CN102335191A - 一种治疗腹泻复方药物的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗腹泻复方药物的制备方法，由含锌药用原料和药用蒙脱石原料制备的复方制剂，含锌药用原料包括葡萄糖酸锌、硫酸锌、枸橼酸锌、醋酸锌、氯化锌、乳酸锌、甘氨酸锌、L-赖氨酸锌和甘草锌，用等量递加法与蒙脱石及辅料混合均匀。本发明发挥了锌的补锌和局部治疗作用，较蒙脱石与锌间隔服用效果好。

Description

一种治疗腹泻复方药物的制备方法

技术领域

 本发明涉及含锌药用原料和药用蒙脱石原料制备的复方制剂，具体涉及含锌药用原料和药用蒙脱石原料的制备方法及最佳配比。

背景技术

腹泻是一种常见病、多发病。临床上蒙脱石制剂用以治疗腹泻

蒙脱石具有层网结构及非均匀性电荷分布，对消化道黏膜有固定的覆盖能力，它能选择性地与黏液糖蛋白结合覆盖于胃黏膜表面，防止胃酸和蛋白酶的侵蚀，对消化道病毒、病菌及其产生的毒素有固定的抑制作用，它还通过激活凝血因子Ⅶ、Ⅶ、XII对消化道局部止血，它通过加强消化道黏膜屏障作用帮助消化道上皮组织再生修复以及固定、吸收、清除HP的作用，使上消化道炎症消退，使消化道溃疡加快愈合，本品不进入血液循环系统，连同所固定的攻击因子随消化道自身蠕动排出体外。天然蒙脱石粉剂进入消化道后，仍以其细小颗粒存在，约6h后连同所固定的病毒、病菌及其所产生的毒素一起排出体外。天然蒙脱石粉剂不被胃肠道吸收，不进入血液循环，对肝、肾、中枢神经及心血管等方面没有影响。天然蒙脱石粉剂不改变食物自口腔至结肠的转运时间，不影响食物的正常消化和吸收。

    锌为人体必需的微量元素之一,作为多种酶的组成成份广泛的参与各种代谢活动，具有抑制病毒、增强局部免疫以控制细菌过度生长和早期病原菌清除等作用，临床上葡萄糖酸锌用于治疗感冒和腹泻。

腹泻补锌能加速肠粘膜细胞再生,修复肠粘膜,有利于肠粘膜对水和钠的重吸收,使水和电解质分泌减少,缓解腹泻症状。锌还可以增加肠道分泌性lgA的分泌,提高机体抗病能力。

锌离子直接与损伤的肠粘膜接触，能更有效的加速肠粘膜细胞再生,修复肠粘膜，增加肠粘膜刷状缘酶的水平，既可起到蒙脱石和锌两种药的局部治疗作用，迅速缓解病人症状。

    临床上常用蒙脱石并加服锌制剂，以及用锌基蒙脱石治疗腹泻。

现有技术的不足在于蒙脱石无增强局部免疫的作用，仅发挥吸附病菌、病毒和粘膜保护的作用；锌离子无吸附性和粘膜保护作用，仅发挥其抑制病毒、增强局部免疫以控制细菌过度生长和早期病原菌清除的作用。蒙脱石制剂用法为“两餐间服用”，现临床上多为空腹或餐后1小时服用。锌制剂的不良反应是胃肠刺激可引起轻度恶心、呕吐和便秘等反应，为减轻锌制剂的不良反应，锌制剂宜餐后服用以减少胃肠道刺激。二者用法不一致，前者要求空腹服用，后者要求餐后服用，二者服用时间不一致而相互矛盾，给治疗和患者造成不便。由于二者间隔服用，锌在肠的上端即几乎吸收完全，锌离子不能到达肠下端的病变部位，锌离子不能直接与损伤的肠粘膜接触，不能发挥其局部治疗的疗效，仅发挥补锌的作用，不能发挥锌最好疗效。锌基蒙脱石由于在制备过程中锌离子完全进入蒙脱石的层间，服用后锌离子不能较快被置换进入液体，使锌不能在锌吸收较多的肠的上端释放，使锌吸收量少，生物利用度小，锌只发挥局部作用，而全身补锌的作用降低，同样不能发挥锌最好疗效，同时锌基蒙脱石中锌的比例大，当蒙脱石达到治疗量时，锌超量。

