CN102321748A - 一种同时分析人基因组dna 22个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒及其使用方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种同时分析人基因组DNA22个基因座的五色荧光标记复合扩增试剂盒；本发明将22个基因座分为4组，共涉及5种颜色的荧光标记；本发明的荧光标记复合扩增试剂盒的灵敏度高，在DNA模板量为0.12ng的条件下，可检出全部22个基因座；适用于血滤纸、FTA卡采集样本的直接扩增。
Description
技术领域
本发明涉及一种22个基因座的荧光标记复合扩增检验试剂盒，具体是涉及一种同时分析人基因组DNA 22个基因座的五色荧光标记复合扩增试剂盒，该试剂盒可以应用于个体识别和亲子鉴定。
背景技术
短串联重复序列基因座（STR）是目前普遍应用的遗传标记。90年代初STR基因座多态性的发现，特别是STR基因座具有片段小容易扩增，适宜于检验微量和降解检材，而且各基因座的扩增条件相似而能够复合扩增，因而具有灵敏、准确、快速、信息量大等优点。尤其是在建立DNA数据库方面，STR复合扩增技术具有极大的优越性。因此美国FBI选择了13个STR基因座用于建立DNA数据库——CODIS（Combined DNA Index System）：CSF1PO、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA、TH01、TPOX、vWA。这些STR基因座通常被称为13个核心基因座。
正因为STR所具备的优点和应用前景，法医学界以及一些大的公司均投入大量的资金对其进行了开发性的研究。90年代中后期以美国ABI公司为代表的研发商建立起荧光复合扩增体系。目前最具代表性的是ABI（Applied Biosystems, USA）公司的IdentifilerTM和Promega（USA）公司的PowerPlex-16荧光检测试剂盒。这两个试剂盒均包括上述13个核心基因座。
长期的DNA检验实践表明，短串联重复序列基因座的遗传多态性在种族间存在一定的差异，各个基因座间差别也很大。在美国FBI推荐的13个核心基因座中，有部分基因座遗传多态性不高，或是不同人群间差异较大。由此给DNA检验技术的应用及其效率带来一定的影响。
专利ZL200510096613.6公开了一种同时分析人基因组DNA的多个基因座的荧光标记复合扩增系统，其特征在于：所述的15个基因座为：Amelogenin、D2S1338、D3S1358、D5S818、D6S1043、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、Penta E、CSF1PO、vWA、FGA。该专利提供了对15个基因座的分型结果，为4色荧光检测试剂盒。
我们对中国人群的短串联重复序列基因座的遗传多态性进行了深入的研究，并以此为依据开发新的短串联重复序列基因座的复合扩增检验试剂盒，以求在5色荧光检测试剂盒中，提供对包括Amelogenin在内的22个基因座的分型结果，同时提高试剂盒的累计个体识别能力和累积非父排除率。
发明内容
本发明的目的之一在于：提供一种通过复合扩增22个基因座来进行个体识别和亲子鉴定的荧光标记STR复合扩增检验试剂盒。涉及检测人基因组中具有多态性的遗传标记。本发明特别涉及用聚合酶链式反应在一个体系中同时扩增多个短串联重复基因座。
为了实现本发明的目的，采用如下技术方案：
一种同时分析人基因组DNA 22个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒，所述的22个基因座为：D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta E、D2S441、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、Penta D、D10S1248、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA、性别基因座Amelogenin；其特征在于：该试剂盒包括22个基因座对应的引物如下：
22个基因座对应的引物的浓度为：
所述的每个基因座对应的引物中至少有一个引物的5’端进行荧光染料标记。
所述的荧光染料标记物为6-FAM、HEX、TAMRA或ROX。
将所述22个基因座分组，具体为：D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta E和D2S441为第一组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为6-FAM、HEX、TEMRA和ROX的任意一种；TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、Penta D和D10S1248为第二组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为与第一组不同的荧光染料标记物；D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043为第三组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为与第一组和第二组都不同的荧光染料标记物；D8S1179、D5S818、D12S391、FGA，以及性别基因座Amelogenin为第四组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为与第一组、第二组和第三组都不同的荧光染料标记物；该试剂盒还设有内标，其选用橙色荧光标记，荧光标记物为SIZ。
所述的试剂盒由如下组成：
| 组分 | 体积 |
| Reaction Mix | 10.0 μL |
| 基因组DNA | 0.1-10ul含量为0.125-5ng |
| 权利要求1所述的引物 | 5.0 μL |
| 热启动Taq酶（5U/ μL） | 0.5 μL |
| sdH2O | 补足至25.0μL |
其中所述的Reaction Mix为----.MgCl2 7.5mM, Tris-HCl buffer 125mM,KCl 125mM,dNTPs 7.5m M ,BSA 2mg/ml
