CN108966651A - 吲哚胺2,3-双加氧酶抑制剂及其制备方法与应用 - Google Patents

吲哚胺2,3-双加氧酶抑制剂及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种具有式(I)结构的吲哚胺2,3‑双加氧酶抑制剂及其制备方法与应用。该IDO抑制剂是N'‑羟基‑N‑苯基甲脒衍生物，对IDO具有很高的抑制活性，能够有效抑制IDO活性，也可用于抑制患者的免疫抑制。可广泛应用于治疗或预防癌症或肿瘤、病毒感染、抑郁症、神经变性病症、创伤、年龄相关的白内障、器官移植排斥或自身免疫疾病，有望开发成新一代免疫抑制剂。

Description

吲哚胺2,3-双加氧酶抑制剂及其制备方法与应用 技术领域
本发明属于药物开发领域，具体涉及吲哚胺2,3-双加氧酶抑制剂及其制备方法与应用。
背景技术
吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,简写IDO)是一种与色氨酸代谢有关的蛋白酶。色氨酸是八种必需氨基酸之一，在体内色氨酸可用来合成蛋白质，色氨酸还可作为前体底物通过甲氧基吲哚代谢途径合成5-羟色胺和褪黑激素(N-乙酰-5-甲氧基色胺)。5-羟色胺和褪黑激素是神经递质和神经内分泌激素，参与体内的多种神经与生理过程的调节。此外，色氨酸还可通过犬尿氨酸代谢途径产生犬尿氨酸等代谢产物。犬尿氨酸代谢途径的第一步是在吲哚胺2,3-双加氧酶或色氨酸2，3-双加氧酶(TDO)的催化作用下，色氨酸L-色氨酸降解为N-甲酰基-犬尿氨酸，N-甲酰基-犬尿氨酸在犬尿氨酸甲酰胺酶的催化作用下形成犬尿氨酸，犬尿氨酸还可被进一步代谢形成3-羟基邻氨基苯甲酸，喹啉酸，吡啶甲酸。喹啉酸具有神经毒性，而吡啶甲酸具有神经保护作用。犬尿氨酸和3-羟基邻氨基苯甲酸参与淋巴细胞活性调节从而引起免疫系統被抑制。
除胎盘组织外，正常健康状况下吲哚胺2,3-双加氧酶在多数组织细胞内基本不表达。在炎症发生区域，干扰素γ等炎性细胞因子可诱导吲哚胺2,3-双加氧酶表达量升高。多方面的实验结果证明，吲哚胺2,3-双加氧酶在组织细胞中的高表达可导致该组织微环境的免疫系統被抑制，或称免疫被抑制或免疫检查点(immune checkpoint)。胎盘组织吲哚胺2,3-双加氧酶的高表达可防止对胎儿的免疫排斥反应。炎症区域吲哚胺2,3-双加氧酶的高表达可防止过度的免疫反应，防止细胞组织受到过度的损伤。导致免疫被抑制的机制之一是吲哚胺2,3-双加氧酶高表达造成局部L-色氨酸耗竭，从而被周围的淋巴细胞通过GCN2等机制感受到，引起CD8+细胞毒性T细胞发生细胞周期停滞或凋亡。导致免疫被抑制的另一种机制是吲哚胺2,3-双加氧酶高表达造成犬尿氨酸升高，犬尿氨酸形成后可离开细胞进入细胞外基质，然后进入附近的淋巴细胞通过结合AHR转录因子对CD8+T细胞和调节性Treg细胞进行调节,CD8+细胞毒性T细胞的活性被抑制，而调节性Treg细胞的数量增多并且被激活，从而导致免疫被抑制。
在很多不同类型的肿瘤中吲哚胺2,3-双加氧酶发生异常高表达，包括血液肿瘤和直结肠癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、咽喉癌等实体瘤。吲哚胺2,3-双加氧酶异常高表达与肿瘤不良预后呈正相关。肿瘤细胞逃脱免疫监控是癌变和癌症进一步发展的关键一步，肿瘤中吲哚胺2,3-双加氧酶的异常高表达可能是肿瘤细胞逃脱 免疫监控的一种主要机制，抑制吲哚胺2,3-双加氧酶的活性有可能激活被抑制的免疫系统，达到抑制肿瘤生长的效果，所以吲哚胺2,3-双加氧酶抑制剂作为一种免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitor)引起了医药界很大的兴趣。吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)有两种，IDO-1和IDO-2，参与上述免疫被抑制的主要是IDO-1，IDO-2在免疫被抑制中的作用还不是很清楚。色氨酸2，3-双加氧酶(TDO)也在很多类型的肿瘤中发生异常高表达，有的肿瘤还呈现IDO和TDO双阳性，所以有人认为也可通过抑制TDO免疫检查点起到肿瘤治疗的目的。因为正常肝脏细胞表达TDO，尚不清楚TDO抑制剂是否会影响肝脏功能和正常的色氨酸代谢，但TDO敲除得小鼠模型未见异常，表明TDO抑制剂可能不会影响肝脏功能和正常的色氨酸代谢。IDO和TDO导致免疫被抑制的机理基本相同，所以IDO/TDO双特异抑制剂也同样引起了医药界的兴趣，IDO/TDO双特异抑制剂将适用于IDO阳性、TDO阳性、IDO/TDO双阳性的病人。
色氨酸的犬尿氨酸代谢途径的很多代谢产物与精神分裂症，抑郁症，神经元退化有关，吲哚胺2,3-双加氧酶抑制剂可能也可用于这些疾病的治疗。犬尿氨酸在犬尿氨酸氨基转移酶的催化作用下可转化为犬尿喹啉酸，犬尿喹啉酸是一种NMDA拮抗剂，在精神分裂症病人的中枢神经中常见到较高的犬尿喹啉酸水平。喹啉酸具有神经毒性，可导致神经细胞凋亡和神经退化。吲哚胺2,3-双加氧酶不仅参与色氨酸代谢，还参与色氨等的代谢，5-羟色胺在吲哚胺2,3-双加氧酶的催化作用下可转化为5-羟吲哚乙酸，5-羟色胺下降可能是导致抑郁症的因素之一。
目前吲哚胺2,3-双加氧酶抑制剂的研发均处于早期，包括NewLink公司的Indoximod，NLG-919(IDO/TDO双特异性)，Incyte公司的Epacadostat(INCB024360)，以及BMS，Flexus，Iomet,Iteos,Curadev等公司的IDO或TDO抑制剂。专利WO2016041489A1公开了一系列磺酰亚氨基化合物，该类对吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)具有很好的抑制活性，但该专利公开的最好化合物6相对于INCB-24360的暴露量(AUC)提升幅度有限，且T1/2很短，不利于临床开发；化合物13(化合物6前药)虽然延长了T1/2，但其暴露量(AUC)还不如INCB-24360，因此，进一步开发具有适合临床给药的T1/2，同时具有较高暴露量(AUC)的化合物吸引了世界许多科学家为此不断努力。
发明内容
发明人在一系列研究后发现N'-羟基-N-苯基甲脒衍生物，对吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)具有很高的抑制活性，而对色氨酸2，3-双加氧酶(TDO)没有抑制活性，并且在PK动物模型中具有非常好的暴露量(AUC)，同时具有非常适合临床应用的T1/2。该类化合物能够有效抑制IDO的活性，也可用于抑制患者的免疫抑制。可广泛应用于治疗或预防癌症或肿瘤、病毒感染、抑郁症、神经变性 病症、创伤、年龄相关的白内障、器官移植排斥或自身免疫疾病，有望开发成新一代免疫抑制剂。
本发明一方面提供一种具有如下式(I)结构的(Z)-N'-羟基-N-苯基甲脒衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，
其中：
为Z型和E型；优选Z型；
X选自C1-8烷基或C3-8环烷基，任选进一步被一个或多个选自氘、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、卤取代C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR8、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
R1选自如下结构：
Y选自-S(O)2-或-C(O)-C(O)-；
Z选自键、O、S或-NR7-；
R2选自氢、氘、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基、5-10元杂芳基或C0-8烷基羰基，
任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、卤取代C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
R3选自氢、氘、羟基、氨基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基、5-10元杂芳基、C1-8烷氧基、C3-8环烷氧基、3-8元杂环基氧基、 C5-10芳基氧基、5-10元杂芳基氧基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5，
任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、卤取代C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
R4选自氢、氘、C1-8烷基、C2-8链烯基、C3-8环烷基、卤取代C1-8烷基、苯基、对甲基苯基、氨基、单C1-8烷基氨基、二C1-8烷基氨基或C1-8烷酰氨基；
R5选自氢、氘、C1-8烷基、C3-8环烷基、卤取代C1-8烷基或羟取代C1-8烷基；
R6选自氢、氘、C1-8烷基、C1-8烷氧基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基、卤取代C1-8烷基、卤取代C1-8烷氧基、羟取代C1-8烷基或羟取代C1-8烷氧基；
R7、R8、R9、R10各自独立的选自氢、氘、羟基、C1-8烷基、C1-8羟烷基、C1-8烷氧基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基、5-10元杂芳基或C1-8烷酰基，或者，R7与R8、R9与R10和所连接的氮原子形成3-8元杂环烷基，
任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、乙酰氨基、叠氮基、磺酰基、甲磺酰基、C1-8烷基、三氟甲基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C1-8烷氧基、C1-8烷氧羰基、C1-8烷基羰基、C1-8烷基羰基氧基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、氨基、单C1-8烷基氨基或二C1-8烷基氨基的取代基所取代；
r为0～2。
作为进一步优选的方案，所述的(Z)-N'-羟基-N-苯基甲脒衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自式(Ⅱ)化合物：
其中：
X选自C1-6烷基或C3-8环烷基，任选进一步被一个或多个选自氘、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、卤取代C1-8烷基或C3-8环烷基的取代基所取代；R7、R9、R10各自独立的选自氢、氘、羟基、C1-8烷基、C1-8羟烷基、C1-8烷氧基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基、 C1-8烷基取代的C5-10芳基、5-10元杂芳基、C1-8烷酰基或-C0-8-C(O)OR5，或R9与R10和所连接的氮原子形成5-6元杂环烷基，
任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、乙酰氨基、叠氮基、磺酰基、甲磺酰基、C1-8烷基、三氟甲基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C1-8烷氧基、C1-8烷氧羰基、C1-8烷基羰基、C1-8烷基羰基氧基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、氨基、单C1-8烷基氨基或二C1-8烷基氨基的取代基所取代。
作为更一步优选的方案，所述的(Z)-N'-羟基-N-苯基甲脒衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自式(IIA)或(IIB)化合物：
其中：
X选自乙基、环丁基、环己基，任选进一步被一个或多个选自氘、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、三氟甲基、C1-8烷基或C3-8环烷基的取代基所取代；
R7、R9、R10各自独立的选自氢、氘、羟基、C1-8烷基、C1-8羟烷基、C1-8烷氧基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基、C1-8烷基取代的C5-10芳基、5-10元杂芳基、C1-8烷酰基或-C0-8-C(O)OR5，或R9、R10与所连接的氮原子形成5-6杂环烷基。
作为最优选的方案，所述的(Z)-N'-羟基-N-苯基甲脒衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自如下化合物：
作为进一步优选的方案，所述(Z)-N'-羟基-N-苯基甲脒衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自式(III)化合物：
Z选自键或-NR7-；
R2选自氢、氘、C1-8烷基；
R3选自氘、羟基、氨基、C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基、5-10元杂芳基、C1-8烷氧基、C3-8环烷氧基、3-8元杂环基氧基、C5-10芳基氧基、5-10元杂芳基氧基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-C(O)OR5或-C0-8-O-C(O)R6；
R4选自氢、氘、C1-8烷基、C2-8链烯基、C3-8环烷基、卤取代C1-8烷基、苯基、对甲基苯基、氨基、单C1-8烷基氨基、二C1-8烷基氨基或C1-8烷酰氨基；
R5选自氢、氘、C1-8烷基、C3-8环烷基、卤取代C1-8烷基或羟取代C1-8烷基；
R6选自氢、氘、C1-8烷基、C1-8烷氧基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基、卤取代C1-8烷基、卤取代C1-8烷氧基、羟取代C1-8烷基或羟取代C1-8烷氧基；
r为0～2。
作为更进一步优选的方案，所述(Z)-N'-羟基-N-苯基甲脒衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，所述式(III)化合物有如下两种表述方式：
作为更进一步优选的方案，所述的式(I)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐，
Z选自键或-NR7-；.