为克服现技术的不足，发挥锌的补锌和局部治疗作用，以取得最佳疗效，使之与蒙脱石治疗腹泻的作用增加，同时减少锌制剂胃肠道刺激，减少服药次数，提高依从性，便于服用方便，制备锌与蒙脱石复方。

锌与蒙脱石的复方在加水服用时，大部分锌离子与蒙脱石的阳离子进行交换进入蒙脱石层间，可避免锌引起的轻度恶心、呕吐不良反应。当进入肠道时，消化液的阳离子将蒙脱石层间的锌离子大部分置换出来，置换出锌离子被人体吸收，未置换的锌离子随覆盖在损伤肠粘膜上的蒙脱石进行较长时间释放，形成较高的局部浓度，发挥局部治疗作用。

本发明的优点在于同时发挥发挥锌的补锌和局部治疗作用，而不影响蒙脱石的疗效。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，提供治疗腹泻的锌与蒙脱石组成的复方药物。

本发明的另一目的在于提供锌与蒙脱石组成的复方药物的配比和制备方法。

所述的锌是含锌药用原料包括锌基蒙脱石、葡萄糖酸锌、硫酸锌、枸橼酸锌、醋酸锌、氯化锌、乳酸锌、甘氨酸锌、L-赖氨酸锌和甘草锌。

所述的锌基蒙脱石是按下述方法制备的：蒙脱石1g，加入7水硫酸锌0.15g,搅拌4小时,离心后用水洗涤2次,于100℃条件下烘干，磨细，过325目筛。

所述的锌与蒙脱石组成的复方药物的配比是根据不同锌药用原料中的锌与蒙脱石中离子交换量的不同和药效试验结果而采用不同的配比。

为实现上述目的通过以下技术方案来实现：取一定量的锌药用原料，用等量递加法与定量的蒙脱石及辅料混合均匀，分装。

具体实施方式：

实施例1：取葡萄糖酸锌4g、蒙脱石300g、葡萄糖75g，葡萄糖酸锌用等量递加法与蒙脱石及辅料混合均匀，分装。

实施例2：取葡萄糖酸锌5g、蒙脱石300g、葡萄糖75g，葡萄糖酸锌用等量递加法与蒙脱石及辅料混合均匀，分装。

实施例3：取葡萄糖酸锌6g、蒙脱石300g、葡萄糖75g，葡萄糖酸锌用等量递加法与蒙脱石及辅料混合均匀，分装。

实施例4：取硫酸锌3g、蒙脱石300g、葡萄糖75g，葡萄糖酸锌用等量递加法与蒙脱石及辅料混合均匀，分装。

实施例5：取硫酸锌4g、蒙脱石300g、葡萄糖75g，葡萄糖酸锌用等量递加法与蒙脱石及辅料混合均匀，分装。

实施例6：取乳酸锌5g、蒙脱石300g、葡萄糖75g，葡萄糖酸锌用等量递加法与蒙脱石及辅料混合均匀，分装。

实施例7：取乳酸锌6g、蒙脱石300g、葡萄糖75g，葡萄糖酸锌用等量递加法与蒙脱石及辅料混合均匀，分装。

实施例8：取乳酸锌7g、蒙脱石300g、葡萄糖75g，葡萄糖酸锌用等量递加法与蒙脱石及辅料混合均匀，分装。

实施例9：取乳酸锌8g、蒙脱石300g、葡萄糖75g，葡萄糖酸锌用等量递加法与蒙脱石及辅料混合均匀，分装。

实施例10：取甘氨酸锌1.5g、蒙脱石300g、葡萄糖75g，葡萄糖酸锌用等量递加法与蒙脱石及辅料混合均匀，分装。

实施例11：取甘氨酸锌2.5g、蒙脱石300g、葡萄糖75g，葡萄糖酸锌用等量递加法与蒙脱石及辅料混合均匀，分装。

