CN102499235A - 一种硅藻标本制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种硅藻标本制备方法，包括了标本的处理和封片步骤。与已有的方法相比，省去了浓硫酸的处理程序。本发明的方法，明显的简化了硅藻标本处理的步骤，降低了标本处理过程中的劳动量，处理过程中不需要添加浓硫酸，减少对环境的污染，并取得了较好的标本处理效果；同时采用的封片方法也能够获得观察效果较好的硅藻封片。本发明的方法简便易行，能够在硅藻研究中得以广泛应用。

Description

一种硅藻标本制备方法

技术领域

本发明属于硅藻研究技术领域，具体涉及一种硅藻标本制备方法，包括硅藻标本处理及封片步骤。

背景技术

硅藻是一类真核的微小生物体，它的特殊之处在于细胞壁，它的细胞壁变化多样而且充满了硅质成为坚硬的壳体。硅藻是一个庞大的类群，不但种类多，数量大，分布也广泛。硅藻是水体污染尤其是河流系统污染中重要的指示植物；在海洋和淡水沉积物种的硅藻是过去环境变化的良好指示者；近来也被用于检测酸雨发生导致的pH值的变化。

硅藻在各研究领域的应用都以其分类学研究为基础，而硅藻分类的研究主要是依据其壳面的形态来进行。因此对硅藻标本进行适当的处理和封片是硅藻研究工作的最关键一步，也是后续研究的重要基础。

传统的硅藻处理方法采用三酸法，需实验人员手持试管夹，夹住装有硅藻标本的玻璃管在酒精灯上灼烧，过程中不断添加浓盐酸、浓硫酸和浓硝酸，耗时长，处理一个标本约需40-50分钟，一个人一天仅能处理10余号标本，劳动强度较大，处理效果也不十分理想。并且传统的硅藻封片方法，容易使封片中残留大量气泡，封片之后要干燥2-3周，才可以观察。这些技术上的问题都给硅藻在各研究领域的应用带来一定困难。

发明内容

本发明的目的是提供一种硅藻标本制备方法，能够简化硅藻标本的处理过程，提高标本的处理效果和封片效果，从而弥补现有技术的不足。

本发明的方法，是使用强氧化性酸去除硅藻的细胞内含物，留下硅藻的细胞壁，即硅质壳，便于观察研究。

本发明的方法，包括如下的步骤：

1)取含有硅藻的水样，静置后弃去上清液，得到含有硅藻样品的沉淀；

2)在沉淀中加入浓盐酸，在95～98℃加热2～3小时后，静置弃去上清液，得到沉淀；

3)在步骤2)制备的沉淀中加入浓硝酸，在恒温水浴锅中95～98℃加热4～5小时后，静置弃去上清液，得到沉淀；

4)将步骤3)的沉淀用蒸馏水反复清洗，离心去掉上清液，得到处理好的硅藻样品，用75％的酒精保存；

5)将擦干净的载玻片和盖玻片放在加热板上，在60-70℃加热，保持干燥；

6)将步骤4)保存在75％酒精的硅藻样品震荡，使样品与酒精混合均匀形成悬浊液；

7)将步骤6)的悬浊液取10-20μl均匀涂布到步骤5)处理的盖玻片上，加热干燥20分钟；

8)将载玻片放在加热板上，中间滴一滴Napharx胶，将盖玻片有标本的一面朝下，盖在胶上，轻压盖玻片，使胶慢慢扩散到整张盖片；

9)将封好的玻片放在酒精灯上加热，待胶沸腾并冒出气泡和白色的烟时，移走玻片，静置冷却后完成硅藻标本封片的制备。

本发明的方法，明显的简化了硅藻标本处理的步骤，降低了标本处理过程中的劳动量，处理过程中不需要添加浓硫酸，减少对环境的污染，并取得了较好的标本处理效果；同时采用的封片方法也能够获得观察效果较好的硅藻封片。本发明的方法简便易行，能够在硅藻研究中得以广泛应用。

具体实施方式

实施例1：本实施方式按照如下步骤进行硅藻标本处理：

1)取水样20ml置于玻璃管中，沉淀24小时，弃去上清液；

2)加入20ml浓盐酸，在恒温水浴锅中加热(95～98℃)2-3小时，静置12小时，弃去上清液；

3)加入40ml浓硝酸，在恒温水浴锅中加热(95～98℃)4-5小时(此过程中要视浓硝酸减少的情况添加浓硝酸)，待沉淀变为淡黄色或白色，静置12小时，弃去上清液；

