CN102414199A

CN102414199A - 二芳基醚

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Publication number: CN102414199A
Application number: CN2010800183568A
Authority: CN
Inventors: S·D·德明; D·麦克戈万; S·J·拉斯特; P·J-M·B·拉布瓦松
Original assignee: Tibotec Pharmaceuticals Ltd
Current assignee: Janssen R&D Ireland ULC
Priority date: 2009-04-24
Filing date: 2010-04-23
Publication date: 2012-04-11
Anticipated expiration: 2030-04-23
Also published as: MX2011011136A; ZA201107738B; CA2759142A1; RU2528231C2; AU2010240882B2; BRPI1016172A2; AU2010240882A1; US20120034678A1; WO2010122162A1; RU2011147726A; JP2012524761A; CN102414199B; EP2421855A1; US8436036B2

Abstract

式I化合物：包括其任何可能的立体异构体，或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物及药物制剂和式I化合物作为HCV抑制剂的用途。

Description

二芳基醚

技术领域

本发明涉及作为被丙型肝炎病毒(HCV)编码的NS5A蛋白的抑制剂的二芳基醚及其在治疗或预防HCV中的用途。

背景技术

HCV是属于肝炎病毒属(hepacivirus genus)中病毒的黄病毒(Flaviviridae)科的单链正义RNA病毒。病毒基因组转译为单独的开放阅读框，它编码多种结构和非结构蛋白。

随着最初的急性感染，大多数被感染个体发展为慢性肝炎，因为HCV优先在肝细胞中复制，而并非直接引起细胞病变。尤其是，缺乏剧烈的T-淋巴细胞的响应和病毒对突变的高倾向似乎促成高比率的慢性感染。慢性肝炎可发展为肝纤维化，导致肝硬化、晚期肝病和HCC(肝细胞癌)，使其成为肝移植的主要原因。

存在六种主要的HCV基因型和超过50种亚型，其在地理学上有不同的分布。在欧洲和美国，HCV基因型1是主要基因型。HCV的广泛的遗传异质性具有重要的诊断和临床含义，可能解释疫苗开发的困难和对目前疗法的响应的缺乏。

HCV传播可通过接触被污染的血液或血液制品，例如在输血或采用静脉输注药物后而发生。用于血液筛查的诊断试验的引入已经导致输血后HCV发病率的趋势下降。然而，考虑到缓慢发展为晚期肝病，目前的感染将持续表现出几十年的严重医学和经济负担。

目前的HCV疗法基于与利巴韦林联合的(聚乙二醇化)干扰素-α(IFN-α)。该联合疗法对40％的感染基因型1HCV的患者和约80％的感染基因型2和3的患者产生持续的病毒学响应。除对HCV基因型1疗效有限外，该联合疗法还具有显著的副作用，包括流感样症状、血液学异常和神经精神病症状。因此，存在对更有效、更方便和更好耐受性的治疗的需求。

用HIV药物，尤其是用HIV蛋白酶抑制剂的经验已经表明，次优(suboptimal)的药物动力学和复杂的剂量方案很快导致因疏忽造成的依从失败。这依次意味着HIV治疗方案中的各种药物的24小时谷浓度(最小血药浓度)在一天的大部分时间常常落在IC₉₀或ED₉₀阈值以下。认为至少IC₅₀和更实际地，IC₉₀或ED₉₀的24小时谷水平对减缓药物逃逸突变体(drug escape mutants)的发展是重要的。实现允许这样的谷水平的必要药物动力学和药物代谢给药物设计提出迫切的挑战。

HCV的NS5A蛋白位于NS4B蛋白的下游和NS5B蛋白上游。一旦被病毒丝氨酸蛋白酶NS3转译后裂解，NS5A就成熟为或者作为低磷酸化(hypophosphorylated)物质(56-kDa，p56)或者作为高磷酸化物质(hyperphosphorylated species)(58-kDa，p58)存在的含锌的三结构域磷蛋白。HCV的NS5A涉及病毒生命周期的多个方面，包括病毒复制和感染颗粒装配及其宿主细胞环境的调节。尽管丝毫未将酶功能归因于蛋白，仍报导其与大量病毒因子和细胞因子相互作用。

多个专利和专利申请公开具有NS5A HCV抑制活性的化合物。WO2006/133326公开了均二苯代乙烯(stilbene)衍生物，而WO 2008021927公开了具有NS5A HCV抑制活性的联苯衍生物。

需要可克服目前HCV疗法的缺点诸如副作用、有限的疗效、耐药性的出现和依从性失败以及改善持续的病毒负荷响应的HCV抑制剂。

本发明涉及具有有关一个或多个以下参数的有用性质的一组HCV抑制二芳基醚：抗病毒疗效、适合的耐药性发展概况(profile)、无毒性和基因毒性、有利的药物动力学和药效学和易于配制和给药。

本发明化合物还可能因它们缺乏抗其它病毒，尤其是抗HIV的活性的事实而诱人。HIV感染患者常常同时感染(co-infections)诸如HCV。用也可抑制HIV的HCV抑制剂治疗这类患者可导致耐药HIV毒株的出现。

发明描述

一方面，本发明提供可由式I表示的化合物：

包括其任何可能的立体异构体，其中：

R和R¹相互独立地为任选被各自独立地选自卤代基和C₁-C₆烷基的一个、两个或三个取代基取代的苯甲酰基；或为-C(＝O)-Het，其中Het任选被独立地选自C₁-C₄烷基的一个或两个取代基取代；或为式-C(＝O)-CH(R^x)-R⁶的基团、苄氧羰基、C₁-C₆烷氧基羰基、式H₂N-CH(R⁷)-C(＝O)-的基团、式R⁸-O-C(＝O)-HN-CH(R⁷)-C(＝O)-的基团或-C(＝O)-C(＝O)-苯基；

R⁶是C₁-C₄烷基、C₃-C₆环烷基、苄基或苯基，其中的苯基可任选被各自独立地选自卤代基、C₁-C₆烷基，甲氧基、三氟甲氧基的一个、两个或三个取代基取代，或者在相邻环原子上的两个取代基与苯环一起，形成苯并间二氧杂环戊烯，和其中的C₁-C₄烷基任选被单-或二C₁-C₄烷基氨基、苯基磺酰基、Het取代，和其中苄基任选被各自独立地选自卤代基、甲氧基的一个、两个或三个取代基取代；

R^x独立地选自氢、羟基、C₁-C₆烷氧基、氨基、单-或二C₁-C₆烷基氨基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、咪唑基、C₁-C₆烷基羰基氨基或C₁-C₆烷氧基羰基氨基；

Het是包含选自O和N的一个或两个杂原子并具有4-7个环原子的杂环基团，其中所述杂环通过环碳原子连接到羰基碳，和其中至少一个所述杂原子与所述环碳原子相邻，

R²和R³相互独立地是氢、羟基、C₁-C₄烷基或卤代基；

R⁴和R⁵相互独立地是氢、C₁-C₄烷基、卤代基或甲氧基；

各R⁷独立地为氢、苯基，或者任选被甲氧基或苯基取代的C₁-C₄烷基；和，

R⁸是C₁-C₄烷基或苄基；

或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。

在一个实施方案中，本发明提供可由式I表示的化合物：

包括其任何可能的立体异构体，其中：

R和R¹相互独立地为任选被各自独立地选自卤代基和C₁-C₆烷基的一个、两个或三个取代基取代的苯甲酰基，或为-C(＝O)-Het或式-C(＝O)-CH(R^x)-R⁶的基团、苄氧羰基、C₁-C₆烷氧基羰基、式H₂N-CH(R⁷)-C(＝O)-的基团或式R⁸-O-C(＝O)-HN-CH(R⁷)-C(＝O)-的基团；

