CN102395581A - 作为微管蛋白聚合抑制剂的取代的4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-腈和取代的4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-羧酰胺 - Google Patents

作为微管蛋白聚合抑制剂的取代的4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-腈和取代的4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-羧酰胺 Download PDF

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Abstract

取代的4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-腈和取代的4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-羧酰胺以及它们的盐是微管蛋白聚合抑制剂，可用于治疗癌症。

Description

作为微管蛋白聚合抑制剂的取代的4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-腈和取代的4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-羧酰胺
相关申请的引用
本申请要求2009年4月16日提交的名称为“作为微管蛋白聚合抑制剂的取代的4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-腈和取代的4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-羧酰胺”的美国临时专利申请No.61/169,785的35USC 119(e)之下的权益，所述申请的全部公开内容通过引用并入本申请。
技术领域
本申请涉及取代的4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-腈和4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-羧酰胺、它们的盐、包含它们的药物组合物，以及它们作为微管蛋白聚合抑制剂和在癌症治疗中的用途。
背景技术
微管是细胞骨架蛋白聚合物，其由α-微管蛋白和β-微管蛋白聚合物构成。它们是所有细胞的必不可少的成分，并且对于维持细胞形态很关键。微管构成细胞有丝分裂机制(apparatus)的基础，并且动态运作的微管对于正常的细胞分裂、以及细胞运动和附着非常重要。对微管动态(微管动力学，microtubule dynamics)的干扰会阻止分裂中的细胞正常通过细胞周期，并且导致G2/M细胞周期停滞和细胞凋亡。癌细胞获得无限制的复制潜能，并且持续地分裂而不会进入静止或衰老。结果，癌细胞极度依赖微管动态，并且因此对干扰微管动态的试剂敏感，所述试剂要么通过抑制微管蛋白聚合来干扰微管动态，要么通过稳定微管聚合物来干扰微管动态。
在细胞周期的M期，包含细胞有丝分裂纺锤体的动态微管是多数已知的微管蛋白导向剂(tubulin-directed agent)的靶标。尽管各种抗有丝分裂剂的最终作用机制基本上是相同的(即，阻碍正常的微管形成和动态)，但各种试剂对抗不同癌症类型的活性有所不同。例如，长春花碱类(vincaalkaloids)(诸如长春新碱、长春碱和长春瑞滨(vinorelbine))通常对血液癌症更有效，而对实体瘤则不那么有效，尽管长春瑞滨对非小细胞肺癌和乳腺癌具有活性；而紫杉烷类(taxanes)(诸如紫杉醇(paclitaxel)和紫杉萜(docetaxel))对卵巢癌、乳腺癌和肺实体瘤有效，但对结肠和肾的实体瘤以及对血液癌症则相对无效。
值得期望的是，开发作为微管蛋白聚合的有效抑制剂的化合物，作为抗癌剂。
美国专利申请公开号US 2005/0085531(Amphora)公开了544个据称展现出ATP-利用酶抑制活性的噻吩基化合物(thiophene-basedcompounds)。这些化合物包括4-氨基-5-苯甲酰基-2-[(2-甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈，其据称是GSK-3α、GSK-3β、KIT和MAPKAPK的抑制剂；4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-羧酰胺(4-amino-5-benzoyl-2-(phenylamino)thiophene-3-carboxamide)，其据称是Aurora-A、GSK-3α、GSK-3β和KIT的抑制剂；以及4-氨基-2-(1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-基氨基)-5-(4-氯苯甲酰基)噻吩-3-羧酰胺(以下化合物27A)，其据称是Aurora-A、GSK-3α和GSK-3β的抑制剂。尽管所述化合物据称对所列举的每一个靶酶的活性，高于基本失活化合物群(population ofpredominately inactive compounds)对相同靶酶的平均活性的3σ，但并没有给出具体的活性。
美国专利申请公开号US 2006/0041006(Plexxikon)公开了281个据称是磷酸二酯酶(PDE)4B的配体的噻吩基化合物，以及它们在治疗PDE4B介导的病症中的用途。这些化合物包括43个4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-腈，包括4-氨基-5-(2，4-二甲氧基苯甲酰基)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈(以下化合物7A)，以及1个4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-羧酰胺。
Graschenkova等，Farmatsevtichnii Zhurnal，4，69-73(2007)据称公开了各种2-芳酰基-3-氨基-4-硝酰基-5-芳基氨基噻吩的合成和促使血清脂质减少的活性(hypolipidemic activity)。根据摘要和来自化学文摘(ChemicalAbstracts)的索引，据称公开了化合物4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(4-乙基苯基)氨基]噻吩-3-腈(以下化合物15A)。
多种取代的4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-腈和4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-羧酰胺，包括以下化合物1A、4A、12A、17A和38A，均可从科学目录中获得。