实施例12：取甘氨酸锌3.5g、蒙脱石300g、葡萄糖75g，葡萄糖酸锌用等量递加法与蒙脱石及辅料混合均匀，分装。

实施例13：取锌基蒙脱石40g、蒙脱石260g、葡萄糖75g，葡萄糖酸锌用等量递加法与蒙脱石及辅料混合均匀，分装。

实施例14：取锌基蒙脱石50g、蒙脱石250g、葡萄糖75g，葡萄糖酸锌用等量递加法与蒙脱石及辅料混合均匀，分装。

实施例15：取锌基蒙脱石60g、蒙脱石250g、葡萄糖75g，葡萄糖酸锌用等量递加法与蒙脱石及辅料混合均匀，分装。

实验例1：

1 试剂

1.1 受试制剂：实施例1、实施例2、实施例3，药物配制：上述药物均用蒸馏水配成0.5ml含0.19g蒙脱石的混悬液，现用现配。

1.2 造模剂番泻叶水提液的制备：番泻叶100g，加蒸馏水800ml。煮沸15分钟，倒出滤液。按上法加蒸馏水再煮沸15分钟。合并2次滤液，浓缩至350ml。灌胃给小鼠0.6ml/20g小鼠。

2 实验动物

2.1 实验动物：KM小鼠50只，雌雄各半，体重27±2g。

4.1分组、给药及模型的建立：

4.1.1分组：KM小鼠50只，雌雄各半，随机分为正常对照组、模型组对照组、实施例1组、实施例2组、实施例3组，共5组，每组10只小鼠。

4.1.2给药：各组小鼠每日上午灌胃给相应药物，灌胃体积0.5ml/20g，模型组与正常对照组小鼠灌胃给等体积蒸馏水。连续给药7天。

4.1.3造模：除正常对照组10只小鼠外，其余小鼠包括模型组对照组、实施例1组、实施例2组、实施例3组，共40只小鼠每日下午灌胃给番泻叶水提液0.6ml/20g小鼠，建立小鼠肠粘膜损伤模型，连续给番泻叶水提液7天。

于末次给药后24小时，处死各组小鼠，剖检小鼠腹腔，肉眼观察小鼠小肠病变情况，取小鼠小肠送病理检查，观察小鼠肠粘膜病理变化情况。

4.2结果：

4.2.1小鼠一般状况：试验期间，除正常对照组外，各灌服番泻叶水提液的小鼠可见皮毛无光泽、少动等症状。个别动物出现肛周皮毛污秽，未见明显稀便。上述症状组间无明显差异。

4.2.3病理检查结果：

正常对照组：小肠组织结构正常。肠绒毛呈长指状向肠腔内突起，绒毛排列规整，上皮无明显变性、坏死，固有层大量小肠腺。肌层、外膜未见明显异常。

模型组：多数（8/10）空肠局部大范围肠绒毛脱落，明显变短甚至消失。肠腺萎缩，减少。损伤部位肌层明显变薄。

实施例1组：少数(3/9)空肠局部大范围肠绒毛脱落，变短。肠腺萎缩，减少。损伤部位肌层明显变薄。

实施例2组：少数(2/10)空肠局部大范围肠绒毛脱落，明显变短。肠腺萎缩，减少。损伤部位肌层略变薄。

实施例3组：少数(4/10)空肠局部小范围肠绒毛脱落，变短。肠腺萎缩，减少。损伤部位肌层变薄。

组织学观察结论：实施例1、实施例2、实施例3对番泻叶损伤肠粘膜的保护作用中，空肠损伤由轻到重：实施例2组、实施例1组、实施例3。

实验例2：

1 试剂

1.1 受试制剂：实施例4、实施例5、实施例6，药物配制：上述药物均用蒸馏水配成试验所需浓度，现用现配。

其余试剂、试验动物、试验方法同实验例1.