R⁶是C₁-C₄烷基或苯基，其中的苯基可任选被各自独立地选自卤代基和C₁-C₆烷基的一个、两个或三个取代基取代；

R^x选自氢、羟基、C₁-C₆烷氧基、氨基、单-或二C₁-C₆烷基氨基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、C₁-C₆烷基羰基氨基或C₁-C₆烷氧基羰基氨基；

R²和R³相互独立地是氢、羟基、C₁-C₄烷基或卤代基；

R⁴和R⁵相互独立地是氢、C₁-C₄烷基、卤代基或甲氧基；

各R⁷独立地为氢、C₁-C₄烷基或苯基；和，

R⁸是C₁-C₄烷基或苄基；

或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。

在又一方面，本发明涉及如本文限定的式I化合物在抑制HCV方面的用途。或者，提供在制备含有如本文限定的式I化合物的药物中的用途。

本发明的实施方案涉及如本文限定的式(I)化合物或其任何亚组，其中适用如本文限定的对R、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^x和/或Het的一个或多个定义。

式I化合物的亚组是如本文限定的那些式I化合物或式I化合物的亚组，其中R和R¹是苄基羰基或异丁氧基羰基，尤其是其中R和R¹是苄基羰基。

式I化合物的亚组是如本文限定的那些式I化合物或式I化合物的亚组，其中R和R¹相互独立地可为式-C(＝O)-CH(R^x)-R⁶或-C(＝O)-Het的基团，尤其是其中R和R¹相互独立地为式-C(＝O)-CH(R^x)-R⁶的基团。

式I化合物的亚组是如本文限定的那些式I化合物或式I化合物的亚组，其中R^x是羟基、C₁-C₆烷氧基、氨基、单-或二C₁-C₆烷基氨基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、C₁-C₆烷基羰基氨基或C₁-C₆烷氧基羰基氨基；或者其中R^x是羟基、氨基、二C₁-C₄烷基氨基或吗啉基；或者其中R^x是羟基、氨基或二甲基氨基。

式I化合物的亚组是如本文限定的那些式I化合物或式I化合物的亚组，其中R⁶是任选被一个卤代基或C₁-C₆烷基取代的苯环；或者其中的苯环未被取代。作为选择，R⁶选自苯基和异丙基。

式I化合物的亚组是如本文限定的式I化合物或式I化合物的亚组，其中如上定义的Het含4、5或6个环原子；或其中Het选自2-吡啶基、2-嘧啶基、2-吡嗪基、2-咪唑基、2-噻唑基、2-噻吩基、2-吡唑啉基、2-哌啶基、2-吡咯烷基、2-吡咯基、2-呋喃基、2-四氢呋喃基、2-氧杂环丁烷基、2-或3-吗啉基和2-哌嗪基，尤其是2-四氢呋喃基。

式I化合物的亚组是如本文限定的那些式I化合物或式I化合物的亚组，其中R²和R³独立地为氢、羟基或氟代基，尤其是其中R²和R³是氢。

式I化合物的亚组是如本文限定的那些式I化合物或式I化合物的亚组，其中R⁴和R⁵独立地为氢、甲基、甲氧基或氯代基，尤其是其中R⁴和R⁵是氢。

式I化合物的亚组是如本文限定的那些式I化合物或式I化合物的亚组，其中R⁸是甲基。

式I化合物的亚组是如本文限定的那些式I化合物或式I化合物的亚组，其中基团

相对于两个苯基之间的氧桥，在间位或对位被取代，如本文所述，尤其是式I化合物或其亚组，其中所述基团在间位。

式I化合物的亚组是如本文限定的那些式I化合物或式I化合物的亚组，其中作为式H₂N-CH(R⁷)-C(＝O)-或式R⁸-O-C(＝O)-HN-CH(R⁷)-C(＝O)-的一部分的基团-HN-CH(R⁷)-C(＝O)-形成选自缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、苯基丙胺酸(Phe)、MeO-苏氨酸或苯基甘氨酸的氨基酸残基。特别感兴趣的是L-氨基酸残基，诸如L-Val、L-Leu、L-Phe和L-MeO-苏氨酸。

式I化合物的亚组是具有结构式Y的如本文限定的那些式I化合物或式I化合物的亚组

其中适用如本文限定的R、R¹、R²、R³、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R^x和/或Het。

在又一个方面，本发明提供用于HCV感染的治疗或预防(或制备用于治疗或预防的药物)的式I化合物或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。根据本发明的治疗或预防的上下文中的代表性HCV基因型包括基因型1b(流行于欧洲)或1a(流行于北美)。本发明还提供治疗或预防HCV感染(尤其是基因型1a或1b)的方法。

如本文所述的化合物和中间体的纯立体异构形式被定义为基本不含所述化合物或中间体的相同基本分子结构的其它对映异构体或非对映异构体形式的异构体。尤其是，术语“立体异构体纯”涉及具有立体异构体过量至少80％(即最少90％一种异构体和最大10％其它可能的异构体)至最多立体异构体过量100％(即100％一种异构体并无其它异构体)的化合物或中间体，更特别是，具有立体异构体过量90％至最多100％，甚至更特别是具有立体异构体过量94％至最多100％和最特别是具有立体异构体过量97％至最多100％的化合物或中间体。应以类似的方式理解术语“对映异构体纯”和“非对映异构体纯”，不过分别要考虑所述混合物的对映异构体过量和非对映异构体过量。

可通过应用本领域已知的步骤得到本发明化合物和中间体的纯立体异构形式或立体异构体。例如，可用光学活性酸或碱选择性结晶它们的非对映异构体盐，将各对映异构体相互分离。其实例有酒石酸、二苯甲酰酒石酸、二甲苯酰酒石酸和樟脑磺酸。作为选择，可通过采用手性固定相的层析技术分离对映异构体。所述纯立体化学异构形式也可衍生自适当起始原料的相应的纯立体异构形式，前提是发生立体有择反应。优选地，如果想要特定的立体异构体，就通过制备的立体有择方法合成所述化合物。这些方法将有利地采用对映异构体纯的起始原料。

可通过常规方法分开得到式I化合物的各非对映异构外消旋体。可有利地采用的适当物理分离方法有例如选择性结晶和层析法，例如，柱层析法或超临界流体层析法。

式I化合物有几个手性中心。感兴趣的是在2-碳原子上的吡咯烷环的立构中心。该位置上的构型可为对应于L-脯氨酸的构型，即

或对应于D-脯氨酸的构型，即

也感兴趣的是在式-C(＝O)-CH(R^x)-R⁶基团中的R^x和R⁶和/或如由式H₂N-CH(R⁷)-C(＝O)-或式R⁸-O-C(＝O)-HN-CH(R⁷)-C(＝O)-所定义那样的氨基酸残基所取代的碳原子的立体化学。

药学上可接受的加成盐包括治疗活性的式(I)化合物或其亚组的无毒酸和碱加成盐形式。感兴趣的有式I化合物的或本文所定义的式I化合物的任何亚组的游离，即非盐形式。

可通过用这类适用的酸处理碱形式，方便地得到药学上可接受的酸加成盐。适用的酸包括，例如，无机酸诸如氢卤酸，例如，盐酸或氢溴酸，硫酸，硝酸，磷酸等酸；或者有机酸，诸如，乙酸、丙酸、羟乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸(即乙二酸)、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、马来酸、富马酸、苹果酸(即羟基丁二酸)、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环拉酸、水杨酸、对氨基水杨酸、双羟萘酸等酸。相反地，可通过用适用的碱处理，将所述盐形式转化为游离碱形式。

