CN102414561A - 侧流式免疫层析测定设备 - Google Patents
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Abstract
设备包括迁移膜、迁移膜上的结合垫、结合垫上的血浆分离膜、血浆分离膜上的预滤器。迁移膜具有测试线,所述测试线被构造成用于加载对测定靶标具有特异性结合亲和性的一种或多种捕获抗体。迁移膜被构造成允许血浆或血清侧向流动穿过迁移膜到测试线。结合垫被构造成用于加载对测定靶标具有特异性结合亲和性的一种或多种检测抗体。血浆分离膜被构造成允许血浆或血清通过并用于俘获红细胞。预滤器被构造成用于加载包含红细胞以及血浆和血清中之一或两者的测定样品。所述预滤器被构造成允许血浆或血清通过预滤器并使得血浆或血清在预滤器内侧向流动。方法包括提供设备和进行诊断测定循环。
Description
背景
1.发明领域
本发明大体上涉及侧流式免疫层析测定设备。
2.相关技术
已经开发出多种侧流式免疫层析测定设备用于对血液样品进行诊断性测定。侧流式免疫层析测定设备典型地包括在壳体中排列多层材料,所述壳体具有用于引入样品和用于读出测定结果的开口。
对具有有助于改进测定性能能力的结构和应用模式的侧流式免疫层析测定设备有持续的需求。
概述
在实施的实例中,提供这样的设备,其包括迁移膜(migrationmembrane)、迁移膜上的结合垫(conjugate pad)、结合垫上的血浆分离膜(plasma separation membrane)以及血浆分离膜上的预滤器(pre-filter)。所述迁移膜具有测试线(test line),所述测试线被构造成将对测定靶标具有特异性结合亲和性的一种或多种捕获抗体加载到所述测试线上。所述迁移膜被构造成允许血浆或血清侧向流动穿过所述迁移膜到所述测试线。所述结合垫被构造成将对测定靶标具有特异性结合亲和性的一种或多种检测抗体加载到所述结合垫上。所述血浆分离膜被构造成允许血浆或血清通过所述血浆分离膜并用于俘获红细胞。所述预滤器被构造成将包含红细胞以及血浆和血清中之一或两者的测定样品加载到所述预滤器上。此外,所述预滤器被构造成允许血浆或血清通过所述预滤器,并被构造成用于使血浆或血清在所述预滤器内侧向流动。
作为另一个实施的实例,提供一种方法。所述方法包括提供侧流式免疫层析测定设备,所述设备包括迁移膜、迁移膜上的结合垫,结合垫上的血浆分离膜以及血浆分离膜上的预滤器。在所述侧流式免疫层析测定设备中,所述结合垫加载有对测定靶标具有特异性结合亲和性的一种或多种检测抗体;且所述迁移膜具有测试线,所述检测线加载有对测定靶标具有特异性结合亲和性的一种或多种捕获抗体。所述方法进一步包括进行诊断测定循环。在所述诊断测定循环中,将包含红细胞以及血浆和血清中之一或两者的测定样品加载到所述预滤器上。同样在所述循环中,使血浆或血清在所述预滤器中侧向流动并且允许其穿过所述预滤器到所述血浆分离膜。所述诊断测定循环进一步包括使红细胞被俘获在所述血浆分离膜中;并允许血浆或血清穿过所述血浆分离膜到所述结合垫上。此外,所述循环包括允许血浆或血清穿过所述结合垫到所述迁移膜上并且允许血浆或血清侧向流动穿过所述迁移膜到所述测试线。
依据对以下附图和详细描述的分析,对于本领域技术人员来说,本发明的其他设备、方法、特征和优势将是明显的或将变得明显。意在将所有这些另外的设备、方法、特征和优势包含在此描述中、使其包括在本发明的范围内并且使其受所附的权利要求的保护。
附图简述
通过参考以下附图可以更好的理解本发明。图中的所述组件不一定是按比例的,而重点在于图示本发明的原理。此外,在所述图中,类似的附图标记表示在不同的视图中相应的部分。
图1是分解透视图,所述分解透视图图示侧流式免疫层析测定设备的实施的实例。
图2是在图1中显示的所述侧流式免疫层析测定设备沿线A-A截取的横截面视图。
图3是图示方法的实施的实例的流程图。
图4是照片,其显示用于实施实施例A、B和C的所述侧流式免疫层析测定设备。
图5是照片,其显示用于实施实施例D、E、F和G的所述侧流式免疫层析测定设备。
图6是照片,其显示用于实施实施例H、I、J和K的所述侧流式免疫层析测定设备。
图7是照片,其显示用于实施实施例L、M、N和O的所述侧流式免疫层析测定设备。
图8是照片,其显示用于实施实施例P、Q、R和S的所述侧流式免疫层析测定设备。
图9是照片,其显示用于实施实施例T、U、V和W的所述侧流式免疫层析测定设备。
图10是照片,其显示用于实施实施例X、Y、Z和AA的所述侧流式免疫层析测定设备。
图11是照片,其显示用于实施实施例AB、AC、AD和AE的所述侧流式免疫层析测定设备。
图12是照片,其显示用于实施实施例AF、AG、AH和AI的所述侧流式免疫层析测定设备。
图13是照片,其显示用于实施实施例AJ和AK的所述侧流式免疫层析测定设备。
图14是照片,其显示用于实施实施例AL和AM的所述侧流式免疫层析测定设备。
图15是照片,其显示用于实施实施例AN和AO的所述侧流式免疫层析测定设备。
图16是照片,其显示用于实施实施例AP的所述侧流式免疫层析测定设备。
图17是照片,其显示用于实施实施例AQ和AR的所述侧流式免疫层析测定设备。
详述
侧流式免疫层析测定设备可以例如通过将诊断测定样品加载到加载有对测定靶标具有特异性结合亲和性的一种或多种检测抗体的结合垫上来发挥作用。然后所述诊断测定样品可以被侧向携带穿过迁移膜到加载有对测定靶标同样具有特异性结合亲和性的一种或多种捕获抗体的测试线上。如果在所述诊断测定样品中存在足够浓度的测定靶标,那么可检测到的数量的所述检测抗体可以在所述结合垫处与所述测定靶标特异性结合并且然后可以与测定样品一起侧向流动到所述测试线。然后所述测试线处的捕获抗体同样可以与所述测定靶标特异性结合,产生可见标记,所述可见标记构成所述诊断测定的阳性测试结果。例如,可以用显色的标志物诸如胶体金标记检测抗体。当所述测定样品携带足够量的所述检测抗体到所述测试线并且然后足够量的捕获抗体与携带有结合的检测抗体的所述测定靶标在所述测试线处结合时,可以形成可见的显色标记。例如当所述检测抗体标志物是胶体金时,可以形成具有微红色、粉红色或褐色色彩的标记。
所述诊断测定样品可以包括红血球,其在本文中也被称为“红细胞”。例如,所述诊断测定样品可以包括全血,或否则可以包含红细胞以及血浆和血清中之一或两者。例如在进行侧流式免疫层析诊断测定前可以将血浆或血清与红细胞分离从而减少或基本排除由血红蛋白引起的微红色。然而,如果测定样品中的红细胞在侧流式免疫层析测定前或在侧流式免疫层析测定期间破裂,则从破裂的红细胞中释放出的血红蛋白可能使血浆或血清染色。如果被血红蛋白染色的血浆或血清在侧流式免疫层析测定中到达所述测试线,那么血红蛋白在所述测试线处可以形成可见的显色标记,这产生假阳性测定结果。可以通过在进行侧流式免疫层析诊断测定前将红细胞从测定样品中除去来避免这些假阳性结果。例如,将全血离心以除去红细胞,以致待测的测定样品是血浆的形式。此外,也可以将凝血因子除去,以致所测试的测定样品是血清。然而,在一些情况中,可能需要使用包含红细胞以及血浆和血清中之一或两者的测定样品。例如,医务人员可能需要在以下情况进行侧流式免疫层析诊断测定:当不能获得用以将红细胞从全血中除去的设备诸如离心机时,或当需要快速的测验性能以致对等待血浆或血清样品的制备是不可接受的延迟时。例如,医务人员可能需要在远离临床设施的场所,或当患者遭受危急的危及生命的状况时进行侧流式免疫层析诊断测定。
作为另一个实例,缺乏制备血浆或血清样品所需的技能和设备的外行人可能需要使用全血来自行进行侧流式免疫层析测定。此外,这样的外行人还可能缺乏采集来自患者的静脉血所需的设备和技能。此外,外行人可能难以通过指尖切开来采集多于一滴的患者的毛细血管血,特别是如果外行人需要采集自己的血液并在之后对自己的血液进行诊断测定。此外,当这样的外行人在远离专业医务人员的场所处遭受危及生命的状况时,其可能需要自行进行侧流式免疫层析测定。
因此,能够利用包含红细胞以及血浆和血清中之一或两者的小测定样品(诸如全血的最小样品)的侧流式免疫层析测定设备可以在不同的环境中使用。例如这种侧流式免疫层析测定设备可能需要将红细胞与血浆或血清有效地分离从而避免由破裂的红细胞造成的假阳性结果。此外,例如,这种侧流式免疫层析测定设备可能需要有效地将尽可能多的血浆或血清的小样品递送到所述测试线,以致可以利用小测定样品诸如单滴全血来产生定性测定测试结果。
侧流式免疫层析测定设备可以包括血浆分离膜,所述血浆分离膜被构造成允许血浆或血清通过所述血浆分离膜并用于俘获红细胞。在如此俘获红细胞时,所述血浆分离膜可能变得部分阻塞以致妨碍血浆或血清通过所述血浆分离膜向所述测试线流动,这有损侧流式免疫层析测定设备利用具有最小体积的测定样品诸如单滴血液的能力。因此,需要侧流式免疫层析测定设备可以能够利用最小体积的测定样品诸如包含红细胞以及血浆和血清中之一或两者的单滴样品。本文提供这种侧流式免疫层析测定设备以及用于进行侧流式免疫层析测定的方法。
本文所提供的侧流式免疫层析测定设备包括迁移膜、迁移膜上的结合垫、结合垫上的血浆分离膜以及血浆分离膜上的预滤器。所述迁移膜具有测试线,将所述测试线被构造成将对测定靶标具有特异性结合亲和性的一种或多种捕获抗体加载到所述测试线上。所述迁移膜被构造成允许血浆或血清侧向流动穿过所述迁移膜到所述测试线。所述结合垫被构造成将对测定靶标具有特异性结合亲和性的一种或多种检测抗体加载到所述结合垫上。所述血浆分离膜被构造成允许血浆或血清通过所述血浆分离膜并用于俘获红细胞。所述预滤器被构造成将包含红细胞以及血浆和血清中之一或两者的测定样品加载到所述预滤器上。所述预滤器还被构造成允许血浆或血清通过所述预滤器。此外,所述预滤器被构造成使血浆或血清在所述预滤器内侧向流动。所述预滤器可以另外地被构造成使血浆或血清选择性地通过所述预滤器并用于俘获红细胞。所述设备可以被构造成能够使用单滴全血,诸如悬滴,例如,作为测定样品。
在实施例中,所述一种或多种检测抗体和所述一种或多种捕获抗体可以具有对心脏肌钙蛋白-I表位的特异性结合亲和性。所述多种检测抗体可以包括心脏肌钙蛋白-I抗体克隆19C7以及心脏肌钙蛋白-I抗体克隆4C2和M155其中之一或两者。所述多种捕获抗体可以包括心脏肌钙蛋白-I抗体克隆MF4和16A11两者。作为另一个实施例,所述侧流式免疫层析测定设备可以包括第一和第二检测抗体以及第三和第四捕获抗体,所述第一、第二、第三和第四抗体中的每一种都具有对实质上不同的心脏肌钙蛋白-I表位的特异性结合亲和性。贯穿本说明书,当术语“实质上不同”应用于测定靶标的两个表位时,意味着所述两个表位充分地不同从而允许两种抗体通过结合到所述两个表位而同时结合到所述靶标。
以下约定适用于贯穿本说明书使用的有关术语。材料的“层”是指侧流式免疫层析测定设备的任何组件,所述组件粘接或连接到任何其他层体、在任何其他层上形成或沉积或通过其他方式设置在任何其他层上或在所述侧流式免疫层析测定设备的壳体上或壳体内。层可以包括,作为实例的垫料(mat)、表面、膜(film)、箔(foil)、区(region)、体(body)或基底(substrate)。当提到一层或一种材料在另一层或另一个壳体的“上面”、“上方”或“被加载到其上(loaded onto)”时,那么所述层或材料的全部或部分可以直接地在另一层或另一个壳体的全部或部分上并与其接触,或备选地,也可以存在插入层(intervening layer)以致所述一层的全部或部分与在所述一层或一个壳体的“上面”或“上方”的另一层的全部或部分相互不直接接触。当将层表述为“直接地在另一层或另一个壳体上”时,那么将不存在插入层,除非另外指明。当将层表述为在两个其他层“之间”时,那么在所述两个其他层之间还可以存在一个或多个附加的插入层。当提到一层在另一层的“上面”(或“上方”)时,那么所述一层可以覆盖另一层的整个表面或可以只覆盖另一层的一部分。当将材料表述为“加载到层或层的表面上”时,所述材料可以保持在所述层的表面上,或者也可以穿透所述表面进入所述层内,或者可以穿透并穿过所述层。术语诸如“在其上形成”、“布置在其上”、“加载在其上”或“沉积在其上”并非意欲引入关于用于制造层的具体方法的任何限制,除非另外指明。
图1是分解透视图,其图示侧流式免疫层析测定设备100的实施实例。图2是图1中所示的侧流式免疫层析测定设备100沿线A-A截取的横截面视图。侧流式免疫层析测定设备100包括迁移膜102、迁移膜102上的结合垫104、结合垫104上的血浆分离膜106以及血浆分离膜106上的预滤器108。在图1中将侧流式免疫层析测定设备100的这些组件在箭头109的方向上分解。迁移膜102具有测试线110,将测试线110被构造成将对测定靶标(未显示)具有特异性结合亲和性的一种或多种捕获抗体(未显示)加载在测试线110上。如此构造测试线110可以包括用表面111形成迁移膜102,选择表面111从而适于将一种或多种捕获抗体加载和结合到测试线110处的表面111上。迁移膜102还被构造成允许血浆或血清(未显示)侧向流动穿过迁移膜102到测试线110。如此构造迁移膜102可以包括排列结合垫104、迁移膜102和测试线110从而形成在箭头113方向上的通道,所述通道适于允许血浆或血清侧向流动穿过迁移膜102到测试线110。
