CN102344371A - 温敏两亲性聚醚树枝化基元及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

温敏两亲性聚醚树枝化基元及其制备方法和应用，属化学技术领域。I为第三代温敏两亲性聚苄醚树枝化基元，II为第四代温敏两亲性聚苄醚树枝化基元。通过改变试剂用量、延长反应时间等方法，提高了粗产物的纯度，用溶剂萃取法和透析法代替柱色谱分离，高产率地得到了分析纯的中间产物和目标产物，简化了实验步骤，缩短了合成周期，合成效率高。本发明基元的最低临界溶解温度具有随树枝化基元代数的增加而降低的特性，可在水中自组装形成球形纳米胶束，作为鬼臼毒素药物的载体。

Description

温敏两亲性聚醚树枝化基元及其制备方法和应用

技术领域：

本发明属化学技术领域，具体涉及带有二聚乙二醇单甲醚链的第三代和第四代聚苄醚树枝化基元，制备方法，及其自组装形成的球形纳米胶束作为药物控制释放载体的应用。

背景技术：

温度响应性材料具有特殊的热性能，其在溶液中的溶解度会随着温度的升高而缓慢降低，但一旦温度升高到某一温度(低临界溶液温度，LCST)附近，其溶解度会突然降低，出现热沉降，而且这种变化是可逆的。这一特性使其在药物控制释放、分离膜、固定化酶以及温敏器件的研制等方面具有广阔的应用前景。具有温度响应性的材料能自动感应病原体或热原(如发热、肿瘤)存在下人体温度的变化，使材料产生智能化相变，药物释放速度加快；当身体正常时，材料即恢复原状，释药速度也随之下降，形成应答式释药系统，从而实现药物在病灶区的定时、定点可控释放，最大限度地降低药物的不良反应。目前，研究的温度响应性材料多为聚合物，而对于具有温度响应性的小分子树枝化基元(dendrons)的研究则鲜见文献报道。

聚乙二醇(PEG)具有很好的水溶性、无毒、无免疫原性和良好的生物相容性，也具有温度响应性，而且低分子量的PEG可由肾排出，因此在生物医用材料方面具有重要的应用价值。但线形PEG的LCST较高(在100℃以上)，在很大程度上限制了其应用。在PEG链段中引入亲脂性链段形成两亲性嵌段或接枝共聚物，或将低聚乙二醇(OEG)引入到树形聚合物(dendritic polymers)中均可调节其LCST。

树枝化基元(dendrons)是树形大分子(dendrimers)、树形-线形杂化体(dendritic-linearhybrid)和树枝化聚合物(dendronized polymer)的重要组成部分。一些树枝化基元在固态、水相或有机溶剂中能自组装成有序的超分子结构。

鬼臼毒素是一种木脂素类化合物，其较强的生理活性可抑制细胞核有丝分裂，使其停止于中期细胞，在对体外培养的正常表皮细胞及异常增生的鳞状上皮细胞的药效研究中鬼臼毒素所显示出的抑制程度不同，因此，鬼臼毒素常被添加到抗炎药物中制备成治疗皮肤病的药物。鬼臼毒素的体内研究结果表明其同样具有抗肿瘤活性，然而鬼臼毒素在水中的溶解度较小，在体内很难发挥其药效，如果将其负载到药物载体中势必会提高药物在体内的含量，增强靶向给药，增加药效。

胶束是一种新型的药物载体，疏水性内核是药物的储存库，而亲水性外壳能有效延长在血液中的循环时间，因此胶束在疏水性药物增溶和保持药效稳定性方面具有重要的研究价值。另外，几十纳米尺寸的胶束能顺利透过肿瘤血管内皮进入肿瘤组织，利用其增强通透性和保留效应可实现药物载体的肿瘤靶向。鉴于胶束载体的上述优点，已有大量研究利用两亲性共聚物胶束包覆疏水性抗肿瘤药物，但文献检索未见利用两亲性树枝化基元形成的胶束包覆鬼臼毒素的文献报道。