也可通过用适用的有机和无机碱处理，使含有酸性质子的式(I)化合物转化为它们的碱加成盐，尤其是金属或胺加成盐形式。适用的碱盐形式包括，例如，铵盐、碱和碱土金属盐，例如，锂、钠、钾、镁、钙盐等，与有机碱的盐，例如苄星、N-甲基-D-葡糖胺、海巴明盐，和例如与氨基酸(例如精氨酸、赖氨酸)所成的盐等。

术语″溶剂合物″涵盖式I化合物及其盐所能形成的任何药学上可接受的溶剂合物。这类溶剂合物有，例如水合物、醇合物，例如，乙醇盐、丙醇盐等。

某些式I化合物也可以互变异构形式存在。例如，酰胺(-C(＝O)-NH-)基团的互变异构形式是亚氨基醇(-C(OH)＝N-)。互变异构形式，尽管未在本文表示的结构式中明确指出，仍打算包含在本发明范围内。

如本文所用的那样，作为基团或基团一部分的″C₁-C₄烷基″定义为具有1-4个碳原子的饱和直链或支链烃基团，诸如甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-丁基、2-甲基-1-丙基、2-甲基-2-丙基。″C₁-C₆烷基″涵盖C₁-C₄烷基及其具有5或6个碳原子的高级同系物，诸如，1-戊基、2-戊基、3-戊基、1-己基、2-己基、2-甲基-1-丁基、2-甲基-1-戊基、2-乙基-1-丁基、3-甲基-2-戊基等。C₁-C₆烷基中感兴趣的是C₁-C₄烷基。

“C₁-C₆烷氧基”或“C₁-C₆烷氧基”指式-O-C₁-C₆烷基基团，其中C₁-C₆烷基如上所定义。C₁-C₆烷氧基的实例有甲氧基、乙氧基、正丙氧基或异丙氧基。C₁-C₆烷氧基中感兴趣的有C₁-C₄烷氧基，即式-O-C₁-C₄烷基基团，其中C₁-C₄烷基如上所定义。

术语“C₃-C₆环烷基”泛指环丙基、环丁基、环戊基和环己基。

术语“卤代基”泛指氟代基、氯代基、溴代基和碘代基。

如本文所用的那样，术语“(＝O)”或“氧代”在连着碳原子时形成羰基部分。应注意，当该原子的化合价允许时，它只能被氧代基团取代。

为定义Het的目的，如本文所用的，杂环基团可包括选自O和N的一个或两个杂原子并具有4、5、6或7个环原子。

在分子部分上的基团的位置未确定(例如苯基上的取代基)时或用不固定的键表示的情况下，这类基团可定位在这样部分的任何原子上，只要所产生的结构是化学稳定的。当任何变量在分子中出现超过一次时，各定义是独立的。

无论本文何时使用，术语“式I化合物”或“本化合物”或类似术语，认为它包括式I化合物，包括其可能的立体异构形式和药学上可接受的盐和溶剂合物。

通用合成方法

如流程1所阐明的那样，可通过使式(II)双吡咯烷基衍生物与中间体R-W或R¹-W在酰胺或氨基甲酸酯形成反应中反应，制备其中R和R¹具有相同意义的式(I)化合物，所述化合物用式(Ia)表示。针对酰胺形成，W是羟基或活性基团，针对氨基甲酸酯形成，W是活性基团。活性基团是卤化物，尤其是氯化物、混合酐或活性酯。

流程1

在以下和以下反应流程中，吡咯烷环中的α-碳原子可为外消旋或可具有立体化学构型之一(R或S)。

酰胺形成反应包括任选在碱的存在下，使起始原料，即羧酸衍生物和双吡咯烷基(II)，例如苯基乙酸、扁桃酸、甲苯基乙酸，与酰胺-偶合试剂在反应惰性溶剂中反应。可采用的溶剂包括卤代烃诸如二氯甲烷(DCM)或氯仿，醚诸如四氢呋喃(THF)或2-甲基四氢呋喃(MeTHF)，烃溶剂诸如甲苯或二甲苯，两极性质子惰性溶剂诸如DMF、DMA、乙腈或它们的混合物。酰胺偶合试剂包括诸如N-乙氧基羰基-2-乙氧基-1，2-二氢喹啉(EEDQ)、N-异丙氧基羰基-2-异丙氧基-1，2-二氢喹啉，尤其是它的盐酸盐、(IIDQ)、N，N，N′，N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲

六氟磷酸盐(HATU)、苯并三唑-1-基-氧代-三-吡咯烷子基-

六氟磷酸盐(可作为PyBOP

经商业途径得到)、1，1′-羰基二咪唑(CDI)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDI或EDCI)及其盐酸盐、二环己基-碳二亚胺(DCC)或1，3-二异丙基碳二亚胺、O-苯并三唑-N，N，N’，N’-四甲基-脲

-六氟-磷酸盐(HBTU)等试剂。可加入催化剂，例如1-羟基苯并三唑(HOBt)或4-二甲基氨基吡啶(DMAP)。通常在碱，尤其是胺碱，诸如叔胺，例如三乙胺、N-甲基吗啉、N，N-二异丙基乙胺(后者也称为Hünig氏碱、DIPEA或DIEA)的存在下进行反应。在一个实施方案中，在作为碱的N，N-二异丙基乙胺的存在下，在DMF和HATU中进行反应。

也可通过使活性酸诸如羧酸卤化物，尤其是氯化物或混合酐或活性酯与(II)反应，制备酰胺。在活性酸中，W是芳氧基诸如苯氧基、对硝基苯氧基、五氟苯氧基、三氯-苯氧基、五氯苯氧基等；或者W可为混合酐的其余部分，即W是-O-CO-Z或-O-CO-OZ，在后者中的Z是，例如C_1-4烷基，诸如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、异丁基或Z是苄基)。

可采用多种方法，尤其是通过式(II)双吡咯烷基衍生物与氯甲酸烷基酯的反应；尽管并非优选，通过醇与氨基甲酰氯或异氰酸酯的反应；通过涉及金属络合物或酰基转移试剂的反应，进行氨基甲酸酯形成反应。一氧化碳和某些金属催化剂也可用来合成氨基甲酸酯。金属诸如钯、铱、铀和铂可用作催化剂。

制备氨基甲酸酯的一种途径涉及采用式R’-O-CO-Q的中间体，其中R’是C₁-C₆烷基或苄基，和Q是离去基团诸如卤代基，尤其是氯代基和溴代基或用于针对酰胺键形成的活性酯中的基团，诸如上述那些基团。中间体R’-O-CO-Q可衍生自醇R’-OH和光气，从而形成氯甲酸酯，或者通过转移后者中的氯代基至其它活性基团。