本申请中引用的所有文献的全部公开内容均通过引用并入本申请。
发明内容
在第一个方面，本发明是式A(表示)的取代的4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-腈和取代的4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-羧酰胺、以及它们的盐作为微管蛋白聚合抑制剂和用于治疗能够通过微管蛋白聚合抑制剂治疗的疾病(尤其是癌症)中的用途；包含该化合物的药物组合物，其用作微管蛋白聚合抑制剂和用于治疗能够通过微管蛋白聚合抑制剂治疗的疾病，尤其是癌症；该化合物在制备用作微管蛋白聚合抑制剂和用于治疗能够通过微管蛋白聚合抑制剂治疗的疾病(尤其是癌症)的药物中的用途；以及通过给予该化合物治疗能够通过微管蛋白聚合抑制剂治疗的疾病(尤其是癌症)的方法：
Figure BDA0000098177150000041
其中：
X是CN或CONH2；
m和n独立地是0、1、2或3，条件是m和n中的至少一个不是0；以及
每一个R独立地是卤素、氰基(cyano)、硝基、或可选取代的烷基、或-OR′、-SR′、-C(O)O R′、或-NR′R″，其中R′是可选取代的烷基，以及R″是氢或烷基，或者在相同苯基上的两个相邻的R基团一起是亚甲二氧基(methylenedioxy)。
在第二方面，本发明是作为药剂的化合物1A、4A、12A、17A和38A，包含这些化合物的药物组合物，这些化合物在制备药物中的用途，以及用于通过给予这些化合物治疗疾病的用途。
本发明还包括在本发明第一方面中所描述的那些化合物之中的新化合物，诸如以下化合物2A、3A、5A、6A、8A至11A、13A、14A、16A、18A至26A、28A至37A、以及39A至41A，以及它们的盐，以及含有它们的药物组合物；它们作为药物和在制备药物中的用途；以及通过给予它们的治疗方法，如在本发明的第一方面和第二方面所描述的那样。这些化合物中的每一个均单独地、且以所有组合公开。
本发明的优选实施方案的特点通过提交的本申请的说明书和权利要求书的特征加以描述。
具体实施方式
定义
“烷基”表示通过从碳原子上去除一个氢原子，衍生自可为直链、支链或环状的饱和的C1-3烃的一价基团，即甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基。应注意该申请中“烷基”的定义比常规定义更广，并包括较为常被称作“环烷基”的基团。
“取代的烷基”是被多达三个卤原子和/或选自-CN、-OR、-SR和-NR2的取代基所取代的如上定义的烷基，其中每个R独立地是氢或烷基。因此，例如，取代的烷基包括诸如三氟甲基、2-(二甲基氨基)乙基和3-氯丙基的基团。
“卤素”或“卤”表示F、Cl或Br。
“盐”描述于标题为“本发明的化合物”的部分中。
“治疗有效量”表示当给予人用于治疗癌症时足以有效治疗癌症的量。“治疗”人类癌症包括以下中的一个或多个(方面)：
(1)限制/抑制癌症生长，即限制/停止其发展，
(2)减少/预防癌症扩散，即减少/预防转移，
(3)缓解癌症，即引起癌症的消退，
(4)减少/预防癌症复发，以及
(5)减轻癌症的症状。
“联合治疗(combination therapy)”是指在癌症化疗过程中给予本发明的化合物和用于待治疗疾病的其它疗法，尤其是其它抗癌疗法。这种联合治疗包括在给予另一疗法之前、期间和/或之后，给予本发明第一方面的化合物。本发明第一方面的化合物的给予在时间上可以与另一疗法的给予相隔达数周，而且可以在其之前或之后，但是更常见的是，本发明第一方面化合物的给予将在达48小时内，最常在短于24小时内，伴随另一疗法的至少一个方面(在抗癌疗法的情况下，诸如给予一个剂量的化疗剂、分子靶向治疗剂、生物治疗剂或放射治疗)。
“另一疗法”是指不是以本发明的化合物治疗的用于治疗所述疾病的疗法、此类用于癌症的“另一疗法”包括化疗；分子靶向疗法；生物疗法和放射疗法。这些疗法是那些作为单一治疗或联合治疗而使用的疗法。
用于癌症的化疗剂包括：烷化剂、抗代谢药、天然产物包括抗肿瘤抗生素、蒽环类抗癌药(anthracyclines)、酶、紫杉烷类、长春花碱类、喜树碱、和依托泊苷(etoposide)、激素和激素拮抗剂、以及杂类药剂(miscellaneous agents)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三氧化二砷、硝酸镓、羟基脲、左旋咪唑、米托坦(mitotane)、奥曲肽(octreotide)、甲基苄肼(procarbazine)、苏拉明(suramin)、沙利度胺(thalidomide)、来那度胺(lenalidomide)，光动力化合物，诸如甲氧沙林(methoxsalen)和卟吩姆钠(sodium porfimer)，以及蛋白酶体抑制剂(proteasome inhibitor)诸如硼替佐米(bortezomib)。
用于癌症的分子靶向治疗剂包括，功能性治疗剂、表型定向治疗药剂，包括单克隆抗体和癌症疫苗。
用于癌症的生物治疗剂包括，干扰素和白介素。
除了用来抵抗癌细胞的这些制剂以外，抗癌疗法还包括使用保护剂或佐剂，包括：细胞保护剂，诸如氨磷汀(amifostine)、右雷佐生(dexrazoxane)、以及美司钠(mesna)；膦酸盐诸如帕米膦酸盐(pamidronate)和唑来膦酸(zoledronic acid)，以及刺激因子诸如依泊汀、达贝泊汀(darbeopetin)、非格司亭(filgrastim)、PEG-非格司亭、以及沙格司亭(sargramostim)。
本发明的化合物可以与其结合的癌症联合治疗方案，包括涉及使用两种或更多种抗癌疗法(抗癌剂)的所有方案，如在上述段落[0023]至[0025]中所提及的那些和/或放射治疗，可选地包括保护剂和佐剂，如在上述段落[0026]中所提及的那些；以及可以将本发明的化合物加入现有的已知用于治疗各种癌症的抗癌方案中，诸如在Chabner and Longo，eds.，“CancerChemotherapy and Biotherapy：Principles and Practice”，第三版(2001)、以及Skeel，ed.，“Handbook of Cancer Chemotherapy”，第六版(2003)(均来自Lippincott Williams & Wilkins，Philadelphia，Pennsylvania，U.S.A.)类书籍中所提及的方案；并且用于抗癌疗法、尤其是化疗的方案可以参见Web网站，如由国立癌症研究所(National Cancer Institute)(www.cancer.gov)、美国临床肿瘤学会(American Society for Clinical Oncology)(www.asco.org)、以及National Comprehensive Cancer Network(www.nccn.org)所维护的那些网站。