一种同时分析人基因组DNA 22个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒的使用方法，其特征在于按如下步骤实现：
A、扩增体系为：
| 组分 | 体积 |
| Reaction Mix | 10.0 μL |
| 基因组DNA | 0.1-10ul含量为0.125-5ng |
| 权利要求1所述的引物 | 5.0 μL |
| 热启动Taq酶（5U/ μL） | 0.5 μL |
| sdH2O | 补足至25.0μL |
B、扩增热循环
（l）将PCR扩增管置于热循环仪上；
（2）选择下面推荐的程序进行扩增；
（3）扩增后的样品应避光保存；
热循环仪的扩增程序
C、扩增产物在遗传分析仪上荧光检测
由去离子甲酰胺与试剂盒中分子量内标AGCU Marker SIZ-500组成上样混合物〔（0.5μl AGCU Marker SIZ-500（无锡中德美联生物技术有限公司））×（进样数）＋（12μl去离子甲酰胺）×（进样数）〕。将12.5μl上样混合物与1 μl扩增产物或试剂盒中等位基因分析标准物EX22 Allelic Ladder（无锡中德美联生物技术有限公司）混合，避免产生气泡。95℃变性3分钟，冰浴3分钟，并尽快电泳；用遗传分析仪检测分析；
D、分型分析
用片段分析软件GeneMapper分析步骤C中遗传分析仪检测收集的数据。
电泳采用多道或单道毛细管电泳。
其中基因组DNA样品来源于精斑、唾液斑、组织、血痕或血液。
一种同时分析人基因组DNA 22个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒的应用，其特征在于：该试剂盒用于个体识别、亲子鉴定。
具体解释
一、基因座的确定
对现有的STR基因座进行深入分析研究并优选新的高鉴别力基因座。对D8S1179、D21S11、D7S820、CSF1PO、D3S1358、D13S317、D16S539、TPOX、TH01、D5S818、vWA、D18S51、FGA、D2S1338、D19S433、Penta E、Penta D、D19S253、D12S391、D6S1043、D6S474、D12ATA63、D22S1045、D10S1248、D1S1677、D11S4463、D1S1627、D3S4529、D2S441、D6S1017、D4S2408、D17S1301、D1GATA113、D18S853、D20S482、D14S1434、D9S1122、D2S1776、D10S1435和D5S2500等40个STR基因座在中国人群的遗传多态性开展调查研究。对5000多名个体进行基因型检测，根据各基因座等位基因的分布频率计算个体识别能力（DP）、杂合度（H）、非父排除率（PE）等数据，表明在24个STR基因座中，除TH01、TPOX基因座外，其余各基因座的DP值均接近0.9，H均大于0.7，PE值大都在0.5以上，这表明它们在法医学上有较好的应用价值。TH01、TPOX基因座在多态性方面较差，但也符合法医应用的要求。多态信息含量（PIC）也是衡量DNA基因座应用价值大小的指标之一。本试剂盒所选STR基因座PIC均大于0.5，故可为生物学检材的检验提供相当大的信息量。
在考虑到与现有数据库兼容的基础上，最终确立了STR基因座构成，即D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta E、D2S441、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、Penta D、D10S1248、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA。该基因座构成突破了现有13个核心基因座的模式，提供了22个基因座的分型结果，提高了试剂盒的累计个体识别能力和累积非父排除率，更加符合法医学DNA检验的技术要求。
二、荧光标记复合扩增体系的基因座组合方案设计
本研究对荧光染料进行了鉴别、遴选，选用了蓝、绿、黄、红、橙五种荧光标记物，优选了5色荧光组合方案。
在确定5色荧光组合方案的基础上，通过大量反复实验，在国内首次自行设计出基因座组合方式，以下为其中一种产品组合方式：D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta E和D2S441为一组，采用蓝色荧光染料标记，荧光标记物为6-FAM；TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、Penta D和D10S1248为一组，采用绿色荧光染料标记，荧光标记物为HEX；D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043为一组，采用黄色荧光染料标记，荧光标记物为TAMRA；D8S1179、D5S818、D12S391、FGA，以及性别基因座Amelogenin为一组，采用红色荧光染料标记，荧光标记物为ROX。内标选用橙色荧光标记，荧光标记物为SIZ。这种独创的基因座组合方式使得仅需标记四种荧光就可实现这22个基因座的同时检测分析。
在组合方案的基础上，根据22个基因座所在位置的侧翼序列进行引物设计，实现22个基因座在同一反应中的复合扩增。
本发明在国内首次实现22个基因座同时在单一反应中的复合扩增，并以五色荧光标记进行检验。
三、荧光标记STR 复合扩增体系的优化及建立
1 、基因座之间平衡度的调配
随着复合扩增体系中基因座数目的增加，由于竞争的影响，各基因座的相对平衡控制难度加大，通过多次反复实验，调节引物浓度与配比，最终达到平衡。各基因座引物序列及引物浓度见下表：
以表格中的引物浓度，配置成复扩引物混合物。
2 、复合扩增条件的建立
先对22个基因座的单一扩增条件进行优化，在成功地建立了单个基因座扩增条件的基础上，研究22个基因座复合扩增PCR反应条件，通过大量的反复实验确定了复合扩增中的各个参数，如，循环参数、退火温度、缓冲液离子强度、酶量、复合扩增反应体积的变化以及模板DNA量等，使扩增产物达到平衡、特异的要求，建立起复合扩增体系，同时扩增出22个基因座。
注：本发明采用引物合成和标记用ABI 394合成仪完成 ，委托上海生工公司合成。
有益效果