可采用与上述针对与酰胺偶合试剂的反应的类似反应条件，进行与活性酸的反应或氨基甲酸酯形成反应。

可如以下反应流程中所阐明的那样，制备其中一个吡咯烷子基咪唑基在间位的式(II)双吡咯烷基衍生物，下文也称为(II-m)。

流程2

可通过在碱诸如碳酸钾的存在下，1-(4-氟苯基)乙酮衍生物(XI)上的1-(3-羟基苯基)乙酮衍生物(X)的芳族取代反应，形成双苯基醚基团，制备1-(3-(4-乙酰基苯氧基)苯基)乙酮衍生物(IX)。所述(IX)被溴溴化成2，2-二溴-1-(3-(4-(2，2-二溴乙酰基)苯氧基)苯基)乙酮衍生物(VIII)。后者可通过与亚磷酸酯，例如亚磷酸二乙基酯的反应，被转化为2-溴-1-(3-(4-(2-溴乙酰基)苯氧基)苯基)乙酮衍生物(VII)，随后可采用氮化物盐诸如叠氮化钠，用叠氮基取代溴代原子。可在贵金属催化剂的存在下，用氢，例如在Pd的存在下的氢，还原所生成的双叠氮化物化合物(VI)中的叠氮基，生成2-氨基-1-(3-(4-(2-氨基乙酰基)苯氧基)苯基)乙酮衍生物(V)。后者可与N-保护的脯氨酸衍生物偶合，生成苯氧基苯基衍生物(IV)，其中P是氨基保护基，例如叔丁氧基羰基(BOC)。

在下一步骤中，用乙酸铵环化(IV)成中间体(III)，其中P如上述定义。例如在P是BOC的情况下，与酸例如与HCl水溶液反应除去P，生成(II-m)。通过引入酰基或氨基甲酸酯基团，后者可用作制备各种式(I)化合物的原料。

作为选择，例如如在实施例17中所述般，通过如在化合物(XIV)(流程3)转化为化合物(XII)中所用的类似方法，可将化合物(VII)转化为化合物(III)。

可如反应流程3中所述制备其中两个吡咯烷子基咪唑基团在彼此相互对位的式(II)双吡咯烷基衍生物，下文中称为(II-p)。

流程3

可在Lewis酸诸如氯化铝和酰氯的存在下，可采用二硫化碳作为溶剂，优选加热至回流，通过在二芳基醚(XV)上进行friedel crafts酰基化，制备1，1′-(4，4′-氧代双(4，1-亚苯基))双(2-氯乙酮)衍生物(XIV)。用氯代乙酰基氯化物的酰基化生成α-卤代酮(XIV)。采用可溶性有机碱诸如三乙胺或二异丙基乙胺，使所生成的卤代酮与氨基酸诸如Boc-L-脯氨酸反应，生成酯。然后，用乙酸铵环化酯产物(XIII)成中间体(XII)。可在密封管中与过量氨源，例如乙酸铵一起进行环化，并用常规方法或在微波炉中加热，生成中间体(XII)。例如在P是BOC的情况下用酸，例如用HCl水溶液去保护，除去P，生成(II-p)。

可如反应流程4中概述的那样，制备其中R和R¹具有不同的意义的式(I)化合物，下文以式(I-b)表示。

流程4

(I-b)中的R和R¹是具有上述限定意义的不同基团。

用过渡金属催化剂，尤其是Pd°络合物诸如四三苯膦钯或铜(II)盐诸如三氟甲磺酸铜(II)或用Cu°，进行(XVI)与(XVII)的反应。式(XVI)中间体可制备自相应的被保护酚，例如相应的甲氧基类似物，用例如三溴化硼(BBr₃)使其去甲基化。可如在流程5中所阐明的那样，制备相应的甲氧基类似物(XVIa)。可自式(XVIII)化合物开始，采用上文针对使化合物(IX)转化为化合物(III)的相同类型的步骤，得到式(XVIa)化合物。

流程5

流程6说明，可采用与在化合物(XIV)转化为化合物(XII)中所述的类似步骤，自溴代、溴代乙酰基-苯基衍生物得到中间体(XVII)

流程6

在又一个方面，本发明涉及包含治疗有效量的如本文所限定的式I化合物和药学上可接受的载体的药用组合物。本上下文中的治疗有效量是足以以预防方式对抗受感染受治疗者或有被感染风险的受治疗者的HCV感染，以稳定或减轻HCV感染的量。在又一个方面，本发明涉及制备如本文所限定的药用组合物的方法，它包括密切混合药学上可接受的载体与治疗有效量的如本文所限定的式I化合物。

因此，可针对给药用途，将本发明化合物或其任何亚组配制成各种药物形式。作为适用的组合物，可列举出通常用来全身给药的所有组合物。为制备本发明药用组合物，使有效量的作为活性成分的特定化合物，任选除盐形式或金属络合物外，还与药学上可接受的载体密切混合合并，根据想要给予的制剂形式，该载体可呈多种形式。呈特别适于经口、直肠、经皮或胃肠外注射给药的单一剂型的这些药用组合物是理想的。例如，在制备呈口服剂型的组合物中，例如，在口服液体制剂诸如混悬剂、糖浆剂、酏剂、乳剂和溶液剂的情况下，可采用任何常用的药用介质，诸如，水、二醇、油、醇等；或者在散剂、丸剂、胶囊剂和片剂的情况下，可采用固体载体诸如淀粉、糖、白陶土、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。由于其易于给药，片剂和胶囊剂代表最有利的口服剂量单位形式，在这种情况下，显然采用固体药物载体。针对胃肠外组合物，尽管还可能包括其它成分例如，提高溶解度的，载体将通常包括至少大部分的灭菌水。例如，可制备可注射溶液剂，其中的载体包括盐水溶液，葡萄糖溶液或盐水和葡萄糖溶液的混合物。也可制备可注射混悬剂，这种情况下可采用适当的液体载体、助悬剂等。还包括在使用前不久要转化为液体形式制剂的固体形式制剂。在适于经皮给药的组合物中，载体任选包括任选与较小比例的具有任何性质的适用添加剂合并的渗透促进剂和/或适用的湿润剂，该添加剂对皮肤不产生显著的有害作用。也可采用本领域已知的任何递药系统，以溶液剂、混悬剂或干粉剂形式经口吸入或吹入给予本发明化合物。

配制呈易于给药和均匀剂量的单位剂型的上述药用组合物是特别有利的。如本文所用的单位剂型指适于作为单一剂量的物理上分离的单位，各单位含有与所需药用载体一起的、旨在产生想要的治疗效果的预定量的活性成分。这类单位剂型的实例有片剂(包括刻痕片或包衣片剂)、胶囊剂、丸剂、栓剂、散剂包、糯米纸囊剂、可注射溶液剂或混悬剂等及其隔开的多个单位。

式I化合物表现出抗HCV活性并可用于治疗和预防HCV感染或与HCV有关的疾病。后者包括进行性肝纤维化、肝炎和坏死，导致肝硬化、晚期肝病和HCC。而且，认为多种本发明化合物有抗HCV的突变病毒株的活性。另外，本发明化合物可表现出有利的药物代谢动力学分布并就生物利用度而言具有有吸引力的性质，包括可接受的半衰期、AUC(曲线下的面积)和峰值，并没有不利的现象诸如不充分的快速起效和组织潴留。

可根据Lohmann等(1999)Science 285：110-113，和Krieger等(2001)Journal of Virology 75：4614-4624(通过引用结合于本文)所述的进一步修饰，在细胞HCV复制子系统中测试式I化合物对HCV的体外抗病毒活性，在实施例对其进一步举例说明。该模型，尽管并非HCV的完全感染模型，作为目前能得到的自主HCV RNA复制的最可靠和有效的模型被广泛接受。应理解，在HCV复制子模型中，在特异性干扰HCV功能的化合物与发挥细胞毒素或抑制细胞生长作用的化合物之间进行鉴别是重要的，并因而使HCV RNA或连接的报告分子酶浓度下降。本领域已知例如采用荧光氧化还原染料诸如刃天青，基于线粒体酶的活性，评价细胞毒性的试验。而且，为评价连结报告基因活性的非选择性抑制作用，存在细胞反选择(cellular counterscreens)，诸如萤火虫荧光素酶。可用荧光素酶报告基因稳定转染装配适当的细胞类型，其表达取决于结构上活化的基因启动子，且这类细胞可用作反选择，以消除非选择性抑制剂。

