CN102408457A - 利用雪莲果制备蔗果三糖、蔗果四糖方法 - Google Patents

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朱振元
连红玉
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Abstract

本发明公开了雪莲果低聚果糖分析方法及蔗果三糖、蔗果四糖制备方法。采用水提醇沉的方法，取其上清液，进行浓缩、冷冻干燥，得到淡黄色的雪莲果低聚糖。雪莲果低聚糖经高压液相色谱分析，色谱条件：色谱柱：APS-2HYPERSIL；柱温：30℃；流动相：乙腈-水(75∶25，V/V)；流速：0.8ml/min；进样量：20μl；示差检测器。雪莲果低聚糖中含有果糖、葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖，其含量分别为38.30％、16.44％、14.58％、12.29％、12.17％、6.20％。将制得的低聚糖样品进行硅胶柱层析，用冰乙酸∶氯仿∶无水乙醇∶水＝3∶11∶11∶1为洗脱剂进行洗脱，依次收集洗脱液，然后浓缩、冻干。得到蔗果三糖和蔗果四糖。经高压液相色谱法分析，制备的蔗果三糖、蔗果四糖纯度可达90％以上。

Description

利用雪莲果制备蔗果三糖、蔗果四糖方法
技术领域
本发明涉及雪莲果中低聚糖，同时，本发明还涉及雪莲果中低聚糖的定性、定量分析及其低聚果糖中蔗果三糖、蔗果四糖的制备。 
背景技术
低聚果糖是雪莲果中含量较高的活性物质。低聚果糖是由蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖等组成，并且具有特殊的保健功能。目前的研究大多集中于制备高纯度的低聚果糖，但对低聚果糖中蔗果三糖、蔗果四糖等各单组分制备的研究较少，尚缺乏成熟的技术 
发明内容
本发明的目的在于提供一种雪莲果低聚糖，其提取方法简便易行，可大批量生产。
本发明的另一目的在于提供雪莲果低聚糖的成分分析方法，此方法准确可靠。 
本发明的目的还在于提供该雪莲果低聚果糖中蔗果三糖、蔗果四糖的制备方法。该方法制备的蔗果三糖、蔗果四糖纯度较高。 
本发明提供的雪莲果低聚糖，其采用水提醇沉的方法，取其上清液，然后浓缩、冷冻干燥，得到的雪莲果低聚糖为淡黄色的粉末。 
本发明提供的雪莲果低聚糖的成分分析方法，采用高压液相色谱法进行分析。色谱条件：色谱柱：APS-2HYPERSIL；柱温：30℃；流动相：乙腈-水(75∶25，V/V)；流速：0.8ml/min；进样量：20μl；检测器：示差检测器。雪莲果低聚糖中含有果糖、葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖，其含量分别为38.30％、16.44％、14.58％、12.29％、12.17％、6.20％。低聚糖样品中的低聚果糖含量为30.66％。 
本发明采用硅胶柱层析，制备出低聚果糖中蔗果三糖、蔗果四糖单组分。将低聚糖样品进行干法上柱，用展开剂冰乙酸∶氯仿∶无水乙醇∶水＝3∶11∶11∶1进行洗脱，经飞行时间质谱分析，洗脱出的物质为蔗果三糖和蔗果四糖，高压液相色谱法分析其纯度分别为95.9％，92.6％，纯度较高。 
具体实施方式
实施案例1雪莲果中低聚糖的制备 
原料：雪莲果产自云南，成熟度95％，4℃下贮藏半个月。将雪莲果切片，50℃烘干，用高速粉碎机粉碎，制成雪莲果粉末。 
雪莲果粉末→80℃热水浸提→离心、抽滤→保留清液，残渣反复提取→合并提取液→浓缩→80％乙醇(v/v)沉淀→保留上清液→浓缩→冷冻干燥→雪莲果低聚糖 
实施案例2雪莲果中低聚糖的定性、定量试验 
高压液相色谱 
