CN106706917A - 一种检测土豆中龙葵碱的试纸板 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种检测土豆中龙葵碱的试纸板，包括基板、衬板、保护膜，所述衬板上依次附着金标垫、吸水垫、样品垫、醋酸纤维素膜，所述金标垫、吸水垫、样品垫、醋酸纤维素膜的相邻各部分之间有0.5‑0.8mm的重叠，所述金标垫中设有与胶体金偶联的单克隆抗体，所述醋酸纤维素膜上设有检测线、质控线、假阳性标线，所述样品垫上设置过滤膜层。本发明的试纸板具有灵敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、适合各种单位使用、储存简单、保质期长的优点，操作简单、快速、安全，将反应所需的大部分原料整合到PVC背衬中，滴样后，抗原抗体反应在固相膜上快速进行，大大缩短检样时间，且样品无需特殊处理，成本低，易推广，生产成本低廉，投资少，收效快。

Description

一种检测土豆中龙葵碱的试纸板

技术领域

本发明涉及一种胶体金检测试剂板，具体是一种检测土豆中龙葵碱的试纸板。

背景技术

土豆又名马铃薯、洋芋，是继水稻、小麦、玉米的第四大粮食作物。由于马铃薯植株和块茎中普遍含有一类甾体糖苷生物碱,称为茄碱，又叫龙葵碱（目前已知的龙葵碱有α、β、γ-茄碱或α、β、γ-卡茄碱）具有一定毒性，在马铃薯食用过程中存在一定安全隐患。马铃薯在储存过程中，很容易变绿发芽，绿皮与芽中龙葵素含量会迅速上升，过多摄入（发绿马铃薯30g左右）会引起舌头发麻、恶心呕吐、腹泻、头痛、晕眩等不良反应，甚至导致中毒者抽搐、昏迷、呼吸中枢麻痹而死亡。英国就曾经发生过78个学生因为食用龙葵碱含量过高的土豆而中毒的事件。口服时大鼠的半数致死量为每千克体重590毫克。砒霜的大鼠口服实验的半数致死量是每公斤体重15毫克。龙葵碱让人体产生中毒症状的剂量比动物毒理实验得出的数据还要低得多。有病例分析认为，人体对糖苷生物碱的中毒剂量可以低到每千克体重2～5毫克，而每千克体重3～6毫克的剂量就可能致命。需要注意的是，这个糖苷生物碱很难通过烹饪破坏。以龙葵碱为例，冷冻、干燥、微波加热、蒸煮等对它的破坏都很有限，甚至没有影响。要170℃以上的深度油炸处理才能显著降低其含量。

目前，对土豆中龙葵碱中毒尚无特效药治疗，龙葵碱对胃肠道黏膜有较强的刺激性和腐蚀性，对中枢神经有麻痹作用，尤其对呼吸和运动中枢作用显著；对红细胞有溶血作用，可引起急性脑水肿、胃肠炎等；中毒的主要症状为胃痛加剧，恶心、呕吐，呼吸困难、急促，伴随全身虚弱和衰竭，严重者可导致死亡；龙葵碱主要是通过抑制胆碱酯酶的活性造成乙酰胆碱不能被清除而引起中毒的；为了控制龙葵碱对人和动物产生的危害，必须对土豆中龙葵碱含量进行检测，确定是否含有龙葵碱。目前，比较常用的龙葵碱检测方法有薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法-质谱法(GC-MS)、生物检测法和免疫学检测法等。薄层色谱分析法是较早用于龙葵碱检测的一种方法，操作人员无需经过专门培训，且成本低，无需价格昂贵的仪器。但此方法所需试剂繁多，检测周期长，灵敏度不高等，已远不能满足现代检测要求。高效液相色谱法、气相色谱法-质谱法等仪器分析方法具有准确度高、灵敏性强、可微量测定等优点，且气相色谱法-质谱法可同时检测不同的龙葵碱，适合于土豆中龙葵碱的定量分析。但设备昂贵、对样品中龙葵碱纯度的要求较高，导致检测成本高、周期长，无法满足大批量样品快速筛选的需要，所以使用受到限制。微生物检测法虽然待检样品不需很纯，但方法专一性差，灵敏度低，主要用于定性，一般只作为化学分析法的佐证。