4)将全部沉淀移入离心管中，加入等量的蒸馏水，离心(2500转，5分钟)，弃上清液，取沉淀，重复5-7次；将处理好的标本移入1.5ml道夫管中，用75％的酒精保存。

实施例2：本实施方式按照如下步骤进行硅藻标本处理：

1)取含有硅藻样品的水样30ml置于玻璃管中，沉淀24小时，弃去上清液；

2)加入30ml浓盐酸，在恒温水浴锅中加热(98℃)2-3小时，静置12小时，弃去上清液；

3)加入50ml浓硝酸，在恒温水浴锅中加热(98℃)4-5小时(此过程中要视浓硝酸减少的情况添加浓硝酸)，待沉淀变为淡黄色或白色，静置12小时，弃去上清液；

4)将全部沉淀移入离心管中，加入等量的蒸馏水，离心(2500转，5分钟)，弃上清液，取沉淀，重复5-7次；将处理好的标本移入1.5ml道夫管中，用75％的酒精保存。

下面对处理好的硅藻标本进行封片：

5)将热平板加热到60-70℃，将擦干净的载玻片和盖玻片放在热平板上加热保持干燥；

6)将盛有干净标本的道夫管在磁力振荡器上震荡，使标本沉淀与酒精混合均匀形成悬浊液；

7)用移液枪取10-20μl的悬浊液，均匀涂再盖玻片上，加热干燥20分钟；

8)将载玻片放在加热板上，中间滴一滴Napharx胶，Napharx胶购自英国的Brunel Microscopes Ltd公司；将盖玻片有标本的一面朝下，盖在胶上，轻压盖玻片，使胶慢慢扩散到整张盖片；

9)将封好的玻片放在酒精灯上加热，待胶沸腾并冒出气泡和白色的烟时，移走玻片，静置冷却，即可观察。

将制好的封片在显微镜下观察，使用本方法处理过的标本效果良好，硅藻壳面线纹及其他分类特征清晰，照片对比度大，质量较高。

实施例3：对Naphrax胶进行浸泡后再制备：

1)将装有Naphrax胶的玻璃瓶放在恒温水浴锅中，70℃恒温加热半小时；

2)取Naphrax胶30ml，放入玻璃瓶中，但最好不使用磨口的玻璃瓶；

3)加入12ml甲苯溶液，浸泡3天，胶达到最加粘稠度，即可进行封片。

在对Naphrax胶浸泡后，按照实施例2中的步骤8)和步骤9)进行封片，结果表明，将Naphrax胶进行浸泡后的制片效果更好，所制备的硅藻标本片子相比于Naphrax胶没有浸泡处理所制备的标本具有更好的展开性和对比度。

Claims (3)

1.一种硅藻标本制备方法，其特征在于，包括如下的步骤：

1)取含有硅藻的水样，静置后弃去上清液，得到含有硅藻样品的沉淀；

2)在沉淀中加入浓盐酸，在95～98℃加热2～3小时后，静置弃去上清液，得到沉淀；

3)在步骤2)制备的沉淀中加入浓硝酸，在恒温水浴锅中95～98℃加热4～5小时后，静置弃去上清液，得到沉淀；

4)将步骤3)的沉淀用蒸馏水反复清洗，离心去掉上清液，得到处理好的硅藻样品，用75％的酒精保存；

5)将擦干净的载玻片和盖玻片放在加热板上，在60-70℃加热，保持干燥；

6)将步骤4)保存在75％酒精的硅藻样品震荡，使样品与酒精混合均匀形成悬浊液；

7)将步骤6)的悬浊液取10-20μl均匀涂布到步骤5)处理的盖玻片上，加热干燥20分钟；

8)将载玻片放在加热板上，中间滴一滴Napharx胶，将盖玻片有标本的一面朝下，盖在胶上，轻压盖玻片，使胶慢慢扩散到整张盖片；

9)将封好的玻片放在酒精灯上加热，待胶沸腾并冒出气泡和白色的烟时，移走玻片，静置冷却后完成硅藻标本封片的制备。

2.如权利要求1所述的硅藻标本制备方法，其特征在于所述的Napharx胶进行浸泡后再于封片制备，浸泡步骤如下：

1)将装有Naphrax胶的玻璃瓶放在恒温水浴锅中，70℃恒温加热半小时；

2)再Naphrax胶中加入甲苯溶液，浸泡3天完成Napharx胶的浸泡操作。

3.如权利要求2所述的硅藻标本制备方法，其特征在于所述的步骤2)中Napharx胶和甲苯溶液的体积比为5∶2。