CN102297902A

CN102297902A - 一种检测中药中雪腐镰刀菌烯醇和脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素的方法

Info

Publication number: CN102297902A
Application number: CN201010209190XA
Authority: CN
Inventors: 杨美华; 岳延涛; 张晓飞
Original assignee: Institute of Medicinal Plant Development of CAMS and PUMC
Current assignee: Institute of Medicinal Plant Development of CAMS and PUMC
Priority date: 2010-06-25
Filing date: 2010-06-25
Publication date: 2011-12-28

Abstract

一种检测中药中雪腐镰刀菌烯醇和脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素的方法，包括样品的提取，纯化及检测，所述的样品采用乙腈-水(80∶20，V/V)高速匀质提取，过滤，滤液过DON专用净化柱进行纯化，乙腈-水(80∶20，V/V)清洗柱子两次，合并过柱液，减压浓缩至干，加流动相溶解残渣，过滤后制成样品溶液。所述样品测定方法包括：高效液相色谱-紫外检测法测定，检测波长218nm，用C18色谱柱分离，水-乙腈-甲醇(90∶5∶5，V/V/V)为流动相，进样量50μL。液-质联用确证，用C18柱分离，大气压化学电离方式电离，负离子监测模式，全扫描，扫描范围200-400m/z，进样量10μL。

Description

一种检测中药中雪腐镰刀菌烯醇和脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素的方法

技术领域：

本发明涉及一种检测中药中雪腐镰刀菌烯醇和脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素的方法，特别是涉及采用高效液相色谱-紫外检测法测定，液相色谱-质谱联用确证中药中雪腐镰刀菌烯醇和脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素的方法。

背景技术：

雪腐镰刀菌烯醇(Nivalenol，NIV)和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)毒素是两种最主要的B类单端孢霉烯族毒素，属镰刀菌毒素，是镰刀菌属中多种真菌所产生的次生代谢产物，在自然界中分布极为广泛，是自然发生的最危险的食品、农产品污染物，对人畜健康危害十分严重。DON是摄食与生长抑制剂，其毒性作用表现为厌食，恶心呕吐，腹泻，代谢紊乱等，研究发现DON还具有很强的细胞毒性，并对免疫系统和造血系统有损害。NIV常与DON共存，其在急性毒性、皮肤毒性、细胞毒性和其他生物作用方面均比DON强10倍。

由于镰刀菌为土壤习居菌，很多中药易受到镰刀菌的侵染，是很多根和根茎类药材根腐病的主要致病菌，而上述镰刀菌中部分为产毒菌，可产生NIV和DON毒素，因此，很有必要对中药中NIV和DON毒素进行研究，建立毒素的检测方法，制订其合理的限量标准，以保证中药的安全有效。

发明内容

到目前为止，国内外报道的方法大多仅限于对食品、农产品以及饲料NIV和DON毒素的分析，对中药中NIV和DON的分析，目前还是空白。因此对中药中NIV和DON毒素测定方法的建立研究迫在眉睫。现有的测定食品、农产品以及饲料中的NIV和DON毒素的方法，由于样品基质相对简单，干扰较小，一般都较容易测定。本发明克服现有技术不足，选择了适用于中药中NIV和DON毒素的提取、净化方法，优化了高效液相，液质条件，保证样品处理快捷简便，含量测定结果准确性高，重现性好，故采用该方法能更加准确的对不同基质中药中的NIV和DON毒素进行测定。

本发明是通过采用高效液相色谱-紫外检测法测定中药中的NIV和DON毒素的方法，同时建立了中药中NIV和DON毒素的液相色谱-质谱联用确证法。

具体的不同基质中药中NIV和DON毒素测定的方法，可以通过以下步骤实现：

仪器、药品及材料：

仪器：

Waters 600高效液相色谱系统，美国Waters公司，包括：

Waters 600控制器；

Waters 600色谱泵；

Waters 486紫外可见光检测器；

Empower色谱工作站；

CBL Model 100型柱温箱，美国Photoelectron Technology公司；

AgelaVenusilMPC18色谱柱，北京艾杰尔科技有限公司；

RE-52型旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；

GF-1型高速均质器，江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司；

Puri ToxSR TC-T200呕吐毒素(DON)专用净化柱，美国Trilogy分析实验室。

对照品：

DON和NIV标准品都购自日本WAKO公司，纯度≥99％；色谱分析用乙腈、甲醇均为为色谱纯，美国Thermo Fisher科技公司；水为娃哈哈纯净水；其余试剂均为分析纯。。

