薄荷脑2.0g、无水乙醇35ml，混合后搅拌20－30分钟，制得A液；

b.取氧化锌4.0g、黄芩苷5.0g，加预热至50－60℃的纯化水558ml搅拌溶解，2－3分钟后变成桔红色，即为B液；

c.取甘草酸二钾13g，加入丁二醇70ml搅拌溶解后，再加入烟酰胺15g，搅拌溶解，制得C液；

d．将上述B液加入C液中，搅拌均匀，控制温度在30－35℃，再加至A液中搅拌20－30分钟，即制得半透明桔黄色乳液，分装，即得。

本发明治疗婴幼儿湿疹的复方甘锌乳的性状为半透明桔黄色至浅棕色的乳液；气香，具清凉感。

功能与主治：抗菌、抗炎、抗过敏、止痒、保护和修复表皮功能。用于婴幼儿湿疹及儿童特应性皮炎、各种湿疹、皮炎。

用法与用量：外用，涂擦患处，一日2－3次。

将本发明实施例1所制得的治疗婴幼儿湿疹的复方甘锌乳（下称甘锌乳）进行抗炎、抗过敏、抗菌及皮肤刺激性的实验情况如下：

1 实验内容

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物：

昆明种小白鼠，SPF级，体重为（20±2）g，许可证号：SCXK(鄂)2010－0009，豚鼠，普通级，体重为（200－220）g，许可证号：SCXK(鄂)2011－0011，Wistar大鼠，SPF级，体重为（150－180）g，许可证号：SCXK(鄂)2008－0005

1.1.2 菌种：

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）20株、乙型溶血性链球菌（β－hemolvtic streptococcus）10株、白色念珠菌（Candidaalbicans）14株，所有菌种均来自于华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科2012年1月至8月从患者临床标本中分离得到。

1.1.3 仪器

JA2003电子天平（上海越平科学仪器有限公司），离心机（上海化工机械厂有限公司），高压蒸汽灭菌器 MLS－3780(三洋电机株式会社)，电热恒温鼓风干燥箱 DHG－781（湖北省黄石市医疗器械厂），生物超净工作台 BCN－B6015(HDL APPARATUS)，隔水式电热恒温培养箱（上海一恒科技有限公司），二氧化碳培养箱（Thermo Scientific），直径6mm打孔器，千分尺等。

1.1.4 试剂及培养基

实施例制得的治疗婴幼儿湿疹的复方甘锌乳（下称甘锌乳）（批号：20120306，黄石市第一医院制备）；醋酸泼尼松乳膏（批号：120321，同济医院制剂室自制）；伊文思蓝（Sigma）；沙保氏琼脂斜面培养基、沙保氏琼脂平板培养基，MH血琼脂平板培养基(MH琼脂培养基加脱纤维羊血)、加入阳离子调整的MH肉汤培养基，加入羊血的MH肉汤培养基，以上培养基均由本实验室自制；MH琼脂培养基（武汉市中晋科技有限公司）；RPMI1640培养基（批号：811186，Gibco）；3－（N－吗啉代）－2－羟基丙磺酸（MOPS）（批号：23110120，Genview）；脱纤维绵羊血（批号：20120831/1/25，北京政博伟业生物科技有限公司）；丙酮，二甲苯等试剂均为分析纯。

1.2 抗炎实验

1.2.1小鼠耳廓肿胀试验

对象：昆明小鼠40只

方法：昆明小鼠40只，随机分为5组，每组8只。即空白组，阳性对照组（醋酸泼尼松乳膏），甘锌乳（100%原药浓度）、中（50%原药浓度）、低（20%原药浓度）剂量组。各试验组小鼠右耳均匀涂以相应浓度的药物0.2ml，空白组涂以基质0.2ml，阳性对照物涂以醋酸泼尼松软膏0.2g，给药后15min在小鼠右耳用微量加样器滴加二甲苯0.05ml致炎。致炎1h后颈椎脱臼处死小鼠，剪下双耳，用直径6mm打孔器在同一部位切下，天平精密称重，用左右两耳片重量差表示肿胀度，并计算甘锌乳对肿胀反应的抑制率，抑制率(%)=100－实验组肿胀度/对照组肿胀度×100。