ELISA法是免疫学检测方法之一，具有特异、快速、灵敏度高和成本低的特点，适用于基层机构大量样品的筛选和普查。但此方法需接触龙葵碱标准品，不利于保护操作者的健康，且酶的活性易受温度影响，因此试剂需要低温保藏、寿命短，并易造成测定结果重复性较差。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灵敏度高、操作简单的检测土豆中龙葵碱的试纸板，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种检测土豆中龙葵碱的试纸板，包括基板、衬板、保护膜，所述衬板上依次附着金标垫、吸水垫、样品垫、醋酸纤维素膜，所述金标垫、吸水垫、样品垫、醋酸纤维素膜的相邻各部分之间有0.5-0.8mm的重叠，所述金标垫中设有与胶体金偶联的单克隆抗体，所述醋酸纤维素膜上设有检测线、质控线、假阳性标线，所述样品垫上设置过滤膜层。

作为本发明进一步的方案：所述基板采用有机玻璃制成。

作为本发明进一步的方案：所述基板、衬板和保护膜为压制的整体式结构。

作为本发明进一步的方案：所述单克隆抗体为龙葵碱单克隆抗体。

作为本发明进一步的方案：所述金标垫、吸水垫和样品垫采用聚酯树脂制成。

作为本发明进一步的方案：所述检测线包被龙葵碱-BSA特异性结合抗原，所述质控线包被兔抗鼠多克隆抗体，所述假阳性标线包被脱脂奶粉封闭的龙葵碱单克隆抗体。

作为本发明进一步的方案：所述醋酸纤维素膜的厚度为0.2-0.4mm。

作为本发明进一步的方案：通过以下步骤制备：

1）制备喷涂有单克隆抗体的金标垫；

2）制备具有包被龙葵碱-BSA特异性结合抗原的检测线、包被兔抗鼠多克隆抗体的质控线及包被脱脂奶粉封闭的龙葵碱单克隆抗体的假阳性标线的醋酸纤维素膜；

3）将制备好的金标垫、醋酸纤维素膜与样品垫、吸水垫、基板、衬板和保护膜组装成试纸板。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明的试纸板具有灵敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、适合各种单位使用、储存简单、保质期长的优点，操作简单、快速、安全，将反应所需的大部分原料整合到PVC背衬中，滴样后，抗原抗体反应在固相膜上快速进行，大大缩短检样时间，且样品无需特殊处理，成本低，易推广，生产成本低廉，投资少，收效快。

附图说明

图1为本发明的结构示意图。

图中：1-衬板、2-金标垫、3-吸水垫、4-样品垫、5-醋酸纤维素膜、6-检测线、7-质控线、8-假阳性标线。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。

请参阅图1，一种检测土豆中龙葵碱的试纸板，包括基板、衬板1、保护膜，所述衬板1上依次附着金标垫2、吸水垫3、样品垫4、醋酸纤维素膜5，所述金标垫2、吸水垫3、样品垫4、醋酸纤维素膜5的相邻各部分之间有0.5-0.8mm的重叠，所述金标垫2中设有与胶体金偶联的单克隆抗体，所述醋酸纤维素膜5上设有检测线6、质控线7、假阳性标线8，所述样品垫4上设置过滤膜层；所述基板采用有机玻璃制成；所述基板、衬板1和保护膜为压制的整体式结构；所述单克隆抗体为龙葵碱单克隆抗体；所述金标垫2、吸水垫3和样品垫4采用聚酯树脂制成；所述检测线6包被龙葵碱-BSA特异性结合抗原，所述质控线7包被兔抗鼠多克隆抗体，所述假阳性标线8包被脱脂奶粉封闭的龙葵碱单克隆抗体；所述醋酸纤维素膜5的厚度为0.2-0.4mm；通过以下步骤制备：