病理检查结果：

正常对照组：小肠组织结构正常。肠绒毛呈长指状向肠腔内突起，绒毛排列规整，上皮无明显变性、坏死，固有层大量小肠腺。肌层、外膜未见明显异常。

模型组：多数（7/10）空肠局部大范围肠绒毛脱落，明显变短甚至消失。肠腺萎缩，减少。损伤部位肌层明显变薄。

实施例4组：少数(4/10)空肠局部大范围肠绒毛脱落，变短。肠腺萎缩，减少。损伤部位肌层明显变薄。

实施例5组：少数(3/9)空肠局部大范围肠绒毛脱落，明显变短。肠腺萎缩，减少。损伤部位肌层变薄。

实施例6组：少数(2/10)空肠局部小范围肠绒毛脱落，变短。肠腺萎缩，减少。损伤部位肌层略变薄。

组织学观察结论：实施例4、实施例5、实施例6对番泻叶损伤肠粘膜的保护作用中，空肠损伤由轻到重：实施例4组、实施例5组、实施例6。

实验例3：

1 试剂

1.1 受试制剂：实施例7、实施例8、实施例9，药物配制：上述药物均用蒸馏水配成试验所需浓度，现用现配。

其余试剂、试验动物、试验方法同实验例1.

病理检查结果：

正常对照组：小肠组织结构正常。肠绒毛呈长指状向肠腔内突起，绒毛排列规整，上皮无明显变性、坏死，固有层大量小肠腺。肌层、外膜未见明显异常。

模型组：多数（7/10）空肠局部大范围肠绒毛脱落，明显变短甚至消失。肠腺萎缩，减少。损伤部位肌层明显变薄。

实施例7组：少数(4/10)空肠局部大范围肠绒毛脱落，变短。肠腺萎缩，减少。损伤部位肌层明显变薄。

实施例8组：少数(3/10)空肠局部大范围肠绒毛脱落，明显变短。肠腺萎缩，减少。损伤部位肌层变薄。

实施例9组：少数(1/9)空肠局部小范围肠绒毛脱落，变短。肠腺萎缩，减少。损伤部位肌层略变薄。

组织学观察结论：实施例4、实施例5、实施例6对番泻叶损伤肠粘膜的保护作用中，空肠损伤由轻到重：实施例9组、实施例8组、实施例7。

实验例4：

1 试剂

1.1 受试制剂：实施例13、实施例14、实施例15，药物配制：上述药物均用蒸馏水配成试验所需浓度，现用现配。

其余试剂、试验动物、试验方法同实验例1.

病理检查结果：

正常对照组：小肠组织结构正常。肠绒毛呈长指状向肠腔内突起，绒毛排列规整，上皮无明显变性、坏死，固有层大量小肠腺。肌层、外膜未见明显异常。

模型组：多数（9/10）空肠局部大范围肠绒毛脱落，明显变短甚至消失。肠腺萎缩，减少。损伤部位肌层明显变薄。

实施例13组：少数(3/10)空肠局部大范围肠绒毛脱落，变短。肠腺萎缩，减少。损伤部位肌层变薄。

实施例14组：少数(1/10)空肠局部大范围肠绒毛脱落，明显变短。肠腺萎缩，减少。损伤部位肌层略变薄。

实施例15组：少数(3/10)空肠局部小范围肠绒毛脱落，变短。肠腺萎缩，减少。损伤部位肌层变薄。

组织学观察结论：实施例13、实施例14、实施例15对番泻叶损伤肠粘膜的保护作用中，空肠损伤由轻到重：实施例14组、实施例13组、实施例15。

   试验结果：葡萄糖酸锌与蒙脱石的最佳配比为5∶300，硫酸锌与蒙脱石的最佳配比为3∶300，乳酸锌与蒙脱石的最佳配比为8∶300：，锌基蒙脱石与蒙脱石的最佳配比为50∶250。

实验例5：

一、试验材料

1 试剂

1.1 受试制剂：实施例2、实施例4、蒙脱石、葡萄糖酸锌、硫酸锌。

药物配制：实施例2、实施例4、蒙脱石用蒸馏水配成0.5ml含0.19g蒙脱石的混悬液，葡萄糖酸锌和硫酸锌分别按实施例2和实施例4的含锌量用蒸馏水配成与实施例2和实施例4相同锌浓度的溶液。现用现配。