贯穿本说明书,术语“血浆”是指已经除去了包括红细胞、白细胞和血小板的实体细胞成分的全血成分。贯穿本说明书,术语“血清”是指已经去除了凝血剂(coagulant)和实体细胞成分的全血成分。贯穿本说明书,除非当另外清楚地说明或从上下文很明显的情况,认为所有对“血浆”的提及都是指:“血浆”和“血清”的混合物,以及单独的“血浆”或单独的“血清”。贯穿本说明书,除非当另外清楚地说明时,认为所有对“血浆或血清”的提及都共同地是指和包括:“血浆”、“血清”和“血浆和血清”。
贯穿本说明书,当应用于血浆或血清穿过迁移膜102的流动时,术语“侧向流动”是指侧流式免疫层析测定设备100被构造成允许血浆或血清从结合垫104流动到测试线110。然而,显示在图1-2中的侧流式免疫层析测定设备100的方位是为了图示的目的,而非指明在使用或其他过程中侧流式免疫层析测定设备100相对重力的水平定位或任何其他特殊的定位。
结合垫104在迁移膜102上,结合垫104被构造成将对测定靶标具有特异性结合亲和性的一种或多种检测抗体(未显示)加载到结合垫104上。如此构造的结合垫104可以包括用表面117来构成结合垫104,选择表面117从而适于将一种或多种检测抗体加载到表面117上。例如所述一种或多种检测抗体可以透过表面117并渗入结合垫104中。所述检测抗体可以包括可见的显色标记试剂,诸如作为实例的胶体金颗粒或蓝色乳胶微球。可以使用的具有大约40纳米(nm)平均直径的胶体金颗粒,以及用这种颗粒标记抗体的服务,可以从Arista Biologicals购买到,该公司的办公地址是:1101 Hamilton Street,Allentown,Pennsylvania 18101 USA。血浆分离膜106被构造成允许血浆或血清通过血浆分离膜106并用于俘获红细胞(未显示)。血浆分离膜106可以进一步被构造成使血浆或血清选择性地通过血浆分离膜106。
预滤器108被构造成将包含红细胞以及血浆和血清其中之一或两者的测定样品(未显示)加载到预滤器108上。作为实施例,所述测定样品可以包括全血。在进一步的实施例中,所述测定样品可以包括全血以及血浆和血清其中之一或两者。在另外的实施例中,所述测定样品可以包括血浆和血清其中之一或两者,而不包括血细胞。虽然预滤器108被构造成用于加载包含红细胞的测定样品,但是贯穿本说明书要理解本文公开的所述侧流式免疫层析测定设备可以用于对不包含红细胞而包含血浆和血清其中之一或两者的测定样品进行免疫层析测定。例如,所要使用的测定样品可以是血浆样品或血清样品。
将预滤器108构造成将包含红细胞以及血浆和血清其中之一或两者的测定样品加载到预滤器108上,这样的构造可以包括例如用第一表面120来形成预滤器108,选择第一表面120从而适于将这样的测定样品加载到表面120上。将预滤器108还被构造成允许血浆或血清通过预滤器108并被构造成使血浆或血清在预滤器108内侧向流动。将预滤器108构造成允许血浆或血清的这种通过并用于导致这种侧向流动可以包括,例如选择具有纤维结构(fibrous structure)或具有包括形成在第一表面120和第二表面122之间连通的通道的孔隙的结构的预滤器108。
在实施例中,血浆分离膜106可以具有朝向预滤器108的第一表面112和朝向结合垫104的第二表面114。将血浆分离膜106构造成允许血浆或血清通过血浆分离膜106并用于俘获红细胞可以包括将血浆分离膜106设置成具有纤维结构,或具有包括形成在第一表面112和第二表面114之间连通的通道的孔隙的结构。在另一个实施例中,血浆分离膜106可以包括多个通路115,每个通路115与第一和第二表面112、114两者连通,并且其中多个通路115中的每个具有在第一表面112处的第一开口116和在第二表面114处的第二开口118,第二开口118比第一开口116小。多个通路115中的每个可以具有截头圆锥体形状,在血浆分离膜106内多个通路115彼此侧向间隔开。多个通路115中的每个的截头圆锥体形状可以被构造成用于俘获和固定红细胞。
预滤器108可以具有例如无规(random)结构,所述无规结构被构造成允许测定样品全方向地通过预滤器108,所述测定样品诸如包含全血或否则包含红细胞以及血浆和血清其中之一或两者的测定样品,或包含血浆和血清其中之一或两者的测定样品。预滤器108可以具有无规的纤维结构。预滤器108可以被构造成使得血浆或血清选择性地通过预滤器108并用于俘获红细胞。预滤器108可以被构造成用于从测定样品中俘获最少比例的红细胞,所述最少比例的红细胞至少足以显著减小由红细胞造成的血浆分离膜106的阻塞倾向,因此改善血浆分离膜在俘获红细胞和允许血浆或血清流过血浆分离膜106方面的性能。例如,预滤器108可以被构造成用于从测定样品中俘获至少大约10%或至少大约30%的量的红细胞。预滤器108可以被构造成使得测定样品在预滤器108内基本上侧向流动,所述测定样品诸如包含全血或否则包含红细胞以及血浆和血清其中之一或两者的测定样品,或包含血浆和血清其中之一或两者的测定样品。贯穿本说明书,当其应用于血浆或血清穿过预滤器108的流动时,术语“基本上侧向流动”是指所述血浆或血清经由第二表面122的一部分离开预滤器108,第二表面122的面积比预滤器108的第一表面120的面积多至少大约5%,所述血浆或血清经由第一表面120进入预滤器108。贯穿本说明书,当其应用于包含红细胞的测定样品穿过预滤器108的流动时,术语“基本上侧向流动”是指所述测定样品经由第二表面122的一部分离开预滤器108,第二表面122的面积比预滤器108的第一表面120的面积多至少大约5%,所述测定样品经由第一表面120进入预滤器108。
例如预滤器108可以具有暴露的第一表面120和朝向血浆分离膜106的第二表面122。预滤器108可以具有包括多个通路123的结构,多个通路123具有与第一表面120连通的第一开口124以及与第二表面122连通的第二开口126。预滤器108可以被构造成使得测定样品从第二开口126流出的量大于从第一开口124流出的量,所述测定样品经由第一开口124进入预滤器108,所述测定样品诸如包含全血或否则包含红细胞以及血浆和血清其中之一或两者的测定样品,或包含血浆和血清其中之一或两者的测定样品。预滤器108可以与血浆分离膜106协作从而使输送到结合垫104的所述测定样品的部分大于血浆分离膜106在没有预滤器108时所能够这样输送的部分,所述测定样品诸如包含全血或否则包含红细胞以及血浆和血清其中之一或两者的测定样品。在这点上,预滤器108可以使所述测定样品在血浆分离膜106的第一表面112的扩大部分上侧向地展开。所述测定样品,诸如包含全血或否则包含红细胞以及血浆和血清其中之一或两者的测定样品,然后进入血浆分离膜106的扩大部分,从而允许血浆或血清流过血浆分离膜106并允许在更多数目的通路115中俘获红细胞。因为俘获的红细胞在更多数目的通路115上展开,所以对血浆或血清经过血浆分离膜106的流动的阻塞就相应地减小了。进一步,血浆或血清然后可以以同样方式流动到结合垫104的扩大部分上,从而允许所述检测抗体在扩大的区域上与血浆或血清接触。作为另一个实施例,预滤器108可以具有不对称结构,其中第二开口126之间的平均间隔大于第一开口124之间的平均间隔。
例如,预滤器108和血浆分离膜106可以共同地被构造成用于从测定样品中俘获至少大约90%的量的红细胞。侧流式免疫层析测定设备100可以被构造成用于将来自测定样品的血浆或血清的很大部分输送到迁移膜102。贯穿本说明书要理解术语“很大部分”是指将按体积计至少大约60%的来自测定样品的血浆或血清输送到迁移膜102。例如,侧流式免疫层析测定设备100可以被构造成用于将按体积计大约60%~大约80%的来自测定样品的血浆或血清输送到迁移膜102。侧流式免疫层析测定设备100可以被构造成能够使用单滴全血诸如悬滴,例如作为测定样品。血滴的体积可以在大约20微升(μl)~大约65μl的范围内。血液悬滴的体积可以在大约60μl~大约65μl的范围内。全血的悬滴中的血浆或血清的体积可以在大约32μl~大约42μl的范围内。当测定样品包含血清和血浆其中之一或两者但是不包含红细胞时,可以例如使用在所述范围内的测定样品体积,即大约30μl~大约42μl的体积。
侧流式免疫层析测定设备100可以有能力对全血的小量样品诸如单滴全血进行诊断测定,而不需要在将所述全血样品加载到侧流式免疫层析测定设备100上之前将血浆或血清与红细胞分离。例如,可以不需要在将全血的液滴加载到预滤器108上之前对全血进行离心。因此,侧流式免疫层析测定设备100可以在不能获得用于测定样品的预处理的外置细胞成分分离设备诸如离心机的情况下有助于诊断测定的进行。例如,侧流式免疫层析测定设备100可以适用于作为单机便携式诊断测定设备在远离任何医院或诊所的“野外”使用。使用侧流式免疫层析测定设备100对单滴全血进行诊断测定的能力同样有助于外行人使用侧流式免疫层析测定设备100,外行人可以能够通过使用小刀(lance)进行常规手指穿刺来自行从毛细血管中抽取所需的小量全血样品,并在之后自行进行诊断测定。此外例如,怀疑他或她经历过心脏病发作或正在经历心脏病发作的外行人可以能够使用多个侧流式免疫层析测定设备100来成功地自行实施多次诊断测定,从而在某一时间周期内监测他或她自己的身体状态并将实时的(ongoing)的状态信息提供给远方的心脏病专家。
迁移膜102可以具有纵轴127。血浆分离膜106可以具有正中点(midpoint)128,正中点128切向地位于第一点130沿纵轴127的上方。结合垫104可以具有正中点132,正中点132切向地位于第二点134沿纵轴127的上方,而且其中第二点134比第一点130更接近测试线110。当血浆或血清经过血浆分离膜106到结合垫104然后到迁移膜102上时,正中点130、134的所述相对方位可以用来使血浆或血清的流动偏向迁移膜102。迁移膜102还可以包括对照线136,在对照线136上可以进行对照测试。例如,可以将所选择的能够结合所述检测抗体的抗体加载到对照线136处从而验证适当的检测功能性,所述检测功能性包括所述检测抗体和血浆或血清一起从结合垫104到测试线110的流动。侧流式免疫层析测定设备100可以进一步包括基底138、吸收垫140和壳体142。基底138可以包括用于固定迁移膜102、结合垫104以及基底138上的吸收垫140的粘合层(未显示)。壳体142可以包括用于引入测定样品的开口144和用于读出测定结果的开口146。在实施例中,开口144可以位于预滤器108的正中点147上方的中央。在使用侧流式免疫层析测定设备100以进行测定的过程中,开口144的所述方位可以使测定样品在预滤器108的第一表面120上方的所有方向上展开,从而改善血浆或血清的流动。
当使用侧流式免疫层析测定设备100进行诊断测定时,加载在预滤器108上的测定样品流过预滤器108然后经过血浆分离膜106。将测定样品中的红细胞俘获在血浆分离膜106中;并且也可以俘获在预滤器108上或预滤器108内。如果白细胞和血小板存在于测定样品中,可以将其俘获在血浆分离膜106中;并且也可以俘获在预滤器108上或预滤器108内。然后血浆或血清通过结合垫104。然后加载在结合垫104上的所述检测抗体与靶抗原(如果存在于血浆或血清中)特异性地结合,然后血浆或血清携带结合的检测抗体侧向穿过迁移膜102到测试线110。与特异性地结合靶抗原的检测抗体结合的可见的显色剂被相应地运送到测试线110。然后在测试线110处可以与迁移膜102结合的所述捕获抗体可以与靶抗原(如果存在于血浆或血清中)特异性结合,这有效地使可见的显色剂与测试线110结合。如果靶抗原以可检测到的浓度存在于所述测定样品中,那么这样结合的可见的显色剂的积聚可以在测试线110处形成可见标记,所述可见标记是阳性定性测定结果,其表明靶抗原存在于所述测定样品中。当所述可见的显色剂是胶体金时,作为实例在测试线110处如此形成的可见标记可以具有微红色、粉红色或褐色的外观。
当所述诊断测定发生时,由与特异性结合靶抗原的检测抗体结合的可见的显色剂形成的可见的有色前沿(leading edge)(未显示)移动到测试线110。例如迁移膜102可以被构造成使所述可见的显色剂的前沿以大约2.5分钟每3厘米(min/3cm)~大约3.75min/3cm的范围内的可控速度穿过迁移膜102。可以用如下选择的浓度的膜封闭缓冲液(membrane blockingbuffer)来浸渍迁移膜102:所选择的浓度使得可见的显色剂的前沿以可控速度移动。迁移膜102可以具有如下选择的平均孔径:所选择的平均孔径使得可见的显色剂的前沿以可控速度移动。例如,包括具有大约1微米(μm)~大约250μm的平均孔径的孔隙的迁移膜102可以适用于使可见的显色剂的前沿以可控速度移动。所选择的迁移膜102可以是不带电荷的从而帮助维持可控速度。
