CN111689924A - 含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂及其制备方法和用途 - Google Patents

含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂及其制备方法和用途 Download PDF

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CN111689924A CN201910192963.9A CN201910192963A CN111689924A CN 111689924 A CN111689924 A CN 111689924A CN 201910192963 A CN201910192963 A CN 201910192963A CN 111689924 A CN111689924 A CN 111689924A
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赵伟利
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Abstract

本发明属药物合成领域，涉及通式(Ⅰ)所示的含有取代脒基的1,2,5‑噁二唑类化合物及其药学上可接受的盐，及其制备方法和在医学上的应用。本发明所述化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐或其药物组合与抗CTLA‑4抗体、抗PD‑1抗体、抗PD‑L1抗体，抗病毒剂、化疗剂、免疫抑制剂、辐射、抗肿瘤疫苗、抗病毒疫苗、细胞因子疗法或酪氨酸激酶抑制剂进行联合用药，调节吲哚胺2,3‑双加氧酶活性，可用于治疗或预防癌症或肿瘤、病毒感染、抑郁症、神经变性病症、创伤、年龄相关白内障、器官移植排斥或自身免疫疾病。
Figure DDA0001994908410000011
其中，
Figure DDA0001994908410000012
X＝NH或SR1＝CN或NO2

Description

含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂及其制备方法和用途
技术领域
本发明属药物合成领域，涉及2,3-双加氧酶抑制剂，具体涉及一种含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂及其制备方法和用途。
背景技术
现有技术公开了吲哚胺-2,3-双加氧酶(Indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)是一种含有亚铁血红素的单体酶(1967年Hayaishi小组首次在细胞内发现)，cDNA编码蛋白由403氨基酸组成，分子量为45kDa，广泛分布于人和其他哺乳动物除肝脏以外的组织中，如肺，小肠和大肠，直肠，脾，肾，胃和脑等，是肝脏以外唯一可催化色氨酸沿犬尿酸途径进行分解代谢的限速酶。研究显示，在肿瘤患者的细胞中，IDO常作为诱导肿瘤微环境免疫耐受产生重要的生理作用，其介导的色氨酸(Tryptophan,Trp)-犬尿氨酸(Kynurenine,Kyn)代谢途径参与了肿瘤免疫逃逸，而IDO作为诱导肿瘤微环境免疫耐受也产生重要的作用。
有研究表明，IDO在肿瘤微环境中可通过下述方式来抑制局部T细胞免疫反应：色氨酸耗竭、毒性代谢和诱导调节性T细胞增殖。很多情况是在肿瘤中过渡表达，从而消耗局部的色氨酸，产生大量的犬尿氨酸等代谢产物。事实上，在无色氨酸或犬尿氨酸的培养条件下，T细胞会发生增殖抑制、活性降低甚至凋亡。而T细胞中存在一个对色氨酸水平非常敏感的调节点，IDO的作用下，能够使色氨酸消耗，从而导致T细胞停滞于G1期中期，从而抑制了T细胞的增殖，也抑制了T细胞的免疫应答。而T细胞一旦停止增殖，可能就不会再被刺激作用，其正是IDO在体内免疫作用机制。IDO已被证实与阿尔茨海默病，白内障，癌症等多种人类重大疾病密切相关，因此IDO抑制剂可以用于治疗癌症、阿尔茨海默病等具有IDO介导的色氨酸代谢途径的病理学特征的疾病作为重要的药物受到日益广泛的关注。
目前吲哚胺2,3-双加氧酶抑制剂的研发均处于早期阶段，包括NewLink公司的Indoximod,NLG-919,Incyte公司的Epacadostat(INCB 024360),以及BMS,Flexus,Iomet,Iteos,Curadev等公司的IDO或TDO抑制剂。
基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供新的IDO抑制剂，其将对改善我国肿瘤患者的经济负担，提高肿瘤临床治疗效果，具有重要的实践意义。
发明内容
本发明的目的是基于现有技术的现状，提供新的IDO抑制剂，涉及一种包含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂，具体涉及一种含有取代脒基的1,2,5-噁二唑类化合物的高效的IDO酶抑制剂，及其制备方法和用途。
本发明的进一步目的是提供上述含有取代脒基的1,2,5-噁二唑类化合物的制备方法。
本发明抑制剂中，含有如通式(Ⅰ)所示的取代脒基的1,2,5-噁二唑类化合物及其药学上可接受的盐，
Figure BDA0001994908390000021
其中，
Figure BDA0001994908390000022
X＝NH或S
R1＝CN或NO2
Figure BDA0001994908390000023
本发明中，优选的化合物具有下述化合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12的结构：
Figure BDA0001994908390000024
Figure BDA0001994908390000031
本发明中以化合3为例，本发明的化合物的制备过程如下：
Figure BDA0001994908390000041
本发明提供了一种抑制IDO的化合物的用途，其中，该化合物用于制备预防和/或治疗具有IDO介导的色氨酸代谢途径的病理学特征的疾病的药物组合。
本发明所述化合物可以添加药学上可以接受的载体制成常见的药物制剂，如片剂，胶囊，粉剂，糖浆，液剂，悬浮剂针剂等。本发明所述化合物在临床上的给药方式可以采用口服，注射等方式。
本发明另一方面提供一种调节吲哚胺2,3-双加氧酶活性的方法，所述方法包括治疗有效剂量的前述化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐或其药物组合与抗CTLA-4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体，抗病毒剂、化疗剂、免疫抑制剂、辐射、抗肿瘤疫苗、抗病毒疫苗、细胞因子疗法或酪氨酸激酶抑制剂进行联合用药。
本发明所述药物用于治疗或预防癌症或肿瘤、病毒感染、抑郁症、神经变性病症、创伤、年龄相关白内障、器官移植排斥或自身免疫疾病；优选的，其中所述癌症或肿瘤选自肺癌，骨癌、胃癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、子宫癌、卵巢癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、直肠癌、结肠癌、肛门区癌、乳腺癌、食管癌等。
附图说明
图1显示了本发明中化合物3对Lewis肺癌具有较好的体内抑制活性，在100mg/kg(bid,ig)剂量下有很强的体内抗肿瘤活性。