1.2.2 大鼠足跖肿胀实验

对象：Wistar大鼠40只

方法：Wistar大鼠40只随机分为5组，每组8只，即空白组，阳性对照组（醋酸泼尼松乳膏），甘锌乳（100%原药浓度）、中（50%原药浓度）、低（20%原药浓度）剂量组。自大鼠右后足跖中部皮下注入10%鸡蛋清－生理盐水溶液0.1ml。然后立即于各试验组大鼠右侧后足局部均匀涂以相应的药物，给药剂量同小鼠耳肿胀实验。使用排水法测量大鼠致炎前及致炎后0.5，1，2，4，6h右后足跖体积，计算致炎后各时间点足跖肿胀度。肿胀度=致炎后足跖体积－致炎前足跖体积。

1.3 皮肤刺激性试验

对象：豚鼠共32只

1.3.1单次给药皮肤刺激性试验

方法：实验分为完整皮肤组与破损皮肤组,每组8只豚鼠。实验前24h去毛，给药前检查皮肤是否因为去毛而划破, 如果受伤, 该豚鼠不宜用于完好皮肤的刺激性实验。给药当天制作破损皮肤，采用一次性注射器针头在一侧皮肤作#字形伤口, 以有组织液渗出但不出血为度。采用同体自身左右对比, 左侧去毛区涂甘锌乳0.5ml,右侧去毛区涂以等量空白基质作为对照, 用纱布和胶布固定, 给受试物4h后, 去除残留受试物, 去除受试物1、24、48、72h肉眼观察, 记录涂药处有无红斑和水肿等情况, 按评分标准记分及强度标准判断刺激强度。

1.3.2 多次给药皮肤刺激性试验

方法：试验方法与观察仍按一次给药试验进行, 但每天给药1次, 连续1周, 去除受试物后1、24、48和72h肉眼观察, 记录各组受试物和基质的平均反应分值, 按评分标准记分及强度标准判断刺激强度。

结果评价方法：在自然光线下观察皮肤反应，记录受试部位是否出现红斑、水肿情况，进行刺激强度评定；同时注意观察涂敷部位是否有色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄情况及其发生、消退的时间。末次敷贴后，在去除受试物1、24、48和72h时，肉眼观察并记录敷贴部位有无红斑和水肿等情况。

按下列公式计算每天每只动物平均积分。

表1 皮肤刺激反应评分

皮肤反应	积      分
		红斑和焦痂形成
无红斑	0
		轻微红斑（勉强可见）	1
明显红斑	2
		中度～重度红斑	3
严重红斑（紫红色）至轻微焦痂形成	4
		水肿形成
无水肿	0
		轻微水肿（勉强可见）	1
轻度水肿（皮肤隆起轮廓清楚）	2
		中度水肿（皮肤隆起约1mm）	3
重度水肿（皮肤隆起超过1mm，范围扩大）	4
		最高积分	8

表2 皮肤刺激强度分级

积分均值	强    度
		0～0.5	无刺激性
0.5～2.0	轻度刺激性
		2.0～6.0	中度刺激性
6.0～8.0	强度刺激性

1.4 抗过敏反应实验

1.4.1  2,4－二硝基氟苯(DNFB)致小鼠迟发型过敏反应(DTH)

对象：昆明小鼠40只

方法：取昆明小鼠40只，随机分为5组，每组8只，即基质对照组、醋酸泼尼松阳性药物对照组、甘锌乳（100%原药浓度）、中（50%原药浓度）、低（20%原药浓度）剂量组。小鼠腹部脱毛，范围为3cm×3cm。次日于脱毛区用5% 2,4－二硝基氯苯(DNFB)－丙酮溶液20μl致敏，在此期间每天于脱毛区分别给以相应药物，各试验组小鼠右耳均匀涂以相应浓度的药物0.2ml，空白组涂以基质0.2ml，阳性对照物涂以醋酸泼尼松软膏0.2g。5d后各组将1% 2,4－二硝基氯苯(DNFB)－丙酮溶液20μl均匀涂于小鼠右耳两面进行攻击。涂耳24h后, 脱颈椎处死小鼠, 剪下双耳耳廓, 以6mm打孔器摘取左右耳片称重, 以两侧耳重的差值作为迟发型超敏反应值, 计算肿胀度。同时摘取胸腺、脾脏称重, 以每10g小鼠体重的胸腺和脾重量表示脾指数和胸腺指数，判断其对免疫器官的毒性。