“包括”或“包含”以及它们的语法变型是表示包含而不具有限制性的词语，并且用于说明所述组分、基团、步骤等的存在，但不旨在排除其他组分、基团、步骤等的存在或添加。因此“包括”不表示“由...组成”、“基本由...组成”或“仅由...组成”；例如“包含”某一化合物的制剂必须包含该化合物但还可能包含其他的活性成分和/或赋形剂。
本发明的化合物
式A化合物的盐(例如，药学可接受的盐)包括在本发明中，并且可用于本申请描述的组合物、方法和用途中。此类盐优选是与药学可接受的酸形成的盐。参见，例如，Stahl和Wermuth，eds.，“Handbook ofPharmaceutically Acceptable Salts”，(2002)，Verlag Helvetica Chimica Acta，Zürich，Switzerland，其广泛论述了药用盐、它们的选择、制备和用途。除非上下文另外要求，否则提及本发明的任何化合物等同于提及该化合物及其盐两者。
这些盐包括当存在的酸性质子能够与无机或有机碱反应时所形成的盐。通常用包含合适的阳离子的过量的碱性试剂，诸如氢氧化物、碳酸盐或醇盐，处理母体化合物。阳离子，诸如Na+、K+、Ca2+、Mg2+和NH4 +，是存在于药学可接受的盐中的阳离子的实例。因此合适的无机碱包括氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠和氢氧化钠。还可利用有机碱制备盐，诸如下列物质的盐：伯胺、仲胺和叔胺，包括天然存在的取代的胺在内的取代胺、以及环胺，包括异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二甲基氨乙醇、氨丁三醇(tromethamine)、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、海巴青霉素(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、N-烷基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶等。
如果本发明第一方面的化合物包含碱性基团，诸如-NR2基团，则其可作为酸加成盐来制备。在合适的溶剂中以标准方法从母体化合物和过量的酸制备所述化合物的酸加成盐，所述酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸(得到硫酸盐和硫酸氢盐)、硝酸、磷酸等，以及有机酸诸如乙酸、丙酸、羟乙酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、水杨酸、4-甲苯磺酸、己酸、庚酸、环戊基丙酸、乳酸、2-(4-羟基苯甲酰)苯甲酸、1，2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、樟脑磺酸(camphorsulfonic acid)、4-甲基双环[2.2.2]辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸(glucoheptonic acid)、葡糖酸、4，4′-亚甲基双(3-羟基-2-萘)酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、十二烷基硫酸、葡糖醛酸、谷氨酸、3-羟基-2-萘酸、硬脂酸、粘康酸(muconic acid)等。
本发明的代表性化合物包括其中满足以下一项或多项的化学式A的那些化合物：
(1a)X是CN；或
(1b)X是CONH2；
(2)m是至少1，优选1或2；
(3)n是至少1，优选1或2；和
(4)至少一个R在其所连接的苯基的4-位上(将连接苯基至噻吩的羰基或氨基基团的连接点作为1-位)，或如果两个R一起是亚甲二氧基，则此亚甲二氧基连接在苯基的3-和4-位；优选两个苯基都在4-位被R取代，或一个苯基在4-位被R取代，而另一个苯基被3，4-亚甲二氧基取代。
通常，相对于具有更少这些特征的化合物，优选具有更多这些特征的化合物；特别地，具有少于全部这些特征的化合物在加入这些特征之一后，通常得到的化合物与不具有该特征的化合物相比是优选的。
本发明的化合物包括所提交的本申请的说明书和权利要求中所描述的每一个化合物，包括在实施例中和在下表中的化合物，例如化合物2A、3A、5A、6A、8A至11A、13A、14A、16A、18A至26A、28A至37A，以及39A至41A；特别是化合物2A、3A、5A、6A、8A至11A、13A、14A和16A；特别是化合物6A和10A；以及它们的盐。本发明的组合物和方法等包括其中化合物是在前面句子中所列举的那些化合物之一，连同化合物1A、4A、7A、12A、15A、17A、27A和38A的组合物和方法等。
为了简明一致，将在本说明书和权利要求书中的化学式A的每一个化合物命名为氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-腈或4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-羧酰胺的衍生物，而非通过按以下IUPAC命名约定的优先规则命名。因此，例如，化合物6A，以下化学式的化合物
Figure BDA0000098177150000101
命名为4-氨基-5-(2，4-二甲氧基苯甲酰基)-2-[(4-乙氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈；以及化合物1A，以下化学式的化合物
Figure BDA0000098177150000102
命名为4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-羧酰胺。
化合物的制备
在以下通用合成方法的讨论中所示的反应方案中，在任一苯环上都未显示取代基，但应当明了的是，取代基(或者是在所期望化合物上的最终取代基，或者是在化合物核心形成之后被修饰的那些最终取代基的前体)是可能存在的，如随后在说明书中所讨论的以及通过实施例阐释的那样。
方便通用的合成方法，可同时适用于腈和羧酰胺两者，包括丙二腈或2-氰基乙酰胺的阴离子与苯基异硫氰酸酯和2-L-苯乙酮反应，如下所示。
Figure BDA0000098177150000103
将丙二腈(1，X＝CN)或2-氰基乙酰胺(1，X＝CONH2)溶解在极性溶剂例如二甲基甲酰胺中，用碱处理以形成相应的阴离子。当使用丙二睛时，所述碱可以是弱碱，例如碳酸钾；但当使用2-氰基乙酰胺时，所述碱通常是较强的碱，例如金属氢化物或乙醇盐(ethoxide)。然后加入苯基异硫氰酸酯(2)，随后加入2-L-苯乙酮(3，L是离去基团如溴、氯、烷基磺酰氧基或芳基磺酰氧基，特别是溴)。得到的式A的腈/羧酰胺产物可如下方便地分离：加入水，可选在其之前去除溶剂，以沉淀粗产物；并可通过常规方法纯化，例如在硅胶上进行色谱法。