具体实施方式
实施例1：合成化合物1，N-(3-溴-4氟苯基)-N′-羟基-4-[[2-[(1-甲氨基)-2-硝基-乙烯基氨基]乙基]氨基]-1,2,5-噁二唑-3-甲脒
1)合成4-氨基-N′-羟基-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒
将丙二腈(0.5mol,32g)加入到已预热到45℃的1.5L水中，搅拌5分钟后,冰浴条件下加入亚硝酸钠(0.55mol,38g)。当温度达到10℃，加入5.5ml 6N盐酸,使温度维持在16℃搅拌15分钟撤去冰浴，16～18℃搅拌1.5h。降温到13℃。取盐酸羟胺固体(1.5mol,104.2g)溶于适量水，加入等量氢氧化钠中和，一次性加入到上述反应液，温度上升到26℃，当放热反应完全，撤去冰浴，26～27℃搅拌1h,接着缓慢加热到回流2h。回流结束后冷却过夜。后处理：用氢氧化钠水溶液调至中性，冰浴，抽滤干燥得白色固体产物67.9g,收率95％。13C NMR(100MHz,CD3OD):δ156.0,145.9,141.3.MS ESI:m/z＝144.0,[M+H]+
2)合成4-氨基-N′-羟基-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒氯
取4-氨基-N′-羟基-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒(29.5mmol,4.2g)加入到59ml水，30ml醋酸，6N盐酸的混合溶液中，42～45℃搅拌至完全溶解。加入氯化钠(88.5mmol,5.2g),冰浴搅拌,2g亚硝酸钠溶于水中用恒压滴液漏斗缓慢滴加，温度维持在0℃，加料完后冰浴搅拌1.5h后升温到室温搅拌2h。后处理：抽滤，水洗，干燥得产物2.4g,收率50％。13CNMR(100MHz,CD3OD):δ155.8,143.4,129.7.MS ESI:m/z＝162.9,[M+H]+
3)合成4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒
取4-氨基-N-羟基-1,2,5-噁二唑-3碳杂亚胺酰基氯(20mmol,3.25g)溶于45ml水，加热到60℃，8.4g 3-溴-4-氟苯胺加入到上述溶液中搅拌10min,2.5g碳酸氢钠溶于热水缓慢加入，60℃下搅拌20min。抽滤，水洗，干燥得5.7g产物，收率90％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.48(s,J＝3.1Hz,1H),8.90(s,1H),7.19(t,J＝8.7Hz,1H),7.10(dd,J＝6.1,2.7Hz,1H),6.77(dd,J＝8.1,4.2Hz,1H),6.28(s,2H).MS ESI:m/z＝317.1,[M+H]+
4)合成3-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮
取4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(8.45mmol,2.67g)溶于20ml四氢呋喃，将5.34g的N,N′-羰基二咪唑溶于四氢呋喃加入到上述溶液中，加热回流1h，冷却到室温，旋蒸到出现大量固体，用50ml乙酸乙酯稀释，30ml 1N盐酸洗两次，30ml水洗一次，30ml饱和食盐水洗一次，收集有机层,无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干得2.75g产物，收率95％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.19(t,J＝8.7Hz,1H),7.10(dd,J＝6.1,2.7Hz,1H),6.77(dd,J＝8.1,4.2Hz,1H),6.28(s,2H).MS ESI:m/z＝343.0,[M+H]+
5)合成4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-硝基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮
取3-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(10g,29.2.0mmol)加入200ml三氟醋酸中，加入100ml双氧水，60℃反应12h.反应完后将反应液倒入冰水中，抽滤，干燥得产物7.6g(棕黄色固体)，产率70％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.09–8.01(m,1H),7.72–7.64(m,1H),7.62–7.53(m,1H).MS ESI:m/z＝371.9,[M+H]+
6)合成4-(3-溴-4-氟苯基)-3-[[4-(硫杂环丁烷-3-基)氨基]-1,2,5-噁二唑-3-基]-1,2,4-二唑-5(4H)-酮
取3-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-(4H)-酮(1.63g,4.4mmol)溶于四氢呋喃，将365mg的3-硫杂环丁胺加入到上述溶液中，室温搅拌2h,点板监测。后处理：旋去部分四氢呋喃，二氯甲烷萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以石油醚:乙酸乙酯＝12:1为洗脱剂，柱层析得1.04g白色固体，收率63％。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.63(dd,J＝5.7,2.6Hz,1H),7.41–7.29(m,2H),5.74(d,J＝7.7Hz,1H),5.15–4.90(m,1H),3.53–3.46(m,4H).MS ESI:m/z＝414,[M+H]+
7)合成[2-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯
将N-叔丁氧羰基-1,2-乙二胺(160mg,1mmol)加入到4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-硝基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(372mg,1mmol)的四氢呋喃溶液中,后三乙胺(303mg,3mmol)加入到上述溶液中，室温搅拌四小时。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝100:1为洗脱剂，柱层析得363mg产物，收率75％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.13–8.04(m,1H),7.73(dd,J＝8.6,3.8Hz,1H),7.60(t,J＝8.7Hz,1H),6.90(d,J＝6.0Hz,1H),6.54(t,J＝6.1Hz,1H),3.25(q,J＝6.7Hz,2H),2.96(q,J＝6.5Hz,2H),1.37(s,9H).MS ESI:m/z＝485,[M+H]+
8)合成4-(3-溴-4-氟苯基)-3-[4-[[2-[[1-(甲基氨基)-2-硝基-乙烯基]氨基]乙基]氨基]-1,2,5-噁二唑-3-基]-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮
冰浴下5ml 30％的三氟醋酸二氯甲烷溶液滴加入[2-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(200mg,0.4mmol)的二氯甲烷中，室温反应半小时，TLC监测原料无剩余，旋蒸掉溶剂得油状物。
乙醇钠(42.8mg,0.6mmol)溶于10ml乙醇加入到上述油状物中，随后N-甲基-1-甲硫基-2-硝基乙烯胺(72mg,0.6mmol)加入到上述反应液中，60℃过夜。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝100:1后换为80:1过柱，柱层析得79mg产物，收率41％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.99(d,J＝25.8Hz,1H),7.51–7.01(m,3H),6.81–6.71(m,1H),6.41(s,1H),3.47(s,2H),2.84(s,2H).MS ESI:m/z＝485,[M+H]+
9)合成N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基-4-[[2-[[1-(甲基氨基)-2-硝基-乙烯基]氨基]乙基]氨基]-1,2,5-噁二唑-3-甲脒
取4-(3-溴-4-氟苯基)-3-[4-[[2-[[1-(甲基氨基)-2-硝基-乙烯基]氨基]乙基]氨基]-1,2,5-噁二唑-3-基]-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(232mg,0.48mmol)于四氢呋喃溶液中，加入2.5ml 2N氢氧化钠水溶液，反应0.5h。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝30:1为洗脱剂，柱层析得134mg产物，收率61％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.48(s,1H),9.99(d,J＝25.8Hz,1H),8.96(d,J＝4.0Hz,1H),7.51–7.01(m,3H),6.81–6.71(m,1H),6.41(s,1H),3.47(s,2H),2.84(s,2H).MS ESI:m/z＝459,[M+H]+。
实施例2：合成化合物2，N-[2-[[4-[N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基甲脒基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基甲基]乙基]-N′-氰基氨基甲酰硫代酯
1)合成N-[2-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5噁二唑-3-基]氨基]乙基]-N′-氰基氨基甲酰硫代酯
冰浴下5ml 30％的三氟醋酸二氯甲烷溶液滴加入[2-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(200mg,0.4mmol)的二氯甲烷中，室温反应半小时，TLC监测原料无剩余，旋蒸掉溶剂得油状物。
乙醇钠(42.8mg,0.6mmol)溶于10ml乙醇加入到上述油状物中，随后N-氰亚胺基-S,S-二硫代碳酸(87.6mg,0.6mmol)加入到上述反应液中，60℃过夜。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝100:1后换为80:1过柱，柱层析得86.8mg产物，收率45％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),7.11(t,J＝8.8Hz,1H),7.06–7.01(m,1H),6.68(d,J＝3.1Hz,1H),6.17(s,1H),3.25(d,J＝5.8Hz,2H),3.15(d,J＝6.4Hz,2H),2.43(d,J＝1.4Hz,3H).MS ESI:m/z＝483,[M+H]+
2)合成N-[2-[[4-[N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基甲脒基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基甲基]乙基]-N′-氰基氨基甲酰硫代酯
取N-[2-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5噁二唑-3-基]氨基]乙基]-N′-氰基氨基甲酰硫代酯(482mg,1mmol)于四氢呋喃溶液中，加入5ml 2N氢氧化钠水溶液，反应0.5h。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝30:1为洗脱剂，柱层析得274.2mg产物，收率60％。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.47(s,1H),8.16(s,1H),7.77(s,1H),7.27(s,1H),7.16(t,J＝8.7Hz,1H),7.00(s,1H),6.42(s,1H),3.71(d,J＝5.2Hz,2H),3.53(s,2H),2.63(s,3H).MSESI:m/z＝457,[M+H]+。
实施例3：合成化合物3，N-(3-溴-4-氟苯基)-4-[[(2-氰基-3-甲基胍基)乙基]氨基]-N′-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒
取N-[2-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5噁二唑-3-基]氨基]乙基]-N′-氰基氨基甲酰硫代酯(241mg,0.5mmol)于7ml 30％甲胺乙醇溶液中，反应2h。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝30:1为洗脱剂，柱层析得147.4mg产物，收率67％。1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ10.51(s,1H),8.11(s,1H),7.31–7.25(m,1H),7.15(t,J＝8.7Hz,1H),7.01(s,1H),6.78(s,1H),6.62(d,J＝12.1Hz,2H),3.62(d,J＝5.0Hz,2H),3.44(d,J＝5.0Hz,2H),2.91(d,J＝4.4Hz,3H).MS ESI:m/z＝440,[M+H]+。
实施例4：合成化合物4，N-[3-[[4-[N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基甲脒基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基甲基]丙基]-N′-氰基氨基甲酰硫代酯
1)合成[3-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]丙基]氨基甲酸叔丁酯