1、本发明采用22个基因座对应的引物扩增，其在同一反应体系中进行。发明人筛选并构建了上述引物，并对其浓度进行了限定，克服了随着复合扩增体系中基因座数目的增加，由于竞争的影响，各基因座的相对平衡控制难度加大，难以达到平衡的难题。
2、本发明所采用的22个基因座被位于该基因座两侧的一对引物扩增，其中每对引物中至少有一个引物的5’端进行荧光染料标记；本发明提供了荧光标记复合扩增体系的基因座组合设计方案。本发明分别选用了蓝、绿、黄、红、橙5色荧光组合方案。这种基因座组合方式使得仅需标记四种荧光就可实现这22个基因座在同一反应中扩增。并且分组好处在于同一分子量范围的基因座标记分别采用不同颜色标记，防止了相似片段重合，提高了检测的灵敏度；本发明的荧光标记复合扩增试剂盒扩增多个基因座采用聚合酶链式反应进行，检测方法采用多道或单道毛细管电泳。
3、本发明还涉及一种采用该荧光标记复合扩增检验试剂盒对DNA样品进行分析的方法；其中，本发明适用的DNA样品来源于精斑、唾液斑、组织、血痕或血液等。
4、本发明中21个短串联重复序列基因座STR基因座构成为：D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta E、D2S441、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、Penta D、D10S1248、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA。本发明对上述21个短串联重复序列基因座及其等位基因遗传特征进行了深入的研究，表明这21个短串联重复序列基因座在人群中具有高度的遗传多态性和良好的等位基因频率分布。将上述21个短串联重复序列基因座加上用于鉴别人性别的Amelogenin基因座构成本发明的复合扩增检验试剂盒。
5、本发明提供了一种通过复合扩增22个基因座来进行个体识别和亲子鉴定的检验试剂盒。该基因座构成，突破了现有13个核心基因座的模式，更加符合法医学DNA检验的技术要求与中国人群的群体遗传学特征，并兼顾了国际数据交流与共享的需求。
6、本发明提供的检验试剂盒达到目前国际上STR荧光标记复合扩增试剂盒的最高水平。
附图说明
图1 对标准品9947A样品的STR分型结果；
图2：等位基因分型标准物；
图3-6：对实施例3样品中的STR分型结果；其中FU代表被检父，N代表女孩，Z代表男孩。
具体实施方式
下面的实施例用来进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明的任何限制。
实施例1 对标准品9947A的验证试验
一种同时分析人基因组DNA 22个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒，由如下组成：
| 组分 | 体积 |
| Reaction Mix | 10.0 μL |
| 22个基因座对应的引物 | 5.0 μL |
| 热启动Taq酶（5U/ μL） | 0.5 μL |
| sdH2O | 补足至25.0μL |
其中所述的Reaction Mix为MgCl2 7.5mM, Tris-HCl buffer 125mM,KCl 125mM,dNTPs 7.5m M ,BSA 2mg/mL。
其中22个基因座对应的引物及其引物浓度为：
所述的每个基因座对应的引物中至少有一个引物的5’端进行荧光染料标记。
所述的荧光染料标记物为6-FAM、HEX、TAMRA或ROX。
将所述22个基因座分组，具体为：D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta E和D2S441为第一组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为6-FAM、HEX、TEMRA和ROX的任意一种；TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、Penta D和D10S1248为第二组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为与第一组不同的荧光染料标记物；D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043为第三组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为与第一组和第二组都不同的荧光染料标记物；D8S1179、D5S818、D12S391、FGA，以及性别基因座Amelogenin为第四组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为与第一组、第二组和第三组都不同的荧光染料标记物；该试剂盒还设有内标，其选用橙色荧光标记，荧光标记物为SIZ。标准品9947A（Promega公司 美国）。
上述试剂盒的使用方法：
A、扩增体系为：
| 组分 | 体积 |
| Reaction Mix | 10.0 μL |
| 基因组DNA（9947A Promega USA ） | 0.1-10ul含量为0.125-5ng |
| 如上的22个基因座对应的引物 | 5.0 μL |
| 热启动Taq酶（5U/ μL） | 0.5 μL |
| sdH2O | 补足至25.0μL |
B、扩增热循环
（l）将PCR扩增管置于热循环仪上；
（2）选择下面推荐的程序进行扩增；
（3）扩增后的样品应避光保存；
热循环仪的扩增程序
C、扩增产物在遗传分析仪上荧光检测
由去离子甲酰胺与试剂盒中分子量内标AGCU Marker SIZ-500组成上样混合物〔（0.5μl AGCU Marker SIZ-500（无锡中德美联生物技术有限公司））×（进样数）＋（12μl去离子甲酰胺）×（进样数）〕。将12.5μl上样混合物与1 μl扩增产物或试剂盒中等位基因分析标准物EX22 Allelic Ladder（无锡中德美联生物技术有限公司）混合，避免产生气泡。95℃变性3分钟，冰浴3分钟，并尽快电泳；用遗传分析仪检测分析；
D、分型分析
用片段分析软件GeneMapper分析步骤3中遗传分析仪检测收集的数据，得到实际样品的分型数据，结果见附图1。
讨论：选用标准品9947A（Promega公司 美国）是公知标准DNA，其序列已知，可以用其去验证本试剂盒检测结果的正确性，通过分型比较获知，本试剂盒获得数据和已知信息一致。且标准品DNA含量也是已知的，也能检测试剂盒的灵敏度。