丙二睛和2-氰基乙酰胺是可商购的，如多种苯基异硫氰酸酯和2-L-苯乙酮例如2-溴苯乙酮也可商购。苯基异硫氰酸酯也可由它们相应的苯胺通过与硫光气反应来制备(苯胺还可由相应的硝基苯通过还原来制备)；并且2-溴苯乙酮也可由它们相应的苯乙酮通过与溴在乙酸中反应来制备，这使得可方便制备大量原料以及由此得到的式A的化合物。
利用本领域普通技术人员公知的用于形成酸加成盐的技术，通过与合适的酸反应，可以将式A的化合物转化为盐。可以选择所使用的酸，以及反应条件以获得药学上可接受的、且具有方便分离和配制的形式，例如固体形式(如无定形或结晶)的盐。
用于某一用途的化合物、组合物以及用途
本发明化合物可通过任何适合被治疗个体以及该个体的疾病性质的途径给予。给予途径包括注射给予，其包括静脉内、腹膜内、肌肉内和皮下注射，透粘膜或透皮递送给予，经局部施用、鼻喷雾、栓剂等给予或口服给予。制剂可选为脂质体制剂、乳剂、被设计用于跨粘膜给予药物的制剂或透皮制剂。每一种这些给予方法的合适的制剂可参见例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy，20th ed.，A.Gennaro，ed.，LippincottWilliams & Wilkins，Philadelphia，Pennsylvania，U.S.A。典型的制剂是口服制剂或用于静脉内输注的溶液。典型的剂型是用于口服给予的片剂或胶囊剂、用于静脉内输注的溶液剂，以及用于复溶成静脉内输注溶液的冻干粉剂。
根据预期的给予方式，药物组合物可为固体、半固体或液体剂型的形式，优选适用于精确剂量的单次给予的单位剂型。除了有效量的(一种或多种)活性化合物之外，组合物可包含合适的药学可接受的赋形剂，包括有助于将活性化合物加工成可作为药物使用的制剂的辅剂(佐剂，adjuvant)。“药学可接受的赋形剂”指不影响(一种或多种)活性化合物的生物学活性的有效性并且对于其所给予的个体是无毒的或不是令人不适的一种赋形剂或多种赋形剂的混合物。
对于固体组合物，常规的赋形剂包括例如药品级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等。液体的可药理学给予的组合物，例如可通过将如本文所述的活性组合物和可选的药用辅剂，在水或水性赋形剂如水、盐水、葡萄糖水溶液(aqueousdextrose)等中溶解、分散等，以形成溶液或混悬液。如果需要，用于给予的药物组合物还可包含少量的无毒性的辅助赋形剂，例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂等，例如醋酸钠、山梨醇单月桂酸酯(sorbitan monolaurate)、三乙醇胺醋酸钠、三乙醇胺油酸酯等。
对于口服给予，组合物一般为片剂或胶囊剂的形式，或其可为水溶液或非水溶液、混悬液或糖浆。片剂和胶囊剂是优选的口服给予形式。用于口服使用的片剂和胶囊剂一般包括一种或多种常规使用的赋形剂，例如乳糖和玉米淀粉。典型地还加入润滑剂，例如硬脂酸镁。当使用液体混悬剂时，可将活性剂与乳化和助悬赋形剂(悬浮赋形剂，suspending excipients)组合。如果需要，还可加入矫味剂、着色剂和/或甜味剂。其他用于掺入口服制剂的可选赋形剂包括防腐剂、混悬剂、增稠剂等。
可将注射制剂制备成常规形式，要么作为液体溶液剂或混悬剂、适用于注射前在液体中溶解或混悬的固体形式、要么作为乳剂或脂质体制剂。无菌注射制剂还可为无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射液或混悬剂。可采用的可接受的媒剂或溶剂有水、林格溶液和等渗的氯化钠溶液。此外，无菌的固定油、脂肪酯或多元醇被常规用作溶剂或混悬介质。
本发明的药物组合物还可配制成用于肠胃外给予的冻干形式。冻干制剂可在使用前通过加入水或其他水性介质，然后用合适的稀释剂进一步稀释来复溶(reconstitute)。液体制剂一般为经过缓冲的、等渗的水溶液。合适的稀释剂的实例为等渗盐溶液、5％的右旋糖水溶液(5％dextrose inwater)以及经过缓冲的醋酸钠或醋酸铵溶液。可加入药学可接受的固体或液体赋形剂以增强或稳定化该组合物，或有助于该组合物的制备。
典型地，将本发明的药物组合物包装在带有标签、说明书或这二者的容器中，以指明该药物组合物在治疗通过给予微管蛋白聚合抑制剂可治疗的疾病，特别是癌症中的用途。
除本发明的化合物之外，药物组合物可另外包含一种或多种其他药理学上的活性剂。这些另外的活性剂通常可用于治疗癌症或用于增强本发明的化合物对癌症的治疗。
使用该化合物的方法
如下文在体外和体内实施例中所证明的那样，本发明第一方面的化合物对人癌细胞系具有活性，并因此被考虑为可用作人类癌症的化疗药剂，用于治疗人类癌症。
因此，本发明包括通过将治疗有效量的本发明的化合物或含有该化合物的药物组合物给予人来治疗人类癌症的方法；以及本发明的化合物在制备用于治疗人类癌症的药物中的用途。可选地，该方法还包括用另一抗癌疗法，例如对于被治疗的癌症而言已是常规性的疗法，来治疗人。
可特别通过本发明方法治疗的癌症，是对微管蛋白聚合抑制剂具有敏感性的癌症。此类癌症包括上文段落[0003]中提及的那些，例如血液恶性肿瘤，如白血病、淋巴瘤以及骨髓增生异常综合症(myelodysplasticsyndrome)。其它可特别通过本发明的方法治疗的癌症，包括实体恶性肿瘤，例如结直肠癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、膀胱癌、脑癌、胃肠道癌和肾癌，以及血液恶性肿瘤，例如白血病，特别是ALL和CML、淋巴瘤以及骨髓增生异常综合症。
给予人(单独或更常在本发明的组合物中)的本发明化合物的量应为单独使用时或与另一抗癌疗法联合使用时(如果将本发明的化合物与另一抗癌疗法联合给予)的治疗有效量；并且类似地，给予人的另一抗癌疗法的量(如果将本发明的化合物与另一抗癌疗法联合给予)应为与本发明的化合物联合使用时的治疗有效量。然而，当在联合癌症化疗中给予时，本发明任一化合物的治疗有效量和另一抗癌疗法的量可以各自小于单独给予人时的治疗有效的量。然而在癌症疗法中通常使用该疗法或每一种疗法的最大耐受剂量，仅因这些疗法具有共同毒性或者一种疗法可增强另一种疗法的毒性才减小剂量。
因此，通过给予治疗有效量的所选化合物或组合物，从而将本发明化合物或含有它们的药物组合物用于治疗需要此类治疗的人的癌症。本发明化合物的治疗有效量是10-10,000mg/m2，例如30-3000mg/m2或100-1000mg/m2。给予间隔可为1-35天；例如约500-1000mg/m2，间隔1-5周，特别是间隔1、2、3或4周，或以更高的频率给予，包括频繁如：每日一次持续数(例如5或7)天，每2周、3周或4周重复给予，或持续输注6-72小时的时间段，同样每2周、3周或4周重复给予。合适的剂量和给予频率可由本领域普通技术人员根据该技术和本发明公开内容容易地确定。当根据本发明给予本发明化合物时，预期不会出现不可接受的毒理学作用。
癌症治疗领域中的普通技术人员，依靠个人的知识和本申请的公开内容，不需要过度的实验，就能够确定用于给定癌症和疾病阶段的本发明化合物的治疗有效量以及另一抗癌疗法的治疗有效量(如果将本发明的化合物作为化疗组合的一部分给予)。