1.2 锌测定试剂盒：组分：含Tris-HCl缓冲液和5-Br-PADAP显色液。规格200 ml（600T），批号：20100803，上虞市创烨生物有限公司生产。

1.3细菌： 大肠埃希氏菌O₁₁₁：K58（菌号：01810），由山东省卫生防疫站菌种室提供。

1.4培养基 ：

营养肉汤：上海伊华医学科技有限公司生产，批号：20080302。

纯化琼脂粉：国药集团化学试剂有限公司生产，批号：F20061025。

2 实验动物及饲养

2.1 实验动物： KM小鼠80只，雌雄各半，体重27±2g，由山东鲁抗医药股份有限公司动物中心提供，许可证号：SCXK（鲁）20080002。

2.2 动物实验室条件

动物饲养于普通级环境。

2.3 动物自由饮用自来水。

4、实验方法

4.1.菌种分离及培养  用1ml肉汤培养基稀释菌种后采用划平板方法涂布于普通固体培养基（营养肉汤+2%琼脂）中，37℃培养18小时后取生长良好的单个菌落接种于营养肉汤中，37℃培养18小时后使用比浊法计数细菌数，然后使用营养肉汤稀释至终浓度为5.2×10⁹个/ml的菌液备用。

4.2.模型的建立：昆明种小鼠90只，雌雄各半，随机选10只鼠为正常对照组（空白组），其余80只小鼠分别腹腔注射2.6亿/只大肠杆菌O₁₁₁，注射体积0.5ml/只，建立小鼠肠粘膜损伤模型。

4.3.分组与给药：造模后即刻将小鼠随机分为模型组、蒙脱石对照组、葡萄糖酸锌对照组、硫酸锌对照组、实施例2组、实施例4组、实施例2间隔组（蒙脱石和葡萄糖酸锌量同于实施例2的间隔服药组）、实施例4间隔组（蒙脱石和硫酸锌量同于实施例4的间隔服药组）。

蒙脱石对照组、葡萄糖酸锌对照组、硫酸锌对照组、实施例2组、实施例4组、实施例2间隔组、实施例4间隔组，共7组，每只10只小鼠。各组小鼠灌胃给药，灌胃体积0.5ml/20g。实施例2间隔组和实施例4间隔组蒙脱石与锌间隔2小时灌胃。连续给药3天，末次给药后2小时后处死小鼠，剖检小鼠腹腔，肉眼观察小鼠小肠病变情况，取小鼠小肠送病理检查，观察小鼠肠粘膜病理组织学变化情况。

5、实验结果：

5.1.小鼠一般状况：

试验期间，除正常对照组外，各组小鼠腹腔注射细菌4小时后、被毛粗乱无光、身体卷缩、少动等全身感染症状。该症状于染菌48小时后逐步消失，被毛基本恢复光泽，活动未见明显异常。

5.2.小鼠腹腔剖检结果：

正常对照组：小肠全长质软、色浅红，肠腔无扩张、粘连，无积液。肠壁表面未见明显出血等。

模型组：9/10只动物小肠与周围脏器不同程度粘连，其中6/10只动物肠系膜粘成团状，肠壁轻度充血，但肠段无扩张及梗阻。小肠与周围脏器不易分离，且肠腔内大范围多灶性黄色积液。

蒙脱石对照组：6/10只动物小肠与周围脏器不同程度粘连，其中1/10只动物肠系膜粘成团状，肠壁轻度充血，但肠段无扩张及梗阻。小肠与周围脏器易分离，肠腔内有少量黄色积液。

葡萄糖酸锌对照组：7/10只动物小肠与周围脏器不同程度粘连，其中2/10只动物肠系膜粘成团状，肠壁轻度充血，但肠段无扩张及梗阻。小肠与周围脏器易分离，肠腔内大范围多灶性黄色积液。

硫酸酸锌对照组：6/10只动物小肠与周围脏器不同程度粘连，其中2/10只动物肠系膜粘成团状，肠壁轻度充血，但肠段无扩张及梗阻。小肠与周围脏器易分离，肠腔内大范围多灶性黄色积液。