样品处理：将雪莲果低聚糖样品用流动相配成5mg/ml的溶液，经0.22μm微孔滤膜过滤，超声脱气，取20μl滤液进行分析。 
标准液配制：用流动相分别配制5mg/ml的果糖、葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖对照品标准溶液，过0.22μm滤膜，超声脱气备用。。 
色谱条件： 
色谱柱：APS-2HYPERSIL； 
柱温：30℃； 
流动相：乙腈-水(75∶25，V/V)，混匀，使用前超声脱气； 
流速：0.8ml/min； 
进样量：20μl。 
检测器：示差检测器 
根据高压液相色谱图谱可知，样品中各成分的出峰时间(即保留时间)与标准液中标准物的出峰时间基本一样，所以可以得知从雪莲果制备的低聚糖样品中含有果糖，葡萄糖，蔗糖，蔗果三糖，蔗果四糖。同时在49.315min时还有一个小峰，推测其为蔗果五糖。由于条件限制没有买到蔗果五糖的标准品，所以无法验证。经HPLC面积归一化法定量分析，果糖、葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的含量分别为38.30％、16.44％、14.58％、12.29％、12.17％、6.20％。低聚糖样品中的低聚果糖含量为30.66％。 
实施例3：低聚果糖中蔗果三糖、蔗果四糖的制备 
经过反复的薄层层析试验，确定以展开剂冰乙酸∶氯仿∶无水乙醇∶水＝3∶11∶11∶1为硅胶柱层析的洗脱剂。取适量硅胶，加入洗脱剂，混匀，转入玻璃层析柱(1.6cm×50cm)。取1g低聚糖样品，采用干法上柱，然后用洗脱剂进行洗脱，洗脱速度为1ml/min。用试管收集洗脱液，浓缩，冷冻干燥。然后进行薄层层析。显色剂为2.5g二苯胺，加5mL苯胺、25mL 85％磷酸混合溶解后，加丙酮稀释至250mL，冷藏备用(冷藏可在2～3周内使用)。从薄层层析图片中可知，第81-107管主要以蔗果三糖为主，第131-159管主要以蔗果四糖为主，分别收集并命名为样品1、样品2。然后做飞行时间质谱进行分析。样品1的图谱有一个质荷比(m/z)为527的准分子[GF2+Na]+离子峰，减去一个Na+的质量23，与蔗果三糖GF2分子量504相符。样品2的图谱有一个质荷比(m/z)为689.27的准分子[GF3+Na]+离子峰，减去一个Na+的质量23，与蔗果四糖GF3分子量666相符。还有一个质荷比(m/z)为705.29的准分子[GF3+K]+离子峰，减去一个K+的质量39，也与蔗果四糖GF3分子量666相符。 
然后对样品1和样品2进行高压液相色谱分析，方法同实施例2。经过HPLC面积归一化法定量分析，样品1的纯度为95.9％，样品2的纯度为92.6％，纯度较高。
附图说明：
图1是雪莲果低聚糖高压液相色谱图谱图； 
图2是样品1飞行时间质谱图谱图； 
图3是样品2飞行时间质谱图谱图。 

Claims (3)

1.雪莲果低聚糖，由下法制得：采用水提醇沉的方法，取上清液，然后浓缩、冷冻干燥，得到淡黄色的雪莲果低聚糖粉末。
2.权利要求1所述的雪莲果低聚糖，利用高压液相色谱对其进行成分分析，色谱条件为色谱柱：APS-2HYPERSIL；柱温：30℃；流动相：乙腈-水(75∶25，v/v)；流速：0.8ml/min；进样量：20μl；检测器：示差检测器；雪莲果低聚糖中含有果糖、葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖，其含量分别为38.30％、16.44％、14.58％、12.29％、12.17％、6.20％。
3.权利要求1所述的雪莲果低聚糖，以冰乙酸∶氯仿∶无水乙醇∶水＝3∶11∶11∶1为洗脱剂，利用硅胶柱层析制备高纯度蔗果三糖和蔗果四糖的方法。
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