由于它们的抗病毒性质，尤其是它们的抗HCV性质，如本文所述的式I化合物，尤其在治疗感染HCV的温血动物，尤其是人中可用于抑制HCV复制和用于预防HCV感染。而且，本发明涉及治疗感染HCV或有感染HCV风险的温血动物，尤其是人的方法，所述方法包括给予抗HCV有效量的如本文所限定的式I化合物。

因此，如本文所限定的式I化合物可用作药物，尤其是作为抗HCV药物。作为药物或治疗方法的所述用途包括全身给予HCV感染的受试者或易于感染HCV的受治疗者有效对抗与HCV感染有关的疾病的量。

本发明还涉及本化合物在制备治疗或预防HCV感染的药物方面的用途。

通常，预期每日抗病毒有效量将介于约0.01-约50mg/kg，或约0.02-约30mg/kg体重。在整天的适当时间间隔以两次、三次、四次或更多次分剂量给予所需剂量可能是适当的。所述分剂量可被配制为单位剂型，例如，每单位剂型含有约1-约500mg或约1-约300mg或约1-约100mg或约2-约50mg的活性成分。

本发明还涉及式I化合物、其药学上可接受的盐或溶剂合物和另一种抗病毒化合物，尤其是另一种抗HCV化合物的组合。术语“组合”可涉及含有(a)如上所限定的式I化合物和(b)任选的另一种抗HCV化合物的产物，作为供同时、分开或相继用于治疗HCV感染的组合制剂。

以下实施例旨在阐明本发明，且不应被理解为对其范围的限制。

合成实施例

实施例1：1-(3-(4-乙酰基苯氧基)苯基)乙酮

140℃下，搅拌1-(3-羟基苯基)乙酮(8g，58.7mmol)、1-(4-氟苯基)乙酮(8.1g，58.7mmol)和无水碳酸钾(16.2g，117.5mmol)在DMSO(150mL)中的混合物16小时。将混合物分配在乙酸乙酯和水之间。用1M HCl酸化含水层，直到pH＝6-7，用乙酸乙酯萃取。合并的有机物经盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤和在减压下浓缩。粗产物经硅胶层析(乙酸乙酯/庚烷：1/1)，生成呈白色固体的1-(3-(4-乙酰基苯氧基)苯基)乙酮(11g，74％)。

LC/MS：m/z＝256.2(M+1)⁺.准确质量：255.1.

实施例2：2，2-二溴-1-(3-(4-(2，2-二溴乙酰基)苯氧基)苯基)乙酮

向1-(3-(4-乙酰基苯氧基)苯基)乙酮(11g，43.2mmol)的氯仿(300mL)溶液逐滴加入溴(6.6mL，129.7mmol)。80℃下搅拌反应4小时，冷却至室温并在减压下浓缩。将混合物分配在乙酸乙酯和水之间。用乙酸乙酯萃取含水层，合并的有机层被干燥(MgSO₄)，过滤和真空浓缩。所生成的粗原料经快速层析法(硅胶：EtOAc/庚烷：3/7)纯化，生成呈黄色固体的2，2-二溴-1-(3-(4-(2，2-二溴乙酰基)苯氧基)苯基)乙酮(16g，65％)。

实施例3：2-溴-1-(3-(4-(2-溴乙酰基)苯氧基)苯基)乙酮

0℃下，向2，2-二溴-1-(3-(4-(2，2-二溴乙酰基)苯氧基)苯基)乙酮(16g，28mmol)的四氢呋喃(300mL)溶液加入三乙胺(3.6mL)和亚磷酸二乙基酯(10.7mL，83.2mmol)。逐渐加热反应至室温，在30分钟内搅拌混合物，并在减压下浓缩。将混合物分配在乙酸乙酯和水之间。用EtOAc萃取含水层，合并的有机层被干燥(MgSO₄)，过滤和真空浓缩。所生成的粗原料经快速层析法(硅胶：EtOAc/庚烷：3/7)纯化，生成呈黄色油的2-溴-1-(3-(4-(2-溴乙酰基)苯氧基)苯基)乙酮(10.2g，88％)。

实施例3a：2-溴-1-(4-(3-(2-溴乙酰基)-4-甲氧基苯氧基)苯基)乙酮

采用如在实施例1-3中所述的类似步骤，用1-(5-羟基-2-甲氧基苯基)乙酮和1-(4-氟苯基)乙酮作为起始原料，合成2-溴-1-(4-(3-(2-溴乙酰基)-4-甲氧基苯氧基)苯基)乙酮。

实施例4：2-叠氮基-1-(3-(4-(2-叠氮乙酰基)苯氧基)苯基)乙酮

向2-溴-1-(3-(4-(2-溴乙酰基)苯氧基)苯基)乙酮(10.2g，24.3mmol)的DMSO(200mL)溶液加入叠氮化钠(3.5g，53.4mmol)。室温下，在60分钟内搅拌反应混合物，然后于减压下浓缩。将粗混合物分配在乙酸乙酯和水之间。用乙酸乙酯萃取含水层，合并的有机层被干燥(MgSO₄)，过滤和真空浓缩。粗产物原样用于下一步骤。

实施例5：2-氨基-1-(3-(4-(2-氨基乙酰基)苯氧基)苯基)乙酮二盐酸盐

向2-叠氮基-1-(3-(4-(2-叠氮基乙酰基)苯氧基)苯基)乙酮(9g，26.4mmol)的甲醇(400mL)溶液加入HCl(1M在甲醇中，53mL)，用Pd/C(10％)在氢气氛(1巴)下在2小时内氢化混合物。溶液经硅藻土过滤，并在减压下浓缩。使粗产物溶解于二氯甲烷，在加入HCl(6N，在异丙醇中)后沉淀出盐酸盐。过滤并真空干燥，得到2-氨基-1-(3-(4-(2-氨基乙酰基)苯氧基)苯基)乙酮二盐酸盐。

LC/MS：m/z＝285.2(M+1)⁺.准确质量：284.1

实施例6：2-(2-(3-(4-(2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)乙酰基)苯氧基)苯基)-2-氧代乙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸(S)-叔丁酯

向2-氨基-1-(3-(4-(2-氨基乙酰基)苯氧基)苯基)乙酮二盐酸盐(5.65g，15.8mmol)的DMF(200mL)溶液加入N，N-二异丙基乙胺(10.4mL)、HATU(15g，39.54mmol)和BOC-L-脯氨酸(7.5g，34.7mmol)。在60分钟内，于室温下搅拌混合物，然后于减压下浓缩。将混合物分配于EtOAc和水之间。用EtOAc萃取含水层，合并的有机层被干燥(MgSO₄)，过滤和真空浓缩。所生成的粗原料经快速层析法(硅胶：二氯甲烷/MeOH：9/1)纯化，生成呈黄色油的2-(2-(3-(4-(2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)乙酰基)苯氧基)苯基)-2氧代乙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸(S)-叔丁基酯(8g，74.5％)。

LC/MS：m/z＝679.3(M+1)⁺.准确质量：678.3

实施例7：2-(5-(4-(3-(2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯氧基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸(S)-叔丁基酯