通过例如确定血浆或血清经过预滤器108、血浆分离膜106和结合垫104的流速;以及血浆或血清穿过迁移膜102到测试线110的流速可以选择侧流式免疫层析测定设备100的外形尺寸。然后这些流速可以用于确定侧流式免疫层析测定设备100的外形尺寸以致可以在适度的时间周期内进行和在适度的时间周期后完成诊断测定。贯穿本说明书要理解“适度的”时间周期是指少于大约20分钟的时间周期。作为实施例,适度的时间周期可以是大约7分钟~大约20分钟的范围内的时间周期;或大约10分钟~大约15分钟的范围内的时间周期。过于短的测定完成时间周期可能导致不准确的测定测试结果,例如因为血浆或血清可能移动的过快而越过测试线110。如果是那样的话,所述捕获抗体可能不能充分地与血浆或血清中的所述测定靶标结合。过长的检测完成时间周期有损于侧流式免疫层析测定设备100的有效性,并可能导致假阳性结果。例如,这样过长的检测完成时间周期可以使来自测定样品中破裂红细胞的足够的血红蛋白到达测试线110并在那里积聚从而产生可见的线条从而模拟与检测抗体结合的靶抗原的存在。然而,侧流式免疫层析测定设备100也可以使得在在诊断测定结束后延续的延长的时间周期内观察到准确的定性测定结果,这样的延长的时间周期比适度的时间周期长。例如,在延长的时间周期内的任何时间点时,准确的定性测定结果在检查侧流式免疫层析测定设备100时可以保持可见,所述延长的时间周期是在诊断测定开始后的大约7分钟~大约90分钟的范围内。可以进一步根据具体的终端应用来选择侧流式免疫层析测定设备100的合适的外形尺寸,以致可以有效地进行施具体的诊断测定。例如,侧流式免疫层析测定设备100的外形尺寸可以另外考虑检测抗体标记的靶抗原经过结合垫104并穿过迁移膜102到测试线110的流速。
作为实施例,迁移膜102的长度可以在大约22.0毫米(mm)~大约30.0mm的范围内;或是大约25.0mm。贯穿本说明书要理解在侧流式免疫层析测定设备100的实施例中的组件的所有长度尺寸都是在箭头127的方向上限定的。贯穿本说明书还要理解在侧流式免疫层析测定设备100的实施例中的组件的所有尺寸,包括长度、宽度、高度、尺寸间的相对比例以及任何其他尺寸都是以图示为目的的实施例;并且可以制造和使用具有其他尺寸和比例的侧流式免疫层析测定设备100。结合垫104的长度可以在大约9.0mm~大约12.0mm的范围内;或是大约10.0mm。结合垫104可以在大约0.5mm~大约3.5mm的范围内;或是大约2.0mm的长度上与迁移膜102重叠。测试线110可以与结合垫104的后缘148相隔开一定距离,所述距离沿迁移膜102的长度在大约7.0mm~大约12.0mm的范围内;或是大约9.0mm。对照线136可以与结合垫104的后缘148相隔开一定距离,所述距离沿迁移膜102的长度在大约12.0mm~大约20.0mm的范围内;或是大约17.0mm。血浆分离膜106的长度可以是大约11.8mm~大约15.0mm;或是大约13.0mm。预滤器108的长度可以是大约12.5mm~大约15.0mm;或是大约14.0mm。血浆分离膜106的后缘150与预滤器108的后缘152可以例如,沿纵轴127相互对齐并且与后缘148相比距离测试线110稍远。吸收垫140的长度可以是大约19.0mm~大约22.0mm;或是大约20.0mm。吸收垫140的前缘154可以在大约0.5mm~大约2.0mm的范围内;或大约1.0mm的长度上与迁移膜102重叠。结合垫104的后缘148可以与吸收垫140的前缘154相隔开一定距离,所述距离沿迁移膜102的长度为大约21.0mm~大约24.0mm;或是大约22.0mm。基底138的长度可以是大约61.0mm~大约63mm;或是大约62.5mm。迁移膜102可以沿基底138的长度定位以致部分的基底138限定死区(dead space)156。死区156延伸远离结合垫104的前缘158的长度可以是大约8.5mm~大约11.5mm;或是大约10.0mm。死区156可以用于将预滤器108的正中点147定位在相对于壳体142中的开144大致位于沿纵轴127的中央的位置。
侧流式免疫层析测定设备100可以具有在箭头160的方向上限定的宽度和在箭头109的方向上限定的高度。侧流式免疫层析测定设备100的宽度160可以是大约8.0mm~大约8.3mm;或是大约8.2mm。侧流式免疫层析测定设备100在箭头109的方向上的高度可以是大约1.5mm~大约1.8mm;或是大约1.7mm。
预滤器108可以,例如具有在大约355μm~大约508μm的范围内选择的厚度。血浆分离膜106可以,例如具有在大约310μm~大约350μm的范围内选择的厚度,或是大约330μm的厚度。结合垫104可以,例如具有在大约355μm~大约508μm的范围内选择的厚度。迁移膜102可以,例如具有在大约165μm~大约205μm的范围内选择的厚度。吸收垫140可以,例如具有在大约304μm~大约370μm的范围内选择的厚度。包含粘合层的基底138可以,例如具有在大约550μm~大约650μm的范围内选择的厚度。
预滤器108由具有以下结构的材料形成,所述结构适于引起血浆或血清在预滤器108内侧向流动并且同样允许血浆或血清穿过预滤器108。预滤器108可以具有无规结构,所述无规结构对于血浆或血清的流动均是可渗透的并且使得这种侧向流动发生。所述无规结构可以是纤维无规结构。这种材料还可以具有适当大小的孔隙率或纤维密度,所述孔隙率或纤维密度适于俘获存在于测定样品中的一些红细胞。例如预滤器108可以由纤维素玻璃纤维材料(cellulosic glass fiber material)形成。在进一步的实施例中,预滤器108可以由具有等级型号“SMCON64”或“SMCON75”的含有聚乙烯醇粘合剂的硼硅玻璃纤维(borosilicate glass fiber)形成,以上两种型号的材料都商购自Pall Corporation,Pall Corporation的办公地址是:2200 Northern Blvd.,East Hills,New York 11548 USA;www.pall.com。包括SMCON64和SMCON75材料的Pall Corporation长达3页的“ConjugatePads”的产品数据表的全部内容都通过引用结合于此。
血浆分离膜106由具有以下结构的材料形成,所述结构适于允许血浆或血清穿过血浆分离膜106并适于俘获红细胞。例如,血浆分离膜106可以由不对称膜材料形成,所述不对称膜材料在第一表面112上具有大的孔隙116而在第二表面114上具有较小的孔隙118。作为实施例,大孔隙116的直径可以是大约220μm,而小孔隙118的直径可以是大约2.5μm。然后红细胞可以被俘获在大孔隙116中,而血浆或血清经由小孔隙118流出血浆分离膜106。在实施例中,血浆分离膜106可以是由聚砜形成的不对称膜材料并且具有“VividTM Plasma Separation Membrane”的商品名称,所述商品可以商购自Pall Corporation。Pall Corporation长达6页的VividTMPlasma Separation Membrane的产品数据表的全部内容都通过引用结合于此。
结合垫104由具有以下结构的材料形成,所述结构适于将对测定靶标具有特异性结合亲和性的一种或多种检测抗体加载到结合垫104上。例如,所述材料可以具有以下结构,所述结构适于允许或使一种或多种检测抗体透入并渗入结合垫104。结合垫104可以具有无规结构,所述无规结构对于血浆或血清的流动是可渗透的。所述无规结构可以是纤维无规结构。这种材料还可以具有适当大小的孔隙率或纤维密度,所述孔隙率或纤维密度适于从测定样品中俘获任何剩余的红细胞。例如结合垫104可以由纤维素玻璃纤维材料形成。在进一步的实施例中,结合垫104可以由具有等级型号“SMCON64”或“SMCON75”的含有聚乙烯醇粘合剂的硼硅玻璃纤维形成,以上两种型号的材料都可以商购自Pall Corporation。此外,例如,结合垫104可以由具有“FUSION 5TM”的等级型号的纤维材料形成,所述材料可以从Whatman Inc.购得,Whatman Inc.的办公地址是:Building 1,800 Centennial Avenue,Piscataway,New Jersey 08854 USA;www.whatman.com。Whatman Inc.的长达2页的Fusion 5TM材料的产品数据表的全部内容都通过引用结合于此。作为另一个实施例,可以使用由羟基化聚酯(hydroxylated polyester)形成的不含粘合剂和表面活性剂的亲水性纤维材料,所述材料具有大约101克每平方米(g/m2)的基准重量(basisweight)、大约39微升每平方厘米(μl/cm2)的滞留体积(hold-up volume)、大约44秒每3厘米(44sec/3cm)的芯吸水速率(water wicking rate)以及大约38μl/cm2的吸收能力。
作为实施例,形成预滤器108、血浆分离膜106和结合垫104中的每一个的材料可以采取薄板(sheet)、平盘(flat disc)或网(web)的形式。所述材料可以具有高的芯吸水速率从而促进血浆或血清进入并穿过预滤器108、血浆分离膜106以及结合垫104的流动。可以进一步选择形成预滤器108、血浆分离膜106和结合垫104中的每一个的材料从而最小化靶抗原与这种材料的结合;并且可以用膜封闭缓冲液来处理所述材料从而抑制蛋白的结合。在加载到预滤器108之前可以用抗凝血剂诸如肝素盐、柠檬酸盐诸如柠檬酸钠或乙二胺四乙酸(EDTA)盐来处理所述测定样品。备选地,可以用抗凝血剂来处理形成预滤器108的所述材料。此外,形成预滤器108、血浆分离膜106和结合垫104的所述材料可以用适于使这种材料具有亲水性的表面活性剂来处理。
迁移膜102由具有以下结构的材料形成,所述结构适于允许血浆或血清穿过迁移膜102到测试线110的侧向流动。作为实施例,迁移膜102可以由选择为适于使这种侧向流动在选择的时间周期内发生的材料形成。此外,例如,用于形成迁移膜102的材料的结构可以积极地导致血浆或血清的侧向流动的发生,诸如通过毛细管效应或芯吸效应。迁移膜102可以由具有包括通常均匀的芯吸速率、厚度、抗张强度和蛋白质结合水平的结构的材料形成。迁移膜102可以具有通常均匀的表面111,表面111具有最少的刮痕、灰尘和其他不规则物(irregularity)。迁移膜102可以是在垫片(backing)(未显示)上形成的材料的层,其中所述垫片具有足够的抗张强度从而在侧流式免疫层析测定设备100的制造和使用中维持迁移膜102的形状和完整性。例如,迁移膜102可以包括在聚酯垫片上形成的硝化纤维层。此外,迁移膜102可以在无粘合剂的垫片上形成,从而避免在进行测定时所述粘合剂浸出到血浆或血清中。例如,迁移膜102可以由选择为具有至少大约12牛顿的抗张强度的材料形成。可以使用DIN 53 112,第1部分中的测试方案或使用ASTM D 828“Standard Test Method forTensile Properties of Paper and Paperboard UsingConstant-Rate-of-Elongation Apparatus(使用恒定拉伸速率的设备测试纸张和纸板的拉伸性能的标准测试方法)”来测量用于形成宽度是15mm而长度是1,000mm的迁移膜102的材料的样品的抗张强度。在实施例中,迁移膜102可以是具有聚酯垫片的(polyester-backed)硝化纤维膜材料,所述硝化纤维膜材料具有大约150sec/4cm~大约225sec/4cm的芯吸速度、至少大约12牛顿的抗张强度和大约45微克每平方厘米(μg/cm2)~大约59μg/cm2的蛋白质结合(牛血清白蛋白)速率,所述硝化纤维膜材料以“VividTM 170 Lateral Flow Nitrocellulose Membrane”的商品名称由PallCorporation出售。Pall Corporation长达4页的VividTM 170 Lateral FlowNitrocellulose Membrane(侧流式硝化纤维膜)的产品数据表的全部内容都通过引用结合于此。迁移膜102可以用膜封闭缓冲液浸渍。可以用适于使迁移膜102具有亲水性的表面活性剂来处理迁移膜102。