R2选自甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基或苯基；
R3选自羟基、氨基、C1-8烷基或-C0-8-S(O)rR4；
R4选自氢、氘、C1-8烷基、C2-8链烯基、C3-8环烷基、卤取代C1-8烷基、苯基、对甲基苯基、氨基、单C1-8烷基氨基、二C1-8烷基氨基或C1-8烷酰氨基；
r为0～2。
作为最优选的方案，所述(Z)-N'-羟基-N-苯基甲脒衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自如下化合物：
本发明还涉及一种制备通式(III)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐的中间体，其特征在于，如通式(IV)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐：
其中：
Z、R2和R3如通式(III)所述。
本发明还涉及一种制备所述的式(I)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐的方法，其特征在于，包括如下制备步骤：
通式(IV)化合物在碱性条件下开环得到通式(III)化合物；
其中：
X、R2和R3如通式(III)所述。本发明另一方面提供一种前所述N’-羟基-N-苯基甲脒衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐的制备方法，包括如下制备步骤：
其中：
X、R1如式(Ⅰ)化合物所定义。
本发明另一方面提供一种药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效剂量的前述式(Ⅰ)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐及可药用的载体。
本发明另一方面提供一种前述式(Ⅰ)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐、或前述药物组合物在制备药物中的应用，所述药物用于抑制吲哚胺2,3-双加氧酶的活性或者用于抑制患者的免疫抑制。
本发明另一方面提供一种前述式(Ⅰ)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐、或前述药物组合物在制备药物中的应用，所述药物用于治疗或预防患者的癌症或肿瘤、病毒感染、抑郁症、神经变性病症、创伤、年龄相关的白内障、器官移植排斥或自身免疫疾病；优选的，其中所述癌症或肿瘤选自肺癌、骨癌、胃癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、子宫癌、卵巢癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、直肠癌、结肠癌、肛门区癌、乳腺癌、食管癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、胰腺癌、脑癌、睾丸癌、淋巴癌、移行细胞癌、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、软组织肉瘤、儿童实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊柱肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、黑素瘤、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、慢性或急性白血病和所述癌的组合。
作为进一步优选的方案，所述的应用是指将治疗有效剂量的前述的式(Ⅰ)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐、或前述药物组合物与抗CTLA-4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗病毒剂、化疗剂、免疫抑制剂、辐射、抗肿瘤疫苗、抗病毒疫苗、细胞因子疗法或酪氨酸激酶抑制剂进行联合用药；优选的，所述细胞因子优选IL-2、IL-3、IL-4或IL-5，所述化疗剂优选细胞毒性剂，所述抗PD-1抗体优选Keytruda抗体。
本发明另一方面提供一种调节吲哚胺2,3-双加氧酶活性的方法，所述方法包括将治疗有效剂量的前述式(Ⅰ)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐、或前述药物组合物与吲哚胺2,3-双加氧酶接触；优选的，所述调节优选为抑制作用。
本发明另一方面提供一种抑制患者的免疫抑制的方法，所述方法包括将治疗 有效剂量的前述式(Ⅰ)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐、或前述药物组合物给予患者。
本发明另一方面涉及一种治疗癌症的方法，该方法包括向患者施用治疗有效剂量的本发明的通式(I)所述的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐。该方法显示出突出的疗效和较少的副作用，其中所述癌症或肿瘤选自肺癌、骨癌、胃癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、子宫癌、卵巢癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、直肠癌、结肠癌、肛门区癌、乳腺癌、食管癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、胰腺癌、脑癌、睾丸癌、淋巴癌、移行细胞癌、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、软组织肉瘤、儿童实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊柱肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、黑素瘤、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、慢性或急性白血病和所述癌的组合。
附图说明
图1为实施例15化合物检测谱图，横坐标为保留时间(单位：min)；纵坐标为响应值(单位：mV)；
图2为光学异构体①检测谱图，横坐标为保留时间(单位：min)；纵坐标为响应值(单位：mV)；
图3为光学异构体②检测谱图，横坐标为保留时间(单位：min)；纵坐标为响应值(单位：mV)。
具体实施方式
详细说明：除非有相反陈述，下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。
“C1-8烷基”指包括1至8个碳原子的直链烷基和含支链烷基，烷基指饱和的脂族烃基团，C0-8是指不含碳原子或者C1-8烷基，优选包括1至6个碳原子的直链烷基，更优选包括1至4个碳原子的直链烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2，3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2，3-二甲基戊基、2，4-二甲基戊基、2，2-二甲基戊基、3，3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2，3-二甲基己基、2，4-二甲基 己基、2，5-二甲基己基、2，2-二甲基己基、3，3-二甲基己基、4，4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基或其各种支链异构体等。
“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，“C3-8环烷基”指包括3至8个碳原子的环烷基，“5-10元环烷基”指包括5至10个碳原子的环烷基，例如：单环环烷基的非限制性实施例包含环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等，优选环丙基、环丁基和环己基；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。
“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。“5-10元杂环基”指包含5至10个环原子的环基，“3-8元杂环基”指包含3至8个环原子的环基，优选5-6元杂环基。
单环杂环基的非限制性实施例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等，优选吗啡基。
多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。
“芳基”指全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，具有共轭的π电子体系的多环(即其带有相邻对碳原子的环)基团，“C5-10芳基”指含有5-10个碳的全碳芳基，“5-10元芳基”指含有5-10个碳的全碳芳基，例如苯基和萘基。
“杂芳基”指包含1至4个杂原子的杂芳族体系，所述杂原子包括氮、氧和S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，5-7元杂芳基指含有5-7个环原子的杂芳族体系，5-10元杂芳基指含有5-10个环原子的杂芳族体系，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。
“烯基”指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上述定义的烷基，C2-8链烯基指含有2-8个碳的直链或含支链烯基。例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-，2-或3-丁烯基等。
“炔基”指至少两个碳原子和至少一个碳-碳三键组成的如上所定义的烷基，C2-8链炔基指含有2-8个碳的直链或含支链炔基。例如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-，2-或3-丁炔基等。
“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定义如上所述。C1-8烷氧基指含1-8个碳的烷基氧基，非限制性实施例包含甲氧基、乙氧基、丙氧基和丁氧基等。
“卤取代的C1-8烷基”指烷基上的氢任选的被氟、氯、溴、碘原子取代的1-8个碳烷基基团，例如二氟甲基、二氯甲基、二溴甲基、三氟甲基、三氯甲基、三溴甲基等。
“卤取代的C1-8烷氧基”烷基上的氢任选的被氟、氯、溴、碘原子取代的1-8个碳烷氧基基团。例如二氟甲氧基、二氯甲氧基、二溴甲氧基、三氟甲氧基、三 氯甲氧基、三溴甲氧基等。
“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和键(如烯属)的碳原子结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
“立体异构”包含几何异构(顺反异构)、旋光异构、构象异构三类。
下面结合实施例对本发明做进一步详细、完整地说明，但决非限制本发明，本发明也并非仅局限于实施例的内容。
本发明的化合物结构是通过核磁共振(NMR)或/和液质联用色谱(LC-MS)来确定的。NMR化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代甲醇(CD3OD)和氘代氯仿(CDCl3)内标为四甲基硅烷(TMS)。
液质联用色谱LC-MS的测定用Agilent 1200Infinity Series质谱仪。HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150×4.6mm色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C18 150×4.6mm色谱柱)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，TLC采用的规格是0.15mm～0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。
在无特殊说明的情况下，本发明的所有反应均在连续的磁搅拌下，在干燥氮气或氩气氛下进行，溶剂为干燥溶剂。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
在无特殊说明的情况下，实施例中的溶液是指水溶液。反应的温度为室温。 室温为最适宜的反应温度，为20℃～30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)或液质联用色谱(LC-MS)反应所使用的展开剂体系有：二氯甲烷和甲醇体系，正己烷和乙酸乙酯体系，石油醚和乙酸乙酯体系，丙酮，溶剂的体积比可根据化合物的极性不同而进行调节。柱层析的洗脱剂的体系包括：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：正己烷和乙酸乙酯体系，C：二氯甲烷和乙酸乙酯体系，D：乙酸乙酯和甲醇，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的氨水和醋酸等进行调节。
中间体的合成
步骤一:4-氨基-N'-羟基-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒1b
将丙二氰(20g,303mmol)溶于350ml水中，45℃下加热5分钟，冰浴下加入亚硝酸钠(23g,333.3mmol)，当温度升到10℃时加入6N HCl(3.4ml)，温度升到16℃，保持温度在16-18℃下搅拌1.5小时，冷却到13℃，一次性加入50％羟胺水溶液(61.7g,909mmol)，温度急剧升高到27℃，在此温度下搅拌一个小时，然后再回流2小时，冷却至室温搅拌过夜，在冰浴下滴加6N HCl(49ml)，调节PH至7，继续冰浴下搅拌，析出固体，过滤，滤饼用水洗，干燥得到化合物4-氨基-N'-羟基-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒1b(40g，92％)。
MS m/z(ESI):143.9.
13C NMR(400MHz,CD3OD,ppm):δ154.5,144.4,139.7.
步骤二:4-氨基-N-羟基-1,2,5-噁二唑-3-碳杂亚胺酰基氯化1c
将化合物4-氨基-N'-羟基-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒(8.4g,59mmol)溶于100ml水和冰醋酸(60ml)中，加入6N HCl(29ml)，加热至完全溶解,然后加入NaCl(10.36g,59.5mmol)，再在冰浴下加入亚硝酸钠(3.99g,5.78mmol)的水溶液(14ml)，保持温度在0℃搅拌1.5小时，然后搅拌至室温，析出固体，过滤，滤饼用水洗，干燥得到化合物4-氨基-N-羟基-1,2,5-噁二唑-3-碳杂亚胺酰基氯化1c(4g,42％).
MS m/z(ESI):162.9.
13CNMR(400MHz,CD3OD,ppm):δ154.3,141.9,127.0.
步骤三:4-氨基-N'-羟基-N-(2-甲氧基乙基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒1d
将化合物4-氨基-N-羟基-1,2,5-噁二唑-3-碳杂亚胺酰基氯化(4.0g,24.7mmol)溶于乙酸乙酯(40ml)中，冰浴下加入2-甲氧基乙烷-1-胺(2.29ml,25.9mmol)搅拌5分钟，再加入三乙胺(5.16ml,37.05mmol)搅拌二小时至反应完全,水洗，饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥有机相，减压真空浓缩得到化合物4-氨基-N'-羟基-N-(2-甲氧基乙基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒1d(4.5g,92％)。
MS m/z(ESI):202.1.
1H NMR(400MHz,DMSO,ppm):δ10.67(s,1H),6.28(s,2H),6.14(s,1H),3.56(m,2H),3.44(m,2H),3.28(s,3H).
步骤四:N'-羟基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒1e
将化合物4-氨基-N'-羟基-N-(2-甲氧基乙基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒(4.5g,22.3mmol)溶于水(40ml)中，加入氢氧化钾(4.15g,74.1mmol)回流48小时至反应完全，用乙酸乙酯萃取,水洗有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥有机相，减压真空浓缩得到化合物N'-羟基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒1e(2.8g，62％).