实施例2组：3/10只动物小肠与周围脏器不同程度粘连，未见肠系膜粘成团状，肠壁轻度充血，但肠段无扩张及梗阻。肠腔黄色积液量明显减少，范围减小。

实施例2间隔组：5/10只动物小肠与周围脏器不同程度粘连，其中3/10只动物肠系膜粘成团状，肠壁轻度充血，但肠段无扩张及梗阻。小肠与周围脏器易分离，肠腔内少量多灶性黄色积液。

实施例4组：4/10只动物小肠与周围脏器不同程度粘连，其中2/10只动物肠系膜粘成团状，肠壁轻度充血，但肠段无扩张及梗阻。小肠与周围脏器易分离，肠腔内少量黄色积液。

实施例4间隔组：6/10只动物小肠与周围脏器不同程度粘连，其中2/10只动物肠系膜粘成团状，肠壁轻度充血，但肠段无扩张及梗阻。小肠与周围脏器易分离，肠腔少灶性黄色积液。

5.4．病理检查结果：

正常对照组：小肠组织结构正常。小肠绒毛呈长指状向肠腔内突起，绒毛排列规整，上皮无明显变性、坏死，固有层大量小肠腺。肌层、外膜未见明显异常。

模型组：小肠绒毛大量脱落，明显变短。上皮细胞胞浆固缩，核深染。肠腺萎缩，明显减少。肌层明显变薄。

蒙脱石组：较模型组，小肠绒毛略增长、增宽，肌层增厚。

葡萄糖酸锌对照组：较模型组，小肠绒毛略增长、增宽，肌层增厚。

硫酸锌对照组：较模型组，小肠绒毛略增长、增宽，肌层增厚。

实施例2组、：较实施例2间隔组，绒毛略增长，明显增宽，呈粗指状。上皮细胞核深染程度减轻。肠腺增多。

实施例2间隔组：较蒙脱石组及葡萄糖酸锌组，绒毛增长、变细，呈短指状。上皮细胞体积略增大，胞浆增多。肠腺略增多。

实施例4组：较实施例4间隔组，绒毛略增长、增宽，呈粗指状。上皮细胞核深染程度减轻。肠腺增多。

实施例4间隔组：较蒙脱石组及硫酸锌组，绒毛增长、变细，呈短指状。上皮细胞体积略增大，胞浆增多。肠腺略增多。

6.实验结论：

病理检测显示：各给药组均较模型组有所改善。实施例2组较实施例2间隔组，绒毛略增长、增宽，呈粗指状。上皮细胞核深染程度减轻，肠腺略增多。实施例4组较实施例4间隔组绒毛增宽，肠腺略增多。蒙脱石与锌的复方较蒙脱石和锌间隔服用效果好。

Claims (6)

1.含锌药用原料和药用蒙脱石原料的复方制剂的制备方法及含锌药用原料与蒙脱石的最佳配比，其特征在于：含锌药用原料用等量递加法与蒙脱石及辅料混合均匀，分装。

2.根据权利要求1所述的含锌药用原料和药用蒙脱石原料的复方制剂的制备方法，其特征在于：含锌药用原料是锌基蒙脱石、葡萄糖酸锌、硫酸锌、枸橼酸锌、醋酸锌、氯化锌、乳酸锌、甘氨酸锌、L-赖氨酸锌和甘草锌。

3.根据权利要求1所述的含锌药用原料与蒙脱石的最佳配比，其特征在于：葡萄糖酸锌与蒙脱石的最佳配比是5∶300。

4.根据权利要求1所述的含锌药用原料与蒙脱石的最佳配比，其特征在于：硫酸锌与蒙脱石的最佳配比为3∶300。

5.根据权利要求1所述的含锌药用原料与蒙脱石的最佳配比，其特征在于：乳酸锌与蒙脱石的最佳配比为8∶300。

6.根据权利要求1所述的含锌药用原料与蒙脱石的最佳配比，其特征在于：锌基蒙脱石与蒙脱石的最佳配比为50∶250。