实施例
以下实施例说明本发明化合物的制备以及它们在预测性体外和体内抗癌测定中的活性。这些结果据信对于人类抗癌化疗中的功效具有预测性，因为在这些测定中测试的其他抗癌剂已显示出在人中的抗癌活性。给出它们以使得本领域技术人员能够更清楚地理解和实现本发明，但这些实施例不应被认为是对本发明范围的限制，而仅仅是阐释和描述本发明。
制备和合成实施例
本发明化合物可通过常规的有机化学方法来制备。参见，例如，Larock，“Comprehensive Organic Transformations”，Wiley-VCH，New York，New York，U.S.A。在一些情况下，可引入保护基团并随后去除。合适的保护基团描述于Greene等，“Protective Groups in Organic Synthesis”，第二版，1991，John Wiley and Sons，New York，New York，U.S.A。本发明化合物可通过基本按照本申请之前阐释的合成方案，如下文实施例所示的，或通过本领域普通技术人员已知的方法修改例示的合成法来合成。制备实施例指用于本发明化合物合成的中间体的制备；合成实施例指本发明化合物的合成。化合物编号可参见紧随这些实施例之后的表格。
制备实施例1.制备4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]苯基异硫氰酸酯，其为化合物36A的中间体
在搅拌下将二异丙基乙胺(344mg，2.66mmol，2.4eq.(当量))加入到4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]苯胺(200mg，1.11mmol，1eq.)在四氢呋喃(2mL)的溶液(0℃)中，然后在搅拌下逐滴加入硫光气(153mg，1.33mmol，1.2eq.)。搅拌下使反应混合物升温至室温，并在室温下搅拌40分钟，在此期间形成沉淀。在真空下去除四氢呋喃，并将残余物溶解于乙酸乙酯中，用盐水洗涤(3×10mL)，然后在硫酸镁上干燥乙酸乙酯层，蒸发乙酸乙酯，得到4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]苯基异硫氰酸酯(0.20g)，其为棕褐色油，无需进一步纯化即使用。
制备实施例2：制备2-溴-4′-[2-(二甲基氨基)乙氧基]苯乙酮，其为化合物39A的中间体
将2-(二甲基氨基)乙基氯盐酸盐(3.49g，23.2mmol，1.1eq.)加入到4′-羟基苯乙酮(3.00g，22.0mmol，1eq.)在丙酮(100mL)中的溶液中，然后加入碳酸钾(9.12g，66.0mmol，3eq.)。在回流下加热反应混合物过夜，冷却，并过滤；浓缩滤出液，并加入水(50mL)，形成浑浊溶液。加入盐酸(0.1N，20mL)，并用乙酸乙酯萃取得到的澄清溶液三次。用氢氧化钠水溶液使水相变成碱性，形成浑浊混合物，用乙酸乙酯(5×50mL)萃取，然后在硫酸镁上干燥乙酸乙酯层，蒸发乙酸乙酯，得到4′-[2-(二甲基氨基)乙氧基]苯乙酮(2.90g)，其为浅黄色油，通过LC-MS证实了其特性(identity)和纯度。逐滴加入溴(1.62g，10.1mmol，1.4eq.)至4′-[2-(二甲基氨基)乙氧基]苯乙酮(1.5g，7.24mmol)在乙酸(5mL)中的溶液中，在24℃搅拌反应混合物3小时，得到暗红色溶液。冷却反应混合物，加入水(5mL)，并冻干混合物过夜。通过制备HPLC纯化粗制2-溴-4′-[2-(二甲基氨基)乙氧基]苯乙酮，随后冻干合适流分(fractions)，得到2-溴-4′-[2-(二甲基氨基)乙氧基]苯乙酮(0.7g)，其为灰白色固体。
合成实施例1：合成4-氨基-5-(2，4-二甲氧基苯甲酰基)-2-[(4-乙氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈，化合物6A
向丙二腈(0.40g，6.1mmol)在二甲基甲酰胺(DMF)(5mL)中的搅拌溶液中加入碳酸钾(1.68g，12.2mmol，2eq.)。在室温下搅拌混合物15分钟，并加入4-乙氧基苯基异硫氰酸酯(1.07g，6.1mmol)。再搅拌30分钟后，加入2-溴-2′，4′-二甲氧基苯乙酮(1.57g，6.1mmol，1eq.)，并在室温下搅拌该混合物过夜。减压下去除溶剂，加入水(20mL)至残余物中。通过过滤收集得到的固体，并在真空中干燥，得到2.80g作为黄色固体的粗产物。将这一粗产物与两个类似批次合并(总共7.7g粗产物)，并通过硅胶柱色谱纯化，用己烷/乙酸乙酯(2∶1，然后1∶1)洗脱，得到4-氨基-5-(2，4-二甲氧基苯甲酰基)-2-[(4-乙氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈(2.2g)，为黄棕色固体。1H NMR(DMSO-d6)：δ10.24(1H，s)，7.79(2H，br.s)，7.21(2H，d，J＝8.6Hz)，7.09(1H，d，J＝8.6Hz)，6.91(2H，d，J＝9.0Hz)，6.56(1H，d，J＝2.0Hz)，6.49(1H，dd，J＝8.4Hz，J＝2.2Hz)，4.02-3.96(2H，q，J＝7.0Hz)，3.76(3H，s)，1.92-1.57(3H，t，J＝7.0Hz)。
合成实施例2.合成4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-羧酰胺，化合物1A
向2-氰基乙酰胺(3.0g，36mmol)在DMF(50mL)中的搅拌溶液中加入氢化钠(在矿物油中60％，1.43g，35.7mmol，1eq.)，并在0℃搅拌混合物1小时，得到澄清溶液。加入在DMF(10mL)中的4-甲氧基苯基异硫氰酸酯(15.90g，35.7mmol，1eq.)，并搅拌30分钟，然后加入2-溴-4′-氯苯乙酮(8.33g，35.7mmol，1eq.)和碳酸钾(4.93g，35.7mmol，1eq.)，在室温下搅拌该混合物1周。加入水(200mL)；并过滤所形成的深色沉淀，用水(3×50mL)、乙酸乙酯(3×15mL)和丙酮(3×15mL)洗涤，然后在真空下干燥，得到4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-羧酰胺(5.6g)，其为浅橙色固体。1H NMR(DMSO-d6)：δ9.97(1H，s)，8.03(2H，s)，7.54(2H，d，J＝8.2Hz)，7.48(2H，d，J＝8.2Hz)，7.41(2H，s)，7.25(2H，d，J＝8.6Hz)，6.94(2H，d，J＝8.6Hz)，3.74(3H，s).
