CN107655735B - 一种新型硅藻绝对丰度估算方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种新型硅藻绝对丰度估算方法，具体步骤是：(1)、样品称重；(2)、化学清洗；(3)、圆周振荡：先取一个旋筒，将盖玻片支撑台塞入旋筒，再放入一个盖玻片，注意确保盖玻片放入后保持水平，然后使用透明胶带将旋筒底部小孔密封，依照上述步骤依次处理好12个旋筒，然后将其分别固定在2个旋筒夹具上，再使用塑料扎带将旋筒夹具扎紧，随后将其固定在水平放置的圆周振荡仪上；往每个旋筒中先加入40ml去离子水；本发明采用圆周振荡的方法进行首次运用，样品量仅需约1毫克或更少，从而可以为一些特殊的样品(如纹层沉积物等)的测试分析提供可能，所有步骤均为标准化步骤，从而尽可能地消除人为因素影响。

Description

一种新型硅藻绝对丰度估算方法
技术领域
本发明涉及的是一种新型硅藻绝对丰度估算方法。
背景技术
沉积物中硅藻相对丰度和绝对丰度的变化特征，对古环境与古气候研究均极其重要。迄今为止，国内外提出过各种估算沉积物中硅藻绝对丰度的方法，但这些方法彼此差异明显。此外，现有方法均不同程度地易受人为因素影响，致使全球范围内硅藻绝对丰度对比研究难以开展。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的缺陷和不足，提供了一种新型硅藻绝对丰度估算方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种新型硅藻绝对丰度估算方法，具体步骤是：
1、样品称重；
2、化学清洗；
3、圆周振荡：先取一个旋筒，将盖玻片支撑台塞入旋筒，再放入一个盖玻片，注意确保盖玻片放入后保持水平，然后使用透明胶带将旋筒底部小孔密封，依照上述步骤依次处理好12个旋筒，然后将其分别固定在2个旋筒夹具上，再使用塑料扎带将旋筒夹具扎紧，随后将其固定在水平放置的圆周振荡仪上；往每个旋筒中先加入40ml去离子水，然后开启圆周振荡仪并预设转速200rpm旋转时间6h，当圆周振荡仪开始稳定以200rpm转速旋转后，先空转3min，使旋筒内液体产生一个稳定的涡旋，然后使用巴氏滴管依次将试管内样品转移至各个旋筒内,试管清洗至少3遍以确保将样品从玻璃试管中全部转移至旋筒内，随后每个旋筒上套上一个硅胶套，以防止旋转过程中灰尘进入旋筒，待圆周振荡仪工作6h并自动停止后，旋筒静置12h。
4、固定片制作：使用蠕动泵将旋筒内上层悬浮液抽滤干净,注意控制抽滤速度，需从2000μL/min逐渐下降至500μL/min，待旋筒底部液体高度约1-2cm时停止，然后在保持旋筒水平状态下将旋筒底部小孔处透明胶带撕掉，其旋筒内液体从小孔处缓慢流出，当液面下降至盖玻片以下后，盖玻片将逐渐风干，随后将中空的塑料管从旋筒底部小孔插入旋筒，在保持旋筒水平状态下向上将盖玻片支撑台和盖玻片从旋筒顶部缓慢推出。
采用上述结构后，本发明的有益效果为：
1、样品量仅需约1毫克或更少，从而可以为一些特殊的样品(如纹层沉积物等)的测试分析提供可能。
2、采用圆周振荡的方法进行首次运用。
3、所有步骤均为标准化步骤，从而尽可能地消除人为因素影响。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施方式，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施方式仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
一种新型硅藻绝对丰度估算方法，具体步骤是：
1、样品称重；
2、化学清洗；
3、圆周振荡：先取一个旋筒，将盖玻片支撑台塞入旋筒，再放入一个盖玻片，注意确保盖玻片放入后保持水平，然后使用透明胶带将旋筒底部小孔密封，依照上述步骤依次处理好12个旋筒，然后将其分别固定在2个旋筒夹具上，再使用塑料扎带将旋筒夹具扎紧，随后将其固定在水平放置的圆周振荡仪上；往每个旋筒中先加入40ml去离子水，然后开启圆周振荡仪并预设转速200rpm旋转时间6h，当圆周振荡仪开始稳定以200rpm转速旋转后，先空转3min，使旋筒内液体产生一个稳定的涡旋，然后使用巴氏滴管依次将试管内样品转移至各个旋筒内,试管清洗至少3遍以确保将样品从玻璃试管中全部转移至旋筒内，随后每个旋筒上套上一个硅胶套，以防止旋转过程中灰尘进入旋筒，待圆周振荡仪工作6h并自动停止后，旋筒静置12h。
4、固定片制作：使用蠕动泵将旋筒内上层悬浮液抽滤干净,注意控制抽滤速度，需从2000μL/min逐渐下降至500μL/min，待旋筒底部液体高度约1-2cm时停止，然后在保持旋筒水平状态下将旋筒底部小孔处透明胶带撕掉，其旋筒内液体从小孔处缓慢流出，当液面下降至盖玻片以下后，盖玻片将逐渐风干，随后将中空的塑料管从旋筒底部小孔插入旋筒，在保持旋筒水平状态下向上将盖玻片支撑台和盖玻片从旋筒顶部缓慢推出。
本具体实施方式中圆周振荡工具套件包括圆周振荡仪和若干个旋筒，每个旋筒里面要各放入一个盖玻片支撑台和一个盖玻片(其直径分别为24.3mm和24.0mm)、旋筒夹具(方便将12个旋筒固定到圆周振荡仪上)。
本具体实施方式中使用的是美国SCILOGEX品牌的圆周振荡仪(型号：SK-O330-Pro)，其工作时所有固定在振荡仪上面的旋筒都将产生一个同步的水平方向的圆周运动，摆振幅度固定(旋转直径10mm)，但转速可调(转速范围100-500rpm)。旋筒容积大约为69.6ml，材料为光敏树脂，使用3D打印技术制造而成(内径24.3mm，外径27.3mm，高160.0mm)。在旋筒底部设计有一圆孔(直径5.0mm)，该圆孔的作用有2个，一是方便后面旋筒中液体的排出，二是方便盖玻片的推出(即使用一根中空的塑料管从该圆孔插入，并水平向上将盖玻片支撑台和盖玻片从旋筒顶部推出)。盖玻片支撑台和旋筒夹具也是3D打印而成，使用材料分别是橡胶和光敏树脂。盖玻片支撑台的使用是用来支撑放入旋筒的盖玻片，其直径与旋筒内径完全一致，但由于橡胶具有一定弹性，因此盖玻片支撑台可以插入旋筒并与旋筒紧密贴合。旋筒夹具由两部分组成，其结构类似于一个从中对半切开的试管架。工作时，只要用塑料扎带将两半合在一起，即可以十分稳定地将旋筒固定在圆周振荡仪上。
本具体实施方式中的硅藻固定片的制作与传统方法基本一致，同样使用加拿大树脂封片，但需另外使用一个不锈钢制的盖玻片定位器，以使圆形载玻片和圆形盖玻片中心重合在一起。先在圆形载玻片(直径34.0mm)中央滴1-2滴加拿大树脂，再盖上盖玻片定位器和盖玻片(直径24.0mm)，然后在电热板上加热(150℃)5分钟，随后将固定片从电热板上取下，并在固定片完全冷却前将定位器取下(否则会粘在固定片上)，小心不要移动盖玻片。
本具体实施方式的优点：(1)样品量仅需约1毫克或更少，从而可以为一些特殊的样品(如纹层沉积物等)的测试分析提供可能；(2)圆周振荡方法的首次运用；(3)所有步骤均为标准化步骤，从而尽可能地消除人为因素影响。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (1)