基底138可以由具有以下结构的材料形成,所述结构适于物理支撑预滤器108、血浆分离膜106、结合垫104、迁移膜102和吸收垫140,并适于将侧流式免疫层析测定设备100的这些组件在壳体142内保持就位。例如,基底138可以由诸如耐冲性聚苯乙烯(high impact polystyrene)板的刚性板材(rigid sheet material)形成,所述耐冲性聚苯乙烯板的厚度是大约500μm并包括粘合层。这种具有“L-H50”的等级型号并包括丙烯酸类粘合层的适于形成基底138的材料可以从Advanced Microdevices Pvt.Ltd.购得,Advanced Microdevices Pvt.Ltd.的办公地址是:20-21 Industrial Area,Ambala Cantt 133 006,INDIA;www.mdimembrane.com。包括L-H50材料的数据表信息的Advanced Microdevices Pvt.Ltd.产品目录的“Lateral FlowTest(侧向流动测试)”章节(第2-5页)的全部内容都通过引用结合于此。
吸收垫140可以由具有以下结构的材料形成,所述结构适于具有高的吸收性,并产生芯吸效应从而促进血浆或血清侧向流动穿过迁移膜102到测试线110的。例如,吸收垫140可以由纤维素纤维材料形成。这种具有3μm标称孔径(nominal pore size)、大约330.2μm厚度和大约186.3g/m2基准重量的适于形成吸收垫140的纤维素材料可以以“BSP113PK CelluloseAbsorbent 113”的等级型号从Pall Corporation购得。包括BSP113PKCellulose Absorbent 113相关信息的Pall Corporation长达2页的“CelluloseAbsorbent Papers”产品数据表的全部内容都通过引用结合于此。
壳体142可以由适于制造用于侧流式免疫层析测定设备100的刚性保护容器的材料形成。例如,可以使用有机聚合材料。
在侧流式免疫层析测定设备100的实施例中,结合垫104上的所述一种或多种检测抗体可以具有对心脏肌钙蛋白-I表位的特异性结合亲和性。所述多种检测抗体可以包括心脏肌钙蛋白-I抗体克隆19C7以及心脏肌钙蛋白-I抗体克隆4C2和M155其中之一或两者。此外,例如,侧流式免疫层析测定设备100可以包括在测试线110上的具有对心脏肌钙蛋白-I表位的特异性结合亲和性的一种或多种捕获抗体。所述多种捕获抗体可以包括心脏肌钙蛋白-I抗体克隆MF4和心脏肌钙蛋白-I抗体克隆16A11两者。作为进一步的实施例,所述检测抗体和捕获抗体可以对处于以下形式的心脏肌钙蛋白-I具有特异性结合亲和性:游离形式、或片段形式(fragmentedform)、或磷酸化形式、或被蛋白酶部分消化的形式,或作为与肌钙蛋白-T和肌钙蛋白-C其中之一或两者形成的复合物(诸如心脏肌钙蛋白-ITC复合物)的一部分。所述检测抗体和捕获抗体可以具有对人心脏肌钙蛋白-I表位的特异性结合亲和性。用于定性检测在包括全血的测定样品中的心脏肌钙蛋白-I的侧流式免疫层析测定设备100的灵敏度阈值可以是例如大约0.001微克/毫升(μg/ml)(相当于大约1.0纳克每毫升(ng/ml))的处于以下形式的心脏肌钙蛋白-I:游离形式、或片段形式、或磷酸化形式、或被蛋白酶部分消化的形式,或作为与肌钙蛋白-T和肌钙蛋白-C其中之一或两者形成的复合物(诸如心脏肌钙蛋白-ITC复合物)的一部分。作为另一个实施例,侧流式免疫层析测定设备100可以包括在结合垫104上的第一和第二检测抗体,其中侧流式免疫层析测定设备100可以包括在测试线110上的第三和第四捕获抗体,并且其中所述第一、第二、第三和第四抗体中的每一种都具有对实质上不同的心脏肌钙蛋白-I表位的特异性结合亲和性。作为实施例,所述第一抗体可以是心脏肌钙蛋白-I抗体克隆19C7,所述第二抗体可以选自心脏肌钙蛋白-I抗体克隆4C2和M155,所述第三抗体可以是心脏肌钙蛋白-I抗体克隆MF4,而所述第四抗体可以是心脏肌钙蛋白-I抗体克隆16A11。
包括克隆19C7、4C2、M155、MF4和16A11的合适的心脏肌钙蛋白-I抗体克隆可以以4T21的等级名称从HyTest Ltd.和Abcam plc购得,HyTest Ltd.的办公地址是:Intelligate,Joukahaisenkatu 6,20520 Turku,Finland(www.hytest.fi);而Abcam plc的办公地址是332 Cambridge SciencePark,Cambridge CB4 0WN,England(www.abcam.com)。此外可以使用的心脏肌钙蛋白-I抗体公开在由HyTest Ltd.出版的“心血管疾病和代谢综合症的标志物-II肌钙蛋白特异性抗体”(pp.14-22,2009)中,所述资料可以从以下网址下载:http://www.hytest.fi/data_sheets/Markers%20of%20Cardiovascular%20Diseas es%20and%20Metabolic%20Syndrome.pdf,所述资料的全部内容通过引用结合于此。所获得的肌钙蛋白-I的检测抗体和捕获抗体可以进一步由它们的缓冲液稀释,诸如含有叠氮化钠的磷酸盐缓冲液(PBS)。可以使用处于以下形式的骨骼肌钙蛋白-I作为阴性对照:游离形式、片段形式或作为与肌钙蛋白-T和肌钙蛋白-C其中之一或两者形成的复合物的一部分。可以通过进行使用包含骨骼肌钙蛋白-I的测定样品的试验来筛选被选择用于心脏肌钙蛋白-I测定中的检测抗体和捕获抗体从而排除与骨骼肌钙蛋白-I的交叉反应性。处于游离形式、片段形式或作为与肌钙蛋白-T和肌钙蛋白-C其中之一或两者形成的复合物的一部分的心脏肌钙蛋白-I可以作为阳性对照包括在所进行的试验中使用的测定样品中以验证所选的心脏肌钙蛋白-I的检测抗体和捕获抗体的结合活性的灵敏性和特异性。合适的人心脏肌钙蛋白-ITC复合物可以以“8T62”的等级名称从HyTest Ltd.购得,其由AACC cTnI Standardization Subcommitee for international referencematerial(国际参考材料标准化小组委员会)选择。合适的人心脏肌钙蛋白-I可以以“8T53”的等级名称从HyTest Ltd.购得。不含肌钙蛋白-I的血清可以用作另一个阴性对照。由免疫亲和层析纯化的合适的不含肌钙蛋白-I的血清可以以“8TFS”的等级名称从HyTest Ltd.购得。
在加载到预滤器108之前可以用抗凝血剂诸如肝素盐、柠檬酸盐诸如柠檬酸钠或EDTA盐来预处理待测的测定样品,从而防止测定样品在进行诊断测定时凝结。例如,可以使用涂有抗凝血剂的吸液管或试管。备选地,可以使用抗凝血剂处理形成预滤器108的材料。作为实施例,侧流式免疫层析测定设备100可以用于定性检测浓度为大约1ng/ml~至少大约2,000ng/ml的心脏肌钙蛋白-I。
图3是图示方法300的实施的实例的流程图。方法300开始于步骤305,然后是步骤310,步骤310包括提供侧流式免疫层析测定设备100,侧流式免疫层析测定设备100包括迁移膜102、迁移膜102上的结合垫104、结合垫104上的血浆分离膜106以及血浆分离膜106上的预滤器108;其中结合垫104加载有对测定靶标具有特异性结合亲和性的一种或多种检测抗体;并且其中迁移膜102具有测试线110,测试线110加载有对测定靶标具有特异性结合亲和性的一种或多种捕获抗体。步骤310可以进一步包括提供具有前面结合图1-2讨论的更多特征中的任一个的侧流式免疫层析测定设备100。步骤315包括将包含红细胞以及血浆和血清其中之一或两者的测定样品加载到预滤器108上。除了红细胞以外,所述测定样品还可以包括单独的血浆或单独的血清,或在一起的血浆和血清。步骤320包括使血浆或血清在预滤器108内侧向流动并允许血浆或血清穿过预滤器108到血浆分离膜106。步骤325包括使红细胞被俘获在血浆分离膜106内并允许血浆或血清穿过血浆分离膜106并流向结合垫104。步骤330包括允许血浆或血清穿过结合垫104然后流到迁移膜102上并侧向流动穿过迁移膜102到测试线110。步骤315、320、325和330共同限定了诊断测定循环335。之后方法300可以结束于步骤340。
在实施例中,步骤315可以包括在将测定样品加载到预滤器108上后将追踪缓冲液(chase buffer)加载到预滤器108上,并且步骤330可以包括使得追踪缓冲液增强血浆或血清穿过迁移膜102到测试线110的侧向流动。作为实施例,所述追踪缓冲液可以包括牛血清清蛋白(BSA)。此外,例如,包含非离子型去垢剂和防腐剂诸如叠氮化钠的缓冲盐水溶液可以用作所述追踪缓冲液。作为实施例,pH为7.2的追踪缓冲液可以包含:10mM4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)、135mM NaCl、1%w/v BSA和50毫升每升(mL/L)吐温20。作为另一个实施例,pH为7.8的追踪缓冲液可以包含:在Tris缓冲盐水(Tris-buffered saline)中的0.5%聚(乙二醇)、0.5%BSA、0.1%吐温20和0.1%MgCl2。作为另外的实施例,追踪缓冲液可以包含0.15M的NaCl和0.015M的柠檬酸钠,并添加有1.4%的TritonX-100和0.1%的十二烷基硫酸钠。
步骤320可以进一步包括使血浆或血清选择性地通过预滤器108,并使红细胞被俘获在预滤器108上或预滤器108中。在步骤330中的使血浆或血清穿过迁移膜102到测试线110的侧向流动可以包括使结合到所述检测抗体的可见的显色剂的前沿以可控速度被输送穿过迁移膜102,诸如大约2.5min/3cm~大约3.75min/3cm的范围内的可控速度。
作为实施例,步骤310可以包括制造或获得还未加载有所述检测抗体或还未加载有所述捕获抗体或还未加载有所述检测抗体和捕获抗体的侧流式免疫层析测定设备100,以及在之后将上述抗体提供和加载到侧流式免疫层析测定设备100上。在另一个实施例中,步骤310可以包括提供一种或多种对心肌肌钙蛋白-I表位具有特异性结合亲和性的检测抗体,并且可以包括提供一种或多种对心肌肌钙蛋白-I表位具有特异性结合亲和性的捕获抗体。所述多种检测抗体可以包括心脏肌钙蛋白-I抗体克隆19C7以及心脏肌钙蛋白-I抗体克隆4C2和M155其中之一或两者。所述多种捕获抗体可以包括心脏肌钙蛋白-I抗体克隆MF4和16A11。
在另一个实施例中,在步骤310中提供侧流式免疫层析测定设备100可以包括将第一和第二检测抗体加载到结合垫104上以及将第三和第四捕获抗体加载到测试线110上;其中所述第一、第二、第三和第四抗体中的每一种都具有对实质上不同的心脏肌钙蛋白-I表位的特异性结合亲和性。例如,所述第一抗体可以是心脏肌钙蛋白-I抗体19C7,所述第二抗体可以选自心脏肌钙蛋白-I抗体克隆4C2和M155,所述第三抗体可以是心脏肌钙蛋白-I抗体克隆MF4,而所述第四抗体可以是心脏肌钙蛋白-I抗体克隆16A11。
方法300的步骤315可以包括使用包含全血的测定样品。所述测定样品可以是单滴全血,诸如悬滴。方法300可以包括从怀疑最近已经遭受或目前正在遭受心肌梗塞(也被称为心脏病发作)的人类患者采集的全血。
在另一个实施例中,方法300可以包括:从同一人类患者采集的包含全血或否则包含红细胞以及血浆和血清其中之一或两者的另一个测定样品;重复步骤310以提供另一个侧流式免疫层析测定设备100,并且使用所述另一个测定样品和所述另一个侧流式免疫层析测定设备100来进行另一个诊断测定循环335。
实施例
在以下的每个实施例中,均制造侧流式免疫层析测定设备100。每一个所述设备100都包括基底138、在基底138上的迁移膜102、在迁移膜102上的结合垫104、在结合垫104上的血浆分离膜106和在血浆分离膜106上的预滤器108。在每一个侧流式免疫层析测定设备100中的预滤器108和结合垫104都由包括含有聚乙烯醇粘合剂的硼硅玻璃纤维的材料形成,所述材料以SMCON64的等级型号获自Pall Corporation。在每一个设备100中的血浆分离膜106都由同样从Pall Corporation获得的具有商品名“VividTM Plasma Separation Membrane”的聚砜材料形成。在每一个设备100中的迁移膜102都由从Pall Corporation获得的具有商品名“VividTM170 Lateral Flow Nitrocellulose Membrane”的具有聚酯垫片的硝化纤维膜材料形成。每个迁移膜102都包括规定的测试线110,测试线110加载有1.4μl的分散体,所述分散体包含在含有2.5%v/v(2.5毫升每100毫升)异丙醇的20毫摩尔(mM)磷酸钠缓冲液中的等量的鼠源性心脏肌钙蛋白-I抗体克隆MF4和16A11,所述两种抗体克隆的浓度都是0.9mg/ml。将迁移膜102浸渍以膜封闭缓冲液分散体中,所述膜封闭缓冲液分散体包含0.01M Na2HPO4、0.5%w/v(克每100毫升)BSA、0.1%w/v吐温20、0.5%v/v聚乙烯吡咯烷酮、0.06M蔗糖和0.05M NaCl。基底138由从AdvancedMicrodevices Pvt.Ltd.获得的L-H50形成。每个结合垫104都加载有48μl分散体,所述分散体包含在含有5%w/v蔗糖、1.25%w/v海藻糖、0.01M十水四硼酸钠、1%v/v聚乙酸乙烯酯、0.2%w/v Tween20和0.2%w/vTriton-X 100的pH 7.3的稀释载体(dilution vehicle)中的等量的40nm胶体金缀合的(10μg/ml)的鼠源性心脏肌钙蛋白-I抗体克隆19C7和4C2,所述两种抗体克隆的浓度都是3个光密度单位。每个迁移膜102还都包括规定的内部对照线136,对照线136加载有1.4μl分散体,所述分散体包含在磷酸钠缓冲液中的山羊抗鼠抗体从而验证适当的测定功能性。每个设备100还都包括由纤维素纤维材料形成的吸收垫140。将每个侧流式免疫层析测定设备100的以上确定的组件装配在一起从而形成如图1-2所示的结构,并且将所述结构固定在也在图1-2中所示的壳体142中。通过将侧流式免疫层析测定设备100的这些组件适度地压缩在壳体142的上半部和下半部之间从而将它们一起保持就位。