通过一种或多种上述方法或本文未详细描述的类似方法，制备下表所示的式A化合物。分析所有的式A化合物，以确认特性(identity)和纯度，用HPLC确认纯度，用一种或多种质谱(采用正离子电离(positiveionization)或负离子电离(negative ionization))和NMR(1H和/或13C)确认特性，并确认其为具有良好纯度的预期产物。类似地制备式A(表示)的多种其他化合物，以及可类似地制备其他的式A化合物。
代表性的式A化合物包括(“精确质量(exact mass)”为母体化合物的(精确质量)；质谱采用阳离子电离，空白表示没有进行测量)：
Figure BDA0000098177150000181
Figure BDA0000098177150000191
Figure BDA0000098177150000201
Figure BDA0000098177150000211
本发明的其他化合物可类似地进行制备，或可使用本领域普通技术人员公知的方法考虑该技术和本文公开内容进行制备。
体外实施例
以下实施例阐释了所述化合物对人癌症细胞系的体外细胞毒性/细胞抑制作用。这些结果被认为对人类癌症化疗的功效具有预测性，因为在这些测定中检测的其他抗癌药剂已显示在人类中的抗癌活性。
细胞系A549(人肺腺癌)、OVCAR-3(人卵巢癌)、HL60(人早幼粒细胞性白血病)、DLD1(人结肠腺癌)和HCT116(人结肠癌)获自美国典型培养物保藏中心，马纳萨斯，维吉尼亚，美国。根据生产商的说明使用所有产品。组蛋白磷酸化(p-H3)测定为一式两份进行，细胞毒性测定为一式三份进行，每一种情况下均设置溶剂对照。
体外实施例1：细胞毒性分析测定
胰蛋白酶化对数期细胞，通过离心收集，并再悬浮在小体积的新鲜培养基中，并且在台盼蓝染色后测定活细胞的密度。将细胞稀释在新鲜培养基中，在稀释后立即加入试验化合物(浓度在0.1μM至200μM之间，溶解在DMSO中，50μL)以获得最终的0.5％的DMSO浓度，然后以150μL/孔将悬浮液加入到96孔板中，并培养过夜以在粘附细胞(adherent cells)的情况下使其贴壁(attachment)。培养细胞3天(约三个倍增时间)。然后通过离心收集细胞，并将100μL的培养物上清液用CellTiter-Glo试剂替代。在室温下培养15分钟后，利用光度计对该板读数。在这些测试中式A化合物显示出以下细胞毒性。该表给出了以μM为单位的细胞毒性IC50，四舍五入至1位有效数字。
  化合物   A549   OVCAR-3   HL-60   DLD1   HCT116
  1A   0.01   0.01   0.01   0.007   0.01
  2A   0.01   0.02   0.01   0.006   0.01
  3A   0.02
  4A   0.02   0.03   0.04   0.03   0.09
  5A   0.02   0.02   0.02   0.02   0.02
  6A   0.03   0.05   0.03
  7A   0.03   0.02   0.01
  8A   0.04   0.01   0.03   0.007
  9A   0.04   0.02   0.04   0.02   0.04
  10A   0.04   0.04   0.04   0.03
  11A   0.05
  12A   0.05   0.03   0.04   0.04   0.04
  13A   0.06   0.03
  14A   0.1   0.07   0.08
  15A   0.1   0.09
  化合物   A549   OVCAR-3   HL-60   DLD1   HCT116
  16A   0.1   0.06
  17A   0.1   0.1
  18A   0.2
  19A   0.2
  20A   0.2
  21A   0.2
  22A   0.2
  23A   0.3
  24A   0.3   0.08
  25A   0.5
  26A   0.5
  27A   0.6   0.3   0.2   0.6
  28A   0.7
  29A   0.8
  30A   1
  31A   1
  32A   1
  33A   1
  34A   1
  35A   1
  36A   1
  37A   2
  38A   2
  39A   2
  40A   2
  41A   2
体外实施例2：A549细胞中的细胞周期分析
将对数期细胞接种在75-mL烧瓶中过夜以使细胞贴壁(cellattachment)，选择接种密度以使细胞培养物在收获的当天少于80％的汇合(铺满，confluent)。以约IC80加入试验化合物(溶解在DMSO中)以获得最终的0.1％的DMSO浓度，然后进一步培养细胞一天、两天或三天。培养之后，收获细胞，用冷PBS洗涤，固定在75％的乙醇水溶液中，并在-20℃下储存直至进一步分析。为了确定细胞的DNA含量(其反映细胞周期状态)，将固定的细胞用磷酸盐缓冲盐水洗两次，然后用核糖核酸酶(RNase)在37℃处理30分钟。然后用碘化丙锭(propidium iodide)进行染色，接着在Becton Dickinson FACSCalibur系统上进行FACS分析。在上述的41种式A化合物中，测试了35种，并有30种显示了G2/M细胞周期停滞。
体外实施例3：组蛋白磷酸化(p-H3)测定
将对数期的A549细胞接种至96孔板中并使其贴壁(attach)过夜。将测试化合物稀释于DMSO(连续3倍稀释的8种浓度)中并加入到细胞(0.5％DMSO终浓度)中，并将细胞培养4小时。然后用冷的磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤细胞三次，加入裂解缓冲液。于4℃振荡30分钟并离心后，通过“圆点印迹法(dot-blot)”装置将上清转移到硝酸纤维素膜上。将孔洗涤后，对膜进行蛋白质印迹法。用一抗兔抗-p-H3抗体和小鼠抗-β-肌动蛋白抗体然后用二抗山羊抗-兔IRDye800抗体和山羊抗小鼠AlexaFluor680抗体在相同的膜上检测p-H3和β-肌动蛋白。在Odyssey扫描仪上扫描该膜。测试了化合物1A至15A中的11个，其IC50为0.02μM(化合物2A)至0.5μM(化合物15A)，抑制效力的趋势基本上与细胞毒性的趋势相同。
体外实施例4：微管蛋白聚合的抑制
在无细胞荧光测定中测试了化合物2A、9A、12A、14A和21A对微管蛋白聚合的抑制，所有化合物均显示出对微管蛋白聚合的抑制。通过免疫显微术和细胞分级分离(cell fractionation)在A549细胞中测试了化合物2A、4A至10A、12A、14A、15A、19A、29A、30A和40A对微管蛋白聚合的抑制，IC50为0.009μM(化合物7A)至2μM(化合物30A)，抑制效力的趋势基本上与细胞毒性的趋势相同。化合物40A在这一测试中无效。
体外实施例5：其他测定