发明内容：

本发明的目的是提供一种新的温敏两亲性聚醚树枝化基元及其制备方法和应用。

温敏两亲性聚醚树枝化基元也称为热敏两亲性聚醚树枝化基元。

本发明为第三代和第四代温敏两亲性聚醚树枝化基元，它们的分子结构如下：

I为第三代温敏两亲性聚苄醚树枝化基元，II为第四代温敏两亲性聚苄醚树枝化基元。

上述第三代和第四代热敏两亲性聚醚树枝化基元的制备方法为：

1、第三代温敏两亲性聚醚树枝化基元经如下步骤得到：

(a)制备酯中心端基第二代聚醚树枝化基元。酯中心端基第二代聚醚树枝化基元的制备方法为现有技术，例如可参照文献(Li Xu，Lidong Shao，Lin Chen，et al.Chemistry Letters.2010，39(11)：177-1179)，以没食子酸为原料，用收敛法，制备中心端基为酯、带有二聚乙二醇单甲醚链的第二代聚醚树枝化基元(G2-COOMe)。

(b)制备羟甲基中心端基第二代聚醚树枝化基元：

在0～5℃和搅拌下，将氢化铝锂加入步骤(a)得到的G2-COOMe的四氢呋喃溶液中，每毫升四氢呋喃溶有0.02～0.1g酯中心端基第二代树枝化基元(G2-COOMe)，G2-COOMe与氢化铝锂的质量比为1∶0.07～0.1；室温反应20～26h，加入质量百分浓度为5～10％氢氧化钠的水溶液，所加氢氧化钠的水溶液和G2-COOMe的四氢呋喃溶液的体积比为1∶1.5～2.0；过滤，蒸出溶剂，剩余物用二氯甲烷溶解，用饱和NaCl洗涤有机相并用无水硫酸镁干燥，过滤，蒸出溶剂制得羟甲基中心端基第二代聚醚树枝化基元(G2-CH₂OH)。

(c)制备氯甲基中心端基第二代聚醚树枝化基元：

将步骤(b)得到的G2-CH₂OH溶于二甲基甲酰胺和二氯甲烷的混合溶剂中，所述二甲基甲酰胺和二氯甲烷的体积比为1∶10～12，每毫升二甲基甲酰胺和二氯甲烷的混合溶剂溶有0.06～0.08g G2-CH₂OH；搅拌下滴加氯化亚砜的二氯甲烷溶液，所加入氯化亚砜的二氯甲烷溶液与G2-CH₂OH的二甲基甲酰胺和二氯甲烷溶液的体积比是1∶1.5～2.0，其中氯化亚砜与G2-CH₂OH的质量比为0.2～0.3∶1；滴毕，室温反应2～4h后，用饱和NaHCO₃溶液分三次洗涤有机相，并用无水硫酸镁干燥，过滤，蒸出溶剂，得氯甲基中心端基第二代聚醚树枝化基元(G2-CH₂Cl)。

(d)第三代温敏两亲性聚醚树枝化基元的制备：

将新蒸二甲基甲酰胺加入到没食子酸甲酯与步骤(c)得到的G2-CH₂Cl和碳酸钾的混合物中，没食子酸甲酯、G2-CH₂Cl和碳酸钾的质量比为1∶25～27∶7～10；60～80℃下，反应24～48h后，抽滤，减压蒸出滤液中的二甲基甲酰胺，剩余物用水溶解，所得溶液放入截留分子量为3500的透析袋中透析3～5天，减压蒸出水后得到第三代温敏两亲性聚醚树枝化基元(G3-COOMe)。