在密封管中，向2-(5-(4-(3-(2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯氧基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸(S)-叔丁基酯(1.3g，17.6mmol)的对二甲苯(20mL)溶液加入HOAc(0.5mL)和醋酸铵(600mg，0.88mmol)。在微波炉中140℃下加热混合物2小时。将混合物分配于EtOAc和水之间。用EtOAc萃取含水层，合并的有机层经干燥(MgSO₄)，过滤和真空浓缩。所生成的粗原料经快速层析法纯化(硅胶：二氯甲烷/MeOH：9/1)，生成2-(5-(4-(3-(2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯氧基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸(S)-叔丁基酯(420mg，74％)。

LC/MS：m/z＝641.2(M+1)⁺.准确质量：640.3

实施例8：2-((S)-吡咯烷-2-基)-5-(4-(3-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯氧基)苯基)-1H-咪唑盐酸盐

向2-(5-(4-(3-(2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯氧基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸(S)-叔丁基酯(500mg，0.78mmol)的二氯甲烷溶液加入HCl(1M，3mL)，室温下搅拌沉淀的反应产物。过滤并在真空炉中干燥，得到2-((S)-吡咯烷-2-基)-5-(4-(3-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯氧基)苯基)-1H-咪唑盐酸盐(220mg)。

实施例9：2-苯基-1-((S)-2-(5-(4-(3-(2-((S)-1-(2-苯基乙酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯氧基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)乙酮

向2-((S)-吡咯烷-2-基)-5-(4-(3-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯氧基)苯基)-1H-咪唑盐酸盐(72mg)的DMF(20mL)溶液加入N，N-二异丙基乙胺(0.1mL)、HATU(155mg，0.4mmol)和苯基乙酸(49mg，0.36mmol)。室温下，搅拌反应1小时，并在减压下浓缩。粗产物经反相制备型HPLC纯化，得到2-苯基-1-((S)-2-(5-(4-(3-(2-((S)-1-(2-苯基乙酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯氧基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)乙酮(6mg)。

LC/MS：m/z＝677.6(M+1)⁺.准确质量：676.3

实施例10：2-羟基-1-((2S)-2-(5-(4-(3-(2-((2S)-1-(2-羟基-2-苯基乙酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯氧基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-苯基乙酮.

向2-((S)-吡咯烷-2-基)-5-(4-(3-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯氧基)苯基)-1H-咪唑盐酸盐(56mg)的DMF(15mL)溶液加入N，N-二异丙基乙胺(0.1mL)、HATU(103mg，0.27mmol)和DL-扁桃酸(36mg，0.24mmol)。室温下，搅拌反应1小时，并在减压下浓缩。粗产物经反相制备型HPLC纯化，得到2-羟基-1-((2S)-2-(5-(4-(3-(2-((2S)-1-(2-羟基-2-苯基乙酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯氧基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-苯基乙酮(3mg)。

LC/MS：m/z＝709.4(M+1)⁺.准确质量：708.3

实施例11：2-间甲苯基-1-((2S)-2-(5-(4-(3-(2-((S)-1-(2-间甲苯基乙酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯氧基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)乙酮

向2-((S)-吡咯烷-2-基)-5-(4-(3-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯氧基)苯基)-1H-咪唑盐酸盐(100mg，0.22mmol)的DMF(22mL)溶液加入N，N-二异丙基乙胺(0.2mL)、HATU(216mg，0.56mmol)和2-间甲苯基乙酸(75mg，0.5mmol)。室温下，搅拌反应1小时，并在减压下浓缩。粗产物经反相制备型HPLC纯化，得到2-间甲苯基-1-((2S)-2-(5-(4-(3-(2-((S)-1-(2-间甲苯基乙酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯氧基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)乙酮(5mg)。

LC/MS：m/z＝705.2(M+1)⁺.准确质量：704.3

实施例12：1，1′-(4，4′-氧基双(4，1-亚苯基))双(2-氯乙酮)

向配有回流冷凝器和大磁力搅拌棒的3-颈圆底烧瓶加入二苯醚(30g，0.176mol)、氯乙酰基氯(79.6g，0.71mol)和二硫化碳(100mL)。剧烈搅拌混合物，同时或直到反应混合物开始沸腾时加入约3g部分的氯化铝(141g，1.06mol)。当加入完成时，搅拌下加热反应混合物至100℃经2.5小时。将反应冷却至室温，放置1小时。弃去顶层(二硫化碳)。将底层等量分在4个各含有冰(600mL)和浓盐酸(50mL)的烧杯(各1L)中，同时剧烈搅拌。合并混合物，并用二氯甲烷(5x 400mL)萃取。合并各有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下除去滤液的溶剂，生成棕色油。粗混合物经采用庚烷至乙酸乙酯梯度的快速层析法部分纯化。合并最好的流分，在减压下除去溶剂，生成棕色油。在乙酸乙酯中再结晶油，生成标题产物(16.25g)。第二次收获得到额外的25g。

LC/MS m/z＝323(M+1)⁺.准确质量：322.0

¹H-NMR(氘代氯仿，400MHz)：8.01ppm(d，4H)，7.15ppm(d，4H)，4.69ppm(s，4H).

实施例13：′2，2-2，2′-(4，4′-氧基双(4，1-亚苯基))双(2-氧代乙烷-2，1-二基)二吡咯烷-1，2-二羧酸(2S，2′S)-1-叔丁基酯

向乙腈中的实施例12(5g，15.5mmol)中得到的化合物加入Boc-L-脯氨酸(6.99g，32.5mmol)，随后逐滴加入DIEA(4.4g，34.04mmol)。室温下搅拌反应混合物3小时。在减压下除去溶剂。加入水(50mL)，用二氯甲烷(3x 150mL)萃取混合物。合并各有机层，干燥(硫酸钠)，过滤，在减压下除去滤液的溶剂。粗产物经采用庚烷到乙酸乙酯梯度的快速层析法纯化，生成标题产物。

LC/MS：m/z＝681(M+1)⁺.准确质量：680.3

实施例14：2，2′-(5，5′-(4，4′-氧基双(4，1-亚苯基))双(1H-咪唑-5，2-二基))二吡咯烷-1-羧酸(2S，2′S)-叔丁基酯

将在实施例13中得到的初始脂、乙酸铵(20eq)和二甲苯放入密封容器。回流下搅拌混合物数小时，生成标题产物。将混合物分配于EtOAc和水之间。用EtOAc萃取含水层，合并的有机层经干燥(MgSO₄)，过滤和真空浓缩。所生成的粗原料经快速层析法纯化(硅胶：二氯甲烷/MeOH：9/1)，生成标题产物。

LC/MS：m/z＝641(M+1)⁺.准确质量：640.3

实施例15：(S)-5，5′-(4，4′-氧代双(4，1-亚苯基))双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑)

按照如实施例8中所述的相同步骤，除去在实施例14中得到的化合物的脯氨酸部分上的保护基。

LC/MS：m/z＝441(M+1)⁺.准确质量：440.2

而且，采用如实施例9中相同的步骤，酰基化脯氨酸部分的去保护氮。

实施例16：2-(4-(4-(3-(2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)-4-甲氧基苯氧基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸(S)-叔丁基酯