通过测试其在P388和P388/ADR(阿霉素耐性)两种细胞中的细胞毒性，从而测试化合物2A、9A和12A在P388(小鼠白血病)中的交叉抗性(cross-resistance)。在阿霉素本身显示出260倍抗性比(resistanceratios)，长春花碱显示出50倍抗性比，以及秋水仙碱(微管蛋白抑制剂)显示出70倍抗性比的情况下，化合物2A、9A和12A均显示出少于2倍的抗性比。测试了数个更具细胞毒性的式A化合物，并且发现均不是P-糖蛋白的底物，所述P-糖蛋白是通常与癌细胞中多药-耐药性相关的流出泵(efflux pump)。
体内实施例
体内实施例1：HL60异种移植测定，口服给予
在6-8周龄(约20g)的雄性无胸腺nu/nu小鼠的右前侧腹(right foreflank)，皮下移植已在无抗生素的培养基中生长至少两代的约1×107个HL60(人早幼粒细胞性白血病)系细胞。肿瘤移植后约6天，当肿瘤重量为约50-250mg时，将小鼠分配到治疗组。将测试化合物以20mg/mL悬浮于0.55wt.％羧甲基纤维素水溶液中。从治疗开始的第1-5天以及第8-10天，通过每日一次管饲200mg/Kg的化合物2A、9A和12A治疗小鼠组，用媒剂作为对照。治疗最后一天测量肿瘤生长抑制。所有3种测试化合物在本测定中均是活性的，与媒剂相比，化合物2A引起46％肿瘤生长抑制，化合物9A引起43％抑制，以及化合物12A引起66％抑制。
体内实施例2：HCT116异种移植测定，口服给予
在6-8周龄(约20g)的雄性无胸腺nu/nu小鼠的右前侧腹，皮下移植已在无抗生素的培养基中生长至少两代的约1×107个HCT116(人结肠癌)系细胞。肿瘤移植后约14-21天，当肿瘤重量为约50-250mg时，将小鼠分配到治疗组。将测试化合物以20mg/mL悬浮于0.55wt.％羧甲基纤维素水溶液中。从治疗开始的第1-5天以及第8-10天，通过每日一次管饲200mg/Kg的化合物2A、9A和12A来治疗小鼠组，用媒剂作为对照。在治疗最后一天后的2天，测量肿瘤生长抑制。所有3种测试化合物在本测定中均是活性的，与媒剂相比，化合物2A引起35％肿瘤生长抑制，化合物9A引起36％抑制，以及化合物12A引起46％抑制。
体内实施例3：HL60异种移植测定，口服给予
基本上如体内实施例1所述的那样进行实验。从治疗开始的第1-5天以及第8-10天通过每日一次管饲200mg/Kg的化合物5A、6A、7A、8A、和10A来治疗小鼠组，用媒剂作为对照。治疗最后一天后的一天，测量肿瘤生长抑制。5种测试化合物中的4种在本测定中均是活性的，与媒剂相比，化合物5A引起45％肿瘤生长抑制，化合物6A引起89％抑制，化合物7A引起45％抑制，以及化合物10A引起67％抑制；而化合物8A引起10％抑制(统计学上不显著)。
制剂实施例
制剂实施例1.用于口服给予的制剂
通过组合以下物质来制备用于口服给予的固体制剂：
Figure BDA0000098177150000261
并将该混合物压制成片剂或装入包含如100mg本发明化合物的硬凝胶胶囊中。如需要，可通过施用成膜剂(例如，羟丙基甲基纤维素)、色素(例如，二氧化钛)和增塑剂(例如，邻苯二甲酸二乙酯)的悬浮液，并通过蒸发溶剂使膜干燥，从而对片剂进行包衣。
制剂实施例2：用于IV给予的制剂
通过在磷酸盐缓冲盐水中溶解本发明的化合物(例如，作为药学可接受的盐)至浓度为1％w/v；并对该溶液进行灭菌(例如，通过无菌过滤)，以及密封在容纳例如100mg本发明化合物的无菌容器中，从而制备用于IV给予的制剂。
可替换地，通过将本发明的化合物(还例如作为药学可接受的盐)溶解在合适的缓冲液(例如上述磷酸盐-缓冲盐水的磷酸盐缓冲液)中，可选地添加填充剂(膨胀剂，bulking agent)和其他药学上有用的赋形剂，灭菌该溶液并将其分配到合适的无菌小瓶中，冻干该溶液以去除水，并密封该小瓶，从而制备冻干制剂。可通过加入无菌水复溶冻干制剂，并且该复溶的溶液可进一步用诸如0.9％的氯化钠静脉输注液或5％的葡萄糖静脉输注液加以稀释，以用于给予。
虽然已经结合具体实施方式和实施例描述本发明，但对于已了解该技术和本发明披露内容的本领域普通技术人员，显而易见的是：具体披露的物质和方法的等同替换也可用于本发明，这些等同替换应包括在本申请权利要求书的范围内。

Claims (7)

1.式A的化合物、或其盐在制备用于治疗能够通过微管蛋白聚合抑制剂治疗的疾病的药物中的用途，所述疾病尤其是癌症，
Figure FDA0000098177140000011
其中：
X是CN或CONH2；
m和n独立地是0、1、2或3，条件是m和n中的至少一个不是0；以及
每一个R独立地是卤素、氰基、硝基、或可选取代的烷基，或者是-OR′、-SR′、-C(O)OR′、或-NR′R″，其中，R′是可选取代的烷基，以及R″是氢或烷基，或者在相同苯基上的两个相邻的R基团一起是亚甲二氧基。
2.选自以下化合物中的式A的化合物、以及它们的盐在制备诸如用于治疗能够通过微管蛋白聚合抑制剂治疗的疾病的药物中的用途，所述疾病尤其是癌症：
1A、4A、12A、17A、38A、
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-羧酰胺、
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(4-乙氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-甲氧基苯甲酰基)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(4-乙氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、和
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(4-氟苯基)氨基]噻吩-3-腈。
3.一种化合物，选自：
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-溴苯甲酰基)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(3，4-二甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(2，4-二甲氧基苯甲酰基)-2-[(4-乙氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-甲氧基苯甲酰基)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-羧酰胺、
4-氨基-5-[4-(二甲基氨基)苯甲酰基]-2-[(3，4-亚甲二氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-甲氧基苯甲酰基)-2-[(3，4-亚甲二氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-[4-(二甲基氨基)苯甲酰基]-2-[(3，4-二甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(4-乙氧基苯基)氨基]噻吩-3-羧酰胺、