2、第四代温敏两亲性聚醚树枝化基元经如下步骤得到：

(a)制备羟甲基中心端基第三代聚醚树枝化基元：

在0～5℃和搅拌下，将氢化铝锂加入以上步骤1(d)得到的第三代温敏两亲性聚醚树枝化基元(G3-COOMe)的四氢呋喃溶液中，每毫升四氢呋喃溶有0.03～0.10g的G3-COOMe，G3-COOMe与氢化铝锂的质量比为1∶0.05～0.07；室温反应24～30h，加入质量百分浓度为5～10％氢氧化钠的水溶液，所加氢氧化钠的水溶液和G3-COOMe的四氢呋喃溶液的体积比为1∶1.5～2.0；过滤，蒸出溶剂，剩余物用二氯甲烷溶解，用饱和NaCl洗涤有机相，并用无水硫酸镁干燥，过滤，蒸出溶剂制得羟甲基中心端基第三代聚苄醚树枝化基元(G3-CH₂OH)。

(b)制备氯甲基中心端基第三代聚醚树枝化基元：

将步骤2(a)得到的G3-CH₂OH溶于二甲基甲酰胺和二氯甲烷的混合溶剂中，二甲基甲酰胺和二氯甲烷的体积比为1∶10～15，每毫升二甲基甲酰胺和二氯甲烷的混合溶剂溶有0.06～0.10g G3-CH₂OH；搅拌下滴加氯化亚砜的二氯甲烷溶液，所加入氯化亚砜的二氯甲烷溶液与G3-CH₂OH的二甲基甲酰胺和二氯甲烷溶液的体积比是1∶1.6～2.0，其中氯化亚砜与G3-CH₂OH的质量比为0.07～0.1∶1；滴毕，室温反应4～8h后，用饱和NaHCO₃溶液分三次洗涤有机相，并用无水硫酸镁干燥，过滤，蒸出溶剂，得氯甲基中心端基第三代聚醚树枝化基元(G3-CH₂Cl)。

(c)第四代温敏两亲性聚醚树枝化基元的制备：

将新蒸二甲基甲酰胺加入没食子酸甲酯与步骤(b)得到的G3-CH₂Cl和碳酸钾的混合物中，所述没食子酸甲酯、G3-CH₂Cl和碳酸钾的质量比为1∶75～85∶7～10；60～80℃下，反应24～48h后，抽滤，减压蒸出滤液中的二甲基甲酰胺，剩余物用水溶解，所得溶液放入截留分子量为3500的透析袋中透析5～7天，减压蒸出水后得到第四代温敏两亲性聚醚树枝化基元(G4-COOMe)。

以上步骤1和2中的过滤，抽滤，洗涤，减压蒸馏等工序为常规技术。

本发明制备的第三代和第四代热敏两亲性聚醚树枝化基元具有随温度变化的可逆相分离特性，透过率测定结果表明，第三代和第四代热敏两亲性聚醚树枝化基元的LCST随其浓度的增加而降低，当浓度增加到1.5mg/mL时，LCST值不再减小。它们的LCST的变化范围为46～67℃。对于相同浓度的第三代和第四代热敏两亲性聚醚树枝化基元的水溶液，第四代的LCST低于第三代的LCST，这些现象说明随着所合成树枝化基元代数的增加，树枝化基元的温度响应现象变得明显，呈现代数依赖性。

第三代和第四代温敏两亲性聚醚树枝化基元胶束溶液的制备方法为：

称取50mg第三代或第四代两亲性聚醚树枝化基元(G3-COOMe或G4-COOMe)溶于10毫升THF中，待完全溶解后，边搅拌边向溶液中缓慢加入10毫升蒸馏水，室温下蒸出有机溶剂，残留液转入25毫升容量瓶中定容得2.0mg/mL胶束溶液。

载药胶束的制备方法为：

在50mg第三代或第四代两亲性聚醚树枝化基元(G3-COOMe或G4-COOMe)和15mg鬼臼毒素的混合物中加入10mL丙酮，搅拌至完全溶解后，搅拌下缓慢加入10mL去离子水，室温搅拌，蒸出丙酮，剩余溶液在4000r/min下离心30min，取上层清液干燥后制得温敏两亲性聚醚树枝化基元载鬼臼毒素胶束。