样品：

所测中药样品均为市场上随机购买而来，经北京协和医学院药用植物研究所张本刚教授鉴定，低温干燥后备用。

1、高效液相色谱检测法测定中药中的雪腐镰刀菌烯醇和脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素

a.色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，紫外检测器，检测波长：218±2nm，以水-乙腈-甲醇为流动相，流速：0.8-1.0mL/min；柱温20-30℃。

b.溶液配制：

对照品溶液的制备：取NIV和DON标准品适量，加流动相或乙腈制成溶液；

c.样品溶液的制备：

样品提取：取药材粉末，置具塞锥形瓶中，加乙腈-水混合溶剂，提取，静置，过滤，滤液备用。

样品净化：吸取上述滤液到呕吐毒素专用净化柱顶端，过柱，收集纯化液到梨形瓶中，加乙腈-水(80：20，V/V)洗柱两次，收集至上述梨形瓶中，减压蒸干。残渣加甲醇或流动相溶解，过滤后备用。

d.测定法：分别精密吸取对照品和样品溶液，注入液相色谱仪，测定。

2、采用高效液相色谱-质谱联用法对阳性结果进行确证。

a.液相条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-醋酸铵水为流动相；柱温20-30℃；

b.质谱条件：用大气压化学电离方式电离；选择负离子监测模式；全扫描模式扫描。

c.测定法：分别精密吸取对照品和样品溶液，注入高效液相色谱-质谱联用系统，测定。

上述的中药中NIV和DON毒素的测定方法，优选以下步骤：

a.色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，紫外检测器，检测波长：218±2nm，以水-乙腈-甲醇(88-90∶5-6∶5-6，V/V/V)为流动相，流速：0.8-1.0mL/min；柱温20-30℃。

b.溶液配制：

对照品溶液的制备：取NIV和DON毒素标准品适量，加乙腈或流动相制成每mL含80-120μg/mL溶液；

c.样品溶液的制备：

样品提取：取药材粉末20-30g(精确至0.1g)，置具塞锥形瓶中，加80-120mL乙腈-水(80∶20，V/V)混合溶剂，用高速均质器提取2min，静置，过滤，滤液备用。

样品净化：吸取上述滤液4mL到呕吐毒素专用净化柱顶端，过柱，收集纯化液到25mL梨形瓶中，加4-6mL乙腈-水(80∶20，V/V)洗柱两次，收集至上述梨形瓶中，减压蒸干。残渣加1.0-1.2mL流动相溶解，0.45μm滤膜过滤后备用。

d.测定法：分别精密吸取对照品和样品溶液40-50μL，注入液相色谱仪，测定。

2、采用高效液相色谱-质谱联用法对阳性结果进行确证。

a.液相条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1％醋酸铵水(15-25∶75-85，V/V)为流动相；柱温20-30℃；

b.质谱条件：用大气压化学电离方式电离；选择负离子监测模式；干燥气流速2.5±0.5L/min；干燥气温度380-400℃；碎裂电压140-160V；全扫描模式扫描。

c.测定法：分别精密吸取对照品和样品溶液5-10μL，注入高效液相色谱-质谱联用系统，测定。

本发明中药中NIV和DON毒素的测定方法，更优选的技术方案可以按下列测定步骤进行：

1、高效液相色谱检测法测定中药中的NIV和DON毒素

a.色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，紫外检测器，检测波长：218nm，以水-乙腈-甲醇(90∶5∶5，V/V/V)为流动相，流速：0.8mL/min；柱温25℃。

b.溶液配制：

对照品溶液的制备：取NIV和DON标准品适量，加乙腈制成每ml含100μg/mL溶液；

c.样品溶液的制备：

样品提取：取药材粉末25.0g(精确至0.1g)，置具塞锥形瓶中，加100mL乙腈-水(80∶20，V/V)混合溶剂，用高速均质器提取2min，静置，过滤，滤液备用。