实施例2
应用22个基因座的荧光标记复合扩增检验试剂盒进行单亲亲子鉴定
1、收集亲子鉴定案件中的血样：本实验中样品由XX亲子鉴定机构提供。DNA提取采用Chelex-100法分别提取2个全血样本的基因组DNA：取0.5～5μl全血置于灭菌的1.5ml离心管中， 加入sdH2O 1ml于管中，振荡数秒；置于室温10分钟后，振荡数秒， 12,000rpm离心3分钟，弃上清液，保留足够上清液盖没沉淀，勿搅起沉淀；加入200μl 5%的Chelex-100，振荡数秒；于56℃保温30分钟，振荡数秒；沸水浴10分钟，振荡数秒； 12,000rpm离心5分钟，上清为提取得到的基因组DNA。基因组DNA的提取参考《GA/T 383-2002 法庭科学DNA实验室检验规范》进行。也可以直接以血样检测，通过1.2mm孔径血滤纸片或FTA卡血样片实行。
2、使用试剂盒扩增基因组DNA；一种同时分析人基因组DNA 22个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒，由如下组成：
| 组分 | 体积 |
| Reaction Mix | 10.0 μL |
| 22个基因座对应的引物 | 5.0 μL |
| 热启动Taq酶（5U/ μL） | 0.5 μL |
| sdH2O | 补足至25.0μL |
其中所述的Reaction Mix为MgCl2 7.5mM, Tris-HCl buffer 125mM,KCl 125mM,dNTPs 7.5m M ,BSA 2mg/mL。
其中22个基因座对应的引物及其引物浓度为：
所述的每个基因座对应的引物中至少有一个引物的5’端进行荧光染料标记。
所述的荧光染料标记物为6-FAM、HEX、TAMRA或ROX。
将所述22个基因座分组，具体为：D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta E和D2S441为第一组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为6-FAM、HEX、TEMRA和ROX的任意一种；TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、Penta D和D10S1248为第二组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为与第一组不同的荧光染料标记物；D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043为第三组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为与第一组和第二组都不同的荧光染料标记物；D8S1179、D5S818、D12S391、FGA，以及性别基因座Amelogenin为第四组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为与第一组、第二组和第三组都不同的荧光染料标记物；该试剂盒还设有内标，其选用橙色荧光标记，荧光标记物为SIZ。
该试剂盒的使用方法：
A、扩增体系为：
| 组分 | 体积 |
| Reaction Mix | 10.0 μL |
| 基因组DNA（步骤1） | 0.1-10ul含量为0.125-5ng |
| 如上的22个基因座对应的引物 | 5.0 μL |
| 热启动Taq酶（5U/ μL） | 0.5 μL |
| sdH2O | 补足至25.0μL |
B、扩增热循环
（l）将PCR扩增管置于热循环仪上；
（2）选择下面推荐的程序进行扩增；
（3）扩增后的样品应避光保存；
热循环仪的扩增程序
C、扩增产物在遗传分析仪上荧光检测
由去离子甲酰胺与试剂盒中分子量内标AGCU Marker SIZ-500组成上样混合物〔（0.5μl AGCU Marker SIZ-500（无锡中德美联生物技术有限公司））×（进样数）＋（12μl去离子甲酰胺）×（进样数）〕。将12.5μl上样混合物与1 μl扩增产物或试剂盒中等位基因分析标准物EX22 Allelic Ladder（无锡中德美联生物技术有限公司）混合，避免产生气泡。95℃变性3分钟，冰浴3分钟，并尽快电泳；用遗传分析仪检测分析；
D、分型分析
用片段分析软件GeneMapper分析步骤3中遗传分析仪检测收集的数据，将样品分析数据和EX22 Allelic Ladder（见附图3）比较，得到实际样品的分型数据。
3、结论
检测图谱见图3-6，结果显示（见表1），被检父与某女孩在检测的21个基因座中均符合遗传规律，计算得累计亲权指数CPI为3.669×108，相对亲权概率（RCP）大于99.9999%，可以认定被检父为该女孩的生物学父亲。而该男孩与被检父在VWA、D18S51、D2S1338三个基因座上不符合遗传规律，排除亲子关系。
表1 AGCU EX22 的检测结果
注：下划线表示不符合遗传规律的基因座
单亲亲子鉴定在亲子鉴定中具有一种特殊性，由于亲代中某一方不能够提供相关遗传信息，其亲权概率也必然较低，因此，为保证亲权鉴定的准确性，往往需要检测更多的基因座。在二联体亲子鉴定中，相对亲权概率（RCP）大于99.975%时，认定存在亲缘关系；出现3个或3个以上STR基因座违反遗传规律时，就可以达到排除标准而排除亲缘关系。
在本例中，本实验室选用常规的PowerPlex 16试剂盒检测15个基因座，发现该男孩在其中的VWA和 D18S51两个基因座不符合遗传规律，相对亲权概率（RCP）为99.654%，不能排除亲缘关系。在单亲亲子鉴定中，若检测20到24个基因座时可明显提高非父排除率。运用本试剂盒同时检测21个基因座发现，本例中的男孩同时有3个基因座违反遗传规律，可以排除亲缘关系，而本例中的女孩在21个基因座中均符合遗传规律，相对亲权概率（RCP）高达99.9999%以上，可以做出认定结论。
SEQUENCE LISTING
<110> 无锡中德美联生物技术有限公司
<120> 一种同时分析人基因组DNA
22个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒及其使用方法和应用
<130>
<160> 44
<170> PatentIn version 3.3