1.一种新型硅藻绝对丰度估算方法，其特征在于：具体步骤是：
(1)、样品称重；
(2)、化学清洗；
(3)、圆周振荡：先取一个旋筒，将盖玻片支撑台塞入旋筒，再放入一个盖玻片，注意确保盖玻片放入后保持水平，然后使用透明胶带将旋筒底部小孔密封，依照上述步骤依次处理好12个旋筒，然后将其分别固定在2个旋筒夹具上，再使用塑料扎带将旋筒夹具扎紧，随后将其固定在水平放置的圆周振荡仪上；往每个旋筒中先加入40ml去离子水，然后开启圆周振荡仪并预设转速200rpm旋转时间6h，当圆周振荡仪开始稳定以200rpm转速旋转后，先空转3min，使旋筒内液体产生一个稳定的涡旋，然后使用巴氏滴管依次将试管内样品转移至各个旋筒内,试管清洗至少3遍以确保将样品从玻璃试管中全部转移至旋筒内，随后每个旋筒上套上一个硅胶套，以防止旋转过程中灰尘进入旋筒，待圆周振荡仪工作6h并自动停止后，旋筒静置12h；
(4)、固定片制作：使用蠕动泵将旋筒内上层悬浮液抽滤干净,注意控制抽滤速度，需从2000μL/min逐渐下降至500μL/min，待旋筒底部液体高度约1-2cm时停止，然后在保持旋筒水平状态下将旋筒底部小孔处透明胶带撕掉，其旋筒内液体从小孔处缓慢流出，当液面下降至盖玻片以下后，盖玻片将逐渐风干，随后将中空的塑料管从旋筒底部小孔插入旋筒，在保持旋筒水平状态下向上将盖玻片支撑台和盖玻片从旋筒顶部缓慢推出。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102507585A (zh) * 2011-11-11 2012-06-20 广州市刑事科学技术研究所 一种基于混合酸消解的法医学硅藻检验方法
CN102499235A (zh) * 2011-11-08 2012-06-20 哈尔滨师范大学 一种硅藻标本制备方法
CN103926189A (zh) * 2014-04-25 2014-07-16 中国科学院南京地理与湖泊研究所 一种基于流式细胞术快速测定富营养化湖泊异养细菌的方法

Patent Citations (3)

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