胶束对药物的载药率和包封率测定：

将干燥后的载药胶束用乙醇稀释，得到胶束浓度为0.1mg/mL的鬼臼毒素溶液，测其紫外吸光度，计算载药胶束溶液中鬼臼毒素的含量，按以下公式计算载药率和包封率：载药率(％)＝(载药量/载体量)×100％，包封率(％)＝(载药量/投药量)×100％。

试验方法

精确量取制备好的载药胶束溶液15mL，放入截留分子量为3500的透析袋内，置于150mL pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液中，在37℃下，恒速搅拌(120r/min)进行药物释放测试。每隔1h，从透析袋外的释放介质中取2mL液体，再补充2mL新的pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液。将取出的溶液样品真空干燥后，加入4mL乙醇溶解，测定其在292nm处的紫外吸光度值.按线性回归方程计算释药浓度，计算鬼臼毒素的累积释放百分率。

本发明的有益效果：合成树枝状分子的困难在于每一步产物必须经过彻底纯化，往往需要柱色谱分离，过程繁琐，产率低。本发明通过改变试剂用量、延长反应时间等方法，提高了粗产物的纯度，用溶剂萃取法代替柱色谱分离，高产率地得到了分析纯的G2-CH₂OH、G2-CH₂Cl、G3-CH₂OH和G3-CH₂Cl，对第三代和第四代温敏两亲性聚醚树枝化基元(G3-COOMe和G4-COOMe)的分离提纯则采用了透析法。本发明中所合成的树枝化基元均为难分离提纯的油状物，但在本发明中粗产物的分离纯化均未采用柱色谱法，因此简化了实验步骤，缩短了合成周期，提高了产率，合成效率高。本发明研制的第三代和第四代热敏两亲性聚醚树枝化基元具有制备条件温和、容易分离提纯、合成效率高等优点，并能在水溶液中自组装形成稳定的球形纳米胶束，该胶束对鬼臼毒素具有较高的载药量和包封率，并能减慢鬼臼毒素的释放速度，而且在其LCST以下温度，对鬼臼毒素的释放较慢，而在其LCST以上温度释放较快，适合于温度响应性应答式释药系统。

附图说明：

图1是G3-COOMe在水溶液中自组装形成的球形纳米胶束的TEM照片。

图2是在20℃时鬼臼毒素(未被胶束负载)和负载鬼臼毒素的G3-COOMe胶束和G4-COOMe胶束的释放曲线。

图3是在不同温度下负载鬼臼毒素的G3-COOMe胶束的释放曲线。

图4是在不同温度下负载鬼臼毒素的G4-COOMe胶束的释放曲线。

具体实施方式：

下面用实施例来进一步详述本发明，但本发明的内容并不局限于此。

实施例一：

在干燥的圆底烧瓶中加入1.21g酯中心端基第二代聚醚树枝化基元和50mL四氢呋喃，搅拌溶解后，冰水浴中，搅拌下，加入0.10g氢化铝锂，室温反应20h后，加入30mL 5％氢氧化钠溶液，过滤，蒸出溶剂，剩余物用二氯甲烷溶解，用饱和氯化钠溶液洗涤有机相，干燥，过滤，蒸出溶剂，得羟甲基中心端基第二代聚醚树枝化基元(G2-CH₂OH)，产率80.5％。

在干燥的二颈瓶中依次加入3.88g化合物G2-CH₂OH、4.5mL二甲基甲酰胺和50mL二氯甲烷，搅拌下滴加氯化亚砜的二氯甲烷溶液(由0.92g氯化亚砜溶解于30mL二氯甲烷配制而成)，滴毕，室温反应2h后，用150mL饱和碳酸氢钠溶液分三次洗涤有机相，干燥，过滤，蒸出二氯甲烷，得氯甲基中心端基第二代聚醚树枝化基元(G2-CH₂Cl)，产率92.4％。