1.4.2 大鼠同种被动皮肤过敏试验

对象：Wistar大鼠42只

方法：抗血清制备：天花粉以5mg/ml溶于4－5%氢氧化铝凝胶中制成混悬液。取Wistar大鼠2只，体重100－200g，大鼠每个脚掌注射0.1ml上述混悬液，4个脚掌一共注射0.4ml，使大鼠致敏。14d后颈动脉取血，3×10³ r/min 4℃离心15min分离

血清，分装于EP管中，置于－20℃冰箱备用。

Wistar大鼠40只分为5组： 基质对照组、醋酸泼尼松阳性对照组、甘锌乳（100%原药浓度）、中（50%原药浓度）、低（20%原药浓度）剂量组。大鼠乙醚麻醉后背部中线两侧距脊柱1.5cm处剃毛, 约2cm×2cm，每侧两点，抗原攻击前连续3d给药于背部剪毛区，给药剂量和小鼠迟发型过敏反应实验相同。

被动皮肤致敏及抗原攻击：将抗血清用生理盐水按1：10比例稀释，于大鼠背部皮内注射，每侧两点，每点0.1ml。48h后进行抗原攻击，静脉注射天花粉10mg/kg ,用1%伊文思蓝（生理盐水）溶液配制成2mg/mL,注射体积各为5mL/kg。30min后处死动物，翻转背部皮肤，测量其直径，计算抑制率。抑制率(%)=100－实验组蓝斑直径/对照组蓝斑直径×100。

1.5 体外抗菌实验

方法：

菌液制备：将金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌接种于MH血琼脂平板培养基，白色念珠菌接种于沙保氏琼脂斜面培养基，35℃恒温（乙型溶血性链球菌于CO₂环境下培养）培养24h。从所得细菌中挑选典型菌落，分别于相应的培养基上划线接种细菌，再次于35℃恒温（乙型溶血性链球菌于CO₂环境下培养）培养24h。取培养24h的菌落用0.85%的盐水调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液（接种菌液浓度约为1～5×10⁵CFU·ml^－1）。分别用加入阳离子调整的MH肉汤对金黄色葡萄球菌菌悬液进行1∶100稀释，加入羊血的MH肉汤培养基对乙型溶血性链球菌菌悬液进行1∶100稀释，用制备好的RPMI1640培养基（向RPMI培养基中依照34.53g·L^－1浓度加入MOPS缓冲液粉，再用1mol·L^－1NaOH调节ph至7.0）对白色念珠菌菌悬液进行1：1000稀释后备用。

最小抑菌浓度(MIC)的测定：每一菌种取12支经过高温循环蒸汽灭菌的4ml离心管，从第2管开始每管加入相应的培养基（加入阳离子调整的MH肉汤、加入羊血的MH肉汤培养基、加入缓冲液的RPMI1640培养基）1ml，第1管加入甘锌乳1ml，第2管加入甘锌乳1ml后混匀，然后吸取1ml至第3管，混匀后再吸取1ml至第4管，如此连续倍比稀释至第10管，并从第10管中吸取1ml弃去，然后于前10管中分别加入上一步配置好的菌液1ml，第11管为不含药物的阳性对照，各自加入等量菌液以及相应培养基，第12管为只加入相应培养基但不含药物以及菌液的阴性对照，使每组前10支试管中药物的稀释度最终为1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64、1：128、1：256、1：512、1：1024。金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌35℃恒温培养24h（白色念珠菌培养48h），阳性对照对照管中见细菌生长，而阴性对照管则未见细菌生长方可观察结果，测定其MIC值。

最小杀菌浓度(MBC)的测定：将未见菌落生长的离心管摇匀，分别吸取100μl分别接种于相应的平板琼脂培养基（金黄色葡萄球菌接种于MH琼脂培养基，乙型溶血性链球菌接种于MH血琼脂平板培养基，白色念珠菌接种于沙保氏琼脂斜面培养基），35℃恒温（乙型溶血性链球菌于CO₂环境下培养）培养24h，以菌落数小于5个的最低药物浓度作为药物对该种菌的MBC。