将N-叔丁氧羰基-1,3-丙二胺(174.2mg,1mmol)加入到4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-硝基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(372mg,1mmol)的四氢呋喃溶液中，三乙胺(303mg,3mmol)加入到上述溶液中，室温搅拌四小时。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝100:1为洗脱剂，柱层析得399.2mg产物，收率80％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.09(d,J＝4.9Hz,1H),7.72(s,1H),7.59(dd,J＝17.2,8.5Hz,1H),6.89(s,1H),6.54(s,1H),3.25(d,J＝6.0Hz,2H),2.96(d,J＝5.9Hz,2H),1.73–1.58(m,2H),1.37(s,9H).MS ESI:m/z＝499,[M+H]+
2)合成N-[3-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]丙基]-N′-氰基氨基甲酰硫代酯
冰浴下5ml 30％的三氟醋酸二氯甲烷溶液滴加入[3-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]丙基]氨基甲酸叔丁酯(200mg,0.4mmol)的二氯甲烷中，室温反应半小时，TLC监测原料无剩余，旋蒸掉溶剂得油状物。
乙醇钠(42.8mg,0.6mmol)溶于10ml乙醇加入到上述油状物中，随后N-氰亚胺基-S,S-二硫代碳酸(87.6mg,0.6mmol)加入到上述反应液中，60℃过夜。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝100:1后换为80:1过柱，柱层析得99.4mg产物，收率50％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.99(s,1H),7.72(d,J＝15.8Hz,1H),7.38(s,1H),6.20(d,J＝24.0Hz,1H),2.23(s,2H),2.15(s,2H),1.47(s,2H),0.88(s,3H).MS ESI:m/z＝497,[M+H]+
3)合成N-[3-[[4-[N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基甲脒基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基甲基]丙基]-N′-氰基氨基甲酰硫代酯
取N-[3-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]丙基]-N′-氰基氨基甲酰硫代酯(248.5mg,0.5mmol)于四氢呋喃溶液中，加入5ml 2N氢氧化钠水溶液，反应0.5h。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝30:1为洗脱剂，柱层析得129.3mg产物，收率55％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.37(s,1H),8.87(s,1H),8.29(s,1H),7.11(t,J＝8.8Hz,1H),7.06–7.01(m,1H),6.68(d,J＝3.1Hz,1H),6.17(s,1H),3.25(d,J＝5.8Hz,2H),3.15(d,J＝6.4Hz,2H),2.43(d,J＝1.4Hz,3H),1.80–1.69(m,2H).MS ESI:m/z＝471,[M+H]+。
实施例5：合成化合物5，N-(3-溴-4-氟苯基)-4-[[(2-氰基-3-甲基胍基)丙基]氨基]-N′-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒
取N-[3-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]丙基]-N′-氰基氨基甲酰硫代酯(248.5mg,0.5mmol)于7ml30％甲胺乙醇溶液中，反应2h。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝30:1为洗脱剂，柱层析得147.6mg产物，收率65％。1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ10.57(d,J＝6.1Hz,1H),8.11(d,J＝6.2Hz,1H),7.33–7.22(m,1H),7.21–7.09(m,1H),7.04–6.92(m,1H),6.61(d,J＝5.8Hz,2H),6.31(d,J＝5.8Hz,1H),3.38(dt,J＝17.0,6.2Hz,4H),2.94–2.80(m,3H),1.88(dd,J＝12.5,6.2Hz,2H).MS ESI:m/z＝454,[M+H]+。
实施例6：合成化合物6，N-[3-[4-[N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基甲脒基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]-N′-氰基氮杂环丁基-1-硫代甲亚胺酸甲酯
1)合成3-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]氮杂环丁基-1-羧酸叔丁酯
将1-叔丁氧羰基-3-胺基环丁胺(172.2mg,1mmol)加入到4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-硝基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(372mg,1mmol)的四氢呋喃溶液中,后三乙胺(303mg,3mmol)加入到上述溶液中，室温搅拌四小时。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝100:1为洗脱剂，柱层析得386.9mg产物，收率78％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.18(d,J＝14.2Hz,1H),8.90(s,1H),8.87–8.80(m,1H),7.26(s,1H),5.99(s,1H),5.88(d,J＝5.2Hz,2H),5.48–5.44(m,2H),3.01–2.99(m,9H).MS ESI:m/z＝497,[M+H]+
2)合成3-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5，-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]-N-氰基氮杂环丁基-1-硫代甲亚胺酸甲酯
冰浴下5ml 30％的三氟醋酸二氯甲烷溶液滴加入[3-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]氮杂环丁基-1-羧酸叔丁酯(198.4mg,0.4mmol)的二氯甲烷中，室温反应半小时，TLC监测原料无剩余，旋蒸掉溶剂得油状物。