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<400> 8
ccagcctcca ggttcccacc 20
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
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agattgaagt gagccgagat 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
aagtgttaaa ggggatcagg 20
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
cttcctgaac ccagtcctct 20
<210> 12
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
acacccagcc ataaataaca 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
cactagcacc cagaaccgtc 20
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<213> 人工序列
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cttctgtcct tgtcagcgtt 20
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<213> 人工序列
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caggctctag cagcagctca 20
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<213> 人工序列
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gggcttccga gtgcaggtca 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
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tattcagtaa gttaaaggat tgcagga 27
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<213> 人工序列
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tggagtggag gtgcctaaag ac 22
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<213> 人工序列
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cacttcgtgg tggtcagg 18
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aacccacatg gtgccaga 18
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<213> 人工序列
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tggaaggtcg aagctgaagt 20
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ctcttagcct gtggcgtgtc 20
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atcccgtgaa gtagttattg 20
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<213> 人工序列
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atcctgtgag aaaccatact 20
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gaaggaaaga aggtaggaag 20
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cagtgatttc tgatattttg 20
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tatgtgactt ggattgatct 20
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gatagataca aaggatagat 20
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ctgttatggg acttttctca 20
<210> 30
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<213> 人工序列
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tgtattagtc aatgttctcc 20
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acccgactac cagcaacaac 20
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ttcttgagcc cagaaggtta 20
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ttctcctgct cttgaacata 20
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tgtttccttt catacagaat 20