统计学方法：所得结果使用SPSS 19.0软件进行处理，以均数±标准差（

）表示，组间比较以t检验判断其显著性，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果：

表3 甘锌乳对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响（n=8

）

组别	肿胀度(mg)	抑制率(%)
			空白对照组	12.38±2.00
甘锌乳低剂量组	10.75±3.01	13.13%
			甘锌乳中剂量组	7.88±2.30b	36.36%
甘锌乳剂量组	7.25±1.75b	41.41%
			醋酸泼尼松组	7.50±1.20b	39.39%

(注：各组与空白基质组对照，上标a表示P<0.05,上标b表示P<0.01)

表4 甘锌乳对鸡蛋清所致大鼠足跖肿胀的影响（n=8

）

(注：各组与空白基质组对照，上标a表示P<0.05,上标b表示P<0.01)

甘锌乳抗炎实验结果见表3、4。在小鼠耳肿胀和大鼠足跖肿胀实验中，甘锌乳中剂量和高剂量组与空白基质组相比，除中剂量0.5h足跖肿胀度外，结果均有显著性差异，说明甘锌乳对小鼠耳肿胀和大鼠足跖肿胀有明显的抑制作用，有较好的抗炎效果。

表5 甘锌乳对豚鼠单次给药皮肤刺激反应结果

表6 甘锌乳对豚鼠多次给药皮肤刺激反应结果

豚鼠皮肤刺激反应实验结果见表5、6。结果显示，单次给药和多次给药皮肤刺激性试验中各组试验均显示甘锌乳对豚鼠皮肤无刺激性, 受药部位皮肤破损处出现皮肤粗糙外，无红斑、无水肿、无色素沉着、无出血点、无皮肤菲薄。用药组和空白基质组比较, 差异无统计学意义。

表7甘锌乳对小鼠迟发型过敏反应(DTH)的影响（n=8

）

组别	耳肿胀度(mg)	胸腺指数(mg/10g)	脾脏指数(mg/10g)
				空白对照组	13.25±4.62	16.32±4.11	33.84±6.61
甘锌乳低剂量组	11.63±2.83	19.19±4.07	32.94±9.48
				甘锌乳中剂量组	10.38±2.39	14.37±5.39	32.23±3.90
甘锌乳剂量组	8.63±3.42a	18.05±4.23	35.48±11.02
				醋酸泼尼松组	8.38±3.07a	5.90±1.26b	22.86±3.83b

(注：各组与空白基质组对照，上标a表示P<0.05,上标b表示P<0.01)

小鼠迟发型过敏反应(DTH) 实验的结果见表7。与空白对照组相比，仅有高剂量组和阳性对照组对DNFB引起的小鼠耳肿胀结果有显著性差异(P<0.05)，即甘锌乳对Ⅳ型变态反应有一定的抗过敏作用。此外，阳性对照药物醋酸泼尼松虽然抗过敏作用较好，但是其对免疫器官毒性较大，导致大部分受试动物胸腺和脾脏萎缩。甘锌乳与之相比，不会显著降低受试动物的胸腺指数和脾脏指数，说明其对免疫器官无毒性或者毒性极小。

表8 甘锌乳对大鼠同种被动皮肤过敏反应(PCA)的影响（n=8

）

组别	蓝斑直径(mm)	抑制率(%)
			空白对照组	12.25±3.05
甘锌乳低剂量组	11.40±4.28	6.94%
			甘锌乳中剂量组	11.65±3.20	4.90%
甘锌乳剂量组	9.09±2.71a	25.82%
			醋酸泼尼松组	7.59±1.98b	38.07%

(注：各组与空白基质组对照，上标a表示P<0.05,上标b表示P<0.01)

大鼠同种被动皮肤过敏反应(PCA)实验结果见表8。与空白对照组相比，仅有高剂量组对DNFB引起的小鼠耳肿胀结果有显著性差异(P<0.05)，即甘锌乳对I型变态反应有一定的抗过敏作用。

表9 甘锌乳对金黄色葡萄球菌的抗菌作用

金黄色葡萄球菌菌种号	MIC(药液稀释度)	MBC(药液稀释度)
			1370	1：8	1：2
6328	1：8	1：2
			3977	1：8	1；2
4479	1：8	1：2
			1539	1：8	1：2
2335	1：8	1：2
			2931	1：8	1：2
2337	1：8	1：2
			884	1：16	1：4
3807	1：8	1：4
			5245	1：8	1：4
1038	1：8	1：2
			6029	1：8	1：2
1054	1：8	1：4
			802	1：16	1：2
6058	1：8	1：2
			765	1：8	1：4
3133	1：8	1：2
			5177	1：8	1：2
6160	1：8	1：2