乙醇钠(42.8mg,0.6mmol)溶于10ml乙醇加入到上述油状物中，随后N-氰亚胺基-S,S-二硫代碳酸(87.6mg,0.6mmol)加入到上述反应液中，60℃过夜。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝100:1后换为80:1过柱，柱层析得112.9mg产物，收率57％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.22(s,1H),6.84(s,1H),6.73(t,J＝8.4Hz,1H),6.47(s,1H),3.83(s,1H),3.63(s,2H),1.61(s,3H).MS ESI:m/z＝495,[M+H]+
3)合成N-[3-[4-[N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基甲脒基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]-N′-氰基氮杂环丁烷-1-硫代甲亚胺酸甲酯
取3-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]-N-氰基氮杂环丁基-1-硫代甲亚胺酸甲酯(247mg,0.5mmol)于四氢呋喃溶液中，加入5ml 2N氢氧化钠水溶液，反应0.5h。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝30:1为洗脱剂，柱层析得126.4mg产物，收率54％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.47(s,1H),8.98(s,1H),7.19(d,J＝8.7Hz,1H),7.15(d,J＝7.7Hz,1H),7.03(d,J＝6.1Hz,1H),6.76(s,1H),4.70(s,1H),4.39(d,J＝24.2Hz,2H),4.19–3.96(m,2H),2.48(s,3H).MS ESI:m/z＝469,[M+H]+。
实施例7：合成化合物7，N-(3-溴-4-氟苯基)-4-[[(N′-氰基-N-甲基氨基甲酰基)氮杂环丁基]氨基]-N′-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒
取3-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]-N-氰基氮杂环丁基-1-硫代甲亚胺酸甲酯(247mg,0.5mmol)于7ml30％甲胺乙醇溶液中，反应2h。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝30:1为洗脱剂，柱层析得142.4mg产物，收率63％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.48(d,J＝6.7Hz,1H),8.97(s,1H),7.18(t,J＝8.5Hz,1H),7.13(s,1H),6.93(s,2H),6.77(s,1H),4.43(s,2H),4.31(s,1H),4.06(s,2H),2.64(s,3H).MS ESI:m/z＝452,[M+H]+。
实施例8：合成化合物8，3-[[4-N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基甲脒基]-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基]-N-氰基环戊基-1-硫代甲亚胺酸甲酯
1)合成3-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
将3-氨基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(186.3mg,1mmol)加入到4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-硝基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(372mg,1mmol)的四氢呋喃溶液中,后三乙胺(303mg,3mmol)加入到上述溶液中，室温搅拌四小时。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝100:1为洗脱剂，柱层析得382.5mg产物，收率75％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.01(d,J＝5.7Hz,1H),7.63(s,1H),7.57(t,J＝8.6Hz,1H),6.59(d,J＝5.5Hz,1H),4.03(s,1H),3.51(d,J＝9.9Hz,1H),3.30(t,J＝7.0Hz,2H),3.18(dd,J＝23.4,9.5Hz,1H),2.09(d,J＝5.7Hz,1H),1.92(d,J＝6.3Hz,1H),1.40(d,J＝3.0Hz,9H).MS ESI:m/z＝511,[M+H]+
2)合成3-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5，-二氢-1,2,4-噁二唑-3-]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]-N-氰基吡咯烷-1-硫代甲亚胺酸甲酯
冰浴下5ml 30％的三氟醋酸二氯甲烷溶液滴加入3-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(204.4mg,0.4mmol)的二氯甲烷中，室温反应半小时，TLC监测原料无剩余，旋蒸掉溶剂得油状物。
乙醇钠(42.8mg,0.6mmol)溶于10ml乙醇加入到上述油状物中，随后N-氰亚胺基-S,S-二硫代碳酸(87.6mg,0.6mmol)加入到上述反应液中，60℃过夜。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝100:1后换为80:1过柱，柱层析得116.1mg产物，收率57％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.02(s,1H),7.66(s,1H),7.55(d,J＝26.4Hz,1H),6.77(d,J＝25.0Hz,1H),4.35(s,1H),4.19(s,1H),3.86(s,1H),3.62(s,2H),2.67(s,3H),2.15(d,J＝44.5Hz,2H).MS ESI:m/z＝509,[M+H]+
3)合成3-[[[4-N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基甲脒基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]-N-氰基环戊基-1-硫代甲亚胺酸甲酯