MS m/z(ESI):202.1.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ10.53(s,1H),6.22(s,2H),6.15(s,1H),3.56(m,2H),3.50(m,2H),3.37(s,3H).
步骤五:N-羟基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂亚胺酰基氯化1f
将化合物N'-羟基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒(2.8g,13.93mmol)溶于6N HCl(14ml)待溶液澄清后加入氯化钠水(2.2g,41.79mmol)，然后再加水(14ml)和乙酸乙酯(14ml)，冰浴下滴加亚硝酸钠(1.0g, 13.3mmol)冰浴下搅拌2小时，然后室温搅拌过夜至反应完全，用乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥有机相,减压真空浓缩得固体用乙酸乙酯：石油醚(3/20)洗得到化合物N-羟基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂亚胺酰基氯化1f(2.2g，72％).
MS m/z(ESI):221.1.
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ13.47(s,1H),6.22(s,2H),5.99(s,1H),3.43(m,2H),3.53(m,2H),3.28(s,3H).
步骤六:N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂 氧杂脒1g
将化合物N-羟基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂亚胺酰基氯化(2.2g,10mmol)加入水(14ml)加热至60℃，加入3-溴-4-氟苯胺(2.06g,11mmol)，搅拌10分钟，然后再加碳酸氢钠(1.26g,15mmol)60℃下搅拌30分钟，至反应完全，用乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥有机相,减压真空浓缩得化合物1g(3.9g,105％).
MS m/z(ESI):374.0.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ11.54(s,1H),8.86(s,2H),7.10(m,1H),6.81(m,1H),6.15(m,1H)3.53(m,2H),3.39(m,2H),3.29(m,3H).
步骤七:4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-甲氧基乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁 二唑-5(4H)-酮1h
将化合物N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((2-甲氧基乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒(3.9g,10.4mmol)加入乙酸乙酯(50ml)，加热至60℃，加入1,1'-羰基二咪唑(2.53g,15.6mmol)，搅拌30分钟，1N HCl洗有机相，饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥有机相,减压真空浓缩得化合物1h(4.0g,96％).
步骤八:4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-羟基乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二 唑-5(4H)-酮1i
将化合物8(4g,10mmol)加入二氯甲烷(25ml)在-78℃滴加三溴化硼的二氯甲烷溶液(25ml,25mmol)，搅拌至室温，LC-MS监测原料原料转化完全，停止反应，冰浴下用饱和碳酸氢钠溶液调pH至中性，有机相用水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥有机相,减压真空浓缩得化合物1i(2.0g,96％)。
MS m/z(ESI):385.9.
步骤九:2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二 唑-3-基)氨基)乙基甲磺酸酯1j
将化合物4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-羟基乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(2g,5.2mmol)加入乙酸乙酯(15ml)室温下加入甲磺酰氯(593mg,5.2mmol)，再加三乙胺(526mg,5.2mmol)，LC-MS监测原料原料转化完全，停止反应，有机相用水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥有机相,减压真空浓缩得化合物1j(2.0g,82％)。
MS m/z(ESI):463.9.
步骤十:3-(4-((2-叠氮乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二 唑-5(4H)-酮1k
将化合物2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基甲磺酸酯(9.8g,21.1mmol)加入DMF(45ml)室温下加入叠氮化钠(1.7g,26.4mmol)，50℃搅拌4小时，LC-MS监测原料原料转化完全，停止反应，加入水和乙酸乙酯，有机相用水洗，饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥有机相，减压真空浓缩得化合物1k(9.0g,100％)。
MS m/z(ESI):411.0.
步骤十一:3-(4-((2-氨基乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁 二唑-5(4H)-酮氢碘化1l
将化合物3-(4-((2-叠氮乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(9.0g,21.9mmol)加入甲醇(160ml)室温下加入碘化钠(14.3g,131.74mmol)，搅拌5分钟，再滴加三甲基氯硅烷(15.6ml,131.7mmol)的甲醇溶液(32ml)，室温下搅拌4小时，LC-MS监测原料原料转化完全，停止反应，冰浴下将反应液倾入硫代硫酸钠(23g)的水溶液(900ml)，析出固体，过滤，干燥得化合物1l(10.5g,91％)。
MS m/z(ESI):387.0.
实施例化合物的合成
实施例一
(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨 基)乙基)氧醛酰胺(1)
步骤一:N1-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁 二唑-3-基)氨基)乙基)氧醛酰胺1m.
在100mL单口瓶中将3-(4-((2-氨基乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮1l(300mg，0.78mmol),草酰氨(138mg，1.56mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(8mL)，加入O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸(375.6mg,1.17mmol),随后加入N，N-二异丙基乙胺(0.5mL,2.34mmol)，室温反应2小时，加入水(50mL)，固体析出，过滤，固体烘干，得N1-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氧醛酰胺1m(105mg)，收率32.0％。
MS m/z(ESI):456.0,458.0(M,M+2).
步骤二：(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑 -3-基)氨基)乙基)氧醛酰胺1.
在100mL单口瓶中将N1-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氧醛酰胺(105mg,0.23mmol)溶于四氢呋喃/甲醇(5mL/5mL)，将氢氧化钠(46mg,1.15mmol)溶于水(2mL)加入上述溶液中，室温下反应2小时。LC-MS监测原料转化完全，停止反应，加入饱和氯化铵溶液(30mL)，用乙酸乙酯(30mL x 2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，通过制备硅胶板分离纯化(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1；洗脱剂：乙酸乙酯/甲醇＝10/1)得(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氧醛酰胺1(36.6mg)，收率40.0％。
MS m/z(ESI):430.0,432.0(M,M+2).
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.43(s,1H),8.88(s,1H),8.83(s,1H),8.05(s,1H),7.79(s,1H),7.18(t,J＝8.8Hz,1H),7.12(dd,J1＝6.0Hz,J2＝2.8Hz,1H),6.75(m,1H),6.30(t,J＝6.0Hz,1H),3.36(m,4H).
实施例二
(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨 基)乙基)-N2-甲基氧醛酰胺(2)
步骤一:甲基2-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3- 基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸酯2b.
在100mL单口瓶中将3-(4-((2-氨基乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮1l(385mg,1.0mmol),草酸二甲酯(141.6mg,1.2mmol)溶于甲醇(15mL)，加入甲醇钠(130mg,2.4mmol),室温反应过夜，LC-MS监测原料转化完全，停止反应。加入饱和氯化铵溶液(30mL)，用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，得甲基2-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸酯2b(200mg)，收率50.0％。
MS m/z(ESI):471.0,473.0(M,M+2).
步骤二：(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑 -3-基)氨基)乙基)-N2-甲基氧醛酰胺2.
在100mL单口瓶中将甲基2-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸酯(200mg，0.42mmol)溶于甲醇(5mL)，将40％甲胺溶液(2mL)加入上述溶液中，室温下反应3小时，LC-MS监测原料转化完全，停止反应。加入水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL x 2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，通过制备硅胶板分离纯化(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1；洗脱剂：乙酸乙酯/甲醇＝10/1)得(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)-N2-甲基氧醛酰胺2(57.5mg)，收率29.6％。
MS m/z(ESI):444.0,446.0(M,M+2).
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.42(s,1H),8.88(s,1H),8.86(m,1H),8.68(m,1H),7.18(t,J＝8.8Hz,1H),7.10(dd,J1＝6.0Hz,J2＝2.8Hz,1H),6.74(m,1H),6.30(t,J＝6.0Hz,1H),3.38(m,4H),2.66(d,J＝4.0Hz,3H).
实施例三
(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨 基)乙基)-N2-乙基氧醛酰胺(3)
步骤一：N1-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5- 噁二唑-3-基)氨基)乙基)-N2-乙基氧醛酰胺3b.
在100mL单口瓶中将甲基2-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸酯(240mg，0.51mmol)溶于甲醇(15mL)，将1M的乙胺溶液(2mL)加入上述溶液中，室温下反应3小时。LC-MS监测原料转化完全，停止反应，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL x 2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，得N1-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)-N2-乙基氧醛酰胺3b(190mg)，收率78.5％。
MS m/z(ESI):471.0,473.0(M,M+2).
步骤二：(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑 -3-基)氨基)乙基)-N2-乙基氧醛酰胺3.
在100mL单口瓶中将N1-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)-N2-乙基氧醛酰胺(190mg,0.39mmol)溶于四氢呋喃/甲醇(8mL/8mL)，将氢氧化钠(62.7mg,1.57mmol)溶于水(4mL)加入上述溶液中，室温下反应2小时。LC-MS监测原料转化完全，停止反应。加入饱和氯化铵溶液(30mL)，用乙酸乙酯(30mL x 2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，通过制备硅胶板分离纯化(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1；洗脱剂：乙酸乙酯/甲醇＝10/1)得(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)-N2-乙基氧醛酰胺3(80.0mg)，收率43.1％。
MS m/z(ESI):458.0,460.0(M,M+2).
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.42(s,1H),8.88(s,1H),8.86(m,1H),8.75(t,J＝6.0Hz,1H),7.18(t,J＝8.8Hz,1H),7.10(dd,J1＝6.0Hz,J2＝2.4Hz,1H),6.74(m,1H),6.31(t,J＝6.0Hz,1H),3.38(m,4H),3.15(m,2H),1.04(m,3H).
实施例四
(Z)-N1-苯甲基-N2-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二 唑-3-基)氨基)乙基)氧醛酰胺(4)
步骤一：N1-苯甲基-N2-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3- 基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氧醛酰胺4b.
在100mL单口瓶中将甲基2-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸酯(200mg，0.42mmol)溶于甲醇(15mL)，将苄氨(1mL)加入上述溶液中，室温下反应3小时。LC-MS监测原料转化完全，停止反应，加入乙酸乙酯(50mL)，分别用1N的盐酸(30mL x 2)饱和氯化钠(30mL)洗涤，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，得N1-苯甲基-N2-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氧醛酰胺4b(190mg)，收率82.0％。
MS m/z(ESI):546.0,548.0(M,M+2).
步骤二：((Z)-N1-苯甲基-N2-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰 基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氧醛酰胺4
在100mL单口瓶中将N1-苯甲基-N2-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氧醛酰胺(190mg，0.35mmol)溶于四氢呋喃/甲醇(8mL/8mL)，将氢氧化钠(100mg,2.5mmol)溶于水(4mL)加入上述溶液中，室温下反应2小时。LC-MS监测原料转化完全，停止反应。加入饱和氯化铵溶液(30mL)，用乙酸乙酯(30mL x 2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，通过制备硅胶板分离纯化(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1；洗脱剂：乙酸乙酯/甲醇＝10/1)得(Z)-N1-苯甲基-N2-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氧醛酰胺4(60.9mg)，收率39.0％。
MS m/z(ESI):520.0,522.0(M,M+2).
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.42(s,1H),9.35(t,J＝6.0Hz,1H),,8.87(m,2H),7.30(m,2H),7.24(m,2H),6.74(m,1H),6.33(t,J＝6.0Hz,1H),4.33(d,J＝6.4Hz,2H),3.38(m,4H).
实施例五
(Z)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨 基)乙基)-2-吗啉代-2-羰基乙酰胺(5)
步骤一：N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁 二唑-3-基)氨基)乙基)-2-吗啉代-2-羰基乙酰胺5b.
在100mL单口瓶中将甲基2-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸酯(170mg，0.36mmol)溶于甲醇(15mL)，将吗啡啉(1mL)加入上述溶液中，室温下反应3小时。LC-MS监测原料转化完全，停止反应。加入乙酸乙酯(50mL)，分别用1N的盐酸(30mL x 2)饱和氯化钠(30mL)洗涤，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，得N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)-2-吗啉代-2-羰基乙酰胺5b(120mg)，收率63.4％。
MS m/z(ESI):526.0,528.0(M,M+2).
步骤二：(Z)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑 -3-基)氨基)乙基)-2-吗啉代-2-羰基乙酰胺5.