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ccctgggctc tgtaaagaat agtg 24
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tagtctcgaa tttgaccctt cgac 24
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cattcgtatc tatctgtcta 20
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tcaacaggat caatggatgc 20
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gttgtaggta ttatcacggt 20
Claims (10)
1.一种同时分析人基因组DNA 22个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒，所述的22个基因座为：D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta E、D2S441、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、Penta D、D10S1248、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA、性别基因座Amelogenin；其特征在于：该试剂盒包括22个基因座对应的引物如下：
。
2.根据权利要求1所述的一种同时分析人基因组DNA 22个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒，其特征在于：22个基因座对应的引物的浓度为：
。
3.根据权利要求1或2所述的一种同时分析人基因组DNA 22个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒，其特征在于所述的每个基因座对应的引物中至少有一个引物的5’端进行荧光染料标记。
4.根据权利要求3所述的一种同时分析人基因组DNA 22个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒，其特征在于所述的荧光染料标记物为6-FAM、HEX、TAMRA或ROX。
5.根据权利要求4所述的一种同时分析人基因组DNA 22个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒，其特征在于将所述22个基因座分组，具体为：D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta E和D2S441为第一组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为6-FAM、HEX、TEMRA和ROX的任意一种；TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、Penta D和D10S1248为第二组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为与第一组不同的荧光染料标记物；D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043为第三组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为与第一组和第二组都不同的荧光染料标记物；D8S1179、D5S818、D12S391、FGA，以及性别基因座Amelogenin为第四组，该组基因座对应的引物的荧光标记物为与第一组、第二组和第三组都不同的荧光染料标记物；该试剂盒还设有内标，其选用橙色荧光标记，荧光标记物为SIZ。
6.根据权利要求1-5任意一种所述的一种同时分析人基因组DNA 22个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒，其特征在于所述的试剂盒由如下组成：
其中所述的Reaction Mix为----.MgCl2 7.5mM, Tris-HCl buffer 125mM,KCl 125mM,dNTPs 7.5m M ,BSA 2mg/ml。
7.一种同时分析人基因组DNA 22个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒的使用方法，其特征在于按如下步骤实现：
A、扩增体系为：
B、扩增热循环
（l）将PCR扩增管置于热循环仪上；
（2）选择下面推荐的程序进行扩增；
（3）扩增后的样品应避光保存；
热循环仪的扩增程序
C、扩增产物在遗传分析仪上荧光检测
由去离子甲酰胺与试剂盒中分子量内标AGCU Marker SIZ-500组成上样混合物〔（0.5μl AGCU Marker SIZ-500）×（进样数）＋（12μl去离子甲酰胺）×（进样数）〕将12.5μl上样混合物与1 μl扩增产物或试剂盒中等位基因分析标准物EX22 Allelic Ladder混合，避免产生气泡；95℃变性3分钟，冰浴3分钟，并尽快电泳；用遗传分析仪检测分析；
D、分型分析
用片段分析软件GeneMapper分析步骤C中遗传分析仪检测收集的数据。
8.根据权利要求7一种同时分析人基因组DNA 22个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒的使用方法，其特征在于：电泳采用多道或单道毛细管电泳。
9.根据权利要求7一种同时分析人基因组DNA 22个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒的使用方法，其特征在于：其中基因组DNA样品来源于精斑、唾液斑、组织、血痕或血液。
10.一种同时分析人基因组DNA 22个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒的应用，其特征在于：该试剂盒用于个体识别、亲子鉴定。
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