在干燥的二颈瓶中依次加入0.09g没食子酸甲酯、2.41gG2-CH₂Cl、0.69g碳酸钾以及50mL新蒸二甲基甲酰胺，70℃下，反应24h后，蒸出二甲基甲酰胺，剩余物用蒸馏水溶解，将溶液放入截留分子量为3500的透析袋中透析3天，减压蒸出水，得到第三代温敏两亲性聚醚树枝化基元(G3-COOMe)，产率52.3％。

实施例二：

在干燥的圆底烧瓶中加入1.66g G3-COOMe和50mL四氢呋喃，搅拌溶解后，冰水浴中，搅拌下，加入0.09g氢化铝锂，室温反应24h后，加入30mL 5％氢氧化钠溶液，过滤，蒸出溶剂，剩余物用二氯甲烷溶解，用饱和氯化钠溶液洗涤有机相，干燥，过滤，蒸出溶剂，得羟甲基中心端基第三代聚醚树枝化基元(G3-CH₂OH)，产率81.1％。

在干燥的二颈瓶中依次加入3.93g化合物G3-CH₂OH、4.5mL二甲基甲酰胺和50mL二氯甲烷，搅拌下滴加氯化亚砜的CH₂Cl₂溶液(由0.31g氯化亚砜溶解于30mL二氯甲烷配制而成)，滴毕，室温反应4h后，用150mL饱和碳酸氢钠溶液分三次洗涤有机相，干燥，过滤，蒸出二氯甲烷，得氯甲基中心端基第三代聚醚树枝化基元(G3-CH₂Cl)，产率93.1％。

在干燥的二颈瓶中依次加入0.018g没食子酸甲酯、1.47g G3-CH₂Cl、0.138g碳酸钾以及20mL新蒸二甲基甲酰胺，70℃下，反应24h后，蒸出二甲基甲酰胺，剩余物用蒸馏水溶解，将溶液放入截留分子量为3500的透析袋中透析5天，减压蒸出H₂O，得到第四代温敏两亲性聚醚树枝化基元(G3-COOMe)，产率52.3％。

实施例三：

称取50mg第三代温敏两亲性聚醚树枝化基元(G3-COOMe)溶于10mL THF中，待完全溶解后，边搅拌边向溶液中缓慢加入10mL蒸馏水，室温下蒸出有机溶剂，残留液转入25mL容量瓶中定容得2.0mg/mL胶束溶液。用移液管移取不同体积的胶束溶液于若干10mL容量瓶中，再向每个容量瓶中加入浓度为1.2×10^-4mg/mL芘的丙酮溶液50μL，室温将丙酮挥发掉，用蒸馏水稀释至刻度。所得溶液超声30min，在室温下放置24h，用荧光光谱法测得G3-COOMe的临界胶束浓度(CMC)为7.7×10^-6M，此结果与聚合物的CMC(一般～10^-6M)相当，说明G3-COOMe在水溶液中自组装形成了稳定的胶束。透射电镜(TEM)照片表明：G3-COOMe在水溶液中自组装成球形纳米胶束。TEM照片见图1。

实施例四：

将干燥后的第三代或第四代温敏两亲性聚醚树枝化基元载药胶束用乙醇稀释，得到胶束浓度为0.1mg/mL的鬼臼毒素溶液，测其紫外吸光度，计算载药胶束溶液中鬼臼毒素的含量，按以下公式计算载药率和包封率：载药率(％)＝(载药量/载体量)×100％，包封率(％)＝(载药量/投药量)×100％。结果见表1。

表1第三代或第四代树枝化基元对鬼臼毒素的载药率和包封率

	第三代树枝化基元	第四代树枝化基元
			载药率(％)	28.71	31.15
包封率(％)	94.95	97.34

结果表明，本发明研制的第三代和第四代两亲性树枝化基元胶束对鬼臼毒素具有较高的载药率和包封率，而且第四代树枝化基元胶束比第三代树枝化基元胶束对鬼臼毒素具有更高的载药率和包封率。