在100mL单口瓶中将N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)-2-吗啉代-2-羰基乙酰胺(120mg，0.23mmol)溶于四氢呋喃/甲醇(8mL/8mL)，将氢氧化钠(50mg,1.25mmol)溶于水(4mL)加入上述溶液中，室温下反应2小时。LC-MS监测原料转化完全，停止反应，加入饱和氯化铵溶液(30mL)，用乙酸乙酯(30mL x 2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，通过制备硅胶板分离纯化(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1；洗脱剂：乙酸乙酯/甲醇＝10/1)得(Z)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)-2-吗啉代-2-羰基乙酰胺5(30.7mg)，收率30.1％。
MS m/z(ESI):500.0,502.0(M,M+2).
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.45(s,1H),8.89(s,1H),8.83(m,1H),7.20(t,J＝8.8Hz,1H),7.11(dd,J1＝6.0Hz,J2＝2.8Hz,1H),6.77(m,1H),6.24(t,J＝6.0Hz,1H),3.58(m,4H),3.48(m,4H),3.36(m,4H).
实施例六
(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨 基)乙基)-N2-甲氧基氧醛酰胺(6)
步骤一:乙基2-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3- 基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸酯6b.
在100mL单口瓶中将3-(4-((2-氨基乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮氢碘化1l(2.5g,4.88mmol)，溶于四氢呋喃(30mL)，冰浴下加入乙基2-氯-2-羰基乙酸酯(730mg,5.37mmol),随后加入三乙胺(1.23g,12.2mmol)，反应2小时，加入水(50mL)，固体析出。乙酸乙酯萃取(50mL x 2),合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠过滤，通过快速色谱柱得到乙基2-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸酯6b(1.1g)，收率46.5％。
MS m/z(ESI):484.9(M,M+H)+.
步骤二：(Z)-2-((2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑 -3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸6c.
在100mL单口瓶中将乙基2-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸酯(700mg，1.44mmol)溶于乙醇(10mL)加入2N氢氧化钠(1ml,2.0mmol),90℃反应3小时。LC-MS监测原料转化完全，将反应液浓缩。用乙酸乙酯萃取，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，得(Z)-2-((2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸6c(600mg)，收率97.0％。
MS m/z(ESI):429.0(M-H)-.
步骤三：2-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁 二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸6d.
在50mL单口瓶中将(Z)-2-((2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸(600mg,1.39mmol)溶于乙酸乙酯(20mL)加入CDI(271mg,1.67mmol)，60℃反应1小时。LC-MS监测 原料转化完全。用1N盐酸洗,水洗,饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，得2-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸6d(370mg)，收率58.3％。
MS m/z(ESI):454.9(M-H)-.
步骤四：N1-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5- 噁二唑-3-基)氨基)乙基)-N2-甲氧基氧醛酰胺6e.
在50mL单口瓶中将2-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸(100mg，0.22mmol)溶于DMF(5mL)加入O-甲基羟胺盐酸(20mg,0.22mmol)，HATU(130mg,0.33mmol),DIPEA(70mg,0.55mmol)室温下反应过夜。LC-MS监测原料转化完全。用乙酸乙酯萃取，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，经快速色谱柱得N1-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)-N2-甲氧基氧醛酰胺6e(30mg)，收率28.1％。
MS m/z(ESI):484.0(M-H)-.
步骤五：(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑 -3-基)氨基)乙基)-N2-甲氧基氧醛酰胺6.
在50mL单口瓶中将N1-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)-N2-甲氧基氧醛酰胺(30mg，0.06mmol)溶于乙醇(5mL)加入2N氢氧化钠(0.3ml,0.6mmol)，室温下反应过夜。LC-MS监测原料转化完全。用乙酸乙酯萃取,水洗,饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，经快速薄层色谱得(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)-N2-甲氧基氧醛酰胺6(6.0mg)，收率21.7％。
MS m/z(ESI):457.9.0(M-H)-.
1H NMR(400MHz,CD3OD,ppm)δ7.0(m,1H),6.94(m,1H),6.74(m,1H),3.63(s,3H),3.42(4,2H),3.33(m,2H).
实施例七
(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨 基)乙基)-N2-环丙基氧醛酰胺(7)
步骤一:甲基2-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3- 基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸酯7b.
在100mL单口瓶中将3-(4-((2-氨基乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮1l(385mg,1.0mmol),草酸二甲酯(141.6mg，1.2mmol)溶于甲醇(15mL)，加入甲醇钠(130mg,2.4mmol),室温反应过夜。LC-MS监测原料转化完全，停止反应。加入饱和氯化铵溶液(30mL)，用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，得甲基2-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸酯7b(200mg)，收率50.0％。
MS m/z(ESI):471.0,473.0(M,M+2).
步骤二：(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑 -3-基)氨基)乙基)-N2-环丙基氧醛酰胺7.
在封口瓶中将甲基2-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸酯(100mg，0.21mmol)溶于乙醇(5mL)，将环丙胺(0.5mL)加入上述溶液中，90℃下反应过夜。LC-MS监测原料转化完全，停止反应。加入水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL x 2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，通过制备硅胶板分离纯化得(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)-N2-环丙基氧醛酰胺7(30mg)，收率30.3％。
MS m/z(ESI):470.0(M+H)+.
1H NMR(400MHz,CD3OD,ppm)δ8.87(s,1H),8.77(s,1H),7.18(m,1H),7.15(m,1H),6.72(m,1H),6.34(m,1H),2.75(m,1H),0.62(m,4H).
实施例八
(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨 基)乙基)-N2-羟基氧醛酰胺(8)
步骤一:乙基2-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3- 基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸酯8b.
在100mL单口瓶中将3-(4-((2-氨基乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮氢碘化1l(2.5g,4.88mmol)，溶于四氢呋喃(30mL)，冰浴下加入乙基2-氯-2-羰基乙酸酯(730mg,5.37mmol),随后加入三乙胺(1.23g,12.2mmol)，反应2小时，加入水(50mL)，固体析出。乙酸乙酯萃取(50mL x 2)合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠过滤，快速色谱柱得到化合物，得乙基2-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸酯8b(1.1g)，收率46.5％。
MS m/z(ESI):484.9(M,M+H)+.
步骤二：N1-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5- 噁二唑-3-基)氨基)乙基)-N2-羟基氧醛酰胺8c
在单口瓶中将乙基2-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)-2-羰基乙酸酯(70mg，0.14mmol)溶于甲醇(5mL)，冰浴下将50％羟胺的水溶液(0.1mL)加入上述溶液中，滴加饱和的氢氧化钠的甲醇溶液(0.2ml)，在0℃下反应30分钟。LC-MS监测原料转化完全，停止反应，浓缩，用2N盐酸调PH至中性，加水，用乙酸乙酯(30mL x 2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，得N1-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)-N2-羟基氧醛酰胺8c(60mg)。
MS m/z(ESI):472.0(M+H)+.
步骤三：(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑 -3-基)氨基)乙基)-N2-羟基氧醛酰胺8.
在50mL单口瓶中将N1-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)-N2-羟基氧醛酰胺(60mg,0.13mmol) 溶于乙醇(5mL)加入2N氢氧化钠(0.2ml,0.4mmol)，室温下反应过夜。LC-MS监测原料转化完全。用乙酸乙酯萃取，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，经快薄层色谱得(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)-N2-羟基氧醛酰胺8(24.0mg)，收率41.5％。
MS m/z(ESI):444.0(M-H)-.
1H NMR(400MHz,MeCD3OD,ppm)δ7.04(m,1H),6.94(m,1H),6.71(m,1H),3.43(m,2H),3.36(m,2H).
实施例九
(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨 基)丙基)氧醛酰胺(9)
步骤一:N1-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁 二唑-3-基)氨基)丙基)氧醛酰胺9b.
在25mL单口瓶中将3-(4-((1-氨基丙烷-2-基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮氢碘化1l(2.5g,4.88mmol)，溶于DMF(3mL)，加入2-氨基-2-羰基乙酸(18.6mg,0.21mmol),随后加入HATU(108mg,0.29mmol)，DIPEA(49mg,0.38mmol)，室温下反应过夜，加入水(50mL)，固体析出，乙酸乙酯萃取(15mL x 2)合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠过滤，浓缩得N1-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)丙基)氧醛酰胺9b(36mg)，收率40.0％。
MS m/z(ESI):470.0(M+H)+.
步骤二：(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑 -3-基)氨基)丙基)氧醛酰胺9
在50mL单口瓶中将N1-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)丙基)氧醛酰胺(36mg，0.07mmol)溶于乙醇(5mL)加入2N氢氧化钠(0.2mL,0.4mmol)，室温下反应过夜。LC-MS监测原料转化完全。用乙酸乙酯萃取,水洗,饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，经快薄层色谱得(Z)-N1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)丙基)氧醛酰胺9(13.0mg)，收率41.8％。
MS m/z(ESI):444.0(M+H)+.
1H NMR(400MHz,CD3OD,ppm)δ7.02(m,1H),6.94(m,1H),6.71(m,1H),3.70(m,1H),3.36(m,2H),1.15(m,3H).
实施例十
(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((4-(氨磺酰氨基)环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3- 碳杂氧杂脒(10)
步骤一:4-氨基-N'-羟基-N-(4-羟基环己基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒10b
将化合物4-氨基-N-羟基-1,2,5-噁二唑-3-碳杂亚胺酰基氯(9g，55mmol)溶于乙酸乙酯(100ml)，在0℃下，缓慢加入4-氨基环己烷-1-醇(7.0g,61mmol)。反应液在0℃下搅拌30分钟，缓慢加入三乙胺(11.5ml,82.5mmol)，反应液再在0℃下搅拌30分钟。反应液加入到水中，有机相分离，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后真空浓缩蒸干，得到粗产品。粗产品用二氯甲烷(30ml) 重结晶，得到化合物4-氨基-N'-羟基-N-(4-羟基环己基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒10b(12g)，收率89％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ10.7(s,1H),6.25-6.35(br,2H),5.67(d,1H),4.50(d,1H),3.65-3.75(m,1H)3.28-3.38(m,1H),1.69-1.83(m,4H),1.25-1.40(m,2H),1.05-1.20(m,2H).
步骤二:N'-羟基-4-((4-羟基环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒10c
将化合物4-氨基-N'-羟基-N-(4-羟基环己基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒10b(12g,49.8mmol)悬浮于水(60ml)中，缓慢加入KOH(8.3g,0.15mol)。反应液加热回流48小时，然后冷却到室温。乙酸乙酯(50ml x 3)萃取，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后真空浓缩蒸干，得到N'-羟基-4-((4-羟基环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒10c(3.6g)，收率30％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ10.5(s,1H),6.19-6.25(br,2H),5.96(d,1H),4.58(d,1H),3.40-3.48(m,1H)3.20-3.30(m,1H),1.98-2.08(m,2H),1.78-1.88(m,2H),1.22-1.32(m,4H).
步骤三:N-羟基-4-((4-羟基环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂亚胺酰基氯10d
将化合物N'-羟基-4-((4-羟基环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒10c(3.6g,14.9mmol)悬浮于6NHCl(30ml)中，不断搅拌得到澄清溶液，在0℃下，加入氯化钠(2.62g，44.8mmol)。在0℃下，缓慢加入亚硝酸钠(1.03g,14.9mmol)水溶液(5ml)到反应液中，反应液在0℃下搅拌2小时。将反应液过滤，收集固体，干燥后得到N-羟基-4-((4-羟基环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂亚胺酰基氯1d(3.1g)，收率79％。
MS m/z(ESI):259(M-H).