样品净化：吸取上述滤液4mL到呕吐毒素专用净化柱顶端，过柱，收集纯化液到25mL梨形瓶中，加4mL乙腈-水(80∶20，V/V)洗柱两次，收集至上述梨形瓶中，60℃减压蒸干。残渣加1mL流动相水-乙腈-甲醇(90∶5∶5，V/V/V)溶解，0.45μm滤膜过滤后备用。

d.测定法：分别精密吸取对照品和样品溶液50μL，注入液相色谱仪，测定。

2、采用高效液相色谱-质谱联用法对阳性结果进行确证。

a.液相条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1％醋酸铵水(20∶80，V/V)；柱温25℃；

b.质谱条件：用大气压化学电离方式电离；选择负离子监测模式；干燥气流速2.5L/min；干燥气温度400℃；碎裂电压150V；全扫描模式扫描，扫描范围200-400m/z。

c.测定法：分别精密吸取对照品和样品溶液10μL，注入高效液相色谱-质谱联用系统，测定。

经过多次重复试验，确认方法简便，结果准确，可作为中药中NIV和DON毒素的测定方法。

本发明提供了不同中药中NIV和DON毒素的高效液相-紫外检测法；不同中药中NIV和DON毒素的液相色谱-质谱确证法。结果准确，重现性好，可作为不同基质中药中NIV和DON毒素的测定方法。

1、高效液相色谱检测法测定中药中的NIV和DON毒素

(1)净化方法的选择

中药中成分复杂，样品提取液中含有大量杂质，选用合适的净化柱处理样品是很重要的，试验以三七为代表性样品，以其加样回收率为指标，对几种常用的净化柱进行了比较优选，结果如表1-1。实验最终选择T200呕吐毒素(DON)专用净化柱为前处理小柱。

表1-1净化方法筛选结果

(2)提取溶剂体系的选择

在样品的提取阶段，选择适当极性的提取溶剂对提高回收率十分重要。我们比较了甲醇-水(80∶20，V/V)、甲醇-水(70∶30，V/V)、乙腈-水(84∶16，V/V)、乙腈-水(80∶20，V/V)和乙腈-水(70∶30，V/V)这几种不同提取溶剂的回收率情况。结果见表1-2。当采用甲醇-水(70∶30，V/V)做为提取溶剂时的回收率最低。而采用乙腈-水(80∶20，V/V)做为提取溶剂时，回收率最高，因此我们确定了最佳的提取溶剂为乙腈-水(80∶20，V/V)。

表1-2提取溶剂筛选结果

(3)最低检出限和定量限

根据信噪比S/N≥3为该物质的最低检出限，NIV的最低检出限为2ng；DON的最低检出限为2.5ng；

根据信噪比S/N≥10为该物质的最低定量限，NIV的最低定量限为4ng，DON的最低定量限为5ng。

(4)标准曲线

取NIV和DON混标溶液，稀释得到不同浓度(0.2、1、5、10、20μg/mL)的混标溶液，分别进样，获得的色谱峰峰面积(A)对NIV和DON的质量浓度(C-μg/mL)作回归，得到NIV标准曲线为：A＝65424C+3288.2，r＝0.9999，线性范围为0.2-20μg/mL；得到DON标准曲线为：A＝61734C-3240.1，r＝0.9999，线性范围为0.2-20μg/mL。线性关系考察结果分别见表1-3，表1-4。

表1-3NIV线性关系考察结果

表1-4DON线性关系考察结果

(5)日内精密度实验

精密吸取同一混标溶液，按上述色谱条件连续进样6次，计算NIV和DON的峰面积值，结果见表1-5。

表1-5内精密度试验结果

(6)日间精密度实验

精密吸取同一混标溶液，按上述色谱条件每天进样1次，连续进样5天，计算NIV和DON的峰面积值，结果见表1-6。

表1-6日间精密度试验结果

(7)重复性实验

精密吸取同一标准品溶液，按正文色谱条件分别在0、2、4、8、12h测定，结果见表1-7。

表1-7稳定性实验结果

(8)回收率实验

本实验中采用三七、麦芽、神曲三种药材，这三种药材代表了常用中药的三种基质，且这三种药材经过呕吐毒素专用净化柱处理之后，进HPLC-UV检测，对添加的标准品检测无干扰，故将其用来做回收率实验。