然后将每个侧流式免疫层析测定设备100都用于进行检测人心脏肌钙蛋白-ITC复合物的定性测定。通过从含有肝素锂盐的试管中吸取添加有表1中指示的以ng/ml计的浓度的人心脏肌钙蛋白-ITC复合物的具有悬滴体积的全血样品来制备每个测定样品。将每个测定样品都经由壳体142中的开口加载到预滤器108上,之后立即加入100μl追踪缓冲液。所述人心脏肌钙蛋白-ITC复合物从HyTest Ltd.获得,其具有8T62的等级名称。在加载血液悬滴加载后在表1中所示的经过时间周期(elapsed time period)时拍摄显示其测试线110和对照线136的侧流式免疫层析测定设备100的照片。所述结果概述于表1中并显示在图4-17中。在图4-17中的每张照片中,显示在所述照片中的所有侧流式免疫层析测定设备100的测试线110和对照线136都以同样的方向相互定位。在实施例K、S和AI中对照线136在测试线110的左边;而在实施例AK中对照线136在测试线110的上方。如在图4-17显示的清晰的(vivid)对照线证实了在所述的每个实施例中所述检测抗体都被运送到了测试线110。
使用包含1ng/ml浓度的人心脏肌钙蛋白-ITC复合物的具有悬滴体积的全血的测定样品的实施例B,在大约15分钟的测试经过时间周期(elapsed test time period)后显示微弱的阳性测试线。使用包含5ng/ml浓度的人心脏肌钙蛋白-ITC复合物的具有悬滴体积的全血的测定样品的实施例C,在同样的测试经过时间周期后显示清楚可见的阳性测试线。作为阴性对照并使用具有悬滴体积的人全血且不添加任何加入的心脏肌钙蛋白-ITC复合物的测定样品在同样的测试经过时间周期内进行的实施例A,不产生假阳性测试线。
使用包含1ng/ml浓度的人心脏肌钙蛋白-ITC复合物的具有悬滴体积的全血的测定样品的实施例E,在大约10分钟的测试经过时间周期后显示微弱的阳性测试线。实施例I、M、Q、U、Y、AC和AG分别显示所述微弱的阳性测试线在11、12、15、20、25、35和70分钟的总测试经过时间周期后仍然可见。使用包含5ng/ml浓度的人心脏肌钙蛋白-ITC复合物的具有悬滴体积的全血的测定样品进行实施例F、J、N、R、V、Z、AD和AH中的每一个,它们都产生明显可见的(clearly visible)阳性测试线。使用包含25ng/ml浓度的人心脏肌钙蛋白-ITC复合物的具有悬滴体积的全血的测定样品进行实施例G、K、O、S、W、AA、AE和AI中的每一个,它们都产生清晰的阳性测试线。作为阴性对照并且使用具有悬滴体积的人全血且不添加任何加入的心脏肌钙蛋白-ITC复合物的测定样品进行的实施例D、H、L、P、T、X、AB或AF中没有一个产生任何假阳性测试线。
实施例AJ-AO使用具有足以产生具有可见的微红色的血浆的浓度的溶血红细胞的人全血来进行。作为阴性对照且使用具有悬滴体积的人全血且不添加任何加入的心脏肌钙蛋白-ITC复合物的测定样品进行的实施例AJ,在大约15分钟的测试经过时间周期后不产生假阳性测试线。作为阳性对照的每个都使用包含1ng/ml浓度的人心脏肌钙蛋白-ITC复合物的具有悬滴体积的全血的测定样品的实施例AK和AL,在大约15分钟的测试经过时间周期后显示微弱的阳性测试线。每个都使用包含5ng/ml浓度的人心脏肌钙蛋白-ITC复合物的具有悬滴体积的全血的测定样品的实施例AM和AN,在大约15分钟的测试经过时间周期后显示明显可见的阳性测试线。使用包含25ng/ml浓度的人心脏肌钙蛋白-ITC复合物的具有悬滴体积的全血的测定样品的实施例AO,在大约15分钟的测试经过时间周期后显示清晰的阳性测试线。
使用包含1,000ng/ml(相当于1μg/ml)浓度的人心脏肌钙蛋白-ITC复合物的具有悬滴体积的全血的测定样品的实施例AP,在大约2分钟的测试经过时间周期后显示非常清晰的阳性测试线。
在实施例AQ和AR中的每一个中,通过吸取添加有人骨骼肌钙蛋白-I而不是人心脏肌钙蛋白ITC复合物的具有悬滴体积的全血样品来制备测定样品。在实施例AQ和AR中使用的人骨骼肌钙蛋白-I的浓度分别是25ng/ml和1,000ng/ml。实施例AQ和AR在大约15分钟的测试经过时间周期后都不产生假阳性测试线。
表1
要理解方法300可以包括制造、获得或者另外提供具有在本说明书所讨论的侧流式免疫层析测定设备100的实施例中包含的任一特征的侧流式免疫层析测定设备100。要进一步理解本文对侧流式免疫层析测定设备100的讨论说明了方法300的适当的变化形式。同样要理解本文对方法300的讨论说明了侧流式免疫层析测定设备100的适当的变化形式。因此认为对侧流式免疫层析测定设备100的全部讨论被并入到对方法300的讨论中。此外,认为对方法300的全部讨论被并入到对侧流式免疫层析测定设备100的讨论中。
可以在进行用于检测靶抗原的定性夹心免疫测定(sandwichimmunoassay)中使用侧流式免疫层析测定设备100,所述靶抗原可以存在于包含全血,或否则包含红细胞以及血浆和血清其中之一或两者的测定样品中;或存在于包含血浆和血清其中之一或两者但不包含红细胞的测定样品中。这种靶抗原的实例包括蛋白质、病毒、细菌、微生物、滥用的药物以及人的和非人的血液、血浆或血清的其他正常和异常成分。
虽然上述描述涉及侧流式免疫层析测定设备100的一些实例,但要理解所述主题并不限于这些设备或在本说明书中讨论的设备。可以制造具有与上述教导相符的其他构造的设备。此外,要理解方法300可以包括附加步骤和所示步骤的改型。要理解给出上述对众多实施例的描述的目的是在于说明和描述。此描述不是穷尽的而且并不将所要求保护的发明限制到所公开的确定形式。根据以上描述,改型和变型是可能的或者可以从对本发明的实践中获得。权利要求及其等效形式限定本发明的范围。
Claims (36)
1.一种设备,所述设备包括:
迁移膜,所述迁移膜具有测试线,所述测试线被构造成用于将对测定靶标具有特异性结合亲和性的一种或多种捕获抗体加载到所述测试线上,所述迁移膜被构造成允许血浆或血清侧向流动穿过所述迁移膜到所述测试线;
所述迁移膜上的结合垫,所述结合垫被构造成将对测定靶标具有特异性结合亲和性的一种或多种检测抗体加载到所述结合垫上;
所述结合垫上的血浆分离膜,所述血浆分离膜被构造成允许血浆或血清通过所述血浆分离膜并用于俘获红细胞;以及
所述血浆分离膜上的预滤器,所述预滤器被构造成用于将包含红细胞以及血浆和血清中之一或两者的测定样品加载到所述预滤器上,所述预滤器被构造成允许血浆或血清通过所述预滤器并被构造成使血浆或血清在所述预滤器内侧向流动。
2.权利要求1所述的设备,其中所述血浆分离膜具有朝向所述预滤器的第一表面和朝向所述结合垫的第二表面,其中所述血浆分离膜包括多个通路,所述多个通路中的每个通路与所述第一和第二表面两者连通,并且其中所述多个通路中的每个通路具有在所述第一表面上的第一开口和在所述第二表面上的第二开口,所述第二开口小于所述第一开口。
3.权利要求2所述的设备,其中所述多个通路中的每个通路具有截头圆锥体形状,所述多个通路在所述血浆分离膜内彼此侧向间隔开。
4.权利要求3所述的设备,其中所述多个通路中的每个通路的截头圆锥体形状被构造成用于俘获和固定红细胞。
5.权利要求1所述的设备,其中所述预滤器具有无规结构,所述无规结构被构造成允许血浆或血清全方向地通过所述预滤器。
6.权利要求1所述的设备,其中所述预滤器具有无规的纤维结构。
7.权利要求1所述的设备,其中所述预滤器被构造成使血浆或血清选择性地通过所述预滤器并用于俘获红细胞。
8.权利要求7所述的设备,其中所述预滤器被构造成用于从测定样品中俘获至少大约10%的量的红细胞。
9.权利要求1所述的设备,其中所述预滤器具有暴露的第一表面和朝向所述血浆分离膜的第二表面,其中所述预滤器具有不对称结构,所述不对称结构包括多个通路,所述多个通路中的每个通路具有与所述第一表面连通的第一开口和与所述第二表面连通的第二开口,并且其中所述第二开口之间的平均间隔大于所述第一开口之间的平均间隔。
10.权利要求1所述的设备,其中所述预滤器和所述血浆分离膜共同地被构造成用于从测定样品中俘获至少大约90%的量的红细胞。
11.权利要求1所述的设备,其中所述设备被构造成用于将来自测定样品的按体积计大约60%~按体积计大约80%的血浆或血清输送到所述迁移膜。
12.权利要求11所述的设备,所述设备包括将所述设备被构造成能够使用单滴全血作为所述测定样品。
13.权利要求1所述的设备,其中所述迁移膜具有纵轴,其中所述血浆分离膜具有切向地位于第一点沿所述纵轴上方的正中点,其中所述结合垫具有切向地位于第二点沿所述纵轴上方的正中点,并且其中所述第二点比所述第一点更接近所述测试线。
14.权利要求1所述的设备,其中所述检测抗体包括结合可见的显色试剂,并且其中所述迁移膜被构造成使所述可见的显色剂的前沿以大约2.5分钟每3厘米~大约3.75分钟每3厘米的范围内可控速度被输送穿过所述迁移膜。
15.权利要求14所述的设备,其中用被选择用于使血浆或血清以可控速度输送的浓度的膜封闭缓冲液来浸渍所述迁移膜。
16.权利要求14所述的设备,其中所述迁移膜具有平均孔径,所述平均孔径被选择用于使血浆或血清以可控速度输送。
17.权利要求14所述的设备,其中所述迁移膜不带电荷。
18.权利要求1所述的设备,其中所述一种或多种检测抗体具有对心脏肌钙蛋白-I表位的特异性结合亲和性。
19.权利要求18所述的设备,其中所述多种检测抗体包括心脏肌钙蛋白-I抗体克隆19C7以及心脏肌钙蛋白-I抗体克隆4C2和M155其中之一或两者。
20.权利要求1所述的设备,其中所述设备包括在所述测试线上的一种或多种捕获抗体,所述一种或多种捕获抗体具有对心脏肌钙蛋白-I表位的特异性结合亲和性。
21.权利要求20所述的设备,其中所述多种捕获抗体包括心脏肌钙蛋白-I抗体克隆MF4和心脏肌钙蛋白-I抗体克隆16A11。
22.权利要求1所述的设备,其中所述设备包括在所述结合垫上的第一和第二检测抗体,其中所述设备包括在所述测试线上的第三和第四捕获抗体,并且其中所述第一、第二、第三和第四抗体中的每种抗体具有对实质上不同的心脏肌钙蛋白-I表位的特异性结合亲和性。
23.权利要求22所述的设备,其中所述第一抗体是心脏肌钙蛋白-I抗体19C7,所述第二抗体选自心脏肌钙蛋白-I抗体克隆4C2和M155,所述第三抗体是心脏肌钙蛋白-I抗体克隆MF4,而所述第四抗体是心脏肌钙蛋白-I抗体克隆16A11。
24.一种方法,所述方法包括:
提供侧流式免疫层析测定设备,所述侧流式免疫层析测定设备包括迁移膜、所述迁移膜上的结合垫、所述结合垫上的血浆分离膜以及所述血浆分离膜上的预滤器;其中所述结合垫加载有对测定靶标具有特异性结合亲和性的一种或多种检测抗体;并且其中所述迁移膜具有测试线,所述测试线加载有对所述测定靶标具有特异性结合亲和性的一种或多种捕获抗体;以及进行诊断测定循环,所述诊断测定循环包括:
将包含红细胞以及血浆和血清中之一或两者的测定样品加载到所述预滤器上;
使血浆或血清在所述预滤器中侧向流动并且允许血浆或血清穿过所述预滤器到所述血浆分离膜;
使红细胞在所述血浆分离膜中被俘获并允许血浆或血清穿过所述血浆分离膜到所述结合垫上;以及
允许血浆或血清穿过所述结合垫到所述迁移膜上并且允许血浆或血清侧向流动穿过所述迁移膜到所述测试线。
25.权利要求24所述的方法,所述方法包括使红细胞在所述预滤器上被俘获并使血浆或血清选择性地通过所述预滤器。
26.权利要求24所述的方法,所述方法包括在将所述测定样品加载到所述预滤器上后将追踪缓冲液加载到所述预滤器上,并且使所述追踪缓冲液增强血浆或血清穿过所述迁移膜到所述测试线的侧向流动。
27.权利要求24所述的方法,其中所述检测抗体包括结合可见的显色剂,并且其中允许血浆或血清侧向流动穿过所述迁移膜到所述测试线包括使所述可见的显色剂的前沿以大约2.5分钟每3厘米~大约3.75分钟每3厘米的范围内的可控速度被输送穿过所述迁移膜。
28.权利要求24所述的方法,其中所述一种或多种检测抗体具有对心脏肌钙蛋白-I表位的特异性结合亲和性,并且其中所述一种或多种捕获抗体具有对心脏肌钙蛋白-I表位的特异性结合亲和性。