步骤四:N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((4-羟基环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂 氧杂脒10e
将化合物N-羟基-4-((4-羟基环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂亚胺酰基氯10d(2.4g,9.2mmol)和3-溴-4-氟苯胺(1.75g,9.2mmol)悬浮于水(35ml)中，然后加热到60℃，保持5分钟。在60℃下，一次性加碳酸氢钠(1.16g,13.8mmol)到反应液中。反应液在60℃搅拌20分钟，冷却到室温。乙酸乙酯(50ml x 3)萃取，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后真空浓缩蒸干，得到N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((4-羟基环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒10e(3.8g)。
MS m/z(ESI):413(M+H).
步骤五:4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((4-羟基环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁 二唑-5(4H)-酮10f
将化合物N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((4-羟基环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒10e(3.8g,粗品)溶于乙酸乙酯(40ml)中，在0℃下，缓慢加入N,N-羰基二咪唑(1.47g,9.2mmol)，反应液在0℃搅拌2小时，缓慢升至室温，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后真空浓缩蒸干，得到粗品。粗产品用二氯甲烷(30ml)重结晶，得到4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((4-羟基环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮10f(3.76g)，收率92％。
MS m/z(ESI):438(M-H).
步骤六:4-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二 唑-3-基)氨基)环己基甲磺酸酯10g
将化合物4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((4-羟基环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮10f(1.36g,3.1mmol)溶于乙酸乙酯(20ml)中，在0℃下，加入甲磺酰氯(0.36ml,4.63mmol)。反应液在0℃下搅拌5分钟，然后三乙胺(1.3ml,9.3mmol)缓慢加入。反应液在0℃下搅拌60分钟，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后真空浓缩蒸干，得到粗品。粗品柱分离(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得到4-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)环己基甲磺酸酯10g(1.3g)，收率85％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):8.01-8.07(m,1H),7.55-7.70(m,2H),6.25(d,1H),4.55-4.65(m,1H),3.33-3.43(m,1H)3.20(s,3H),1.92-2.08(m,4H),1.43-1.68(m,4H).
步骤七:3-(4-((4-叠氮环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁 二唑-5(4H)-酮10h
将化合物4-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)环己基甲磺酸酯10g(0.9g,1.74mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(10ml)，然后加入叠氮化钠(340mg,5.21mmol)。反应液加热到90℃搅拌60分钟，TLC显示反应完全，真空浓缩蒸干得到粗品3-(4-((4-叠氮环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮10h(800mg)。
步骤八:3-(4-((4-氨基环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁 二唑-5(4H)-酮10i
将化合物3-(4-((4-叠氮环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮10h(350mg)溶于冰乙酸(10ml)中，然后加入锌粉(490g,7.5mmol)，室温搅拌2小时。反应液真空浓缩蒸干，然后加入乙酸乙酯(25ml)，饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，饱和食盐水洗涤，滤去固体，有机相用无水硫 酸钠干燥后真空浓缩蒸干，得到粗品。粗品柱分离(石二氯甲烷：甲醇＝30:1)得到3-(4-((4-氨基环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮10i(250mg)，收率76％。
MS m/z(ESI):439(M+H).
步骤九:叔-丁基(N-(4-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3- 基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)环己基)氨磺酰)氨基甲酸酯10j
将化合物氯磺酰异氰酸酯(126mg,0.89mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，在0℃下，加入叔丁醇(65mg,0.89mmol)，搅拌20分钟得到中间体溶液A。将化合物3-(4-((4-氨基环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮10i(260mg,0.59mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，在0℃下，加入中间体溶液A，搅拌5分钟，然后加入三乙胺(0.25ml,1.78mmol)，0℃下搅拌30分钟。然后加入乙酸乙酯(50ml)，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后真空浓缩蒸干，得到粗品。粗品柱分离(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得到化合物叔-丁基(N-(4-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)环己基)氨磺酰)氨基甲酸酯10j(140mg)，收率38％。
MS m/z(ESI):616(M-H).
步骤十:3-(4-((4-(氨磺酰氨基)环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯 基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮10k
将化合物叔-丁基(N-(4-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)环己基)氨磺酰)氨基甲酸酯10j(120mg)溶于二氯甲烷(3ml)，在0℃下，缓慢加入三氟乙酸(3ml)。反应液在0℃下搅拌30分钟，然后真空浓缩蒸干，得到粗品3-(4-((4-(氨磺酰氨基)环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮10k(120mg，棕色粘稠物)。
步骤十一:(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((4-(氨磺酰氨基)环己基)氨基)-1,2,5- 噁二唑-3-碳杂氧杂脒10
将化合物3-(4-((4-(氨磺酰氨基)环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮10k(100mg，粗品)溶于甲醇(2ml)，氢氧化钠(15mg，0.375mmol，2M水溶液)加入到反应液中，然后室温搅拌30分钟。反应液用1N盐酸调节PH至7。反应液用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到粗产品。粗产品用二氯甲烷重结晶，得到化合物(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((4-(氨磺酰氨基)环己基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒10(50mg，白色固体)，收率53％。
MS m/z(ESI):490(M-H).
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):11.6(s,1H),8.91(s,1H),7.18-7.22(m,1H),7.10-7.15(m,1H),6.79-6.85(m,1H)，6.51(s,2H),6.43(d,1H),6.06(d,1H),3.43-3.50(m,1H),3.23-3.33(m,1H),1.62-1.85(m,8H).
实施例十一
(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((3-(氨磺酰氨基)环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3- 碳杂氧杂脒(11)
步骤一:3-氨基环丁烷-1-醇三氟乙酸盐11b
将叔-丁基(3-羟基环丁基)氨基甲酸酯11a(9g,48mmol)溶于二氯甲烷 (20ml)，在0℃下，缓慢加入三氟乙酸(20ml)。反应液在室温下搅拌3小时，真空浓缩蒸干，得到3-氨基环丁烷-1-醇三氟乙酸盐11b(9g)，收率100％。
1H NMR(400MHz,MeOD,ppm):5.43-5.49(m,1H),4.43-4.49(m,0.7H),3.99-4.06(m,1H),3.84-3.91(m,0.7H),2.67-2.78(m,4.3H),2.33-2.47(m,3.4H).
步骤二:4-氨基-N'-羟基-N-(3-羟基环丁基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒11d
将化合物3-氨基环丁烷-1-醇三氟乙酸盐11b(9g,48mmol)溶于乙酸乙酯(25ml)，缓慢加入碳酸钾(13.5g,97mmol)，室温搅拌10分钟，除去固体，得到游离1b溶液。将化合物4-氨基-N-羟基-1,2,5-噁二唑-3-碳杂亚胺酰基氯(6.6g,40mmol)溶于乙酸乙酯(25ml)中，在0℃下，缓慢加入游离3-氨基环丁烷-1-醇三氟乙酸盐1b溶液。反应液在0℃下搅拌30分钟，缓慢加入三乙胺(16.7ml,120mmol)，在0℃下搅拌30分钟。反应液加入到水中，有机相分离，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后真空浓缩蒸干，得到粗产品。粗品经柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得到4-氨基-N'-羟基-N-(3-羟基环丁基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒11d(4.2g)，收率49％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ10.7(s,1H),6.25-6.30(m,3H),4.92(d,1H),4.43-4.53(m,1H)4.18-4.27(m,1H),2.15-2.24(m,2H),2.03-2.09(m,2H).
步骤三:N'-羟基-4-((3-羟基环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒11e
将化合物4-氨基-N'-羟基-N-(3-羟基环丁基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒11d(4.2g,19.7mmol)悬浮于水(20ml)中，缓慢加入KOH(3.3g,59.1mmol)。反应液加热到回流48小时，然后冷却到室温。乙酸乙酯(50ml x 3)萃取，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后真空浓缩蒸干，得到N'-羟基-4-((3-羟基环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒11e(2.2g)，收率52％。
MS m/z(ESI):212(M-H).
步骤四:N-羟基-4-((3-羟基环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂亚胺酰基氯11f
将化合物N'-羟基-4-((3-羟基环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒11e(1.8g,8.4mmol)悬浮于6N HCl(30ml)中，不断搅拌得到澄清溶液，在0℃下，加入氯化钠(1.46g,25.2mmol)。在0℃下，缓慢加入亚硝酸钠(0.58g,8.4mmol)水溶液(2ml)到反应液中，反应液在0℃下搅拌2小时。乙酸乙酯(50ml x 3)萃取，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后真空浓缩蒸干，得到N-羟基-4-((3-羟基环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂亚胺酰基氯11f(1.95g)，收率100％。
MS m/z(ESI):231(M-H).
步骤五:N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((3-羟基环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂 氧杂脒11g
将化合物N-羟基-4-((3-羟基环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂亚胺酰基氯11f(1.95g,8.4mmol)和3-溴-4-氟苯胺(1.59g,8.4mmol)悬浮于水(25ml)中，然后加热到60℃后，保持5分钟。在60℃下，一次性加碳酸氢钠(1.06g,12.6mmol)到反应液中。反应液在60℃搅拌20分钟，冷却到室温。乙酸乙酯(50ml x 3)萃取，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后真空浓缩蒸干，得到N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((3-羟基环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒11g(3.24g，粗品)。
步骤六:4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((3-羟基环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁 二唑-5(4H)-酮11h
将化合物N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((3-羟基环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒11g(3.24g,粗品)溶于乙酸乙酯(20ml)中，在0℃下，缓慢加入N,N-羰基二咪唑(1.36g,8.4mmol)，在0℃搅拌2小时，缓慢升到室温，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后真空浓缩蒸干，得到粗品。粗品经柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得到4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((3-羟基环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮11h(1.66g)，收率47％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ8.02-8.05(m,1H),7.65-7.69(m,1H),7.57-7.62(m,1H),6.60(d,1H),5.07(d,1H),4.20-4.28(m,1H)3.96-4.06(m,1H),2.21-2.25(m,2H),2.10-2.16(m,2H).
步骤七:3-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二 唑-3-基)氨基)环丁基甲磺酸酯11i
将化合物4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((3-羟基环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮1h(0.5g,1.2mmol)溶于乙酸乙酯(10ml)中，在0℃下，加入甲磺酰氯(0.14ml,1.8mmol)。反应液在0℃下搅拌5分钟，然后三乙胺(0.51ml,3.6mmol)缓慢加入。反应液在0℃下搅拌60分钟，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后真空浓缩蒸干，得到粗品。粗品柱分离(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得到3-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)环丁基甲磺酸酯11i(0.56g)，收率94％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ8.07-8.09(m,1H),7.69-7.73(m,1H),7.57-7.62(m,1H),6.86(d,1H),5.14-5.19(m,1H)4.14-4.19(m,1H),3.18(s,3H),2.57-2.61(m,4H).
步骤八:3-(4-((3-叠氮环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁 二唑-5(4H)-酮11j
将化合物3-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5- 噁二唑-3-基)氨基)环丁基甲磺酸酯11i(504mg,1.03mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(5ml)，然后加入叠氮化钠(198mg,3.09mmol)。反应液加热到在90℃下搅拌60分钟，TLC显示反应完全，然后真空浓缩蒸干得到粗品3-(4-((3-叠氮环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮11j(450mg)。
MS m/z(ESI):435(M-H).
步骤九:3-(4-((3-氨基环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁 二唑-5(4H)-酮11k
将化合物3-(4-((3-叠氮环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮11j(450mg)溶于冰乙酸(10ml)中，然后加入锌粉(670g,10.3mmol)，室温搅拌2小时。反应液真空浓缩蒸干，然后加入乙酸乙酯(25ml)，饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，饱和食盐水洗涤，滤去固体，有机相用无水硫酸钠干燥后真空浓缩蒸干，得到粗品。粗品柱分离(二氯甲烷：甲醇＝30:1)得到3-(4-((3-氨基环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮11k(350mg)，收率82％。
MS m/z(ESI):409(M-H).