本实验添加了4个水平的标准品溶液：水平1：NIV和DON的浓度为10000μg/kg；水平2：NIV和DON的浓度为5000μg/kg；水平3：NIV和DON的浓度为1000μg/kg；水平4：NIV和DON的浓度为500μg/kg，每组实验均重复3次，n＝3。

准确称取20g药材粉末，加入适量标准溶液，挥干溶剂后，按上述方法制备样品溶液和检测，按外标法测定其含量，计算加样回收率结果见表1-8和表1-9。

表1-8NIV加样回收率的测定

表1-9DON加样回收率的测定

2、液相色谱-质谱分析条件：

液相条件：Phenomenex Gemini C18色谱柱(150mm×2mm i.d.，5μm)；流动相：甲醇-0.1％醋酸铵水(20∶80，V/V)系统；流速：0.2mL/min；柱温25℃；进样量10μL。

质谱条件：离子化方式，大气压化学电离(APCI)；离子极性，负离子；干燥气流速2.50L/min；干燥气温度400℃；碎裂电压150V；SCAN模式扫描，扫描范围200-400m/z。

中药成分复杂，采用高效液相进行分析时，常会出现假阳性结果。因此，仅仅通过色谱峰的保留时间进行鉴别，有可能给分析结果造成误差。为了排除干扰和消除误差，本发明采用了HPLC-APCI-MS联用技术对加样样品进行了确证，通过总离子流图确定NIV和DON毒素的保留时间，确定了该方法可适用于中药中NIV和DON的确证检测。

根据质谱图可以确定NIV毒素的特征离子为：m/z 371([M+CH₃COO]^-)，m/z 311([M-H]^-)，m/z281([M-H-CH₂O]^-)，m/z 245([M-H-CH₂O-2H₂O]^-)等。

根据质谱图可以确定DON毒素的特征离子为：m/z 355([M+CH₃COO]^-)，m/z 295([M-H]^-)，m/z 265([M-H-CH₂O]^-)，m/z 249([M-H-CH₂O-CH₄]^-)等。

附图说明：

图1是NIV和DON毒素标准品的高效液相色谱图；

图2是神曲空白样品的高效液相色谱图；

图3是神曲加标样品(10μg/g的高效液相色谱图；

图4是NIV，DON标准品的LC-MS总离子流图；

图5是NIV标准品的质谱图；

图6是DON标准品的质谱图；

图7是西洋参加样样品(1μg/g)的总离子流图；

图8是西洋参加样样品中NIV标准品的质谱图；

图9是西洋参加样样品中DON标准品的质谱图；

具体实施方案

实施例一：(1)、高效液相色谱检测法测定中药中的NIV和DON毒素

b.溶液配制：

c.样品溶液的制备：

样品净化：吸取上述滤液到呕吐毒素专用净化柱顶端，过柱，收集纯化液到25mL梨形瓶中，加4mL乙腈-水(80∶20，V/V)洗柱两次，收集至上述梨形瓶中，60℃减压蒸干。残渣加1mL流动相水-乙腈-甲醇(90∶5∶5，V/V/V)溶解，0.45μm滤膜过滤后备用。

(2)、采用高效液相色谱-质谱联用法对阳性结果进行确证。

实施例二：(1)、高效液相色谱检测法测定中药中的NIV和DON毒素

a.色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，紫外检测器，检测波长：218nm，以水-乙腈-甲醇(88∶6∶6，V/V/V)为流动相，流速：1.0mL/min；柱温23℃。

b.溶液配制：

对照品溶液的制备：取NIV和DON标准品适量，加乙腈制成每ml含120μg/mL溶液；

c.样品溶液的制备：

样品提取：取药材粉末25.0g(精确至0.1g)，置具塞锥形瓶中，加120mL乙腈-水(80∶20，V/V)混合溶剂，用高速均质器提取2min，静置，过滤，滤液备用。