29.权利要求28所述的方法,其中所述多种检测抗体包括心脏肌钙蛋白-I抗体克隆19C7以及心脏肌钙蛋白-I抗体克隆4C2和M155中之一或两者。
30.权利要求28所述的方法,其中所述多种捕获抗体包括心脏肌钙蛋白-I抗体克隆MF4和16A11。
31.权利要求27所述的方法,其中提供所述侧流式免疫层析测定设备包括将第一和第二检测抗体加载到所述结合垫上并且将第三和第四捕获抗体加载到所述测试线上;并且其中所述第一、第二、第三和第四抗体中的每种抗体具有对实质上不同的心脏肌钙蛋白-I表位的特异性结合亲和性。
32.权利要求31所述的方法,其中所述第一抗体是心脏肌钙蛋白-I抗体克隆19C7,所述第二抗体选自心脏肌钙蛋白-I抗体克隆4C2和M155,所述第三抗体是心脏肌钙蛋白-I抗体克隆MF4,而所述第四抗体是心脏肌钙蛋白-I抗体克隆16A11。
33.权利要求24所述的方法,其中所述测定样品包括全血。
34.权利要求33所述的方法,其中所述测定样品是单滴全血。
35.权利要求33所述的方法,其中所述方法包括采集来自怀疑最近已遭受或目前正遭受心肌梗塞的人类患者的全血。
36.权利要求35所述的方法,所述方法包括采集包含来自所述人类患者的全血的另一个测定样品,提供另一个侧流式免疫层析测定设备,以及使用所述另一个测定样品和所述另一个侧流式免疫层析测定设备来进行另一个诊断测定循环。
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---|---|
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---|---|---|---|
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---|---|
US (1) | US20110076697A1 (zh) |
EP (1) | EP2425247A4 (zh) |
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IL (1) | IL215894A0 (zh) |
WO (1) | WO2010129302A1 (zh) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103212454A (zh) * | 2012-01-20 | 2013-07-24 | 奥索临床诊断有限公司 | 具有可控样品大小的测定装置 |
CN105021809A (zh) * | 2014-04-16 | 2015-11-04 | 万冰 | 一种便携式检测装置 |
CN105137065A (zh) * | 2015-07-29 | 2015-12-09 | 安徽省煦棠医疗科技有限公司 | 肌钙蛋白i快速定量测定免疫层析试纸卡 |
CN106706917A (zh) * | 2016-11-09 | 2017-05-24 | 百奥森(江苏)食品安全科技有限公司 | 一种检测土豆中龙葵碱的试纸板 |
CN106796233A (zh) * | 2014-08-08 | 2017-05-31 | 奥索临床诊断有限公司 | 侧向流测定装置 |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9816979B2 (en) | 2010-07-27 | 2017-11-14 | Northwestern University | Devices and methods for filtering blood plasma |
WO2013088429A1 (en) * | 2011-12-13 | 2013-06-20 | Kieran Gerard Walshe | A homogeneous competitive lateral flow assay |
US10670611B2 (en) | 2014-09-26 | 2020-06-02 | Somalogic, Inc. | Cardiovascular risk event prediction and uses thereof |
CN106526171A (zh) * | 2015-09-11 | 2017-03-22 | 睿嘉生物科技股份有限公司 | 免疫检测套组 |
US20170212112A1 (en) * | 2016-01-25 | 2017-07-27 | General Electric Company | Integration of sample separation with rapid diagnostic tests for improved sensitivity |
EP3833735A4 (en) * | 2018-08-06 | 2022-05-11 | Becton, Dickinson and Company | LATERAL FLOW IMMUNOASSAY DEVICE WITH DISCONNECT MEMBRANE |
CN110007076B (zh) * | 2019-05-13 | 2024-02-27 | 无锡博慧斯生物医药科技有限公司 | 一种全血样本检测装置及其检测方法 |
CN114280312B (zh) * | 2020-09-27 | 2023-09-15 | 河北特温特生物科技发展有限公司 | 一种用于免疫荧光层析检测的全血分离膜及其制备方法和应用 |
Citations (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5710008A (en) * | 1990-10-12 | 1998-01-20 | Spectral Diagnostics Inc. | Method and device for diagnosing and distinguishing chest pain in early onset thereof |
CN1260490A (zh) * | 1998-12-30 | 2000-07-19 | 中国科学院上海药物研究所 | 半定量一步免疫诊断法 |
US20030032196A1 (en) * | 2001-07-18 | 2003-02-13 | Siliang Zhou | Test strip for a lateral flow assay for a sample containing whole cells |
CN1155827C (zh) * | 1995-05-09 | 2004-06-30 | 贝克曼考尔特公司 | 将血液的液体部分与血液的细胞成分分离的装置和方法 |
EP1619498A2 (en) * | 2003-04-16 | 2006-01-25 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Method of screening remedy for heart disease and medicinal composition for treating heart disease |
US20060234304A1 (en) * | 2003-11-03 | 2006-10-19 | Roche Diagnostics Operations, Inc | Diagnosis of acute myocardial, ischemic diseases |
CN101031798A (zh) * | 2004-07-29 | 2007-09-05 | 瑞莱诊断体系有限公司 | 侧向流系统和测定 |
US7279136B2 (en) * | 2005-12-13 | 2007-10-09 | Takeuchi James M | Metering technique for lateral flow assay devices |
CN101059519A (zh) * | 2007-05-23 | 2007-10-24 | 南京博天科智生物技术有限公司 | 心肌肌钙蛋白i纳米金标检测试纸条及其制备方法 |
CN101105497A (zh) * | 2006-07-13 | 2008-01-16 | 上海凯创生物技术有限公司 | 一种检测心肌肌钙蛋白i的试剂盒及其制备方法 |
US20090068181A1 (en) * | 2004-06-28 | 2009-03-12 | Transtarget, Inc. | Bispecific antibodies |
Family Cites Families (80)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5622871A (en) * | 1987-04-27 | 1997-04-22 | Unilever Patent Holdings B.V. | Capillary immunoassay and device therefor comprising mobilizable particulate labelled reagents |
US2252459A (en) * | 1940-10-05 | 1941-08-12 | Miller Co | Liquid control valve |
EP0111762B1 (en) * | 1980-06-20 | 1987-11-19 | Unilever Plc | Processes and apparatus for carrying out specific binding assays |
US5073484A (en) * | 1982-03-09 | 1991-12-17 | Bio-Metric Systems, Inc. | Quantitative analysis apparatus and method |
USRE34405E (en) * | 1983-08-01 | 1993-10-12 | Abbott Laboratories | Determination of analytes in particle-containing medium |
US4740468A (en) * | 1985-02-14 | 1988-04-26 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Concentrating immunochemical test device and method |
US5763262A (en) * | 1986-09-18 | 1998-06-09 | Quidel Corporation | Immunodiagnostic device |
US5491098A (en) * | 1987-03-09 | 1996-02-13 | Janssen Pharmaceutica N.V. | Method for depositing metal particles on a marker |
CA1303983C (en) * | 1987-03-27 | 1992-06-23 | Robert W. Rosenstein | Solid phase assay |
EP0560411B1 (en) * | 1987-04-27 | 2000-07-26 | Unilever N.V. | Specific binding assays |
US4943522A (en) * | 1987-06-01 | 1990-07-24 | Quidel | Lateral flow, non-bibulous membrane assay protocols |
US4987085A (en) * | 1987-06-22 | 1991-01-22 | Chemtrak Inc. | Blood filtering metering device |
US5571667A (en) * | 1987-10-01 | 1996-11-05 | Chu; Albert E. | Elongated membrane flow-through diagnostic device and method |
US5204061A (en) * | 1987-10-08 | 1993-04-20 | Becton, Dickinson And Company | Depositing a binder on a solid support |
US5260025A (en) * | 1987-10-08 | 1993-11-09 | Becton, Dickson And Company | Depositing a binder on a solid support |