取3-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5，-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]-N-氰基吡咯烷-1-硫代甲亚胺酸甲酯(254.5mg,0.5mmol)于四氢呋喃溶液中，加入5ml 2N氢氧化钠水溶液，反应0.5h。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝30:1为洗脱剂，柱层析得127.7mg产物，收率53％。1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ9.51(s,1H),7.03(s,1H),6.16–6.09(m,1H),6.00(dd,J＝15.9,7.4Hz,1H),5.85(d,J＝8.3Hz,1H),5.19(s,1H),3.16(d,J＝4.6Hz,1H),2.94–2.71(m,2H),2.67(s,2H),1.57(s,3H),1.25(td,J＝13.4,7.7Hz,1H),1.07(s,1H)._MS ESI:m/z＝482,[M+H]+。
实施例9：合成化合物9，N-(3-溴-4-氟苯基)-4-[[(N′-氰基-N-甲基氨基甲酰基)氮杂环戊基]氨基]-N′-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒
取3-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5，-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]-N-氰基吡咯烷-1-硫代甲亚胺酸甲酯(254mg,0.5mmol)于7ml30％甲胺乙醇溶液中，反应2h。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝30:1为洗脱剂，柱层析得141.8mg产物，收率61％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.46(s,1H),8.92(s,1H),7.18(t,J＝8.8Hz,1H),7.10(dd,J＝6.0,2.4Hz,1H),6.87(d,J＝4.5Hz,1H),6.82–6.74(m,1H),6.47(d,J＝5.7Hz,1H),4.09(d,J＝4.4Hz,1H),3.72(dd,J＝10.7,5.8Hz,1H),3.54(t,J＝6.7Hz,2H),3.44(d,J＝8.2Hz,1H),2.81(d,J＝4.3Hz,3H),2.22–2.09(m,1H),2.08–2.00(m,1H).MS ESI:m/z＝465,[M+H]+。
实施例10：合成化合物10，4-[[[4-N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基甲脒基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]-N-氰基哌啶基-1-硫代甲亚胺酸甲酯
1)合成4-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]哌啶基-1-羧酸叔丁酯
将4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(200.3mg,1mmol)加入到4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-硝基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(372mg,1mmol)的四氢呋喃溶液中,后三乙胺(303mg,3mmol)加入到上述溶液中，室温搅拌四小时。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝100:1为洗脱剂，柱层析得341.3mg产物，收率65％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.02(dd,J＝6.2,2.3Hz,1H),7.67–7.62(m,1H),7.58(t,J＝8.6Hz,1H),6.33(d,J＝7.3Hz,1H),3.80(s,2H),3.54–3.44(m,1H),2.85(s,2H),1.83(d,J＝12.7Hz,2H),1.40(s,9H).MS ESI:m/z＝525,[M+H]+
2)合成4-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5，-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]-N-氰基哌啶基-1-硫代甲亚胺酸甲酯
冰浴下5ml 30％的三氟醋酸二氯甲烷溶液滴加入4-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]哌啶基-1-羧酸叔丁酯(210mg,0.4mmol)的二氯甲烷中，室温反应半小时，TLC监测原料无剩余，旋蒸掉溶剂得油状物。
乙醇钠(42.8mg,0.6mmol)溶于10ml乙醇加入到上述油状物中，随后N-氰亚胺基-S,S-二硫代碳酸(87.6mg,0.6mmol)加入到上述反应液中，60℃过夜。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝100:1后换为80:1过柱，柱层析得115.1mg产物，收率55％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.88(t,J＝5.9Hz,1H),7.50(s,1H),7.48–7.39(m,1H),6.24(t,J＝6.6Hz,1H),4.11(d,J＝13.1Hz,2H),3.87(q,J＝7.1Hz,1H),3.16(d,J＝12.6Hz,2H),2.55(s,2H),1.83(s,3H),1.43(dd,J＝21.4,9.9Hz,2H).MS ESI:m/z＝523,[M+H]+
3)合成4-[[[4-N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基甲脒基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]-N-氰基哌啶基-1-硫代甲亚胺酸甲酯
取4-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]-N-氰基哌啶基-1-硫代甲亚胺酸甲酯(261mg,0.5mmol)于四氢呋喃溶液中，加入5ml 2N氢氧化钠水溶液，反应0.5h。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝30:1为洗脱剂，柱层析得126.7mg产物，收率51％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.44(s,1H),8.92(s,1H),7.18(t,J＝8.8Hz,1H),7.11(d,J＝3.6Hz,1H),6.80–6.71(m,1H),6.24(d,J＝7.1Hz,1H),4.22(d,J＝13.2Hz,2H),3.63(d,J＝27.8Hz,1H),3.46–3.37(m,2H),2.70(s,3H),2.04(d,J＝10.7Hz,2H),1.52(dd,J＝20.5,10.0Hz,2H).MS ESI:m/z＝497,[M+H]+。
实施例11：合成化合物11，N-(3-溴-4-氟苯基)-4-[[(N′-氰基-N-甲基氨基甲酰基)氮杂哌啶基]氨基]-N′-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒
取4-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5-噁二唑-3-基]氨基]-N-氰基哌啶基-1-硫代甲亚胺酸甲酯(261mg,0.5mmol)于7ml30％甲胺乙醇溶液中，反应2h。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝30:1为洗脱剂，柱层析得139.2mg产物，收率58％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.46(s,1H),8.91(s,1H),7.27(d,J＝3.9Hz,1H),7.18(t,J＝8.7Hz,1H),7.11(d,J＝3.8Hz,1H),6.79(s,1H),6.22(d,J＝7.1Hz,1H),3.85(d,J＝13.2Hz,2H),3.55(s,1H),3.07(t,J＝11.8Hz,2H),2.84(d,J＝4.0Hz,3H),1.97(d,J＝11.2Hz,2H),1.46(d,J＝10.7Hz,2H).MS ESI:m/z＝480,[M+H]+。
实施例12：合成化合物12，N-[2-[[4-[N-(3-溴-4-氟苯基)-N′羟基甲脒基]-1,2,5-噁二唑-3-基]硫代甲基]乙基]-N′-氰基氨基甲酰硫代酯
1)合成3-[4-[(2-氨基乙基)硫基]-1,2,5-噁二唑-3-基]-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮
将2-氨基乙硫醇(77.2mg,1mmol)加入到4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-硝基-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-二唑-5(4H)-酮(372mg,1mmol)的四氢呋喃溶液中,后三乙胺(303mg,3mmol)加入到上述溶液中，室温搅拌四小时。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝100:1为洗脱剂，柱层析得241.2mg产物，收率60％。MS ESI:m/z＝402,[M+H]+2)合成N-[2-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5噁二唑-3-基]硫基]乙基]-N′-氰基氨基甲酰硫代酯
将3-[4-[(2-氨基乙基)硫基]-1,2,5-噁二唑-3-基]-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(201mg,0.5mmol)溶于10ml乙醇中，随后N-氰亚胺基-S,S-二硫代碳酸(87.6mg,0.6mmol)加入到上述反应液中，60℃过夜。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝100:1后换为80:1过柱，柱层析得117.2mg产物，收率51％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.52(s,1H),8.06(d,J＝4.1Hz,1H),7.74–7.66(m,1H),7.56(t,J＝8.7Hz,1H),3.65(s,2H),3.42(t,J＝6.2Hz,2H),2.44(s,3H).MS ESI:m/z＝500,[M+H]+
3)合成N-[2-[[4-[N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基甲脒基]-1,2,5-噁二唑-3-基]硫代甲基]乙基]-N′-氰基氨基甲酰硫代酯
取N-[2-[[4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基]-1,2,5噁二唑-3-基]硫基]乙基]-N′-氰基氨基甲酰硫代酯(250mg,0.5mmol)于四氢呋喃溶液中，加入5ml 2N氢氧化钠水溶液，反应0.5h。后处理：乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，以二氯甲烷:甲醇＝30:1为洗脱剂，柱层析得144.6mg产物，收率61％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.77(s,1H),9.00(s,1H),8.58(s,1H),7.17(t,J＝8.5Hz,1H),7.11(s,1H),6.69(d,J＝5.4Hz,1H),3.69(s,2H),3.37(s,2H),2.53(d,J＝13.5Hz,3H).MS ESI:m/z＝474,[M+H]+。
实施例13：IDO活性抑制的酶学评价
Buffer(pH＝6.5)的配制：取599.9mg的磷酸二氢钠，再加入1M的氢氧化钾1.52mL，加水稀释至100mL，再将PH微调至6.5。标准反应液的配制：用缓冲液(pH＝6.5)作为母液，加入抗坏血酸176.12mg，过氧化氢酶10mg，亚甲基蓝0.325mg，L-色氨酸4.075mg。将所有待测化合物配制成80mmol的DMSO溶液，再用Buffer将80mmol稀释成8μmol待用。取96孔黑板，测试孔、最大值和最小值对照孔中均加入80μL的标准反应液；在测试孔加入10μL的IDO酶和10μL的待测化合物溶液,最大值对照孔中加入10μL的酶和10μL的Buffer，最小组对照孔中加入20μL的Buffer。37℃状态下放置1h后取出，再向96板的孔中加入1M的氢氧化钠溶液20μl，60℃环境中放置4h(目的是将N-甲酰犬尿氨酸分解为犬尿氨酸)后取出，冷却后，用酶标仪测试荧光值。抑制率＝(最大值-测量值)/(最大值-最小值)*100％。
结果如表1所示，结果表明，本发明中化合物显示出较好的IDO酶制活性，其中化合物1、2、3对于IDO酶制活性IC50值小于100nM。本发明的化合物可以进一步研制开发IDO抑制剂。
表1：本发明化合物IDO酶抑制活性IC50值
化合物 IDO酶抑制活性IC<sub>50</sub>(nM)
化合物1 95.95±9.13
化合物2 49.37±2.86
化合物3 52.12±3.27
化合物4 271.53±20.83
化合物5 224.87±3.84
化合物6 273.60±7.31
化合物7 321.87±32.47
化合物8 465.37±23.35
化合物9 765.03±90.17
化合物10 738.07±20.45
化合物11 349.33±38.64
化合物12 191.03±1.31
实施例14：IDO活性抑制的细胞模型测试
干扰素γ可诱导Hela细胞表达IDO这一模型被用来测试化合物对吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的抑制活性。待测化合物用二甲亚砜配制为8mM,实验时用二甲亚砜稀释至试验最高浓度，实验时用培养基进行3倍梯度稀释，一般稀释成7到10个浓度点，每个浓度设复孔。二甲亚砜终浓度为0.5％，每次实验均包含内参化合物。
实验的程序为：体外培养好的Hela细胞接种于96孔板中(104个/孔，100μL)(即105个/ml,每孔加100μl),培养24h后，人IFN-γ(80ng/mL)、梯度稀释抑制剂、L-色氨酸(15μg/mL)、D++共200μL(即最终孔中总体积200μl)加入到96孔板中混匀。培养48h后，1200rpm离心3min,取上清液140μL于另一块96孔板中，加入10μL 6.1M的三氯乙酸混合，50℃孵育30min。然后2500rpm离心10min，取100μL上清液于另一96孔板中，加入100μL 2％(w/v)的4-(二甲氨基)苯甲醛(乙酸溶液)反应至溶液变黄，然后置于480nm波长下读数。抑制率％＝{(MAX-A)X100/(MAX-MIN)其中MAX是不加抑制剂的读数，MIN是不加干扰素且不加抑制剂的读数(不加部分全部用D++补齐)，A为加入抑制剂的读数。