表10 甘锌乳对乙型溶血性链球菌的抗菌作用

乙型溶血性链球菌菌种号	MIC(药液稀释度)	MBC(药液稀释度)
			604	1：4	1：2
705	1：4	1：2
			4523	1：4	1：4
1513	1：4	1：2
			3875	1：4	1：2
3221	1：4	1：4
			2624	1：4	1：4
6649	1：4	1：4
			831	1：4	1：2
6764	1：4	1：2

表11 甘锌乳对白色念珠菌的抗菌作用

白色念珠菌菌种号	MIC(药液稀释度)	MBC(药液稀释度)
			2572	1：16	>1：2
3301	1：32	>1：2
			3574	1：16	>1：2
5996	1：32	>1：2
			6647	1：32	>1：2
5995	1：32	>1：2
			5518	1：32	>1：2
4161	1：32	>1：2
			6409	1：32	1：2
6284	1：32	>1：2
			6133	1：32	>1：2
3819	1：32	>1：2
			2573	1：32	>1：2
4577	1：32	>1：2

体外抗菌实验结果见表9、10、11。结果显示，甘锌乳对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、白色念珠菌均有抑制细菌（真菌）生长的作用，其中对白色念珠菌的抑菌效果最好；在杀菌实验中，可检测到其对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌有一定的杀菌活性，而白色念珠菌在设计浓度梯度内除菌株6409外，未观察到其杀菌活性。

3 结论：

结果表明，本发明实施例1所制备的甘锌乳对二甲苯所致小鼠耳肿胀以及鸡蛋清致大鼠足跖肿胀有明显的抑制作用；对豚鼠完整皮肤和破损皮肤均无刺激性；对小鼠迟发型过敏反应(DTH)和大鼠同种被动皮肤过敏反应(PCA)仅高剂量组有一定效果，对免疫器官无明显毒性；对白色念珠菌有抑制细菌生长的作用，对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌则同时有抑菌和杀菌作用。以上实验结果为甘锌乳治疗特异性皮炎以及各种湿疹提供了确切的药效学资料。

本发明实施例1所制得的治疗婴幼儿湿疹的复方甘锌乳（下称甘锌乳）的临床观察资料如下：

1 资料与方法

1．1 研究对象：  完成观察200例，年龄0岁～2岁，男103例，女97例。1岁以下116例，1～2岁84例。病程2天～3个月。其中正接受母乳喂养48例，人工喂养86例。混合喂养66例。 皮损分布：头面部69例，波及躯干、四肢者76例，单发躯干、四肢者55例。

1．2  诊断及入选标准：急性渗出型：2岁以内婴幼儿湿疹头面部红斑、丘疹、水疱、糜烂结痂，严重者波及双耳、躯干、四肢；亚急性型：同上述症状但无明显渗出；慢性型：皮损为暗红色斑，略高出皮肤，表面干燥或少许脱屑，多由上两型演变而来。凡符合诊断标准，且就诊前1个月未用过糖皮质激素软膏，家长 接受本疗法并能配合实施者，均可入围。排除标准：合并严重 感染的湿疹；有药物接触过敏史；患有严重系统疾病；治疗前1 个月内服用或外用过糖皮质激素或非甾体类抗炎药。淘汰标准：未按规定用药，未按时复诊，自动终止治疗者。家长/监护人愿意并签署知情同意书；能够按临床研究要求,遵守限制用药规定。

1.3  用药方法和疗程：符合标准的患儿根据不同年龄段按1：1比例随机分为治疗组和对照组。治疗组接受复方甘锌乳治疗；对照组接受氧化锌油治疗。用药方法：在皮损部位外涂一薄层乳剂或油剂, 每日早晚各1次，治疗总疗程2周,患者在治疗后第1, 14天治疗分别进行疗效观察。

1.4  统计学处理：  统计学方法采用SPSS13．0版软件处理，计数资料比较采用卡方检验，治疗前后积分比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