步骤十:叔-丁基(N-(3-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3- 基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)环丁基)氨磺酰)氨基甲酸酯11l
将化合物氯磺酰异氰酸酯(102mg,0.72mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，在0℃下，加入叔丁醇(54mg,0.72mmol)，搅拌20分钟得到中间体溶液A。将化合物3-(4-((3-氨基环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮11k(200mg,0.48mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，在0℃下，加入中间体溶液A，搅拌5分钟，然后加入三乙胺(0.20ml,1.44mmol)，0℃下搅拌30分钟。然后加入乙酸乙酯(50ml)，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥后真空浓缩蒸干，得到粗品。粗品柱分离(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得到化合物叔-丁基(N-(3-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)环丁基)氨磺酰)氨基甲酸酯11l(110mg)，收率26％。
MS m/z(ESI):588(M-H).
步骤十一:3-(4-((3-(氨磺酰氨基)环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯 基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮11m
将化合物叔-丁基(N-(3-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)环丁基)氨磺酰)氨基甲酸酯11l(110mg)溶于二氯甲烷(3ml)，在0℃下，缓慢加入三氟乙酸(3ml)。反应液在0℃下搅拌30分 钟，然后真空浓缩蒸干，得到粗品3-(4-((3-(氨磺酰氨基)环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮11m(90mg)。
MS m/z(ESI):488(M-H).
步骤十二:(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((3-(氨磺酰氨基)环丁基)氨基)-1,2,5- 噁二唑-3-碳杂氧杂脒11
将化合物3-(4-((3-(氨磺酰氨基)环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮11m(90mg，粗品)溶于甲醇(2ml)，氢氧化钠(15mg,0.375mmol,2M水溶液)加入到反应液中，然后室温搅拌30分钟，用1N HCl调节PH至7。反应液用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到粗产品。粗产品用二氯甲烷(1ml)重结晶，得到(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((3-(氨磺酰氨基)环丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒11(11mg)，收率13％。
MS m/z(ESI):462(M-H).
1H NMR(400MHz,MeOD,ppm):δ7.01-7.03(m,1H),6.93-6.97(m,1H),6.72-6.76(m,1H),3.62-3.70(m,1H)3.48-3.57(m,1H),2.71-2.79(m,2H),1.83-1.93(m,2H).
实施例十二
叔-丁基(Z)-(N-(4-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑 -3-基)氨基)环己基)氨磺酰)氨基甲酸酯(12)
将化合物叔-丁基(N-(4-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)环己基)氨磺酰)氨基甲酸酯12a(17mg,0.027mmol)溶于甲醇(0.3ml)，氢氧化钠(2.2mg，0.054mmol,2M水溶液)加入到反应液中，然后室温搅拌30分钟。真空浓缩得到粗产品。粗产品用水洗涤得到叔-丁基(Z)-(N-(4-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基氨基甲亚胺酰基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)环己基)氨磺酰)氨基甲酸酯12(11mg)，收率69％。
MS m/z(ESI):590(M-H).
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):11.6(s,1H),8.91(s,1H),7.18-7.22(m,1H),7.10-7.15(m,1H),6.79-6.85(m,1H),6.02-6.12(m,1H),3.43-3.50(m,1H),3.23-3.33(m,1H),1.62-1.85(m,8H),1.36(s,9H).
实施例十三
(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((2-(S-甲基-N-(4-甲基苯磺酰)磺亚胺酰氨基)乙 基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒(13)
步骤一:甲亚磺酰氯13b
将化合物1,2-二甲基二硫烷(3.4g,36mmol)溶于乙酸(4.34g,72mmol)中，在-20℃下，缓慢滴加磺酰氯(14.6g,108mmol)。反应液在-20℃下搅拌30分钟，然后缓慢升到室温搅拌2小时，在35℃下搅拌1小时。在真空下，浓缩除去挥发组分，得到甲亚磺酰氯13b(6g)，收率48％。
步骤二:N-对甲苯磺酰甲磺亚胺酰基氯13c
将化合物氯胺T(1.5g,6.7mmol)加入到甲苯(50ml)，加热到回流5小时，同时用分水器除去水，然后冷却到室温。甲亚磺酰氯1b(1g,10mmol)加入到反应液中，在80℃下加热2小时，然后冷却到室温，除去固体。将反应液真空浓缩得到N-甲苯磺酰甲磺亚胺酰基氯13c(1.5g)，收率79％。
1H NMR(400MHz,CDCl3,ppm):δ7.88(d,2H),7.33(d,2H),3.78(s,3H),2.45(s,3H).
步骤三:N-(((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5- 噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)(甲基)(羰基)-l6-硫烷亚基)-4-甲基苯磺酰胺13e
将化合物N-对甲苯磺酰甲磺亚胺酰基氯(175mg,0.65mmol)溶于四氢呋喃(10ml)中，在0℃下，缓慢加入3-(4-((2-氨基乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(402mg,1.05mmol)。反应液在0℃ 下搅拌30分钟后，加入水中，乙酸乙酯(15ml x 3)萃取分离。有机相用无水硫酸钠干燥后真空浓缩蒸干，得到粗产品。粗产品用制备薄层板分离(二氯甲烷：甲醇＝15:1)得到N-(((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)(甲基)(羰基)-l6-硫烷亚基)-4-甲基苯磺酰胺13e(140mg)，收率37％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ8.08(m,1H),7.98-8.02(br,1H),7.69(d,2H),7.60(m,1H)7.32(d,2H),7.26(br,1H),6.6(m,1H),3.37-3.44(m,2H),3.22-3.28(m,5H),2.36(s,3H).
步骤四:(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((2-(S-甲基-N-(4-甲基苯磺酰)磺亚胺酰 氨基)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒13.
将化合物N-(((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)氨基)(甲基)(羰基)-l6-硫烷亚基)-4-甲基苯磺酰胺13e(35mg，0.056mmol)溶于甲醇(1ml)，氢氧化钠(5mg,0.114mmol,2M水溶液)加入到反应液中，然后室温搅拌1小时。反应液用1N盐酸调节PH至8。反应液用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到粗产品。粗产品用二氯甲烷重结晶，得到化合物(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((2-(S-甲基-N-(4-甲基苯磺酰)磺亚胺酰氨基)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒13(28mg)，收率84％。
MS m/z(ESI):590.0.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ11.5(s,1H),8.92(s,1H),8.02(m,1H),7.69(d,2H),7.32(d,2H),7.14(m,1H),7.09(m 1H),6.74(m,1H),3.37-3.44(m,2H),3.22-3.28(m,5H),2.36(s,3H).
实施例十四
(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((2-(S-甲基-N-(甲磺酰)磺亚胺酰基)乙基)氨 基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒(14)
步骤一:4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-(甲硫基)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4- 噁二唑-5(4H)-酮14b.
在100mL单口瓶中将2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基甲磺酸酯1l(2.6g,5.60mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(25mL)，冰浴冷却至0℃，加入甲硫醇钠(43.1mg,6.16mmol),在冰浴下搅拌20分钟。LC-MS监测原料转化完全，停止反应，加入水(50mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液加硅胶，直接旋干柱层析，石油醚/乙酸乙酯(5/1到3/1)，得4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-(甲硫基)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮14b(1.0g)，收率42.8％.
MS m/z(ESI):416.0,418.0(M,M+2).
1H NMR(400MHz,CDCl3,ppm)δ7.62(dd,J1＝5.6Hz,J2＝2.4Hz,1H),7.33(m,2H),5.68(t,J＝5.2Hz,1H),3.60(dd,J1＝12.8Hz,J2＝6.4Hz,2H),2.80(t,J＝6.4Hz,2H),2.15(s,3H).
步骤二：4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-(甲基亚硫酰基)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3- 基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮14c.
在100mL单口瓶中将4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-(甲硫基)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(1.0g,2.41mmol)溶于二氯甲烷(30mL)，用干冰丙酮浴冷却至-40℃，将间氯过氧化苯甲酸(457mg,2.65mmol)溶于5mL二氯甲烷滴加入上述溶液中，滴加完后撤去干冰丙酮浴，大约20分钟后温度缓慢升至室温，室温下继续搅拌40分钟，LC-MS监测原料转化完全，停止反应，加入水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠(60mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-(甲 基亚硫酰基)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮14c(0.9g)，收率90％.
MS m/z(ESI):432.0,434.0(M,M+2).
步骤三：4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-(S-甲基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑 -3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮14d.
在100mL单口瓶中将4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-(甲基亚硫酰基<亚磺酰>)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(0.9g，2.08mmol)溶于氯仿(30mL)，加入叠氮化钠(275.0mg,4.16mmol),用冰浴冷却至0℃，加入浓硫酸(0.5mL)，撤去冰浴，油浴加热到42℃，搅拌反应过夜。LC-MS监测原料转化完全，停止反应，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-(S-甲基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮14d(0.7g)，收率75.3％.
MS m/z(ESI):447.0,449.0(M,M+2).
步骤四：N-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5- 噁二唑-3-基)氨基)乙基)(甲基)(羰基)-6-硫烷亚基)甲磺酰胺14e.
在100mL单口瓶中将4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-(S-甲基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(1.5g,3.36mmol)溶于二氯甲烷(30mL)，加入甲磺酰氯(1mL,10mmol)，在室温下搅拌15分钟,然后加入三乙胺(1.5mL,10mmol)搅拌反应过夜。LC-MS监测原料转化完全，停止反应，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液加硅胶，直接旋干柱层析，乙酸乙酯/甲醇(30/1到20/1得到N-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)(甲基)(羰基)-6-硫烷亚基)甲磺酰胺14e(0.65g)，收率36.8％.
MS m/z(ESI):525.0,527.0(M,M+2).
步骤五：(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((2-(S-甲基-N-(甲磺酰)磺亚胺酰基)乙 基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒14.
在100mL单口瓶中将N-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)(甲基)(羰基)-6-硫烷亚基)甲磺酰胺(0.65g,1.24mmol)溶于四氢呋喃/甲醇(8mL/8mL)，将氢氧化钠(250mg,6.20mmol)溶于水(4mL)加入上述溶液中，室温下反应2小时。LC-MS监测原料转化完全，停止反应，加入饱和氯化铵溶液(30mL)，用乙酸乙酯(30mL x 2)萃 取，合并有机相用饱和氯化钠(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液加硅胶，直接旋干柱层析，乙酸乙酯/甲醇(30/1到10/1)，得(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((2-(S-甲基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒14(345mg)，收率55.0％.
MS m/z(ESI):499.0,501.0(M,M+2).
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.45(s,1H),8.92(s,1H),7.18(t,J＝8.8Hz,1H),7.12(dd,J1＝6.0Hz,J2＝2.8Hz,1H),6.77(m,1H),6.57(t,J＝6.0Hz,1H),3.92(m,1H),3.80(m,3H),3.48(s,3H),3.01(s,3H).
实施例十五
(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-4-((2-(N-(环丙基磺酰)-S-甲基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-N'- 羟基-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒(15)
步骤一：N-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5- 噁二唑-3-基)氨基)乙基)(甲基)(羰基)-l6-硫烷亚基)环丙磺酰胺15b.
在100mL单口瓶中将4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-(S-甲基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(1.5g,3.36mmol)溶于吡啶(30mL)，加入环丙基磺酰氯(1.42g,10mmol),DMAP(41mg,3.36mmol),在室温下搅拌反应过夜，停止反应，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液加硅胶，直接旋干柱层析，乙酸乙酯/甲醇(30/1到20/1得到N-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)(甲基)(羰基)-l6-硫烷亚基)环丙磺酰胺15b(0.65g)，收率32.7％.
MS m/z(ESI):551.0,553.0(M,M+2).
步骤二：(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-4-((2-(N-(环丙基磺酰)-S-甲基磺亚胺酰基)乙基) 氨基)-N'-羟基-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒15.