样品净化：吸取上述滤液4mL到呕吐毒素专用净化柱顶端，过柱，收集纯化液到25mL梨形瓶中，加6mL乙腈-水(80∶20，V/V)洗柱两次，收集至上述梨形瓶中，60℃减压蒸干。残渣加1.2mL流动相水-乙腈-甲醇(88∶6∶6，V/V/V)溶解，0.45μm滤膜过滤后备用。

d.测定法：分别精密吸取对照品和样品溶液40μL，注入液相色谱仪，测定。

(2)、采用高效液相色谱-质谱联用法对阳性结果进行确证。

a.液相条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1％醋酸铵水(25∶75，V/V)；柱温23℃；

c.测定法：分别精密吸取对照品和样品溶液5μL，注入高效液相色谱-质谱联用系统，测定。

实施例三：(1)、高效液相色谱检测法测定中药中的NIV和DON毒素

a.色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，紫外检测器，检测波长：218nm，以水-乙腈-甲醇(89∶5∶6，V/V/V)为流动相，流速：0.9mL/min；柱温27℃。

b.溶液配制：

对照品溶液的制备：取NIV和DON标准品适量，加乙腈制成每ml含80μg/mL溶液；

c.样品溶液的制备：

样品提取：取药材粉末25.0g(精确至0.1g)，置具塞锥形瓶中，加80mL乙腈-水(80∶20，V/V)混合溶剂，用高速均质器提取2min，静置，过滤，滤液备用。

样品净化：吸取上述滤液4mL到呕吐毒素专用净化柱顶端，过柱，收集纯化液到25mL梨形瓶中，加5mL乙腈-水(80∶20，V/V)洗柱两次，收集至上述梨形瓶中，60℃减压蒸干。残渣加1.1mL流动相水-乙腈-甲醇(90∶5∶5，V/V/V)溶解，0.45μm滤膜过滤后备用。

d.测定法：分别精密吸取对照品和样品溶液45μL，注入液相色谱仪，测定。

(2)、采用高效液相色谱-质谱联用法对阳性结果进行确证。

a.液相条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1％醋酸铵水(15∶85，V/V)；柱温27℃；

c.测定法：分别精密吸取对照品和样品溶液15μL，注入高效液相色谱-质谱联用系统，测定。

Claims

1.一种检测中药中雪腐镰刀菌烯醇和脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素的方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

(1)用高效液相色谱-紫外检测法法测定中药中的雪腐镰刀菌烯醇和脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素；

(2)用液相色谱-质谱联用检测法确证中药中的雪腐镰刀菌烯醇和脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素；

2.根据权利要求1的中药中雪腐镰刀菌烯醇和脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素的检测方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

a.色谱条件：用反相色谱柱分离，以水-乙腈-甲醇为流动相，流速0.6-1.0mL/min，柱温20-30℃，紫外检测器检测，检测波长218±2nm。

b.溶液配制：

对照品溶液的配制：分别称取对照品适量，加流动相或乙腈制成溶液；

c.样品溶液的制备：

样品提取：取药材粉末，置具塞锥形瓶中，加乙腈-水混合溶剂，用高速均质器提取，过滤。

样品净化：吸取上述滤液到净化柱顶端，过柱，收集纯化液到梨形瓶中，取出活塞，加乙腈/水到柱子顶端。将所有溶液彻底过柱，收集到梨形瓶中，在60℃蒸干。残渣加水-乙腈-甲醇混合溶剂溶解，过滤。

a.色谱条件：用反相色谱柱分离，甲醇-醋酸铵水为流动相，柱温20-30℃，流速为0.1-0.3mL/min。

b.质谱条件：大气压化学电离，负离子模式，干燥气流速2-3L/min，干燥气温度380-420℃，碎裂电压140-160V。

c.分别精密吸取对照品和样品溶液，注入液相色谱-质谱联用仪，确证。

3.根据权利要求2的中药中雪腐镰刀菌烯醇和脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素的检测方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

a.色谱条件：用C₁₈反相色谱柱分离，以水-乙腈-甲醇(80-90∶5-10∶5-10，V/V/V)为流动相，流速0.8-1.0mL/min，柱温25-30℃，紫外检测器检测，检测波长218±2nm。