室温下，向2-溴-1-(4-(3-(2-溴乙酰基)-4-甲氧基苯氧基)苯基)乙酮(实施例3a)(10g，14mmol)的乙腈(150mL)溶液加入N-(叔丁氧基羰基)-L-脯氨酸(11.2g，28mmol)。在室温下搅拌该混合物6小时后，向该溶液中，逐滴加入Hunigs碱(23mL，42mmol)。然后真空浓缩反应混合物，用二氯甲烷(300mL)稀释粗产物。然后用水洗涤有机混合物(2x 300mL)。合并的有机物经硫酸镁干燥。在过滤和蒸发溶剂后，经快速层析法(EtOAc/庚烷：3/7)纯化混合物，得到纯吡咯烷-1，2-二羧酸(S)-2-(2-(4-(3-(2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-羰基氧基)乙酰基)-4-甲氧基苯氧基)苯基)-2-氧代乙基)1-叔丁基酯，它原样用于下一步骤。随后使吡咯烷-1，2-二羧酸(S)-2-(2-(4-(3-(2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-羰基氧基)乙酰基)-4-甲氧基苯氧基)苯基)-2-氧代乙基)1-叔丁基酯溶解于二甲苯(150mL)，加入NH₄OAc(5eq.)。140℃下搅拌反应混合物6小时。随后用二氯甲烷萃取混合物，合并的有机层经水洗涤，经Na₂SO₄干燥。混合物经过滤，除去溶剂，残余物经快速层析法(氯仿/MeOH：95/5)纯化，生成标题化合物(4.1g，得率：44％)。

¹H NMR(400MHz，氘代氯仿)δppm 1.48(s，9H)1.50(s，9H)1.86-2.02(m，2H)2.07-2.23(m，4H)2.91-3.04(m，2H)3.39(br.s.，4H)3.97(br.s.，3H)4.97(dd，J＝7.5，2.4Hz，2H)6.90(m，5H)6.98(d，J＝8.6Hz，2H)7.14(s，2H)

实施例17：2-(5-(3-(4-(2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯氧基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸(S)-叔丁基酯的选择制备

0℃下，向2-溴-1-(3-(4-(2-溴乙酰基)苯氧基)苯基)乙酮(2.05g，5mmol)的CH₂Cl₂(40mL)溶液加入N-(叔丁氧基羰基)-L-脯氨酸(2.15g，10mmol)。随后小心逐滴加入三乙胺(1.0g，10mmol)，室温下搅拌混合物6小时。再加入CH₂Cl₂(150mL)，混合物经水洗涤，经Na₂SO₄干燥。过滤后，除去溶剂，经快速层析法(正己烷/乙酸乙酯：2/1)纯化得到的残余物，生成吡咯烷-1，2-二羧酸(S)-2-(2-(3-(4-(2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-羰基氧基)乙酰基)苯氧基)苯基)-2-氧代乙基)1-叔丁基酯，得量2.11g(63％)。140℃下搅拌二甲苯(150mL)中的吡咯烷-1，2-二羧酸(S)-2-(2-(3-(4-(2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-羰基氧基)乙酰基)苯氧基)苯基)-2-氧代乙基)1-叔丁基酯(6.80g，10mmol)和NH₄OAc(7.7g，100mmol)的混合物6小时。然后用乙酸乙酯(300mL)萃取混合物，经水洗涤和经Na₂SO₄干燥。过滤后，除去溶剂，经快速层析法纯化所得到的残余物(氯仿/MeOH：95/5)，生成标题化合物(50％).

¹H NMR(400MHz，氘代氯仿)δppm 1.49(m，18H)1.84-2.02(m，4H)2.15(br.s.，4H)3.41(m，4H)4.86-5.03(m，2H)6.87(d，J＝7.0Hz，1H)7.04(m，3H)7.17(m，3H)7.32(m，3H)

实施例18-41

通用步骤：

首先，向2-(5-(3-(4-(2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯氧基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸(S)-叔丁基酯的二氯甲烷溶液逐滴加入过量HCl(1M在异丙醇中)。滤去沉淀出的固体，并在真空炉中干燥，生成2-(吡咯烷-2-基)-5-(4-(3-(2-(吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯氧基)苯基)-1H-咪唑盐酸盐。

随后，向2-(吡咯烷-2-基)-5-(4-(3-(2-(吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯氧基)苯基)-1H-咪唑盐酸盐(300mg)的DMF(7ml)溶液加入Hunigs碱(0.45ml，2.72mmol)、HATU(647mg，1.70mmol)和相应的酸(1.5mmol)。室温下搅拌混合物4小时，并真空浓缩。将混合物装在Isolute(SCX-3，15mL)塞上，用MeOH洗涤塞(4次)。然后，用NH₃/MeOH(2次)漂洗出产物。随后真空浓缩所得到的溶液，用HCl(1M在水中)和DCM(3/1)处理粗产物直到得到固体。再滤出固体，用HCl(1M)水溶液洗涤。在真空炉中干燥产物，得到目标产物。

根据该通用步骤合成的化合物列于表1中。如表1中所示，某些化合物被制备为HCl盐，而其它的被制备为游离碱。化合物39、40、43和44经常规硅胶层析法(MeOH(7N NH₃)/DCM：2/98)或反相层析法进一步纯化。

表1

实施例45-48

除从2-(4-(4-(3-(2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)-4-甲氧基苯氧基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸(S)-叔丁基酯(实施例16)开始外，采用如以上针对化合物18-41相同的通用步骤，得到列于表2中的化合物。化合物45、46、47和48经常规硅胶层析法(MeOH(7 N NH₃)/DCM：2/98)或反相层析法进一步纯化。

表2

实施例49

除从(S)-5，5′-(4，4′-氧代双(4，1-亚苯基))双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑)(实施例15)开始外，采用针对以上化合物18-41的相同的通用步骤，得到列于表3的化合物。

表3

所有化合物经LC/MS特征鉴定。举例化合物的保留时间(Rt)列于表4。表4还列出用来确定各举例化合物的Rt的LC/MS方法。采用以下LC/MS方法：

方法A：装配有PDA检测器(范围210-400nm)和带双模离子源ES+/-的Waters SQD的Waters Acquity UPLC。所用柱为Halo C18，2.7μ，2.1x 50mm并保持在50℃。用1.5分钟使95％甲酸水溶液(0.1％)/5％乙腈渐升至100％乙腈梯度，保持0.6分钟，然后回到100％甲酸水溶液(0.1％)持续0.5分钟。流速为0.6mL/min。

方法B：液体层析法：Waters Alliance 2695，UV检测器：Waters 996PDA，范围：210-400nm；质量检测器：Waters ZQ，离子源：所用ES+，ES-柱：SunFire C18 3.5μ 4.6x100mm流动相A：10mM NH₄OOCH+0.1％HCOOH在H₂O中；流动相B：CH₃OH；柱温：50℃；流速：1.5mL/min梯度时间(min)[％A/％B]0[65/35]至7[5/95]至9.6[5/95]至9.8[65/35]至12[65/35]

方法C：装配有PDA检测器的Waters Acquity UPLC(范围210-400nm)和带双模离子源ES+/-的Waters SQD。所用柱为XS Strategy 1.7μ，2.1x 20mm并维持在50℃。用1.5分钟使100％甲酸水溶液(0.1％)渐升至100％乙腈的梯度，保持0.6分钟，然后回到100％甲酸水溶液(0.1％)0.5分钟。流速为0.6mL/min。

所选择的化合物经NMR进一步特征鉴定。NMR谱被纪录在BrukerAvance 400分光计上，以400MHz对1H和100MHz对13C和用DMSO作为溶剂运行，除非另有说明。在各种情况下，用四甲基硅烷(TMS)作为内标。化学位移以ppm给出，以Hz给出J值。

采用以下缩写词表示峰裂数：d指双峰，t指三重峰，m指多重峰，等。

实施例32：

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm 2.00-2.16(m，6H)，2.42(m，2H)，3.71-3.82(m，2H)，4.03-4.14(m，2H)，5.25-5.41(m，1H)，6.79(m，2H)，7.07-7.14(m，1H)，7.19(m，2H)，7.19(br.s.，1H)，7.57(m，1H)，7.67(m，1H)，7.71(m，1H)，7.77(s，2H)，7.90(m，2H)，8.01(s，1H)，8.13(s，1H)，8.28(br.s.，2H)