实施例五：

精确量取制备好的第三代树枝化基元载药胶束溶液、第四代树枝化基元载药胶束溶液和相同浓度的鬼臼毒素溶液各15mL，分别放入三个截留分子量为3500的透析袋内，分别置于150mLpH 7.4的磷酸盐缓冲溶液中，在20℃下，恒速搅拌(120r/min)进行药物释放测试。每隔1h，从透析袋外的释放介质中取2mL液体，再补充2mL新的pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液。将取出的溶液样品真空干燥后，加入4mL乙醇溶解，测定其在292nm处的紫外吸光度值，按线性回归方程计算释药浓度，计算鬼臼毒素的累积释放百分率。结果见图2。

实施例六：

精确量取三份制备好的第三代树枝化基元载药胶束溶液各15mL，分别放入三个截留分子量为3500的透析袋内，置于150mLpH 7.4的磷酸盐缓冲溶液中，分别在20℃、37℃和50℃下，恒速搅拌(120r/min)进行药物释放测试。每隔1h，从透析袋外的释放介质中取2mL液体，再补充2mL新的pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液。将取出的溶液样品真空干燥后，加入4mL乙醇溶解，测定其在292nm处的紫外吸光度值，按线性回归方程计算释药浓度，计算鬼臼毒素的累积释放百分率。结果见图3。

实施例七：

基本同实施例五，不同之处是药物载体是第四代树枝化基元；精确量取三份制备好的第四代树枝化基元载药胶束溶液各15mL，分别放入三个截留分子量为3500的透析袋内，置于150mLpH 7.4的磷酸盐缓冲溶液中，分别在20℃、37℃和50℃下，恒速搅拌(120r/min)进行药物释放测试。每隔1h，从透析袋外的释放介质中取2mL液体，再补充2mL新的pH7.4的磷酸盐缓冲溶液。将取出的溶液样品真空干燥后，加入4mL乙醇溶解，测定其在292nm处的紫外吸光度值，按线性回归方程计算释药浓度，计算鬼臼毒素的累积释放百分率。结果见图4。

结果表明：本发明研制的第三代和第四代热敏两亲性聚醚树枝化基元胶束对鬼臼毒素具有控释作用，并具有温度响应性，而且第四代树枝化基元胶束比第三代树枝化基元胶束对鬼臼毒素具有更好的控释作用。

Claims (4)

1.第三代和第四代温敏两亲性聚醚树枝化基元，其特征在于它们的分子结构如下：

I为第三代温敏两亲性聚苄醚树枝化基元，II为第四代温敏两亲性聚苄醚树枝化基元。

2.如权利要求1所说的第三代温敏两亲性聚苄醚树枝化基元的制备方法，其特征在于经如下步骤得到：

(a)制备酯中心端基第二代聚醚树枝化基元；

(b)制备羟甲基中心端基第二代聚醚树枝化基元：

在0～5℃和搅拌下，将氢化铝锂加入步骤(a)得到的G2-COOMe的四氢呋喃溶液中，每毫升四氢呋喃溶有0.02～0.10g酯中心端基第二代树枝化基元(G2-COOMe)，G2-COOMe与氢化铝锂的质量比为1∶0.07～0.1；室温反应20～26h，加入质量百分浓度为5～10％氢氧化钠的水溶液，所加氢氧化钠的水溶液和G2-COOMe的四氢呋喃溶液的体积比为1∶1.5～2.0；过滤，蒸出溶剂，剩余物用二氯甲烷溶解，用饱和NaCl洗涤有机相并用无水硫酸镁干燥，过滤，蒸出溶剂制得羟甲基中心端基第二代聚醚树枝化基元(G2-CH₂OH)；

(c)制备氯甲基中心端基第二代聚醚树枝化基元：

将步骤(b)得到的G2-CH₂OH溶于二甲基甲酰胺和二氯甲烷的混合溶剂中，所述二甲基甲酰胺和二氯甲烷的体积比为1∶10～12，每毫升二甲基甲酰胺和二氯甲烷的混合溶剂溶有0.06～0.08g G2-CH₂OH；搅拌下滴加氯化亚砜的二氯甲烷溶液，所加入氯化亚砜的二氯甲烷溶液与G2-CH₂OH的二甲基甲酰胺和二氯甲烷溶液的体积比是1∶1.5～2.0，其中氯化亚砜与G2-CH₂OH的质量比为0.2～0.3∶1；滴毕，室温反应2～4h后，用饱和NaHCO₃溶液分三次洗涤有机相，并用无水硫酸镁干燥，过滤，蒸出溶剂，得氯甲基中心端基第二代聚醚树枝化基元(G2-CH₂Cl)；