US5275785A (en) * | 1987-10-30 | 1994-01-04 | Unilever Patent Holdings B.V. | Test device for detecting an analyte in a liquid sample |
US5670381A (en) * | 1988-01-29 | 1997-09-23 | Abbott Laboratories | Devices for performing ion-capture binding assays |
US5039607A (en) * | 1988-05-17 | 1991-08-13 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Method for immunochromatographic analysis |
US5334513A (en) * | 1988-05-17 | 1994-08-02 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Method for immunochromatographic analysis |
ES2079363T3 (es) * | 1988-06-09 | 1996-01-16 | Abbott Lab | Metodo y dispositivo que emplean colorantes coloreados inmovilizados covalentemente. |
AU2684488A (en) * | 1988-06-27 | 1990-01-04 | Carter-Wallace, Inc. | Test device and method for colored particle immunoassay |
DE69021327T2 (de) * | 1989-11-08 | 1996-03-14 | Chemtrak Inc | Verbesserung in einem gerätefreien auf Entfernungsbestimmung beruhenden diagnostischen Test. |
US5470714A (en) * | 1989-12-12 | 1995-11-28 | Lidak Pharmaceuticals | One-step free fatty acid determination method |
US5252496A (en) * | 1989-12-18 | 1993-10-12 | Princeton Biomeditech Corporation | Carbon black immunochemical label |
US5437981A (en) * | 1990-02-26 | 1995-08-01 | Boehringer Mannheim Gmbh | Method for the immunological determination of ligands |
ES2089057T3 (es) * | 1990-07-18 | 1996-10-01 | Abbott Lab | Un reactivo sustituto de un analito para uso en metodos de ensayo de fijacion especifica, dispositivos y kits. |
CA2027434C (en) * | 1990-10-12 | 1999-01-05 | George Jackowski | Diagnostic kit for diagnosing and distinguishing chest pain in early onset thereof |
US5604105B1 (en) * | 1990-10-12 | 1999-08-24 | Spectral Diagnostics Inc | Method and device for diagnosingand distinguishing chest pain in early onset thereof |
DE69229334T2 (de) * | 1991-01-11 | 1999-12-16 | Quidel Corp | Einstufiges querfluss analysenverfahren und ein darin verwendeter nichtsaugfähiger träger |
US5686315A (en) * | 1991-06-14 | 1997-11-11 | Quidel Corporation | Assay device for one step detection of analyte |
US5451504A (en) * | 1991-07-29 | 1995-09-19 | Serex, Inc. | Method and device for detecting the presence of analyte in a sample |
DE4136010A1 (de) * | 1991-10-31 | 1993-08-12 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung einer immunologisch bindefaehigen substanz |
EP0643777A4 (en) * | 1992-01-22 | 1995-06-07 | Abbott Lab | CALIBRATION REAGENTS FOR SEMI-QUANTITATIVE BINDING ASSAYS AND DEVICES. |
US5541069A (en) * | 1992-02-28 | 1996-07-30 | Quidel Corporation | Assay having improved dose response curve |
US5296192A (en) * | 1992-04-03 | 1994-03-22 | Home Diagnostics, Inc. | Diagnostic test strip |
US5369036A (en) * | 1992-07-02 | 1994-11-29 | Becton, Dickinson And Company | Enhancement of signal in immunoassays using microparticles which contain different detectable substances |
EP0660935B1 (en) * | 1992-08-03 | 2000-05-24 | Gec-Marconi Limited | Immunological detection using two detectable labels |
US5356782A (en) * | 1992-09-03 | 1994-10-18 | Boehringer Mannheim Corporation | Analytical test apparatus with on board negative and positive control |
US5807752A (en) * | 1992-09-11 | 1998-09-15 | Boehringer Mannheim Corporation | Assay using an unblocked solid phase with immobilized analyte binding partner |
US5308775A (en) * | 1992-09-15 | 1994-05-03 | Abbott Laboratories | Assay devices for concurrently detecting an analyte and confirming the test result |
FI92882C (fi) * | 1992-12-29 | 1995-01-10 | Medix Biochemica Ab Oy | Kertakäyttöinen testiliuska ja menetelmä sen valmistamiseksi |
FR2701954B1 (fr) * | 1993-02-23 | 1995-07-07 | Pasteur Sanofi Diagnostics | Composition stabilisée de troponine pour immunoessais et procédé de stabilisation de troponine pour immunoessais. |
DE69420556T2 (de) * | 1993-05-17 | 2000-03-23 | Fortron Bioscience Inc | Assay für troponin i aus dem herzmuskel |
CA2130280C (en) * | 1993-08-24 | 1999-08-31 | Lilian Lee | Method for purification of cardiac troponin i |
DE4420742A1 (de) * | 1993-10-20 | 1995-04-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | Synthetischer Standard für Immunoassays |
US5478751A (en) * | 1993-12-29 | 1995-12-26 | Abbott Laboratories | Self-venting immunodiagnositic devices and methods of performing assays |
US5547833A (en) * | 1994-01-04 | 1996-08-20 | Intracel Corporation | Radial flow assay, delivering member, test kit, and methods |
US5643721A (en) * | 1994-02-09 | 1997-07-01 | Abbott Laboratories | Bioreagent immobilization medium |
US5582907A (en) * | 1994-07-28 | 1996-12-10 | Pall Corporation | Melt-blown fibrous web |
WO1996015453A1 (en) * | 1994-11-14 | 1996-05-23 | Spectral Diagnostics Inc. | Method and device for determination of proteins employing antigen/antibody reactions |
US5569608A (en) * | 1995-01-30 | 1996-10-29 | Bayer Corporation | Quantitative detection of analytes on immunochromatographic strips |
US5795725A (en) * | 1995-04-18 | 1998-08-18 | Biosite Diagnostics Incorporated | Methods for the assay of troponin I and T and selection of antibodies for use in immunoassays |
US5712172A (en) * | 1995-05-18 | 1998-01-27 | Wyntek Diagnostics, Inc. | One step immunochromatographic device and method of use |
AU6248796A (en) * | 1995-05-19 | 1996-11-29 | Universal Health-Watch, Inc. | Rapid self-contained assay format |
US5821073A (en) * | 1996-05-09 | 1998-10-13 | Syntron Bioresearch, Inc. | Method and apparatus for single step assays of whole blood |
US5798273A (en) * | 1996-09-25 | 1998-08-25 | Becton Dickinson And Company | Direct read lateral flow assay for small analytes |