1.5疗效判定标准   根据不同部位皮损症状严重程度，所占面积的大小再结合成人、儿童各部位面积占全身面积的比例的综合积分，具体的计算方法如下。

1.5.1．临床症状的评分：临床表现分为四项，即：红斑(erythema，E)，硬肿(水肿)／丘疹(induration (edema)／papulation，I)，表皮剥脱(excoriation，Ex)，苔藓化(1ichenification，L)。每一临床表现的严重度 以0～3分计分，0=无，1=轻，2=中，3=重。各种症状分值之间可记半级分，即0．5。

1.5.2．临床表现面积大小评分：中国新九分法换算成所占该部位的比例计分。③皮损面积占各部位面积的比例分值为0～6，即：0为无皮疹，1为<10％，2为10％～19％，3为20％～49％，4为50％～69％，5为70％～89％，6为90％ ～100％。

1.5.3． 0～7岁则头颈20％，上肢20％．躯干30％，下肢30％。

1.5.4．根据上述各项，8岁以上患者的EASI计算分值方法见表1 如0～7岁患儿，则表中头／颈部为(E+I+Ex+L)×面积×0．2，下肢为(E+I+Ex+L)×面积×0．3，其它不变。各部位分值相加即为EASI皮损症状严重程度的总分。

表1 湿疹面积及严重度指数对8岁以上患者评分表

治愈：皮损全部消退,瘙痒症状消失积分减少95%以上；显效：皮损大部分消退,瘙痒明显轻,积分减少61%～95%；有效：皮损部分消退,瘙痒症有所改善,积分下降20%～60%；无效：皮损消退不明显瘙痒未见减轻或临床症状反见恶化,积分减少20%以下，有效率=痊愈率+显效率。

4.结果

表1 两组患者临床疗效比较

X²=19.06    p<0.01

表2 两组患者临床证候积分变化比较(

)

从上表可以看出，治疗组（复方甘锌乳组）有效率为91.0%，明显高于对照组（氧化锌油组）的67.0%（P＜0.01），说明本发明所制得的复方甘锌乳治疗婴幼儿湿疹有很好的疗效。同时，复方甘锌乳被制作成亚纳米乳状态（平均粒径189nm），提高了载药量，扩大分子表面积，利于保持和提高局部药物的有效浓度，利于婴幼儿娇嫩皮肤的吸收。该药为水包油性乳液，不但使用方便，易洗涤，不含糖皮质激素，长期使用无色素沉着、皮肤萎缩、毛细血管扩张、多毛和激素依赖样副反应，临床使用安全，疗效可靠。

Claims (3)

1.治疗婴幼儿湿疹的复方甘锌乳，其特征在于每1000g乳液由下述用量的组分组成：

甘草酸二钾    2－13g             黄芩苷     1－5g

烟酰胺        5－15g             薄荷脑     1－2g

维生素E       2－8g             氧化锌      1－4g

甘油三蓖麻酸聚氧乙烯酯35               200－240g

肉豆蔻酸异丙酯                           30－50g

无水乙醇      20－35ml           丁二醇   50－70ml

纯化水            余量；

所述甘油三蓖麻酸聚氧乙烯酯35由德国BASF公司生产。

2.根据权利要求1所述的治疗婴幼儿湿疹的复方甘锌乳，其特征在于：每1000g乳液由下述用量的组分组成：

甘草酸二钾       8g             黄芩苷       2g

烟酰胺          10g             薄荷脑       1g

维生素 E         5g             氧化锌       2g

甘油三蓖麻酸聚氧乙烯酯35                   220g

肉豆蔻酸异丙酯                              40g

无水乙醇       30ml           丁二醇       60ml

纯化水         余量。

3.根据权利要求1 所述的一种治疗婴幼儿湿疹的复方甘锌乳的制备方法，其特征在于由下述步骤组成：

a.取甘油三蓖麻酸聚氧乙烯酯35、肉豆蔻酸异丙酯、维生素E、薄荷脑、无水乙醇，混合后搅拌20－30分钟，制得A液；

b.取氧化锌、黄芩苷，加入预热至50－60℃适量水搅拌溶解，2－3分钟后变成桔红色，此为B液；

c.取甘草酸二钾，加入丁二醇搅拌溶解后，再加入烟酰胺，搅拌溶解，制得C液；

d．将上述B液加入C液中，搅拌均匀，控制温度在30－35℃，再将B液与C液的混合液加至A液中，搅拌20－30分钟，即制得半透明桔黄色乳液，分装，即得。