(d)制备第三代温敏两亲性聚醚树枝化基元：

将新蒸二甲基甲酰胺加入到没食子酸甲酯与步骤(c)得到的G2-CH₂Cl和碳酸钾的混合物中，没食子酸甲酯、G2-CH₂Cl和碳酸钾的质量比为1∶25～27∶7～10；60～80℃下，反应24～48h后，抽滤，减压蒸出滤液中的二甲基甲酰胺，剩余物用水溶解，所得溶液放入截留分子量为3500的透析袋中透析3～5天，减压蒸出水后得到第三代温敏两亲性聚醚树枝化基元(G3-COOMe)。

3.如权利要求1所说的第四代温敏两亲性聚苄醚树枝化基元的制备方法，其特征在于经如下步骤得到：

(a)制备羟甲基中心端基第三代聚醚树枝化基元：

在0～5℃和搅拌下，将氢化铝锂加入按权利要求2的步骤得到的第三代温敏两亲性聚醚树枝化基元(G3-COOMe)的四氢呋喃溶液中，每毫升四氢呋喃溶有0.03～0.10g的G3-COOMe，G3-COOMe与氢化铝锂的质量比为1∶0.05～0.07；室温反应24～30h，加入质量百分浓度为5～10％氢氧化钠的水溶液，所加氢氧化钠的水溶液和G3-COOMe的四氢呋喃溶液的体积比为1∶1.5～2.0；过滤，蒸出溶剂，剩余物用二氯甲烷溶解，用饱和NaCl洗涤有机相，并用无水硫酸镁干燥，过滤，蒸出溶剂制得羟甲基中心端基第三代聚苄醚树枝化基元(G3-CH₂OH)；

(b)制备氯甲基中心端基第三代聚醚树枝化基元：

将得到的G3-CH₂OH溶于二甲基甲酰胺和二氯甲烷的混合溶剂中，二甲基甲酰胺和二氯甲烷的体积比为1∶10～15，每毫升二甲基甲酰胺和二氯甲烷的混合溶剂溶有0.06～0.10gG3-CH₂OH；搅拌下滴加氯化亚砜的二氯甲烷溶液，所加入氯化亚砜的二氯甲烷溶液与G3-CH₂OH的二甲基甲酰胺和二氯甲烷溶液的体积比是1∶1.6～2.0，其中氯化亚砜与G3-CH₂OH的质量比为0.07～0.1∶1；滴毕，室温反应4～8h后，用饱和NaHCO₃溶液分三次洗涤有机相，并用无水硫酸镁干燥，过滤，蒸出溶剂，得氯甲基中心端基第三代聚醚树枝化基元(G3-CH₂Cl)；

(c)第四代温敏两亲性聚醚树枝化基元的制备：

将新蒸二甲基甲酰胺加入没食子酸甲酯与步骤(b)得到的G3-CH₂Cl和碳酸钾的混合物中，所述没食子酸甲酯、G3-CH₂Cl和碳酸钾的质量比为1∶75～85∶7～10；60～80℃下，反应24～48h后，抽滤，减压蒸出滤液中的二甲基甲酰胺，剩余物用水溶解，所得溶液放入截留分子量为3500的透析袋中透析5～7天，减压蒸出水后得到第四代温敏两亲性聚醚树枝化基元(G4-COOMe)。

4.如权利要求1所述的第三代和第四代温敏两亲性聚醚树枝化基元的应用，其特征在于：在水中自组装形成球形纳米胶束，作为鬼臼毒素药物的载体。

Images