US5834210A (en) * | 1997-05-23 | 1998-11-10 | Spectral Diagnostics, Inc. | Stable troponin subunits and complexes |
AU7590198A (en) * | 1997-06-10 | 1998-12-30 | Medlyte Diagnostics, Inc. | Methods for early detection of heart disease |
AU3548799A (en) * | 1998-04-03 | 1999-10-25 | Invitrogen Corporation | Libraries of expressible gene sequences |
US6338790B1 (en) * | 1998-10-08 | 2002-01-15 | Therasense, Inc. | Small volume in vitro analyte sensor with diffusible or non-leachable redox mediator |
US6591125B1 (en) * | 2000-06-27 | 2003-07-08 | Therasense, Inc. | Small volume in vitro analyte sensor with diffusible or non-leachable redox mediator |
US6616819B1 (en) * | 1999-11-04 | 2003-09-09 | Therasense, Inc. | Small volume in vitro analyte sensor and methods |
US6436722B1 (en) * | 2000-04-18 | 2002-08-20 | Idexx Laboratories, Inc. | Device and method for integrated diagnostics with multiple independent flow paths |
US20060062786A1 (en) * | 2000-11-08 | 2006-03-23 | Human Genome Sciences, Inc. | Antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors |
US20070292411A1 (en) * | 2000-11-08 | 2007-12-20 | Human Genome Sciences, Inc. | Antibodies That Immunospecifically Bind to TRAIL Receptors |
GB0029154D0 (en) * | 2000-11-30 | 2001-01-17 | Lee Helen | Signal enhancement with multiple labelled-antibodies |
US6962776B2 (en) * | 2001-02-23 | 2005-11-08 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Methods and materials for evaluating cardiovascular conditions |
US6461828B1 (en) * | 2001-09-04 | 2002-10-08 | Syn X Pharma | Conjunctive analysis of biological marker expression for diagnosing organ failure |
US20040018577A1 (en) * | 2002-07-29 | 2004-01-29 | Emerson Campbell John Lewis | Multiple hybrid immunoassay |
BRPI0409474A (pt) * | 2003-04-15 | 2006-05-02 | Metgen Inc | dispositivo de uso médico para monitorar nìveis de fenilalanina na corrente sangüinea |
JP4603547B2 (ja) * | 2003-09-11 | 2010-12-22 | セラノス, インコーポレイテッド | 検体の監視および薬物送達のための医療デバイス |
GB0329220D0 (en) * | 2003-12-17 | 2004-01-21 | Inverness Medical Switzerland | System |
EP1787121B1 (en) * | 2004-07-29 | 2010-08-25 | Relia Diagnostic Systems, LLC | Lateral flow system and assay |
KR100635110B1 (ko) * | 2004-12-09 | 2006-10-17 | 주식회사 바이오디지트 | 현장분석용 랩온어칩 및 랩온어칩용 신호탐지기 |
US8153444B2 (en) * | 2005-10-13 | 2012-04-10 | Auric Enterprises, Llc | Immuno gold lateral flow assay |
US7910381B2 (en) * | 2005-10-13 | 2011-03-22 | BioAssay Works | Immuno gold lateral flow assay |
US7344893B2 (en) * | 2005-10-13 | 2008-03-18 | Auric Enterprises, Llc | Immuno-gold lateral flow assay |
ES2322297T3 (es) * | 2006-01-14 | 2009-06-18 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Elemento de ensayo inmunologico con zona de control perfeccionada. |
US8741230B2 (en) * | 2006-03-24 | 2014-06-03 | Theranos, Inc. | Systems and methods of sample processing and fluid control in a fluidic system |
US7749773B2 (en) * | 2006-10-11 | 2010-07-06 | Day Alan R | Device for detection of molecules in biological fluids |
-
2010
- 2010-04-27 CA CA2800460A patent/CA2800460A1/en not_active Abandoned
- 2010-04-27 CN CN2010800188133A patent/CN102414561A/zh active Pending
- 2010-04-27 WO PCT/US2010/032616 patent/WO2010129302A1/en active Application Filing
- 2010-04-27 US US12/768,706 patent/US20110076697A1/en not_active Abandoned
- 2010-04-27 EP EP10772542A patent/EP2425247A4/en not_active Withdrawn
-
2011
- 2011-10-24 IL IL215894A patent/IL215894A0/en unknown
Patent Citations (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5710008A (en) * | 1990-10-12 | 1998-01-20 | Spectral Diagnostics Inc. | Method and device for diagnosing and distinguishing chest pain in early onset thereof |
US5710008B1 (en) * | 1990-10-12 | 1999-09-07 | Spectral Diagnostics Inc | Method and device for diagnosing and distinguishing chest pain in early onset thereof |
CN1155827C (zh) * | 1995-05-09 | 2004-06-30 | 贝克曼考尔特公司 | 将血液的液体部分与血液的细胞成分分离的装置和方法 |
CN1260490A (zh) * | 1998-12-30 | 2000-07-19 | 中国科学院上海药物研究所 | 半定量一步免疫诊断法 |
US20030032196A1 (en) * | 2001-07-18 | 2003-02-13 | Siliang Zhou | Test strip for a lateral flow assay for a sample containing whole cells |
EP1619498A2 (en) * | 2003-04-16 | 2006-01-25 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Method of screening remedy for heart disease and medicinal composition for treating heart disease |
US20060234304A1 (en) * | 2003-11-03 | 2006-10-19 | Roche Diagnostics Operations, Inc | Diagnosis of acute myocardial, ischemic diseases |
US20090068181A1 (en) * | 2004-06-28 | 2009-03-12 | Transtarget, Inc. | Bispecific antibodies |
CN101031798A (zh) * | 2004-07-29 | 2007-09-05 | 瑞莱诊断体系有限公司 | 侧向流系统和测定 |
US7279136B2 (en) * | 2005-12-13 | 2007-10-09 | Takeuchi James M | Metering technique for lateral flow assay devices |
CN101105497A (zh) * | 2006-07-13 | 2008-01-16 | 上海凯创生物技术有限公司 | 一种检测心肌肌钙蛋白i的试剂盒及其制备方法 |
CN101059519A (zh) * | 2007-05-23 | 2007-10-24 | 南京博天科智生物技术有限公司 | 心肌肌钙蛋白i纳米金标检测试纸条及其制备方法 |
Cited By (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103212454A (zh) * | 2012-01-20 | 2013-07-24 | 奥索临床诊断有限公司 | 具有可控样品大小的测定装置 |
US10712340B2 (en) | 2012-01-20 | 2020-07-14 | Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. | Assay device having controllable sample size |
US11921107B2 (en) | 2012-01-20 | 2024-03-05 | Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. | Assay device having controllable sample size |
CN105021809A (zh) * | 2014-04-16 | 2015-11-04 | 万冰 | 一种便携式检测装置 |
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