具体结果如表2所示。结果表明，本发明中化合物显示出较好的细胞中IDO酶制活性，其中化合物2、3、5、6、7和12对于Hela细胞中的IDO酶制活性IC50值小于50nM。本发明的化合物可以进一步研制开发IDO抑制剂。
表2：本发明化合物细胞中IDO抑制活性IC50值
Figure BDA0001994908390000181
Figure BDA0001994908390000191
实施例15：体内抗肿瘤活性测试
体外培养的LLC细胞用PBS稀释至107/ml。6-8周C57BL/6小鼠12只，随机分为2组分别为空白组和化合物组，每组6只，小鼠接种前两天背部剃毛。每只小鼠接种0.1ml细胞悬液。肿瘤体积到50-100mm3时开始灌胃给药，100mg/kg，每2天用游标卡尺测量肿瘤体积V＝a*b2/2(注：a为长径，b为短径)，给药周期为14天。
结果如图1所示，结果表明，本发明中化合物3显示出对Lewis肺癌有较好的体内抑制活性，在100mg/kg(bid,ig)剂量下显示很强的体内抗肿瘤活性。本发明的化合物可以进一步研制开发IDO抑制剂，作为新型抗肿瘤药物。

Claims (19)

1.一种含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂，其特征在于，所述抑制剂含有通式(I)结构的取代脒基的1,2,5-噁二唑类化合物及其药学上可接受的盐，
Figure FDA0001994908380000011
其中，
Figure FDA0001994908380000012
X＝NH或S
R1＝CN或NO2
Figure FDA0001994908380000013
2.根据权利要求1所述的含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂，其特征在于，所述的取代脒基的1,2,5-噁二唑类化合物为下述结构的化合物1，
Figure FDA0001994908380000014
3.根根据权利要求1所述的含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂，其特征在于，所述的取代脒基的1,2,5-噁二唑类化合物为下述结构的化合物2，
Figure FDA0001994908380000021
4.根据权利要求1所述的含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂，其特征在于，所述的取代脒基的1,2,5-噁二唑类化合物为下述结构的化合物3，
Figure FDA0001994908380000022
5.根据权利要求1所述的含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂，其特征在于，所述的取代脒基的1,2,5-噁二唑类化合物为下述结构的化合物4，
Figure FDA0001994908380000023
6.根据权利要求1所述的含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂，其特征在于，所述的取代脒基的1,2,5-噁二唑类化合物为下述结构的化合物5，
Figure FDA0001994908380000024
7.根据权利要求1所述的含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂，其特征在于，所述的取代脒基的1,2,5-噁二唑类化合物为下述结构的化合物6，
Figure FDA0001994908380000031
8.根据权利要求1所述的含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂，其特征在于，所述的取代脒基的1,2,5-噁二唑类化合物为下述结构的化合物7，
Figure FDA0001994908380000032
9.根据权利要求1所述的含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂，其特征在于，所述的取代脒基的1,2,5-噁二唑类化合物为下述结构的化合物8，
Figure FDA0001994908380000033
10.根据权利要求1所述的含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂，其特征在于，所述的取代脒基的1,2,5-噁二唑类化合物为下述结构的化合物9，
Figure FDA0001994908380000034
11.根据权利要求1所述的含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂，其特征在于，所述的取代脒基的1,2,5-噁二唑类化合物为下述结构的化合物10，
Figure FDA0001994908380000041
12.根据权利要求1所述的含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂，其特征在于，所述的取代脒基的1,2,5-噁二唑类化合物为下述结构的化合物11，
Figure FDA0001994908380000042
13.根据权利要求1所述的含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂，其特征在于，所述的取代脒基的1,2,5-噁二唑类化合物为下述结构的化合物12，
Figure FDA0001994908380000043
14.权利要求1所述的含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂的制备方法，其特征在于，按下式制备，
Figure FDA0001994908380000051
15.权利要求1所述的含取代脒基结构的2,3-双加氧酶抑制剂在制备预防和/或治疗具有IDO介导的色氨酸代谢途径的病理学特征疾病的药物组合物中的用途。
16.按权利要求15所述的用途，其特征在于，所述的疾病为癌症或肿瘤、病毒感染、抑郁症、神经变性病症、创伤、年龄相关白内障、器官移植排斥或自身免疫疾病。
17.按权利要求16所述的用途，其特征在于，所述癌症或肿瘤选自肺癌，骨癌、胃癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、子宫癌、卵巢癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、直肠癌、结肠癌、肛门区癌、乳腺癌或食管癌。
18.一种药物组合物，其包括治疗有效量的式(Ⅰ)结构的化合物或其药学上可接受盐及可药用的载体。
19.根据权利要求18所述药物组合物，其特征在于，所述药物组合物与抗CTLA-4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体，抗病毒剂、化疗剂、免疫抑制剂、辐射、抗肿瘤疫苗、抗病毒疫苗、细胞因子疗法或酪氨酸激酶抑制剂进行联合用药。
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