1）制备喷涂有单克隆抗体的金标垫2；

2）制备具有包被龙葵碱-BSA特异性结合抗原的检测线6、包被兔抗鼠多克隆抗体的质控线7及包被脱脂奶粉封闭的龙葵碱单克隆抗体的假阳性标线8的醋酸纤维素膜5；

3）将制备好的金标垫2、醋酸纤维素膜5与样品垫4、吸水垫3、基板、衬板1和保护膜组装成试纸板。

本发明中试纸板的组装：

将醋酸纤维素膜5、金标垫2、样品垫4、吸水垫3依次按顺序粘贴在衬板1上；金标垫从起始端有1/2区域被样品垫1覆盖，金标垫2的末端与醋酸纤维素膜5的始端连接，醋酸纤维素膜5的末端与吸水垫3的始端相连；所述醋酸纤维素膜5上有检测线6和质控线7及假阳性标线8，检测线6和质控线7均为与所述试纸板垂直的条状带，假阳性标线8为与所述试纸板相交的椭圆条状带；检测线6位于靠近吸水垫3的起始端的一侧；质控线7位于靠近金标垫2的末端的一侧；将试纸板用机器切成6mm宽的小条，使用保护膜进行包覆，4～30℃条件下可保存24个月。

本发明的试纸板具有灵敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、适合各种单位使用、储存简单、保质期长的优点，操作简单、快速、安全， 将反应所需的大部分原料整合到PVC背衬中，滴样后，抗原抗体反应在固相膜上快速进行，大大缩短检样时间，且样品无需特殊处理，成本低，易推广，生产成本低廉，投资少，收效快。

上面对本专利的较佳实施方式作了详细说明，但是本专利并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本专利宗旨的前提下作出各种变化。

Claims (8)

1.一种检测土豆中龙葵碱的试纸板，包括基板、衬板、保护膜，其特征在于，所述衬板上依次附着金标垫、吸水垫、样品垫、醋酸纤维素膜，所述金标垫、吸水垫、样品垫、醋酸纤维素膜的相邻各部分之间有0.5-0.8mm的重叠，所述金标垫中设有与胶体金偶联的单克隆抗体，所述醋酸纤维素膜上设有检测线、质控线、假阳性标线，所述样品垫上设置过滤膜层。

2.根据权利要求1所述的一种检测土豆中龙葵碱的试纸板，其特征在于，所述基板采用有机玻璃制成。

3.根据权利要求1所述的一种检测土豆中龙葵碱的试纸板，其特征在于，所述基板、衬板和保护膜为压制的整体式结构。

4.根据权利要求1所述的一种检测土豆中龙葵碱的试纸板，其特征在于，所述单克隆抗体为龙葵碱单克隆抗体。

5.根据权利要求1所述的一种检测土豆中龙葵碱的试纸板，其特征在于，所述金标垫、吸水垫和样品垫采用聚酯树脂制成。

6.根据权利要求1所述的一种检测土豆中龙葵碱的试纸板，其特征在于，所述检测线包被龙葵碱-BSA特异性结合抗原，所述质控线包被兔抗鼠多克隆抗体，所述假阳性标线包被脱脂奶粉封闭的龙葵碱单克隆抗体。

7.根据权利要求1所述的一种检测土豆中龙葵碱的试纸板，其特征在于，所述醋酸纤维素膜的厚度为0.2-0.4mm。

8.根据权利要求1-7任一所述检测土豆中龙葵碱的试纸板，其特征在于，通过以下步骤制备：

1）制备喷涂有单克隆抗体的金标垫；

2）制备具有包被龙葵碱-BSA特异性结合抗原的检测线、包被兔抗鼠多克隆抗体的质控线及包被脱脂奶粉封闭的龙葵碱单克隆抗体的假阳性标线的醋酸纤维素膜；

3）将制备好的金标垫、醋酸纤维素膜与样品垫、吸水垫、基板、衬板和保护膜组装成试纸板。