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(4-甲苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(3，4-二甲氧基苯甲酰基)-2-[(3，4-亚甲二氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(3，4-二甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-甲基苯甲酰基)-2-[(3，4-亚甲二氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-氰基苯甲酰基)-2-[(3，4-亚甲二氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(2-甲氧基苯甲酰基)-2-[(3，4-亚甲二氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(2，4-二甲氧基苯甲酰基)-2-[(2，4-二甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-溴苯甲酰基)-2-[(3，4-亚甲二氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(3，4-亚甲二氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(3-甲氧基苯甲酰基)-2-[(3，4-亚甲二氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-[4-(二甲基氨基)苯甲酰基]-2-[(2，4-二甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-甲氧基苯甲酰基)-2-[(3，4-二甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(4-异丙苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-{[4-(甲氧基羰基)苯基]氨基}噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-{[4-(三氟甲基)苯基]氨基}噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-甲氧基苯甲酰基)-2-[(2，4-二甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-氟苯甲酰基)-2-[(3，4-亚甲二氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(3-氰基苯甲酰基)-2-[(3，4-亚甲二氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(3-氯苯甲酰基)-2-[(3，4-亚甲二氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-({4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]苯基}氨基)噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(4-硝基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-{4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]苯甲酰基}-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(4-氰基苯基)氨基]噻吩-3-腈、和
4-氨基-5-(3-溴苯甲酰基)-2-[(3，4-亚甲二氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈，
以及它们的盐。
4.根据权利要求3所述的化合物，其选自：
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-溴苯甲酰基)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(3，4-二甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(2，4-二甲氧基苯甲酰基)-2-[(4-乙氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-甲氧基苯甲酰基)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-羧酰胺、
4-氨基-5-[4-(二甲基氨基)苯甲酰基]-2-[(3，4-亚甲二氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-甲氧基苯甲酰基)-2-[(3，4-亚甲二氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-[4-(二甲基氨基)苯甲酰基]-2-[(3，4-二甲氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(4-乙氧基苯基)氨基]噻吩-3-羧酰胺、
4-氨基-5-(4-氯苯甲酰基)-2-[(4-甲苯基)氨基]噻吩-3-腈、和
4-氨基-5-(3，4-二甲氧基苯甲酰基)-2-[(3，4-亚甲二氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈，
以及它们的盐。
5.根据权利要求4所述的化合物，其为4-氨基-5-(2，4-二甲氧基苯甲酰基)-2-[(4-乙氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、或其盐。
6.根据权利要求4所述的化合物，其为4-氨基-5-(4-甲氧基苯甲酰基)-2-[(3，4-亚甲二氧基苯基)氨基]噻吩-3-腈、或其盐。
7.一种药物组合物，包含权利要求3至6中任一项所述的化合物。
CN2010800163865A 2009-04-16 2010-02-09 作为微管蛋白聚合抑制剂的取代的4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-腈和取代的4-氨基-5-苯甲酰基-2-(苯基氨基)噻吩-3-羧酰胺 Pending CN102395581A (zh)

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