实施例39：

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm 1.02-1.05(m，6H)1.88-2.19(m，8H)3.07-3.13(m，3H)3.17-3.20(m，3H)3.37-3.50(m，4H)3.51-3.56(m，6H)3.75-3.86(m，2H)4.20-4.32(m，2H)4.98-5.10(m，2H)6.80(br.s.，1H)6.97(br.s.，2H)7.18-7.26(m，2H)7.29-7.34(m，1H)7.37(br.s.，2H)7.44-7.52(m，2H)7.66-7.75(m，2H)11.63-11.82(m，2H)

实施例40：

¹H NMR(600MHz，METHANOL-d₄)δppm 0.84-1.06(m，18H)1.81-2.43(m，8H)3.36-3.44(m，2H)3.61-3.67(m，6H)3.78-3.88(m，2H)3.93-4.03(m，2H)4.26-4.41(m，2H)5.05-5.23(m，2H)6.74-7.08(m，4H)7.15-7.77(m，8H)

实施例45：

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm 0.71-0.84(m，12H)1.92-2.22(m，8H)2.28-2.41(m，2H)3.50-3.56(m，6H)3.78-4.00(m，4H)3.94-3.99(m，3H)4.02-4.15(m，2H)5.11-5.23(m，2H)7.04-7.13(m，2H)7.15-7.21(m，1H)7.22-7.30(m，2H)7.68-7.75(m，1H)7.83-7.89(m，2H)7.83-7.89(m，2H)7.89-7.93(m，1H)7.94-7.99(m，1H)

实施例48：

1H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm 1.87-2.10(m，8H)2.29-2.40(m，2H)3.73-3.89(m，4H)3.96(br.s.，3H)5.13-5.25(m，2H)5.30-5.41(m，2H)7.07-7.13(m，2H)7.16-7.23(m，2H)7.24-7.40(m，12H)7.65-7.98(m，5H)

生物学实施例

复制子试验

检验式(I)化合物对HCV复制子的抑制活性。如Lohmann等(1999)Science 285卷110-113页等所述、经Krieger等(2001)Journal ofVirology 75：4614-4624页，在多目标筛选策略中所述修饰的，该细胞试验基于双顺反子(bicistronic)表达结构。

大体上，该方法如下：

试验采用稳定转染细胞系Huh-7luc/neo(下文称为Huh-Luc)。该细胞系含有RNA编码的双顺反子表达结构，其包含转译自来自脑心肌炎病毒(EMCV)的内部核糖体进入位点(IRES)的HCV型1b的野生型NS3-NS5B区域，在此之前是报告基因部分(FfL-荧光素酶)，以及可选择标记部分(neo^R，新霉素磷酸转移酶)。该结构位于来自HCV型1b的5’和3’NTRs(非转译域)侧面。在G418(neo^R)的存在下，持续培养复制子细胞取决于HCV RNA的复制。表达HCV RNA的稳定转染的复制子细胞(其自主复制并达到高水平，编码尤其是荧光素酶)用来筛选抗病毒化合物。

在以各种浓度加入的测试化合物和对照化合物的存在下，将复制子细胞接种在384孔培养皿中。在培养3天后，通过检验荧光素酶的活性测定HCV复制(采用标准荧光素酶试验底物和试剂和PerkinElmer ViewLux^TM ultraHTS微孔板成像仪)。在没有任何抑制剂的情况下，对照培养基中的复制子细胞具有高荧光素酶表达。用Huh-Luc细胞监测化合物对荧光素酶活性的抑制活性，得到各测试化合物的剂量-反应曲线。然后计算EC₅₀值，它表示使被检测的荧光素酶活性水平，或者更具体地，降低遗传连接HCV复制子RNA复制的能力下降50％所需化合物的量。

结果

表4表示针对以上给出的实施例化合物所得到的复制子结果和细胞毒性结果。

表4

Claims

1.一种式I化合物：

包括其任何可能的立体异构体，其中：

R和R¹相互独立地为任选被一个、两个或三个取代基取代的苯甲酰基，所述取代基各自独立地选自卤代基和C₁-C₆烷基；或-C(＝O)-Het，其中Het任选被独立地选自C_1-4烷基的一个或两个取代基取代；或式-C(＝O)-CH(R^x)-R⁶的基团、苄氧羰基、C₁-C₆烷氧基羰基、式H₂N-CH(R⁷)-C(＝O)-的基团、式R⁸-O-C(＝O)-HN-CH(R⁷)-C(＝O)-的基团或-C(＝O)-C(＝O)-苯基；

R⁶是C₁-C₄烷基、C_3-6环烷基、苄基或苯基，其中的苯基可任选被各自独立地选自卤代基、C₁-C₆烷基、甲氧基、三氟甲氧基的一个、两个或三个取代基取代，或者在相邻环原子上的两个取代基与苯环一起，形成苯并间二氧杂环戊烯，和其中的C₁-C₄烷基任选被单-或二C₁-C₄烷基氨基、苯基磺酰基、Het取代，和其中苄基任选被各自独立地选自卤代基、甲氧基的一个、两个或三个取代基取代；

R^x选自氢、羟基、C₁-C₆烷氧基、氨基、单-或二C₁-C₆烷基氨基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、咪唑基、C₁-C₆烷基羰基氨基或C₁-C₆烷氧基羰基氨基；

R²和R³相互独立地是氢、羟基、C₁-C₄烷基或卤代基；

R⁴和R⁵相互独立地是氢、C₁-C₄烷基、卤代基或甲氧基；

R⁸是C₁-C₄烷基或苄基；

或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物。

2.权利要求1的化合物，其中R²和R³是氢、羟基或氟代基，尤其是其中R²和R³是氢。

3.权利要求1或2的化合物，其中R和R¹相互独立地为式一C(＝O)-CH(R^x)-R⁶或-C(＝O)-Het的基团，尤其是其中R和R¹相互独立地为式-C(＝O)-CH(R^x)-R⁶的基团。

4.权利要求1-3中任一项的化合物，其中R^x是羟基、C₁-C₆烷氧基、氨基、单-或二C₁-C₆烷基氨基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、C₁-C₆烷基羰基氨基或C₁-C₆烷氧基羰基氨基；或者其中R^x是羟基、氨基、二C₁-C₄烷基氨基或吗啉基；或者其中R^x是羟基、氨基或二甲基氨基。

5.权利要求1-4中任一项的化合物，其中R⁶是任选被一个卤代基或C₁-C₆烷基取代的苯环。

6.权利要求1-4中任一项的化合物，其中R⁶选自苯基和异丙基。

7.权利要求1-3中任一项的化合物，其中Het选自2-吡啶基、2-嘧啶基、2-吡嗪基、2-咪唑基、2-噻唑基、2-噻吩基、2-吡唑啉基、2-哌啶基、2-吡咯烷基、2-吡咯基、2-呋喃基、2-四氢呋喃基、2-氧杂环丁烷基、2-或3-吗啉基和2-哌嗪基，尤其是2-四氢呋喃基。

8.权利要求1-7中任一项的化合物，其中R⁴和R⁵独立地为氢、甲基、甲氧基或氯代基，尤其是其中R⁴和R⁵是氢。

9.权利要求1的化合物，其中的基团

在相对于两个苯基之间的氧桥的间位被取代。

10.根据权利要求1-9中任一项的化合物，其用于HCV复制的抑制。