在100mL单口瓶中将N-((2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)(甲基)(羰基)-l6-硫烷亚基)环丙磺酰胺(0.65g,1.18mmol)溶于四氢呋喃/甲醇(10mL/10mL)，将氢氧化钠(236mg, 5.95mmol)溶于水(5mL)加入上述溶液中，室温下反应2小时。LC-MS监测原料转化完全，停止反应，加入饱和氯化铵溶液(50mL)，用乙酸乙酯(50mL x2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液加硅胶，直接旋干柱层析，乙酸乙酯/甲醇(30/1到10/1)，得(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-4-((2-(N-(环丙基磺酰)-S-甲基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-N'-羟基-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒15(350mg)，收率54.0％.
MS m/z(ESI):525.0,527.0(M,M+2).
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.43(s,1H),8.90(s,1H),7.18(t,J＝8.8Hz,1H),7.12(dd,J1＝6.0Hz,J2＝2.8Hz,1H),6.77(m,1H),6.55(t,J＝6.0Hz,1H),3.93(m,1H),3.80(m,3H),3.47(s,3H),2.64(m,1H),0.95(m,4H).
实施例十六
(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-4-((2-(N,S-二甲基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-N'-羟基-1,2,5- 噁二唑-3-碳杂氧杂脒(16)
步骤一:4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-(N,S-二甲基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-1,2,5-噁 二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮16b
100mL单口瓶中加入4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-(S-甲基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(40mg,0.09mmol)，三甲基氧鎓四氟硼酸(20mg,0.13mmol)，二氯甲烷(8mL),室温下搅拌15分钟，加入碳酸钠(57.3mg,0.54mmol),室温反应过夜。停止反应，加入水(20mL)，用乙酸乙酯(20mL x 2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，通过制备硅胶板分离纯化(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1；洗脱剂：乙酸乙酯/甲醇＝10/1)得4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-(N,S-二甲基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮16b(20mg，50％)。
MS m/z(ESI):461.0,463.0(M,M+2).
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ8.11(dd,J1＝6.4Hz,J2＝2.8Hz,1H),7.74(m,1H),7.60(t,J＝8.8Hz,1H),7.05(t,J＝6.0Hz,1H),3.66(dd,J1＝12.4Hz,J2＝6.4Hz,2H),3.37(t,J2＝6.4Hz,2H),2.99(s,3H),2.65(s,3H).
步骤二:(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-4-((2-(N,S-二甲基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-N'-羟 基-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒16
在100mL单口瓶中将4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-(N,S-二甲基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(20mg，0.43mmol)溶于四氢呋喃/甲醇(6mL/6mL)，将氢氧化钠(9mg,0.22mmol)溶于水(2mL)加入上述溶液中，室温下反应2小时。LC-MS监测原料转化完全，停止反应，加入饱和氯化铵溶液(10mL)，用乙酸乙酯(15mL x 2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，通过制备硅胶板分离纯化(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1；洗脱剂：乙酸乙酯/甲醇＝10/1)得(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-4-((2-(N,S-二甲基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-N'-羟基-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒16(13.0mg，68％)。
MS m/z(ESI):435.0,437.0(M,M+2).
1H NMR(400MHz,CDCl3,ppm)δ7.18(dd,J1＝6.0Hz,J2＝3.6Hz,1H),7.18(dd,J1＝5.6Hz,J2＝2.8Hz,1H),7.02(t,J＝8.4Hz,1H),6.90(m,1H),6.76(t,J＝6.0Hz,1H),3.90(m,2H),3.58(m,2H),3.09(s,3H),2.83(s,3H).
实施例十七
(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-((2-(N-甲基乙基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-1,2,5- 噁二唑-3-碳杂氧杂脒(17)
步骤一:4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-(N-甲基乙基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-1,2,5-噁 二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮17b
100mL单口瓶中加入4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-(S-乙基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(300mg,0.65mmol)，三甲基氧鎓四氟硼酸(115mg,0.78mmol)，二氯甲烷(30mL),室温下搅拌15分钟，加入碳酸钠(414mg,3.9mmol)，室温反应过夜。停止反应，加入水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，通过制备硅胶板分离纯化(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝15/1；洗脱剂：乙酸乙酯/甲醇＝15/1)得4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-(N-甲基乙基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮17b(130mg，42.1％)。
MS m/z(ESI):475.0,477.0(M,M+2).
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ8.12(dd,J1＝6.0Hz,J2＝2.8Hz,1H),7.74(m,1H),7.60(t,J＝8.8Hz,1H),7.00(t,J＝6.0Hz,1H),3.63(dd,J1＝12.8Hz, J2＝6.4Hz,2H),3.40(m,1H),3.30(m,1H),3.16(m,2H),2.64(s,3H),1.22(t,J＝7.2Hz,3H).
步骤二:(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-4-((2-(N,S-二甲基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-N'-羟 基-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒17
在100mL单口瓶中将4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-((2-(N-甲基乙基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(130mg，0.27mmol)溶于四氢呋喃/甲醇(8mL/8mL)，将氢氧化钠(55mg,1.36mmol)溶于水(5mL)加入上述溶液中，室温下反应2小时。LC-MS监测原料转化完全，停止反应，加入饱和氯化铵溶液(30mL)，用乙酸乙酯(30mL x 2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，通过制备硅胶板分离纯化(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1；洗脱剂：乙酸乙酯/甲醇＝10/1)得(Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-4-((2-(N,S-二甲基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-N'-羟基-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒17(76.6mg，63.2％)。
MS m/z(ESI):448.0,450.0(M,M+2).
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.45(s,1H),8.89(s,1H),7.18(t,J＝8.8Hz,1H),7.10(dd,J1＝6.0Hz,J2＝2.8Hz,1H),6.76(m,1H),6.56(t,J＝6.0Hz,1H),3.58(dd,J1＝12.8Hz,J2＝6.4Hz,2H),3.31(m,2H),2.63(s,3H),1.22(t,J＝7.2Hz,3H).
实施例十八
(R,Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-4-((2-(N-(环丙基磺酰)-S-甲基磺亚胺酰基)乙基)氨 基)-N'-羟基-1,2,5-噁二唑-3-碳杂氧杂脒(18-(R,Z))和(S,Z)-N-(3-溴-4-氟苯 基)-4-((2-(N-(环丙基磺酰)-S-甲基磺亚胺酰基)乙基)氨基)-N'-羟基-1,2,5-噁二唑 -3-碳杂氧杂脒(18-(S,Z))
制备方法如下：
本发明采用制备设备(日本YMC公司K-Prep LAB100S型超临界流体色谱制备仪)和大赛璐手性柱(AD-H 4.6*250，填料粒径5um)对实施例15化合物2.3457g(检测谱图见附图1)进行手性异构体分离，分别收集8.56min和9.69min 的样品溶液，旋转蒸发除去溶剂，得到8.56min的光学异构体①0.9744g(ee％值：99.322％，检测谱图见附图2)和9.69min的光学异构体②0.9552g(ee％值：98.676％，检测谱图见附图3)。
制备洗脱剂：(A:乙醇，B:0.1％DEA正己烷，A:B＝30:70，体积比)；检测波长:214nm；柱温:20℃。
手性纯度检测分析方法如下：
色谱柱型 手性柱OJ-H
柱子尺寸 0.46cm I.D.×25cm L
进样量 1.0ul
流动相 MeOH＝100％
流速 1.0ml/min
检测波长 UV 254nm
柱温 35℃
旋光测定如下：
旋光测试仪：珀金埃尔默(PE)型号Perkin Elmer 341，测定结果如下：空白：
WL(nm) Arc[°] Energy[#] Temp.[℃]
589 0 75 20
样品：
样品 浓度[g/ml] 溶剂 WL(nm) Arc[°] OROT[°]
光学异构体18-(R,Z)① 0.01007(C＝1) 乙腈 589 -0.110 -10.9
光学异构体18-(S,Z)② 0.00999(C＝1) 乙腈 589 +0.096 +9.6
生物学评价
一、IDO活性抑制的酶学测试
人的吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)购自BPS Bioscience Inc。人吲哚胺(idoleamine)2,3-双加氧酶(IDO)酶学反应在96孔板进行，反应体积为20μL，反应条件为：40nM IDO酶，0.2mM L-色氨酸，50mM KPB(pH6.5)缓冲液，20mM L-抗坏血酸钠，10μM亚甲蓝，0.2mg/mL过氧化氢酶，溶剂为二甲基亚砜的<1％不同浓度的化合物。在30℃反应60分钟后，每孔加入5μL 30％(W/V)三氯乙酸(50mM KPB缓冲液配制)，50℃孵育30分钟使N-甲酰基-犬尿氨酸水解为犬尿氨酸。每孔加入25μL 2％(W/V)p-(二甲基氨基)苯甲醛(p-DMBA)/冰醋酸溶液，用BioTek Synergy H1酶标仪(Molecular Devices)读取490nm吸光值。
待测化合物贮备溶液用二甲基亚砜配制为10mM，实验时用用二甲基亚砜稀释至试验最高浓度，然后进行1：3梯度稀释，一般稀释成8到10个浓度点，每个浓度点设复孔，每次实验均包含1个参照化合物。分析酶标仪读取490nm吸光值原始数据，计算受试化合物不同浓度点对IDO酶活性的抑制，采用GraphPad Prism软件对抑制百分比数据进行非线性拟合分析得到化合物的半数抑制浓度IC50值。
二、IDO活性抑制的细胞模型测试
干扰素γ可诱导Hela细胞表达IDO，这一模型被用来测试化合物对吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的抑制活性。Hela细胞(ATCC)的培养液为含100μM L-色氨酸的不含酚红的RPMI-1640。待测化合物贮备溶液用二甲基亚砜配制为10mM，实验时用二甲基亚砜稀释至试验最高浓度，实验时用培养基进行3倍系列稀释，一般稀释成8到10个浓度点，每个浓度点设复孔。DMSO终浓度为0.5％，每次实验均包含内参化合物。
试验的程序为：在96孔培养板上每孔加入20，000个Hela细胞(ATCC)过夜培养，24小时后将干扰素γ(终浓度为50ng/mL)和不同浓度的待测化合物和内参化合物加到培养的细胞。24时后，将140μL上清液/孔转移至一个新的96孔板中，每孔加入10μL 6.1N的三氯乙酸，50℃孵育30分钟使N-甲酰基-犬尿氨酸水解为犬尿氨酸。反应混合物离心(转速为2500转/分钟离心10分钟)去除沉淀物，将上清液100μL转移至另一个新的96孔板中，每孔加入100μL2％(W/V)p-(二甲基氨基)苯甲醛(p-DMBA)/冰醋酸溶液，用BioTek Synergy H1酶标仪(Molecular Devices)读取490nm吸光值。
分析酶标仪读取490nm吸光值原始数据，计算受试化合物不同浓度点对IDO酶活性的抑制，采用GraphPad Prism软件对抑制百分比数据进行非线性拟合分析得到化合物的半数抑制浓度IC50值。
本发明实施例化合物通过以上两个试验方法分别进行测定，酶学及细胞学IDO抑制活性IC50值结果见下表：
试验结果证明：本发明实施例化合物具有良好的酶学及细胞学IDO抑制活性。
三、大鼠血浆PK分析
测试化合物的药物代谢动力学试验是用SD大鼠(上海史莱克)进行的。
■给药方式：单次灌胃给药。
■给药剂量：20mg/10mL/kg。
■制剂处方：3％二甲基乙酰胺和20％羟丙基-β-环糊精。
■取样点：给药前和给药后15分钟、0.5、1、2、4、6、8、24小时。