b.溶液配制：

对照品溶液的配制：分别精密称取对照品适量，加乙腈制成溶液；

c.样品溶液的制备：

样品提取：取药材粉末20-30g(精确到0.1g)，置250mL具塞锥形瓶中，加乙腈-水(80∶20，V/V)混合溶剂，用高速均质器提取1-3min，静置过滤。

样品净化：吸取上述滤液4mL到净化柱顶端，向下推活塞，使溶液完全过柱，收集纯化液到梨形瓶中，取出活塞，加2×4mL乙腈/水到柱子顶端。将所有溶液彻底过柱，收集到梨形瓶中，在60℃蒸干。残渣加水-乙腈-甲醇(90∶5∶5，V/V/V)混合溶剂溶解，过滤。

d.测定法：分别精密吸取对照品和样品溶液40-60μL，注入液相色谱仪，测定。

a.色谱条件：用反相C18色谱柱分离，甲醇-0.1％醋酸铵水为流动相，柱温20-30℃，流速为0.2mL/min。

b.质谱条件：大气压化学电离，负离子模式，干燥气流速2.5L/min，干燥气温度400℃，碎裂电压150V，全扫描模式。

c.分别精密吸取对照品和样品溶液5-15μL，注入液相色谱-质谱联用仪，确证。

4.根据权利要求3的中药中雪腐镰刀菌烯醇和脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素的检测方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

a.色谱条件：用C₁₈反相色谱柱分离，以水-乙腈-甲醇(90∶5∶5，V/V/V)为流动相，流速0.8mL/min，柱温25℃，紫外检测器检测，检测波长218nm。

b.溶液配制：

对照品溶液的配制：分别精密称取对照品适量，加乙腈制成质量浓度为100μg/mL的混合标准储备溶液；

c.样品溶液的制备：

样品提取：取药材粉末25g(精确到0.1g)，置250mL具塞锥形瓶中，加乙腈-水(80∶20，V/V)混合溶剂100mL，用高速均质器提取2min，静置过滤。

样品净化：吸取上述滤液4mL到净化柱顶端，向下推活塞，使溶液完全过柱，收集纯化液到梨形瓶中，取出活塞，加2×4mL乙腈/水(90∶20，V/V)到柱子顶端。将所有溶液彻底过柱，收集到梨形瓶中，在60℃减压蒸干。残渣加1mL水-乙腈-甲醇(90∶5∶5，V/V/V)混合溶剂溶解，0.45μm的一次性针头过滤器过滤。

a.色谱条件：用反相C₁₈色谱柱分离，甲醇-0.1％醋酸铵水(20∶80，V/V)为流动相，柱温25℃，流速为0.2mL/min。

b.质谱条件：大气压化学电离，负离子模式，干燥气流速2.5L/min，干燥气温度400℃，碎裂电压150V，全扫描模式，扫描范围200-400m/z。

c.分别精密吸取对照品和样品溶液10μL，注入液相色谱-质谱联用仪，确证。

5.根据权利要求2-4的任一种所述的中药中雪腐镰刀菌烯醇和脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素的检测方法，其特征在于：该方法的样品提取过程为采用乙腈：水高速匀质提取。

6.根据权利要求5的中药中雪腐镰刀菌烯醇和脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素的检测方法，其特征在于：该方法的样品提取过程为采用乙腈∶水(80∶10，V/V)高速匀质提取。

7.根据权利要求2-4的任一种所述的中药中雪腐镰刀菌烯醇和脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素的检测方法，其特征在于：该方法的液相分析条件为以水-乙腈-甲醇(90∶5∶5，V/V/V)为流动相，流速0.8mL/min，柱温25℃，紫外检测器检测，检测波长218nm。

8.根据权利要求2-4的任一种所述的中药中雪腐镰刀菌烯醇和脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素的检测方法，其特征在于：该方法的液相色谱-质谱联用检测法确证以甲醇-0.1％醋酸铵水(20∶80，V/V)为流动相，柱温25℃，流速为0.2mL/min。大气压化学电离，负离子模式，全扫描模式。