■血浆采样与样品处理：
1)颈静脉采血0.2ml，置于EDTA-2K试管中，4℃下以转速6000转/分钟离心5分钟分离血浆，于-80℃保存。
2)将160μL乙腈加入到40μL血浆样品、标品、和内参，涡旋3分钟，转速4000转/分钟离心10分钟，取100μL上清液，然后再加入100μL无离子水混匀，取10μL进行LC/MS/MS分析，血浆LC/MS/MS分析所用仪器为AB Sciex API 4000。
■液相分析：
●液相条件：Shimadzu LC-20AD泵
●色谱柱：phenomenex Gemiu 5um C18 50X 4.6mm
●移动相：A液为0.1％甲酸水溶液，B液为乙腈
●流速：0.8mL/min
●洗脱时间：0-3.01分钟，洗脱液如下：
时间/分钟 A液 B液
0.01 70％ 30％
1 10％ 90％
2 10％ 90％
2.01 70％ 30％
3 70％ 30％
■质谱分析：质谱仪设置条件：阳离子电喷雾电离(ESI)模式。
■试验结果：药代动力学的主要参数用WinNonlin 6.1计算得到，实验结果见下表：
试验结果证明：本发明实施例化合物明显优于参照化合物(INCB-24360)，具有更好的药代动力学，主要药代动力学参数最大血药浓度(Cmax)、药物暴露量(AUC)相对于参照化合物(INCB-24360)均有很大幅度的提高。
四、实施例化合物在PAN02荷瘤小鼠模型的抑瘤作用
本发明采用在PAN02荷瘤小鼠模型来测试实施例化合物抑瘤作用。所述PAN02荷瘤小鼠模型为:小鼠胰腺癌细胞系PAN02购自广州吉妮欧生物科技有限公司，使用的培养液是含有10％胎牛血清的DMEM。用于荷瘤的小鼠品系是C57/BL6，购自上海斯莱克实验动物有限公司。种植时，将处于对数生长期的PAN02细胞收集，与降低生长因子的BDMatrigel基质胶混匀至5千万/毫升，每只小鼠皮下种植100微升5百万细胞。待肿瘤长到约100立方毫米时将动物随机分组，每组8只动物，开始给药(D0)。
给药方式：灌胃给药，每天2次。
给药剂量：50mg/10mL/kg。
制剂处方：3％二甲基乙酰胺和20％羟丙基-β-环糊精。
■给药周期与肿瘤测量：给药周期为13天，每周3次测瘤体积，称鼠重，记录数据。肿瘤体积(V)计算公式为：V＝1/2axb2其中a、b分别表示长、宽。T/C的计算公式为：T/C(％)＝100xΔT/ΔC。抑瘤率(％)＝1-T/C(％)。
■试验结果：实施例15化合物对PAN02荷瘤小鼠模型的抑瘤效果见下表。
从表中可以看出，在50mg/kg给药剂量下，实施例15化合物在PAN02荷瘤小鼠中的抑瘤率可达74.8％,显著高于参照阳性化合物INCB 24360(抑瘤率39.7％)。
五、实施例化合物在Colon26荷瘤小鼠模型的抑瘤作用
本发明进一步采用了在Colon26荷瘤小鼠模型来测试实施例化合物抑瘤作用。所述Colon26荷瘤小鼠模型为:小鼠直结肠癌细胞系Colon26购自广州吉妮欧生物科技有限公司，使用的培养液是含有10％胎牛血清的RPMI1640,用于荷瘤的小鼠品系是Balb/c，购自上海西普尔－必凯实验动物有限公司。种植时，将处于对数生长期的Colon26细胞收集混匀至1千万/毫升，每只小鼠皮下种植100微升一百万细胞。待肿瘤长到约100立方毫米时将动物随机分组，每组8只动物，开始给药(D0)。
给药方式：灌胃给药，每天2次。
给药剂量：50mg/10mL/kg。
制剂处方：3％二甲基乙酰胺和20％羟丙基-β-环糊精。
■给药周期与肿瘤测量：给药周期为13天，每周3次测瘤体积，称鼠重，记录数据。肿瘤体积(V)计算公式为：V＝1/2axb2其中a、b分别表示长、宽。T/C的计算公式为：T/C(％)＝100xΔT/ΔC。抑瘤率(％)＝1-T/C(％)。
■试验结果：实施例15化合物对Colon26荷瘤小鼠模型的抑瘤效果见下表。
从表中可以看出，在25mg/kg给药剂量下，实施例15化合物在Colon26荷瘤小鼠中的抑瘤率可达94.6％,显著高于参照阳性化合物INCB 24360(抑瘤率78.4％)。
在相同实验条件下，调整给药剂量，实施例15及其光学异构体18-①和18-②对Colon26荷瘤小鼠模型的抑瘤效果见下表：
实施例及其给药剂量 抑瘤率(％)D12
实施例15 10mg/kg 71.10％
实施例18-①10mg/kg 72.54％
实施例18-②10mg/kg 68.49％
从表中结果可以看出，实施例15经拆分得到的光学纯化合物18在Colon26荷瘤小鼠中的抑瘤率效果相当，具有良好的抑制效果。

Claims (15)

  1. 具有如下式(I)结构的N'-羟基-N-苯基甲脒衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，
    其中：
    为Z型和E型；优选Z型；
    X选自C1-8烷基或C3-8环烷基，任选进一步被一个或多个选自氘、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、卤取代C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
    R1选自如下结构：
    Y选自-S(O)2-或-C(O)-C(O)-；
    Z选自键、O、S或-NR7-；
    R2选自氢、氘、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基、5-10元杂芳基或C0-8烷基羰基，
    任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、卤取代C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
    R3选自氢、氘、羟基、氨基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基、5-10元杂芳基、C1-8烷氧基、C3-8环烷氧基、3-8元杂环基氧基、C5-10芳基氧基、5-10元杂芳基氧基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、 -C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5，
    任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、卤取代C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
    R4选自氢、氘、C1-8烷基、C2-8链烯基、C3-8环烷基、卤取代C1-8烷基、苯基、对甲基苯基、氨基、单C1-8烷基氨基、二C1-8烷基氨基或C1-8烷酰氨基；
    R5选自氢、氘、C1-8烷基、C3-8环烷基、卤取代C1-8烷基或羟取代C1-8烷基；
    R6选自氢、氘、C1-8烷基、C1-8烷氧基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基、卤取代C1-8烷基、卤取代C1-8烷氧基、羟取代C1-8烷基或羟取代C1-8烷氧基；
    R7、R8、R9、R10各自独立的选自氢、氘、羟基、C1-8烷基、C1-8羟烷基、C1-8烷氧基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基、5-10元杂芳基或C1-8烷酰基，或者，R7与R8、R9与R10和所连接的氮原子形成3-8元杂环烷基，
    任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、乙酰氨基、叠氮基、磺酰基、甲磺酰基、C1-8烷基、三氟甲基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C1-8烷氧基、C1-8烷氧羰基、C1-8烷基羰基、C1-8烷基羰基氧基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、氨基、单C1-8烷基氨基或二C1-8烷基氨基的取代基所取代；
    r为0～2。
  2. 根据权利要求1所述的式(I)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，选自式(II)化合物：
    其中：
    X选自C1-6烷基或C3-8环烷基，任选进一步被一个或多个选自氘、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、卤取代C1-8烷基或C3-8环烷基的取代基所取代；
    R7、R9、R10各自独立的选自氢、氘、羟基、C1-8烷基、C1-8羟烷基、C1-8烷 氧基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基、C1-8烷基取代的C5-10芳基、5-10元杂芳基、C1-8烷酰基或-C0-8-C(O)OR5，或者，R9与R10和所连接的氮原子形成5-6元杂环烷基，
    任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、乙酰氨基、叠氮基、磺酰基、甲磺酰基、C1-8烷基、三氟甲基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C1-8烷氧基、C1-8烷氧羰基、C1-8烷基羰基、C1-8烷基羰基氧基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、氨基、单C1-8烷基氨基或二C1-8烷基氨基的取代基所取代。
  3. 根据权利要求1所述的式(I)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，选自式(ⅡA)或(ⅡB)化合物：
    其中：
    X选自乙基、环丁基或环己基，任选进一步被一个或多个选自氘、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、三氟甲基、C1-8烷基或C3-8环烷基的取代基所取代；
    R7、R9、R10各自独立的选自氢、氘、羟基、C1-8烷基、C1-8羟烷基、C1-8烷氧基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基、C1-8烷基取代的C5-10芳基、5-10元杂芳基、C1-8烷酰基或-C0-8-C(O)OR5，或者，R9与R10和所连接的氮原子形成5-6元杂环烷基。
  4. 根据权利要求1-3任一所述的式(I)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，选自如下化合物：
  5. 根据权利要求1所述的式(I)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，选自式(III)化合物：
    Z选自键或-NR7-；
    R2选自氢、氘或C1-8烷基；
    R3选自氘、羟基、氨基、C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基、5-10元杂芳基、C1-8烷氧基、C3-8环烷氧基、3-8元杂环基氧基、C5-10芳基氧基、5-10元杂芳基氧基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-C(O)OR5或-C0-8-O-C(O)R6；
    R4选自氢、氘、C1-8烷基、C2-8链烯基、C3-8环烷基、卤取代C1-8烷基、苯基、对甲基苯基、氨基、单C1-8烷基氨基、二C1-8烷基氨基或C1-8烷酰氨基；
    R5选自氢、氘、C1-8烷基、C3-8环烷基、卤取代C1-8烷基或羟取代C1-8烷基；
    R6选自氢、氘、C1-8烷基、C1-8烷氧基、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基、卤取代C1-8烷基、卤取代C1-8烷氧基、羟取代C1-8烷基或羟取代C1-8烷氧基；
    r为0～2。
  6. 根据权利要求5所述的式(I)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，选自如下通式化合物：
    其中：
    Z、R2和R3如权利要求5所述。
  7. 根据权利要求7所述的式(I)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，选自如下化合物：
  8. 一种制备权利要求5所述的式(III)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐的中间体，其特征在于，如通式(IV)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐：
    其中：
    Z、R2和R3如权利要求5所述。
  9. 权利要求1-7任一所述的式(I)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐的制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤：
    通式(IV)化合物在碱性条件下开环得到通式(III)化合物；
    其中：
    X、R2和R3如权利要求5所述。
  10. 一种药物组合物，其包括治疗有效剂量的权利要求1-7任一所述的式(I)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐及可药用的载体。
  11. 权利要求1-7任一所述的式(I)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐、或权利要求10所述的药物组合物在制备药物中的应用，所述药物用于抑制吲哚胺2,3-双加氧酶的活性或者用于抑制患者的免疫抑制。
  12. 权利要求1-7任一所述的式(I)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐、或权利要求10所述的药物组合物在制备药物中的应用，所述药物用于治疗或预防患者的癌症或肿瘤、病毒感染、抑郁症、神经变性病症、创伤、年龄相关的白内障、器官移植排斥或自身免疫疾病；其中所述癌症或肿瘤优选自肺癌、骨癌、胃癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、子宫癌、卵巢癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、直肠癌、结肠癌、肛门区癌、 乳腺癌、食管癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、胰腺癌、脑癌、睾丸癌、淋巴癌、移行细胞癌、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、软组织肉瘤、儿童实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊柱肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、黑素瘤、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、慢性或急性白血病和所述癌的组合。
  13. 根据权利要求11-12任一所述的应用，其特征在于，将治疗有效剂量的权利要求1-7任一所述的式(I)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐、或权利要求10所述的药物组合物与抗CTLA-4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗病毒剂、化疗剂、免疫抑制剂、辐射、抗肿瘤疫苗、抗病毒疫苗、细胞因子疗法或酪氨酸激酶抑制剂进行联合用药；所述细胞因子优选IL-2、IL-3、IL-4或IL-5，所述化疗剂优选细胞毒性剂，所述抗PD-1抗体优选Keytruda抗体。
  14. 一种调节吲哚胺2,3-双加氧酶活性的方法，其特征在于，所述方法包括将治疗有效剂量的权利要求1-7任一所述的式(I)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐、或权利要求10所述的药物组合物与吲哚胺2,3-双加氧酶接触；所述调节优选为抑制作用。
  15. 一种抑制患者的免疫抑制的方法，其特征在于，所述方法包括将治疗有效剂量的权利要求1-7任一所述的式(I)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐、或权利要求10所述的药物组合物给予患者。
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